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HIV临床检测研究

(工作规范)湖北省艾滋病检测实验室管理及资质认定工作规范

1 目的为规范我省艾滋病检测实验室资质认定评审工作，明确资质认定的范围和形式；保证资质认定工作规范及评审结果客观、公正和准确，提高省艾滋病检测实验室管理工作质量，特制定本规程。 2 范围本规程适用于湖北省艾滋病检测实验室资质认定工作，可供全省各级验收工作组相关工作人员和评审员使用。也可供各类艾滋病检测实验室在申请资质认定准备工作和日常管理中参考。 3引用文件及技术资料 1)《全国艾滋病检测工作管理办法》 2)《湖北省艾滋病检测工作管理实施办法》 3)《全国艾滋病检测技术规范》（2004年版） 4)《实验室生物安全通用要求（GB 19489－2004）》 5)《实验室资质认定评审准则》 6)《医学实验室质量和能力认可准则（CNAS-CL02:2006/ISO 15189:2007）》 7)《省疾病预防控制中心关于下发<湖北省艾滋病检测实验室相关操作规程及检测工作记录（试行）>的通知》 4 艾滋病检测实验室的类型：分为艾滋病检测确证实验室和艾滋病检测筛查实验室两类，后者包括艾滋病筛查中心实验室、艾滋病筛查实验室和艾滋病检测点三种。

5 组织管理 5.1湖北省卫生厅是全省艾滋病检测实验室管理资质认定的主管部门，负责全省艾滋病检测实验室的监督管理和发证工作。 5.2各级验收工作组 5.2.1省艾滋病检测实验室验收工作组（以下简称“省验收工作组”）设在省疾病预防控制中心质量技术管理办公室，负责受理全省艾滋病确证实验室、市州级疾病预防控制机构筛查中心实验室的申请、资料审核和安排初审，对已完成初审的初筛实验室安排现场评审。 5.2.2市、州卫生行政部门应成立市级艾滋病检测实验室验收工作组（以下简称“市级验收工作组”）负责受理本辖区艾滋病筛查实验室的申请、资料审核和安排初审，对已完成初审的艾滋病检测点安排现场评审。 5.2.3 县(市、区)卫生行政部门应成立县级艾滋病检测实验室验收工作组（以下简称“县级验收工作组”），负责受理辖区内艾滋病检测点的申请、资料审核和安排初审。 5.3 评审组 5.3.1 评审员管理 5.3.1 评审员的基本条件：从事艾滋病相关管理人员；从事与艾滋病检测相关的技术人员；大专以上学历或中级以上技术职称；热爱艾滋病检测实验室管理工作；卫生行政主管部门审核并经培训考核合格者。 5.3.2 评审员的基本素质要求 5.3.2.1 熟悉《全国艾滋病检测工作管理办法》、《省艾滋病检测工作管理实施办法》、《全国艾滋病检测技术规范》（2004年版）、《实验室生物安

HIV的实验室诊断

HIV实验室诊断一、HIV病毒是带有包膜的RNA逆转录病毒，在我国流行的是HIV-1。二、HIV实验室诊断人体感染HIV后，血液中最先出现HIV抗原，然后很快消失直到疾病后期才重新出现。几周后出现IgM抗体并很快消失，此后,IgG抗体出现并一直存在。因此，HIV感染的实验室诊断以抗体检测为主，病毒及相关抗原的检测为辅。抗体检测分为初筛试验和确证试验两种，初筛试验为阳性的血清必须进一步确证，确证实验为阳性的方可报告为HIV感染阳性。多聚酶链式反应(PCR)主要用于检测血浆中HIV的RNA含量，目前主要用于预测母亲将HIV传染给胎儿的可能性以及新生儿的HIV感染状况。此外，尚可用于判断病人的预后及监测抗病毒治疗的效果。（一）HIV抗体的初筛检测初筛试验的要求是敏感性高，理论上要求达到100%，尽可能避免漏掉可能阳性的对象，相对来说，对特异性要求不是太严，允许有少量假阳性，这些假阳性可以通过重复试验和确证试验排除。 HIV抗体初筛检测的方法很多，如酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)、明胶颗粒凝集实验(gelatine particle agglutination assay, PA)、乳胶凝集实验(latex agglutination assay, LA)、各种快速检测实验(rapid tests)等。 1．酶联免疫吸附实验检测HIV1/2 型抗体，酶联免疫吸附实验（ELISA）是最常见的HIV抗体检测方法，它具有准确性高、价格低廉、判断结果有客观标准、结果便于记录和保存等优点，适合于大批量标本的检测，是献血员筛选和临床诊断最常用的方法。 3．胶体金法检测HIV1/2抗体实验胶体金法检测HIV抗体是一种不需要任何仪器设备的血清／血浆检测法，它利用免疫层析分析原理来快速检测血清／血浆中是否含有HIV抗体，从而用于判断人体是否受到HIV1型／HIV2型病毒感染。注意：由于样本中HIV抗体滴度的不同，测试区（T）内的红色条带会显现出不同深浅的颜色。但是，本试剂盒的测试结果不能做为判定样本中抗体滴度高低的依据。 (二)、初筛试验每一次检测阴性者可报告阴性，若第一次检测阳性，则需进行复测，复测时（最好用不同类型的试剂）可同时测定两孔，判定方法如下：

