高效液相色谱仪的使用及运行性能测试

高效液相色谱仪的使用及运行性能测试实验目的

1.了解高效液相色谱仪的基本原理和结构。?

2.掌握高效液相色谱仪的基本操作方法。

3.掌握测试高效液相色谱仪运行性能的指标和方法，验证各部件及整机的性能。

实验器材?

高效液相色谱仪，LC-ATvp高压泵、SCL-10Avp程序控制器、SPD-M10Avp二极管阵列检测器、CTO-10Asvp温度控制器。Shim-packVP-ODS C18 150×分析柱、20μl进样器、AS3210型超声波发生器。无水甲醇和双蒸水各500ml（脱气处理）、萘、咖啡因（均为色谱纯或分析纯）。

实验原理

高效液相色谱法是一种现代液相色谱法，其基本方法是用高压输液泵将流动相泵入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图并进行数据处理，得到测定结果。由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。

描述

高效液相色谱仪由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成。LC-2010和Agilent1100型为单泵型，适于单一流动相的洗脱；LC-10Avp型为双泵型高效液相色谱仪，适于程序洗脱。单泵型高效液相色谱仪的结构示意见图9-1。

?

实验步骤?

（一）高效液相色谱仪的基本操作步骤（以岛津LC-10A为例）

1.依照顺序开机，自检完毕后进入操作模板；

2.设定洗脱程序、检测器的条件及测定报告；

3.完成实验过程，打印试验结果，依照顺序关机。

（二）性能测试

高效液相色谱仪的性能检查分为单个部件的验证和整机验证。验证时一般先验证泵、柱温箱、自动进样器的性能，接着是检测器的性能，最后是整机的性能验证。验证目的是检查并确认高效液相色谱仪运行性能是否符合要求。

1.验证标准

按照中华人民共和国国家计量检定规程，高效液相色谱仪各验证部件的验证项目的

合格标准见表9-1。

表9-1 高效液相色谱仪各验证部件的验证项目的合格标准

验证部件验证项目合格标准

流量设定值误差Ss

输液泵

流量稳定性误差SR

柱温箱

柱温箱设定值误差ΔTs < ±2℃

柱温箱控温稳定性Tc ≤1℃自动进样器进样量准确度误差≤±2%

检测器基线噪声≤2×10+5AU

最小检测浓度≤1×(萘的甲醇溶液) 基线漂移≤5×

整机性能定性测量重复性误差RSD≤%

2.验证步骤

（1）输液泵泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定将

表9-2 流量、次数、收集时间表

流量设定值（mL/min）

测量次数 3 3 3

流动相收集时间（min）10 55

?

（3）自动进样器进样量准确度误差的检定

取进样瓶装入1ml水，用天平精密称定其重量，然后置于自动进样器上让其进样10次，每次50μl。进样完成后再精密称定其重量，由重量差计算进样量准确度，结果填入数据记录与处理的表16-5中。

（4）检测器的检定

①

②的萘/甲醇溶液进样20μl，记录色谱图，由色谱峰峰高和基线噪声峰峰高算按照下列公式计最小检测浓度CL。

CL=(2×Nd×C)/H

式中: CL：最小检测浓度，；Nd：基线噪声峰峰高，mm；

C：标准溶液浓度，；H：标准溶液峰峰高，mm。

实验结果填入数据记录与处理的表16-6中。

（5）整机性能的检定

℃

数据记录与处理

将上述的实验数据记录于下列各表，并进行相应的数据处理，得出检定结论。

（1）输液泵泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定

表9-3 输液泵泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定结果

仪型号：泵型号：流动相：色谱柱：鉴定日期：检定人：复核人：

Fs

1次2次3次1次2次3次1次2次3次

W1

W2

t

T

ρT

Fm=(W2-W1)/ ρT·t

SS＝(Fm－FS)/FS×100%

平均SS

F=(Fm1+Fm2+Fm3)/3

Fmax

Fmin

SR＝(Fmax－

Fmin)/F×100%

此项检定结论：（2）柱温箱柱箱温度设定值误差ΔTS 和控温稳定性TC 的检定表9-4 柱温箱柱箱温度设定值误差ΔTS 和控温稳定性TC 的检定结果

仪型号：柱温箱型号：数字温度仪型号：

T设定35℃45℃

时间读数时间读数

稳定时

第1次

第2次

第3次

第4次

第5次

第6次

第7次

T平均

T最大

T最小

ΔTs=T平均-T设定

Tc =T最大-T最小

此项检定结论：

（3）自动进样量准确度误差的检定

表9-5 自动进样量准确度误差的检定结果

液相色谱仪型号：自动进样器型号：检定温度：℃

进样前进样瓶加水的总重W1（g）进样后进样瓶加水的总重

W2(g)

水的密度ρ

(g/ml)

进样量准确度误

差(%)

进样量准确度误差=[(W1-W2)-(50×10×10-3×ρ)]/（50×10×10-3×ρ）×100%此项检定结论：（4）检测器的检定

表9-6 检测器的检定结果

液相色谱仪型号：检测器型号：色谱柱：

流动相：流速：萘甲醇标准溶液浓度C：配制人：配制日期：

基线噪声Nd 基线漂移H 最小检测浓度CL

最小检测浓度的计算: CL=(2×Nd×C)/H

此项检定结论：

（5）高效液相色谱仪整机性能的检定

表9-7 整机性能的检定结果

液相色谱仪型号：检测器型号：色谱柱：检测波长：nm流动相：

流速：标准溶液类型：浓度：配制人：配制日期：

定性测定（保留时间）定量测定（峰面积）

第1次

第2次

第3次

第4次

第5次

第6次

平均值

测量误差的RSD

备注：测量误差的RSD采用EXCEL函数表格计算

此项检定结论：高效液相色谱仪的验证结果分析和综合评价根据实验测定结果，讨论说明高效液相色谱仪整体运行性能状况。