细菌涂片的制备

系部：动科系教师：钱锦花训练日期：年月日

课程名称动物微生物训练项目细菌标本片的制备及染色方法训练班级牧医0821、动医0821班训练学时 2

训练目的

要求学生掌握掌握细菌标本片的制备基染色方法

所需设备、

仪器、工具

接种环、玻片、酒精灯、染色缸、染色架

材料病料、细菌培养物、染色液、甲醇、酒精

训练组织与设计一、教学组织

1、教师示范，进一步讲解说明，学生分组操作。

2、观察学生操作，个别指导。

二、方法与步骤：

（一）、细菌涂片的制备

1、液体培养物及液体病料：

（1）涂片用接种环取一滴培养液或液体病料，于玻片的中央均匀地涂布成适当大小的薄层

（2）干燥一般采用自然干燥，天气较冷时也可于酒精灯火焰上方30－40cm处适当加热干燥。

（3）固定火焰固定

（二）、细菌触片的制备：将固体病料（病变组织）作无菌切开,用切面在玻片中央接触一下或稍用力印压成一薄层,干燥,固定,染色。

（三）、细菌的染色法：

1、单染色法：又称简单染色法，即只应用一种染料进行染色的方法。

美蓝染色法：在已干燥、固定好的涂片或触片上滴加适量的美蓝染色液，染色1－2min后，水洗，干燥（吸水纸吸干或自然干燥），镜检。

2、复染色

革兰氏染色法：初染（结晶紫）、媒染（碘液）、脱色（酒精）、复染（番红）（四）注意事项

考核标准1、出勤占10%；

2、实际操作过程占60%；

3、实验报告占30%

玉溪农业职业技术学院

实训（验）项目单

常见致病菌的检测

常见致病菌的检测 摘要：近年来食品药品安全的问题屡见不鲜，做好致病菌的检测，是防范于未然的措施，因而显得尤为的重要，也越来越受到人们的重视。这就要求我们对一些常见的致病菌检测技术的要有一定的了解。 关键词：致病菌，肠球菌，霉菌和酵母菌，金黄色葡萄球菌，沙门氏菌。一.肠球菌 （1）、形态与染色【1】 肠球菌为革兰阳性（G+）球菌,广泛分布于自然环境及人和动物消化道内。20世纪80年代以来，肠球菌严重感染的发生率和病死率明显升高，并且由于肠球菌的固有耐药和获得性耐药，使许多常用抗菌药物在治疗肠球菌感染时失败。因此，从分子水平对肠球菌致病因子、肠球菌引起的感染机制与治疗的研究显得尤为重要。肠球菌为圆形或椭圆形、呈链状排列的革兰阳性球菌，无芽胞，无鞭毛，为需氧或兼性厌氧菌。本菌对营养要求较高，在含有血清的培养基上生长良好。 （3）致病性【1】 一般而言，肠球菌的毒力不高。与金黄色葡萄球菌和化脓性链球菌相比，肠球菌对大多数动物的半数致死量（LD50）值相当高，而且肠球菌很少引起蜂窝织炎和呼吸道感染。 肠球菌只有在宿主组织寄殖，耐机体非特异及免疫防御机制，并引起病理改变，才能导致感染。粘附测定显示肠球菌可通过细菌表面表达的为粘附素，吸附至肠道、尿路上皮细胞及心脏细胞。这些粘附素的表达亦受细菌生长环境的影响。另外，肠球菌可产生一种聚合物质（系一种蛋白表面物质，可聚集供体与受体菌，以利质粒转移），在体外增强其对肾小管上皮细胞的粘附。 细菌生长环境亦影响肠球菌与多形核白细胞反应。血清中生长的肠球菌与多形核白细胞反应较弱，而肉汤中生长的细菌反应较强。体外多形核白细胞对肠球菌的有效杀灭作用需血清补体蛋白参与，而抗肠球菌抗体可增强该作用。 （4）、肠球菌属主要检测步骤如下：【2】 方法一：肠球菌平板计数法检验程序 25g (mL) + 225 mL 缓冲蛋白胨水

细菌的形态与结构

第二单元细菌的形态与结构 第一节细菌的形态 一、细菌大小的测量单位 微米（μm） 1μm = 1/1000mm。 二、细菌的形态 球菌（coccus）：直径0.8~1.2μm。呈双球状、链状、葡萄状等多种样式排列形式。 杆菌（bacillus）：长度：0.6-10μm不等，直径：0.3~1.0μm。 螺型菌（spiral bacterium）：菌体有数量不等的弯曲。 （1）弧菌（vibrio）：只有一个弯曲。如霍乱弧菌 （2）螺菌（spirillum）：菌体有数个弯曲。如鼠咬热螺菌 （3）螺杆菌：呈螺旋状弯曲。如幽门螺杆菌 （4）弯曲菌：呈U型、S型等。如空肠/结肠弯曲菌 第二节细菌的基本结构 一、细菌基本结构的构成 （一）细胞壁（cell wall）：包绕在细胞膜外一层坚韧膜状结构。厚10~80（nm） 化学组成：肽聚糖（peptidoglycan）（粘肽） 聚糖支架：N-乙酰胞壁酸、N-乙酰葡萄糖胺借助β-1，4糖苷键相互连接组成。 四肽侧链：与聚糖支架上的胞壁酸分子连接。 五肽交联桥：连接两个相邻的四肽侧链。 肽聚糖由聚糖支架与四肽侧链及五肽交联桥共同构成。 功能：保持菌体固有形态，保护细菌不受外界的低渗环境的破坏（维持菌体内外的渗透压）。革兰阳性菌细胞壁结构 革兰阴性菌细胞壁结构

革兰阳性细菌细胞壁特点： 1.肽聚糖含量丰富，层厚，15-50层，20~80nm 2.细胞壁中含有大量磷壁酸（teichoic acid） 3.四肽侧链与五肽交联桥相连，形成三维立体结构 革兰阴性细菌细胞壁特点： 1.肽聚糖含量少，层薄，1-3层,10~15nm 2.细胞壁中不含磷壁酸（teichoic acid） 3.缺少五肽交联桥，四肽侧链直接相链,形成二维网状结构 4.肽聚糖层外包绕外膜层：脂质双层、脂蛋白、脂多糖。 5. 脂多糖是革兰阴性细菌内毒素主要成分。 革兰阳性菌细胞壁结构

