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碧云天一氧化氮合成酶检测试剂盒

碧云天一氧化氮合成酶检测试剂盒
碧云天一氧化氮合成酶检测试剂盒

一氧化氮合成酶检测试剂盒

产品编号产品名称包装

S0025 一氧化氮合成酶检测试剂盒 100次

产品简介:

?一氧化氮合成酶检测试剂盒(Nitric Oxide Synthase Assay Kit)可以检测活细胞内总的一氧化氮合成酶的活性。如果和特异性的一氧化氮合成酶抑制剂配合使用,也可以检测不同类型的一氧化氮合成酶的活性。

?本试剂盒提供了一种在生理条件下通过荧光检测活细胞内一氧化氮合成酶活性的方法,不需要使用传统方法所需的放射性同位素。本试剂盒采用了可以穿透细胞膜的最新一代一氧化氮荧光检测探针DAF-FM DA (3-amino,4-aminomethyl-2’,7’-difluorescein, diacetate),在提供充足的底物的条件下检测细胞内的一氧化氮合成酶可以催化产生的一氧化氮量,从而检测出一氧化氮合成酶的活性。详细的检测原理参考图1。采用一些一氧化氮合成酶的抑制剂则可以测定出特定类型的一氧化氮合成酶的活性。例如,采用iNOS抑制剂,未加iNOS抑制剂测定出来的酶活力减去加了iNOS抑制剂测定出来的酶活力就是iNOS的酶活力。

图1. 一氧化氮合成酶检测试剂盒原理图

?本试剂盒是目前为止世界上最先进的一种一氧化氮合成酶检测试剂盒。和Calbiochem等多年前就开始提供的一氧化氮合成酶检测试剂盒相比无需使用同位素,和Sigma等最近推出的基于荧光的一氧化氮合成酶检测试剂盒相比采用了最新一代的荧光探针,灵敏度更高,特异性更好。本试剂盒的缺点是和其它荧光法一氧化氮合成酶检测试剂盒一样,仅能提供一氧化氮合成酶的相对活性。

?本试剂盒和检测细胞内一氧化氮水平的不同之处在于提供了充足的底物L-Arginine和一些可以穿透细胞膜的反应辅助因子,确保一氧化氮合成酶的催化的一氧化氮合成不会受底物的量或辅助因子的量的限制,从而可以测定出细胞内一氧化氮合成酶活力。

?本试剂盒最适合用于贴壁的细胞或组织的一氧化氮合成酶的检测,对悬浮细胞也可以进行检测。

?本试剂盒可以测定100个样品。

包装清单:

产品编号产品名称包装

S0025-1 NOS检测缓冲液(2X) 15ml

S0025-2 精氨酸溶液600μl

S0025-3 NADPH 2.3mg

S0025-4 DAF-FM DA(5mM) 20μl

—说明书1份

保存条件:

-20℃保存,DAF-FM DA需避光保存,半年有效。

注意事项:

?RPMI 1640等含有较高浓度硝酸盐的培养液容易对本试剂盒的检测产生干扰,请尽量避免。

?由于检测过程中有还原反应,凡是影响还原反应的氧化或还原试剂要注意避免,例如常用的还原剂DTT和巯基乙醇。

?DAF-FM DA在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内,可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。

?为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:

1.细胞或组织培养:

把待检测的细胞或组织培养到96孔板内,通常以培养16-24小时后细胞为80-90%满为宜。可以留至少一个孔作为没有细胞的空白对照。

2.试剂的准备:

NADPH溶液的配制:加入1ml MilliQ级纯水,充分溶解并混匀,配制成2.5mM的NADPH溶液。分装成小管,当日不使用的立即-70℃冻存。取适量2.5mM NADPH,用NOS检测缓冲液稀释成0.1mM NADPH。

NOS检测缓冲液的配制:取适量NOS检测缓冲液(2X),加入等量MilliQ级纯水,混匀即成NOS检测缓冲液。

检测反应液的配制:检测反应液参考下表配制,即1个反应就配制100微升,10个反应就配制1毫升。

1个反应10个反应20个反应

NOS检测缓冲液(2X) 50微升 500微升1毫升

MilliQ级纯水39.8微升398微升796微升

精氨酸溶液5微升 50微升 100微升

0.1mM NADPH 5微升50微升100微升

DAF-FM DA 0.2微升2微升4微升

检测反应液总体积100微升1毫升2毫升

参考上表依次加入各种试剂,混匀后即为检测反应液。注意:DAF-FM DA较易下沉,配制时一定要注意把DAF-FM DA混匀。

3.样品的检测:

细胞或组织内一氧化氮合成酶的活性检测有如下两种方法:

a.边刺激边测定。对于短时间药物等刺激(通常2小时以内)可以显著提高一氧化氮合成酶活性的情况可以使用本方法。

?吸尽培养液,加入100微升NOS检测缓冲液。如果是悬浮细胞,可以将96孔板离心后吸去上清,或将生长良好的细胞直接从培养的器皿中离心收集后按照适当密度用NOS检测缓冲液重悬后,按照每孔100微升均匀加入到

96孔板中。

?再加入100微升检测反应液,轻轻混匀。

?37℃细胞培养箱内孵育20-120分钟。具体孵育时间因不同的刺激和不同的细胞而不同,需自行摸索。对于经典的LPS和γ-IFN共同刺激RAW 264.7细胞,诱导一氧化氮合成酶活力的提高,孵育120分钟后检测,可以观察到

