聚酰胺树脂分离甘草总黄酮及抗氧化活性研究
表3
正交试验结果
列号
A B C D 试验指标
A 238n m
A 440n m 栀子苷提
取得率
111110.73750.0070 3.658212220.82100.0088 4.085313330.70330.0101 3.483421230.76960.0232 3.822522310.69900.0119 3.461623120.58500.0315 2.878731320.75450.0066 3.7458
3
2
1
3
0.82680.0052
4.114933210.70330.0182
3.483
∑K 1j 11.22611.22510.65010.602∑K 2j 10.16111.66011.39010.708∑K 3j 11.3429.84410.68911.419
∑K 1j
3.742 3.742 3.550 3.540∑K 2j 3.387 3.887 3.797 3.569∑K 3j
3.781 3.281 3.563 3.806R
0.394
0.606
0.247
0.266
(注:栀子苷提取得率=测得浸提物中栀子苷量/取样量×
100
)
表4 正交试验方差分析
方差来源离差平方和S 自由度f 均方V
F 值显著性
因素A 0.282820.14149.7853因素B 0.600720.300320.7853
因素C 0.115920.0579 4.001因素D 0.100920.0504
3.491
误差e 0.02892
F 0.1(2,2)=9.00 F 0.05(2,2)=19.00
3.3.3 验证试验
分别准确称取150.0g 的栀子粉末,采用乙酸乙酯法按照筛选得到的最佳工艺条件A 1B 2C 3D 1进行提取,平行做3份,测定栀子苷含量,进行正交验证试验。
表5
试验验证结果
试验号检测吸光度
A 238n m 栀子苷提取得率(
)
栀子苷平均提取得率(
)
RSD
()
平行10.830 4.130平行20.839 4.174 4.12
0.95
平行3
0.816
4.060
由表5可得知:按照筛选得到的最佳工艺条件
A 1
B 2
C 3
D 1进行提取,栀子苷平均提取得率为4.12
,试验结
果略高于选择工艺,变异系数RSD =0.95,说明所选择的
工艺合理、可行。
4 小结
以栀子苷在提取物中的含量为考评指标,实验结果表明:通过对水提取法、乙醇提取法、醋酸乙酯提取法、乙醚提取法的比较,发现用醋酸乙酯提取法对栀子苷的提取量最大,且提取物中栀子黄色素杂质很少,有利于栀子苷的纯化与精制。同时通过正交试验确定了醋酸乙酯浸提法提取栀子苷的工艺条件,考虑节能和工业生产中经济等因数,我们选择的最佳工艺条件为:浸提温度为75°C,料液比为50
mL,浸提时间为3h,浸提级数为1,栀子苷提取得率为4.12。此工艺提取栀子苷得率较高,本实验研究为工业化
生产提供了方法依据。参考文献:
[1] 中国药典一部.[S]:2000:2012202.
[2] 王钢力,陈德昌,赵淑杰.栀子属植物化学成分研究进展[J ].
中国中药杂志,1996,21(2):67272.
[3] 谢学建,张俊慧,马爱华.中药栀子的研究进展[J ].时珍国医
国药,2000,10(11):9432945.
[4] 袁翠美,马自超.紫外分光光度法测定栀子黄色素中栀子酚和
栀子苷的含量[J ].中国野生植物资源,1993,(4):9211.
[5] 徐莲英,侯世祥.中药制药工艺技术解析[M ].北京:人民卫
生出版社,2003:29230.
