人类血小板抗原全套基因分型方法的建立与应用
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．临床实验诊断研究．
人类血小板抗原全套基因分型方法的
建立与应用
许先国朱发明刘瑛洪小珍马开荣蓝小飞严力行
【摘要】目的建立一种基于ＤＮＡ扩增和测序分型（ＰＣＲｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ?ｂａｓｅｄｔｙｐｉｎｇ，ＰＣＲ－ＳＢＴ）的
人类血小板抗原ＨＰＡ—ｌ—ＨＰＡ－１６ｗ的基因分型方法。方法从免疫多态性数据库中下载ＨＰＡ－１一
ｔｔＰＡ?１６ｗ的全套ＨＰＡ核酸序列，以ＰｒｉｍｅｒＰｒｅｍｉｅｒ５．０软件设计引物，特异性扩增包含ＨＰＡ－Ｉａ／Ｉｂ到
ＨＰＡ－１６ａｗ／１６ｂｗ多态性的核酸片段。通过调整引物序列和ＰＣＲ条件获得单一的特异性扩增产物。
ＰＣＲ产物纯化后直接进行ＤＮＡ序列分析并确定ＨＰＡ基因型。通过对２份标准样本的ＨＰＡ分型验
证ＰＣＲ－ＳＢＴ方法的准确性；并利用ＰＣＲ－ＳＢＴ法对２００８年度国际输血协会（ｉｓｇｒ）第１４届国际血小板
免疫学工作组提供的１６份比对样本（包括６个含有基因突变的干扰样本）进行ＨＰＡ基因分型。结果
设计ＩＩ对引物扩增和测序１６个ＨＰＡ系统。２份标准样本的ＨＰＡ基因型分别为ＨＰＡ：１ａａ／２ａａ／３ａｂ／
４ａａ／５ａｂ／６ａａ／Ｔａａ／８ａａ／９ａｎ／１０ａａ／１ｌａａ／１２ａａ／１３ａａ／１４ａａ／１５ａａ／１６ａｎ和ＨＰＡ：ｌａａ／２ａｎ／３ａｎ／４ａｎ／５ａａ／６ａｎ／
７ａａ／８ａｓ／９ａｎ／ｌＯａｎ／１１ａａ／１２ａａ／１３ａａ／１４ａａ／１５ａｓ／１６ａｎ。１６份ＩＳｆｆｒ考核样本的２５６个ＨＰＡ基因型结果
清晰，其中ＨＰＡ—ｌ—ＨＰＡ－６ｗ、ＨＰＡ－９ｗ和ＨＰＡ一１５共８个系统的１２８个基因型结果与ＩＳＢＴ参考结果完
全一致。结论建立了ＨＰＡ－１一ＨＰＡ一１６ｗ的ＰＣＲ—ＳＢＴ分型方法，结合高通量的ＤＮＡ序列分析仪，具
有简单、快速和准确的优点，适合于临床ＨＰＡ全套基因分型，具有良好的应用前景。
【关键词】抗原，人血小板；基因型；聚合酶链反应
ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄａｐｐＨｃａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｐｌａｔｅｌｅｔａｎｔｉｇｅｎｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇＷｉ恤ＰＣＲｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ－ｂａｓｅｄ
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向，ＹＡＮＬｉ－ｘｉｎｇ．研ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＢｌｏｏｄＳａｆｅｔｙＲｅｓｅａｒｃｈ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＨｅａｌｔｈ，ｈｕｔｉｔｕｔｅｏｆＴｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ
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（ＩＳＢＴ）ｉｎ２００８ｗｅｒｅａｌｓｏｔｅｓｔｅｄｂｙｔｈｉｓｈｏｍｅ?ｂｒｅｗＨＰＡＰＣＲ—ＳＢＴｍｅｔｈｏｄ．ＲｅｓｕｌｔｓＴｏｔａｌｅｌｅｖｅｎｐ血ｏｆ
ｐｆｉｍｅｍｗｅｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄｔｏａｍｐｌｉｆｙａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅｔｈｅｓｉｘｔｅｅｎＨＰＡｓｙｓｔｅｍｓ．ＴｈｅＨＰＡｇｅｎｏｔｙｐｅｓｏｆｔｗｏｓｔａｎｄａｒｄ
ｌａａ／２ａａ／３ａｂ／４ａａ／５ａｂ／６ａａ／７ａｎ／８ａａ／９ａｎ／１０ａａ／ｌｌａａ／１２ａａ／１３ａａ／１４ａａ／１５ａａ／１６ａａａｎｄ１ａａ／
ｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅ
２ａａ／３ａａ／４ａａ／５ａａ／６ａａ／７ａｎ／８ａａ／９ａａ／１０ａａ／１１ａａ／１２ａｓ／１３ａａ／１４ａｎ／１５ａｎ／１６ａａ．ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，Ｔｈｅ２５６ＨＰＡ
ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｃｌｅａｒ．１２８ｇｅｎｏｔｙｐｅｓａｍｏｎｇｔｈｅｍｗｅｒｅｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙａｃｃｏｒｄａｎｃｅｗｉｔｈ
ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ０ｆ１６
ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｐｒｏｖｉｄｅｄｂｙＩＳＢＴｒｅｐｏｒｔＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓＴｈｅＰＣＲ－ＳＢＴａｓｓａｙｃｏｍｂｉｎｉｎｇｈｉｇｈ—ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔＤＮＡ
ｓｅｑｕｅｎｃｅｒｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｉｎｔｈｅｓｔｕｄｙｐｒｏｖｉｄｅｓａｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄａｎｄａｃｃｕｒａｔｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒＨＰＡ—ｌｔｏＨＰＡ－１６ｗ
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ｆｕｒｔｈｅｒａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．
【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ａｎｔｉｇｅｍ，ｈｕｍａｎｐｌａｔｅｌｅｔ；Ｇｅｎｏｔｙｐｅ；Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍ＆ｊ．ｉ虮１００９－９１５８．２００９．０４．０１０
基金项目：浙江省医药卫生优秀青年科技人才专项基金资助项目（２００８ＱＮ００８）
作者单位：３１０００６杭州，浙江省血液中心输血研究所卫生部血液安全研究重点实验室
通信作者：严力行，电子信箱：ｆｉｘ＠ｚｊｂ．ｏ曙∞