刺激前后总的一氧化氮合成酶活力提高6-10倍。

?直接取该96孔板用荧光酶标仪检测。以没有细胞的孔为空白对照,激发波长为495nm,发射波长为515nm。用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪也可以进行检测。

b.先刺激后测定。对于需长时间刺激(通常6小时以上)才可以显著提高一氧化氮合成酶活性的情况可以使用本方法。

?细胞或组织刺激后,吸尽培养液,加入100微升NOS检测缓冲液。如果是悬浮细胞,可以将96孔板离心后吸去上清,再加入100微升NOS检测缓冲液。

?再加入100微升检测反应液,轻轻混匀。

?37℃细胞培养箱内孵育20-60分钟。具体孵育时间因不同的刺激和不同的细胞而不同,需自行摸索。

?直接取该96孔板用荧光酶标仪检测。以没有细胞的孔为空白对照,激发波长为495nm,发射波长为515nm。由于波长的设置和FITC检测时的波长设置非常接近,可以直接使用FITC的设置。用激光共聚焦显微镜或流式细胞

仪也可以进行检测。

4.样品中特定的一氧化氮合成酶的检测(本步骤可以和上述步骤3同时进行):

?无论是边刺激边测定还是先刺激后测定,吸尽培养液后加入100微升含有适当浓度的特定一氧化氮合成酶抑制剂的NOS检测缓冲液。

?再加入100微升检测反应液,轻轻混匀。

?37℃细胞培养箱内孵育20-60分钟或20-120分钟。具体孵育时间因不同的刺激和不同的细胞而不同,需自行摸索。

?直接取该96孔板用荧光酶标仪检测。以没有细胞的孔为空白对照,激发波长为495nm,发射波长为515nm。由于波长的设置和FITC检测时的波长设置非常接近,可以直接使用FITC的设置。用激光共聚焦显微镜或流式细胞

仪也可以进行检测。

5.一氧化氮合成酶相对活力的计算:如果以没有刺激前样品中一氧化氮合成酶的活力为1,那么刺激后:

样品中一氧化氮合成酶相对活力=(RFU已刺激-RFU空白)/(RFU未刺激-RFU空白)

RFU, relative fluorescence unit, 即为实际测定得到的相对荧光强度。

6.特定一氧化氮合成酶相对活力的计算:例如检测时加了iNOS的抑制剂,如果以没有刺激前样品中一氧化氮合成酶的活力

为1,那么刺激后:

样品中iNOS酶相对活力=(RFU已刺激-RFU(抑制剂+已刺激))/( RFU未刺激-RFU (抑制剂+未刺激))

7.如果使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪进行检测,可以参考上述方法进行。

使用本产品的文献:

1. Li MX, Wang YR, Cao JM, Tian GZ, Zhao LH.

To Explore the Double - labelingMethod ofMon itor ing the GHRP Regula tory Function on [ Ca2+ ] i and NO on Rea l Time in Card iomyocytes Under LSCM. J Med Res. Aug 2007,V ol.36 No.8.

2. Cao X, You QD, Li ZY, Guo QL, Shang J, Yan M, Chern JW, Chen ML.

Design and synthesis of 7-alkoxy-4-heteroarylamino-3-quinolinecarbonitriles as dual inhibitors of c-Src kinase and nitric oxide synthase.

Bioorg Med Chem. 2008 Jun 1;16(11):5890-8.

3. Cao X, You QD, Li ZY, Liu XR, Xu D, Guo QL, Shang J, Chern JW, Chen ML.

The design, synthesis and biological evaluation of 7-alkoxy-4-heteroarylamino-3-cyanoquinolines as dual inhibitors of c-Src and iNOS.

Bioorg Med Chem Lett. 2008 Dec 1;18(23):6206-9.

4. Zhao F, Wang L, Liu K.

In vitro anti-inflammatory effects of arctigenin, a lignan from Arctium lappa L., through inhibition on iNOS pathway.

J Ethnopharmacol. 2009 Apr 21;122(3):457-62.

5. Xiong J, Lu H, Lu K, Duan Y, An L, Zhu C.

Cadmium decreases crown root number by decreasing endogenous nitric oxide, which is indispensable for crown root primordia initiation in rice seedlings.

Planta. 2009 Sep;230(4):599-610. Epub 2009 Jun 26.

鼎国小鼠诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)说明书

小鼠诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)酶联免疫分析(ELISA) 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的含量。 实验原理: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)水平。用纯化的小鼠诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入诱导型一氧化氮合成酶(iNOS),再与HRP标记的iNOS抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)浓度。 样本处理及要求: 1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上 清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。 2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心 20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。 3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程 中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/

分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备 用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融. 7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 操作步骤 1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标 准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为480 pg/ml ,320pg/ml ,160 pg/ml,80 pg/ml ,40 pg/ml)。 2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。 5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此 重复5次,拍干。 6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 7.温育:操作同3。 8.洗涤:操作同5。 9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色 15分钟. 10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。 注意事项: 1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。 2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。 4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计

小鼠肾脏发生发育中神经型一氧化氮合酶的定量分析(一)

