实验七 杀虫剂胃毒作用毒力测定

实验七杀虫剂胃毒作用毒力测定

基本原理：昆虫在取食正常食物的同时将药剂摄入消化道，经肠壁细胞吸收进入血液，随血液循环到达作用部位而使昆虫中毒。它利用昆虫的贪食性，因此要尽量避免药剂与昆虫体壁接触而产生其它毒杀作用。测定方法有（1）液滴饲喂法；（2）口腔注射法；（3）叶片夹毒法。

一、叶片夹毒法

基本原理：在两叶片中间均匀地夹入一定量的杀虫剂，饲喂目标昆虫，药剂随叶片被昆虫取食，然后由被吞食的叶片面积，计算出吞食的药量。优点是可以减少目标昆虫与杀虫剂的接触，避免发生触杀作用，操作方便，结果比较精确。叶片夹毒法只适用于植食性的，取食量大的咀嚼口器目标昆虫，如粘虫、蝗虫．玉米螟等。

l、实验材料：

药剂：90%敌百虫

溶剂：丙酮

试虫：菜青虫或斜纹夜娥幼虫：30～50头

用具：培养皿30～50个，木塞钻（口径2cm），微量注射器10微升1支，浆糊或明胶

生物材料：甘蓝叶、蓖麻叶等。

2、实验方法：

用木塞钻制成直径2cm的圆心叶片60片，把圆叶片放在湿润的培养皿中待用。

夹毒叶的制备：用丙酮将敌百虫稀释成有效成分为0.1%的药液，用微量注射器吸敌百虫丙酮液10微升，均匀滴在叶片上，计算出每张圆叶片药量（mg/厘米2）。用浆糊（或明胶）涂在无药的圆叶片上，两相对合，即成夹毒叶片，同时制备不夹毒叶片2～4片作对照。每培养皿中放一片，另放一团湿棉花或湿水草纸一小块保湿，然后编号。

采回的试虫先饥饿数小时，每头虫称重，每培养皿放一头虫，饲喂夹毒叶片。

3、结果观察及计算：

观察试虫取食情况，控制食叶量一部份虫食叶片1/3，一部分虫食叶片1/2，一部分食叶片3/4或全部叶片。然后取出剩余的夹毒叶片，饲喂新鲜叶片，经3-24小时后，检查死亡率。

食量的计算：将剩余的叶片放在直径2cm的方格纸上，计数被吃去的方格数（1毫米2/1格），然后按每张圆叶片上的总药量，计算每一方格的剂量，即可求出取食药量。从而求得每头虫单位体重所取食的剂量（mg或微g/g体重）。

致死中量的计算：按每头虫食剂量的大小顺序排列。将供试昆虫分为三组（1）生存组；（2）中间组（有生存的，也有死亡的）；（3）死亡组；在计算LD50时只用中间组，所以设计浓度时，生存组和死亡组反应试虫数目越少越好。中间组又分生存部分和死亡部分。

A=

()

中间组活虫总数

中间组活虫剂量

∑

B=

()

中间组死虫总数

中间组死虫剂量

∑

致死中量（LD50）= 2B

A+

（单位：mg或微g/g体重）药剂对昆虫的剂量—反应记录表

实验报告：写出供试药剂对供试昆虫剂量反应的实验报告。

实验八杀虫剂内吸作用毒力测定

[基本原理]：将药剂接触到植物的某一部分（如根、茎、叶、种子），药剂可渗入植物体内，并随体液传导到全株或植株的某一部分，在一定时间内，让昆由取食没有直接用药的植物组织，观察其致毒反应。本实验采用包扎法和药液培养法，目的是通过实验了解药剂的内吸性能并初步掌握内吸杀虫剂的测定原理及方法。[实验材料]：

供试昆虫：花生蚜虫：

供试植物：花生苗

供试药剂：50％乐果EC，25％螟蛉畏EC，50％杀螟松EC

用具：烧坏（250ml），试管（2×180），移液管，试管架、药棉、塑料布、剪刀、纸套等。

[实验方法]：

药剂配制：将三种供试药剂配成有效含量为0.5％的乳液各50ml。

内吸测定方法：

1、涂抹包扎法：

挑选生长发育一致，叶片带蚜量较一致（20-25头）的花生苗12株，每株在颈部包扎一圈脱脂棉，用移液管吸取上述药液0.2ml 滴于脱脂棉上。外部用塑料布缠绕后，用线结扎，防止药剂蒸汽挥发，每一药剂重复三次，每处理一株，对照用清水、重复三次，将已施药的花生苗用纸袋套住，插在盛有清水的试管中，排列在试管架上，各处理间不要接触，24小时后解开纸袋，统计蚜虫平均死亡率，比较各药剂的内吸毒效。

2、药液培养法：

先将供试药配成10ppm水溶液，分别注入试管内，每管20ml，对照用清水，重复三次，挑取生长发育一致，叶片带蚜量较一致（20～25头）的花生苗12株，插入液面10cm处，精确计算苗上蚜虫的数目后，用纸套住，24小时后统计平均死亡率。

[实验报告]：

将实验结果整理成表，并比较几种药剂的内吸作用，判断哪种药剂

不是内吸剂。

实验九 杀虫剂熏蒸作用毒力测定

[基本原理]：在适当气温下，利用有毒的气体、液体或固体挥发产生的蒸气毒杀害虫（或病菌），称为熏蒸。熏蒸时，毒剂主要以气态从昆虫的气门进入气管，再分布到全身的气管，然后到达神经作用部位．因此测定熏蒸毒力的装置都必须基于同一原则，即试虫在一密闭容器中不能和固态或液态的毒剂直接接触。毒剂只能以气态和试虫接触。

常见熏蒸作用的测定方法有二重皿法、干燥器法、广口瓶法、药纸熏蒸法和三角瓶法：

[实验材料]：

供试药剂；（1）50%敌敌畏EC 、（2）50%马拉硫磷EC ，（3）90%敌百虫结晶。

试应；赤拟谷盗

用具：培养皿12个，干燥器4个，移液管0.2ml13支，滤纸、量筒、烧杯、纱布等。

[实验方法]：

1、二重皿熏蒸法：

药剂配制：每组实验药剂稀释成有效成分

含量0.5％药液，各20ml （用水稀释）。 处理；在培养皿底内加入5ml 供试药液，皿口盖纱布或纱网盖1张，将试虫20～30头放在纱布或纱网上，再盖相同口径的培养皿底，使其密闭对合（如图），各药剂重复3次，对照