临床标本细菌培养鉴定常见的15个疑问

问题1：如何正确应用药物敏感结果？ 正确运用药敏试验结果应考虑以下3个方面： 首先要确定病原菌，如未找到真正的致病菌，药敏实验不但不能指导用药甚至可能误导临床； 重视耐药监测，这是经验用药的一个重要的参考； 考虑到药敏试验的局限性：体外报告敏感的药物体内治疗不一定有效，而体外报告耐药的药物体内治疗不一定无效。 问题2：是否MIC越低的药物越好？ 不一定。因为不同药物对同种细菌，同一药物对不同细菌的折点均可不同，并且若细菌产生某些特殊耐药机制时，即使体外敏感也应报耐药，另外尚需考虑药动学和耐受性。因此，不能单纯比较MIC值而认为MIC越低的药物就一定越好。 MIC只表示一种药物对某一株细菌抗菌作用的强弱，MIC越低（离中介值越远）说明该药物对相应的病原菌的作用越强。只能比较同一种药对同一株菌，若MIC值升高，可认为其耐药性提高。 问题3：是否所有报告的细菌均为病原菌？ 不一定。原因如下： 所报告细菌为污染菌或定植菌，细菌培养结果的临床意义大小与所取标本有关。如为血液等无菌标本则临床意义较大，但即使血培养阳性也可能为污染菌。某些标本易受污染如痰标本易于受咽喉部携带菌的污染，尿培养易受下尿道、尿道口寄居菌污染。 可能为应用抗菌药后的菌群交替或菌群失调。特别是原为复数菌感染时，针对优势菌治疗一段时间后可能非优势上升为优势菌，或广谱抗菌药治疗后可

能出现真菌感染。 有２种以上病原菌时因生长速度不同、营养要求不同，培养结果不能真实反映病原菌的种类、数量。 问题4：为什么有时痰涂片结果与痰培养结果不一致？ 由于痰标本进行培养和涂片时选取的部位不一致； 某些快生长菌所占比例并不多，但由于生长速度快、营养要求低，能在培养过程中迅速变为优势菌而掩盖其他菌的生长； 标本从采集到接种的时间过长，造成部分苛养菌死亡，在涂片中看到的只是菌的残骸而非活菌。 问题5：我们想用的药物在药敏试验中没有做？ 1.天然耐药 2.可能是药物的敏感性被其他药物所预报 问题6：为什么有的菌报告很多种药物，有的仅报告几种药物？ 报告的药物种类根据细菌种类的不同而有所不同，如铜绿假单胞菌报告的药物较多，而嗜麦芽窄食单胞菌报告的药敏较少。 问题7：是否能将所用的药都做药敏试验? 1.没有必要：通过耐药机制和标志性药物可以预测其他抗菌药物的敏感性 2.没有可能：不是所用药物都可以做药敏试验（需要药物在体外稳定，需要有操作标准和解释标准） 问题8：选择药敏报告敏感的药物，为什么临床治疗无效？ ①体外药敏试验只能预测体内治疗效果，并不等同；一般来说，耐药＝治疗无效；敏感≠治疗有效；

细菌的形态与结构带答案复习进程

细菌的形态与结构带 答案

第一章细菌的形态与结构 一、单5选1 1.用来测量细菌大小的单位是： A.pm B.mm C.μm D.nm E.cm 2.下列哪种结构不是细菌的基本结构： A.细胞壁 B.鞭毛 C.细胞膜 D.细胞质 E.核质 3.下列哪种结构不是细菌的特殊结构： A.鞭毛 B.芽胞 C.菌毛 D.细胞质 E.荚膜 4.革兰阳性菌细胞壁的成分是： A.脂蛋白 B.肽聚糖 C.几丁质 D.胆固醇 E.脂多糖 5.细菌细胞壁的主要功能是： A.生物合成 B维持细菌外形保护菌体 C.参与物质交换 D.呼吸作用 E.能量产生 6.革兰阳性菌细胞壁的特殊成分是： A.肽聚糖 B.几丁质 C.胆固醇 D.磷壁酸 E.脂多糖 7.革兰阴性菌细胞壁的特殊成分是： A.肽聚糖 B.磷壁酸 C.外膜 D.五肽交联桥 E.脂多糖 8.具有抗吞噬作用的细菌结构是： A.细胞壁 B.荚膜 C.芽胞 D.鞭毛 E.菌毛 9.普通菌毛是细菌的一种： A.细长波状的丝状物 B.运动器官 C.多糖质 D.可传递遗传物质的器官 E.黏附结构 10.抵抗力最强的细菌结构是：

A.芽胞 B.外膜 C.鞭毛 D.核糖体 E.细胞壁 11.细菌核质以外的遗传物质是： A.mRNA B.核蛋白体 C.质粒 D.性菌毛 E.异染颗粒 12.参与细菌呼吸、生物合成及分裂繁殖的结构是： A.菌毛 B.荚膜 C.鞭毛 D.中介体 E.胞浆膜 13.与细菌侵袭力有直接关系的结构是： A.质粒 B.异染颗粒 C.芽胞 D.中介体 E.荚膜 14.细菌L型的形成与以下哪种结构有关： A.中介体 B.细胞膜 C.细胞壁 D.细胞质 E.核质 15.细菌鞭毛的主要作用是： A.与运动有关 B.与致病力有关 C.与抵抗力有关 D.与分裂繁殖有关 E.与结合有关 16.溶菌酶的灭菌机制是： A.竞争肽聚糖合成中所需的转肽酶 B.与核蛋白体的小亚基结合 C.裂解肽聚糖骨架的β-1，4糖苷键 D.竞争性抑制叶酸的合成代谢 E.破坏细胞膜 17.青霉素抗菌的作用机制是： A.干扰细菌蛋白质的合成 B.破坏细胞壁中的肽聚糖结构 C.破坏细胞膜 D.抑制细菌的酶活性 E.抑制细菌的核算代谢 18.革兰染色所用试剂的顺序是： A.稀释复红→碘液→酒精→结晶紫 B.结晶紫→酒精→碘液→稀释复红 C.结晶紫→碘液→酒精→稀释复红 D.稀释复红→酒精→结晶紫→碘液

微生物标本采集 送检及处理原则

微生物标本采集、送检及处理原则 一、标本采集的一般原则： 1、病程早期、急性期或症状典型时，使用抗生素前。 2、无菌采集应无污染，严格进行无菌操作。 3、根据目的菌的特性用不同的方法采集适量标本，采集量不应过少。 4、注意在不同病程采集不同部位标本。 5、采集标本时要防止传播和自身感染。 二、标本的处理： 1、标本保存在4℃环境中，在2h之内送检。脑脊液则要在25 ℃保存，用于细菌培养的标本保存时间不应超过24h。对环境敏感的细菌应保温并立即送检。 2、标本中可能含有致病菌，必须注意安全防护。切勿污染环境。对于烈性传染病标本运送时更要由专人运送，严格按规定包装。 3、厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可直接用抽取标本的注射器运送。 Ⅰ血液及骨髓标本： 血液标本的细菌培养是诊断菌血症或败血症的基本方法。如从患者血液中检出细菌，一般应视为病原菌。 常见的病原菌主要有金黄色或表皮葡萄球菌、链球菌（A、B群、肺炎链球菌等）、肠球菌、产单核细胞李斯特菌、脑膜炎奈瑟菌、伤

