微生物

名词解释

1.食品微生物学：是微生物学的一个重要分支学科，是随着食品科学的发展而产生的，是专门研究与食品相关的微生物种类、特点及与食品工业关系的一门学科。主要以与食品有关的微生物为研究对象，解决有微生物引起的相关食品问题，涉及的学科多、范围广且实践性强。

2 .芽孢：某些细菌在一定条件下，在细胞内形成一个圆形或椭圆形、厚壁、折光性强、含水量低、抗逆性强的休眠状态。

3. 食品腐败变质：指食品受到各种内外部因素的影响，造成其原有物理或化学性质发生改变，降低或失去其营养价值和商品价值的过程。

4. 大曲：以小麦、大麦、豌豆等为主要原料，经粉碎加水压成砖状的曲胚，依靠自然融入的各种野生菌，在一定温度或适度下进行富集和扩大营养，再经风干、储藏成为多菌种混合物。

5. 发酵：是指微生物细胞将有机物氧化释放的电子直接交给底物本身未完全氧化的某种中间产物,同时释放能量并产生各种不同的代谢产物。

6. 基因突变：是指基因组DNA分子发生的突然的、可遗传的变异现象。从分子水平上看，基因突变是指基因在结构上发生碱基对组成或排列顺序的改变。

7. 移码突变：在正常地DNA分子中，碱基缺失或增加非3地倍数，造成这位置之后的一系列编码发生移位错误的改变，这种现象称移码突变。

8. 自养：用自己制造的有机物来维持生活的营养方式，叫做自养

9. 异养：不能直接把无机物合成有机物，必须摄取现成的有机物来维持生活的营养方式，叫做异养。

10. 转化：是将外源DNA分子导入到受体细胞,使之获得新的遗传特性的一种方法

11. 转导：是利用噬菌体作为媒介,将供体菌的部分DNA转移到受体的现象

12. 营养：是人体不断从外界摄取食物，经过消化、吸收、代谢和利用食物中身体所需要的营养素来维持生命活动的全过程

13. 初级代谢：一般将微生物从外界吸收各种营养物质,通过分解代谢和合成代谢生成维持生命活动的物质和能量的过程,称为初级代谢

14. 次级代谢：是指微生物在一定的生长时期，以触及代谢产物为前体，合成一些对微生物的生命活动无明确功能的物质的过程。

简答题

1. 污染食品的微生物来源：

来自土壤、水、空气、动植物及人、用具及杂物的微生物。｛分点作答｝

2. 肉类制品里面的微生物污染的来源是什么？

a.主要是在牲畜宰杀时和宰杀后从环境中污染的；

b.在屠宰、分割、加工、储存、和肉的销售过程中的每一个环节也都会发生微生物的污染；

c.猪牛的身体本身携带污染微生物。

3. 利用霉菌制造的食品种类及主要使用的霉菌种类

酱油米曲霉、酵母菌、乳酸菌

腐乳毛霉、根霉

豆豉毛霉、曲霉、根霉、

丹贝根霉、少孢根霉、黑根霉、米根霉

4. 利用细菌制造的食品种类及主要使用的细菌种类

酸乳嗜热链球菌、德式乳杆菌保加利亚亚种共同发酵

泡菜乳酸菌、植物乳杆菌、发酵乳杆菌、肠膜明串珠菌

干酪乳酸球菌属、链球菌属、乳杆菌属、片球菌属、明串菌属、肠球菌属的种或亚种及变种，主要是乳酸菌

开菲儿乳酸菌、酵母

5.食品微生物学的研究内容：

包括与食品有关的微生物的活动规律；研究如何利用有益微生物为人类制造食品；研究如何控制有害微生物，防止食品发生腐败变质；研究检测食品中微生物的方法，制定食品中微生物指标，从而为判断食品的卫生质量提供科学依据。

6.食品微生物的研究任务：

其一是充分研究、开放和利用与食品相关的有益微生物，为人们提供更多营养丰富、健康安全的食品；其二是研究与食品腐败变质、食物中毒及食源性疾病有关的微生物生物学特性及其危害，并进行监测、预测和预报，建立食品安全生产的微生物学微生物指标和质量控制体系，一确保食品的安全性

7. 革兰染色的机制、原理：

基于细菌细胞壁特殊化学组分基础上的物理原因，经初染、媒染之后，在细胞膜或原生质体上染上了不溶于水的结晶紫与碘形成的大分子复合物，G+细菌因细胞壁厚，肽聚糖含量高，分子交联紧密，所以在用95%乙醇脱色时，肽聚糖网孔会脱水而明显收缩，壁上缝隙减少，复合物被阻留。G-细菌细胞壁薄，肽聚糖含量低，交联松散，遇乙醇后网孔不易收缩，而且类脂含量高，被乙醇溶解后会出现较大缝隙，复合物易被溶出，使细胞呈现无色，用番红等红色染料复染时，就使G-细菌获得了新的颜色——红色，而G+细菌则仍呈紫色。

8.食物腐败变质的原因、原理、条件、因素

食品腐败变质的原因有以下三个方面：

1、食品本身的组成和性质：动植物食品本身含有各种酶，在适宜的温度下酶类活性增强，使食品发生各种改变。

2、环境因素：主要有气温、气湿、紫外线和氧等。环境温度不仅可以加速食品内的化学反应过程，而且有利于微生物的生长繁殖。水分含量高的食品易于腐败变质。紫外线和氧均有加速食品组成物质氧化分解作用，特别是对油脂作用尤为明显。

3、微生物的作用：微生物本身具有能分解食品特定成分的酶，一种是细胞外酶，

可将食物中的多糖、蛋白质水解为简单的物质；另一种是细胞内酶，能将已经吸收到细胞内的简单物质进行分解，产生的代谢产物使食品具有不良气味和味道。

防止原理：杀灭细菌或抑制细菌生长，防止食品腐败两种方法：1是杀死食物中的微生物；2是抑制微生物的生长和繁殖

条件:食品所处的环境如温度、气体、湿度等与食品上微生物的生长繁殖关系极为密切,因此这些因素也直接地影响食品腐败变质的速度和程度。

因素：食品中的酶、食品的水分含量、食品的渗透压、食品的PH值、食品的完整性、温度、空气、光线

9.诱变育种的原理和方法

原理：基因突变和基因重组

方法：步骤，出发菌株经右边得到少量存活的菌株，其中多数未发生突变，少数突变的菌株中多为负变，只有少量表现为正变，且少数幅度大、并且多数不具有生产性，只有少量适于投产。｛存活率、突变率、正变率、高产率、投产率｝