用清水，半小时、1小时、5小时后，观察计

算平均死亡率。

2、干燥器熏蒸法：

取供试虫60头分放三个小烧杯中，杯口用纱布扎紧（三个重复）放在干燥器磁板上，再将供试药剂稀释成有成分含量为0.1％药液20ml ，放入干燥器底部，对照用清水，盖好干燥器盖，一定时间后，在通风处迅速取出试虫，统计死亡率。

3、广口瓶法： 用两个广口瓶（250ml ），在一个广口瓶中放入一

上皿

虫纱布药下皿

定数量的目标昆虫，另一个广口瓶中放入定量药剂，用橡皮塞和多个玻璃管把广口瓶连接，震荡，使药剂挥发，气体均匀分散，作用一定时间后，将目标昆虫移入干净器皿中，放入新鲜饲料，盖上纱布，规定时间内观察目标昆虫的中毒死亡情况。

4、药纸熏蒸法：在三角瓶（500-1000ml）的瓶塞上，用大头针固定0.5-1.0cm的滤纸片，在滤纸片上滴加1-2ul的敌敌畏原油或其他熏蒸剂，然后将麻醉的家蝇放入瓶内，盖上瓶塞，25℃温度下，一定时间后，观察试虫的击倒中毒反应。

5、三角瓶法：在三角瓶底部放入含有一定量熏蒸剂的滤纸片（4×4cm），用纱布袋包一定数量的试虫，然后，把布袋固定在瓶塞上，让布袋悬挂在三角瓶中，25℃温度下，一定时间后，观察试虫的中毒和死亡情况。

[实验报告]：

列表记录试验结果，比较各种药剂的毒力并分析哪种供试药剂没有熏蒸作用。

第四部分除草剂生物测定

除草剂的生物测定技术是指利用生物体（主要指有害生物）对除

草剂的反应，来测定除草剂的毒性及效果的基本方法，是发展除草剂生产和使用不可缺少的工作，是研究除草剂特性的重要手段,

也是水中、土壤中残留除草剂分析的有用工具。

实验十九种子萌发鉴定

指示植物的种子（常用黄瓜、高粱、燕麦）在药剂处理过的砂土内萌发，一般不以萌发率作为评判指标，而是在萌发后一定时间内测定根和茎的长度，并以此作评判标准。激素型除草剂，如2，4-D类，一般采用这种方法。在一定范围内，根和茎的伸长和除草剂的浓度呈相关性，因而可用作除草剂的定量测定，灵敏度较高。属于这类的测定方法如下：

1、除草剂培养皿法

培养皿法简单易行。国内大多采用琼脂、土、砂、滤纸为培养基质，用敏感植物的根长抑制率或芽长抑制率与药剂浓度进行回归，

从而测出药剂的EC50。试验中发现培养皿测定土壤处理剂较为合适，但对茎叶处理剂的测定结果与田间试验结果有较大的差异。本试验通过用培养皿法测定土壤处理剂的活性。

[实验材料]

培养皿、滤纸、稗草种子、保鲜膜、光照培养箱、乙草胺[实验方法]

1、将稗草种子催芽3～4ｄ，待稗草种子露白后备用。

2、把甲草胺用水按系列浓度稀释法，稀释成6个不同浓度的药液。

3、在铺有一张圆滤纸、直径为9ｃｍ的培养皿中加入各个浓度的待测药液5ｍｌ。

4、精选整齐刚露白的稗草种子8粒于培养皿中，盖好保鲜膜。每个处理重复3次。

5、将培养皿放入ＬＲＨ-2 50Ｇ型光照培养箱(广东省医疗器械厂),在 2 7℃下培养4ｄ。

6、用空白作对照。

[结果整理]

用直尺测量稗草的芽长，精确到毫米。

抑制率（%）=

100

?

-

对照组芽（根）长

处理组芽（根）长

对照组芽（根）长

[实验报告]：记录实验结果，完成实验报告。求出抑制率，并计算EC50。

2、黄瓜幼苗形态法

黄瓜幼苗形态法是测定激素型除草剂和植物生长调节剂活性的经典方法。测定原理是以不同剂量的药剂所引起黄瓜幼苗形态上的不同变化来测定样品活性。该法具有操作简单，灵敏度高（可测出0.05ppm）的特点。

将样品配成一系列浓度的丙酮溶液，用直径11cm的滤纸在其中浸透，取出吹干，放入直径12cm的培养皿中，再在滤纸上

铺二张同样大小的未浸药的滤纸。挑选饱满度一致黄瓜种子，在5%的漂白粉液中消毒半小时，取出晾干，每皿排放20粒，并加入12ml蒸馏水（据该方法建立者Sudi测定，此时皿内样品的实际浓度比原来浸滤纸时降低10倍），盖好皿盖，置25℃恒温下黑暗培养6天，取出观察黄瓜幼苗的形态。

将2，4-D的一系列浓度下黄瓜幼苗形态画成“标准图谱”（就象化学分析中的标准曲线一样），然后用测定样品的黄瓜幼苗形态去和标准图谱对比，就可确定2，4-D类除草剂的含量或比较待测样品的除草活性大小。

3、高粱法（皿内法）

高粱法适合于非光合作用抑制剂的生物测定。它具有操作简便、培养期间不用管理、周期短，测定范围广，重现性好等优点，因而被国内外许多实验室采用。

先将高粱种子放在湿滤纸上，24℃温度下萌发15~20h，待长出胚芽1~2㎜时取用。配制一系列浓度的待测样品溶液，将16㎜某浓度的样品溶液放入124g石英砂中，仔细拌均。将此湿的石英砂装入9㎝直径的培养皿中，刮平使与皿边对齐。选10粒准备好的萌动高粱种子，排列于砂表面，胚部向上而幼根沿同一方向排成一行，盖上皿中,将培养皿竖立倾斜15度放入24℃温箱,黑暗中经16~18h,将根尖的位置用蜡笔标于皿盖上,经过24h,取出培养皿，从标记处测量根延伸的长度,精确到毫米。