寒及副伤寒沙门菌和厌氧菌等。 1、采血时间及次数 2、抽血部位及抽血量 3、报告方式：培养5d无菌生长者报告“培养5d无菌生长”。 查见细菌报告菌名和药敏结果。 4、菌血症、败血症的诊断标准：1）两次培养均出现同一种细菌（可排除污染）； 2）发病星期后血中抗体滴度上升。 Ⅱ脑脊液标本： 脑脊液的细菌学检查对于细菌性脑膜炎的诊断有重要价值。正常人的脑脊液是无菌的，检出细菌提示有细菌性（急性化脓性、结核性等）脑膜炎。 常见的病原菌主要有脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、链球菌（A、B群和肺炎链球菌）、葡萄球菌、产单核细胞李斯特菌、结核分枝杆菌等。 1、涂片检查： (1) 一般细菌涂片检查：例如：革兰阴性、凹面相对的球菌，可能是脑膜炎奈瑟菌；链状排列的革兰阳性球菌；长丝状等多形态性的革兰阴性杆菌，可能是流感嗜血杆菌。 (2)结核分枝杆菌涂片检查 (3)新生隐球菌涂片检查

常见细菌及图片

肺炎克雷伯菌 1.形态结构：肺炎克雷伯菌肺炎亚种为革兰阴性杆菌，无鞭毛，无芽孢，标本直接涂片 或在营养丰富培养基上的营养物可见菌体外有明显的荚膜。 2.培养特性：兼性厌氧，营养要求不高，在初次分离培养基可形成较大、凸起灰白色黏 液型的菌落。菌落大而厚实、光亮，相邻菌落容易发生融合，用接种蘸取时可挑出长丝状细丝。在麦康凯琼脂（MAC）培养基上形成较大的黏液型、红色的菌落，红色可扩散至菌落周围的培养基中。在伊红美蓝琼脂（EMB）上为大、粘稠、红色、易融合成一片的菌落。在血琼脂上为灰白色、大而黏、光亮且形成菌丝的菌落。 3.生化特性：氧化酶阴性，葡萄糖产酸产气，动力阴性，吲哚阴性，脲酶阳性。 金黄色葡萄球菌 典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH 7.4。平板上菌

落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。在EMB培养基上基本不生长。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10-15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。 大肠埃希氏菌 1．形态与染色特性 菌体两端钝圆、中等大小，杆状(有时呈卵圆形)、1—3um X 0.6um、周生鞭毛，能运动，不产生荚膜，革兰氏阴性，而且一般是对碱性染料着色较好，但有时两端着色较浓，要与巴氏杆菌区分开来。 2．培养特性 1)需氧及兼性厌氧菌 2)对营养的要求不高，在普通琼脂上就生长良好，在15C-45℃范围内均可生长，但最适生长温度为37℃，最适pH为7.2—7.4。

常见微生物标本的采集

常见微生物标本的采集、处理与检测 标本采集的基本原则：尽早采集、根据可疑的病原体，选择不同采集时机和标本种类、在抗生素应用前采集、遵守无菌操作、正确保存和运送。容器应密封不易碎，标本不得污染容器的口和外壁。 1.血液标本正常人的血液是无菌的。当细菌侵入时可引起严重的菌血症或败血症。 一般情况下在患者发热初期或发热高峰时采集；持续性菌血症可随时采集；间歇性菌血症，应预测其体温上升期进行采血。一般在使用抗生素前采集2~3次；多部位采集，如两侧肘静脉或动、静脉同时采取；对于已使用抗生素而无法停止的患者，也应在下次用药前采取。在感染局部的附近血管中采血，可提高阳性率。采血量成人一般5~10ml，婴幼儿1~2ml。 采集的血液标本注入培养瓶中先进行增菌培养，培养基和血液标本量的比例应>10：1，将血液中的各类杀（抑）菌物质充分稀释。需氧菌常用培养基有胰酪蛋白大豆胨肉汤和葡萄糖酚红肉汤等，常加入对氨基苯甲酸（PABA）50μg/ml中和磺胺类，青霉素酶2单位/ml破坏青霉素类，硫酸镁中和链霉素、四环素、土霉素、金霉素、新霉素及多粘菌素等抗生素。加入0.03~0.05%的聚茴香磺酸钠（sodium polyanethol sulfonate, SPS）可抑制血清中的抗菌物质，并对氨基糖苷类和多肽类抗生素有灭活效果。并加入Ⅹ、Ⅴ因子等生长因子。 培养瓶每天观察一次。如发现①培养瓶内液体浑浊；②血球层上面出现颗粒状的生长物，并且有自下而上的溶血；③有明显的凝块；④液体表面有菌膜，培养液清晰或浑浊等，表明有细菌生长。直接进行涂片染色初步报告。同时分别接种血平板、巧克力（色）平板，普通培养和5%CO2 35℃培养。也可直接进行体外药敏试验。无细菌生长迹象的培养瓶孵育至第7d，接种血平板、巧克力（色）平板，分别进行普通培养和5%CO2环境35℃孵育24h。为了提高检出的速度，在培养的第2~3d时应移种一次。 有厌氧菌感染时，同时注入需氧瓶和厌氧瓶，厌氧培养基通常用硫乙醇酸盐培养基、牛心脑浸液肉汤等；培养液中有刃天青，无氧时无色，有氧时呈红色。需氧瓶和厌氧瓶同时浑浊，或需氧瓶无生长而厌氧瓶液体浑浊，提示厌氧菌生长。分别接种血平板和厌氧血平板，置需氧和厌氧环境中，如果都只生长1种细菌，则为兼性厌氧菌；如果仅在厌氧环境中生长，可以直接报告“有厌氧菌检出”。 若长期应用抗细胞壁类抗生素，应考虑细菌L型存在，将血液接种高渗培养基中，分别进行需氧、厌氧和5%CO2环境培养。每周移种2~3次于高渗固体培养基上，观察有无细菌L型菌落生长。 2.呼吸道标本 正常上呼吸道有正常菌群。下呼吸道正常情况下无细菌或仅有少量细菌侵入