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血小板抗原在Ｉ临床上具有特定意义，针对特异血小板抗原的同种抗体可引起新生儿同种免疫性血小板减少症、血小板输注无效等疾病…。迄今，通过同种抗体而确认的血小板抗原数为２４个，其中２２个抗原的编码基因和遗传多态性已被确认，并被国际输血协会（ＩＳＢＴ）命名为人类血小板抗原（ｈｕｍａｎｐｌａｔｅｌｅｔａｎｔｉｇｅｎ，ＨＰＡ）。其中１２个对偶抗原被归类为６个ＨＰＡ系统（ＨＰＡ一１～ＨＰＡ－５、ＨＰＡ?１５）；另１０个抗原由于未发现其对偶抗原，而暂命名为ＨＰＡ－６Ｗ～ＨＰＡ一１４ｗ、ＨＰＡ一１６ｗ。建立准确的ＨＰＡ分型技术在血小板减少症的诊断和血小板输注中具有重要作用，但由于特异性同种抗血清的缺乏，利用抗原抗体的免疫学反应进行ＨＰＡ定型很困难。目前常用的方法是进行ＨＰＡ基因分型，如序列特异性引物聚合酶链反应（ＰＣＲ—ＳＳＰ）技术旧Ｊ。本研究建立了一种基于ＤＮＡ扩增和测序分型（ＰＣＲｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ—ｂａｓｅｄｔｙｐｉｎｇ，ＰＣＲ．ＳＢＴ）的ＨＰＡ．１到ＨＰＡ一１６ｗ基因分型技术，并应用该技术参加了ＩＳＢＴ第１４届血小板基因分型室间质控项目。
材料与方法
１．样本来源：２份标准ＤＮＡ样本来源于ＨＰＡ—ＳＳＰ试剂盒（德国ｉｎｎｏ－ＴＲＡｉｎ公司）；１６份ＨＰＡ基因分型考核ＤＮＡ样本由ＩＳＢＴ第１４届国际血小板免疫学工作组提供，其中６份为含有ＨＰＡ基因突变并干扰基因分型的样本，另１０份样本为普通考核样本；３份随机ＤＮＡ样本为本单位无偿献血者经知情同意后抽样提取。
２．ＰＣＲ．ＳＢＴ引物设计：从欧洲免疫多态性数据库（ｔｈｅＩｍｍｕｎｏＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍＤａｔａｂａｓｅ，ＩＰＤ：ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｉｐｄ／）中下载ＨＰＡ一１一ＨＰＡ一１６ｗ所在基因的核酸序列及ＨＰＡ相关的核苷酸变异位点（表１），以ＰｒｉｍｅｒＰｒｅｍｉｅｒ５．０软件设计ＰＣＲ扩增引物。引物设计原则：ＰＣＲ产物包含ＨＰＡ－ｌ—ＨＰＡ一１６ｗ的变异位点，产物长度２００—１０００ｂｐ，以利于扩增和测序，引物位置避开单核苷酸多态性（ＳＮＰ）位点；位于同一基因位点而且ＨＰＡ变异核苷酸接近的ＨＰＡ系统尽量设计在ｌ对引物中，如ＨＰＡ—ｌ和ＨＰＡ一１０ｗ变异核苷酸均位于ＩＴＧＢ３基因的第３外显子，二者相距８７ｂｐ，可以用同一对引物扩增和测序。
３．ＨＰＡ一１一ＨＰＡ一１６ｗ基因扩增条件：ＰＣＲ反应总体积为２５一，其中包括１０×ＰＣＲ缓冲液２．５山，２ｍｍｏｌ／ＬｄＮＴＰ２．５山，引物终浓度Ｏ．５Ｉ山ｍｏｌ／Ｌ，Ｍ９２＋终浓度１．５—２．０ｍｍｏｌ／Ｌ，ｒＴａｑＤＮＡ聚合酶０．８Ｕ（大连ＴａＫａＲａ公司），ＤＮＡ模板约１００ｎｇ。在不同的Ｍ９２＋终浓度条件下，以ＰＴＣ一２４０梯度ＰＣＲ仪（美国ＭＪ公司）摸索各对引物的最适退火温度。
４．扩增产物的酶切纯化：利用虾碱性磷酸酶（ＳＡＰ，ｌＵ／一，美国Ｐｒｏｍｅｇａ公司）的ＤＮＡ５’端去磷酸化功能，以及核酸外切酶Ｉ（Ｅｘｏ．Ｉ，５Ｕ／山，大连ＴａＫａＲａ公司）的单链特异性３’－５’核酸外切酶功能进行扩增产物纯化。取２一ＰＣＲ产物进行琼脂糖凝胶电泳，确定扩增片段的特异性，在剩余的
表ｌＨＰＡ．１一ＨＰＡ－１６ｗ系统基因序列及相关核苷酸变异位点
生堡撞堕医堂盘查！Ｑ盟生堡旦筮丝鲞笠！麴鱼ｉ！』！坐丛型：叁Ｐ四！Ｑ塑：！丛丝：丛垒！
ＰＣＲ产物中分别加入ＳＡＰ和Ｅｘｏ．Ｉ各２山，３７℃
３０ｒａｉｎ酶切反应，８０℃１５ｒａｉｎ酶失活。
５．ＰＣＲ纯化产物直接序列分析：参照本实验室
建它的方法旧Ｊ，以ＢｉｇＤｙｅｔｅｍｆｉｎａｔｏｒｖ３．１ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｋｉｔ（美国ＡＢＩ公司）试剂进行双向序列分析，测序引物为ＰＣＲ扩增引物。所有的测序电泳均在４８根毛细管的ＡＢＩ３７３０测序仪上进行高通量分析，以ＳｅｑｕｅｎｃｉｎｇＡｎａｌｙｓｉｓ５．２进行序列分析，ＳｅｑＳｃａｐｅＶ２．５进行序列比对，按照ＩＰＤ数据库序列确定ＨＰＡ一１一ＨＰＡ一１６ｗ的基因型。
６．随机样本、标准样本和ＩＳＢＴ考核样本的检测：由３份随机ＤＮＡ样本进行ＨＰＡ．１～ＨＰＡ一１６ｗ的ＰＣＲ．ＳＢＴ基因分型方法学摸索。建立ＰＣＲ—ＳＢＴ方
结果
１．ＨＰＡ引物设计和ＰＣＲ扩增：ＰｒｉｍｅｒＰｒｅｍｉｅｒ５．０软件设计ＰＣＲ扩增引物见表２，共设计１ｌ对引物扩增ＨＰＡ的１６个血型系统，其中ＨＰＡ一１和ＨＰＡ—ｌＯｗ，ＨＰＡ－３和ＨＰＡ－９ｗ，ＨＰＡ－４和ＨＰＡ－１６ｗ，ＨＰＡ－６Ｗ和ＨＰＡ－７ｗ，ＨＰＡ－８ｗ和ＨＰＡ．１１ｗ，分别由同一对引物扩增。通过摸索合适的Ｍｆ＋终浓度和退火条件，每对引物均得到单一的扩增片段，片段长度与预期相符合（图１）。
表２１６个ＨＰＡ系统的ＰＣＲ－ＳＢＴ引物设计和ＰＣＲ条件注：Ｆ为上游引物，Ｒ为下游引物
?４１０?
生堡撞验匿堂盘壶２塑生兰星筮丝鲞复！翅坠垫』坐型：叁Ｐ巫！至堂ｔ！丛丝ｔ型堡垒
注：阮标准带；１．ＨＰＡ一１和ＨＰＡ－ｌｏｗ；２．／－ＩＰＡ－２；３．ＨＰＡ－３和ＨＰＡ－９ｗ；４．ＨＰＡ－４和ＨＰＡ一１６ｗ；５．ＨＰＡ－５；６．ＨＰＡ－６ｗ和ＨＰＡ－７ｗ；７．ＨＰＡ－８ｗ和ＨＰＡ－１１ｗ；８．ＨＰＡ?１２ｗ；９．ＨＰＡ?１３ｗ；
１０．ＨＰＡ?１４ｗ；１１．ＨＰＡ一１５
圈１Ｉ－ＩＰＡ．１一ＲＰＡ一１６ｗ的ＰＣＲ扩增产物电泳结果
２．测序分析：３份随机样本的１６个ＨＰＡ系统测序结果清晰，分型明确（图２）。进一步对２份标
准样本进行ＨＰＡＰＣＲ—ＳＢＴ基因分型。ｌ份结果为
ＨＰＡ：１ａａ／２ａａ／３ａｂ／４ａａ．／５ａｂ／６ａａ／７ａａ／８ａａ／９ａａ／１０ａａ／１１
ａａ／１２ａａ／１３ａａ／１４ａａ／１５ａａ／１６ｓａ；另１份结果为
ＨＰＡ：ｌａａ／２ａａ／３ａａ／４ａａ／５ａａ／６ａａ／７ａａ／８ａａ／９ａａ／１０ａａ／
１１ａａ／１２ａａ／１３ａａ／１４ａａ／１５ａａ／１６ａａ。其中ＨＰＡ－１一ＨＰＡ－５和ＨＰＡ．１５结果与试剂盒提供的结果完全一致，其余ＨＰＡ结果试剂盒未提供。１６份ＩＳＢＴ考核样本的ＨＰＡ．１一ＨＰＡ一１６ｗ基因型结果均清晰明确，共包
括２５６个基因型。其中ＨＰＡ－Ｉ—ＨＰＡ－６ｗ、ＨＰＡ－９ｗ和ＨＰＡ一１５共８个系统的１２８个基因型结果按照ＩＳＢＴ要求上报，与参考结果完全一致。
讨
论
在１６个ＨＰＡ系统中，除ＨＰＡ一１４ｗ是由缺失３个核苷酸引起外，其余ＨＰＡ均为相关基因的ＳＮＰ所致。所以随着ＨＰＡ基因机制的发现，各种基于
注：８图为ＨＰＡ．１ｅａ；ｂ图为ｌ－ｌＰＡ－２ａｂ；ｃ图为ＨＰＡ－３ａｂ；ｄ图为ＨＰＡ－４ａｂ；ｅ图为ＨＰＡ－５ａａ；ｆ图为Ｉ－ＩＰＡ－６ａａｗ；ｇ图为ＨＰＡ－Ｔａａｗ；ｈ图为ＨＰＡ?８ａａｗ；ｉ图为ＨＰＡ－ｇＭｗ；Ｊ图为ＨＰＡ．１０ａａｗ；ｋ图为ＨＰＡ?ｌｌａａｗ；ｌ图为ＨＰＡ－１２ａａｗ；ｍ图为ＨＰＡ?１３ａａｗ；ｎ图为ＨＰＡ?１４ａａｗ；ｏ图为ＨＰＡ?１５ａｂ；
Ｐ图为｝ｎ强一１６”；“Ｎ”代表杂合位点；箭头所指为ＨＰＡ相关的核营酸
圈２
ＨＰＡ．Ｉ—ＨＰＡ?１６ｗ多态性位点的部分测序图谱
生堡焦熊医堂邀鲞！螋笙！旦箍丝鲞筮！魍ｇ垡！』堂型：垒Ｐ型！鲤：丛丝，坠堡
ＳＮＰ鉴定的分子生物学技术陆续应用于ＨＰＡ的基因分型，如ＰＣＲ—ＳＳＰ、ＰＣＲ?限制性片段长度多态性（ＰＣＲ．ＲＦＬＰ）和实时定量ＰＣＲ（ｒｅａｌ?ｔｉｍｅＰＣＲ）等【４剖。其中ＰＣＲ．ＳＳＰ法简便快速，在各实验室中应用最广，但容易受ＰＣＲ条件的干扰而出现假阳性或假阴性结果；ＰＣＲ—ＲＦＬＰ法受酶切位点限制和酶切效率的影响，容易出现错误结果；ｒｅａｌ．ｔｉｍｅＰＣＲ是基于定量ＰＣＲ的ＳＮＰ分型技术，灵敏度较高，易于自动化和高通量分型检测，但探针设计较难。从近几届ＩＳＢＴ血小板基因分型室间质控项目报告看，以上ＨＰＡ分型方法均出现一定比例的错误结果，如第１０—１２届质控项目的ＨＰＡ分型总错误率分布为２．７％、０．８％和１．３５％【７－９３，在一些特定的ＨＰＡ系统错误率更高，如ＨＰＡ．１５系统在第ｌｌ届报告中错误率高达７．５％哺ｊ。因此，建立一种准确性高、可作为ＨＰＡ分型标准的实验方法非常重要。ＤＮＡ序列分析基础上的ＰＣＲ—ＳＢＴ基因分型技术是目前研究特定样本基因型的最准确方法，是核对其他分型方法准确性的标准，也是发现薪基因型的途径，但目前国际上尚未见利用ＰＣＲ—ＳＢＴ的ＨＰＡ基因分型方法。
