实验：DNA的粗提取与鉴定实验方法总结

实验：DNA 的粗提取与鉴定

实验材料：新鲜鸡血

试剂：质量浓度为0.1g/mL的柠檬酸钠、2mol/L NaCI、蒸馏水、二苯胺试剂、体积分数为95％的酒精。

实验用具：离心机、恒温水浴锅、烧杯（500mL 1个、50mL 3个）、试管、漏斗、纱布、玻璃棒、量筒（50mL）

实验步骤：

（1 ）制备鸡血细胞液

取质量浓度为0.1 g/mL的柠檬酸钠溶液100 mL ,置于500 mL烧杯中。将宰杀活鸡流出的鸡血（约180 mL ）注入烧杯中，同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶液充分混合,以免凝血。然后将血液倒入离心管内,用4000 r/min 的离心机离心2 min，去上清液，留血细胞备用。（若无离心机，置入冰箱1d静置后，将上清液除去，得血细胞液。）

（2）提取鸡血细胞的细胞核物质

将制备好的鸡血细胞液5 mL?10mL，注入到50 mL烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水20 mL，同时用玻璃棒充分搅拌5 min，使血细胞加速破裂。然后用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至500mL 烧杯中。

（3）溶解细胞核内的DNA

将2 mol 的氯化钠溶液40mL 加入到滤液中，用玻璃棒沿一个方向搅拌1 min 使血细胞充分溶解。

（4）析出含DNA 的粘稠物

沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒沿一个方向轻轻搅拌，（接近300mL）这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中出现的粘稠物会越来越多，当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水（这时溶液中

氯化钠的物质的量浓度相当于0.14 mol / L ）。此时，丝状物缠绕在玻璃棒上。（5）将DNA 的粘稠物再溶解

取1个50 mL烧杯，向烧杯内注入2 mol / L的氯化钠溶液20mL，将粘稠物放至氯化钠溶液中，用玻璃棒不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中。

（6）过滤含有DNA 的氯化钠溶液

取1个100 mL 烧杯，用放有三层纱布的漏斗过滤步骤4中的溶液，取其滤液。（7）提取含杂质较少的DNA 在上述滤过的溶液中加入冷却的、酒精的体积分数为

95％的溶液50mL （使用冷却的酒精，对DNA 的凝集效果较佳），并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分，这种丝状物的主要成分就是DNA。

（8）DNA 的鉴定

取两支10 mL的试管，各加入2mol /L的氯化钠溶液2mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌使丝状物溶解。然后向两支试管中各加入4mL 的二苯胺试剂，混合均匀后，将试管置于沸水中加热5 min ，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化。

实验材料：新鲜猪肝

试剂：0.9% NaCl溶液、2mol /L NaCl、洗洁精、蒸馏水、二苯胺试剂、95 %酒精。

实验用具：组织破碎机、剪刀、天平、烧杯（500mL 1 个、50mL 1 个）、漏斗、试管、纱布、玻璃棒、量筒（50mL）

实验步骤：

（1 ）破碎猪肝脏组织

称取50g 猪肝脏用剪刀剪成小块，放入组织破碎机中，加入50mL 0.9% NaCl 溶液，破碎组织得到匀浆。两层纱布过滤，得滤液约55mL 。

（2）破裂肝脏细胞，释放DNA

取滤液5mL，加水15mL ,洗洁精5滴，充分搅拌使细胞破裂，过滤得滤液约

18mL 。

（3）DNA 的析出

在滤液中加入冷的95%酒精，有白色絮状物出现，直至白色絮状物不再增加为止（约是滤液的1.3 倍）。

（4）DNA 的鉴定

取两支10 mL的试管，各加入2mol /L的氯化钠溶液2mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌使丝状物溶解。然后向两支试管中各加入4mL 的二苯胺试剂，混合均匀后，将试管置于沸水中加热5 min ，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化。

实验材料：新鲜菜花

试剂：2mol/L NaCl、洗洁精、蒸馏水、二苯胺试剂、95%酒精。

实验用具：刀片、天平、研钵、烧杯、试管、漏斗、纱布、玻璃棒、量筒（50mL）实验步骤：

（1 ）研磨菜花

用刀片切取菜花，称取5g放入研钵中，加入5mL洗洁精溶液进行充分研磨。

（2）DNA 的析出

取一支试管，加入5mL 预冷的95% 酒精，将菜花研磨液用纱布过滤后，加入酒精中，可见有白色絮状物出现。用玻璃棒轻轻搅拌，使白色絮状物缠绕在玻璃棒

上。

（3）DNA 的鉴定

取两支10 mL的试管，各加入2mol /L的氯化钠溶液2mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌使丝状物溶解。然后向两支试管中各加入4mL 的二苯胺试剂，混合均匀后，将试管置于沸水中加热5 min ，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化。