细菌的基本形态有哪些

1、细菌的基本形态有哪些？了解其形态有何意义？ 细菌的种类虽然很多，但其基本形态只有三种：球菌（葡萄球菌、双球菌、链球菌、四联球菌、八叠球菌）、杆菌、螺旋菌（弧菌和螺菌）。根据细菌的基本形态，可初步鉴定细菌，协助临床诊断，为了进一步了解细菌的致病性，指导临床防治细菌感染性疾病均具有一定的意义。 ２、何谓革兰氏阴性细菌？何谓革兰氏阳性菌？ 细菌涂片后经革兰染色镜检为紫蓝色细菌，即为革兰阳性（Ｇ＋）细菌；镜检为红色细菌，即为革兰阴性（Ｇ－）细菌。 ３何谓正常菌群？何谓菌群失调症？ 寄居在正常人体的体表和外界相通的眼结膜、口腔、鼻腔、肠道、泌尿生殖道等腔道粘膜中的不同种类和数量且对人体无害而有益的微生物称为正常微生物群。其中以细菌为主，故将正常微生物群通称为正常菌群。 由于长期使用抗生素或滥用抗生素，机体某些部位的正常菌群中，各种细菌的正常比例关系发生变化，称为菌群失调。例如长期使用抗生素治疗腹泻的患者，可使肠内正常的大肠杆菌数目大量减少，而导致金黄色葡萄球菌及白念珠菌大量繁殖，引起假膜性肠炎，此类疾病称为菌群失调症。为防止菌群失调症的发生，在临床工作中，必须合理使用抗生素。 ４、何谓菌血症、败血症、毒血症、脓毒血症？ 菌血症：病原菌有局部侵入血流，并在其中少量繁殖，引起轻微的症状，细菌短暂地出现于循环中所引起的这种轻微症状称为菌血症。 败血症：病原菌侵入血流并在其中大量繁殖，产生的毒性代谢产物等所引起的全身严重的中毒症状（如高热、皮肤粘膜淤血、肝脾肿大、肾衰竭等）称为败血症。 毒血症：产生外毒素的病原菌在局部组织生长繁殖，外毒素进入血循环，并损害特定的靶器官和组织所出现毒性症状称为毒血症。 脓毒血症：是指化脓性病原菌侵入血流，并在血液中大量生长繁殖。细菌通过血流扩散到机体某些组织和器官，产生新的化脓性病灶而引起中毒症状称为脓毒血症。 ５、破伤风杆菌的致病性物质是什么？主要症状及防治原则有哪些？ 致病物质主要是破伤风杆菌产生的外毒素，即破伤风痉挛毒素。 主要症状：骨骼肌痉挛强直，牙关紧闭、角弓反张等现象。初期有轻度发热、头痛、不适、肌肉酸痛等前驱症状，随后出现的局部肌群抽搐、张口困难、咀嚼痉挛，患者牙关紧闭、苦笑面容，随后颈部、躯干及四肢肌肉发生强直性痉挛，角弓反张，全身肌肉强直性收缩，颜面发绀，全身颤抖、呼吸困难，最后可因窒息而死亡。 防治原则： （１）人工自动免疫：用破伤风类毒素预防接种，刺激机体产生破伤风抗毒素以获得免疫力。特别是对容易受外伤的人员及儿童、军人要有计划地施行类毒素预防接种。 （２）受伤后处理：对外伤严重特别是有泥土、污物的伤口应及时清创、扩创，用双氧水冲洗伤口，并注射破伤风抗毒素作紧急预防，但必须作皮肤试验。对已发病的患者，用破伤风抗毒素治疗，但必须作皮试，皮试阳性者采用脱敏疗法（少量多次）。抗毒素注射应早期足量，具体剂量、途径、次数因病情而定。除特异性防治外，还需用青霉素抑制伤口局部破伤风杆菌的繁殖，并对其他混合感染的细菌也有抑制或杀灭作用。 ６、青霉素引起的过敏性休克属于哪一型超敏反应？其发病机制如何？ 青霉素引起的过敏性休克属于Ⅰ型超敏反应。 发生机制是：青霉素具有抗原表位，本身无免疫原性，但其降解产物青霉唑醛酸或青霉烯酸，与体内组织蛋白共价结合形成青霉唑蛋白或青霉烯酸蛋白后，可刺激机体产生特异性IgE分子而触发过敏反应，重者可发生过敏性休克，甚至死亡。 ７、简述Ⅰ型超敏反应特点。 （１）反应发生快、消退也快。 （２）参与Ab为结合在细胞膜上的IgE。 （３）主要表现为生理功能紊乱。 （４）有明显的个体差异和遗传背景。 （５）没有补体参与。

细菌的大小与形态

（一）细菌的大小细菌形体微小，通常以微米（μm；1μm＝1／l000mm）为测量单位。须用显微镜放大数百至上千倍才能看到。一般球菌的直径约lμm，中等大小的杆菌长2～3μm，宽0.3～0.5μm。菌龄与环境等因素对菌体大小有影响。（二）细菌的形态与排列方式细菌有三种基本形态，即球形、杆形和螺旋形，分别称为球菌、杆菌和螺形菌。 1.球菌：球菌呈球形或近似球形（如豆形、肾形或矛头形）。直径约1μm.据细菌分裂的平面不同以及菌体分离程度的差异，根据细菌细胞的排列方式的不同，又分为：（1）双球菌：两个菌体成双排列，如脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、淋病奈瑟菌。（2）链球菌：许多菌体粘连成链状，如溶血性链球菌。（3）葡萄球菌：许多菌体无规律地堆积似一串葡萄，如金黄色葡萄球菌。（4）四联球菌和八叠球菌：4个菌体排列成正方形，称为四联球菌。8个菌体粘附成包裹状，称为八叠球菌。在标本和培养物中细菌可呈单个分散存在。 2.杆菌：杆菌呈杆状或球杆状。在细菌中杆菌种类最多，其长短、大小、粗细差异很大。大的杆菌如炭疽芽胞杆菌长3～lOμm，中等的如大肠埃希菌长2～3μm，小的如布鲁菌长仅0.6～1.5μm。多数杆菌分散存在，有的杆菌可排列成链状，如炭疽芽胞杆菌；有的呈分支状，如结核分枝杆菌；有的呈"八"字或栅栏状，如白喉棒状杆菌。 3.螺形菌：螺形菌菌体弯曲呈螺形，可分二类：（1）弧菌：菌体长2～3μm，只有一个弯曲，呈弧状或逗点状，如霍乱弧菌。弯曲菌除弯曲呈弧形外，尚可见弯曲呈S形或海鸥状，菌长与弧菌相似。（2）螺菌和螺旋体：菌体长3～6μm，有数个弯曲，如鼠咬热螺茵。（三）影响细菌形态的因素：①培养温度、时间、气体、培养基成分、pH、离子浓度等；②机体内生态环境； ③环境中不利于细菌生长的物质，如药物、抗体、过高的盐分等。