小鼠肾脏发生发育中神经型一氧化氮合酶的定量分析(一) 作者:刘霞包翠芬张晓明穆长征 【摘要】目的:对生后小鼠肾脏发生发育不同阶段中神经型一氧化氮合酶(nNOS)的表达进行定量分析,探讨nNOS在小鼠生后肾脏发育中的意义。方法:分别取新生(出生小于2h)、生后3、5、7、14、40天昆明小鼠各8只,共6组,用免疫印迹技术和光密度分析方法对各组小鼠生后肾神经型一氧化氮合酶进行定量检测,以测得的一氧化氮合酶最大量为1(100%),计算蛋白相对含量,SPSS10.0统计软件包统计分析。结果:新生组酶含量最高为100%,随年龄增长酶含量逐渐减少,至成年达到最低水平为44.8±2.4%。结论:这一趋势表明nNOS可能在小鼠生后肾脏发育的早期阶段起重要调节作用。 【关键词】小鼠;肾;神经型一氧化氮合酶 一氧化氮(NO)作为体内重要的信使分子和效应分子,在调节肾脏血流动力学方面具有重要的作用。肾脏中的NO主要由一氧化氮合酶(NOS)催化产生。NOS有三个亚型,即神经型一氧化氮合酶(nNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)〔1〕。目前对肾发生发育过程中NO和NOS的研究还刚刚起步,本实验通过定量方法检测生后小鼠的发生发育不同阶段nNOS的含量,旨在探讨nNOS在小鼠肾脏发生发育中的意义。 1材料和方法 1.1实验动物与分组

成年健康昆明小鼠(辽宁医学院实验动物中心提供)。根据小鼠孕程确认仔鼠出生时间,取新生(小于2h)、3、5、7、14、40天小鼠各8只,共6组。 1.2主要试剂 nNOS兔抗鼠多克隆抗体(北京中杉公司);细胞裂解液、丙稀酰胺、N,亚甲基双丙稀酰胺、甘氨酸、Tween20、、Trisbase、SDS和PVDF膜(SIGMA公司)。 1.3Westernblot步骤 各组小鼠麻醉后剖腹取右肾,PBS冲洗,迅速置于液氮冷冻,-70℃冰箱保存。取冷冻肾组织,加入3倍体积的细胞裂解液,0℃下剪碎、匀浆,将组织匀浆液静置30min,4℃,12000rpm离心10min,留取上清液。用Bradford 法测定蛋白含量,分装成每离心管中含10μg蛋白,-20℃冰箱保存。 配制10%分离胶和5%浓缩胶,取10μg(30μl)肾组织蛋白细胞裂解上清液,加入10μlSDS样品缓冲液,100℃加热3min,离心。取上述裂解液加入电泳胶样品槽,100V电压下电泳,待样品到达合适位置,停止电泳,将胶板取下,转膜液洗涤10~30min。将胶与0.45μmPVDF膜(用前置于甲醇内浸透5min左右,再放入转膜液中至少5min)置于厚滤纸(已用转膜液浸泡)之间,赶尽气泡,常温下半干转印,转印完成后将PVDF膜用 溶液)冲洗,5%脱脂奶粉溶液室温封闭1~2h。与一抗(兔抗小鼠nNOS抗体,稀释度为1∶400)4℃孵育过夜,TBST洗脱3次,每次至少5min;再与二抗(碱性磷酸酶标记的羊抗兔IgG抗体,稀释

小鼠一氧化氮合成酶(NOS)说明书

小鼠小鼠一氧化氮合成酶一氧化氮合成酶一氧化氮合成酶(NOS)(NOS)(NOS)酶联免疫酶联免疫酶联免疫分析分析分析 试剂试剂盒使用说明书盒使用说明书盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围检测范围:: 96T 1μmol/L - 32μmol/L 使用目的使用目的:: 本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中一氧化氮合成酶(NOS)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠一氧化氮合成酶(NOS)水平。用纯化的小鼠一氧化氮合成酶(NOS)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入一氧化氮合成酶(NOS),再与HRP 标记的一氧化氮合成酶(NOS)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的一氧化氮合成酶(NOS)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中小鼠一氧化氮合成酶(NOS)浓度。 试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml ×1瓶 7 终止液 6ml ×1瓶 2 酶标试剂 6ml ×1瓶 8 标准品(64μmol/L ) 0.5ml ×1瓶 3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml ×1瓶 4 样品稀释液 6ml ×1瓶 10 说明书 1份 5 显色剂A 液 6ml ×1瓶 11 封板膜 2张 6 显色剂B 液 6ml ×1/瓶 12 密封袋 1个 标本标本要求要求 1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融 2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP )活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。 32μmol/L 5号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液 16μmol/L 4号标准品 150μl 的5号标准品加入150μl 标准品稀释液 8μmol/L 3号标准品 150μl 的4号标准品加入150μl 标准品稀释液 4μmol/L 2号标准品 150μl 的3号标准品加入150μl 标准品稀释液 2μmol/L 1号标准品 150μl 的2号标准品加入150μl 标准品稀释液 2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、

