牛奶中酪蛋白和乳糖的分离与鉴定

牛奶中酪蛋白和乳糖的分离与鉴定

前言

牛奶是营养最完备的食品之一，这一点已为许多人认识并接受。尤其是在婴儿及青少年时期，每天一定量的牛奶能促进身体健康成长。牛奶的主要成分是水、蛋白质、脂肪、糖和矿物质，这些都是人体发育所必不可少的物质。

牛奶中的蛋白质主要是酪蛋白。酪蛋白是含磷蛋白质的复杂混合物，在牛奶中以其钙盐形式存在，即酪蛋白钙。利用蛋白质在等电点时溶解度最小的特性，把牛奶的ＰＨ值调到酪蛋白的等电点(pＨ=4. 8)来沉淀分离酪蛋白。酷蛋白不溶于乙醇和乙醚，所以可用乙醇和乙醚将其中的脂肪洗涤除去。

牛奶中的糖主要是乳糖。乳糖是一种二糖。它是唯一由哺乳动物乳糖合成的糖，它是在乳腺中被合成的。乳糖是成长中的婴儿建立其发育中的脑子和神经组织所需的物质。乳糖也是不溶于乙醇的，所以，当乙醇混入水溶液中时,乳糖会结晶出来,从而达到分离的目的。

1材料与方法

1.1材料

（1）实验仪器

恒温水浴锅、抽气抽滤瓶、布氏漏斗、蒸发皿、烧杯600ml、100ml各一个、表面皿、天平、玻璃棒。

（2）主要试剂

10%醋酸溶液、95%乙醇、乙醚、奶粉、精密pH试纸（pH=3~5）、碳酸钙、滤纸、1%CuSO4溶液、10%NaOH溶液、茚三酮溶液、30% Acr单体贮液、浓缩胶缓冲贮液等。

1.2方法

1.2.1酪蛋白的分离

称取29g奶粉溶解于100ml温水中，取三份20ml牛奶于100ml烧杯中，在恒温水浴中加热至45℃，边搅拌边慢慢加入10%醋酸溶液，通过pH试纸测量至牛奶pH分别为4.8、4.6和3.8。放置冷却、澄清后，抽滤。注意先将上层清液滤出一部分，再将沉淀倾入漏斗中进行抽滤得沉淀（滤完后，收集滤液，并在滤

液中加入少量粉状碳酸钙留作乳糖的分离）。用蒸馏水洗沉淀2次，离心10min （3500r/min），弃去上清液，在沉淀中加入30ml乙醇。搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。再用乙醇-乙醚混合液（1:1）洗涤沉淀2次，最后用乙醚洗涤沉淀1次（用乙醚洗涤时，注意用玻璃棒捣碎成团的固体，并反复翻洗，保证脂肪被洗净），抽滤得沉淀。将沉淀摊开在表面皿上，风干的酪蛋白纯品。准确称重，计算含量和得率。

含量：酪蛋白（g/100ml奶粉液）=测得含量/理论含量×100ml

式中理论含量为2.5g/100ml奶粉液。

1.2.2酪蛋白的鉴定（在酪蛋白分离后立即完成效果最好）

取少量酪蛋白颗粒于试管中，加入25ml水溶解。

取5ml酪蛋白溶液，加入茚三酮溶液5滴，振荡，放入沸水浴中加热2分钟，溶液呈淡紫色。（茚三酮反应）

茚三酮溶液的配制：1g茚三酮溶于35ml 热水，加氯化亚锡0.04g（防腐），过滤后于暗处放置24h，定容至100ml后使用。

取5ml酪蛋白溶液，加入10% NaOH溶液1ml后，滴入1%CuSO4溶液0.5ml。振荡试管，溶液呈蓝紫色。（缩二脲反应）

取10ml酪蛋白溶液，加入浓硝酸1ml后加热，有黄色沉淀生成。再加入10%NaOH溶液1ml，沉淀为橘黄色。（蛋黄颜色反应）

1.2.3酪蛋白的电泳分析--SDS-PAGE

A.试剂的制备：

①30% Acr单体贮液：14.55g Acr + 0.45g Bis，先用40ml双蒸水溶解，搅拌，直到溶液变成透明，再用双蒸水稀释至50ml，过滤。用棕色瓶可在4℃保存一个月，两种单体和溶液都是中枢神经毒物，要小心操作。

②浓缩胶缓冲贮液（1 M Tris-HCl，pH 6.8）：6.06g Tris溶解在40 ml双蒸水中，用4 M盐酸调节pH至6.8，再用双蒸水加至50ml，4℃保存。

③分离胶缓冲贮液（1.5 M Tris-HCl，pH 8.8）：9.08g Tris溶解在40ml双蒸水中,用4 M盐酸调节pH至8.8,再用双蒸水加至50ml, 4℃保存。

④10% SDS：25g SDS,用双蒸水溶解至250ml,室温保存。

⑤10% 过硫酸铵：0.1g过硫酸铵+ 1ml双蒸水. 关于10% 过硫酸铵的保

存时间，文献上一般介绍需使用前新鲜配制，但据我们的经验，在-20℃可保存一年，4℃可以保存一个月。

⑥SDS—样品缓冲液：SDS 2g +2ml疏基乙醇+3ml甘油+40mg溴酚蓝+0.2mol/L pH 7.2PBS 10ml溶解。

⑦SDS—电极缓冲液：3.0275gTris+14.4134g甘氨酸+0.1%SDS（pH8.3）。

⑧染色液：0.1%考马斯亮蓝R-250+40%甲醇（乙醇）+10%冰醋酸。

⑨脱色液：10%甲醇（乙醇）+10%冰醋酸。

B.检测：

①洗板和装板

洗净电泳玻板，直至玻板不挂水珠，凉干；将两支封条放在两块玻板（其中一块玻板有凹槽）之间的左右两边，用透明胶纸密封玻板的左右和下边（没有凹槽），再用夹子夹住玻板，垂直放置。

②配分离胶

用10%丙烯酰胺凝胶，分离胶体积6ml，按如下体积吸取各种贮存液：灭菌去离子水2.28ml；30%丙烯酰胺溶液2.04ml；1.5mol/LTris(pH 8.8)1.56ml；10% SDS0.06μl；10% 过硫酸铵0.06μl

③玻板封底

用EP管取1.0 ml，加0.4μlTEMED，迅速混匀，迅速加入玻板中

④灌分离胶

其余的分离胶加入2.0μl TEMED，混匀（注意不要产生气泡），沿玻板壁缓缓加入两块玻板之间（注意不要产生气泡），上面覆盖一层灭菌去离子水（隔离空气），以利于丙烯酰胺的聚合。静置20—30分钟，若丙烯酰胺聚合可见凝胶与水层之间明显的界面。

⑤配浓缩胶

按如下体积吸取各种贮存液，配制2.5ml浓缩胶：灭菌去离子水1.7ml；30%丙烯酰胺溶液0.425ml；1.0 mol/L Tris(pH 6.8)0.325ml；10% SDS 0.025μl；10%过硫酸铵0.025μl；TEMED 1μl混匀（注意不要产生气泡）。

⑥灌浓缩胶

待分离胶聚合后（20—30 min），倒掉上层的水。将混匀的浓缩胶沿玻板壁

缓缓加在分离胶上面，然后插上梳子，静置20—30分钟。

⑦样品处理

取10μl样品液于1.5 ml EP管中，加入等量的样品处理液，煮沸5min。（注意：EP管盖须扎一针孔，以免沸液将管盖冲开。）处理一个标准分子量mark作为标准物质。

⑧加样

待浓缩胶聚合后（20—30 min），撕去透明胶纸，缓缓取出梳子。将两块玻板夹在电泳槽上，形成电泳上槽。将1×电泳缓冲液倒满上槽，其余的倒入下槽。用微量加样注射器吸取20 μl样品，缓缓加到加品孔底部，每加完一个样品需用水清洗微量加样注射器。样品加完后，如有剩余的加样孔，应加上等体积的1×SDS 凝胶加样缓冲液（目的是使凝胶的负载均匀）。