细菌的染色检查法

作细菌染色检查，首先要制备细菌涂片。制备细菌涂片一般包括涂片、干燥、固定三步。1．涂片：取洁净玻片一张，按以下步骤操作 肉汤培养物涂片： ①右手拿接种环的黑色胶柄部分，左手托持试管。 ②接种环以15°角置于酒精灯的外焰中烧灼灭菌，直至金属丝烧红(图1-3)，然后将金属柄部也回旋通过火焰烧灼灭菌。 ③用右手小指和手掌小鱼肌侧拔掉左手所持试管的棉塞，并立即火焰烧灼试管口灭菌。 ④用已灭菌冷却的接种环伸入试管中取出菌液(图1-4)。注意勿使沾有菌液的接种环触及试管壁及试管口。 ⑤再次灭菌试管口，将棉塞在火焰上略加烧灼（时间要短，以免点燃棉塞），塞好棉塞，放回原处。 ⑥将接种环上之菌液涂于载玻片上，制成的菌膜直径约1cm左右。然后将接种环用火焰烧灼灭菌。为防止细菌溅散污染环境，接种环灭菌前，须先将接种环靠近火焰或放内焰中烤干，然后再在外焰中烧红灭菌，杀死残留的细菌。液体标本（如脓液、痰液等）均可照此法涂片斜面培养物涂片： 用细菌斜面（或平板）培养物涂片，需预先取一接种环无菌生理盐水置于载玻片上，然后再按上述无菌操作法从斜面培养物上取少量菌苔，放入生理盐水内轻轻研匀，制成直径lcm左右的菌膜。 如有多个标本行同一方法染色时，可用蜡笔在玻片上划出数格，做好标记再分别进行涂片，以免混淆。 2、干燥： 涂片最好在室温中自然干燥，如需加速干燥，可将标本向上小心地放置离火焰半尺高处，略烘促使干燥，切不可在火焰上烧干。 3、固定： 常用加热固定法。涂片干燥后，让玻片有菌膜的面向上，在火焰的最热部分迅速通过三次。固定之目的是使细菌蛋白变性，菌体牢固黏附于玻片上，还可杀死细菌，改变菌体对染料的通透性。 以上步骤完成后，便可进行各种染色。

第1章细菌的形态与结构

第1章细菌的形态与结构 [各型试题] 一、名词解释 1、荚膜 2、芽胞 3、质粒 4、鞭毛 5、中介体 6、菌毛 7、cell wall of bacterium 8、lipopolysaccharide(LPS) 9、L-form of bacterium 10、Gram staining 二、填空 1、细菌的结构中与革兰染色性和致病性有关是。 2、细菌的特殊结构有、、和。 3、细菌的遗传物质有和。 4、经革兰染色后，被染成紫色的是菌，被染成红色的是。 5、细菌的基本形态有球形菌，和。 6、螺形菌的菌体弯曲螺旋状，致病性螺形菌主要包括，螺菌，弯曲菌和。 7、细菌的基本结构依次是，，细胞质和核质（拟核）。 8、革兰氏阴性菌细胞壁的脂多糖即内毒素包括类脂A，和3种成分。 9、革兰氏阳性菌细胞的主要结构肽聚糖，是由，和五肽交联桥3部分组成。 10、按细菌鞭毛的数目和排列方式，将鞭毛菌分为单毛菌，，和周毛菌4种。 三、选择题 A型题 1、细菌细胞壁的主要功能是： A、生物合成 B、维持细菌的外形 C、参与物质交换 D、呼吸作用 E、能量产生 2、具有抗吞噬作用的细菌结构是:

A、细胞壁 B、荚膜 C、芽胞 D、鞭毛 E、菌毛 3、革兰染色所用染液的顺序是: A、稀释复红-碘液-乙醇-结晶紫 B、结晶紫-乙醇-碘液-稀释复红 C、结晶紫-碘液-乙醇-稀释复红 D、稀释复红-乙醇-结晶紫-碘液 E、稀释复红-结晶紫-碘液乙醇 4、细菌的芽胞: A、是细菌的繁殖形式 B、是细菌的有性遗传物质 C、仅在肠杆菌科出现 D、通常是在缺氧条件下形成 E、是细菌在不利环境条件下形成有抗性的休眠体 5、与内毒素有关的细菌结构是: A、外膜 B、核膜 C、线粒体膜 D、荚膜 E、细胞膜 6、芽胞与细菌有关的特性是: A、抗吞噬作用 B、产生毒素 C、耐热性 D、粘附于感染部位 E、侵袭力 7、无细胞壁结构的微生物是: A、革兰阴性菌 B、真菌 C、支原体 D、立克次体 E、衣原体 8、不属于细菌基本结构的是: A、鞭毛 B、细胞质 C、细胞膜 D、核质（拟核） E、细胞壁 9、内毒素的主要成分为: A、肽聚糖 B、蛋白质 C、鞭毛 D、核酸 E、脂多糖 10、关于细菌L型，错误的说法是: A、主要是由肽聚糖结构的缺陷引起 B、可在体外试验中形成 C、呈多形性E、失去产生毒素的能力而使其致病性减弱 11、细菌大小的测量单位是： A、cm B、mm C、um D、毫微米 E、微微米

肠道菌群粪便涂片检查—用于菌群失调的诊断和防治

肠道菌群粪便涂片检查—用于菌群失调的诊断和防治 理论和基础 一、粪便直接涂片的优缺点： 1、优点： ①设备简单 ②操作简单 ③时间短 ④形象直观，直接了解粪便菌群的“像”，熟练者对诊断菌群失调有较高的准确性。 2、缺点： ①检验者必须有一定的经验，否则易判断错误 ②主要是定性检查，确定分度较困难。 二、操作技术： 1、涂片将新鲜大便直接涂抹在洁净的玻片上，粪便不可稀释以防细菌变形。标本务求新鲜，涂片厚薄适宜。 2、外观肉眼检查外观颜色、形状（若含有膜状物的大便应补做艰难梭菌培养）。 3、镜检染色技术是诊断准确成功的关键，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌要对比鲜明。镜检时应将涂片视野全面观览，切不可看几个视野就计数或报告。 三、检查方法：

1、细菌总数：观察菌群涂片首先要总览细菌总数。了解涂片上细菌的数量是增多还是减少，有无优势菌或真菌。细菌总数过多的情况较少见或不易引起重视。菌群失调时细菌总数多在正常、减少或消失。 细菌总数评定标准 每油镜视野细菌数评价 ＜10显著减少 11—100明显减少 101—500略微减少 501—5000正常 ＞5000增多 2、观察革兰氏阳性、阴性杆菌及球菌的比率改变 革兰氏阳性杆菌：革兰氏阴性杆菌：革兰氏阳性球菌：革兰氏阴性球菌（包括球菌/杆菌）比率反映了粪便菌群的质素，它一般不受粪便稀释或浓缩的影响，所以较细菌总数有更大的意义，更能反映菌群的本质和预后。 选定有代表性视野中的部分区域作细菌分类计数，需要数100—200个细菌以求得比例。不同年龄的人的比例都不一样，一般杆菌与球菌比例约为75：25。 各年龄组细菌比率平均值的正常参考值（%） 年龄革兰氏阳性杆菌革兰氏阴性杆菌革兰氏阳性球菌革兰氏阴性球菌 1d30.7—61.538.5—60.90—2.20—0.01 2d60.0—71.634.8—36.93.0—3.50—0.01 3d66.9—82.716.0—31.41.3—1.60—0.05 4d79.2—86.212.4—19.21.4—1.70—0.1 5d85.5—87.511.0—12.81.4—1.70.08—0.4 6d—7d75.4—90.17.2—20.81.3—2.90.1—0.6