HIV实验室ELISA检测方法

人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法） 1 试剂信息试剂厂家：北京万泰生物药业股份有限公司 2 样本要求 2.1 本试剂使用样品为人血清或血浆，含有EDTA、柠檬酸钠或肝素等抗凝剂的样品可用于本实验。 2.2 不能检测含悬浮纤维蛋白或聚集物，重度溶血的样品。 2.3 样品中应无微生物，可在2-8℃储存1周，长期储存应低温冻存，避免反复冻融。 2.4 使用前请将样品室温平衡30分钟以上，冷冻样品实验前需混匀。 3 检测步骤 3.1 配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。 3.2 编号：将样品对应微孔板按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照1型、2型各1孔、空白对照1孔。 3.3 加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照100μL。 3.4 温育：用封板膜封板后，置37±1℃温育60±2分钟。 3.5 洗板：小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。 3.6 加酶：每孔加入酶标试剂100μL，空白孔除外。 3.7 温育：用封板膜封板后，置37±1℃温育60±2分钟。 3.8 洗板：操作同步骤5。 3.9 显色：每孔加入显色剂A、B液各50μL，轻轻震荡混匀，37±1℃避光显色30±1分钟。 3.10 测定：每孔加入终止液50μL，轻轻振荡混匀，10分钟内测定结果。 4 参考值临界值（CUTOFF）计算：临界值=阴性对照A均值+0.12. 5 检验结果的解释 5.1 阴性对照孔A值≦0.10，阳性对照A值≧0.80，否则试验无效。 5.2 若有1孔阴性对照A值大于0.1应舍弃，若两孔或两孔以上阴性对照A值大于0.1，应重复试验。

5.3 阴性判定：样品A值<临界值（CUTOFF）者为HIV抗体阴性。 5.4 阳性判定：样品A值≧临界值（CUTOFF）者为HIV抗体阳性。（注意：初试阳性应重新取样双孔复试。复试阳性者应按《全国艾滋病检测技术规范》送HIV确证实验室进行确证实验。）

艾滋病检测筛查实验室基本标准

艾滋病检测筛查实验室基本标准（一）艾滋病筛查中心实验室及艾滋病筛查实验室。 1、人员条件至少由3名医技人员组成，其中具有中级卫生技术职称人员至少1名。负责筛查试验的技术人员需具有2年以上从事病毒性疾病血清学检测工作经验，接受过省级以上艾滋病检测技术培训，并获得培训证书。 2、建筑条件：实验室或检测区域应分为清洁区、半污染区和污染区，应符合二级生物安全实验室（BSL-2）要求。 3、仪器设备条件配备艾滋病病毒抗体筛查试验所需设备，至少包括酶标读数仪、洗板机、普通冰箱、水浴箱（或温箱）、离心机、加样器（仪）、消毒与污物处理设备、实验室恒温设备、安全防护用品和生物安全柜。（二）艾滋病检测点。 1、人员条件：至少由2名经过艾滋病检测技术培训并获得培训证书的专业人员组成。 2、建筑条件：需有艾滋病检测区域或专用实验台，能开展简便、快速检测。 3、设备条件：需配备快速试验所必须的物品，包括普通冰箱、消毒与污物处理设备、一次性消耗品、安全防护用品。

艾滋病检测筛查实验室职能包括艾滋病筛查中心实验室、艾滋病筛查实验室和艾滋病检测点。艾滋病筛查中心实验室设在市（地）级疾病预防控制中心；艾滋病筛查实验室和艾滋病检测点可设在疾病预防控制机构、医疗机构、采供血机构、计划生育技术服务机构等。 1、艾滋病筛查中心实验室职能。（1）负责职责范围内艾滋病病毒抗体筛查试验，根据需要可开展其他艾滋病检测工作。（2）负责将艾滋病病毒抗体筛查呈阳性反应的样品送艾滋病检测确证实验室。（3）定期汇总艾滋病检测资料，并上报艾滋病检测确证实验室。配合艾滋病检测确证实验室做好个案调查、登记等随访工作。（4）负责对职责范围内艾滋病检测筛查实验室的技术指导；协助艾滋病筛查实验室和艾滋病检测点开展自愿咨询检测工作，给予技术支持和指导。 2、艾滋病筛查实验室职能。（1）开展艾滋病病毒抗体的筛查试验，根据需要可开展其他艾滋病检测工作。（2）负责将艾滋病病毒抗体筛查呈阳性反应的样品送当地艾滋病筛查中心实验室或艾滋病检测确证实验室。（3）定期汇总艾滋病检测资料，并上报当地艾滋病筛查中心实验室或艾滋病检测确证实验室。（4）对自愿咨询检测工作提供技术支持。 3、艾滋病检测点职能。（1）开展艾滋病病毒抗体的筛查试验。（2）负责将艾滋病病毒抗体筛查呈阳性反应的样品送当地艾滋病筛查实验室或艾滋病筛查中心实验室。（3）定期汇总艾滋病检测资料，并上报当地艾滋病筛查实验室或艾滋病筛查中心实验室。（4）开展艾滋病自愿咨询检测工作。

全国艾滋病检测技术规范(2015年修订版)

附件1 全国艾滋病检测技术规范 National Guideline for Detection of HIV/AIDS （2015年修订版）中国疾病预防控制中心二○一五年十二月

全国艾滋病检测技术规范National Guideline for Detection of HIV/AIDS （2015年修订版）中国疾病预防控制中心二○一五年十二月