⑨电泳

将电泳槽与电泳仪相接，正极（红色）接下槽。打开电源，恒压120 V电泳，当溴酚蓝前沿进入分离胶（分离胶与浓缩胶之间有一可见的界面），约20 min，将电压调高至200 V，继续电泳直至溴酚蓝到达分离胶底部（约90 min），关闭电源。

⑩染色与脱色

将电泳完成的凝胶从电泳槽中取出,去除浓缩胶,将分离胶放置于染色液中进行染色30分钟后,将分离胶片取出放入脱色液中进行脱色,脱色完成后进行观察,

1.2.4乳糖的分离

将上述滤液用倾滗法倒至蒸发皿中，用蒸汽浴浓缩至5ml后，将热的混合物用布氏漏斗抽滤，除去沉淀的蛋白质和残余碳酸钙。加热滤液，在热的溶液中加入95%乙醇18ｍl，并继续加热，待其混合均匀后，趁热过滤，滤液应澄清。把滤液移至锥形瓶中，加塞，放置 1 -2天，让乳糖充分结晶。抽滤，分离出乳糖晶体，并用冷的95%的乙醇水溶液洗涤产物，待其干燥后称重。

2 结果与分析

称重得分离所得的络蛋白重量为0.41g，则奶粉中络蛋白的含量为 2.05g /100ml

乳糖的分离实验中得到少量的乳糖晶体，过滤后晶体全都附着在看滤纸上，

无法称取其重量。

此照片为络蛋白的电泳结果照片

3结论

3.1不同PH值的酪蛋白的实验现象

PH值调到3.8的牛奶,酪蛋白迅速沉淀下来，抽滤的速度也很快，鉴定酪蛋白的几个性质试验现象都十分明显，而且滤液十分澄清。

PH值调到4.8的牛奶，酪蛋白的沉淀速度很慢，抽滤的速度也很慢，而且抽不干，滤液是浑浊的。

PH值调到4.6的牛奶，酪蛋白沉淀速度和抽滤速度处于上面两种情况的中间酪蛋白，性质试验现象明显。滤液略显乳白色。

3.2奶中脂肪的影响

脂肪也是牛奶的主要成分之一，约占牛奶的 3.9%,在分离酪蛋白时，脂肪回夹杂在酪蛋白中一起沉淀出来。因此，在用乙醚洗涤酪蛋白时，应把任何形状的酪蛋白捣碎，并用玻璃棒搅拌约10min，尽可能出去脂肪。否则，酪蛋白长时间放置后会焦化变黄。

3.3碳酸钙的作用

本实验中所使用的碳酸钙，主要是用以中和过剩的乙酸，避免在后面的实验中乳糖在酸性条件下水解，从而影响收得率。

4总结

通过本次综合实验,进一步提高了我们的实验操作技术,特别是加强了生物实验重要的电泳技术的练习。我们将理论与实践互相结合,学到知识的同时能过熟练的运用这些知识解决一些实际的问题,这对于我们的未来是有很大的帮助。

牛奶中脂肪含量的测定

萍乡学院牛奶中脂肪含量的测定 专业：商检技术 学生姓名：薛钦 指导老师：肖沐航 学号： 完成时间：2020年6月13日

牛奶中脂肪含量的测定 【实验目的】 1、了解从牛奶中分离脂肪的方法。 2、熟练掌握脂肪哥特里-罗紫法的测定方法。 3、了解罗紫哥特里法测脂肪原理。 【实验原理】 牛奶是一种营养成分齐全、保健功能显著的食品，被誉为“最接近完善”的食品和人体“白色血液”。牛奶的组成成分十分复杂，基本成分主要为脂肪蛋白质、乳糖、无机盐、维生素和水。脂肪是牛奶等食品的重要营养组成成分，脂肪酸作为脂肪中的有效成分，其种类、含量和比例与人体营养需求密切相关；随着食品工业的快速发展，牛乳质量越来越受到人们的关注，乳脂是牛乳质量评价的重要指标之一。牛奶脂肪主要含有甘油三酯、甘油酯、脂肪酸。 分离牛奶中脂肪的方法;悬浮结晶、固化层熔融结晶法融或者采用离心机分离。能用离心机分离出脂肪,因脂肪比重轻，通过高速旋转，产生离心作用将脂肪分离出来。 熔融结晶是一种重要的分离、纯化及浓缩技术。熔融结晶分离的原理很简单，根据熔点不同进行分离，熔融的混合物移去热源后，依熔点高低逐渐固化得以分离。 检测脂肪的主要方法有：索氏抽提法、酸水解法、哥特里-罗紫法、盖勃氏法和巴布科克氏法、氯仿-甲醇提取法等。

本实验是采用哥特里-罗紫法。又称碱性乙醚提取法。其原理是是利用氨-乙醇溶液，破坏乳的胶体性状及脂肪球膜，使非脂成分溶解于氨-乙醇溶液中而脂肪游离出来，再用乙醚-石油醚提取出脂肪，蒸馏去除溶剂后，残留物即为乳脂。罗紫哥特里法适用于适用于巴氏杀菌乳、灭菌乳、生乳、发酵乳、调制乳、乳粉、炼乳、奶油、稀奶油、干酪和婴幼儿配方食品中脂肪的测定。 【实验步骤】 取一定量样品（牛奶吸取；乳粉精密称取约1g，用10ml60℃水，分数次溶解）于抽脂瓶中，加入氨水，充分混匀，置60℃水浴中加热5分钟，再振摇2分钟，加入10ml乙醇，充分摇匀，于冷水中冷却后．加入25ml乙醚，振摇半分钟，加入25ml石油醚，再振摇半分钟，静置30min，待上层液澄清时，读取醚层体积，放出一定体积醚层于一已恒重的烧瓶中，蒸馏回收乙醚和石油醚，挥干残余醚后．放入l00—105℃烘箱中干燥小时，取出放入干燥器中冷却至室温后称重，重复操作直至恒重。 【仪器与试剂】 离心机、抽脂瓶；水浴锅乳粉。 ①20％氨水（相对密度）； ②96％乙醇； ③乙醚（不含过氧化物）； ④石油醚（沸程30—60℃） 【计算结果】