本研究设计的ＨＰＡ—ｌ—ＨＰＡ一１６ｗ特异性引物，行检测，其中的１２８个上报结果与ＩＳＢＴ组委会的参
年来，随着ＤＮＡ序列分析仪的普及，ＰＣＲ—ＳＢＴ技术逐渐应用于临床检测，如药物相关的ＨＢＶ变异测序、骨髓移植的ＨＬＡ高分辨测序分型等。本研究在建立ＨＰＡ基因分型方法时，通过条件摸索简化了经典的ＰＣＲ—ＳＢＴ步骤：首先通过引物设计，把位于同一基因和同一外显子的不同ＨＰＡ系统放在一个ＰＣＲ中扩增，分别合并了ＨＰＡ—ｌ和ＨＰＡ—ｌＯｗ、ＨＰＡ－３和ＨＰＡ－ｇｗ、ＨＰＡ－４和ＨＰＡ－１６ｗ、ＨＰＡ－６ｗ和ＨＰＡ．７ｗ、ＨＰＡ名ｗ和ＨＰＡ—１１Ｗ系统的扩增引物，将１６个ＨＰＡ系统缩减为１１个ＰＣＲ扩增，减少了后续的各项操作；其次，通过调整Ｍ９２＋浓度和退火温度，使１１个ＰＣＲ反应均得到单一的扩增片段（图１），避免了后续繁琐的ＰＣＲ产物割胶纯化步骤，而替代为简易的ＳＡＰ和Ｅｘｏ－Ｉ双酶切纯化方法。使用该纯化法，９６孔的ＰＣＲ产物纯化可在１ｈ内完成，同时可避免割胶纯化过程的ＤＮＡ污染；再次，使用４８通道的ＡＢＩ３７３０测序仪，４８个测序电泳可在２．５ｈ内完成，使整个ＨＰＡ的ＰＣＲ?ＳＢＴ分型过程实现标准化和高通量化，如果配以ＰＣＲ自动加样系统，可实现ＨＰＡ－１一ＨＰＡ－１６ｗ的自动化分型。
参考文献
［１］胡翊群，ＢｏｅｈｌｅｎＦ，夏文权，等．抗血小板抗原３ａ，５ｂ（ＨＰＡ．３ａ，５ｂ）引起的新生儿同种免疫血小板减少症．中华血液学
杂志，１９９７，１８：１５１—１５２．
ｆ２］ＦｅｎｇＭＬ．ＬｉｕＤＺ，ＳｈｅｎＷ．ｅｔａｉ．ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆａｌｌＨＰＡ—１．ｔｏ一１６一ｔｙｐｅｄｐｌａｔｅｌｅｔｄｏｎｏｒＩｅｇｉ８ｈｙｉｎＣｈｉｎａ．ＴｒａｎｓｈｍｉｏｎＭｅｄ，
２００６，１６：３６９－３７４．
［３］吴俊杰。洪小珍，许先国，等．ＲＨＤ基因测序方法的建立及其在弱Ｄ表型分子鉴定中的应用．中华检验医学杂志．２００６，
２９：４６０－４６２．
【４］邓志辉，吴国光，李大成．人类血小板抗原１—６系统同步基因分型的研究．遗传．２００４，２６：５９４－５９８．
［５］陆震宇，刘达庄，朱自严．等．限制性片段长度多态性分析人血小板抗原５系统基因型．中华检验医学杂志，２００１，２４：
２３０－２３２．
［６］ＲｕａｎＬ．ＰｅｉＢ，ＬｉＱ．Ｍｕｌｄｅｏｌｏｒｒｅａｌ—ｔｉｍｅｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈｌｌｉｎｒｅａｃｔｉｏｎｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇｏｆｓｉｘｈｕｍａｎｐｈｔｅｌｅｔ∞ｄｇｅｍｕｓｉｎｇｄｉｓ＃ａｃｉｎｇ
ｐｒｏｂｅｓ．Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，２００７，４７：１６３７－１６４２．
［７］ＰａｎｚｅｒＳ．ＲｅｐｏｒｔＯｉｌｔｈｅｔｅｎｔｈｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｐｌａｔｅｌｅｔｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇａｎｄｓｅｒｏｌｏｇｙｗｏｒｋｓｈｏｐＯｉｌｂｅｈａｌｆｏｆｔｈｅｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｓｏｃｉｅｔｙｏｆｂｌｏｏｄｔｒａｎ幽ｉｏｎ．ＶｏｘＳａｎｇ，２００１，舳：７２－７８．
ｆ８］ＧｏｌｄｍａｎＭ．ＴｍｄｅｌＥ。ＲｉｃｈａｒｄＬ．ＲｅｐｏｒｔｏｎｔｈｅｅｌｅｖｅｎｔｈｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＢｏｃｉｅｔｙｏｆｂｌｏｏｄｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎｐｌａｔｅｌｅｔｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇａｎｄ
ｓｅｒｏｌｏｇｙｗｏｒｋｓｈｏｐ．ＶｏｘＳａｎｇ．２００３，８５：１４９—１５５．
【９］ＢｅｓｓｏｓＨ，ＷｉｌｓｏｎＤＷ．ＭｅｔｃａｌｆｅＰ。ｅｔａ１．ＲｅｐｏｒｔＯｉｌｔｈｅ１２ｔｌｌｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｓｏｃｉｅｔｙｏｆｂｌｏｏｄｎ薯ｎ矗ｈＢｊｉｏｎｐｌａｔｅｌｅｔｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
ｗｏｒｋｓｈｏｐ．Ｖｏｘｓ曩ＩＩｇ，２００５．８９：１０５－１１３．
（收稿日期：２００８－０８—１１）
（本文编辑：张嫒）
抗血小板治疗中国专家共识(一、二、三).pdf
抗血小板治疗中国专家共识（一、二、三） 一、前言 中华医学会心血管病学分会和中华心血管病杂志编辑委员会根据近年来抗血小 板治疗药物相关临床试验结果，综合美国心脏病学学会基金会(ACCF)／美同心脏协会(AHA)、欧洲心脏病学学会(ESC)、心血管造影和介入治疗学会(SCAI)、欧洲卒中组织等权威机构发布的最新指南，中华医学会心血管病学分会、中华医学会神经科 分会等国内学术机构发布的指南和我国心脑血管疾病防治的现状，组织相关专家撰 写了本共识，以推进我国抗血小板治疗的规范化。共识制定过程：(1)全面复习各类心脑血管疾病涉及抗血小板治疗的临床研究证据；(2)综合评估心脑血管疾病患者抗血小板治疗临床研究证据，并考虑中国患者的临床特征；(3)讨论现有各类心脑血管疾病治疗指南中涉及抗血小板治疗内容；(4)综合评估证据。 二、抗血小板药物种类及药理作用 动脉粥样硬化血栓形成是影响心、脑血管和外周动脉的全身系统性疾病。血小 板在动脉粥样硬化血栓形成和发展中起着重要作用，常用抗血小板药物有以下几种。 1．血栓素A2(TXA2)抑制剂：阿司匹林或乙酰水杨酸是临床上广泛应用的皿栓 素抑制剂，40年前发现其抑制血小板的作用，是目前抗血小板治疗的基本药物。阿 司匹林通过对环氧酶(COX)-1的作用直接抑制TXA2合成，抑制血小板黏附聚集活性。阿司旺林其他作用包括介导血小板抑制的嗜中性一氧化氮／环磷酸鸟苷以及参 与各种凝血级联反应和纤溶过程[1-2]。阿司匹林口服后吸收迅速、完全，服用后1 h 达峰值血药浓度。在胃内开始吸收，在小肠上段吸收大部分。阿司匹林以结合代谢 物和游离水杨酸从肾脏排泄。嚼服阿司匹林，起效快． 2．二磷酸腺苷(ADP)P2Y12受体拮抗剂：ADP存在于血小板内的高密度颗粒中，与止血及血栓形成有关、血小板ADP受体调控ADP浓度，人类血小板有3种不同ADP
《稳定性冠心病口服抗血小板药物治疗中国专家共识》要点
《稳定性冠心病口服抗血小板药物治疗中国专家共识》要点 冠心病的抗血小板治疗理念和药物不断发展，合理应用抗血小板药物是改善冠心病患者预后的重要措施。稳定性冠心病(stable coronary arterydisease，SCAD)长期治疗目的是改善冠状动脉供血缓解缺血症状，以及在抗动脉粥样硬化治疗基础上予抗血小板治疗以减少血栓形成事件并降低死亡率。SCAD抗血小板治疗策略的变化源于对动脉粥样硬化病变过程的深入理解。动脉粥样硬化是全身性、不断进展的过程，临床表现稳定的冠心病患者其动脉粥样硬化的发展过程存在很大差异，往往多个部位存在不同性质的动脉粥样硬化斑块(稳定和不稳定斑块)，而血栓事件的发生具有不可预测性，SCAD患者长期抗血小板治疗至关重要。同时，抗血小板治疗必然伴随出血风险。因此，应基于不同个体的血栓和出血危险采用不同抗栓治疗强度。本共识借鉴欧美指南，并回顾该领域研究证据，帮助临床医生进一步认识和全面评估抗血小板治疗的获益与风险，根据SCAD患者不同特点合理选择抗血小板治疗策略，更好地降低血栓事件和出血事件风险，改善患者生存率。 SCAD的定义和风险评估 SCAD涵盖了除急性冠状动脉综合征(ACS)以外的冠心病病程中的各个阶段。SCAD患者应根据危险因素、伴随疾病并借助辅助检查进行综合危险评估，在此基础上采用不同治疗策略。预后不良的危险因素包括：糖