上海植物生理所对此法作了些改进：用直径9㎝的培养皿，装满干燥黄砂，刮平，每皿加入30ml药液，正好使全皿干砂浸透，然后用有10个齿的“齿板”在皿的适当位置轻轻压出10个小坑，以便每皿能排10粒根长1~2㎝（选用根尖尚未长出根鞘者）的萌发高粱种子。为了缩短时间，在排种培养的前1天，让上述准备好的培养皿，置于34℃保温过夜，使砂温提高，8h后即可划道标记幼根起点，再过14~16小时，待对照根长30mm左右即可测量。吴文君采用小麦种子代替高粱，亦取得满意结果，但对2，4—D 类除草剂来说，小麦不如高粱敏感，其灵敏度比高粱差1个数量级。

4、小麦根长法

在直径为9cm的培养皿内铺满一层小玻璃球（直径为0.5cm），移入10ml不同浓度的待测药液，放入10粒露白的小麦种子，重复三次，以蒸馏水为对照，在20－25℃培养箱中培养5-7 d后取出，测量根长，计算抑制率和IC50值。

本法可用来比较杀单子叶杂草的除草剂间的活力，如氟乐灵、

除草通、绿麦隆等。

5、稗草胚轴法

在50ml烧杯中，加入5 ml不同浓度的除草剂溶液，放入10粒发芽整齐、大小一致的稗草籽，在种子周围撒些干净石英砂，以防幼苗浮起。以蒸馏水为对照，重复3次，置于28-30℃恒温箱中培养，4 d后测定稗草胚轴长度，计算IC50。

本法适于测定氯乙酰胺类除草剂，如甲草胺、异丙甲草胺等，灵

敏度可达0.01ppm。

6、玉米法

选取玉米种子在20℃下黑暗催芽48h，得胚根长达1—5mm时，选均匀一致的种子，放人装有含除草剂土样的烧杯或培养皿中，保持适宜湿度，在20℃下暗处培养5d后取出，测定根长。以系列标准浓度除草剂处理得到的根长制出标准曲线，将样品处理过的玉米所测结果与之比较，可测出样品中除草剂含量，灵敏度可达0.001ug／g土壤，此外，也可以用玉米根鲜重或干重为指标进行测定。

本法用来测定嗪草隆（Glean）等。

7、琼脂测定法：

该法在40年代末提出，国内80年代才有报道，90年代才有采用。琼脂测定法适用于酰胺类，二硝基苯胺类，氨基甲酸脂类，均三氮苯类等多种除草剂的测定，也可用于农药混用试验。

方法：将药剂定量地混入溶化的琼脂液中，倒入试管或培养皿中，待其凝固后再播入供试植物的种子，生长到一定程度后再测定。该法的伏点是以琼脂代替土壤，既可与药剂均匀混合，又可起到固定供植物的作用。

农药常识之农药的毒性毒力药效

农药的毒性、毒力、药效 在使用农药时，必然要遇到毒性、毒力、药效三个问题。三者的含义不同，但又是经常容易被混淆的问题。 (一)毒性是指药剂对人、畜等的毒害程度。我国现行对农药毒性测定是用纯药原药或制剂在大白鼠、小白鼠、兔、狗等试验动物身上测定，分急性毒性和慢性毒性两种。 1.急性毒性是指药剂经皮肤或经口、经呼吸道一次性进入动物体内较大剂量，在短时间内引起急性中毒。 农药毒性分级标准是以农药对大白鼠“致死量”表示，目前国内外通常用“致死中量”或叫半数致死量(LD50)表示。致死中量是指毒死半数受试动物剂量的对数平均数，即每千克(公斤)体重的动物所需药物的毫克数，记作“mg/kg(毫克/千克)”。LD50愈小，药物毒性愈大。根据我国《农药安全使用规定》，依致死中量分高毒、中等毒、低毒3种。高毒农药的使用范围有一定限制，国家有规定，使用时要遵守。 最小致死量(MLD)：即受试动物开始出现中毒症状而死亡的剂量； 全致死量(LD100)：指受试动物全部死亡所使用的最低剂量； 无作用剂量(NoEL)； 致死中浓度(LC50)：即在一定时间内受试动物死亡50%吸入剂量(毫克/立方米)； 耐药中量(TLM)：表示农药对鱼的毒性，一般用48小时内引起鱼半数死亡的浓度。标记为TLM48小时LC50(毫克/升)或用ppm(百分之一)； 致死中时间(LT50)：在一定条件下能杀死被试生物群体中一半数量所需的时间；

击倒中时间(KT50)：一定量药剂能击倒50%被试昆虫所需要的时间； 每日允许摄取量(ADI)：每天按人的体重(公斤)计算所能摄取的农药重量，在人的一生中不会造成对人体有害，单位mg/kg体重/天； 农药的半衰期：是指农药在某种条件下分解或消失一半所需的时间； 农药量最大容许残留量：供人类食用的农副产品中允许的农药最高限度的残留浓度。 2.慢性毒性是指供试动物在长期反复多次小剂量口服或接触一种农药后，经过一段时间累积到一定量所表现出的毒性。 无论急性或慢性中毒药剂均需要注意其是否有三致(致畸、致癌、致突变)作用。 致畸：引起动物畸形； 致癌：引起动物产生肿瘤； 致突变：引发遗传上的突然变异。 凡有三致作用的，均不能做农药使用。另外还有些农药对水生动物和鱼类、蜜蜂以及有益的天敌等有毒或二次中毒问题，使用时也要特别注意，或者忌用。 (二)毒力是指药剂本身对有害生物的毒害程度，多在室内人为控制条件下精密测定。 毒力的选择性亦很重要。所谓选择性，一般是指农药对虫、鼠的毒力强而对人、畜弱。选择性越强，毒力间差别越大，对人、畜威胁就越小，使用也越安全。但选择性也不宜过强，如果仅对几种病虫或几种鼠类有毒，则使用范围就会受到很大限制。