内皮型一氧化氮合酶脱偶联的研究进展

Therapeuti c effects of a sp i r i n and m echan is m s of a sp i r i n resist ance HUA Yi2nan,X I E Mei2lin (D ept of Phar m acology,M edical School of Suzhou U niversity,Suzhou 215123,China) Abstract:A s p irin is one of the maj or drugs used f or p reventing ather othr ombotic vascular diseases,but not effective t o all patients or s o2called as p irin resistance. However,the mechanis m s of this resistance still re2 mains t o be elucidated.The recent p r ogresses is re2vie wed in the therapeatic effect of as p irin and mecha2 nis m s of the drug resistance. Key word:as p irin;as p irin resistance;thr ombosis; p latelet;mechanis m 内皮型一氧化氮合酶脱偶联的研究进展郑建普1,卞 卡1,2,3,可 燕1,2,Murad Ferid1,3 (1.上海中医药大学穆拉德中药现代化研究中心,上海 201203;2.上海高校一氧化氮与炎症医学研究院,上海 201203;3.美国德克萨斯大学休斯顿医学院综合生物及药理学系,德克萨斯大学分子医学研究所,休斯顿 T X77030) 中国图书分类号:R205;R28911;R345144;R5431023; R7431023;R91613;R97713;R97714 文献标识码:A文章编号:1001-1978(2006)06-0659-05摘要:血管内皮功能障碍(endothelial dysfuncti on)是多种心脑血管疾病的共同病理机制,其突出表现为内皮依赖性血管舒张功能障碍,主要由NO减少及氧自由基增加所致。最新研究发现,内皮型一氧化氮合酶脱偶联(e NOS uncoup ling)是导致NO水平下降和氧自由基水平升高的重要机制,是高血压、糖尿病、动脉粥样硬化等疾病中内皮功能障碍的重要原因。通过纠正e NOS脱偶联可有效改善内皮功能,有望为保护血管内皮功能提供有效途径。 关键词:e NOS脱偶联;内皮功能障碍;一氧化氮;氧化应激;四氢生物蝶呤 血管内皮细胞(vascular endothelial cells, VECs)是分布于所有血管内侧的单层纵向细胞,在调节血管舒缩状态、凝血和纤溶,防止有害脂蛋白浸 收稿日期:2006-02-22,修回日期:2006-04-16 基金项目:上海市教委高校一氧化氮与炎症医学E研究院计划资助项目(No E204010);上海市教委重点科研资助项目(No 05ZZ11);上海市科委基础研究重点资助项目(No 05JC14056) 作者简介:郑建普(1979-),男,博士生,研究方向:心血管药理学与炎症医学,Tel:021*********,E2mail:je mpoo.tseng@ g https://www.wendangku.net/doc/f511926868.html,; 卞 卡(1958-),男,教授,博士生导师,研究方向:心脑 血管药理学与炎症医学,通讯作者,Tel:021*********,E2 mail:Ka.B ian@uth.t m https://www.wendangku.net/doc/f511926868.html, 润及氧自由基损伤等方面起重要作用。大量实验研究证明,正常的血管内环境是抵御心血管疾病的基础防线,内皮细胞的健康与否直接关系到血管内环境的稳定,而一氧化氮(nitric oxide,NO)信息系统的健全又是内皮细胞发挥生理作用的关键。正常生理条件下,血管系统中的NO主要源于内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,e NOS),发挥扩张血管、调节血压、抑制血小板聚集、抗平滑肌细胞增殖等作用[1]。近年来,大量的基础及临床资料进一步证实,在诸如高血压、动脉粥样硬化、充血性心力衰竭、糖尿病及长期吸烟等病理情况下, e NOS出现功能障碍,此时e NOS不再生成NO而是产生超氧阴离子,造成NO生物利用度降低及氧化应激(oxidative stress)增加,导致或加重内皮功能障碍,该现象被称为e NOS脱偶联(e NOS uncoup2 ling)[2,3]。 1 eN O S脱偶联的产生机制 e NOS脱偶联的产生机制主要有:①NO生成底物L2精氨酸(L2arginine,L2A rg)不足,使本应转移到L2A rg的电子转移到O2从而产生超氧阴离子(O? 2 );②NO生成的重要辅助因子四氢生物蝶呤 (tetrahydr obi op terin,BH4)供应不足,导致主要的终 产物是O? 2 ,而不是NO;③氧化应激使e NOS结构发生改变从而导致活性下降。 1.1 L2Arg与eN O S脱偶联 L2A rg是人体的半必需氨基酸之一,也是NO合成的底物。L2A rg在生理 浓度下,电子由NADPH转移到F AD,生成F ADH 2 , ? 9 5 6 ? 中国药理学通报 Chinese Phar m acological B ulletin 2006Jun;22(6):659~63

人一氧化氮合成酶(NOS)elisa试剂盒使用说明书

人一氧化氮合成酶(NOS)elisa试剂盒使用说明书 Elisa kit规格:48孔配置/96孔配置 标准品稀释液:1.5ml×1瓶 酶标试剂:3 ml×1瓶(48)/6 ml×1瓶(96) 【人一氧化氮合成酶(NOS)elisa试剂盒】本试剂仅供研究使用 计算: 以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。 试剂盒组成: 封板膜:2片(48)/2片(96) 说明书:1份 密封袋:1个 标准品:2700ng/L 0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存 酶标包被板: 1×48 1×96 2-8℃保存 样品稀释液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存 显色剂A液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存 显色剂B液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存 终止液: 3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存 浓缩洗涤液:(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存 实验原理: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人一氧化氮合成酶(NOS)水平。用纯化的人一氧化氮合成酶(NOS)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入一氧化氮合成酶(NOS),再与HRP标记的一氧化氮合成酶(NOS)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的一氧化氮合成酶(NOS)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人一氧化氮合成酶(NOS)浓度。 目的:本试剂盒用于测人血清,血浆及相关液体样本中一氧化氮合成酶(NOS)的含量。 服务承诺: 供货期:款到发货。 工作时间内免费的技术咨询和指导。请来电咨询 为客户提供来样检测服务,最大限度实验结果的有效性(免费代测)。 保存条件及有效期: 试剂盒保存:2-8℃| 有效期:6个月 【人一氧化氮合成酶(NOS)elisa试剂盒】样本处理及要求: 1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上 清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。 2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心 20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

一氧化氮及其合酶在杀伤肿瘤细胞中的作用(一)