尿病、高血压、高龄、吸烟、总胆固醇升高等。合并慢性肾脏疾病、周围血管疾病、有症状和体征的心力衰竭、心肌梗死病史、冠状动脉复杂病变、近期发生心绞痛或加重以及心绞痛严重程度等均是评估SCAD患者危险程度的重要因素。此外，还可结合患者特点有选择性地采用左心室功能评价、负荷超声心动图和冠状动脉造影等检查进一步评估缺血风险。SCAD 患者如伴左心室功能减低[左心室射血分数(LVEF)<50％]，负荷超声心动图显示多个节段室壁运动异常(左心室17节段中≧3个节段)，冠状动脉造影发现左主干病变以及3支血管近端病变等，均提示预后不良。 抗血小板药物作用机制及临床应用 目前，临床中用于冠心病抗血小板治疗的药物主要包括阿司匹林、P2Y12受体拮抗剂以及糖蛋白(GP)Ⅱb/Ⅲa受体抑制剂。P2Y12受体拮抗剂主要包括噻吩吡啶(氯吡格雷、普拉格雷)和非噻吩吡啶类(替格瑞洛)，普拉格雷尚未在中国上市。而磷酸二酯酶抑制剂(如双嘧达莫和西洛他唑)尚无在SCAD治疗的证据。GPⅡb/Ⅲa受体抑制剂主要短期用于某些接受经皮冠状动脉介入治疗(PCI)的患者。 一、阿司匹林 1．作用机制：阿司匹林不可逆性抑制血小板环氧化酶-1，从而阻止血栓烷A2的形成，达到抑制血小板活化和聚集的作用。
流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)检测血小板功能及其临床应用
流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）检测血小板功能及其临床应用 血小板功能的检测包括测定血小板粘附、聚集和活化的能力。然而，在血小板相关疾病的诊断中，检测血小板功能的方法常常是有争议的。这通常是由于方法本身的原因造成的［1］，譬如，静脉阻滞、抗凝剂选择、离心，甚至标本处理不当等因素，都可导致医源性血小板激活，影响临床诊断的价值。这就要求建立一种灵敏、精确、快速、简便，最好可用于临床常规检测血小板功能测定方法。 关键词：血小板临床应用流式细胞术 血小板功能的检测包括测定血小板粘附、聚集和活化的能力。然而，在血小板相关疾病的诊断中，检测血小板功能的方法常常是有争议的。这通常是由于方法本身的原因造成的［1］，譬如，静脉阻滞、抗凝剂选择、离心，甚至标本处理不当等因素，都可导致医源性血小板激活，影响临床诊断的价值。这就要求建立一种灵敏、精确、快速、简便，最好可用于临床常规检测血小板功能测定方法。 由于血小板的活化程度可由血小板膜糖蛋白表达水平的高低来判断，近年来，文献报道利用流式细胞术，特别是全血法流式细胞术，检测血小板膜糖蛋白的表达［2］。该技术能灵敏、特异地检测血液中活化血小板，并评价其功能。现就全血法流式细胞术检测血小板功能的方法及临床应用现状和潜力进行综述。 一、全血法流式细胞术 1.方法学：流式细胞仪能快速测定大量个体细胞的特性。样品中欲分析的细胞预先进行荧光标记，然后由压缩氮经硅管送达标本室，再以5 000～10 000个细胞/秒的速率逐个射入光敏感区。在适当波长的激发光作用下，被特殊染色的细胞发射出一定量的荧光脉冲讯号。探测器收集每个细胞的荧光讯号和光散射，然后传入计算机进行分析。 传统的流式细胞术检测血小板膜糖蛋白的表达，常用的样本是经洗涤的血小板或富含血小板的血浆。由于血小板极易活化激惹，样本经离心、洗涤等步骤，容易人为地导致体外血小板激活，影响临床诊断价值。为此，Shatti等［2］引入了全血法流式细胞术。该技术能使用全血样本测定循环中血小板的活化状态以及血小板对激活剂的功能应答。 全血流式细胞术样本制备步骤为： 抽血抗凝→稀释→生物素化的检测用单克隆抗体(单抗)→激动剂或缓冲液→固定(1%多聚甲醛)→FITC标记的鉴别用单抗→PE-卵白素→稀释。 稀释样本是为了防止血小板聚集，否则单个血小板上的抗原量就测不出来了，因为流式细胞仪测定的是单个粒子的荧光，而不管这单个粒子是一个血小板还是几个血小板的聚集体。当用凝血酶作外源激动剂时，为防止血小板聚集并形成纤维蛋白凝块，可在全血标本中加入四肽化合物Gly-Pro-Arg-Pro (GPRP)［3］。固定这一步若不干扰单抗的结合，生物素化的检测用单抗也可以在固定后加入。血小板鉴别用单抗可在针对血小板特异性膜糖蛋白GPⅠb，GPⅡb，GP Ⅲa的单抗中任选一种。标记这单抗的荧光试剂可在FITC、PE、PE-CY53种荧光染料中任选。 样本随后用流式细胞仪检测。通过荧光极性和特异性光散射鉴别出血小板后，检测5 000～10 000个血小板表面的特异性荧光讯号。检测结果可用两种方法表示。一种是平均颗粒荧光强度，另一种是特异性荧光抗体结合阳性血小板的百分率。阳性血小板百分率法与荧光信号的放大倍数无关，且可以检测受损伤部位血小板亚群的变化。如果检测的是血小板表面某抗原的总量，则荧光强度法更为适合。譬如，在活化状态下，血小板表面GPIb-IX-V复合物含量比静息时低，但降低的幅度小，通常还不足以报告阴性结果［4］，这时用荧光强度法就比阳性血小板百分率法更合适。 目前传统的流式细胞术还不能定量分析结合位点的绝对数目，但Shatti等［2］利用125I 和生物素双标记的单抗进行研究，以PE-卵白素作为荧光结合试剂，发现碘标测定的结合位点数与荧光强度间有线性关系。因此，对于一个特定的单抗，一旦弄清这一线性关系，并知道荧光单抗上荧光素与抗体的摩尔比，就能利用流式细胞仪定量分析该抗体结合位点的绝对数目。
抗凝或抗血小板药物治疗患者接受区域麻醉与镇痛管理的专家共识(2017版中国麻醉学指南与专家共识)
抗凝或抗血小板药物治疗患者 接受区域麻醉与镇痛管理的专家共识（2017） 王秀丽王庚（共同执笔人）冯泽国江伟李军张兰陈绍辉金善良袁红斌徐懋（共同执笔人）郭向阳（共同负责人） 止血机制正常的患者，区域麻醉导致封闭腔隙内（颅内、眼内或椎管内等）血肿和神经压迫损伤等严重并发症的概率很低。但对于使用抗凝、抗血小板等抗血栓药和其他导致止血异常的患者（创伤、大量失血、肝功能异常和DIC等），区域麻醉导致血肿的风险增加。一旦发生椎管内血肿或其它深部血肿，可能造成严重的不良后果，如截瘫、神经损伤、明显失血、气道梗阻等。 近年来，随着心脑血管疾病发病率的升高，服用抗血栓药物预防血栓的患者也日益增多。房颤、静脉血栓、机械瓣膜置换术后、冠脉支架置入术后等患者，通常会应用抗血栓药。此类患者接受区域麻醉时，其止血功能的异常增加了区域麻醉的风险。 对于围术期使用抗血栓药的患者，区域麻醉时机的选择很重要。麻醉科医师应该掌握常用抗血栓药的基本特点，选择合适的时机，将该类患者应用区域麻醉的风险降到最低。不同的患者，药物的代谢亦不同，应注意凝血功能的检查。熟悉抗血栓药物的药理特点并结合凝血功能检查，有助于麻醉科医师做出更加合理的选择。 本专家共识参考国内外相关指南，结合心脑血管及深静脉血