出发菌株的选择----同步培养----单细胞悬液的配制----诱变处理----中间培养----分离和筛选

10.菌种的衰退原因和补救措施

原因: 1、自发突变菌种退化的主要原因是有关基因的负突变。2、通过诱变获得的高产菌株本身不纯.高产突变只发生在一个核上，随着核的分离，原来未变异的低产性状逐渐恢复。单核微生物由于高产突变只发生在一条DNA链上，也往往发生分离回复的现象。3、培养、保藏条件可以通过对自发突变率的影响来表现，也可在不改变基因现的情况下表。

补救措施：合理的育种、选用合适的培养基、创造良好的培养条件、采用有效的菌种保藏方法等可以有效的防止菌种的退化。

11. 如何调控微生物的发酵

A.可通过对发酵工艺条件的控制，人为的改变发酵产物的生长；b.可通过控制细胞膜的渗透性，解决终产物的反馈调节作用，增加发酵的产量；c.可改变微生物的遗传特性，影响细胞原有的代谢调节机制，进而可以解除终产物的抑制和反馈阻遏作用或使细胞内的调节酶不受过量的终产物的反馈阻遏，从而提高发酵产量。

12.环境因素对微生物生长的影响

A.温度具体表现在：影响酶活性；影响细胞膜的流动性；影响物质的溶解度，从而影响细胞对营养的吸收或代谢产物的分泌，最终影响微生物的生长；影响细胞内大分子物质的活性。

B.环境气体成分氧气、二氧化碳

C.PH值改变会影响微生物代谢反应中各种酶的活性，从而影响酶促反

应速率及代谢途径；

D.水分活度环境缺水会引起微生物细胞内蛋白质的变性和盐类浓度的增高，抑制微生物的生长，甚至造成微生物的死亡；

E.渗透压高渗溶液会发生质壁分离现象，微生物细胞代谢受抑制甚至导致死亡；低渗溶液中细胞回吸水，易膨胀破裂而死亡；

还有辐射和超声波都有一定的影响。

13.微生物与生物环境间的关系

A.互生指两种生物可单独生活，当它们在一起时，通过各自的代谢活动而有利于对方，或偏利于一方的生活方式；

B.共生两种生物共居住在一起，相互分工合作、相依为命，甚至达到难分难舍、合二为一；

C.寄生小生物生活在较大型生物的体内或体表，从中夺取营养并进行生长繁殖，使后者损坏或死亡；

D.拮抗某种生物所产生的特定的带i邪恶产物可抑制他种生物的生长发育甚至杀死他们的一种关系；

E.捕食大型生物直接捕捉、吞食一种小型生物以满足其营养需要的相互关系。

论述题

1. 微生物引起食品腐败变质的条件是什么？怎样利用这些条件来实现食品的促藏加工？

只要温度适宜，微生物就会生长繁殖，分解食物中的营养素，以满足自身需要。其次还有适度、酸碱度都有一定影响。天气热温度高，食物中的细菌繁殖快，变质也快；跟空气接触，被氧化，加速变质放进冰箱要保存食品不变质就要把一些容易变质的食品放到冰箱里面，其他比较干燥的食品就要放在阴凉通风的地方，在低温下变质也慢了；可以把食物腌制、风干、或放进真空袋中，这样也能延长保质期。

2.。简述单细胞生物典型生长曲线的划分及各阶段的特点。

典型的微生物生长曲线包括四个时期：调整期、对数期、稳定期、衰亡期。

调整期：微生物进入新的生长环境后，对环境的适应阶段；

对数期：也叫对数生长期，微生物适应了环境后，开始高速分裂繁殖，并在一定时间内维持该繁殖速率；

稳定期：随着营养物质的消耗，代谢产物的积累、pH值的变化等因素影响，微生物繁殖速率下降，数量保持相对稳定；

衰亡期：环境对微生物继续生长越来越不利、细胞的分解代谢大于合成代谢、继而导致大量细胞死亡。

常见的微生物检测方法

常见的微生物检测 方法

摘要：微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义，本文分生长量测定法，微生物计数法，生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量，体积，大小，生理代谢物等指标的二十余种常见的检测方法，简要介绍了这些方法的原理，应用范围和优缺点。 概述： 一个微生物细胞在合适的外界条件下，不断的吸收营养物质，并按自己的代谢方式进行新陈代谢。如果同化作用的速度超过了异化作用，则其原生质的总量（重量，体积，大小）就不断增加，于是出现了个体的生长现象。如果这是一种平衡生长，即各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，从而引起个体数目的增加，这时，原有的个体已经发展成一个群体。随着群体中各个个体的进一步生长，就引起了这一群体的生长，这可从其体积、重量、密度或浓度作指标来衡量。微生物的生长不同于其它生物的生长，微生物的个体生长在科研上有一定困难，一般情况下也没有实际意义。微生物是以量取胜的，因此，微生物的生长一般指群体的扩增。微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标，同

时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病，霉腐微生物的防治都和她们的生长抑制紧密相关。因此有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法。既然生长意味着原生质含量的增加，因此测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，能够从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。 生长量测定法 体积测量法：又称测菌丝浓度法。 经过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。 称干重法：

微生物标准操作流程

目录 生物安全柜操作规程及维护 (3) 实验室高压蒸气灭菌器操作程序 (6) 物体表面细菌监测 (8) 医护人员手指细菌监测 (9) 空气中细菌含量的监测 (10) 环境卫生学监测质控标准 (12) 使用中消毒剂与无菌物品保存液的质控程序 (13) 一次性医疗用品微生物监测 (14) 紫外线消毒质量控制程序 (15) 污水的细菌监测(总大肠菌群) (16) 正确洗手的手法 (18)