农药常识之农药的毒性 毒力 药效

农药的毒性、毒力、药效在使用农药时，必然要遇到毒性、毒力、药效三个问题。三者的含义不同，但又是经常容易被混淆的问题。 (一)毒性是指药剂对人、畜等的毒害程度。我国现行对农药毒性测定是用纯药原药或制剂在大白鼠、小白鼠、兔、狗等试验动物身上测定，分急性毒性和慢性毒性两种。 1.急性毒性是指药剂经皮肤或经口、经呼吸道一次性进入动物体内较大剂量，在短时间内引起急性中毒。 农药毒性分级标准是以农药对大白鼠“致死量”表示，目前国内外通常用“致死中量”或叫半数致死量(LD50)表示。致死中量是指毒死半数受试动物剂量的对数平均数，即每千克(公斤)体重的动物所需药物的毫克数，记作“mg/kg(毫克/千克)”。LD50愈小，药物毒性愈大。根据我国《农药安全使用规定》，依致死中量分高毒、中等毒、低毒3种。高毒农药的使用范围有一定限制，国家有规定，使用时要遵守。 最小致死量(MLD)：即受试动物开始出现中毒症状而死亡的剂量； 全致死量(LD100)：指受试动物全部死亡所使用的最低剂量； 无作用剂量(NoEL)； 致死中浓度(LC50)：即在一定时间内受试动物死亡50%吸入剂量(毫克/立方米)； 耐药中量(TLM)：表示农药对鱼的毒性，一般用48小时内引起鱼半数死亡的浓度。标记为TLM48小时LC50(毫克/升)或用ppm(百分之一)； 致死中时间(LT50)：在一定条件下能杀死被试生物群体中一半数量所需的时间； 击倒中时间(KT50)：一定量药剂能击倒50%被试昆虫所需要的时间； 每日允许摄取量(ADI)：每天按人的体重(公斤)计算所能摄取的农药重量，在人的一生中不会造成对人体有害，单位mg/kg体重/天；

29种常用杀菌剂对番茄枯萎病菌和青枯病菌的室内毒力测定

29种常用杀菌剂对番茄枯萎病菌和青枯病菌的室内毒力测定 摘要：在实验室内，采用菌丝生长速率法测定了29种杀菌剂对番茄枯萎病菌的抑菌效果，采用纸碟法测定了29种杀菌剂对番茄青枯病菌的抑菌效果。结果表明，有10种杀菌剂对番茄枯萎病菌的毒力较强（Ec50值 相对抑制率计算公式如下： 抑菌率=对照菌落直径-处理菌落直径对照菌落直径-菌饼直径×100%。 1.2.2杀菌剂对番茄青枯病菌的毒力测定方法菌液的制备：将番茄青枯病菌在LB斜面上活化，移入50mLLB培养液中，在28℃下振荡（150r/min）培养过夜。用无菌水将番茄青枯病菌菌液稀释至浓度约为106cFU/mL，备用。 纸碟测定方法参照文献[12-15]：将29种杀菌剂分别制成浓度为1000、100、10、1mg/L，吸取20μL在LB平板中央，每处理重复3皿。设清水对照。用上述番茄青枯病菌稀释液（106cFU/mL）喷雾后，28℃培养过夜，调查抑菌圈直径，计算相对抑制率。应用Excel软件处理系统求出各单剂毒力回归方程、Ec50值及相关系数。 2结果与分析 2.1杀菌剂对番茄枯萎病菌的毒力测定 采用菌丝生长速率法测定了29种杀菌剂对番茄枯萎病菌的抑菌效果。 2.2杀菌剂对番茄青枯病菌的毒力测定 采用纸碟法测定了29种杀菌剂对番茄青枯病菌的抑菌效果。结果表明，有3种杀菌剂对番茄青枯病菌有较强的毒力，其Ec50值均小于10mg/L（表3、图2），其中3%中生菌素的毒力最强，Ec50值为3.3742mg/L。其余26种杀菌剂对番茄青枯病菌不表现毒力。 表33种杀菌剂对番茄青枯病菌的室内毒力测定结果 药剂名称毒力回归方程相关系数 （r）Ec50 （mg/L）3%中生菌素y=7.10x+1.250.96823.374280%代森锰锌y=5.58x+0.830.97565.58872%春雷霉素y=4.11x+1.210.94198.3587 3结论与讨论 番茄具有较高的营养价值，深受广大消费者的喜爱。番茄是江苏省重要的蔬菜品种，年种植面积达到5.33万hm2，其中70%以上为设施栽培。近年来，番茄的价格保持稳定并呈现上升趋势，番茄市场价格一般为4～5元/kg，最高市场价达到20元/kg，番茄种植效益优势十分明显。番茄已成为江苏省发展现代高效农业的优选作物，番茄产业的发展对促进江苏省“农业增效、农民增收”发挥着重要的作用。 随着设施番茄连续种植年代的增加，由枯萎病菌、青枯病菌引起的土传病害连作障碍日趋严重，已成为设施番茄安全生产的主要瓶颈。目前生产上防治番茄枯萎病、青枯病主要依靠化学农药，但防治效果并不理想。我们通过实地调查和研究分析发现，主要有以下原因：（1）农户不了解病菌侵染时期，不能做到适时用药。番茄枯萎病和青枯病是系统性病害，病原菌长期存活在土壤的病残体上，在番茄苗期定植时，从根部的伤口侵入，存活在番茄组织的木质部和韧皮部内，大量繁殖后导致番茄植株失水死亡。防治番茄枯萎病和青枯病必须在苗期定植时用药，一旦错过防治适期，病原菌侵入番茄植株体内，使用药剂也不会有防治效果。（2）农户不了解药剂的杀菌范围，不能做到对症下药。农户认为杀菌剂能够包治百病，手边有什么药剂就用什么药剂。我们从7个示范基地收集了29种药剂，试验结果表明，只有10种杀菌剂对番茄枯萎病菌生长有抑制作用，3种杀菌剂能有效抑制番茄青枯病菌繁殖，大部分杀菌剂可能对番茄的其他病害有防控效果，但是对枯萎病和青枯病基本没有防治作用。表明要有效地防控番茄枯萎病和青枯病，必须适时用药和对症下药。