栓用药和区域麻醉的应用，为抗凝或抗血小板药物治疗患者的区域阻滞管理提供意见，规范围术期的相应管理，供麻醉科医师和相关医务人员参考。 一、常用抗血栓药的基本药理 临床常用抗血栓药可分为抗凝血酶药、抗血小板药及纤维蛋白溶解药等。中草药和抗抑郁药也有改变凝血功能的作用。各类药物的基本药理作用简述如下。 （一）抗凝血酶药 1.间接凝血酶抑制剂 ①肝素（UFH）：是一种分子量在15 000~18 000 D的粘多糖。UFH主要通过与抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）结合，增强后者对活化的凝血因子Ⅱ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ和Ⅻ的抑制作用。其后果涉及阻止血小板凝集和破坏，妨碍凝血激活酶的形成；阻止凝血酶原变为凝血酶；抑制凝血酶，妨碍纤维蛋白原变成纤维蛋白。UFH为血管外科及心脏外科手术中常用药物。UFH可被鱼精蛋白中和而失去抗凝活性（1mg鱼精蛋白可拮抗100U肝素）。UFH在低剂量（≤5000U）使用时即可抑制Ⅸa。监测活化部分凝血活酶时间（aPTT）可以了解其抗凝程度。通常，皮下或静脉给予肝素可维持aPTT在其1.5~2.5倍正常值。此外，UFH 可能会引起血小板减少，长时间使用时需复查血小板计数。 ②低分子肝素（LMWH）：LMWH的分子量为2000~10000 D，皮下注射2h~4h达峰，半衰期3h~4h。LMWH具有很高的抗凝血因子Ⅹa 活性和较低的抗凝血因子Ⅱa活性。针对不同适应证的推荐剂量，LMWH
血小板功能检测及其临床应用
血小板功能检测及其临床应用 【关键词】血小板; 功能检测; 临床应用 血小板检测方法可归纳为出血、血栓和药物监测3大类。虽则有些方法能应用于多种检测 目的，但为特殊目的而创建的方法亦有重要价值。故在检测时应合理地运用。 1 出血性疾病监测中的应用 血小板的基本功能是黏附、聚集、分泌、促凝血、血块回缩。通过这些功能维持着正常人体的初期止血作用。由于这些功能异常而导致的出血疾病包括遗传性和获得性两类，在有些疾病同时会有血小板功能异常和数量减少。 1.1 遗传性血小板功能异常疾病 ①黏附受体蛋白异常：GPIb Ⅴ Ⅸ(BSS,血小板型vWD,Bolin Jamieson 综合征)、GPⅡb/Ⅲa(血小板无力症)、GPⅠa/Ⅱa、GPⅥ、GPⅣ。 ②可溶性激动剂受体异常:TXA2受体,P2Y12受体、α2 肾上腺素能受体。 ③血小板颗粒异常:δ 颗粒(δ 贮存池缺陷、Hermansky Pudlak综合征等)、α 颗粒(灰色血小板综合征，Quebec血小板病等)。 ④信号传递途径异常:TXA2途径异常、Ca离子流动异常、Gαq缺陷、GSα高反应、PLC pleckstrin磷酰化缺陷。 ⑤膜磷脂异常:Scott综合征、Stormorken综合征。 ⑥其他异常:原发性释放异常、Montreal综合征、Ehlers Danlos综合征、 May Hegglin综合征等 1.2 遗传性血小板数量减少疾病 ①体积减小：Wiskott Aldrich综合征、性联血小板减少症。 ②体积正常：家族性血小板病、先天性无巨核细胞性血小板减少症。 ③体积增大：巨大血小板综合征、血小板型vWD、May Haegglin异常、灰色血小板综合征、Montreal血小板综合征。 1.3 获得性血小板功能异常这种异常十分常见，可由下列不同原因引起：①药物、食物和维生素;②慢性肾衰;③体外循环;④骨髓增生异常疾病;⑤抗血小板抗体等。 血小板功能缺陷检测的方法包括：①血细胞分析仪在测定血小板数量及外形大小中应用;②血小板功能:出血时间(血小板功能分析仪，(FPA 100R)、黏附性测定、聚集功能测定、释放功能测定(致密颗粒：5 HT、ADP、ATP、δ 颗粒缺陷 Hermansky Pudlak 综合征、Chediak Hygashi 综合征(荧光法)、α 颗粒：TF4、β TG(α 颗粒缺陷 灰色血小板综合征、Quebec 血小板病、Jacobsen或Paris Trousseau 综合征)(ELISA法，试剂盒),PF3有效性; Ca2+释放与内流,、血栓烷形成、cAMP、GAMP;血块回缩;③膜受体分
血小板计数
编写：伍海波 制定日期：2011.01.01 审核：周可成 核准：伍海波 修订日期：2012.06.01 1．项目名称: 血小板计数 2．测定原理： 用稀释液将血液稀释一定倍数，红细胞及白细胞在稀释液作用下破裂或溶解，剩下血小板。混匀后充入计数池中，计数一定体积内血小板，即可算得每升血液血小板数。 3．标本要求： 用含EDTA.K 2抗凝剂塑料管抽取静脉血1.5ml ，混匀，镜下无PLT 聚集 4．试剂： 4.1 1%草酸铵稀释液：草酸铵 1g 福尔马林（40％甲醛液）0.1ml 枸橼酸钠 0.5g 蒸馏水加至100ml 溶解后过滤即可 4.2 保存条件：2-8℃。放冰箱可保存稍长。 5．仪器和材料： 显微镜、计数板、试管、吸管 6．操作程序： 6.1 在试管中加血小板稀释液0.38ml ； 6.2 CBC 管充分混匀，取血标本20ul ，轻轻加入已盛稀释液试管底部，吸上清液洗吸管三次，轻轻混匀，置10-30分钟待红细胞溶解； 6.3 取干净计数板，试管轻轻振摇，用吸管吸悬液充池，避免产生气泡或溢出，充好液计数板放置10-15分钟； 6.4 低倍找到计数池中央大格，换高倍镜计数全部大方格（400小格）内血小板 6.5 注意事项： a. 全部用具和稀释液要特别清洁； b. 血小板易聚集，充池前要充分混匀，但又不宜用力过猛； c. 一定要等血小板完全下沉后计数； d. 仪器计数高于300×103/ul 或低于60×103/ul 须做直接计数（排除试管内血小板聚集）。 7．计算和参考值 计算：1个大方格内所数血小板数×200=血小板数/ul 。 正常参考值：100×109～300×109/L 警示值：〈10×109/L 8. 参考文献 全国临床检验操作手册
缺血性脑血管病的抗血小板药物治疗
缺血性脑血管病的抗血小板药物治疗 选择题（共10 题，每题10 分） 1 . （单选题）缺血性脑卒中及短暂性脑缺血发作二级预防风险评估量表常用的有哪些（） A .ABCD评分系统 B .Essen量表 C .SPI-II量表 D .以上都是 2 . （单选题）随着Essen量表评分增高，卒中复发风险增加，Essen量表评分大于几分的患者，年卒中复发风险>4％（） A .≥3分 B .≥4分 C .≥5分 D .≥6分 3 . （单选题）建议急性缺血性脑血管病患者在发病后多长时间内服用阿司匹林（） A .24～48 h B .48～72 h C .72～96 h D .96～120 h 4 . （单选题）轻型卒中（NIHSS评分≤3分）患者起病24h内，应尽早给予何种抗血小板药物治疗21d（） A .阿司匹林 B .氯吡格雷 C .氯吡格雷联合阿司匹林 D .以上都不是 5 . （单选题）2014中国缺血性脑卒中和短暂性脑缺血发作二级预防指南指出哪种抗血小板药物可作为长期二级预防一线用药（） A .阿司匹林 B .氯吡格雷 C .阿司匹林或氯吡格雷 D .以上都不是 6 . （单选题）对于未接受静脉溶栓治疗的轻型卒中及高危TIA患者，在发病多长时间内启动双重抗血小板治疗（） A .12h B .24h C .36h D .48h 7 . （单选题）消化道出血患者对症处理选择哪些药物（） A .PPI B .H2受体拮抗剂 C .黏膜保护剂 D .以上都是 8 . （单选题）在使用抗血小板药物前先评估消化道出血的风险，以下哪项是常见的危险因素（）
A .消化道溃疡及并发症病史 B .消化道出血史 C .双联抗血小板治疗或联合抗凝治疗 D .以上都是 9 . （单选题）《2019 阿司匹林在心血管疾病一级预防中的应用中国专家共识》指出哪个年龄段可以考虑服用小剂量阿司匹林(75~100 mg/d) 进行一级预防（） A .40-50岁 B .40-60岁 C .40-70岁 D .40-80 10 . （单选题）不建议下列哪些人群服用阿司匹林进行ASCVD 的一级预防（） A .年龄>70 岁或<40 岁的人群 B .高出血风险人群 C .经评估出血风险大于血栓风险的患者 D .以上都是