一氧化氮及其合酶在杀伤肿瘤细胞中的作用(一) 关键词:巨噬细胞肺泡一氧化氮合酶肿瘤活化的巨噬细胞(M)在抗肿瘤过程中具有十分重要的意义。一氧化氮(NO)作为活化的M的细胞毒效应分子之一,在杀伤肿瘤效应中起重要作用〔1〕。本研究通过测定肺M内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及其产物NO水平,并应用特异性NOS抑制剂来观察肺M对肿瘤细胞杀伤作用的影响,旨在探讨肺MNOS 活性与肿瘤杀伤力之间的关系,以阐明肺M在抗肿瘤免疫中的地位。1材料和方法 1.1肺M的制备及培养体质量20~25g的纯种C57雄性小鼠32只,购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司,随机分成实验组和对照组,每组16只,均经腹腔注入2%戊巴比妥钠麻醉,腹主动脉放血处死,暴露颈部气管后,用37℃生理盐水进行支气管肺泡灌洗,每次1ml,共15次。将回收的灌洗液以1500r/min离心10min,弃上清,用含10%小牛血清的最低必需培养液(MEM)配成1×106个/ml的细胞悬液。将细胞悬液接种于96孔板中,37℃,5%CO2培养2h,洗去未贴壁细胞,根据需要分别加入不同剂量(50,100,150,200U/ml)的干扰素γ(INFγ),继续培养24h。 1.2肿瘤细胞培养上清液的收集将无菌取得的肥大细胞肿瘤细胞P815(上海肿瘤研究所提供)以5×105个/ml的密度培养在RPMI1640培养液中,置37℃,5%CO2培养箱培养48h,2500r/min离心20min,取上清液,置-20℃保存待用。 1.3iNOS活性测定用Smith薄层层析法〔2〕测定上清液培养标本中瓜氨

酸(citrulline)的生成量,以此反映iNOS的活性。 1.4NO测定10mmol/L硼酸钠溶液系列稀释10mmol/L亚硝酸钠,测定其相应于波长为545nm时的光密度(D)值,作曲线,并得出直线回归方程式〔3〕。取上清培养液,加入等量的Greiss试剂(1%磺胺、0.1%萘乙二胺、 2.5%磷酸),室温放置10min,545nm比色,根据直线回归方程计算出NO含量。 1.5肺M肿瘤杀伤活性测定在培养板内加入肺M悬液100μl/孔,实验组再加入2mmol/LNG单甲基左旋精氨酸(L-NMMA,Sigma公司),50μl/孔,置37℃,5%CO2培养箱培养4h,再加入含10%P815上清液的营养液100μl/孔,置37℃,5%CO2培养72h。每孔加二甲基亚砜(DMSO)100μl,混匀静置20min,在PG-3022酶联仪上用570nm波长测定D值,计算肿瘤细胞生长抑制率。 1.6统计学处理所有数据采用X±s表示,组间显著性检验用配对资料t 检验,各指标进行直线相关分析。 2结果 2.1不同剂量INFγ对肺M产生NO的影响不同剂量的INFγ与活化的肺M共同培养24h后,培养液中NO含量随着INFγ剂量的增加而升高(图1),且呈明显的剂量依赖关系(r=0.985,t=19.89,P<0.01)。 图1INFγ对肺巨噬细胞NO产生和iNOS活性的影响 fig1TheeffectofINFγonNOproductionand activityofiNOSbymacrophages