前言艾滋病在我国的流行已数十年，随着感染者和临床病人的不断增加、感染人群的变化，艾滋病检测工作量逐渐加大，对监测和检测的需求也不断增加，承担艾滋病检测的实验室已遍及全国各级医疗、疾病预防控制、采供血、妇幼保健机构，出入境检验检疫、军队等各个系统。为了尽早发现HIV感染者和艾滋病病人，及早提供咨询、治疗，同时为适应基层艾滋病检测工作需求，在新的形势下，根据《关于艾滋病抗病毒治疗管理工作的意见》、《中国预防与控制艾滋病中长期规划（1998—2010年）》、《中国遏制与防治艾滋病十二五行动计划的通知（国办发[2012]4号）》、“四免一关怀”等国家艾滋病防治重要方针政策和十三五防治工作重点，在广泛征求各省、市疾病预防控制机构和医疗机构意见的基础上，在中华人民共和国卫生和计划生育委员会艾滋病专家及省级专家的参与下，中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心对《全国艾滋病检测技术规范（2009年版）》进行修改、增补和完善，制定出《全国艾滋病检测技术规范（2015年版）》（以下简称《规范》），使其既能满足目前艾滋病检测工作的实际需求，又能体现检测技术的发展。本次《规范》修订工作立足于我国目前检测状况，结合发达国家使用的指南，主要对以下几个方面内容进行了修改、增补和完善：（1）完善了不同的检测策略，并将其整合为独立的一章；（2）增加了HIV-1新

HIV检测方法

HIV 实验室诊断
人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)及其相关标志的检测是预防 HIV 感染和艾滋病临床治疗中重要的环节，在艾滋病的防治工作中具有重要作用，如艾滋病的诊断、HIV 感染的诊断、血源及器官供体的筛选、流行病学调查、艾滋病病人及 HIV 感染者的病情动态观察、临床治疗疗效考核以及 HIV 疫苗的安全性和效果鉴定等。 HIV 感染标志分为病毒标志、免疫标志和相关标志三大类。病毒标志是指直接从 HIV 感染者体内分离出病毒或检出 HIV 组成成分(抗原或核酸)。免疫标志是指 HIV 感染所产生的 HIV 抗原、抗体等免疫物质。相关标志是指 HIV 感染后与艾滋病病情进展有密切关系的某些标志，如 CD4 细胞、CD8 细胞，β2 微球蛋白、有关细胞因子等。这些标志的测定可为 HIV 感染及临床疗效的考核提供极为重要的诊断、治疗和预后指征。目前 HIV 抗体的检测是艾滋病实验室检测中最常用的方法，因为 HIV 抗体是患者感染 HIV 后最容易检出并且持续时间最长的免疫学标志，而且抗体的检测方法大多简便、经济，易于推广应用。在介绍各种 HIV 实验室诊断方法之前，为了使实验室工作人员能够有效地确保结果准确、可靠、优质，我们必须对作为一种感染因子的 HIV 以及由它所导致的致命性危害有基本的认识。实验室工作人员应特别注意病毒的结构、抗原组成，人体的免疫反应，诊断试验的基本原理、试验结果的解释，以及为了准确而有效地提供实验诊断所必需的质量保证措施。如果由于缺乏技术专长或基本知识而造成不正确的试验结果是不可原谅的。现将有关内容扼要介绍如下：一、人类免疫缺陷病毒(HIV)概述（一）年份 1981 艾滋病病原体的发现和命名事由命名
美国首先在洛杉矶男性同性恋中发现 5 例以往很罕见的卡氏肺囊虫肺炎和 26 例卡波济氏肉瘤患者，这些病人均表现有严重的免疫缺陷，但原因不明。
1982 年将这种新的疾病命名为 “获得性免疫缺陷综合征” Acquired Immuno Deficiency
Syndrome，AIDS，即艾滋病淋巴结病相关病毒 Lym phadenopathy Associated
1983
从艾滋病流行学资料分析很可能是由病毒引起的。法国巴斯德研究所 Montagnier 等首先从多发性淋巴结病综合症病人分离到一种新的逆转录病毒
Virus，LAV
1984
美国国立癌症研究所 Robert Gallo 等报道从艾滋病病人活检组织分离到一种新的逆转录病毒与其以前发现的 HTLV-1 和 HTLV-Ⅱ不同。
人类嗜 T 淋巴细胞Ⅲ型病毒 Human T-cell Lymphatropic Virus
typeⅢ，HTLV-Ⅲ AIDS Related Virus， ARV
1984
美国加州大学分离出艾滋病相关病毒

HIV抗体检测

第二章 HIV抗体检测 1 范围本章规定了HIV抗体的检测方法、检测程序、检测报告及检测策略，适用于各级各类医疗机构、疾病预防控制机构、检验检疫机构、采供血机构及卫生保健机构。可作为对HIV感染者/AIDS 病人的诊断、报告和处理的实验室依据。 2 规范性引用文件 Revised recommendations for the selection and use of HIV antibody tests. WHO/UNAIDS Revised version 2001. 实验室生物安全通用要求（GB 19489-2004）。 3 HIV抗体检测实验室应符合《全国艾滋病检测工作规范（1997年版）》中对检测实验室人员、建筑设施和设备等条件的要求。应符合《实验室生物安全通用要求》（GB 19489-2004）对II级生物安全实验室（BSL-2）的各项要求。实验室的质量保证按本规范第八章规定执行。实验室安全防护按本规范第七章规定执行。 4 HIV抗体检测的目的和要点 4.1 HIV抗体检测的目的 4.1.1 HIV抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查。 4.1.2 以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势而进行的检测，检测的人群包括各类高危人群和一般人群。 4.1.3 以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状况而进行的检测，包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。 4.1.4 以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。 4.2 HIV抗体检测的要点 4.2.1 筛查试验阳性不能出阳性报告。 4.2.2 严格遵守实验室标准操作程序（SOP）。 4.2.3 严格按照试剂盒说明书操作。 4.2.4 注意防止样品间交叉污染。