对牛奶的七大误解

对牛奶的七大误解 近年来，对牛奶是优是劣的争论一直没有停止。甚至有人还抛出了“牛奶有害”论调，这是不对的，也是不科学的。牛奶是完美的，不仅营养丰富、全面，而且易于吸收，所以它成了人们健康食品的最佳选择。但正如任何事物一样，有阳光就会有阴影，牛奶也不例外，有美丽也就会有误会。人们对牛奶的误会，综合起来讲，大约有以下七个方面： 你对牛奶的七大误解 误会一：牛奶越香越好 牛奶加热时才有奶香味，凉奶则很少闻到香味。此外，不同季节牛奶口感也有很大区别。夏天青饲料吃得较多，相对来讲含水分多、干物质、脂肪少，同时青饲料（包括青草）中的油酸部分转入牛乳中，使其含量升高。而油酸属于长链不饱和脂肪酸，不挥发，不体现香气，因此夏季的牛奶“奶香味”较淡。冬季牛青贮、干草吃得较多，其干物质、脂肪含量高，营养丰富，牛吃了以后部分转化为短链脂肪酸，熔点低，易挥发，赋予牛奶特有的乳香味，冬季的牛奶“奶香味”则较浓。 误会二：牛奶越浓越好 很多人选购的牛奶，揭开后喜欢看到上面附有一层厚厚的黄油，认为这样黏稠的牛奶才是好奶，这种观点是不正确的。喝牛奶时，你不妨留心一下，便可在牛奶包装物上发现印有两个很特别的字眼：均质。 均质是指牛奶加工时将牛奶中的脂肪球进一步粉碎，使脂肪充分溶解到蛋白质和水中，从而防止脂肪吸附在袋、盖和盒上。牛奶经过均质这种细加工，把脂肪球打碎，有利于人体吸收，能够更有效地促进消化。同时，被打碎的脂肪球溶入奶中发出脂肪香，使奶味更加浓郁醇厚。一般来说，均质过的牛奶，看起来较稀，但其营养价值实际上一点儿也不比看起来似乎黏稠的牛奶低。那些在袋上、盒上和盖上附有黄油的牛奶，是因为脂肪量大，经过一定时间后，脂肪就会上浮，形成油脂。这样的牛奶难以被人体充分吸收，常会造成不必要的浪费。 在此需要提醒的是，有的牛奶生产厂家甚至利用人们对此的误解，在牛奶中添加增稠剂，以此蒙骗消费者，所以正确选购牛奶时，千万不要以表面的稀稠作为判断牛奶质量优劣的标准。误会三：牛奶加热煮沸喝 如果想喝热牛奶，用温水浸泡即可，牛奶不仅不宜冷冻保存，而且还不宜高温久煮。牛奶煮熟后，营养会有所损失，煮的时间越长，损失越大。这是因为随着温度的升高，牛奶中所含的维生素、蛋白质等营养成分都会发生化学变化，不仅色、香、味降低，还会转化成其它物质，所以牛奶加热时间不宜过长。 一般来说，消毒牛奶的温度要求并不高，80—85℃/10—15秒。如果煮沸，温度达到100℃，牛奶中的乳糖就会出现焦化现象，而焦糖可诱发癌症。其次，煮沸后牛奶中的钙会出现磷酸沉淀现象，从而降低牛奶的营养价值。 误会四：牛奶可以当水喝 有些人把牛奶当开水喝，以为多多益善，这是不对的。水对于人体是非常重要的，为使体内水分保持平衡，必需从饮食中得到补充。牛奶虽含有大量水分，但属于高渗性饮料，饮入过多，特别在出汗、失水过多时，容易导致脱水。因此，一般来说，牛奶是不能当水喝的。 但也有特殊情况，如中国飞人刘翔喝牛奶跟喝水似的。据他的父母说，他从小就喜欢喝牛奶，十六七岁的时候，他每天就要喝三四瓶了，刘翔自己也说爱喝奶胜过于水：“我很喜欢喝牛奶，早晚都喝。”这是因为刘翔每天大量的运动消耗，需要喝大量的牛奶来补充自己的体能。误会五：牛奶用微波炉加热会致癌 有人说，牛奶用微波炉加热后喝会致癌，这是不科学的。其实微波加热的原理很简单，乃是

牛奶中提取酪蛋白

牛奶中提取酪蛋白 [目的与要求] 1、了解等电点沉淀法 2、学习从牛奶中制备酪蛋白的方法 3、加深对蛋白质等电点性质的理解 [原理] 蛋白质是一种亲水胶体，在水溶液中蛋白质分子表面形成一个水化层。另外，蛋白质又是一种两性离子，在一定pH溶液能够维持一个稳定的状态。但是调节蛋白质溶液的pH值至等电点时，蛋白质会因失去电荷而变得不稳定，此时若再加脱水剂或加热，水化层被破坏，蛋白质分子就相互凝聚而析出。等电点沉淀法主要利用两性电解质分子在等电点时溶解度最低的原理，而多种两性电解质具有不同等电点而进行分离的一种方法。 牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀，除去脂类杂质后便可得到较纯的酪蛋白。 但单独利用等电点沉淀法来分离生化产品效果并不太理想，因为即使在等电点时，有些两性物质仍有一定的溶解度，并不是所有的蛋白质在等电点时都能沉淀下来，特别是同一类两性物质的等电点十分接近时。生产中常与有机溶剂沉淀法、盐析法并用，这样沉淀的效果较好。 本实验目的是使学生运用等电点沉淀法制备酪蛋白，从中加深对蛋白质等电点性质的理解。 [方法和步骤] 1、取预先放冰箱中冷却的消毒牛奶6mL，3 000r/min离心10min，除去脂肪层的乳液置50毫升烧杯内，加热至40℃左右，在搅拌下慢慢加入10mL左右预热的醋酸-醋酸钠缓冲液，此时混浊液中有大量絮状物沉下。冷至室温，3 000r/min离心10min，弃去上清液，得酪蛋白粗品。 2、用蒸馏水洗沉淀三次（每次5mL左右），3 000r/min离心10min，弃去上清液。 3、将沉淀置研钵中，研碎后，渐加5mL 95%乙醇，静置片刻，将全部悬浮液转移至布氏漏斗抽滤，抽干后的制品，用乙醇-乙醚混合液洗沉淀二次（每次5mL），最后用无水乙醚洗沉淀二次（每次5mL），抽干。 4、将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白制品（称重，记录）。 5、酪蛋白溶液的配制：称取酪蛋白0.1g，置10毫升烧杯中，加5mL 0.2mol/L氢氧化钠溶液，搅匀，隔水加热，溶解后转移至10毫升容量瓶中，用少量蒸馏水洗烧杯数次，洗液并入容量瓶中，最后加水至刻度处，摇匀，置冰箱中保存备用。 [结果与计算] 计算酪蛋白含量和得率： 1、含量：酪蛋白克数/100mL牛奶 2、 100 %? = 理论含量 测得含量 得率 式中理论含量3.5g/100mL牛奶

牛奶的品质改善技术

甘肃省高等教育自学考试 毕业论文 题目：牛奶的品质改善技术 专业：动物医学 姓名：苏子杰 指导老师：薛慧文 甘肃省高等教育自学考试办公室印制 2014年4月 目录

摘要 (1) 关键词 (1) 前言 (1) 1 牛奶的营养与消费趋势 (1) 1.1牛奶的营养特点 (1) 1.1.1 牛奶中的蛋白质和氨基酸 (2) 1 .1. 2 牛奶中的碳水化合物 (3) 1.1.3牛奶脂肪 (3) 1.1.4 牛奶的矿物质 (3) 1.1.5 牛奶维生素 (3) 1.1.6 牛奶其他成分 (4) 1.2 牛奶的消费局势 (4) 1.2.1 营养 (4) 1.2.2安全 (4) 1.2.3 保健 (4) 2 影响牛奶品质的因素 (4) 2.1 遗传因素 (4) 2.1.1 品种 (4) 2.2.2 个体 (5) 2.2.3 年龄和胎次 (5) 2.2 日粮管理 (5) 2.2.1 日粮模型 (5) 2.2.2 采食量 (5) 2.2.3 日粮能量 (5) 2.2.4 日粮中的矿物质和维生素 (5) 2.3 其他因素 (6) 2.3.1 季节 (6) 2.3.2 气温 (6) 2.3.3 产奶量 (6) 3 改善牛奶品质的营养调配技术 (6) 3.1改善奶牛乳房健康的营养调控技术 (6)

3.1.1维生素A和胡萝卜素 (6) 3.1.2 维生素E和硒 (7) 3.1.3铜、锌、锰、碘 (7) 3.2提高牛奶营养物质含量的营养调控技术 (7) 3.2.1保证牛奶营养物质含量达标的基本营养原则 (7) 3.2.2提高牛奶营养物质含量的特殊营养调控技术 (7) 3.3改善牛奶脂肪酸组成的营养调控技术 (7) 3.3.1牛奶脂肪酸组成调控的关键点 (7) 3.3.2日粮调控技术 (8) 3.3.3瘤胃调控技术 (8) 4 总结 参考文献 (8) 致谢 (8)