血小板抗体检测意义
血小板抗体检测意义 因血小板抗体引起的临床问题和疾病已引起全社会的严重关注，成为临床亟待解决的问题。 血小板抗体检测（或筛选）包括白细胞特异性和组织相容性抗体和血小板特异性和组织相容性抗体。 白细胞、血小板抗体是引起临床非溶血性发热性输血反应的最主要原因，非溶血性发热性输血反应是临床很常见的输血不良反应，文献报道输注红细胞为2?6%，输注血小板为 20?30%，多次输血患者高达27%?63%,而非溶血性发热性输血反应与血小板抗体密切 相关，是影响临床安全输血的严重因素。血小板抗体的检测对于预防和减少非溶血性发热性输血反应非常有意义。 （一）输注红细胞悬液： 1. 血小板抗体检测阳性患者的非溶血性发热反应明显高于血小板抗体检测阴性患者；血小板抗体检测阳性患者经干预后非溶血性发热反应明显下降。 2. 干预措施： 1）建议使用去白的红细胞（血库型或床旁型白细胞滤器） 2）建议使用洗涤的红细胞 3）使用药物 （二）输注血浆： 1）输血性急性肺损伤（transfusion related acute lung injury , TRALI）：文献报道,输血后发生的一系列严重呼吸窘迫病,其80%病例输入的血液中含有血小 抗体。研究已经证实：血小板抗体是引起TRALI 的重要因素之一。 上海市血液中心杨颖教授认为中国免疫性TRALI 发病虽少,但严重型较多。 2）不同国家TRALI 发生死亡率 德国丹麦法国加拿大UK SHOT 1996-20031995 - 20021999 - 20021994 -19982000 -2003 例数139********
发生率% 7370-150-5 死亡率% 9NR NR209检测患者、供者血液的血小板抗体是可行的、必要的,目的是进一步保证输血安全。 （三）输注血小板 临床血小板输注无效发生率为30%?70%，其中免疫因素引起的血小板输注无效约为20%。 血小板抗体是临床引起免疫性血小板输注无效的最主要原因，文献报道20?80%多次 输血的患者出现免疫性血小板输注无效，血小板输注无效会导致昂贵的血液和医疗资源的极大浪费，同时给患者造成较大的经济损失和身体损害。 血小板抗体的检测是临床诊断和治疗与血小板抗体有关的疾病的重要依据，其对不孕不育和因子宫肌瘤引起死胎都有极大的影响。 鉴于血小板抗体对临床的重要价值，为此该项目得到2011年11月1日卫生厅质量检查组的充分肯定。目前我省兄弟医院已相继开展，有浙一、浙二、邵逸夫医院、浙江省中医院、浙江医院，我市有李惠利医院、市一、鄞州医院、鄞州二院等。 收费： 1 白细胞特异性和组织相容性抗体： 1）针对HLA- I类抗原（HLA-A、HLA-B 抗原和少量HLA-C 抗原）的HLA- I类抗体 （50-80% ）。 2）物价收费目录：编码—260000016 ；项目名称—白细胞特异性和组织相容性抗体检测； 价格—90 元/次。 3）现医保限定支付范围：无限定支付范围；甲乙分类—甲。 2 血小板特异性和组织相容性抗体： 1）针对血小板特异性抗原（HPA 抗原）的HPA 抗体（17-25%）。 2）物价收费目录：编码—260000017 ；项目名称—血小板特异性和组织相容性抗体检测；价格—90 元/次。 3）现医保限定支付范围—限列入支付范围的器官移植；甲乙分类—甲。（输血就是器官移 植的一种） 收费参考文件： 《浙江省基本医疗保险医疗服务项目名称》，浙江省劳动和社会保障厅，2005 年版，第65 页。
欧洲心脏协会抗血小板治疗指南-译文
欧洲心脏协会－抗血小板治疗指南－译文 摘译：ESC Expert Consensus Eocument Expert Consensus Document on the Use of Antiplatelet Agents 本文主要阐述抗血小板药物作用机制，明确抗血小板治疗中获益远远大于出血风险的人群。 血小板病理 血小板具有粘附于受损血管并在局部凝集的功能，这使它在正常及病理的凝血机制中占有重要地位。一般说来，血小板的粘附和聚集应算为生理过程。但当粥样斑块突然破裂时，血小板激活可以导致一系列不可控制的自身正反馈并放大激活的病理过程，最终引起腔内血栓形成，血管阻塞，一过性缺血甚至梗死。 现有的抗血小板药物可以干预血小板激活过程中的一些环节，包括粘附、释放、聚集，在有效地预防动脉血栓的同时也不可避免地增加出血的危险。 讨论抗血小板治疗前，有必要重提几点： 1．正常生理循环中，每天新生成1011个血小板，机体有需要时这个数量可以成倍增加。 2．血小板在循环中最长寿命为10天，为无核细胞，以释放颗粒的形式储有化学因子，细胞因子，及生长因子等。 3．血小板被激活时，很快地反应性激活磷脂酶、环氧化酶1，TX合成酶，在这些酶的催化下，血小板可将膜磷脂释放的花生四烯酸合成为前列烷素(主要为TXA2)。新生成的血小板尚可诱导表达COX的亚型COX-2和PGE合成酶，血小板生成加速时尤其明显。 4．活化血小板不能重新合成蛋白，但可将预存的mRNA转译为蛋白，如IL-1β可在数小时内合成。 因此，在炎症及血管损伤过程中，血小板可能具有以前未曾发现的作用。抗血小板的治疗也许会影响血小板源性蛋白信号的传导和/或更深层的反应。 血小板粘附聚集的负性调控环节包括：内皮源性前列环素(PGI2)，NO，CD39/ecto-ADPase，和血小板内皮细胞粘附分子-1（PECAM-1）。一些抗血小板药物作用于这些环节，如阿司匹林和其它的COX抑制剂对PGI2的剂量依赖性的抑制。
谈STEMI患者抗血小板治疗的选择
谈STEMI患者抗血小板治疗的选择 葛均波(复旦大学附属中山医院) 2012年12月，美国心脏病学会基金会（ACCF）和美国心脏协会（AHA）联合发布了2013版《ST段抬高型心肌梗死管理临床实践指南》。复旦大学附属中山医院葛均波院士将解读《指南》中的抗血小板治疗相关内容，涉及直接经皮冠脉介入治疗（PCI）、溶栓、溶栓后延迟PCI三种情况下的辅助抗血小板治疗原则和建议。 1、指南推荐建议 2013版《指南》针对ST段抬高型心梗梗死（STEMI）临床决策中的各个阶段，推荐了不同资源配置情况下的疾病管理系统，目的是确保患者能够快速得到治疗。《指南》还提出了快速恢复闭塞冠脉血流的建议以及院外管理计划。《指南》作者指出，2013版《指南》的重点放在再灌注治疗的进展、患者转
运流程、基于循证的抗栓药物治疗和二级预防策略上，总体目的是优化以患者为核心的ST段抬高型心肌梗死的管理。 行直接PCI的STEMI患者的辅助抗血小板治疗 溶栓患者的辅助抗血小板治疗 溶栓治疗后延迟PCI患者的辅助抗血小板治疗
2、指南解读 直接PCI氯吡格雷证据级别提升 新版《指南》中，直接PCI患者推荐应用氯吡格雷、普拉格雷和替格瑞洛（Ⅰ类推荐，B级证据），与2009年版ACCF/AHA STEMI管理指南相比（Ⅰ类推荐，C级证据），证据级别有所提升。这是由于参考了两版指南发布期间出现的一些新的循证证据。例如CURRENT-OASIS 7研究和TRITON-TIMI 38研究结果的新数据。 CURRENT-OASIS 7研究进一步增加了氯吡格雷在直接PCI患者的证据。另外，虽然在TRITON-TIMI 38研究中，普拉格雷组的30天复合终点事件发生率低于氯吡格雷组，但是，该研究中在冠脉血管造影之前很少有患者应用了氯吡格雷，另
凝血功能检测项目意义