巨噬细胞中诱导型一氧化氮合酶来源的 N O

PEG 10mRNA 的抑制作用最强,表明靶mRNA 的 二级结构对siRNA 的功能有很大影响。 本研究中我们构建针对PEG 10基因的siRNA 真核表达载体,并通过酶切鉴定和测序鉴定,说明我们构建的针对PEG 10的真核表达载体是正确有效的,可以用于后续PEG 10基因功能的研究,以及沉默PEG 10后抑制肝癌细胞生长,诱导肝癌细胞凋亡,从而为肝癌的基因治疗提供理论依据和实验工具。 参考文献: [1] Ryuichi Ono ,Shin K obayashi ,Hirotaka Wagat suma ,et al.A retrotransposon 2derived gene ,PEG 10,is a novel imprinted gene located on human chromosome 7q 21[J ]. Genomics , 2001,73(2):2322237. [2] Noble A ,Towne C ,Chopin L ,et al.Insulin 2like growt h fac 2 tor 2Ⅱbound to vitronectin enhances MCF 27breast cancer cell migration[J ].Endocrinology ,2003,144(6):241722424.[3] Moorehead RA ,Sanchez O H ,Baldwin RM ,et al.Transgenic overexpression of IGF 2Ⅱindues spontaneous lung tumors :a model for human lung adenocarcinoma [J ].Oncogene ,2003, 22(6):8532857. [4] Vella V ,Sciacca L ,Pandini G ,et al.The IGF system in t hy 2 roid cancer :new concept s[J ].Mol Pat hol ,2001,54(3):1212 124. [5] Tsou AP ,Chuang YC ,Su J Y ,et al.Overexpression of a no 2 vel imprinted gene ,PEG 10,in human hepatocellular carcino 2ma and in regenerating mouse livers [J ].J Biomed Sci ,2003, 10(6Pt 1):6252635. [6] Hiroshi Okabe ,Seiji Satoh ,Y oichi Furukawa ,et al.Involve 2 ment of PEG 10in human hepatocellular carcinogenesis t hrough interaction wit h SIA H 1[J ].Cancer Research ,2003,63(12): 304323048. [7] 常莹,陶璐薇,陈孝平,等.肝癌组织中遗传印记基因PEG 10 表达的特异性及其意义[J ].世界华人消化杂志,2005,13 (12):140821411. [8] Naito Y ,Yamada T ,Ui 2Tei K ,et al.siDirect :highly effec 2 tive ,target 2specific siRNA design software for mammalian RNA interference [J ].Nucleic Acids Res ,2004,32:W 1242 129. [9] Reynolds A ,Leake D ,Boese Q ,et al.Rational siRNA design for RNA interference[J ].Nat Biotechnol ,2004,22(3):3262 330. [编辑:刘红武] 收稿日期:2006202221;修回日期:2006204214基金项目:怀化市科技计划资助项目(0502) 作者单位:1.418000湖南怀化医学高等专科学校检验  系;2.中国科学院生物物理研究所结构与分子生物学研究 中心作者简介:张申(1955-),男,学士,教授,主要从事自由 基生物学研究 巨噬细胞中诱导型一氧化氮合酶来源的NO 对共培养HL 60细胞凋亡的影响 张 申1,尹利华1,卫涛涛2 E ffects of Inducible Nitric Oxide Synthase Derived Nitric Oxide on Apoptosis of H L 60Cells Co 2cultured with RAW 264.7Macrophages ZHAN G Shen 1,YIN Li 2hua 1,WEI Tao 2tao 2 1.De partment of L aboratory Medicine ,H uai hua Medical College ,H uai hua 418000,China; 2.Center f or S t ructural and Molecular B iology ,I nstitute of B iophysics ,Chinese A cadem y of Sciences Abstract :Objective To study effects of inducible nitric oxide synthase (iNOS )2derived nitric oxide (NO )on apoptosis of HL 60cells co 2cultured with RAW 264.7macrophages.Methods Upon stimulation with lipopolysaccharide (L PS )and interferon 2 γ(IFN 2γ),inducible nitric oxide synthase gene was expressed in RAW 264.7macrophages ,which caused the consequent generation of nitric oxide.Effects of nitric oxide on HL 60cells viability ,expression of bcl 22and bax protein ,activity of Caspase 23and cell apoptosis were evaluated with M T T assay ,Western blot analysis ,fluorescence analysis ,flow cytometry (FCM ),trans 2mission electron microscopy (TEM )and DNA agarose gel electrophoresis.R esults The results showed that iNOS 2derived nitric oxide caused oxidative damage of HL 60cells co 2cultured with RAW 264.7mac 2rophages ,and decreased cell viability ,and evidently reduced expression of bcl 22and increased expression of bax ,and induced activity of caspase 23and DNA f ragmentation.Conclusion The results suggested im 2portant effect of iNOS 2derived nitric oxide on apoptosis of cells in RAW 264.7macrophages. K ey w ords : Inducible nitric oxide synthase ;Nitric oxide ;Apoptosis ;Mac 2 rophage 摘  要:目的 研究巨噬细胞中诱导型一氧化氮合酶(iN 2OS )来源的一氧化氮(NO )对共培养HL 60细胞凋亡的影响。 方法 以脂多糖(L PS )和γ2干扰素(IN F 2γ)诱导RAW 264.7巨噬细胞iNOS 基因的表达产生过量NO 为实验模型,通过