牛奶中酪蛋白的提取与分析

实验题目：牛奶中酪蛋白的提取与分析实验材料：牛奶 小组成员： 实验时间：

一：实验题目：牛奶中酪蛋白的提取与分析 二：报告撰写者 三、小组成员 实验仪器 温度计、布氏漏斗（*）、pH试纸（*）、抽滤瓶（*）水浴锅、烧杯、量筒、表面皿（*）、电子天平（*）、2个1000ml的容量瓶（*）、2张醋酸纤维薄膜（2cm×8cm 厚度120nm）成品（*）、培养皿9—10cm（*）、毛细管（*）、尺子、铅笔、单面刀片（*）、镊子、普通滤纸（*）、电泳槽、玻璃板8cm ×12cm（*）、752型分光光度计（*）、细布（*）、、、的移液管、试管、试管架、 四、实验材料 牛奶（蒙牛特仑苏和伊利金典） 五、实验试剂 特仑苏400ml、金典200ml、巴比妥（*）、巴比妥钠（*）、氨基黑10B（*）、50ml甲醇AR（*）、100ml冰醋酸AR（*）、95%的乙醇250ml（*)、95%的乙醚100ml（*）、L的乙酸100ml（*）、L的乙酸钠100ml（*）、25g氢氧化钠固体（*）标准酪蛋白、15mg五水硫酸铜（*）、60mg酒石酸钾钠（*）所需试剂配制方法： 乙醇乙醚混合液的配制： 10ml95%的乙醇 10ml95%的乙醚 乙醇钠缓冲液的配制： 配制乙醇乙醚1:1的混

L 的乙酸51ml L 的乙酸钠49ml 巴比妥钠缓冲液的配制： 巴比妥 巴比妥钠 染色液的配制： 氨基黑10B 50ml 甲醇AR 10ml 冰醋酸AR 漂洗液的配制： 45ml95%乙醇AR 5ml 冰醋酸AR 蒸馏水 透明液的配制： 25ml 的冰醋酸AR 75ml 的无水乙醇AR L 氢氧化钠溶液的配制： 16g 的氢氧化钠固体定容至1000ml 10%氢氧化钠溶液的配制： 5g 的氢氧化钠固体定容至50ml 双缩脲试剂的配制： 15mg 五水硫酸铜 配制巴比妥钠缓冲液（,./L ）, 将上 +40ml 蒸馏水， 混匀既得染 配制的乙酸钠缓冲液（l ） 混匀得染色液 混匀得透明液 溶于5ml 蒸馏水，在搅拌情况下，加入10%氢氧化钠溶液3ml ，用

生物化学实验四 酪蛋白的制备

实验四酪蛋白的制备 一、目的要求 学习和掌握从牛乳中制备蛋白的原理和方法；掌握等电点沉淀法提取蛋白质的原理和方法；掌握离心方法。 二、实验原理 牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为3.5g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7.利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。 三、材料、器材与试剂 1〉材料 鲜牛奶。 2〉器材 离心机、抽滤装置、精密pH试纸、电炉、烧杯、温度计、玻棒、漏斗、滤纸、滴管。3〉试剂 (1) 95%乙醇。 (2) 无水乙醚。 (3) 0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液。 A液：0.2mol/L醋酸钠溶液，称取CH3COON a·3H2O 54.44g，用蒸馏水定容至2000ml。 B液：0.2mol/L醋酸溶液，称取优级纯醋酸(含量大于99.8%)24.0g，定容至2000ml。 取A液1770ml，B液1230ml混合即可得pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3000ml。 (4)乙醇-乙醚混合液的配制：乙醇-乙醚=1:1(体积分数)。 四、实验步骤 (1)将20ml牛奶加热至40°C，在搅拌下慢慢加入预热至40°C、pH4.7的醋酸缓冲液20ml。用精密pH试纸调pH至4.7，将上述悬浮液冷却至室温，离心15min(3000r/min)，弃去上清液，得到酪蛋白粗制品。 (2)用水洗1次，离心10min，弃去上清液。 (3)在沉淀中加30ml乙醇，搅拌片刻，将全部悬浮液转移至布氏漏斗中离心10min，弃上清液，用乙醇-乙醚混合液洗1次。最后用乙醚洗沉淀1次，抽干或滤纸过滤得到湿的酪蛋白。 (4)将沉淀摊开，风干；得到酪蛋白纯品。 五、结果及处理 准确称重，得20ml牛乳中酪蛋白含量(g)，按下式计算酪蛋白的得率： 测得含量 得率(%)= 理论含量×100 式中，理论含量为3.5g/100ml牛乳。 实验结果： (1.426-0.795) ×5 得率(%)= 3.5 ×100=90.14%

牛奶中酪蛋白含量的测定

牛奶中酪蛋白的提取及含量测定 一、实验原理 1、牛乳的主要成分：碳水化合物（5%）、脂类（4%）、蛋白质（3.5%）、维生素、微量元素（Ca、P等矿物质）、水（87%） 牛奶中的糖主要是乳糖。乳糖是一种二糖，它由D?半乳糖分子和D?葡萄糖分子通过P -1,4-糖昔键连接而成。乳糖溶于水，不溶于乙醇，当乙醇混入乳糖水溶液中时，乳糖会结晶出来，从而达到分离的目的。 牛奶中的蛋白质主要是酪蛋白和乳清蛋白两种，其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。酪蛋白是白色、无味的物质，不溶于水、乙醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。而乳清蛋白水合能力强，分散性强，在牛乳中呈高分子状态。 2、等电点沉淀法： 在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零（即正负电荷相等），此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。酪蛋白的等电点为4.7左右（不同结构的酪蛋白等电点有所不同），本实验中将牛乳的pH调值4.7时，酪蛋白就沉淀出來。 市售牛奶通常会添加耐酸碱稳定剂來增加粘稠度，以致即使pH调至等电点酪蛋白也沉淀的很少，故实验时可将pH稍微调过多一点再调回等电点。同时，市售牛奶由于生产过程通常导致酪蛋白组分发生变化，因而使pl偏离了 4.7,通常偏酸。3、酪蛋白的提纯 根据乳糖、乳清蛋白等和酪蛋白的溶解性质差异，可以用纯水洗涤来除去乳糖、乳清蛋白等溶于水的杂质，再用乙醇除去脂类，然后过渡到用乙瞇洗涤，由于乙瞇很快挥发，最终得到纯粹的酪蛋白结晶。 4、蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝结合法） 考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区结合，这种结合具有高敏感性。考马斯亮蓝G520的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm o当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰变为595nm o在一定范围内，考马斯亮蓝G520- 蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以测定蛋白质浓度。 二、实验器材与试剂 1、器材：恒温水浴锅、离心机、抽滤装置、蒸发皿、精密pH试纸、旋涡混合器、紫外分光光度计、试管四、5mL吸管、50mL容量瓶、100mL ft筒、电子分析天平 2、试剂：鲜牛奶、pH4.7醋酸■醋酸钠缓冲溶液、乙醇■乙艇混合液（95%乙醇、无水乙瞇体积比1： 1）、0.9%NaCl溶液、标准蛋白液（0.1mg/mL牛血清蛋白）、考马斯亮蓝G520染液 三、实验操作记录 1、酪蛋白的制备 将20mL牛奶盛于100mL的烧杯中加热到40*C,在搅拌下慢慢加入预热至40?C、pH4.7的醋酸缓冲溶液20mLo用冰醋酸调节溶液pH至4.7,此时即有大量的酪蛋白沉淀析出。将上述悬浮液冷却至室温，离心Smin (4000r/min),弃去上清液，沉淀即为酪蛋白粗品。