细菌的形态和大小范文

细菌的形态和大小 定义：细菌是一类细胞细而短（细胞直径约0.5um，长度约0.5~5um）、结构简单、细胞壁坚韧、以二等分裂方式繁殖和水生性较强的原核微生物。 生存环境：温暖潮湿、富含有机物的地方，都有大量细菌活动。有特殊的臭味或酸败味，发粘、发滑。 应用：工业上生产各种氨基酸、核苷酸、酶制剂、乙醇、丙酮、丁醇、有机酸、抗生素等；农业上用作杀虫菌剂、细菌肥料的生产和在沼气发酵、饲料青贮等方面的应用；医药上如各种菌苗、类毒素、代血浆和许多医用酶类的生产等；以及细菌在环保和国防上的应用等，都是利用有益细菌活动的例子。 危害：人、动物、植物的传染病、食物和工农业产品腐烂变质。 定义：细菌是一类细胞细而短（细胞直径约0.5um，长度约0.5~5um）、结构简单、细胞壁坚韧、以二等分裂方式繁殖和水生性较强的原核微生物。 生存环境：温暖潮湿、富含有机物的地方，都有大量细菌活动。有特殊的臭味或酸败味，发粘、发滑。 应用：工业上生产各种氨基酸、核苷酸、酶制剂、乙醇、丙酮、丁醇、有机酸、抗生素等；农业上用作杀虫菌剂、细菌肥料的生产和在沼气发酵、饲料青贮等方面的应用；医药上如各种菌苗、类毒素、代血浆和许多医用酶类的生产等；以及细菌在环保和国防上的应用等，都是利用有益细菌活动的例子。 危害：人、动物、植物的传染病、食物和工农业产品腐烂变质。 一、细菌细胞的形态与排列状态 数量：杆菌最为常见，球菌其次，螺旋菌较少。

菌体呈球形或近似球形,以典型的二分裂殖方式繁殖,分裂后产生的新细胞常保持一定的空间排列方式.根据细胞分裂的方向及分裂后的各子细胞的空间排列状态不同,可将球菌分为以下几种: 单球菌、双球菌、链球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌等。 球菌(coccus)及其排列状态 Spherical is called coccus. 常见菌种：Micrococcus ureae（尿素小球菌）、Diplococcus pneumoniae（肺炎双球菌）、Streptococcus lactis（乳链球菌）、S.faecalis（粪链球菌）、S.hemolyticus（溶血链球菌）、Micrococcus tetragenus（四联小球菌）、Sacina lutea（藤黄八叠球菌）、Staphylococcus aureus （金黄色葡萄球菌）等。 单球菌： 细胞分裂沿一个平面进行，新个体分散而单独存在. 如尿素微球菌(Micrococcus ureae) 双球菌： 细胞沿一个平面分裂，新个体成对排列. 如肺炎双球菌(Diplococcus pneumoniae) Division along the same plane forms chains; 2 cocci together - Diplococcus . 4 - 20 in chains - Streptococcus. 链球菌： 细胞沿一个平面进行分裂，新个体不但可保持成对的样子，并可连成链状. 如： 乳链球菌（Streptococcus lactis） 无乳链球菌（Streptococcus agalactiae) 溶血链球菌（Streptococcus hemolyticus) 链的长短往往具种的特性。 ◆Spherical is called coccus. ◆Division along the same plane forms chains; 2 cocci together - Diplococcus . ◆4 - 20 in chains - Streptococcus. 四联球菌： 细胞分裂是沿两个相垂直的平面进行，分裂后每四个细胞特征性地连在一起，呈田字形. 如四联微球菌 （Micrococcus tetragenus） Division along 2 different planes - Tetrads 八叠球菌： 细胞按三个互相垂直的平面进行分裂后，每八个球菌特征性地连在一起成立方体形. 如藤黄八叠球菌 （Sarcina ureae) Division along 3 planes regularly - Sarcinae 葡萄球菌： 细胞无定向分裂，多个新个体形成一个不规则的群体，犹如一串葡萄。

淋球菌涂片检查要注意什么

淋球菌涂片检查要注意什么 淋球菌为严格的人体寄生菌，常存在于急性尿道炎与阴道炎的脓性分泌物的白细胞中，形态染色类似于脑膜炎球菌。菌体结构淋球菌的致病主要与菌体外面的结构有密切关系。淋球菌外面结构为外膜，外膜的主要成分为膜蛋白、脂多糖和菌毛。膜蛋白可使淋球菌黏附于人体黏膜上，通过细胞吞噬作用进人细胞。那么淋球菌涂片检查时，需要注意什么呢？ 在正常人的血、尿、脑脊液、胸膜液、心包液及腹膜液中，均无细菌存在。淋球菌涂片检查，可以帮助检出，协助诊断。采样后，经过涂片、染色进行显微镜检查。本法简便、报告迅速、无须特殊药品和器材等。一般采用最常用的革兰(Gram)氏染色法，可报告革兰氏阳、阴性球菌或杆菌，如能密切结合临

床资料，仍有一定诊断参考价值。咽壁涂片，疑有咽白喉时，如涂片检出白喉棒状杆菌对诊断意义很大。咽、喉结核有时涂片或可发现结核分枝杆菌。在发生坏疽性口炎时，涂片检到梭形杆菌亦有助于诊断。鼻分泌物涂片鼻白喉或疑为瘤型麻风伴有鼻粘膜损害时，从鼻粘膜取粘液涂片，前者可找到白喉棒状杆菌，而后者或可发现麻风杆菌。脓液涂片以脓液作涂片或培养，找到致病菌，有助于分析细菌的致病作用和选择抗菌药物。常见的化脓性细菌有葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌等。 淋球菌感染淋病的主要症状有尿频、尿急、尿痛、尿道口、宫颈口或阴道口有脓性分泌物等。或有淋菌性结膜炎、肠炎、咽炎等表现，或有播散性淋病症状。在干净的载玻片上滴上一滴蒸馏水，用接种环进行无菌操作，挑取培养物少许，置载玻片的水滴中，与水混合做成悬液并涂成直径约1厘米的薄层，为避免因菌数过多聚成集团，不利观察个体形态，可在载玻片之一侧再加一滴水，从已涂布的菌液中再取一环于此水滴中进行稀释，涂布成薄层，若材料为液体培养物或固体培养物中洗下制备的菌液，则直接涂布于载玻片上即可。基本程序是制片→固定→媒染→染色→脱色→复染→水洗→干燥→镜检。根据各种细菌的形态特点，进行判断得出结论。