艾滋病检测实验室的安全防护措施和要求(一)

艾滋病检测实验室的安全防护措施和要求(一) 艾滋病检测实验室人员安全防护工作对预防及减少意外事故的发生，提供意外事故发生时的处理方法，明确制定“艾滋病实验室安全防护和要求”是十分必要的。 1艾滋病检测实验室的安全操作和防护措施除做好对临床实验室10条要求外，还应做到以下8点： 1.1具有高度的实验室全安防护意识： 1.1.1实验室审评专家验收考核时，应对设备和实验室安全时行评估，对提出的意见和指出的隐患要及时改进。 1.1.2建立本实验室的安全－标准操作程序，这些程序适用于现有实验条件，并与其他规则和操作过程相一致。 1.1.3无论是否有意外发生和新的危险出现，每年均要对安全－标准操作程序及实施情况进行检查。 1.2接受严格的培训和复训：所有工作人员都必须经过培训，并要接受实验管理人员的监督，所有工作人员均有责任保证自己和他人的工作安全。 1.3注意个人保健： 1.3.1注意个人保健对于减少感染的危险性很重要。皮肤受损、患病都会增加感染的危险性。很小的伤口和擦伤都应以防水的敷料覆盖。 1.3.2进实验室前要摘除首饰，修剪长的、带刺的手指甲，以免刺破手套。 1.3.3进入实验室应穿隔离衣、戴手套，必要时戴两层手套和防护眼镜。 1.3.4切忌用嘴吸液，避免用锐利的器材和玻璃器皿，以减少刺伤机会。 1.3.5在脱去隔离衣，离开实验室前必须洗手。 1.4人员： 1.4.1实验室工作人员只限于被批准的、按艾滋病检测工作规范培训合格的人员。实验室工作人员要有安全防护意识，熟悉生物安全知识和消毒技术。 1.4.2在安排工作人员的实验室区域时，要根据其工作的各类和所涉及的生物试剂，对实验室环境做好安全检查。 1.4.3严格执行实验室工作人员年度采血检测HIV抗体和备案制度。 1.5血清及其他体液样品：所有的样品均应严格按要求妥善保存，HIV抗体阳性样品应做好标记单独保存。 1.6带入及带出实验室的物品： 1.6.1所有带入实验室的包裹都应经过检查。 1.6.2装有样品、细菌或病毒株及有毒物的包裹应在安全柜或其他适当的消毒装置内打开。 1.6.3在将HIV/AIDS样品转到其他实验室时，实验室负责人和指定人员应确定样品送达哪个实验室。 1.6.4向实验室运送样品时，应防止对工作人员、患者或环境造成污染。 1.6.5应将样品放入可靠、安全防漏的容器中运输。所有样品应装入密封塑料管内，样品管外面套上塑料袋，一并装入有缓冲垫的冷藏瓶内，做好标记。 1.6.6护送者应了解接受者，并保证这些材料被转入安全位置，得到安全的处理。

艾滋病检测筛查实验室基本标准

HIV抗体检测技术规范

HIV抗体检测技术规范 1 范围本章规定了HIV抗体的检测方法、程序、结果报告、检测策略及质量控制。适用于各级各类医疗机构、疾病预防控制机构、检验检疫机构、采供血机构及卫生保健机构。可作为对HIV感染者诊断和监测的实验室依据。 2 规范性引用文件《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》（中华人民共和国卫生行业标准，WS293-2008） Guidance for HIV testing in the Western Pacific Region. WHO Draft 19 July 2008. Statement from the Surveillance and Survey Working Group and the Laboratory Working Group to the Office of the Global AIDS Coordinator.26 Nov.2006. Guidelines for the use of the BED assay for incidence estimation and surveillance in resource-limited countries. Atlanta, 5 June 2006. Revised Guidelines for HIV Counseling, Testing, and Referral. U.S. CDC 2001. Current HIV-2 diagnostic strategy overestimates HIV-2 prevalence in China. Journal of Medical Virology,

常用的HIV诊断方法

HIV/AIDS艾滋病诊断是一个十分严肃的问题，任何诊断的错误结果无论是假阴性还是假阳性，对家庭和社会都会造成十分严重的后果。HIV检测是诊断HIV感染及艾滋病的重要实验室依据之一，要知道是否感染了HIV可以通过检测病毒的抗体、抗原、核酸或通过病毒培养来确定。常用于诊断HIV/AIDS的方法是HIV抗体检测，它是诊断HIV/AIDS的主要指标，也是世界卫生组织和我国卫生部推荐使用的HIV感染诊断方法。为了最大限度地保证诊断结果准确，HIV诊断采用特殊的检测策略，即先用敏感性高的初筛试剂进行初筛，如果阳性再用特异性强的确认试剂进行确认。检测HIV抗体常用的初筛方法有酶联免疫吸附试验(ELISA)、凝集试验和各种快速诊断方法，确认的方法有蛋白印迹法(WB)、放射免疫沉淀试验(RIP)、间接免疫荧光试验(IFA)等。一般先用ELISA做初筛试验;如果阳性，再用蛋白印迹法来确认。以下介绍一下较常用的HIV抗体测定的方法。一．初筛试验方法 1．酶联免疫吸附试验（ELISA）酶联免疫吸附试验简称酶标法，是最常用初筛检测方法，在HIV抗体的测定中有四种模式：间接法、双抗原夹心法、捕获法和竞争法，其中以间接法用的最多。 1）间接法：将HIV抗原纯化后固定于微孔板上，然后加入待测标本，清洗后加酶标记抗人免疫球蛋白（IgG），清洗后加入底物，产生有色反应即为阳性。（见图1） 2）双抗原夹心法：将HIV抗原固定于微孔板上,然后加入待测标本，清洗后加入酶标记的HIV抗原，清洗后加入底物，产生有色反应即为阳性。（见图2）