如何区分乳糖不耐和牛奶过敏

牛奶小常识3 有些人喝了牛奶之后会有一些不适应，这里介绍一下两种情况，牛奶过敏症和乳糖不耐症。一：牛奶过敏症 1、概念：牛奶过症敏即是指人体对牛奶(主要是牛奶中的某些蛋白质如α-S1酪蛋白和β-乳球蛋白)产生过敏反应。也可称为牛奶蛋白不耐受。正常情况下，这些蛋白质是能被消化的，但是，如果人体的消化能力不足，则这两种蛋白质可能以未被消化的形式进入人体，从而引起过敏反应。 2、主要发生人群：新生婴幼儿和老年人是容易发病人群。老年人因为消化能力下降，对大分子长链蛋白质不容易消化。而新生婴幼儿则是因为他们的消化系统和免役系统都尚未发育完成。一般而言，新生婴幼儿0-6个月是最最敏感的时期，两岁以后，随着消化能力的提高和免疫功能的增强，大部分的小朋友不再对牛奶过敏。 3、主要症状：首先发生于皮肤、接着是胃肠道、呼吸道，症状有腹痛、腹胀、腹泻，皮疹、呕吐，严重时哮喘、便血等。 4、现在我们的婴儿奶粉都调整了酪蛋白与乳清蛋白的比例，使其比例为40：60，大大的降低了酪蛋白的含量，牛奶过敏症发生得比较少。 二：乳糖不耐症 1、概念：人体内能够分解乳糖的酶只有乳糖酶。由于乳糖酶的缺乏，乳糖不能分解在葡萄糖和半乳糖被吸收进入血液，称为乳糖消化不良”或“乳糖吸收不良”。由于乳糖酶的缺乏，没有被分解吸收的乳糖进入结肠后，被细菌发酵生成果酸和气体，引起人肠鸣、腹痛、排气和腹泻等症状，就称为“乳糖不耐受”。 2、主要发生人群：主要发生在以下几类人群中：正常的成年人，这是最常见、最主要的乳糖不耐受群体。其次还有由于很罕见的先天性疾病、由于早产而造成婴儿肠道乳糖酶活性低下以及由于肠道手术或其他原因，造成肠黏膜损伤，从而使乳糖酶活性会暂时消失一个月或更长一段时间等等。婴幼儿乳糖不耐症的情况比较少，人出生时，肠道内的乳糖酶活性是最高的，可以有效地保障对乳中乳糖的消化和吸收，从而为个体提供有效的能量和营养。随着人的生长发育，体内乳糖酶活性呈规律性衰减，结果造成乳糖吸收障碍。“乳糖不耐受症”的现象 3、乳糖不耐症的主要症状：主要表现为一些胃肠道症状，有腹部紧张、疼痛和腹泻。 4、乳糖不耐症患者可以采用一些办法：不要空腹喝牛奶，一次喝牛奶量不要太大，或者配合谷物同吃，或者加麦片同吃都能减少不适应的症状， 注：当消费者喝了牛奶之后有些反应，如腹泻之类的，有可能是自己的身体的一些原因造成的，而不是奶粉的原因。 怎样照顾有先天乳糖不耐症的宝宝 先天乳糖不耐症是一种隐性的遗传缺陷，是因为分解乳糖的酵素beta-galactosidase缺乏所引起。负责

低乳糖牛奶有营养吗

低乳糖牛奶有营养吗 牛奶是我们日常生活必不可少的，它有很高的营养价值，对身体有很多好处，基本我们日常生活已经离不开牛奶了，我们经常在超市中会看到各种各样的牛奶，总会让我们觉得眼花缭乱，不知道怎么样去选择，现在我们经常在超市看到很多低乳糖牛奶，那么什么是低乳糖牛奶，低乳糖牛奶有营养吗在许多人心里画了个问号。下面一起了解下低乳糖牛奶。 所谓低乳糖奶，即乳糖含量较低的奶。有人误认为是糖尿病人专用的牛奶，其实不是。低乳糖奶是在生产过程中加入一定量的乳糖酶，将乳糖分解为葡萄糖和半乳糖，模拟人体的乳糖消化过程，再经过杀菌、灭酶工艺制成的产品。 一、喝牛奶不舒服的现象普遍存在 您喝牛奶时有过不舒服的情况吗？比方肚胀、腹泻等。可能就是因为乳糖不耐受。我国居民乳糖不耐受率高达70%。乳糖不

耐受的原因是体内缺乏乳糖酶。 二、解决乳糖不耐受的方法 我国居民乳制品摄入不足，造成了钙缺乏情况严重。据《中国居民膳食宝塔》，成人每天要喝300g牛奶。但是，乳糖不耐受人群要喝牛奶又难受，如何解决呢？有以下几种方法。 1.喝酸奶。因为乳酸菌将一部分乳糖分解成乳酸，就降低了乳糖不耐受的情况。 2.少量，或兑水喝。或和其他固体食物一起吃。 3.喝低乳糖的牛奶。 三、低乳糖牛奶为什么能缓解乳糖不耐受情况？ 低乳糖牛奶即经过乳糖酶水解法加工的牛奶。在牛奶中加入乳糖酶，经过一定时间和温度的水解，利用乳糖酶(β- 半乳糖苷酶) 来分解乳糖，达到降低乳糖的目的。简单的说，就是因为一些人缺乏乳糖酶，所以，在体外先让乳糖酶把绝大部分乳糖水解，就不至于喝起来不舒服了。

四、低乳糖牛奶为什么喝起来甜甜的？ 低乳糖牛奶其中的乳糖被分解为半乳糖和葡萄糖，由于葡萄糖比乳糖甜，所以喝起来甜甜的，并不是因为添加了蔗糖。 五、低乳糖牛奶营养和普通牛奶比有变化吗？ 只是乳糖被分解为半乳糖和葡萄糖，乳糖酶在水解乳糖的同时还会部分参与半乳糖苷转移反应，生成低聚半乳糖；而总体营养成分改变不大。 六、低乳糖牛奶有效性 潘丽莉等报道，在北京募集68名乳糖不耐受的小学生，饮用250ml低乳糖牛奶后，乳糖不耐受发生率降低到6.1%，说明

实验六-从淡奶粉中分离、鉴定酪蛋白和乳糖

实验六从淡奶粉中分离、鉴定酪蛋白和乳糖 教学要求: 1 掌握通过等电点分离蛋白质的原理和方法； 2 掌握蛋白质鉴定的特征反应； 3 掌握还原性糖的鉴定方法。 教学重点：掌握通过调节溶液体系的pH值利用等电点分离蛋白质。 教学难点：蛋白质和还原性糖鉴定反应的操作及其现象观察 教学时数：4 学时 一、实验目的 １、掌握分离蛋白质和糖的原理和操作方法； ２、掌握蛋白质的定性鉴定方法； ３、了解乳糖的一些性质。 二、实验原理 牛奶的主要成分是水、蛋白质、脂肪、糖和矿物质，其中，蛋白质主要是酪蛋白，而糖主要是乳糖。 蛋白质在等电点时溶解度最小，当把牛奶的ＰＨ值调到4.8时(酪蛋白的等电点),酪蛋白便沉淀出来。酪蛋白不溶于乙醇和乙醚，可用乙醇和乙醚来洗去其中的脂肪。 乳糖不溶于乙醇在滤去酪蛋白的清液中加入乙醇时，乳糖会结晶出来。 三、实验步骤 １、酪蛋白与乳糖的提取 ４g奶粉与80 mL 40℃温水调配均匀，以10%乙酸调节pH=4.7(用精密pH试纸测试)，

静置冷却，抽滤。 滤饼用6mL水洗涤，滤液合并到前一滤液中。滤饼依次用6mL95%乙醇，6mL乙醚洗涤，滤液弃去。滤饼即为酪蛋白，晾干称重。 在水溶液中加入2.5g碳酸钙粉，搅拌均匀后加热至沸，过滤除去沉淀，在滤液中加入1～2粒沸石，加热浓缩至8ml左右，加入10ml 95%乙醇（注意离开火焰）和少量活性炭，搅拌均匀后在水浴上加热至沸腾，趁热过滤，滤液必须澄清，加塞放置过夜，乳糖结晶析出，抽滤，用95%乙醇洗涤产品，晾干称重。 ２、酪蛋白的性质 缩二脲反应取10ml酪蛋白溶液，加入10% NaOH溶液2ml后，滴入1%CuSO4溶液1ml。振荡试管，观察现象(溶液呈蓝紫色)。 蛋黄颜色反应取10ml酪蛋白溶液，加入浓硝酸2ml后加热，观察现象（有黄色沉淀生成）。再加入10%NaOH溶液2ml，有何变化?(沉淀为橘黄色) 3、乳糖的性质 Fehling反应Ｆehling试剂A和Ｂ各3mL,混匀，加热至沸后加入0.5mL5%乳糖溶液，观察现象。 Tollen反应在2mLTollen试剂中加入0.5mL5%乳糖溶液，在80℃中加热，观察现象(有银镜生成)。 四、实验结果 品名性状产量收率