七种杀菌剂对番茄早疫病病原菌室内毒力测定

七种杀菌剂对番茄早疫病病原菌室内毒力测定 方案，为番茄早疫病的防治提供科学依据，制定出切实可行的防治措施。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 供试菌株番茄早疫病病原菌株采集于豫北地区番茄种植大棚中的病果，经组织分离、纯化获得病原菌[10]。 1.1.2 试验药剂50%异菌脲（病可丹）可湿性粉剂为山东鑫星农药有限公司生产，50%氯溴异氰尿酸（比秀）可湿性粉剂为以色列海法作用保护有限公司生产，80%丙森锌（好锌泰）水分散粒剂为陕西美邦农药有限公司生产，10%苯醚甲环唑（病可丹）水分散粒剂为山东鑫星农药有限公司生产，50%醚菌酯（信赖）可湿性粉剂为陕西美邦农药有限公司生产，3 2.8%烷基腈氧基醌（凯银）水分散粒剂、35%腐霉利悬浮剂为宜宾川安高科农药有限责任公司生产。 1.2 方法 1.2.1 杀菌剂单剂毒力测定将7种杀菌剂单剂与PDA培养基充分混匀，配制成0.01、0.05、0.10、0.50、1.00、5.00 mg/L系列浓度的平板。采用菌丝生长速率法测定，用5 mm打孔器在培养6 d后的番茄早疫病菌平板上打孔，用镊子取菌丝面向下接种在含药PDA培养基上，每皿1个菌碟，28 ℃倒置培养，以去离子水作为对照组，每个处理设3次重复，于接种后第3天检查菌丝生长情况并用十字交叉法测量菌落生长直径，通过菌丝生长抑制率值和各药剂浓度对数值间的线性回归性进行分析，求出各菌株EC50并计算相对抑菌率。抑菌率计算方法为每个菌落使用十字交叉法测量2次，取其平均数作为菌落的大小。计算7

种杀菌剂对菌丝生长的抑制百分率，公式如下： 菌落增长直径=菌落测量直径-菌盘直径 抑菌率=（对照菌落增长直径-含药培养基上菌落增长直径）/对照增长菌落直径×100%[11]以浓度对数为横坐标（x），相对抑制率几率值为纵坐标（y），求出各药剂对供试菌株的毒力回归曲线方程y=a+bx、相关系数r与有效抑制浓度（EC50）。根据EC50分析比较不同杀菌剂对供试病菌菌丝生长的影响[12]。 1.2.2 复配剂的毒力测定选择抑菌活性较好的异菌脲、苯醚甲环唑、醚菌酯、腐霉利4种农药按其单剂浓度梯度两两配制成1∶1、1∶2、2∶1的含药平板，以去离子水作为对照组，每处理设3次重复。分别以异菌脲、醚菌酯、苯醚甲环唑为标准药剂，根据供药试剂，计算各复配剂的实际毒力指数、理论毒力指数、联合毒力。根据共毒系数的大小评价复配剂的增效作用，并确定最佳配比。 毒力指数（TI）=（单剂标准药剂EC50/供试药剂EC50）×100 混剂实际毒力指数（ATI）=（标准药剂EC50 / 混剂EC50）×100 混剂理论毒力指数（TTI）=单剂A的TI×PA+单剂B的TI×PB（PA和PB分别为混剂中有效成分的百分含量） 共毒系数（CTC）=（混剂的实测毒力指数/混剂的理论毒力指数）×100 根据共毒系数类型的划分标准[13]，CTC≥170为明显增效，120≤CTC2 结果与分析 2.1 单剂抑菌率测定 异菌脲、氯溴异氰尿酸、丙森锌、苯醚甲环唑、醚菌酯、烷基腈氧基醌、腐霉利单剂在试验浓度下对茄链格孢属菌菌丝生长抑制率分别为76.15%～100%、8.76%～17.97%、2.01%～70.92%、71.82%～100%、51.35%～71.59%、42.46%～93.87%、32.16%～91.76%（图1，表1）。

第五章 毒作用影响因素

第五章毒作用影响因素 (答案仅供参考) 一、名词解释 1.联合作用：指同时或先后接触两种或两种以上外源化学物对机体产生的毒性 效应。 2.相加作用：指每一化学物以同样的方式、同的机制，作用于相同的靶，仅仅 它们的效力不同。它们对机体产生的毒性效应等于各个外源化学物单独对机体所产生效应的算术总和。 3.协同作用：外源化学物对机体所产生的总毒性效应大于各个外源化学物单独 对机体的毒性效应总和，即毒性增强。 4.拮抗作用：外源化学物对机体所产生的联合毒性效应低于各个外源化学物单 独毒性效应的总和。 二、选择题 1. 下面关于化学结构与毒效应，描述正确的是D A．化合物的化学活性决定理化性质 B．理化性质决定化合物的生物活性 C．化合物的生物活性决定该化合物的化学活性 D．化合物的化学结构决定其化学活性及理化性质 2. 化学物质的哪些物理性质影响毒效应D A．电离度 B．熔点 C．挥发度 D．以上都是 3. 影响环境污染物毒性大小和毒作用性质的决定性因素是化学物的D A．理化特性 B．剂量