肠道菌群粪便涂片检查

肠道菌群粪便涂片检查—用于菌群失调的诊断和防治理论和基础 一、粪便直接涂片的优缺点： 1、优点：①设备简单②操作简单③时间短④形象直观，直接了解粪便菌群的“像”，熟练者对诊断菌群失调有较高的准确性。 2、缺点：①检验者必须有一定的经验，否则易判断错误②主要是定性检查，确定分度较困难。 二、操作技术： 1、涂片将新鲜大便直接涂抹在洁净的玻片上，粪便不可稀释以防细菌变形。标本务求新鲜，涂片厚薄适宜。 2、外观肉眼检查外观颜色、形状（若含有膜状物的大便应补做艰难梭菌培养）。 3、镜检染色技术是诊断准确成功的关键，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌要对比鲜明。镜检时应将涂片视野全面观览，切不可看几个视野就计数或报告。 三、检查方法： 1、细菌总数：观察菌群涂片首先要总览细菌总数。了解涂片上细菌的数量是增多还是减少，有无优势菌或真菌。细菌总数过多的情况较少见或不易引起重视。菌群失调时细菌总数多在正常、减少或消失。 细菌总数评定标准 每油镜视野细菌数评价 ＜10显著减少 11—100明显减少 101—500略微减少 501—5000正常 ＞5000增多 2、观察革兰氏阳性、阴性杆菌及球菌的比率改变 革兰氏阳性杆菌：革兰氏阴性杆菌：革兰氏阳性球菌：革兰氏阴性球菌（包括球菌/杆菌）比率反映了粪便菌群的质素，它一般不受粪便稀释或浓缩的影响，所以较细菌总数有更大的意义，更能反映菌群的本质和预后。 选定有代表性视野中的部分区域作细菌分类计数，需要数100—200个细菌以求得比例。不同年龄的人的比例都不一样，一般杆菌与球菌比例约为75：25。 各年龄组细菌比率平均值的正常参考值（%） 年龄革兰氏阳性杆菌革兰氏阴性杆菌革兰氏阳性球菌革兰氏阴性球菌 1d30.7—61.538.5—60.90—2.20—0.01 2d60.0—71.634.8—36.93.0—3.50—0.01 3d66.9—82.716.0—31.41.3—1.60—0.05 4d79.2—86.212.4—19.21.4—1.70—0.1

复习思考题及答案1细菌有哪几种基本形态其大小及繁殖方式

第二章复习思考题及答案 1. 细菌有哪几种基本形态？其大小及繁殖方式如何？ 答：细菌按其个体形态，基本上可分为球状、杆状、螺旋状三种，分别称为球菌、杆菌和螺旋菌。 球菌大小以其直径表示, 大多数球菌的直径为0.5~1μm；杆菌大小以其宽度和长度表示, 多数杆菌的宽度与球菌直径相近，其长度则为宽度的1倍至几倍(约0.5~5μm)；螺旋菌大小也以其宽度和长度表示, 但长度一般是指菌体两端点间的距离, 并非真正的长度。多数螺旋菌大小为0.3 ~ 1 ? 1 ~ 50μm。 细菌一般进行无性繁殖, 最主要的无性繁殖方式是裂殖，即一个细胞通过分裂(二分分裂或折断分裂)，结果由一个母细胞形成大小基本相等的两个子细胞。有少数芽生细菌能象酵母菌一样进行芽殖, 即在母细胞一端先形成一个小突起, 待其长大后再与母细胞分离的一种繁殖方式。此外，还有极少数细菌种类（主要是大肠杆菌），在实验室条件下能通过性菌毛进行有性接合。 2. 试述细菌细胞的一般结构、化学组成及其主要生理功能。 答：一般结构是指一般细菌细胞共同具有的结构，包括细胞壁、细胞质膜、核质体和细胞质等。 (1) 细胞壁革兰氏阳性细菌细胞壁较厚(20 ~ 80 nm), 机械强度较高, 化学组成较简单, 主要含肽聚糖和磷壁酸；革兰氏阴性细菌细胞壁较薄, 机械强度较低, 但层次较多, 成分较复杂, 主要成分除蛋白质、肽聚糖和脂多糖外, 还有磷脂质、脂蛋白等。细胞壁的主要功能是：①维持细胞外形，保护细胞免受外力（机械性或渗透压）的损伤；②作为鞭毛运动的支点；③为细胞的正常分裂增殖所必需；④具有一定屏障作用，对大分子或有害物质起阻拦作用；⑤与细菌的抗原性、致病性及对噬菌体的敏感性密切相关。 (2) 细胞质膜细胞质膜的结构可表述为液态镶嵌模型(fluid mosaic model)，即由具有高度定向性的磷脂双分子层中镶嵌着可移动的膜蛋白构成。其化学组成主要是蛋白质（占50%~70%）和脂类（占20%~30%），还有少量的核酸和糖类。脂类主要是磷脂，每一个磷脂分子由一个带正电荷的亲水极性头（含氮碱、磷酸、甘油）和两条不带电荷的疏水非极性尾（长链饱和与不饱和脂肪酸）组成。非极性尾的长度和饱和度因细菌种类和生长温度而异。 细胞质膜的生理功能主要是：①具有高度的选择透性，控制营养物质的吸收及代谢产物的排除, 是维持细胞内正常渗透压的结构屏障; ②含有各种呼吸酶系，是氧化磷酸化或光合磷酸化产生ATP的部位；③是细胞壁和糖被的各种组分生物合成的场所；④质膜上的间体与DNA复制分离及细胞间隔形成密切相关；⑤是鞭毛的着生点并为其运动提供能量。 (3) 核质体核质体实际上是一条很长的环状双链DNA 与少量类组蛋白及RNA结合, 经有组织地高度压缩缠绕而成的一团丝状结构，通常称之为细菌染色体（图2 –12）。细菌染色体中心有膜蛋白核心构架，构架上结合着几十个超螺旋结构的DNA环，而类核小体环不规则分布在DNA链上。其功能是起贮存遗传信息和传递遗传性状的重要作用。

细菌的形态与结构带答案

第一章细菌的形态与结构 一、单5选1 1.用来测量细菌大小的单位是： C.μm 2.下列哪种结构不是细菌的基本结构： A.细胞壁 B.鞭毛 C.细胞膜 D.细胞质 E.核质 3.下列哪种结构不是细菌的特殊结构： A.鞭毛 B.芽胞 C.菌毛 D.细胞质 E.荚膜 4.革兰阳性菌细胞壁的成分是： A.脂蛋白 B.肽聚糖 C.几丁质 D.胆固醇 E.脂多糖 5.细菌细胞壁的主要功能是： A.生物合成B维持细菌外形保护菌体C.参与物质交换 D.呼吸作用 E.能量产生 6.革兰阳性菌细胞壁的特殊成分是： A.肽聚糖 B.几丁质 C.胆固醇 D.磷壁酸 E.脂多糖 7.革兰阴性菌细胞壁的特殊成分是： A.肽聚糖 B.磷壁酸 C.外膜 D.五肽交联桥 E.脂多糖 8.具有抗吞噬作用的细菌结构是： A.细胞壁 B.荚膜 C.芽胞 D.鞭毛 E.菌毛 9.普通菌毛是细菌的一种： A.细长波状的丝状物 B.运动器官 C.多糖质 D.可传递遗传物质的器官 E.黏附结构 10.抵抗力最强的细菌结构是： A.芽胞 B.外膜 C.鞭毛 D.核糖体 E.细胞壁 11.细菌核质以外的遗传物质是： B.核蛋白体 C.质粒 D.性菌毛 E.异染颗粒 12.参与细菌呼吸、生物合成及分裂繁殖的结构是： A.菌毛 B.荚膜 C.鞭毛 D.中介体 E.胞浆膜 13.与细菌侵袭力有直接关系的结构是：