3）捕获法：将非特异性的兔抗人免疫球蛋白抗体固定于微孔板上，然后加入待测标本,清洗后加入酶标记的HIV抗原，清洗后加入底物，产生有色反应即为阳性。（见图3） 4）竞争法：：将HIV抗原固定于微孔板上,然后同时加入待测标本和一定数量的酶标HIV抗体，如果标本中有HIV抗体,即与加入的酶标HIV抗体竞争结合固定在微孔板上的抗原，标本中HIV抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体就愈少，清洗后加入底物。结果判断与间接法相反，产生有色反应即为阴性，无色反应的为阳性（见图4）

HIV抗体检测

各项要求。实验室的质量保证按本规范第八章规定执行。实验室安全防护按本规范第七章规定执行。 4 HIV抗体检测的目的和要点 4.1 HIV抗体检测的目的 4.1.1 HIV抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查。 4.1.2 以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势而进行的检测，检测的人群包括各类高危人群和一般人群。 4.1.3 以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV 感染状况而进行的检测，包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。4.1.4 以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。 4.2 HIV抗体检测的要点 4.2.1 筛查试验阳性不能出阳性报告。 4.2.2 严格遵守实验室标准操作程序（SOP）。 4.2.3 严格按照试剂盒说明书操作。 4.2.4 注意防止样品间交叉污染。

艾滋病检测实验室基本标准

艾滋病检测实验室基本标准一、艾滋病参比实验室 (一)人员条件。由10名以上医技或科研人员组成,其中具有高级卫生技术职称人员至少5名,中级卫生技术职称人员至少3名。高级技术负责人需具有5年以上艾滋病病毒检测和研究经验,接受过国际或国家级艾滋病检测技术培训,并获得培训证书。 (二)建筑条件。需有独立的符合二级生物安全实验室(BSL-2)要求的以下建筑区域,包括血清学检测、质量控制、核酸检测、基因序列测定及分析、免疫学检测、血清库和冷库等,并将建筑区域分为清洁区、半污染区和污染区。具有满足艾滋病病毒分离、培养与扩增、浓缩与纯化、中和试验等需要的三级生物安全实验室(BSL-3)。 (三)仪器设备条件。配备血清学检测、病原学检测、核酸检测、基因序列测定、免疫学检测设备和三级生物安全实验室(BSL-3)所需仪器设备,至少包括酶标读数仪、洗板机、病毒载量测定仪、

基因序列测定仪和流式细胞仪、普通冰箱、低温冰箱、超低温冰箱、水浴箱、温箱、离心机、旋转震荡器、摇床、加样器(仪)、专用计算机和必要的摄像器材、消毒和污物处理设备、实验室恒温设备、安全防护用品和生物安全柜等。具有建立国家艾滋病病毒毒种库、检测样品库、质控品库、基因库、细胞库和数据库的设备条件。二、艾滋病检测确证实验室 (一)人员条件。至少由5名医技人员组成,其中专职人员至少2名,具有副高级卫生技术职称人员至少1名。负责确证试验的技术人员需具有3年以上从事艾滋病病毒抗体检测工作经验、接受过省级以上艾滋病检测技术培训,并获得培训证书。 (二)建筑条件。需有独立的血清学检测实验室,分为清洁区、半污染区和污染区,符合二级生物安全实验室(BSL-2)要求。根据需要可设置核酸检测、免疫学检测等建筑区域。 (三)仪器设备条件。配备血清学检测和二级生物安全实验室(BSL-2)所需仪器设备,至少包括酶标读数仪、洗板机、普通冰箱、低温

艾滋病检测质量控制试题

艾滋病检测质量控制试题（总分：100分）单位：姓名：得分：一、填空题：（30分，每空2分） 1、常规HIV抗体检测分为和。 2、在艾滋病病毒感染的窗口期进行HIV抗体检测，结果呈，这段时期已具有，时间一般为。 3、WHO推荐，在为病人提供医疗服务时，无论是血液还是体液，也不论它们是阳性还是阴性，都应当采取原则。 4、艾滋病职业暴露的处理原则包括、、和。 5、HIV检测实验室污物处理的推荐消毒方法为：。 6、质量管理包括、、。二、判断题：（27分，每题3分） 1、HIV抗体快速检测结果阳性即表示受检者已感染HIV。（） 2、HIV抗体快速检测结果阴性一定表示受检者未感染HIV。（） 3、HIV确证结果为阳性，表明受检者感染了HIV。( ) 4、对HIV抗体不确定样本应进行追踪检测。（） 5、艾滋病检测点经现场验收并在卫生行政部门备案后可开展检测工作。（） 6、艾滋病检测点的技术人员需要有相关的检验或医学知识、经过县级以上相关专业技术部门培训并取得合格证书。（） 7、快速检测中，只要检测带出现阳性反应，就可以判断为阳性结果。（） 8、艾滋病检测点必须与艾滋病筛查实验室建立密切的联系，并接受筛查实验室的技术指导和督导。（） 9、艾滋病检测点发现的艾滋病抗体筛查阳性反应样品必须及时送艾滋病筛查实验室或确证实验室，不得擅自处理。（）三、问答题：（43分） 1、简述快速检测试剂使用要求。（7分）