牛奶中酪蛋白的制备

牛奶中酪蛋白的制备 一、实验目的 1. 学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。 2. 掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。 二、实验原理 利用酪蛋白的等点点为4.7，所以调节牛奶的pH4.7使酪蛋白沉淀洗出。等电点是调节溶液的pH,使蛋白质所带的正电荷和负电荷恰好相等，总净电荷为零，以两性离子存在，不想阳极移动也不想阴极移动，此溶液的pH称为蛋白质的等电点。酪蛋白不溶于乙醇、乙醚等试剂。因而加入乙醇乙醚洗涤沉淀物除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。 三、实验材料、试剂与仪器 （一）材料与试剂 95%乙醇、新鲜牛奶、乙醇-乙醚混合液（乙醇：乙醚=1：1） 0.2mol/L pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液 A液：0.2mol/L醋酸钠溶液称NaAC·3H2O 27.22g，定容至1000 mL。 B液：0.2mol/L醋酸溶液，称优纯醋酸（含量大于99.8%）6.0g定容至500 mL。 取A液590mL，B液410mL混合即得pH 4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液1000 mL。 （二）器具 离心机、抽滤装置、精密pH试纸、玻璃棒、量筒、恒温水浴 四、实验步骤 （一）酪蛋白的粗提 100mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7的醋酸缓冲液100mL，用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。将上述悬浮液冷却至室温。离心15分钟（3000 r /min）。弃去清液，得酪蛋白粗制品。 （二）酪蛋白的纯化 1. 用水洗涤沉淀3次，离心10分钟（3 000r/min），弃去上清液。 2. 在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇-乙醚混合液30 mL洗沉淀2次。最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。 3. 将沉淀摊开在表面皿上，风干；得酪蛋白纯品。 （三）准确称重，计算含量和得率。

酪蛋白的提取与测定(参考资料)

牛乳中酪蛋白的制备与浓度测定 一、实验目的 1、学习从牛乳中分离酪蛋白的原理和方法 2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法 3、了解紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理，熟悉紫外分光光度计的使用 4、学会用考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度 二、实验原理 1、准备酪蛋白原理：牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质，其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。牛乳在PH4.7时酪蛋白等电聚沉后剩余的蛋白质统称为乳清蛋白。酪蛋白是白色、无味的物质，不溶于水、乙醇等有机溶剂，但溶于碱溶液。乳清蛋白不同于酪蛋白，其粒子的水和能力很强，分散性高，在乳中呈高分子状态。本法利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的PH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。 2、紫外吸收法测定蛋白质浓度的原理：大多数蛋白质由于有酷氨酸和色氨酸的存在，在紫外光280nm有吸收高峰，可以进行蛋白质含量的测定。但是核酸在280nm也有吸收，干扰测定，不过核酸的最大吸收峰在260nm，通过测定在280nm和260nm时A的比值，然后通过计算消除核酸存在的影响，可以求得有核酸存在时蛋白质的浓度。 3、考马斯亮蓝结合法测定蛋白质浓度原理：考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性。考马斯亮蓝G250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。当它与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰改变为595nm，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感度。 在一定范围内，考马斯亮蓝G250—蛋白质复合物呈色后，在595nm下，吸光度与蛋白质含量呈线性关系，故可以用于蛋白质浓度的测定。 三、实验器材与试剂 1、制备酪蛋白： 烧杯、玻璃棒、量筒、精密PH试纸、离心机、布氏漏斗、表面皿、恒温水浴锅 牛奶、醋酸缓冲液、冰醋酸、95%乙醇、无水乙醚 2、紫外光吸收法： 紫外可见光分光光度计、容量瓶50ml(×1)、石英比色皿 0.9%NaCl、1mol/LNaOH溶液、1mol/L乙酸溶液 3、考马斯亮蓝法： 紫外可见光分光光度计、试管1.5cm×15cm(×9)、玻璃比色皿 牛血清白蛋白（0.1mg/ml）、考马斯亮蓝、0.9%NaCl 四、实验步骤

酪蛋白的提取

一、实验目的 1、掌握一种提取蛋白的方法。 2、掌握一种检测牛乳质量的方法。 二、实验原理 酪蛋白是乳蛋白质中最丰富的一类蛋白质，约占乳蛋白的80~82%，酪蛋白不是单一的蛋白质，是一类含磷的复合蛋白质混合物，以一磷酸酯键与苏氨酸及丝氨酸的羟基相结合。它还含有胱氨酸和蛋氨酸这两种含硫氨基酸，但不含半胱氨酸。它在牛乳中的含量约为35g/L，比较稳定，利用这一性质，可以检测牛乳中是否掺假。 酪蛋白在其等电点时由于静电荷为零，同种电荷间的排斥作用消失，溶解度很低，利用这一性质，经牛乳调到pH4.6，酪蛋白就从牛乳中分离出来。酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被利用来从酪蛋白粗制剂中将脂类杂质除去。 三、仪器和试剂 仪器：温度计、布氏漏斗、pH 试纸、抽滤瓶、电炉、烧杯、量筒、表面皿、天平等。 试剂： 1. 95%乙醇、乙醚 2. pH4.6乙酸钠缓冲液0.2mol/L 3. 乙醇、乙醚混合液：乙醇∶乙醚=1∶1（体积比） 4. 市售牛乳 四、实验步骤 1.酪蛋白等电点沉淀 将100ml牛乳放到500ml烧杯中，加热至40℃左右的乙酸钠缓冲液，直到pH达4.6左右，用pH试纸或酸度计调试。将上述悬浮液冷却至室温，然后放置5min，用细布过滤，收集沉淀。 2.除脂类杂质 将上述沉淀用少量水洗数次，然后悬浮于30ml95%的乙醇中。将此悬浮液倾于布氏漏斗中，抽滤除去乙醇溶液，再倒入乙醇—乙醚混合液洗涤沉淀两次，最后再用一米洗涤沉淀两次，抽干。将沉淀从布氏漏斗中移去，在表面皿上摊开以除去乙醚，干燥后得到的是酪蛋白纯品。准确称重后，计算出每100ml牛乳所制备出的酪蛋白数量（g%），并与理论产量（3.5g%）相比较，求出实际获得百分率。 一、实验目的 酶是植物体内具有催化作用的蛋白质，植物体内的生化反应，一般都是在酶的作用下进行的，没有酶的催化反应，植物的生命也就停止了，因此对酶的研究是阐明生命现象本质中十分重要的部分。为要研究酶首先要将酶从组织中提取出来，加以分离、纯化，不同的研究目的对酶制剂的纯度要求也不相同，有些工作只需要粗的酶制剂即可，而有些工作则要求较纯的酶制剂，需根据不同情况区别对待。在酶的提取和纯化过程中，自始至终都需要测定酶的活性，通过酶活性的测定以监测酶的去向。 二、实验原理 （一）酶的提取 1.酶的存在位置? 存在于动植物以及微生物的细胞的各个部位。 2.如何将酶从细胞中分离? 从高等植物中提取酶常遇到一些实际问题，首先是细胞中含有许多种酶，每种酶的浓度又很低，只占细胞总蛋白质中的极小部分（叶中的双磷酸核酮糖羧化酶除外），而许多植物组织中蛋白质的含量又很低。此外，各种酶的存在状态不同，有在细胞外的外酶，在细胞内的内酶，内酶中又有与细胞器一定结构相结合的结合酶，也有的存在于细胞质中，提取时都应区别对待，作不