生物安全柜操作规程及维护 1.目的： 为了满足生物安全操作的要求，并且达到在操作时保护操作人员的目的，使细菌操作达到无菌操作的要求，便于操作的标准化。 2.原理： 通过使用空气超高过滤器（ULPA）的过滤，使仪器内部的空气洁净度达到100级，使细菌的一般操作限制在一个相对密闭的环境中，不但保护操作人员，还可满足操作的标准化。 3.工作条件： 环境温度：18－30℃相对湿度：<80% 安装的环境必须达到一定的洁净度；远离人员通道及有潜在干扰气流的位置；柜后及两侧各留30cm的空隙，顶部30-35cm空隙。 环境必须有良好的通风设备。 4、操作步骤： 生物安全柜的设置已经设置完全，如果需要重新设置请参看HFsafe生物安全柜使用说明。具体操作步骤为： 4.1将电源插头插入准备好的固定插座，连通电源。 4.2有系统管理员(即本室负责人)开启玻璃门门锁，并将总开关置于开位置“！”，此时系统开始上电。 4.3检查显示及按钮的各项功能，具体见后附注（注意：UV灯的测试除外，开启UV灯时必须将前玻璃门关闭）。 4.4当系统稳定后，对设备进行安全性检查。（检查项目包括：工作室平均垂直风速；工作室内可操作区域洁净度达到100级；设备的密封有没有被破坏。所有的安全检查项目中的洁净度建议由当地卫生防疫部门来进行尘埃粒子数、沉降菌和菌落数的检测，看是否符合其工作室的洁净度要求）。 4.5如果安全性测试通过，系统已经可以使用，请在《使用记录》上写下相应的信息。在使用时需要注意的是，操作必须在工作台板无孔区域进行，物品也必须放置于无孔区域。 4.6操作者应先把手臂放进安全柜内大约1分钟，以使柜子适应并且让气流扫过手臂手臂移入移出柜内应保持前门气流的连续性，应缓缓移入移出，并且方向和前门垂直；为使跨越前门的动作量降低，在实验开始前应把所需的物品放入柜子；柜子在开始工作前以及完成后至少要运行5分钟是，使柜子净化，以便于污染空气从柜内排出。实验操作方向应从清洁区到污染区，一般要求为左→右。 4.7 当工作完成后需要关机前，将试验使用的所有材料和其他物品从设备中取出。

大学校园空气微生物污染调查

大学校园空气微生物污染调查 了解校园四季空气中微生物含量变化趋势与污染情况。方法采用撞击式采样器，在人员负荷最重、活动最频繁时，对某大学校园空气中细菌粒子和霉菌粒子含量进行检测。结果校园空气微生物含量在季节间有很大不同，细菌含量在夏季最高，霉菌含量高峰在夏秋两季。细菌浓度比较高的功能区有道路、寝室、食堂、超市、体育馆、微机室和教室。可吸入霉菌粒子占霉菌粒子总数的比例高于细菌粒子。结论校园空气微生物含量在多种因素的综合影响下，季节间和不同功能区之间均表现出明显的差异，存在一过性污染情况。 空气中的微生物往往吸附在颗粒物上形成生物粒子，随风飘荡，其中小粒径的生物粒子在疾病传播方面具有更大意义。研究表明，空气中微生物数量的多少与环境、清洁卫生状况、人员密度和活动情况、空气流通程度等因素有关[1，2]。高校校园是师生集中生活和学习的地方，普遍存在空气微生物污染问题[3，4]。加强对高校校园空气微生物的监测，对于了解校园卫生状况，加强环境卫生管理有着非常重要的参考意义。采用空气中生物粒子数(菌落总数，cfu)这一指示微生物指标对校园主要功能区空气质量进行生物学评价。 1.材料与方法 1.1 校园概况沈阳市内某高校，2001年新迁校址，主要建筑物距离城市南北向主干道约150～1000m。 1.2采样为全面反映校园内师生主要活动区域空气微生物状况，按功能不同将校园分成12个不同的功能区，即操场、道路、绿地、食堂、宿舍、教室、图书馆、微机室、实验室、超市、体育馆和办公室。参照《公共场所卫生监测技术规范》(GB/T 17220-1998)，共设采样点126个。于2008-12，2009-03、2009-06、2009-09采样，分别代表冬、春、夏和秋四季，在各功能区人员负荷最重、活动最频繁时采样。参照《公共场所空气微生物检验方法》(GB/T18204.1-2000)，采用撞击式采样。JWL-2型采样器有上、下两级，上级收集粒径 及以上的微生物粒子，下面级收集以下粒径的可吸入微生物粒子。采样高度为1.2～1.5m，采样时间1min，采样流量28.3L/min。细菌在37℃培养48h，霉菌在26℃培养72h 后，分别计数两级采样皿中的细菌菌落数和霉菌菌落数(cfu)，也即捕获在采样皿中的空气细菌粒子数和霉菌粒子数。全年共采样2016份。 1.3培养基营养琼脂培养基和高盐查氏培养基购自北京奥博星生物技术有限责任公司。按使用说明配置、灭菌。使用Φ9cm平皿，每平皿倾注20ml培养基，冷却备用。 1.4主要仪器JWL-2 两级筛孔型撞击式空气微生物采样器，北京检测仪器有限公司；DXC-280B型不锈钢手提式灭菌器，上海申安医疗器械厂；YLN-30A菌落计数器，北京市亚力恩机电技术研究所；SHP-250型生化培养箱和MJP-250型霉菌培养箱，上海精宏实验设备有限公司；DB-4A控温电热板，金坛市天竟实验仪器厂，环境温度在零度以下采样时使用。 1.5 统计分析菌落计数后，按照公式n=N×1000/(Q×t)计算受检空气中微生物含量。式中：N—平皿菌落计数，个；Q—空气流量，L/min；t—采样时间，min。 1.6质量评价我国《室内空气质量标准》(GB/T18883-2002)规定，室内细菌菌落总数≤2500cfu/m3为合格。 2.结果 2.1空气中细菌粒子浓度及其变化趋势结果见表1，图1。 由表2可见，同样在冬季，室外空气中霉菌粒子含量明显低于其它三个季节，而在室内