聚酰胺树脂分离甘草总黄酮及抗氧化活性研究
郑 颖1
, 蓝闽波2
, 徐德生1
, 薛 明
1
(1.上海中医药大学,上海201203;2.华东理工大学,上海200237)
收稿日期:2005212224
作者简介:郑 颖(1976～),女,博士生,研究方向:中药活性成分及剂型研究,电话:135********。
关键词:甘草;黄酮;抗氧化活性
中图分类号:R284.1 文献标识码:B 文章编号:100121528(2006)1021521201 中药中具有抗氧化性能的成分主要有黄酮类、酚类及其衍生物、多糖和皂苷类,此外一些生物碱、维生素和微量元素
等也具有抗氧化性能[1]。
现代研究表明,甘草主要含三萜类、黄酮类和多糖类成
1
251
分,药理作用广泛。我们对其中的黄酮类成分进行了提取分离、并对各黄酮部位进行了抗氧化作用研究。
1 材料与仪器
1.1 材料
14～30目聚酰胺树脂;80目聚酰胺树脂;试剂均为国产分析纯。
1.2 仪器
UV2ⅡDETECT OR型核酸蛋白检测仪(中科院上海生物化学研究所);3057型便携式记录仪(重庆川仪四厂);RE2 52AA旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);F A2104N电子天平(上海精密科学仪器有限公司);LXJ2Ⅱ离心沉淀机(上海医用分析仪器厂);DZF26050型真空干燥箱(上海精宏实验设备有限公司);UN I CO22102PC型紫外可见分光光度计(上海尤尼柯有限公司);BP LC24微弱发光测定仪(中国科学院北京生物物理研究所)。
2 实验
2.1 甘草总黄酮的制备
称取甘草药材300g,置于5000mL圆底烧瓶中,加3000mL95乙醇热回流提取,100°C提取2h,倒出提取液,药渣再加3000mL95乙醇,100°C提取2h,合并2次提取液,用3000r/m in高速离心机离心20m in,取上清液。药渣待用。上清液50°C旋转蒸发浓缩,真空干燥,得到甘草总黄酮粗提物41.4176g。为样品1。
2.2 甘草总黄酮的精制
用14～30目已处理的聚酰胺树脂湿法装柱,称取甘草总黄酮粗提物20g上样,洗脱液连接紫外在线检测器,流速1mL/m in,用蒸馏水洗脱2倍柱体积,80乙醇洗脱至无信号。分段收集80乙醇洗脱液,液相检测分离效果,合并相同峰形部分,50°C旋转蒸发浓缩,真空干燥,得到精制的甘草总黄酮3.6643g。为样品2。
2.3 甘草总黄酮的分离
用80目已处理的聚酰胺树脂湿法装柱,精密称定精制的甘草总黄酮0.5018g上样,洗脱液连接紫外在线检测器,流速1mL/m in,分别用蒸馏水、20乙醇、40乙醇、60乙醇、80乙醇、95乙醇洗脱2倍柱体积,分别收集洗脱液, 50°C旋转蒸发浓缩,真空干燥,20乙醇洗脱液为样品3, 40乙醇洗脱液为样品4,60乙醇洗脱液为样品5,80乙醇洗脱液为样品6,95乙醇洗脱液为样品7。
2.4 化学发光法测定羟基自由基的生成与清除
取样品1至样品7,每一样品均配成5个浓度,浓度的对数为x,测定羟基自由基的清除率,测定3次,取平均值,为y,绘制出标准曲线,求出羟基自由基的清除率达到50时的样品浓度,即I C
50
。
样品组:往10mL具塞试管中加入pH=9.18的硼砂缓冲液7.80mL,硫酸铜溶液0.5mL,维生素C溶液0.2mL,邻菲罗啉(含鲁米诺)0.5mL,0.15mol/L的过氧化氢0.5 mL,配制好的样品0.5mL,混匀。
空白组:0.5mL蒸馏水代替0.5mL样品,其它同样品组。
样品羟基清除率=(A空白组-A样品组)/A空白组。结果见表1。
2.5 化学发光法测定超氧阴离子自由基的生成与清除
取样品1至样品7,每一样品均配成五个浓度,浓度为x,测定超氧阴离子自由基的清除率,测定3次,取平均值,为y,绘制出标准曲线,求出超氧阴离子自由基的清除率达到50时的样品浓度,即I C50。
样品组:往10mL具塞试管中加入鲁米诺2碳酸缓冲液9.40m l,邻苯三酚0.5mL,配制好的样品0.1mL,混匀。
空白组:0.1mL蒸馏水代替0.1mL样品,其它同样品组。
样品超氧阴离子自由基的清除率=(A空白组-A样品组)/A空白组。结果见表1。
表1 抗氧自由基效果表(n=3)
I C
50
值
样品
抗羟基自由
基I C
50
mg/mL
抗超氧阴离子
自由基I C
50
mg/mL 样品10.01600.0255
样品20.005640.020
样品30.002920.0157
样品40.002950.0156
样品50.002520.0133
样品60.002730.0144
样品70.002880.0131
3 结果与讨论
甘草粗黄酮经过聚酰胺树脂精制后,纯度提高,抗氧化活性明显增加。提示可以作为有效部位进行抗氧化药物的开发。
精制的甘草总黄酮上聚酰胺树脂柱,分别用蒸馏水、20乙醇、40乙醇、60乙醇、80乙醇、95乙醇洗脱,所得的各黄酮部位抗氧化活性基本相当。
参考文献:
[1] 彭 昕,聂 理,徐郎莱.中药对自由基清除作用的研究进展
[J].基层中药杂志,2002,16(1):48250.
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