C．作用持续时间 D．化学结构 4. 苯环上的一个氢被烷基取代，其毒性发生改变A A．苯对造血功能主要是抑制作用，而甲苯为麻醉作用 B．苯主要从呼吸道，对呼吸系统有毒性作用，而甲苯没有 C．苯中毒产生过量的儿茶酚胺刺激心肌细胞发生心室颤动，而甲苯没有D．苯为致癌物．甲苯为工业毒物 5. 研究化学结构与毒性效应之间关系的目的是D A．寻找毒作用规律．有助于通过比较，预测新化合物的生物活性 B．预测毒牲大小 C．推测毒作用机理 D．以上都是 6. 外源化学物联合作用的类型有D A．相加作用 B．协同作用 C．拮抗作用 D．以上都是 7. 两种或两种以上化学毒物作用于机体表现出独立作用，主要是由于A A．化学毒物各自作用的受体、靶不同，出现各自不同的毒效应 B．化学毒物在化学结构上为同系物 C．化学毒物毒作用的靶器官相同 D．化学毒物在对机体毒作用方面存在竞争作用 8. 甲烷（CH4）若用Cl取代CH4上H后，其毒性最大的是D A．CH3Cl B．CH2Cl2 C．CHCl3 D．CCl4 9. 相对毒性是指C A. 将物质的脂水分配系数估计在内的毒性

第五章 影响毒性作用的因素

第五章影响毒性作用的因素A1型题 1.No2 主要作用部位： A.肺泡 B.口腔 C.支气管 D.细支气管 E.咽部 2.下列哪一种化合物的毒性最高： A CCl4 B CHCl3 C CH2Cl2 D CH3Cl E CH4 3.相对毒性是指： A.将物质的脂水分配系数估计在内的毒性 B.将物质的溶解度估计在内的毒性 C.将物质的挥发度估计在内的毒性 D.将物质的分散度估计在内的毒性 E 将物质的所带电荷估计在内的毒性 4.如切除肾上腺后大鼠会： A.其昼夜节律会变得明显 B.其昼夜节律会变得不明显 C.其昼夜节律无明显变化 D.其昼夜节律先变得明显后恢复正常 E.其昼夜节律先不明显后有明显变化 5.高温可使机体对六氯苯的抵抗力： A.升高 B.降低 C.不变 D.先降低后升 E.先后降低升高

6.下列哪种说法正确： A.同一种毒物对不同种类的生物其毒性作用相同 B.同一种毒物对不同种类的生物其毒性作用不同 C.同一种毒物对同种类的不同个体其毒性作用相同 D.同一种毒物对同种类的不同个体其毒性作用只有微小差别 E.同一种毒物对同种类的生物其毒性作用肯定完全不同。 7.在环境中温度升高的情况下，机体怎样变化： A.皮肤收缩、呼吸加深 B.皮肤扩张，呼吸减慢 C.皮肤收缩，呼吸加快 D.皮肤扩张，角质层水合作用加强 E.皮肤扩张，呼吸加快 8.阿托品对抗有机磷化合物引起的毒蕈碱症状为： A.相加作用 B.协同作用 C.独立作用 D.拮抗作用 E.相减作用 9.马拉硫磷与苯硫磷的联合作用为： A.协同作用 B.拮抗作用 C.独立作用 D.相加作用 E.诱导作用 10.苯巴比妥钠作用于大鼠后，会发现哪个季节睡眠时间最长： A.春季 B.夏季 C.秋季 D.冬季 E.没有变化 11.下列毒性最小的为： https://www.wendangku.net/doc/f314655182.html,l4 B.CHCl3 C.CH2 Cl 2 D. CH3C l E.CH4

五种杀菌剂对梨黑斑病的室内毒力测定

梨黑斑病又称裂果病，是梨树的三大病害之一，由 真菌的链格孢菌（Alternaria alternate （Fr.）Keissl ）侵染所 引起[1]。侵染可分为春季分生的新孢子引起的初次侵染 和由初次侵染后在田间引起再侵染两部分组成[2]。梨树 花期和幼果期是该病潜伏侵染时期，在果实贮藏期间 最易发病并且不易控制和防范[3]。 链格孢菌属半知菌亚门链格胞属。病斑上的黑霉是病菌的分生孢子梗和分生孢子。分生孢子梗褐至黄褐色，丛生，基部稍粗，上端略细，有分隔。孢子脱落后有胞痕。分生孢子串生，倒棍棒形，有纵横分隔，成熟的孢子褐色。在20~30℃之间病原菌能生长,pH 值限定4~12。在相对湿度为50%~100%时孢子可萌发，在水滴82019年3月2019（2）北方果树NORTHERN FRUITS DOI:10.16376/https://www.wendangku.net/doc/f314655182.html,ki.bfgs.2019.02.003 中图分类号：S436.612.1+4文献标识码：B 文章编号：1001－5698（2019）02－0008－03 五种杀菌剂对梨黑斑病的室内毒力测定 梁魁景，侯晓杰，高小宽，张志强，欧阳汝欣 （衡水学院生命科学系，河北衡水053000） 收稿日期：2018-12-20 基金项目：2018年度高层次人才科研启动基金项目（2018GC13）；衡水学院校级项目（项目编号：2018LX15） 作者简介：梁魁景（1983-），男，硕士，讲师，主要从事园林植物病虫害防治研究，（电子信箱）zwbh201011@https://www.wendangku.net/doc/f314655182.html, 。摘要：梨黑斑病由链格孢菌（Alternaria alternata ）引起，是目前梨果采后贮藏和运输过程中的主要疾病之 一。为筛选出防治梨黑斑病病的高效药剂，作者调查了衡水地区常用的农药并最终确定5种有效杀菌剂，分别是10%中生·寡糖素、60%多菌灵、32.5%苯甲·嘧菌酯、1.8%辛菌胺醋酸盐、15%络氨铜。用这5种药剂对菌丝进行室内毒力测定。经测定发现，这5种药剂对梨黑斑病病原菌的生长都有一定的抑制作用，其中效果最好的是15%络氨铜，药剂浓度为1000mg/L 时，平均菌落生长量为0.5mm ，抑制率达到92.25％，EC 50为0.652mg/L ；其次为1.8%辛菌胺醋酸盐；60％多菌灵抑菌效果最差，药剂浓度达到1000mg/L 时，平均菌落生长量为3.4mm ，EC 50为681.719mg/L 。 关键词：梨黑斑病；杀菌剂；室内毒力测定 Determination of Indoor Toxicity of Five Fungicides on Alternaria alternata Disease of Pear Fruits LIANG Kui-jing ，HOU Xiao-jie ，GAO Xiao-kuan ，ZHANG Zhi-qiang ，OUYANG Ru-xin （College of Life Science ，Hengshui University ，Hengshui Hebei 053000，China ） Abstract ：Pear black spot disease is caused by Alternaria alternata and is one of the main diseases during the postharvest storage and transportation of pear fruit.In order to screen out high efficiency agents for preventing and treating pear black spot disease ，the authors investigated the commonly used pesticides in Hengshui area and finally identified five effective fungicides ，namely10%Zhongsheng ·oligosaccharide ，60%carbendazim ，and 32.5%benzophene.Azoxystrobin ，1.8%octosamine acetate ，15%copper amide.The mycelium was assayed for indoor virulence using these five agents.It was found that these five agents have a certain inhibitory effect on the growth of P.sylvestris pathogens.The best effect is 15%lycopene copper.When the concentration is 1000mg/L ，the average colony growth is 0.5.Mm ，reaching 92.25%，EC 50is 0.652mg/L ；followed by 1.8%octosamine acetate ；60%carbendazim bacteriostatic effect is the worst ，when the concentration of the drug reaches 1000mg/L ，the average colony growth is 3.4mm ，The EC 50is 681.719mg/L.Key words ：Pear Black Spot ；Fungicide ；Indoor Toxicity