微生物计数方法

微生物的显微直接计数法 一、实验目的 了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法，掌握显微镜下直接计数的技能。 二、实验原理 测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用的有显微直接计数法和平板计数法。 显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区（图21-1），计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。 计数区边长为1mm，则计数区的面积为l mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。 使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。 已知：1mm3体积=10 mm×10 mm×10 mm= 1000mm3 所以：1mm3体积应含有小方格数为1000mm3/1/4000mm3=4×106个小方格，即系数K=4×106。 因此：每ml菌悬液中含有细胞数= 每个小格中细胞平均数（N）×系数（K）×菌液稀释倍数（d） 三、实验器材 1．活材料：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）斜面或培养液。 2．器材：显微镜、血球计数板、盖玻片（22mm×22mm）、吸水纸、计数器、滴管、擦镜纸。 四、实验方法 1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释到10-2），以每小格的菌数可数为度。 2．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。 3．将酵母菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上，不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高。然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。4．静置片刻，将血球计数板置载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。 5．计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数。如果是25个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央l个大方格的菌数（即80个小格）。如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。

微生物检测流程

食品微生物检测标准 受控状态： 文件编号：H-XM-PGZY-10 颁发部门：品管部 接收部门：品管部 发布日期：// 实施日期：//

更改记录

微生物检测目录

食品接触面微生物检测 一、目的： 检测生产车间空气、操作人员手部、与食品有直接接触面的机械设备的微生物指标，生产区域环境当中病原微生物的监控，达到规定标准，以控制食品成品的质量。 二、范围： 标准适用于盘锦兴牧肉联加工集团有限公司食品接触面微生物的检测。 三、采样与检测方法： 3.1、空气微生物采样（自然沉降法） 3.1.1、采样布点要求 (1)室内面积不足50m2的设置3个采样点，50m2以上的设置5个采样点。（2）采样点按均匀布点原则布置，室内3个采样点的设置在室内对角线四等分的3个灯分点上，5个采样点的按梅花布点。 （3）采样点距离地面高度1.2m-1.5m,距离墙壁不小于1m。 （4）采样点应避开通风口、通风道等。 （2）采样方法 采样时，将含平板计数琼脂培养基的平板(直径9 cm)置采样点并避开空调、门窗等空气流通处，打开平皿盖，使平板在空气中暴露5min(静态)，送检时间不得超过6h，若样品保存于0～4℃条件时，送检时间不得超过24h。 3.1.2、菌落培养： （1）将已采集样品的培养基在6 h内送实验室，细菌总数于37℃±1℃培养

48h观察结果，计数平板上细菌菌落数。 （3）菌落计算： a) 记录平均菌落数，用“个/皿”来报告结果。用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，不可遗漏。 b) 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2 个或2 个以上菌落计数。 c)计数每块平板上生长的菌落数，求出全部采样点的平均菌落数，检验 结果以每平皿菌落数（CFU/皿） 3.2、车间设备、工器具（作业前/后）表面采样与检测方法： 3.2.1、样品采集范围： a)在设备、工器具加工前/后进行擦拭检验，以便了解车间卫生清扫消毒情况。 b)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间可疑处进行擦拭，如有检验不合格点，整改后再进行擦拭检验。 c)对工作表面消毒产生怀疑时，进行擦拭检验。 d)正常生产状态的擦拭，每周一次。 3.2.2、采样方法： 用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面取25 cm2的面积，在其内涂抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管待检。 3.3、车间工人手、手套（作业前、后）采样及检测方法 3.3.1、样品采样范围：各班组在线工人生产前/后手、手套进行抽检。

K-e湍流模型

K是紊流脉动动能（J）, &是紊流脉动动能的耗散率（% ） K越大表明湍流脉动长度和时间尺度越大，￡越大意味着湍流脉动长度和时间 尺度越小，它们是两个量制约着湍流脉动。 但是由于湍流脉动的尺度范围很大，计算的实际问题可能并不会如上所说的那样存在一个确切的正比和反比的关系。在多尺度湍流模式中，湍流由各种尺度的涡动结构组成，大涡携带并传递能量，小涡则将能量耗散为内能。 在入口界面上设置的K 和湍动能尺度对计算的结果影响大， 至于k 是怎么设定see fluent manual "turbulence modelling" 作一个简单的平板间充分发展的湍流流动， 基于k-e 模型。 确定压力梯度有两种方案，一是给定压力梯度，二是对速度采用周期边界条 件，压力不管！ k-epsiloi n 湍流模型参数设置：k —动能能量；epsilo n —耗散率； 在运用两方程湍流模型时这个k 值是怎么设置的呢？epsilon 可以这样计算吗？Mepsilo n = Cu*k*k/Vt% 这些在软件里有详细介绍。陶的书中有类似的处理，假定了进口的湍流雷诺 数。 fluent 帮助里说，用给出的公式计算就行。 k—e 模型的收敛问题！ 应用k—e 模型计算圆筒内湍流流动时，网格比较粗的时计算结果能收敛，但是当网格比较密的时候，湍流好散率就只能收敛到10 的—2 次方，请问大侠有没有解决的办法？ 用粗网格的结果做初场网格加密不是根本原因，更本的原因是在加密过程中，部分网格质量差注意改进网格质量，应该就会好转. 在求解标准k-e 双方程湍流模型时（采用涡粘假设，求湍流粘性系数，然后 和N—S 方程耦

微生物大小与数量的测定实验报告

山东大学实验报告2017年11月27日 ________________________________________ _________________________ 科目：微生物学实验题目：微生物大小与数量的测定姓名：丁志康 一、目的要求 1.学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法。 2.增强微生物细胞大小的感性认识。 3. 明确血细胞计数板计数的原理。 4. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。 二、基本原理 一）微生物大小的测定 1.微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物 大小的测定，需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具——测微尺，包括目镜测 微尺和镜台测微尺。 2.镜台测微尺是中央部分可有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格每 格长0.01mm（即10μm）。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于 矫正目镜测微尺每格的相对长度。 3.目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，有 等分为50小格和100小格两种。测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以 测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大 倍数不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也不一样。因此，用目镜测微尺 测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定大放 大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。然后根据微生物 细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。 4.球菌用直径来表示其大小；杆菌则用宽和长的范围来表示。如金黄色葡萄球菌直 径约为0.8μm，枯草芽孢杆菌大小为0.7~0.8×2~3μm。 二）微生物数量的测定 1.微生物数量的测定有多种方法，本次试验中使用显微镜直接计数法。显微镜直接 计数法是将少量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻 片上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。目前 国内外常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley 计菌器等，它们都可用于酵母、细菌、霉菌孢子等悬液的计数，基本原理相同。 后两种计菌器由于盖上盖玻片后，总容积为0.02mm3，而且盖玻片和载波片之间 的距离只有0.02mm，因此可用油浸物镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。（除 了用这些计菌器外，还有在显微镜下直接观察涂片面积与视野面积之比的估算法， 此法一般用于牛乳的细菌学检查。)显微镜直接计数法的优点是直观、快速、操