A.质粒 B.异染颗粒 C.芽胞 D.中介体 E.荚膜 14.细菌L型的形成与以下哪种结构有关： A.中介体 B.细胞膜 C.细胞壁 D.细胞质 E.核质 15.细菌鞭毛的主要作用是： A.与运动有关 B.与致病力有关 C.与抵抗力有关 D.与分裂繁殖有关 E.与结合有关 16.溶菌酶的灭菌机制是： A.竞争肽聚糖合成中所需的转肽酶 B.与核蛋白体的小亚基结合 C.裂解肽聚糖骨架的β-1，4糖苷键 D.竞争性抑制叶酸的合成代谢 E.破坏细胞膜 17.青霉素抗菌的作用机制是： A.干扰细菌蛋白质的合成 B.破坏细胞壁中的肽聚糖结构 C.破坏细胞膜 D.抑制细菌的酶活性 E.抑制细菌的核算代谢 18.革兰染色所用试剂的顺序是： A.稀释复红→碘液→酒精→结晶紫 B.结晶紫→酒精→碘液→稀释复红 C.结晶紫→碘液→酒精→稀释复红 D.稀释复红→酒精→结晶紫→碘液 E.稀释复红→结晶紫→碘液→酒精 19.关于细菌L型的描述，错误的一项是： A.呈高度多样性，G-菌 B.在固体培养基上，可形成“油煎蛋”样菌落 C.分离培养需用低渗高琼脂培养基 D.去除抑制后，可恢复原有形态 E.是细胞壁缺陷仍然可以生长繁殖，具有致病力的细菌 20.细菌芽胞的特点是： A.抗吞噬作用 B.毒素活性 C.耐高温 D.黏附作用 E.侵袭力 21.细菌芽胞与高度耐热有关的特有化学组分是： A.核酸 B.肽聚糖 C.磷脂 D.多糖 E.吡啶二羧酸盐 22.构成细菌H抗原的结构是： A.鞭毛 B.荚膜 C.细胞壁 D.芽胞 E.菌毛 23.检测细菌具有鞭毛的培养方法是：

痰液标本细菌学检验(一)

痰液标本细菌学检验（一） 关键词：细胞库菌株培养中心 atcc 北京标准物质网 一、检验程序 痰及呼吸道标本的细菌学检验程序见图34—1。 二、检验方法 (一)显微镜检查 1．一般细菌涂片检查挑取标本中脓性或带血部分涂片进行革兰染色镜检，描述观察到的细菌的染色性、形态及排列等特征，可发出初步报告。 2．结核分枝杆菌涂片检查挑取标本干酪样或脓性部分做抗酸染色和金胺“O”荧光染色，前者用油镜，后者用荧光显微镜检查。具体操作详见第十五章分枝杆菌属检验。 3．放线菌及诺卡菌涂片检查将痰液用生理盐水反复洗涤数次，挑取黄色颗粒(硫黄颗粒)或不透明着色斑点，置玻片上并覆以盖玻片，轻压后置高倍镜下观察。如见中央为交织的菌丝，其末端粗杆呈放线状排列时揭去盖玻片，待干后做革兰染色及抗酸染色镜检。 4．下呼吸道其他标本检查支气管肺泡灌洗液等直接取自下呼吸道的标本，不易受上呼吸道杂菌的污染，涂片检菌的意义较大。可取离心沉淀物进行革兰染色与抗酸染色检查。 (二)培养和鉴定 1．痰培养标本的前处理于痰标本中加入一定量无菌生理盐水，剧烈振荡5～10秒后，将沉淀于管底的脓痰小片取出，置于另一试管中，同法再处理2次，可洗去痰中的正常菌群。然后向洗涤过的痰液中加入等量pH 7. 6的1％胰酶溶液，放置35℃环境90分钟，使痰液均质化后备用。 2．培养基与培养环境 (1)血琼脂平板：适用于分离多种细菌，需氧环境，可分离β-溶血性链球菌，葡萄球菌；置于5％CO 环境培养，分离肺炎链球菌和β-溶血性链球菌。根 2

据血琼脂平板生长的菌落特征及镜检形态，得出初步结果，再按各类细菌特性做进一步鉴定。 环境培养，常用于分离嗜血杆菌和脑膜 (2)巧克力色琼脂平板：置于5％CO 2 炎奈瑟菌等有特殊营养需求的细菌。 (3)中国蓝琼脂平板／麦康凯平板：需氧环境培养，常用于分离肠杆菌科细菌。 (4)TTC-沙保弱培养基：需氧环境培养，用于分离白假丝酵母菌及其他酵母菌、诺卡菌、放线菌以及烟曲霉菌等。 (5)厌氧血平板：厌氧环境培养，用于培养厌氧菌。 环境培养，改良罗氏培养基、 (6)结核分枝杆菌培养基：需氧或5％～10％CO 2 米氏7H10培养基或其他合适的培养基，用于培养结核分枝杆菌。 (7)军团菌专用培养基：置于2．5％～5. 0％CO 环境培养，药用炭酵母琼 2 脂(CYE)培养基、F-G琼脂，用于培养军团菌。 3．标本的培养 (1)普通细菌培养：将处理后的痰标本接种于血琼脂平板、中国蓝琼脂平板 环境／麦康凯平板、巧克力色琼脂平板上，分别放入普通环境和5％～10％CO 2 中，35℃培养18～24小时，观察菌落特征，并涂片进行革兰染色，根据菌体的形态特点做进一步鉴定。有条件或必耍时进行厌氧培养。具体操作详见第十七章厌氧性细菌检验。 (2)结核分枝杆菌培养：将处理后的痰标本接种于改良罗氏培养基或米氏 环境中培养。根据初步生长出菌落时间和7H10培养基，置35℃、5％～10％CO 2 是否产生色素等特点，加以判定。 (3)标本的菌落计数培养：液体标本，如保护性支气管肺泡灌洗吸出液(PBAL)、气管穿刺抽吸液(TTA)、保护性标本刷洗液(PSB)标本或定量稀释均质化处理的痰标本，可做菌落计数培养。 常用的改良Gould法是一种半定量的方法，先将平皿分为A、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ等4个区，阻3mm接种环取一满环液化痰液(或定量采集的PBAL、TTA、PSB)接种于血琼脂平板或巧克力色琼脂平板，先在A区画线20~40条，然后在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ区分别画线4条。在做Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分区画线前，接种环均须经烧灼灭菌。接种后的