阿散酸的作用毒性及环境行为

阿散酸的作用、毒性及环境行为 王　米　薛飞群　孟新宇　(中国农业科学院上海兽医研究所　200232) 砷是一种无处不在的元素,地壳中排列第20位,海水中排列第14位,人体中排列第12位。地球富含砷约1.5～3mg/kg〔1〕。砷属于第四周期的类金属,在第五主族的位置与P、S、Se相比邻。在动物营养学中,砷既是必需元素,又是有毒有害元素。砷作为动物必需的一种微量元素,具有多种重要的生理功能。鸡、山羊、小型猪、鼠的实验证明,缺砷生长减慢,损害繁殖性能。含甲基的有机砷与细胞膜磷脂有密切关系。一些砷化合物对动物具有明显生长促进作用〔2〕。美国FDA最早于1964年允许有机砷制剂应用于鸡的饲料, 1983年正式批准用作猪鸡的促生长剂。目前常用的有阿散酸(对氨苯胂酸,C6H8AsNO3)和洛克沙生(3-硝基-4-羟基苯胂酸,C6H6AsNO6)两种,我国农业部1996年批准了砷制剂的使用。 阿散酸分子中砷元素含量为34.52%,添加量为50～100mg/kg。阿散酸具有抗菌、促生长等多种作用,近年在畜牧业中的应用越来越广泛,并取得了良好的经济效益。Moody和Williams(1964a,b,c),Frost(1953),Hanson等(1955)、Overby和Fredrickson(1963)研究表明80%～90%有机砷几乎是以原形从家禽和猪的体内快速排出。高速的排出速度和组织砷的快速排空,使得几乎所有的摄入的砷最终都出现在粪便和尿液中。猪粪中砷的浓度为0.42～119 mg/kg,均值19.2mg/kg〔3〕。而畜禽粪便更多是作为肥料还田,大量含砷的畜禽排泄物进入环境,对环境造成了污染。砷制剂的环境污染,已逐渐成为有关砷制剂研究的重点。 1　阿散酸的作用及作用机理 日粮中添加阿散酸能控制仔猪腹泻、提高生产性能〔4〕;提高肥育猪生长速度,降低料肉比(曹志坚等〔5〕,1999)。雏鸡日粮中添加阿散酸能提高机体的免疫功能(曹爱智〔6〕等, 2006)。肉鸡饲料中添加阿散酸,可提高肉鸡的增重。阿散酸可提高肉鸡的育成率,用于产蛋鸡可使产蛋率提高〔7〕。阿散酸可杀死有害菌,使肠壁变薄,有利于营养物质的吸收和转运〔8〕。日粮中添加60mg/kg阿散酸增强生长猪的消化能力,提高干物质、有机物质和粗蛋白质的消化率,提高能量利用率,且各种氨基酸的利用率也得到相应的改善。同时,添加阿散酸对猪消化道(十二指肠、空肠和回肠)肠壁组织(粘膜高度、腺体高度、腺体数、粘膜下层、肌层以及浆膜等)能更好地吸收营养物质也产生了较好的促进作用〔9〕。阿散酸促进蛋白质脂肪的同化作用和有效抑制肠道微生物如大肠杆菌、沙门氏菌等,还能改进机体色素的形成,使动物皮肤红润,被毛光亮〔10〕。阿散酸可使机体同化作用加强,使血浆中γ-球蛋白含量提高,谷草转氨酶活性增强,促进蛋白质合成,提高产蛋率〔7〕。 阿散酸进入机体后,五价砷先被还原成三价砷,三价砷在酶作用下进一步甲基化和二甲基化,最终代谢成甲胂酸排出体外。砷是一种原浆毒,对蛋白的巯基具有巨大的亲和力,侵入体内的砷可与酶蛋白分子上的两个巯基或羟基结合形成稳定的络合物或环状化合物,从而抑制组织中大量巯基依赖酶系,使其失去活力,而影响细胞的正常代谢。少量砷 项目来源:中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目。化物可抑制同化作用,使机体内轻度缺氧,基础代谢降低,皮下脂肪增厚,皮肤营养改善,红细胞增加。同时砷又是碘、汞以及铅元素的颉颃剂,与抗生素和VB12有协同作用,促进机体新陈代谢〔11〕。小剂量砷在机体内与氧化酶的巯基相互作用,从而加速了蛋白质的合成,减弱了蛋白质的分解。 2　阿散酸的毒性及残留 2.1　毒性 通常认为,单质元素砷几近无毒,砷的氧化物及其盐类绝大部分属于剧毒类化合物,无机砷毒性大大高于有机砷,三价砷化合物大于五价砷化合物。 联合国环境规划署出版的《砷的环境卫生标准》的砷安全评价报告指出,长期接触含砷化合物对许多器官系统都有毒副作用,有机砷突出表现为中枢神经系统失调,使脑病和视神经萎缩的发病率升高〔12〕。有机砷虽然无急性毒性,但长期使用或过量添加会引起动物组织器官崩溃。同时抑制多种组织酶的活性。研究表明,不同砷化物的药理和毒理作用本质上是相同的,砷能杀灭细菌和寄生虫,对宿主同样也有毒害作用。砷对各种动物均有毒性,主要以化合物的形式经消化道和呼吸道进入体内,主要分布在肾、肝、脾等内脏,慢性中毒时则主要蓄积于骨骼。砷沉积量较小,大部分迅速从尿中排出。砷对动物毒性大,全身各组织器官均可受损害,尤其对胃肠壁肾、肝、脾、肺和皮肤更为严重〔13〕。有机砷可使动物中枢神经系统失调,使脑病和视神经萎缩的发病率升高〔14〕。 阿散酸的LD50是1710mg/kg属低毒类,但其对水生生物和土壤生物具有遗传毒性效应。阿散酸降解之前和降解的第4周对鲤鱼肾细胞DNA有显著损伤,表现出明显的遗传毒性作用。阿散酸降解开始后,各浓度的降解混合物体系都能引起蚯蚓体腔细胞DNA的明显损伤,表现出较强的遗传毒性作用〔15〕。阿散酸的毒性反应是由五价砷引起的,它与无机砷化合物产生的毒性反应不同,其损害的特点是外周神经和视神经束的脱髓鞘作用及神经胶质增生。这种组织学病变要在喂后6～10d才能观察到,其临床症状为肌肉活动缺乏协调,共济运动失调和瘫痪,中毒的禽会致盲甚至死亡〔16〕。一般认为,在饲料中添加量如达到推荐剂量10倍时,动物在几天内便会发生中毒〔17〕。猪阿散酸中毒出现的最早症状是增重缓慢,并呈进行性发展。中毒初期出现后肢运动失调和轻瘫,中毒进一步发展,动物出现四肢轻瘫,病猪呈犬坐姿势或倒地,并逐渐呈现失明。此外,病猪常出现皮炎。鸡日粮中添加对阿散酸达1000mg/kg时会引起生长率降低,添加量达1500mg/kg时出现中毒,当添加量为2000 mg/kg或更高时,第9～12d就会发生大量死亡。鸡中毒的症状,除生长率降低外,还表现为虚弱,头抖、缩头,共济失调,瘫痪,失明〔18〕。 近年来,由于广大农户不了解阿散酸的毒性,大剂量使用导致猪死亡的事件时有发生。1999年,武义县发生仔猪阿散酸慢性蓄积中毒〔19〕;2003年漳州市郊发生仔猪应激性死亡,是自配料有机砷中毒〔20〕。2005年陕西省某规模化猪场在生长育肥猪全价料中添加了0.2%的阿散酸导致中毒。2006年广西某猪场为防止仔猪胃肠道疾病,按800mg/kg的 ? 9 7 ? 《上海畜牧兽医通讯》　2008年第4期