2、艾滋病检测点必须具备的条件有哪些？（8分） 3、简述HIV抗体快速检测的原理。（8分） 4、简述艾滋病快速检测点的检测程序。（8分） 5、请分别阐述HIV职业暴露的预防及暴露后的处理原则。（12分）

艾滋病、梅毒、乙肝实验室检测技术教材

艾滋病、梅毒、乙肝实验室检测技术岳阳市疾控中心白志永艾滋病抗体检测及样品保存、运送一、HIV抗体检测筛查方法酶联免疫吸附试验（ELISA）化学发光或免疫荧光试验快速检测（RT）（建议配备合格的快速检测试剂，灰区。）二、筛查程序初筛和复检流程（图1）样品筛查试剂初筛试验阳性反应阴性反应原有试剂+另一不同原理（或厂家）试剂或另外两种不同原理（或厂家）试剂复检试验均阳性反应一阴一阳均阴性反应确证试验报告阴性图1 HIV抗体筛查检测流程三、筛查试验结果的报告（建议用修改后报告单附表3）（例） HIV抗体筛查试验用附表1、2进行报告，阴性反应报告为“HIV抗体阴性（-）”；阳性反应报告为“HIV抗体待复检”。

四、 HIV感染产妇所生儿童HIV抗体检测策略及流程 1、适用范围 HIV感染产妇所生婴幼儿；已满18个月的婴幼儿，其母亲HIV感染状态不详，儿童出现H IV相关临床表现，临床怀疑HIV感染的儿童。 2、检测程序图4 艾滋病感染产妇所生儿童HIV抗体检测流程五、样品的保存、运送 1、样品的保存用于抗体和抗原检测的血清或血浆样品，短期（1周）内进行检测的可存放于2～8℃，一周以上应存放于-20℃以下。 2、样品的运送（例）（1）应符合生物安全要求； (2)应采用三层容器对样品进行包装。

第一层容器：直接装样品，应防渗漏。样品应置于带盖的试管内。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。第二层容器：容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。要求不易破碎、带盖、防渗漏、容器的材料要易于消毒处理。第三层容器：容纳并保护第二层容器的运输用外层包装箱。外面要贴上醒目的标签、联系方式，还应易于消毒。 (3) 用于抗体检测的血清和血浆样品应在冻存条件下运送。质量控制一、艾滋病抗体检测的统计学室内质量控制 1、试剂盒内部对照即试剂盒提供的阳性和阴性对照血清。用于判断实验的有效性，不能作为室内质控品使用，内部对照结果无效，必须重新试验。 2、室内质控品为非试剂盒组份的外部质控品，是为了监控检测的重复性而设置的，包括强阳性、弱阳性和阴性质控血清。也可以只设置一个弱阳性质控，以该试剂盒临界值（Cut-off）的2～3倍为宜。作用：判断该批临床样品检测的有效性，每次实验必须包含室内质控品，其结果无效，必须重新试验。

艾滋病的实验室检测流程

艾滋病的实验室检测流程中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心继发布《全国艾滋病检测技术规范(xx 年版)》后，近日即将发布 xx 年版《全国艾滋病检测技术规范》，此规范堪称艾滋病检测实验室的「红宝书」，适用于疾病控制中心艾滋病确认实验室和医疗机构的艾滋病初筛实验室的 HIV 检测技术操作。下面是为大家带来的艾滋病的实验室检测流程的知识，欢迎阅读。检测项目的样品种类 1 HIV 抗体检测：全血、血清、血浆、口腔黏膜渗出液、尿液以及干血斑样品。 2 HIV 抗原检测：全血、血清、血浆、病毒培养上清液。 3 T 淋巴细胞亚群测定：EDTA 或肝素抗凝全血。 4 HIV-1 病毒载量、基因型、耐药检测：血浆、滤纸干血斑(DBS)。 5 HIV 核酸定性与定量、基因型检测和 HIV-1 分离培养：淋巴细胞富集液、外周血单核淋巴细胞(PBMC)及全血。当然，实验室最常用的仍然是血液标本，其他只作为补充样本。 HIV 抗体检测 HIV 抗体检测是艾滋病实验室检测的优先选择项目，在国内绝大多数初筛实验室应用最广泛。 1 初筛方法 (1)酶联免疫吸附试验(ELISA)

ELISA 法检测 HIV 抗体是 HIV 初筛实验室最常用最普遍的方法，目前检测试剂已经发展到 * ，即同时检测血液中 HIV-1P24 抗原和 HIV-1/2 抗体，秉承「宁可错杀一千，不可漏网一个」的革命精神，其灵敏度远高于特异性，直叫 HIV 抗体无处遁形。 (2)化学发光或免疫荧光试验(CIA/IFA) 这个试验方法是近 10 年迅猛发展的一种新型检测方法，其采用发光或荧光底物，既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体，用发光或荧光仪测定结果，其灵敏度较 ELISA 有了进一步的提高，同时带来的是检测成本的增加和假阳性率的增高。 (3)快速检测(RT)方法此类方法操作简便快速，适用于应急检测、门诊急诊检测，但灵敏度和特异性远不如 ELISA 和发光法，但是经济实惠，也有一定的市场影响力。主要包括以下几种方法：明胶颗粒凝集试验(PA)、免疫渗滤试验、免疫层析试验。 2 确认实验 (1)免疫印迹试验(WB) WB 采用间接法检测样品中的抗 HIV-1/HIV-2 特异性抗体。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳把分子量大小不等的 HIV-1 蛋白分离开来，经过一系列处理后，硝酸纤维素膜显示与特异抗原的结合的抗体条带，从而确诊抗体的存在。 (2)条带/线性免疫试验(RIBA/LIA) 实验原理基本同 WB 法，不再赘述。