几种湍流模型

解决湍流的模型总计就是那几个方程，Flue nt又从工程和数值的角度进行了整理，下面就是这些湍流模型的详细说明。 FLUENT提供了以下湍流模型： ?Spalart-Allmaras 模型 ?k-e模型 —标准k-e模型 —Ren ormalizatio n-group （RNG^e 模型 —带旋流修正k-e模型 ?k-3模型 —标准k- 3模型 —压力修正k- 3模型雷诺兹压力模型大漩涡模拟模型 几个湍流模型的比较： 从计算的角度看Spalart-Allmaras模型在FLUENT中是最经济的湍流模型，虽然只有一种方程可以解。由于要解额外的方程，标准ke模型比Spalart-Allmaras模型耗费更多的计算机资 源。带旋流修正的k-e模型比标准ke模型稍微多一点。由于控制方程中额外的功能和非线性，RN&七模型比标准k-e模型多消耗10?15%的CPU时间。就像k七模型，k-3模型也是两个方程的模型，所以计算时间相同。 比较一下k◎莫型和k-3模型，RSM模型因为考虑了雷诺压力而需要更多的CPU时间。然而高效的程序大大的节约了CPU时间。RSM模型比k-e模型和k-3模型要多耗费50?60%的CPU 时间，还有15?20%的内存。 除了时间，湍流模型的选择也影响FLUENT勺计算。比如标准k-e模型是专为轻微的扩散 设计的，然而RNGk-e模型是为高张力引起的湍流粘度降低而设计的。这就是RNG莫型的缺点。同样的，RSM模型需要比k-e模型和k-3模型更多的时间因为它要联合雷诺压力和层流。 概念：1?雷诺平均：在雷诺平均中，在瞬态N-S方程中要求的变量已经分解为时均常量和变量。 相似的，像压力和其它的标量 ；（10.2-2） i「 这里??表示一个标量如压力，动能，或粒子浓度。 2. Boussinesq逼近从雷诺压力转化模型：禾U用Bouss in esq假设把雷诺压力和平均速度梯度 联系起来： +茁飞（肚+川亦）也（10 2-O） Boussinesq假设使用在Spalart-Allmaras模型、k-e模型和k- 3模型中。这种逼近方法好处是对计算机的要求不高。在Spalart-Allmaras模型中只有一个额外的方程要解。k-e模型和k-3模型 中又两个方程要解。Bouss inesq假设的不足之处是假设u t是个等方性标量，这是不严格的。

空气中微生物检测

空气中微生物检测 空气中微生物的检测 1。实验目的 本实验中使用的灭菌培养皿在空气中取样并培养一段时间以测定空气中的微生物。其实验意义在于: (1)了解空气中微生物的分布 (2)比较了普通实验室和无菌室空气中存在的微生物的数量和类型 (3)验证微生物实验中无菌操作的重要性二。实验原理 空气是人类维持正常活动的物质条件，与人类健康有着非常密切的关系。随着社会进入信息时代，空气微生物的采样和检测也得到了迅速发展。已经开发了各种快速、灵敏、特异和高度自动化的仪器。为了保持高质量的空气环境，应该使用正确和先进的空气监测方法。在我们周围环境中有大量的微生物空气也不例外。尽管空气不是微生物的良好栖息地然而，由于气流、灰尘和水滴的流动、人类和动物活动等原因，仍然存在相当数量的微生物。 中空气微生物的采集方法很多，主要采用空气微生物采样器采样监测，自然沉降采样法采样。本文介绍了各种采样方法的性能，以便正确选择各种采样方法。空气微生物采样主要涉及四个方面:采样器、采样介质、采样方法和检测程度。空气微生物采样器主要包括:冲击采样器、过滤空气采样器、离心空气采样器、旋风采样器、静电沉降采样器等 当空气中的单个微生物落在适合其生长和繁殖的固体培养基表面

时，在适当温度下培养一段时间后，每个分散的菌体或孢子将形成一个肉眼可见的细胞群体或菌落。通过观察不同大小和形状的菌落，可以大致识别空气中存在的微生物类型。本实验通过检测普通实验室和无菌间空气中存在的微生物，来判断无菌间的消毒效果，了解空气中常见的微生物群。三。实验装置和仪器 1。实验仪器 (1)无菌板，组数(2)酒精灯，恒温箱数×1 (3)，数量×2 (4)高压釜(5)干热灭菌器(6)冰箱 (7)板(直径9厘米)(8)量筒(9)烧瓶(10)酸度计2。实验所需试剂 (1)蛋白胨，量10g (2)牛肉膏，量3g (3)氯化钠5g (4)琼脂15-20g (5)蒸馏水1000毫升 4，实验步骤 1。琼脂培养基制备方法:将蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂和蒸馏水混合，加热溶解 ，调至7.4，过滤分装，高压灭菌121℃和20min，用自然沉降法测定时，将约15mL倒入灭菌板中，制成营养琼脂板2.倒置板:培养基按常规方法制备，分成三角瓶，高压灭菌备用使用 前，将培养基融化，冷却至50℃左右，倒入几个盘子备用。 3。检测:首先打开无菌室内的紫外线灯，照射15分钟后关闭。打开上面浓缩了 的无菌平板的皿盖，将皿盖暴露在无菌室空间和普通实验室空间中，分别不移动5min和30min后盖上皿盖每个培养基的平板要求在每个