凝血功能检测项目 1、凝血酶原时间（PT）参考范围：11.0~16.0S PT即加入组织凝血活酶和钙离子使血浆凝固的时间，主要用于检测外源性凝血系统有无障碍。 延长：常见于先天性凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅹ缺乏症，低或无纤维蛋白原血症，DIC， FDP增多，恶性贫血，原发性纤溶症，维生素K缺乏，肝实质性损伤时损害凝血因子与凝血酶原的合成，口服抗凝剂如肝素等。 缩短：见于先天性凝血因子Ⅴ增多，口服避孕药，高凝状态，血栓性疾病等。（备注：一般受检者的测定值较参考值延长超过3s以上才有病理意义。） 2、凝血酶时间（TT）参考范围：12.0~18.0S TT在凝血酶作用下，血浆的纤维蛋白原转变成纤维蛋白的时间。 延长：常见于肝素增多或类肝素抗凝物质存在，DIC，FDP增多，SLE，肝病， 肾病，低或无纤维蛋白原血症，异常纤维蛋白原血症等疾病。 缩短：标本可能有微小凝块或有钙离子存在。 3、活化部分凝血活酶时间（APTT）参考范围：27.0~42.0S APTT为脑磷脂具有部分凝血活酶的作用，能加速因子X的活化，使凝血酶原转变为凝血酶，促使血液凝固的时间。反映内源性凝血系统是否正常。 延长：可见于先天性凝血因子缺乏，如甲、乙、丙型血友病；后天性凝血因子 缺乏，如严重肝病、维生素K缺乏、DIC、血液循环中的抗凝物质增加等。 缩短：见于高凝状态，血栓性疾病，Ⅴ、Ⅷ、血小板增多，幼儿，DIC高凝期， 标本离心不足，标本混有血小板等。 （备注：一般受检者的测定值较参考值延长超过10s以上才有病理意义。） 4、纤维蛋白原（FIB、Fib或Fbg）参考范围：2.00~4.00g/L FIB即凝血因子I，是血液中含量最高的凝血因子，既是凝血酶作用的底物又是高浓度纤溶酶的靶物质，在凝血系统和纤溶系统中同时发挥重要作用，FIB作为底物，在凝血酶的作用下转变为纤维蛋白。 增高：可见于糖尿病、糖尿病酸中毒、动脉粥样硬化、急性传染病、急性肾炎 尿毒症、骨髓瘤、休克、外科手术后、轻度肝炎等。
血小板功能实验评价及分析前的质量控制
13 Zhou D，Kusnecov AW，Shurin MR，et al. Exposure to physical and psychological stressors elevates plasma interleukin 6：relationship to the activation of hypothalamic-pituitary-adrenal axis ［J］. Endocrinology，1993，133（6）：2523-2530. 14 Tan KS，Nackley AG，Satterfield K，et al. Beta2 adrenergic receptor activation stimulates pro-inflammatory cytokine production in macrophages via PKA- and NF-kappaB-independent mechanisms ［J］. Cell Signal，2007，19（2）：251-260. 15 Raynor DA，Pogue-Geile MF，Kamarck TW，et al. Covariation of psychosocial characteristics associated with cardiovascular disease: genetic and environmental influences［J］. Psychosom Med，2002，64（2）：191-203. 16 Rebollo I，Boomsma DI. Genetic analysis of anger：genetic dominance or competitive sibling interaction［J］. Behav Genet， 2006，36（2）：216-228. 17 Cloninger CR. A unified biosocial theory of personality and its role in the development of anxiety states［J］. Psychiatr Dev，1986，4（3）：167-226. 18 Service HM，Hintsanen M，Hintsa T，et al. Does neuregulin-1 play a role in Type A behavior？The cardiovascular risk in young Finns study［J］. Behav Brain Funct，2008，4：40. 19 Surtees P，Wainwright N，Khaw KT，et al. Inflammatory dispositions：a population-based study of the association between hostility and peripheral leukocyte counts［J］. PAID，2003，35（6）：1271-1284. 20 Novoselova EG，Khrenov MO，Cherenkov DA，et al. The role of TLR4 receptor in the stress response of lymphocytes［J］. Biofizika，2008，53（3）：457-461. 血小板功能实验评价及分析前的质量控制 Evaluation and pre-analysis quality control on platelet function tests 李祖兰1，杨亮程2，陈兴明3，夏吉成3，白小军3，许永杰3，周维军4，李 平5，丛玉隆1 综述 1解放军总医院 南楼检验科，北京 100853；2总装备部黄寺门诊部，北京 100120；3解放军306医院 检验科，北京 100101；4总装后勤部苇子坑门诊部，北京 100101；5中生北控生物科技股份有限公司，北京 102200 摘要：血小板功能实验包括出血时间、血小板功能分析仪-100、血小板聚集、腺嘌呤核苷酸类测定和流式细胞术等。除了更好定位新实验如血小板功能分析仪、血栓弹力图的作用，更注重老方法如血小板聚集的标准化和优化。本文就目前采用的血小板功能实验优点、缺点以及它们可用的临床条件进行综述，以期为建立血小板功能检验全面质量管理体系提供参考。关键词：血小板；血小板聚集；质量控制 中图分类号：R 446 文献标识码：A 文章编号：1005-1139(2011)02-0196-04 血小板功能试验是临床检验中常用的项目之一，对心脑血管病的诊断和治疗有重要价值。但由于实验方法学、检测仪器与试剂、质量控制措施、操作人员素质等多方面的影响，临床工作中获得准确、有意义的血小板功能试验结果比较困难。对血小板功能实验进行评价及分析前质量控制方面的探讨，对改善血小板功能试验和血小板功能检验全面质量管理都很有意义。 在静脉穿刺、抗凝、标本运输和实验室处理过程中减小对血小板的影响是很重要的。受检者禁食、烟、酒12h，1周内不服阿司匹林类药物，3d不服影响血小板功能的药物；注意年龄和经期、妊娠等生理因素的影响；压脉带压力适度，采血针头至少21号，静脉穿刺且血流顺畅，弃去前2ml血，用塑料试管或硅化玻璃试管或注射器，抽血后立即与抗凝剂轻轻混合，红细胞压积在25%-55%时，3.8%枸橼酸钠与血液比例为1∶9，压积超过这范围时，应调整抗凝剂与血液之间的比例；标本置于室温，最好在采血后2h内进行测试，最长不宜超过3h；掌握好离心的条件，所得的PRP量以占1/4-1/3为佳；检查试管标本是否过满或不足，避免对标本进行不必要的操作[1-3]。不推荐用真空系统采集血样，因为真空通过加大剪切力和增强对低剂量ADP 反应性而易于致血小板活化，血样必须加盖以防血液的pH 值发生变化，影响测试。以下对目前采用的各血小板功能实验优点、缺点以及它们可用的临床条件分别进行综述。 1 出血时间 出血时间在1901年由MILIAN第一次阐述，第二次是在1910年由DUKE表述。但随着使用越来越广泛，其重复性、敏感性和特异性差也越来越明显。例如，约有50%血管性血友病(vWD)患者出血时间正常[4]。单从技术角度看，出血时间受邻近温度较低的皮肤、剧烈运动、压脉带压力的差异(IVY技术)、过度焦虑、切口的方向和过度擦拭切口的影响[5]。1998年，《外科档案》一篇有分量的文章主张反对用出血时间作为常规筛选项目[5]。出血时间不再被认 收稿日期：2010-06-21 修回日期：2010-07-21 基金项目：军队“十一五”项目(42412172) The 11th Five Years Programs of Chinese PLA(42412172) 作者简介：李祖兰，女，硕士，主管技师。研究方向为血小板功能试验分析前质量控制。Email: lzlan5@https://www.wendangku.net/doc/fc6054051.html, 通信作者：丛玉隆。Email: yulongc@https://www.wendangku.net/doc/fc6054051.html,