实验报告-从牛奶中分离酪蛋白

实验报告 一、实验名称：从牛奶中分离酪蛋白 二、实验目的： 1.学习从胶体中提取某一类物质的方法。 2.学习蛋白质的各种颜色反应及其原理。 三、实验原理： 1.蛋白质是两性化合物，溶液的酸碱性直接影响蛋白质分子所带的电荷。当调节牛奶 的pH值达到酪蛋白的等电点（pl）4.8左右时，蛋白质所带正、负电荷相等，呈电 中性，此时酪蛋白的溶解度最小，会以沉淀形式从牛奶中析出。 2.缩二脲反应原理：具有两个或两个以上肽键的化合物在碱性条件下与Cu2+反应,生 成红紫色的络合物。所有的蛋白质均有此显色反应。 3.蛋白黄色反应原理：硝酸将蛋白质分子中的苯环硝化，在加热状态下产生了黄色硝 基苯衍生物，再加碱颜色加深呈橙黄色。这是含有芳香族氨基酸特别是含有酪氨酸 和色氨酸的蛋白质所特有的颜色反应。 4.茚三酮反应原理：蛋白质与茚三酮共热，产生蓝紫色的还原茚三酮、茚三酮和氨的 缩合物。此反应为一切氨基酸及α-氨基酸所共有。 四、实验步骤及现象： 1.取50mL脱脂牛奶于150mL烧杯中，用热水浴加热至40℃，维持此温度，边搅拌 边加稀醋酸（1：9）溶液约2mL——有白色沉淀析出。 2.继续搅拌并使悬浊液冷却至室温，然后将混合物转入离心杯中，于3000r/min离心 15min。 3.离心完毕后，上清液倒入乳糖回收瓶中，沉淀用95%的乙醇（20ml）搅匀，然后用 布氏漏斗减压过滤，用乙醇-乙醚（1：1）混合液洗涤沉淀2次，每次约10ml，最 后用5ml乙醚洗涤沉淀一次，减压过滤至干——得到干燥的白色固体。 4.将干粉铺于表面皿上，称量并计算牛奶中酪蛋白含量。 5.称取0.5g酪蛋白，溶解于0.4M氢氧化钠溶液的生理盐水（5mL）中，然后滴加3-4 滴1%硫酸铜溶液，振荡试管——溶液变成紫色。 五、实验数据： 空表面皿的质量m0 =28.15g 表面皿与酪蛋白的总质量m1 =31.78g 牛奶中酪蛋白的质量m= m1 - m0 =3.63g 六、讨论与感想： 1.牛奶是一种胶体，在正常情况下是均一稳定的，要想分离出其中的某一成分，就应 该想办法使这种成分变成沉淀析出。通过本次实验，我知道了可以通过调节胶体的 酸碱性，来改变蛋白质分子所带电荷，使其达到等电点。此时蛋白质分子间的电荷 作用力最小，分子间没有了间隙，浮力减小，蛋白质就会沉淀。而实验中50ml牛 奶和2ml稀醋酸（1：9）所配成的混合液的pH恰好在4.8左右，正好是蛋白质的

牛奶中乳糖含量的测定——直接滴定法

牛奶中乳糖含量的测定——直接滴定法 1. 1试验样品新鲜牛奶. 1. 2试验试剂碱性酒石酸铜甲液（300g硫酸铜和0.1g亚甲基蓝）; 碱性酒石酸铜乙液（100g酒石酸钠、150g氢氧化钠和8g亚铁氰化钾）; 21. 9%乙酸锌溶液; 10. 6%亚铁氰化钾溶液; 1mg /mL和0. 1mg /mL标准乳糖溶液。 1.3 溶液的配置 碱性酒石酸铜甲液：取300g硫酸铜粉末，加适量温蒸馏水溶解；取0.1g亚甲基蓝适量蒸馏水溶解。前者冷却后加入2L容量瓶，再加入后者，之后用蒸馏水定容至2L。 碱性酒石酸铜乙液：取100g酒石酸钠和8g亚铁氰化钾用适量蒸馏水溶解；取150g氢氧化钠，冷水浴，先加入500mL蒸馏水不停搅拌直至溶解，再加500mL蒸馏水搅拌，待溶解由浑浊变为澄清时方可拿下。二者加入2L容量瓶中，用蒸馏水定容。 21. 9%乙酸锌溶液：取21.9g乙酸锌，溶于100mL蒸馏水中。 10. 6%亚铁氰化钾溶液：取10.6g亚铁氰化钾溶液，溶于100mL蒸馏水中。 1mg/mL乳糖标准溶液：称取预先在100℃烘箱中干燥2h 的分析纯乳糖1.000g，经水溶解后移入1000mL 容量瓶，定容至刻度。每毫升溶液相当于1mg 乳糖。 0.1mg/mL乳糖标准溶液：称取预先在100℃烘箱中干燥2h 的分析纯乳糖0.100g，经水溶解后移入1000mL 容量瓶，定容至刻度。每毫升

溶液相当于0.1mg 乳糖。 2.1 样品处理: 准确吸取25mL 新鲜牛奶于250mL 容量瓶中,加50mL 水, 缓慢加入5mL 乙酸锌及5mL10. 6%的亚铁氰化钾溶液,加水至刻度,混匀,静置30min 过滤,滤液备用. 2.2 标定碱性酒石酸铜: 准确吸取5. 0mL 碱性酒石酸铜甲液及5. 0mL 乙液置150mL 锥形瓶中,加水10mL 从滴定管中滴加约14mL( 1mg /mL)标准乳糖溶液,加热至沸,趁沸以1滴/秒的速度继续滴加乳糖标准液,至蓝色刚好退去为终点,记录消耗的乳糖标准液的体积,平行操作三份,取其平均值,计算每10mL 碱性酒石酸铜液相当于乳糖的质量( mg ) . 2.3 样品测定: 准确吸取5. 0mL 碱性酒石酸铜甲液及5. 0mL 乙液置150mL 锥形瓶中,加水10mL ,从滴定管中滴加约2mL 前述制备的样品溶液,加热至沸,趁沸以1滴/秒的速度继续滴加样品液,至兰色刚好退去为终点,记录消耗的样品液的体积,平行操作三份,得出平均消耗体积. 2.4 结果计算: 样品中乳糖含量按如下公式计算 1001000 25021????=V m m X 式中：X ——样品中乳糖含量，g/mL ；1m ——10ml 碱性酒石酸铜溶液相当于乳糖的质量,mg ；2m ——样品的总量，mL ；V ——测定时平均消耗样品液的体积, mL 。