微生物题库(周德庆完整版)考研必备

微生物学试题库 微生物学试题（一） 一、写出下列名词解释的中文翻译及作出解释 1.Gram positive bacteria 2.parasporal crystal 3 ,colony 4, life cycle 5,capsule6,endospore 二、简答题 1，试述微生物与当代人类实践的重要关系？ 2，简述革兰氏染色的机制？ 3.微生物有哪五大共性？其中最基本的是哪一个？为什么？ 三、填空(每空1分,共15分) 1.真核微生物核糖体类型为 _______ 。 2.大肠杆菌长为2.0μm,宽为0.5μm,其大小表示为_____ 。 3.研究细菌遗传、代谢性能常采用_____ 时期的细胞。 4.酵母菌细胞壁的主要成份_____和_______。 5.侵染寄主细胞后暂不引起细胞裂解的噬菌体称________ 。 6.微生物细胞的主要组成元素是______，_____，_______和_______。 7.食用菌是由 ______和 ____ 组成。 8.用物理或化学方法杀死物品上大部分微生物的过程称 ______ 。 9.细菌细胞的碳、氮营养比为______。 10.根瘤菌可与_________共生固氮 四、学名互译 1.A.niger 2.B.subtilis 3. B.thuringiensis 4. A.oryzae 微生物学试题（一）答案： 一，1，革兰氏阳性菌：细菌经革兰氏染色染色后最终染成紫色的菌 2，伴胞晶体：少数芽孢杆菌，在形成芽孢的同时，会在芽孢旁形成一颗菱形，方形，或不规则形的碱溶性蛋白质晶体称为半胞晶体 3，菌落：当单个细菌细胞或者一小堆同种细胞接种到固体培养基表面，当它占有一定的发展空间并处于适宜的培养条件下时，该细胞就会迅速生长繁殖并形成细胞堆，此即菌落。4，生命周期：指的是上一代生物个体经过一系列的生长，发育阶段而产生下一代个体的全部过程。 5，荚膜：包被于某些细菌细胞壁外的一层厚度不定的透明胶状物质 6，芽孢：某些细菌在其生长发育的后期，在细胞内形成的一个圆形或椭圆形，厚壁，含水量低，抗逆性强的休眠构造。 二，1，①在微生物与工业发展的关系上，通过食品罐藏防腐，酿造技术的改造，纯种厌氧发酵的建立，液体深层通气搅拌大规模培养技术的创建以及代谢调控发酵技术的发明，使得古老的酿造技术迅速发展成工业发酵新技术； ②微生物在当代农业生产中具有十分显著的作用，例如，以菌治害虫和以菌治植病的生物防治技术；以菌增肥效和以菌促生长的微生物增产技术；以菌做饲料和以菌当蔬菜的单细胞蛋白和食用菌生产技术；以及以菌产沼气等生物能源技术。 ③微生物与环境保护的关系越来越受到当代全人类广泛的重视。微生物是占地球面积70%以上的海洋和其他水体中光合生产力的基础；是一切食物链的重要环节；是污水处理中的关键角色；是生态农业中最重要的一环；是自然界重要元素循环的首要推动者；以及是环境污染和监测的重要指示生物；等等。 ④微生物与在食品上的应用。调味品，发酵食品，酸乳，蔬菜加工。 ⑤微生物在医药方面的应用。抗菌素，维生素。 ⑥微生物在能源生产方面也有重要的作用。2，G+细菌由于其细胞壁较厚，肽聚糖网层次多和交联致密，故遇脱色剂乙醇处理时，因失水而使得网孔缩小再加上它不含类脂，故乙醇的处理不会溶出缝隙，因此能把结晶紫和碘的复合物牢牢留在壁内，使得其保持紫色。反之，革兰氏阴性细菌因其细胞壁较薄，外膜层内酯含量高，肽聚糖层薄和交联度差，遇脱色剂乙醇后，以类脂为主的外膜迅速溶解，这时薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘的复合物的溶出，因此细胞退成无色。这时，再经沙黄等红色燃料复染，就使革兰氏阴性细菌呈现红色。而革兰氏阳性细菌则保留最初的紫色。3. 微生物的五大共性：（一）体积小，面积大 （二）吸收多，转化快 （三）生长旺，繁殖快 （四）适应强，易变异 （五）分布广，种类多 其中最基本的是微生物的多样性，原因是：微生物因其体积小，重量轻和数量多等原因，可以到处传播以至达到“无孔不入”的地步。不论在动，植物体内外，还是土壤，河流，空气，平原，高山，深海，污水，垃圾，海底淤泥，冰川，盐湖，沙漠，甚至油井，酸性矿水和岩层下，都有大量与其相适应的各类微生物在活动着。 三．填空 1. 80S 2. 0.5μm x2.0μm3对数生长 4.葡聚糖和甘露聚糖。 5.温和噬菌体6蛋白质，核酸，类脂和碳水化合物 7. 营养菌丝,生殖菌丝豆科植物共生固氮 8 灭菌。9. 6/1 10.豆科植物 四．1.黑曲霉 2. 枯草芽孢杆菌 3. 苏云金芽孢杆菌4. 米曲霉 微生物学试题（二） 是非题（共10分。只需注明“对”或“错”） 1.大多数嗜热菌的G-C含量高于中温菌。 2.大肠杆菌属低等原核生物，所以其遗传物质只是一条松散的环状双链DNA，不存在DNA高级结构。 3.当菌体生长、氧吸收和糖利用的比速度下降时，青霉素的合成达到最高值。 4.初生F’菌株和次生F’菌株都属于部分二倍体。 5.分批培养时，细菌首先经历一个适应期，此期间细胞处于代谢活动的低潮，所以细胞数目并不增加。 6.渗透酶( permease)属于诱导酶，而其它种类的酶往往属于组成酶。 7.恒化培养与恒浊培养的区别在于前者的培养物群体始终处于对数生长期。 8.将HR病毒的外壳蛋白与TMV病毒的RNA混合，去感染烟草，则会出现TMV型病灶。若在感染前，用TMV抗体处理，则会钝化病毒，不出现TMV型病灶。 9.霉菌的基因重组常发生于准性生殖时，较少出现在有性生殖过程中。 10.营养物跨膜的主动运输必需依靠载体和能量，而被动扩散不需要载体和能量。 二填充题（30分） 1 突变率10-10表示_ _ _ _ a_ _ _ 。 2 我们常采用_ _ a_ _ _ 浓度的NaCl 或0.1M_ _ _ b_ _ _ 来稀释菌液或清洗菌体细胞。因为_ _ c_ _ _ 。 3 在有机物为基质的生物氧化反应中，以氧为电子传递最终受体的方式称_ _ _ _ a_ _ _ _ ；以无机氧化物为最终电子受体的称_ _ b_ _ ；以有机物为最终电子受体的称_ _ _ _ c_ _ _ _ 。 4 常见的菌种保藏方法有_ _ _ _ a_ _ _ _ 、_ _ _ b_ _ _ 和_ _ _ c_ _ _ 等，其中_ _ _ d_ _ 方法保藏菌种的时间最长久。