实验七 杀虫剂胃毒作用毒力测定

实验七杀虫剂胃毒作用毒力测定 基本原理：昆虫在取食正常食物的同时将药剂摄入消化道，经肠壁细胞吸收进入血液，随血液循环到达作用部位而使昆虫中毒。它利用昆虫的贪食性，因此要尽量避免药剂与昆虫体壁接触而产生其它毒杀作用。测定方法有（1）液滴饲喂法；（2）口腔注射法；（3）叶片夹毒法。 一、叶片夹毒法 基本原理：在两叶片中间均匀地夹入一定量的杀虫剂，饲喂目标昆虫，药剂随叶片被昆虫取食，然后由被吞食的叶片面积，计算出吞食的药量。优点是可以减少目标昆虫与杀虫剂的接触，避免发生触杀作用，操作方便，结果比较精确。叶片夹毒法只适用于植食性的，取食量大的咀嚼口器目标昆虫，如粘虫、蝗虫．玉米螟等。 l、实验材料： 药剂：90%敌百虫 溶剂：丙酮 试虫：菜青虫或斜纹夜娥幼虫：30～50头 用具：培养皿30～50个，木塞钻（口径2cm），微量注射器10微升1支，浆糊或明胶 生物材料：甘蓝叶、蓖麻叶等。 2、实验方法： 用木塞钻制成直径2cm的圆心叶片60片，把圆叶片放在湿润的培养皿中待用。 夹毒叶的制备：用丙酮将敌百虫稀释成有效成分为0.1%的药液，用微量注射器吸敌百虫丙酮液10微升，均匀滴在叶片上，计算出每张圆叶片药量（mg/厘米2）。用浆糊（或明胶）涂在无药的圆叶片上，两相对合，即成夹毒叶片，同时制备不夹毒叶片2～4片作对照。每培养皿中放一片，另放一团湿棉花或湿水草纸一小块保湿，然后编号。 采回的试虫先饥饿数小时，每头虫称重，每培养皿放一头虫，饲喂夹毒叶片。

3、结果观察及计算： 观察试虫取食情况，控制食叶量一部份虫食叶片1/3，一部分虫食叶片1/2，一部分食叶片3/4或全部叶片。然后取出剩余的夹毒叶片，饲喂新鲜叶片，经3-24小时后，检查死亡率。 食量的计算：将剩余的叶片放在直径2cm的方格纸上，计数被吃去的方格数（1毫米2/1格），然后按每张圆叶片上的总药量，计算每一方格的剂量，即可求出取食药量。从而求得每头虫单位体重所取食的剂量（mg或微g/g体重）。 致死中量的计算：按每头虫食剂量的大小顺序排列。将供试昆虫分为三组（1）生存组；（2）中间组（有生存的，也有死亡的）；（3）死亡组；在计算LD50时只用中间组，所以设计浓度时，生存组和死亡组反应试虫数目越少越好。中间组又分生存部分和死亡部分。 A= () 中间组活虫总数 中间组活虫剂量 ∑ B= () 中间组死虫总数 中间组死虫剂量 ∑ 致死中量（LD50）= 2B A+ （单位：mg或微g/g体重）药剂对昆虫的剂量—反应记录表 实验报告：写出供试药剂对供试昆虫剂量反应的实验报告。