艾滋病实验室的基本标准

艾滋病实验室的基本标准一. 艾滋病参比实验室 1. 人员条件至少由9名医技或科研人员组成, 具有高级卫生技术职称人员至少4名, 中级卫生技术职称人员至少3名。高级技术负责人需具有5 年以上艾滋病病毒检测和研究经验, 接受过国际或国家级HI V检测技术培训，并获得培训证书。 2. 建筑条件需有独立的符合II级生物安全实验室（BSL-2）要求的以下建筑区域和条件: 血清学检测、质量控制、核酸检测、基因序列测定及分析、免疫学检测、血清库和冷库等, 并将其分为清洁区、半污染区和污染区。HIV 病毒分离、细胞培养、HIV病毒研究需要有BSL-3级生物安全实验室。 3. 仪器设各条件配备血清学、病原学、核酸检测、基因序列测定、免疫学检测和BSL-3级生物安全实验室所需仪器设备。血清学和病原学检测设各至少包括酶标读数仪、洗板机、基因序列测定仪和流式细胞仪、普通冰箱、低温冰箱、超低温冰箱、水浴箱、温箱、离心机、旋转震荡器、摇床、移液器、专用计算机和必要的摄像器材、消毒和污物处理设备、安全防护用品和实验室恒温设各等。核酸检测按照国务院卫生行政主管部门制定的有关规定执

行。BSL-3 级生物安全实验室按照《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》及《实验室生物安全通用要求（GB 19489-2004）》的有关规定执行。需要建立国家的艾滋病病毒毒种库、检测样品库、质控血清库、基因、细胞库和数据库。二. 省艾滋病确认中心实验室 1. 人员条件至少由5名医技（或科技）人员组成,具有高级卫生技术职称人员至少2名、中级卫生技术职称人员至少2 名。负责确认试验的技术人员需具有3年以上从事HI V抗体筛查工作经验、接受过国家级或国际HI V检测确认试验技术培训，并获得培训证书。 2. 建筑条件需有独立的符合II级生物安全实验室（BsL2）要求的以下建筑区域和条件: 血清学检测、质量控制、血清库和冷库等并将其分为清洁区、半污染区和污染区。建立省内的艾滋病检测样品库、质控血清库和数据库。根据需要可设置核酸检测、免疫学检测室等。开展HI V病毒分离等研究工作者，需要有BSL-3 级生物安全实验室。 3. 仪器设备条件配备筛查试验和确认试验所需设备, 包括酶标读数仪、洗板机、普通冰箱、低温冰箱、超低温冰箱、水浴箱、温箱、离心机、旋转震荡器、摇床、移液器、专用计算机和必要的摄像器材、消毒和污物处理设备、安全防护用品和实验室恒温设备。要

HIV抗体快速检测的方法与步骤

标题：HIV抗体快速检测的方法与步骤 1、目的采用胶体金免疫技术和层析原理，定性测定全血或血浆样本中的HIV1/2型抗体。同时规范本实验室HIV抗体检测的方法与步骤，保证检测质量和实验工作有序进行。 2、适用范围适用于本中心艾滋病筛查中心实验室及艾滋病确证实验室。 3、职责 3．1 检测人员须严格遵守本操作程序。. 3．2 实验室负责人负责监督检测人员履行相关职责。 4、操作程序 4．1 HIV抗体快速检测步骤： 4.1.1 实验前检测环境应符合要求（温度：湿度：），检查仪器设备是否运行正常。 4.1.2 开启实验室环境消毒设施和生物安全柜紫外线灯进行消毒（不少于30min）。同时取样品与检测试剂放置室温下平衡30min。 4.1.3核对样品编号，填写于《HIV抗体快速检测实验室原始记录》，实验按填写顺序依次加样。 4.1.4 严格按照试剂操作说明书操作，并做好质量控制（见《质量控制程序》）。 4.1.5 将检毕样品分类放入血清库保存，关闭生物安全柜及其它设备，清理消毒实验室。 4.1.6 及时填写实验室各相关记录并发出报告。 4．2 检测方法：血清、血浆样本： 4.2.1HIV快速抗体快速检测细则： 4.2.1.1 按说明要求，采集静脉的血清、血浆或全血应在无菌条件下、并避免样品溶血。 4.2.1.2 将待测标本从储存条件下取出，平衡至室温并编号。 4.2.1.3 将所需数量的测试试剂从包装盒中取出来平衡至室温，打开铝箔包装袋，平衡于台面。 4.2.1.4用微量加样器取60UL血清或血浆样本，或用试剂盒内所配塑料滴管吸

取样本，垂直滴加两滴于试剂的加样处。 4.2.1.5加样后，阳性标本可在1-30分钟内检出。经过试验确证，反应时间（从加样后计算起）超过30分钟将对实验结果的观察造成影响，因此，建议30分钟内最终观察并记录实验结果。 4.2.1.6 结果分析及判断标准：阴性：测试条/卡只在对照区位置出现一条紫红色条带。阳性：测试条/卡在检测区和对照区位置各出现一条紫红色条带如果检测区的紫红色条带隐约可见，建议对该样本重复试验，并使用其他方法确认。 5、支持性文件 5．1 《全国艾滋病检测工作管理办法》 5．2 《全国艾滋病检测技术规范》（2015版） 5.3 《人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒说明说》 6、相关记录表单 6．1《HIV抗体快速检测原始记录》 6．3《I级生物安全实验室使用登记表》 6．4《艾滋病检测实验室检测试剂使用登记表》 6．5《HIV抗体检测样品血清库登记表》