牛奶基础知识

牛奶的营养成分 牛奶中含有几乎人体需要的所有营养成分。在1000克牛奶中含有7克矿物质和各种维生素、40克乳脂、35克蛋白质、50克乳糖和868克水分。 据专家分析测定：每一瓶227克(半磅装)消毒牛奶中，所含蛋白质，相当于55克鸡蛋；脂肪，相当于385克带鱼；热量，相当于120克猪肝；钙，相当于500克菠菜；磷，相当于300克鸡肉；维生素A，相当于125克活虾；维生素B2，相当于225克羊肉。 7~10岁学龄儿童，每天喝500克牛奶(早晚各一瓶)即可。 牛奶被人们称作完全营养食物，所含营养价值几乎能全部消化吸收，并无废弃排泄物。 蛋白质（含量约３．１％）：含人体一切必需的氨基酸。 脂肪（含量约３．４％－３．８％）：乳脂肪是一种消化率很高的食用脂肪，能为机体提供能量。 乳糖（含量约４．７％）：牛奶中的碳水化合物几乎都是乳糖，对于婴儿智力发育非常重要。人体对钙吸收的程度与乳糖数量成正比。因此常喝牛奶可以预防佝偻病。 无机盐：0.60-0.75%，其中含有钠10.62%、钾36.62%、钙45%、镁7.76%。每升牛奶中，含有碘30-70毫克，铁0.4毫克，锌2.5毫克，维生素D:0.3-4.6国际单位，维生素E 20-200毫克，维生素B1 20-100微克，维生素B2 150微克，维生素C 1-4毫克。 矿物质：矿物质是机体的重要组成成分，可与蛋白质一起维持细胞内、外渗透压，还可调节神经肌肉的兴奋性。牛奶中含有较丰富的矿物质，主要包括钙、磷、钾、钠、铁等。 维生素：牛奶中含有已知的所有维生素。 具体营养点： （１）牛奶中的蛋白质含有８种必需氨基酸，适宜于构成肌肉组织和促进健康发育；对于正处在生长发育阶段的儿童青少年更为重要。 （２）牛奶中所含有的脂肪溶点低，颗粒小，很容易被人体消化吸收，并其消化率达９７％。（３）牛奶中的主要碳水化合物是乳糖，乳糖在人体内可调节胃酸，促进肠蠕动和助消化腺分泌的作用。 （４）牛奶中所含的钙质，是人体钙的最好来源。因为牛奶中的钙在体内极易吸收，远比其他各类食物中的钙吸收率高。而且，牛奶中钙与磷比例合适，是促进儿童青少年骨骼、牙齿发育的理想营养食品。 （５）牛奶中几乎含有一切已知的维生素，如维生素Ａ、维生素Ｃ、维生素Ｄ、及Ｂ族维生素。（６）奶中还含有能增进儿童发育所需要的抗体物质。

实验二十四从牛乳中分离酪蛋白

实验二十四从牛乳中分离酪蛋白 实验二十四从牛乳中分离酪蛋白 1、目的 掌握从牛乳中分离酪蛋白的原理，学会操作方法。 2、原理 牛乳中含有多种蛋白质，它们有着不同的性质，在脱脂牛乳的蛋白质中酪蛋白约占80%，酪蛋白是一类含磷蛋白质的复杂混合物。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳 的pH 调到4.7（酪蛋白的等电点）时，酪蛋白就沉淀析出。再用乙醇和乙醚洗涤沉淀， 除去脂类杂质，便可制得纯酪蛋白。 3、实验材料与仪器 3.1材料 新鲜牛乳 （1）95%乙醇 （2）乙醚 （3）0.2 mol/L醋酸溶液 （4）0.2 mol /L pH 4.7醋酸–醋酸钠缓冲液，配制方法如下：先分别配制A 液 和B 液： A 液（0.2 mol / L 醋酸钠溶液）称取分析纯醋酸钠（NaAc ·3H 2O ）27.22g 溶于蒸馏水中，定容至1000 ml。 B 液（0.2 mol / L 醋酸溶液）称取分析纯冰醋酸（含量大于99.8%）12.0g 溶于蒸馏水中，定容至1000 ml。 取A 液885 ml 和B 液615 ml 混合，即得pH 4.7 的醋酸－醋酸钠缓冲液1500 ml 。 3.2仪器 恒温水浴、普通离心机、精密pH 试纸或酸度计、布氏漏斗、抽滤瓶、表面皿、离心 管（80 ml、量筒、烧杯（100 ml）、玻棒、电子天平 4、操作步骤

（1）取30 ml鲜牛乳，置100 ml烧杯中，加热至40 ℃。在搅拌下慢慢加入预热至40 ℃、pH 4.7的醋酸–醋酸钠缓冲溶液40 ml，用精密pH 试纸或酸度计检查pH ，再用0.2 mol/L醋酸溶液调至pH 4.7，静置冷至室温。 （2）悬浮液出现大量沉淀后，转移至离心管中，在3 500 r /min下离心10 min，弃去上清液，所得沉淀为酪蛋白的粗制品。 （3）用40 ml 蒸馏水洗涤沉淀，将沉淀搅起，同上离心分离，弃去上清液。加入30 ml 95%乙醇，把沉淀充分搅起至成悬浊液，将其转移到布氏漏斗中抽滤，先用30 ml 95%乙醇洗涤，再用30 ml乙醚洗涤，最后抽干制得酪蛋白。 （4）将酪蛋白白色粉末摊在表面皿上风干，于电子天平称重M 。 5、计算 X=M/V 式中：M---酪蛋白白色粉末的重量（g ） V---鲜牛乳体积（ml ）

牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制备

2008～2009学年第二学期 实训一牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制备（6学时） 一、目的和要求 1、掌握盐析法的原理和操作； 2、掌握等电点沉淀法的原理和基本操作。 二、实验原理 牛奶中主要的蛋白质是酪蛋白，乳蛋白素是一种广泛存在于乳品中，合成乳糖所需要的重要蛋白质。酪蛋白在pH4.8左右会沉淀析出，但乳蛋白素在pH3左右才会沉淀。利用此一性质，可先将pH降至4.8，或是在加热至40℃的牛奶中加硫酸钠，将酪蛋白沉淀出来。酪蛋白

不溶于乙醇，这个性质被利用来从酪蛋白粗制剂中除去脂类杂质。将去除掉酪蛋白的滤液的pH调至3左右，能使乳蛋白素沉淀析出，部分杂质即可随澄清液除去。再经过一次pH沉淀后，即可得粗乳蛋白素。 三、实验材料 1、材料 脱脂牛乳或低脂牛乳（50ml）、蒸馏水 2、器材 100ml量筒、100ml烧杯（2个）、250ml烧杯、水浴锅、玻璃棒、布氏漏斗、滤纸、抽滤瓶、真空泵、pH计、pH试纸、离心机、离心管、磁力搅拌器 3、试剂 无水硫酸钠、无水乙醇、浓HCl、NaOH 0.1mol/L HCl溶液配制：用洁净的量杯（或量筒）量取9mL浓盐酸，注入盛有1000mL水的试剂瓶中，盖上玻璃塞，摇匀。 （一般来讲最浓的浓盐酸质量分数是37.5%，量浓度约是12mol/L，密度1.183g/cm3左右。） 0.1mol/L NaOH溶液配制：称取4克氢氧化钠固体，用少量蒸馏水溶解，将溶液转移到1L的容量瓶中，定容，摇匀。 四、实验步骤 1、盐析沉淀法制备酪氨酸 （1）将50ml牛乳倒入100ml烧杯中，于40℃水浴中加热并搅拌。

（2）向上述烧杯中缓缓加入（约10min内分次加入）10g无水硫酸钠，再继续搅拌10min。 （或者是书中所讲述的部分----------） （3）将溶液用布氏漏斗过滤，分别收集沉淀和滤液。沉淀悬浮于30ml乙醇中，倾于布氏漏斗中过滤除去乙醇溶液，抽干。将沉淀从布氏漏斗中移出，在表面皿上摊开以除去乙醇，干燥后得到的是酪蛋白。准确称重。 2、等电点沉淀法制备乳蛋白素 （1）将制备酪蛋白操作步骤（3）所得滤液置于100ml烧杯中，一边搅拌，一边利用pH计以浓盐酸调整pH至3±0.1。 （2）将溶液倒入离心管中，6000r/min离心15min，倒掉上层液。（3）在离心管内加入10ml去离子水，振荡，使管内下层物重新悬浮，并以0.1mol/L氢氧化钠溶液调整pH至8.5～9.0，此时大部分蛋白质均会溶解。 （4）将上述溶液以6000r/min离心10min，上层液倒入50ml烧杯中。 （5）将烧杯置于磁搅拌加热板上，一边搅拌，一边利用pH计以0.1mol/L盐酸调整pH至3±0.1。 （6）将溶液倒入离心管中，6000r/min离心10min，倒掉上层液。取出沉淀干燥，并称重。 五、注意事项 离心机的使用安全：