空气细菌总数的测定

空气细菌总数的测定 一、实验原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。 任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。 高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下，可以彻底高效杀死各种细菌及其高度耐热的原理。 空气是人类赖以生存的必须环境，也是微生物借以扩散的媒介。空气中存在着细菌、真菌、病毒、放线菌等多种微生物粒子，这些微生物粒子是空气污染物的重要组成部分。空气微生物主要来自于地面及实施、人和动物的蹑手呼吸道、皮肤和毛发等，它附着在空气气溶胶细小颗粒物表面，可较长时间停留在空气中。某些微生物还可以随着空气中细小颗粒穿过人体肺癌存留在肺的深处，给身体健康带来严重危害，也可以随着空气中细小颗粒物被输送到较远地区，给人体带来许多传染性的疾病和上呼吸道疾病。因此，空气微生物含量多少可以反映所在区域的空气质量，是空气环境污染的一个重要参数评价空气的清洁程度，需要测定空气中的微生物数量和空气污染微生物。 ----测定方法--平皿沉降法 二、测定原理 空气中飘浮着各种微生物，将盛有无菌培养基的平皿放于监测点上，暴露5min，空气中的细菌便会落到培养基上，然后在37°C恒温箱中培养24h，计数每个平皿表面的菌落数，由于一个菌落由一个细菌繁殖而来，菌落总数便可认为是细菌总数。 三、试剂 营养琼脂 1、成分 A蛋白胨 1g B牛肉膏 0.3g

微生物大小测定

微生物的大小测定 胡雪芳 201300261033 【实验目的】 1.了解显微镜测定微生物大小的原理。 2.学习并掌握显微镜下测定微生物细胞大小的技术，包括目镜测微 尺、镜台测微尺的校正技术与测定细胞大小的技术。 【实验原理】 微生物细胞的大小，是微生物重要的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。由于菌体很小、只能在显微镜下来测量。用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。 1.目镜测微尺 目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10 mm长度刻成100等分（如图1所示）。 图1 目镜测微尺 测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校

正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。 2.镜台测微尺 镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将lmm等分为100格，每格长l0μm（即0.0lmm），是专门用来校正目镜测微尺的（如图2所示）。 图2 镜台测微尺 校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。 【实验材料】 1.菌株 酵母菌液， 枯草芽孢杆菌斜面培养物

微生物制药的一般工艺流程

微生物制药的一般工艺流程 微生物制药技术 工业微生物技术是可持续发展的一个重要支撑，是解决资源危机、生态环境危机和改造传统产业的根本技术依托。工业微生物的发展使现代生物技术渗透到包括医药、农业、能源、化工、环保等几乎所有的工业领域，并扮演着重要角色。欧美日等国已不同程度地制定了今后几十年内用生物过程取代化学过程的战略计划，可以看出工业微生物技术在未来社会发展过程中重要地位。 微生物制药技术是工业微生物技术的最主要组成部分。微生物药物的利用是从人们熟知的抗生素开始的，抗生素一般定义为：是一种在低浓度下有选择地抑制或影响其他生物机能的微生物产物及其衍生物。(有人曾建议将动植物来源的具有同样生理活性的这类物质如鱼素、蒜素、黄连素等也归于抗生素的范畴，但多数学者认为传统概念的抗生素仍应只限于微生物的次级代谢产物。)近年来，由于基础生命科学的发展和各种新的生物技术的应用，报道的微生物产生的除了抗感染、抗肿瘤以外的其他生物活性物质日益增多，如特异性的酶抑制剂、免疫调节剂、受体拮抗剂和抗氧化剂等，其活性已超出了抑制某些微生物生命活动的范围。但这些物质均为微生物次级代谢产物，其在生物合成机制、筛选研究程序及生产工艺等方面和抗生素都有共同的特

点，但把它们通称为抗生素显然是不恰当的，于是不少学者就把微生物产生的这些具有生理活性（或称药理活性）的次级代谢产物统称为微生物药物。微生物药物的生产技术就是微生物制药技术。可以认为包括五个方面的内容： 第一方面菌种的获得 根据资料直接向有科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏部门索取或购买；从大自然中分离筛选新的微生物菌种。 分离思路新菌种的分离是要从混杂的各类微生物中依照生产的要求、菌种的特性，采用各种筛选方法，快速、准确地把所需要的菌种挑选出来。实验室或生产用菌种若不慎污染了杂菌，也必须重新进行分离纯化。具体分离操作从以下几个方面展开。 定方案：首先要查阅资料，了解所需菌种的生长培养特性。 采样：有针对性地采集样品。 增殖：人为地通过控制养分或培条件，使所需菌种增殖培养后，在数量上占优势。

微生物大小的测定及微生物数量的直接计数法

微生物大小的测定及微生物数量的直接计数法摘要：本文使用了目镜测微尺和镜台测微尺来测量野生酵母的细胞大小，得到的结果是宽在5.78~11之间，长在8.25~20之间。然后用血细胞计数板对酵母菌进行计数，并绘制其生长曲线，有四个时期，分别是延滞期、对数期、稳定期和衰亡期。 关键词：细胞大小血细胞计数板酵母菌生长曲线 前言 生产生活中利用微生物时，需要了解微生物的一些基本物理属性，如菌体的大小形状等。本实验利用显微测微尺对野生酵母进行测量，并用血球计数板对酵母菌进行其生长曲线的测定，了解去生长规律。通过此综合性实验加深对无菌操作的印象，并将其掌握。 1实验材料与仪器 1．1实验材料与试剂 麦芽汁培养基、生理盐水、果汁（自制）、活化的酵母菌、酒精 1．2实验仪器 锥形瓶、试管、接种环、移液枪、显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、盖玻片、载玻片、滴管、血细胞计数板、吸水纸、酒精灯 2实验方法 2．1预准备 2.1.1培养基的制备 麦芽汁培养基（130.1g/L）200ml*4瓶 麦芽汁琼脂培养基（145.1g/L）5ml*2支试管150ml*1瓶 生理盐水9ml*20支 （制备后高压蒸汽灭菌121℃，20min） 2.1.2酵母分离纯化 平板划线分离：先倒制无菌琼脂培养基平板,待充分冷却凝固后,用接种环以无菌沾取少量待分离的含菌样品,在无菌琼脂平板表面进行有规则的划线。划线的方式有连续划线、平行划线、扇形划线或其它形式的划线。通过这样在平板上进行划线稀释, 微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少, 并逐步分散开