两种HIV抗体检测方法与确证方法比较

两种HIV抗体检测方法与确证方法比较发表时间：2012-07-24T16:04:40.597Z 来源：《中外健康文摘》2012年第13期供稿作者：马金旗 [导读] 两种HIV抗体检测方法与确证方法比较，选择适合输血前筛查HIV感染患者的方法。马金旗 (中南大学湘雅三医院湖南长沙410013) 【中图分类号】R575【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）13-0280-02 【摘要】目的两种HIV抗体检测方法与确证方法比较，选择适合输血前筛查HIV感染患者的方法。方法用酶联免疫吸附试验(抗- HIV ELISA)对48621例输血前标本进行HIV抗体筛查，对阳性标本进行金标法测定，同时随机抽取的20例阴性标本也进行金标法测定，作为对照。对任一试剂检测阳性的标本和对照标本都按规定送检HIV确诊实验室进行确证［1］。结果抗-HIV ELISA法特异性较高，达92.0%，HIV金标法特异性高，达98.7%，与确证方法接近。结论抗-HIV ELISA法特异性较高，特别适合批量标本的检测，可以作为临床HIV初筛试验。用金标特异性高操作简便，快速，对ELISA法检测出的阳性标本进行复检，能较快确认标本HIV阳性可能性，评估感染的风险程度。两种方法可相互结合，及时对患者做出诊断，及早采取措施保护职业暴露人员［2］。【关键词】HIV AIDS ELISA人类免疫缺陷病毒获得性免疫缺陷综合征酶联免疫吸附试验 HIV抗体检测职业暴露 ADIS是一种严重危害人类健康的疾病，当前我国HIV流行呈逐年上升的趋势［3,4］，在一些高危人群中尤为严重。人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）是获得性免疫缺陷综合征（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS）的病原体，以侵犯CD4细胞为主，造成细胞免疫功能缺损，并继发体液免疫功能缺损为基本特征的传染病。其传播途径有三条：性接触传播、血液传播和母婴传播。血液传播途径与临床输血和接受血液制品相关，为了区分患者是否是由于接受血液和血液制品而感染HIV，我们对患者输血前血清样本进行HIV抗体检测。对输血前标进行HIV抗体筛查，对阳性标本进行金标法测定，同时随机抽取的20例阴性对照标本也进行金标法测定。对阳性标本和对照标本送检HIV确诊实验室进行确证实验，现报道如下。 1 材料和方法 1.1 标本 2009年9 月至1日至2012年2月我科输血患者输血前的标本48621例分离血清后用ELISA法检测HIV抗体，初筛阳性55例，另随机抽取20例阴性结果的标本。 1.2 试剂 HIV ELISA试剂盒（珠海丽珠试剂股份有限公司提供）；胶体金试剂（天津中新科炬生物制药有限公司提供）。 1.3 仪器 RT-6100酶标工作站 (深圳雷杜生命科学股份有限公司)、RT-3000洗板机(深圳雷杜生命科学股份有限公司)。 1.4 试验方法用抗-HIV ELISA法检测全部标本,对阳性标本进行双孔复检，一孔或两孔阳性均视为阳性，获初筛阳性血清55份。对55份阳性标本和随机抽取20例阴性结果的标本用金标法检测，并送检此75份血清至湖南省疾病预防控制中心的 HIV确证实验室进行确证实验。以上各项试验操作及结果判读均严格按操作规程和试剂说明书进行,所有试剂均在有效期内。 2 结果确认结果阳性即认为感染HIV病毒，阴性即认为未感染，在此基础上得出ELISA法和金标法的真实性指标（见表3）。金标法与确证方法的符合率很高可达到98.7%，漏检率低0.4%（见表3），ELISA法无漏检作为初筛方法是一种较好的方法，其特异性不是很高92.0%，用金标法对其阳性标本进行复查，可以得出与确证方法相近的结果。表1 59例ELISA法、金标法和确证法检测结果分布情况（例数）表2 两组患者术中、术后情况比较表3 ELISA 、金标法与确证方法的符合率 3 讨论抗HIV检测是一项较为特殊的检测，会涉及病人隐私、工作人员的职业防护、国家传染病防治等许多方面。出现假阳性会给病人造成巨大的精神压力，甚至会引起医疗纠纷，假阴性会漏检感染者，不利于早发现，早诊断，早治疗，早控制病情。 HIV无症状感染期可长达6个月至10年，最后发展为艾滋病，出现中枢神经系统等多器官多系统损害，合并各种条件致病菌、寄生虫、其它病毒感染，或并发肿瘤。5年死亡率约为90%，死亡多发生在出现临床症状的2年之内[5]。血液传播途径与临床输血和接受血液制品相关，如果输入被HIV感染献血员的血液可能会感染HIV,即输血感染HIV，为了区分是输血前还是输血后感染，输血患者输血前应做抗－HIV的检测，这样既可以保护相关工作人员，也可以减少医疗纠纷，维护医院利益，还可以早发现感染患者，以便治疗及控制疫情。选择敏感性、特异性都高的检测方法有助HIV感染的诊断，HIV抗体的检测是最主要的检查方法，也是疾病预防控制中心规定的初筛实验室的检测方法［1］。抗-HIV ELISA法特异性较高，特别适合批量标本的检测，可以作为临床HIV初筛试验。用金标特异性高,操作简便、快速，对ELISA法检测出的阳性标本进行复检，能较快确认标本HIV阳性可能性，评估感染的风险程度。两种方法可相互结合[1]，及时对患者做出诊断，及