诱导型一氧化氮合酶

诱导型一氧化氮合酶(iNOS)与寄生虫感染 转载自中国科技信息网 一氧化氮(NO)在体内由L-精氨酸在一氧化氮合成酶(NOS)的催化下生成。它是一种重要的信使分子, 参与血管、气道平滑肌的调节,神经递质的传递,细胞杀伤, 肿瘤细胞的溶解及内分泌激素的释放过程, 与许多疾病的发生、发展密切相关; 既在机体多个系统多种细胞中具有广泛的生理功能,又可能参与多种疾病的发生过程。NOS是合成NO的唯一限速酶,寄生虫感染时,动物机体内由其诱发产生各种细胞因子,细胞因子激发一氧化氮合酶基因,其转录产生iNOS (inducible nitricoxide synthase)mRNA,由iNOSmRNA 指导一氧化氮合酶生成。本文就NOS的类型和iNOS的表达及NO的生成和NO对寄生虫的作用以及影响NO抗寄生虫感染的因素做一简要综述。 1 NOS的类型和iNOS的表达及NO的生成 许多研究表明,NO 是一种重要的细胞内信使和新的神经递质, 又是效应分子[1]。它介导并调节多种生理机制, 在呼吸系统、神经系统、炎症和免疫反应中起着重要的作用, 但也导致病理生理状态。由于NO 可在数种哺乳动物细胞内产生, 在体内又具有广泛的生理作用, 因而这种化学结构如此简单的小分子被美国《Science》杂志评为1992 年年度分子[2]。NOS 根据所在组织类型,在细胞中的分布,效应方式,组织表达,对Ca 2+/钙调蛋白的依赖性及对不同激动剂的反应,可分为以下3种类型[3]: I型:神经型NOS (ncNOS ),首先于脑组织中发现,所产生的NO为神经递质,也可能作为神经和血管之间的间介物。为结构表达。Ⅱ型:可诱导型NOS (iNOS),主要存在于单核/巨噬细胞系统、肝脏、平滑肌、神经胶质细胞中,另外在内皮细胞、神经元中也有分布。为非结构表达。Ⅲ型:上皮型NOS(ecNOS),存在于血管内皮细胞,与ncNOS类似,为结构表达,对Ca2+/钙调蛋白依赖,分布于胞浆中。在心脏、肠、肾、肝脏和脑等重要脏器的血流量调节以及血管舒张的局部信号机制中占有重要地位。 目前普遍认为, 与抗寄生虫感染密切相关的为iNOS, 主要存在于Mφ中, 也存在于中性粒细胞、神经小胶质细胞和肝细胞等多种细胞内, 细菌脂多糖(LPS)和多种细胞因子都可诱导其高水平表达iNOS。一旦被诱导, iNOS 接着能在相当长时间内以恒定的速度合成大量的NO。由此产生的NO 能选择性地作用于寄生虫或寄生虫感染的细胞, 在局部或全身发挥抗寄生虫作用[4]。Hibbs 等[5~7]在1987 年提出了NO的生化合成途径: 在此途径中, 细胞因子可由寄生虫感染所致。杨志伟等[8] (1999) 发现经血吸虫感染家兔, 虫卵肉芽肿周围有iNOS和巨噬细胞强阳性反应物, 虫卵肉芽肿周围聚集有巨噬细胞、肥大细胞, 并有肿瘤坏死因子TNF-α和表皮生长因子EGF 存在。龙小纯、李雍龙等[9]对小鼠感染血吸虫后不同时间的肝组织总RNA进行RT-PCR,结果表明,未感染血吸虫的小鼠肝组织iNOS的转录表达为阴性,感染后21d,肝组织出现iNOS的转录表达,提示日木血吸虫能诱导宿主肝组织iNOS的转录。还有学者发现在肺内特别是寄生虫周围的炎性组织中有高水平iNOSmRNA[10],表达iNOS基因缺陷小鼠(iNOS-鼠)感染枯氏锥虫后,其体内NO的产生明显减少,并减弱了杀锥虫能力[11]。证实iNOS是合成NO的关键酶。 2 NO抗寄生虫感染的作用机制 在寄生虫感染中,NO一方面能杀死寄生虫,起保护机体的作用,另一方面可能产生相反的作用。关于NO的抗寄生虫作用的确切机制尚不清楚,多数学者认为NO作用于寄生虫的关键代谢酶,使其失活,而发挥抗寄生虫的作用[12]。人们知道,NO与一般的生物效应分子不同,其不需与特异性受体结合,因具有脂溶性,可直接进入寄生虫体内发挥杀伤作用。NO抗寄生虫感染的作用机制可能有二种,一种是NO与寄生虫体内多种代谢酶的活性部位Fe-S基团结合形成铁-亚硝酰基复合物,造成铁离子的丧失和酶活性的抑制,致使能量的产生和DNA的合成受阻,从而干扰寄生虫的生理代谢。NO抗寄生虫作用的另一机制为通过与氧自由基作用。