来。经培养后,可在平板表面形成分散的单 个菌落。但单个菌落并不一定是由单个细 胞形成的，需再重复划线1-2次, 并结合显 微镜检测个体形态特征, 才可获得真正的 纯培养物。 斜面接种是从已生长好的菌种斜面上 挑取少量菌种移植至另一支新鲜斜面培养基上的一种接种方法。具体操作如下：接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓名等。贴在距试管口约2-3cm的位置。点燃酒精灯。用接种环将少许菌种移接到贴好标签的试管斜面上。操作必须按无菌操作法进行。 简述如下：1)手持试管：将菌种和待接斜面的两支试管用大拇指和其他四指握在左手中，使中指位于两试管之间部位。斜面面向操作者，并使它们位于水平位置。2)旋松管塞：先用有于松动棉塞或塑料管盖，以便接种时拔出。3)取接种环：右手拿接种环(如握钢笔一样)，在火焰上将环端灼烧灭菌。然后将有可能伸入试管的其余部分均灼烧灭菌，重复此操作，再灼烧一次。4)拔管塞：用右手的无名指、小指和手掌边先后取下菌种管和待接试管的管塞，然后让试管口缓缓过火灭菌(切勿烧得过烫)。5)接种环冷却：将灼烧过的接种环伸入菌种管，先使环接触没有长菌的培养基部分，使其冷却。6)取菌：待接种环冷却后，轻轻沾取少量菌体或胞子，然后将接种环移出菌种管，注意不要使接种环的部分碰到管壁，取出后不可使带菌接种环通过火焰。7)接种：在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。从斜面培养基的底部向上部作“Z”形来回密集划线，切勿划破培养基。有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央拉一条直线作斜面接种，直线接种可观察不同菌种的生长特点。8)塞管塞：取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将管塞旋上。塞棉塞时不要用试管去迎棉塞，以免试管在移动时纳入不洁空气。9)将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。

空气中微生物检测1

一、空气中微生物的检测 一、实验目的 1了解空气中微生物的分布状况，学习空气采样方法 2掌握空气中微生物的检测方法 二实验原理 空气是人类赖以生存的必须环境，也是微生物借以扩散的媒介。空气中存在着细菌、真菌、病毒、放线菌等多种微生物粒子，这些微生物粒子是空气污染物的重要组成部分。空气微生物主要来自于地面及实施、人和动物的蹑手呼吸道、皮肤和毛发等，它附着在空气气溶胶细小颗粒物表面，可较长时间停留在空气中。某些微生物还可以随着空气中细小颗粒穿过人体肺癌存留在肺的深处，给身体健康带来严重危害，也可以随着空气中细小颗粒物被输送到较远地区，给人体带来许多传染性的疾病和上呼吸道疾病。因此，空气微生物含量多少可以反映所在区域的空气质量，是空气环境污染的一个重要参数评价空气的清洁程度，需要测定空气中的微生物数量和空气污染微生物。测定的细菌指标有细菌总数和绿色链球菌，在必要时则测病原微生物。 空气并非微生物的繁殖场所，空气中缺乏水分和营养，紫外线的照射对微生物也有致死作用。微生物产生的孢子本身也可以飘浮到空气中，形成“气溶胶”，借风力传播。 空气中的微生物中，真菌的孢子数量最多，细菌较少。而且藻类、酵母菌、病毒都会存在于空气中。 目前，还无统一的关于空气的卫生学指标，一般以室内1m3 空气中细菌总数为50~1,000个以上作为空气污染的指标。 病原菌在空气中一般很易死亡，但结核菌、白喉杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、炭疽杆菌、流感病毒和脊髓灰质炎病毒等，也可以在空气中存活一段时间。 尘埃多的地方，如畜舍、公共场所、医院、城市街道的空气中，微生物数量较多。高山、海洋、森林、积雪的山脉和高纬度地带的空气中，微生物较少。 在本次实验中测量空气中微生物含量，主要是利用空气的自然沉降法，也有其它方法，如撞击法，过滤法等。 三实验器材 电炉，培养基，培养箱，无菌台 四实验步骤

微生物大小及数量地测定

微生物大小及数量的测定 一、实验目的： 1、学习并掌握使用显微镜测微尺测定微生物大小的方法 2、掌握对不同形态细菌细胞大小测定的分类学基本要求，增强对微生物细 胞大小的感性认识 3、学习并掌握使用血细胞计数板测定微生物细胞或孢子数量的方法 二、实验器材 1、菌种： 枯草芽孢杆菌、酿酒酵母 2、溶液和试剂 香柏油、二甲苯、美兰染液 3、仪器和其他用品 目镜测微尺、镜台测微尺、普通光学显微镜、擦镜纸、软布、血细胞计数 板、凹载玻片、盖玻片、接种环、酒精灯、试管、吸管、移液枪 三、实验原理 1、测微尺： 微生物大小的测定，需要借助于特殊的测量工具——显微测微尺，它包括 目镜测微尺和镜台测微尺两个互相配合使用的部件。 镜台测微尺是一个在特制载玻片中央封固的标准刻尺，其尺度总长为1mm，精确分为10个大格，每个大格又分为是10个小格，共100个小格，每个小格长度为0.01mm，即10μm。刻线外有一直径为φ3，粗线为0.1mm的圆，以便调焦时寻找线条。刻线上还覆盖有厚度为0.17mm的盖玻片，可保护刻线久

用而不受损伤。。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于校正目镜 测微尺每一格的相对长度。 目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻 度，一般有等分为50个小格和100个小格两种。测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不一样，目镜测微尺每小格在不同条件下所代表的实际长度 也不一样。因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。 球菌用直径表示大小，杆菌用长和宽来表示大小 2、显微镜计数： 显微镜计数是将少量待测样品的悬浮液置于一种特定的具有确定容积的载 玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接观察、计数的方法。目前国内外常用的 计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley计菌器等，它们可用于各种微生物单细胞（孢子）悬液的计数，基本原理相同。其中血细胞 计数板较厚，不能用油镜，常用于个体相对较大的酵母细胞、霉菌孢子等的计数，