内皮型一氧化氮合酶脱偶联与氧化应激_张洪平

第11卷 第12期 2009 年 12 月 辽宁中医药大学学报 JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM Vol. 11 No. 12 Dec .,2009 正常内皮细胞具有抗凝血、抗炎症和抑制血管 增生的功能,也能通过生成一氧化氮(NO)、前列环素和其他血管舒张物质促进血管舒张。许多疾病中,内皮细胞功能障碍是造成血栓形成,炎症和血管舒张功能丧失的共同病理基础。NO 生物利用率降低和活性氧(ROS)过量生成是导致内皮功能紊乱的一个重要因素。许多研究表明,内皮型一氧化氮合酶脱偶联(eNOS uncoupling)是导致NO 水平下降和氧自由基水平升高的重要机制,其中ROS 水平升高又是造成eNOS 脱偶联的主要原因。近年来,对ROS 的病理学作用有了更加深入的认识,ROS 生成和发挥作用都依赖于ROS 相关酶的表达和激活,生理条 件下,正常细胞含有大量的抗氧化物质防御ROS 的 毒性、减少ROS 的效应。ROS 在细胞内产生的位置和抗氧化酶的分布高度区域化,因此,细胞的还原-氧化状态是不均一的。例如,大部分ROS 的产生发生在细胞核、线粒体或者细胞膜上,ROS 对细胞的其他结构影响较小。抗氧化剂以非特异性方式对细胞内总体的还原-氧化平衡的变化进行干预。虽然这些方法的治疗效果还存在争议。但是通过抑制ROS 合成特异性关键酶减少特定区域内的具体的ROS 可以减少氧化应激、逆转eNOS 脱偶联、进而改善血管内皮功能,为防治心血管疾病开辟新的途径。 内皮型一氧化氮合酶脱偶联与氧化应激 张洪平1,唐 宁1, 卞 卡1,2,3 (1.上海中医药大学穆拉德中药现代化研究中心,上海 201203;2.上海教委一氧化氮和炎症医学E-研究院,上海 201203; 3.美国德克萨斯大学休斯顿医学院综合生物及药理学系,德克萨斯大学分子医学研究所,美国 休斯顿 TX77030)摘 要:内皮细胞功能障碍是造成许多心脑血管疾病的共同病理基础。NO 利用率降低和活性氧(ROS)过量生成是导致内皮功能紊乱的一个重要因素。内皮型一氧化氮合酶脱偶联( eNOS uncoupling)是导致NO 水平下降和氧自由基水平升高的重要机制,其中ROS 水平升高又是造成eNOS 脱偶联的主要原因。随着对ROS 病理生理作用认识的不断深入,发现ROS 的生物学作用具有两面性,一方面ROS 与蛋白质、脂质、核酸等生物大分子反应,引发一些病理过程,另一方面ROS 通过不同的信号途径对一些生理过程进行调控。该现象主要是由ROS 分布的区域化造成。通过抑制ROS 合成特异性关键酶减少特定区域内的具体的ROS 减少氧化应激、逆转eNOS 脱偶联、进而改善血管内皮功能,为防治心脑血管疾病提开辟新的途径。 关键词:一氧化氮;信号途径;氧化应激 中图分类号:R2-03 文献标识码:A 文章编号:1673-842X (2009) 12- 0036- 05收稿日期:2009-06-19基金项目:国家科技部“十一五”支撑计划资助项目(2006BAI11B08-03);上海市科委基础研究重点项目(08430711300, 08DZ1972104); 上海市教委高校一氧化氮与炎症医学E-研究院计划项目(E-04010)作者简介:张洪平(1978-),男,山东聊城人,博士研究生,研究方向:心血管药理学与炎症医学。通讯作者:卞卡(1958-),男,浙江杭州人,教授,博士生导师,博士,研究方向:心脑血管药理学与炎症医学。E-mail:Kabian3@https://www.wendangku.net/doc/f511926868.html,。 Endothelial Nitric Oxide Synthase Uncoupling And Oxidative Stress ZHANG Hong-ping 1, TANG Ning 1, BIAN Ka 1, 2, 3 (1. Murad Research Institute for Modernized Chinese Medicine, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China; 2. E-Institute of Shanghai Universities, Division of Nitric Oxide and Inflammatory Medicine, Shanghai 201203, China; 3. Department of Integrative Biology and Pharmacology, Institute of Molecular Medicine, University of Texas Medical School, Houston TX77030, USA) Abstract: Endothelial dysfunction is the common pathological base for a number of cardiovascular diseases. Reduction of NO bioavailability and excessive generation of reactive oxygen species (ROS) are key factors which cause endothelial dysfunction. Endothelial nitric oxide synthase uncoupling (eNOS- uncoupling) is an important mechanism underlying the pathological phenomenon of reduced NO production and enhanced free radicals generation. Higher level of ROS is the major cause of eNOS-uncoupling which exerts influence on protein structure, co-factor as well as the substrate of eNOS. Furthermore, the dual effects of ROS also attract the attention: on the one hand, ROS react with biological macromolecules such as proteins, lipids, nucleic acids, which results a number of pathological consequences. On the other hand, ROS is necessary for certain physiological signaling. The compartmental effects of ROS should be responsible for above phenomenon. Inhibition of ROS in specific region may open up novel pathway for the prevention and treatment of cardiovascular diseases through the means of blocking key ROS synthesis enzymes; preventing and reversing eNOS uncoupling, and improving endothelial function. Key words:nitric oxide; signaling pathway; oxidative stress

碧云天一氧化氮合成酶检测试剂盒

一氧化氮合成酶检测试剂盒 产品编号产品名称包装 S0025 一氧化氮合成酶检测试剂盒 100次 产品简介: ?一氧化氮合成酶检测试剂盒(Nitric Oxide Synthase Assay Kit)可以检测活细胞内总的一氧化氮合成酶的活性。如果和特异性的一氧化氮合成酶抑制剂配合使用,也可以检测不同类型的一氧化氮合成酶的活性。 ?本试剂盒提供了一种在生理条件下通过荧光检测活细胞内一氧化氮合成酶活性的方法,不需要使用传统方法所需的放射性同位素。本试剂盒采用了可以穿透细胞膜的最新一代一氧化氮荧光检测探针DAF-FM DA (3-amino,4-aminomethyl-2’,7’-difluorescein, diacetate),在提供充足的底物的条件下检测细胞内的一氧化氮合成酶可以催化产生的一氧化氮量,从而检测出一氧化氮合成酶的活性。详细的检测原理参考图1。采用一些一氧化氮合成酶的抑制剂则可以测定出特定类型的一氧化氮合成酶的活性。例如,采用iNOS抑制剂,未加iNOS抑制剂测定出来的酶活力减去加了iNOS抑制剂测定出来的酶活力就是iNOS的酶活力。 图1. 一氧化氮合成酶检测试剂盒原理图 ?本试剂盒是目前为止世界上最先进的一种一氧化氮合成酶检测试剂盒。和Calbiochem等多年前就开始提供的一氧化氮合成酶检测试剂盒相比无需使用同位素,和Sigma等最近推出的基于荧光的一氧化氮合成酶检测试剂盒相比采用了最新一代的荧光探针,灵敏度更高,特异性更好。本试剂盒的缺点是和其它荧光法一氧化氮合成酶检测试剂盒一样,仅能提供一氧化氮合成酶的相对活性。 ?本试剂盒和检测细胞内一氧化氮水平的不同之处在于提供了充足的底物L-Arginine和一些可以穿透细胞膜的反应辅助因子,确保一氧化氮合成酶的催化的一氧化氮合成不会受底物的量或辅助因子的量的限制,从而可以测定出细胞内一氧化氮合成酶活力。 ?本试剂盒最适合用于贴壁的细胞或组织的一氧化氮合成酶的检测,对悬浮细胞也可以进行检测。 ?本试剂盒可以测定100个样品。 包装清单: 产品编号产品名称包装 S0025-1 NOS检测缓冲液(2X) 15ml S0025-2 精氨酸溶液600μl S0025-3 NADPH 2.3mg S0025-4 DAF-FM DA(5mM) 20μl —说明书1份 保存条件: -20℃保存,DAF-FM DA需避光保存,半年有效。

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