稳定性冠心病口服抗血小板药物治疗中国专家共识(最全版)
稳定性冠心病口服抗血小板药物治疗中国专家共识（最全版） 冠心病的抗血小板治疗理念和药物不断发展，合理应用抗血小板药物是改善冠心病患者预后的重要措施。稳定性冠心病(stable coronary artery disease, SCAD)长期治疗目的是改善冠状动脉供血缓解缺血症状，以及在抗动脉粥样硬化治疗基础上予抗血小板治疗以减少血栓形成事件并降低死亡率[1]。SCAD抗血小板治疗策略的变化源于对动脉粥样硬化病变过程的深入理解。动脉粥样硬化是全身性、不断进展的过程，临床表现稳定的冠心病患者其动脉粥样硬化的发展过程存在很大差异，往往多个部位存在不同性质的动脉粥样硬化斑块(稳定和不稳定斑块)，而血栓事件的发生具有不可预测性[2]，SCAD患者长期抗血小板治疗至关重要。同时，抗血小板治疗必然伴随出血风险。因此，应基于不同个体的血栓和出血危险采用不同抗栓治疗强度。本共识借鉴欧美指南[1,3,4]并回顾该领域研究证据，帮助临床医生进一步认识和全面评估抗血小板治疗的获益与风险，根据SCAD患者不同特点合理选择抗血小板治疗策略，更好地降低血栓事件和出血事件风险，改善患者生存率。 SCAD的定义和风险评估 SCAD涵盖了除急性冠状动脉综合征(ACS)以外的冠心病病程中的各个阶段。SCAD患者应根据危险因素、伴随疾病并借助辅助检查进行综合危险评估，在此基础上采用不同治疗策略。预后不良的危险因素包括：糖尿病、高血压、高龄、吸烟、总胆固醇升高等。合并慢性肾脏疾病、周围血管疾病、有症状和体征的心力衰竭、心肌梗死病史、冠状动脉复杂病变、
近期发生心绞痛或加重以及心绞痛严重程度等均是评估SCAD患者危险程度的重要因素。此外，还可结合患者特点有选择性地采用左心室功能评价、负荷超声心动图和冠状动脉造影等检查进一步评估缺血风险。SCAD 患者如伴左心室功能减低[左心室射血分数(LVEF)<50%]，负荷超声心动图显示多个节段室壁运动异常(左心室17节段中≥3个节段)，冠状动脉造影发现左主干病变以及3支血管近端病变等，均提示预后不良。 抗血小板药物作用机制及临床应用 目前，临床中用于冠心病抗血小板治疗的药物主要包括阿司匹林、P2Y12受体拮抗剂以及糖蛋白(glycoprotein，GP)Ⅱb/Ⅲa受体抑制剂。P2Y12受体拮抗剂主要包括噻吩吡啶(氯吡格雷、普拉格雷)和非噻吩吡啶类(替格瑞洛)，普拉格雷尚未在中国上市。而磷酸二酯酶抑制剂(如双嘧达莫和西洛他唑)尚无在SCAD治疗的证据。GPⅡb/Ⅲa受体抑制剂主要短期用于某些接受经皮冠状动脉介入治疗(PCI)的患者。此外，还有一些抗血小板药物正在研发中，如凝血酶受体拮抗剂。 一、阿司匹林 1．作用机制： 阿司匹林不可逆性抑制血小板环氧化酶－1，从而阻止血栓烷A2的形成，达到抑制血小板活化和聚集的作用。但阿司匹林对其他激动剂(如胶原、二磷酸腺苷)所致血小板聚集无影响。阿司匹林口服后吸收迅速、完全，服用后1 h达峰值血药浓度，在胃内开始吸收，大部分在小肠上段吸收，并以结合代谢物和游离水杨酸从肾脏排泄。嚼服阿司匹林起效快。 2．剂量：
血小板功能
血小板功能 心血管疾病作为全球第一杀手，占到患者死亡的30%左右。研究者现在发现动脉粥样硬化斑块是随着时间的推移出现的。但是，当斑块破裂时相关成分会出现在动脉细胞外基质中，从而开启血小板凝集功能或动脉血栓。与此同时，巨噬细胞来源泡沫细胞产生的组织因素也会启动血液系统的凝集作用。这些过程均可引起血块的增加，且能引起从中风到心肌梗死（M I）的临床疾病。 现在，血小板抑制剂已成为急性心血管事件预防和治疗原则的主要用药。其中，三种主要的血小板抑制剂是：阿司匹林，包括氯吡格雷在内的噻吩吡啶类派生物和GP IIb/IIIa受体拮抗剂。因为GP IIb/IIIa拮抗剂仅能以静脉形式获得，无法用于医院外患者的长期治疗。另一方面，患者经常服用阿司匹林和氯吡格雷来降低心脏疾病的长期风险。 近来，关于临床实验室是否应该测量阿司匹林和氯吡格雷对血小板功能作用的问题存在着越来越大的争论。本文讨论了测量这些抗血小板药物作用的药理学和可获得的实验室检测。 血小板和血块形成 血小板在正常止血过程中起到主要作用。他们没有细胞核，但含有纤维蛋白原、血小板派生生长因子、凝血因子（vWF）、P-选择素构成的α-颗粒及二磷酸腺苷（ADP）、血清素和钙组成的密集颗粒。 当发生血管损伤时，暴露的vEF和胶原蛋白结合到循环血小板上并激活他们。激活过程中，释放α和致集颗粒（脱粒过程）从而聚集更多血小板到达血管损伤位置并增强血小板活性。血小板也能合成和释放凝血烷（另一种活性调节物质）。 血小板活性过程中，细胞表面的GP IIb/IIIa受体变形，从而使纤维蛋白原（因子I）结合到血小板上。同时，作为血凝固的一部分，凝血酶将纤维蛋白原转化为纤维蛋白。因子X III在血凝固过程最后一步交叉连接纤维蛋白。这种复杂的相互作用结果是引起稳定血小板形成或构成基本的止血（图1）。
血小板检查
第三节血小板检查 一、选择题 【A题型】 1.血小板计数的适应证不包括· A.不明原因的出血 B.排除血友病 C.监测病人的化疗和放疗过程 D.疑为骨髓增生 E.疑为血小板破坏增加 2.血小板计数首选的稀释液是 A.高铁氰化钾 B.复方碘 C.草酸钱 D.复方尿素 E.稀盐酸 3.血小板计数的参考方法为 A.普通光学显微镜直接计数法 B.普通光学显微镜间接计数法 C.免疫法 D.血细胞分析仪法 E.相差显微镜直接计数法 4.血小板计数的稀释液必须具备的条件不包括 A.能有效抑制血液凝固 B.能防止血小板形态变化 C.能完全破坏红细胞 D.组成复杂并易于保存 E.不利于细菌生长 5.可导致血小板假性减少的是 A.巨大血小板 B.小红细胞 C.红细胞碎片 D.淋巴细胞核碎片 E.细胞质碎片 6.可导致血小板假性增多的是 A.卫星现象 B.红细胞碎片 C.巨大血小板 D.异常蛋白血症 E.血小板聚集或凝集 7.血小板计数规范化操作不包括 A.充液前必须轻轻摇动血小板悬液2分钟 B.显微镜下观察光线要亮 C.器材必须洁净、干燥 D.灌人计数池后静置15分钟再计数 E.采血1小时后完成计数 8.血小板计数生理性变化正确的是 A.午后低，早晨高 B.春季低，冬季高 C.月经后低，月经前高 D.静脉血低，毛细血管血高 E.妊娠中晚期低，分娩后高 9.可引起自发性出血的血小板计数小于 A. 400 X 109/L B.200 X 109/L C. 100 X 109/L D.60 X 109/L E. 10 X 109/L 10.常有血栓形成危险的血小板计数大于 A. 1000 X 109/L B.400 X 109/L C. 300 X 109/L D.100 X 109/L E. 60 X 109/L 11.血小板增多常见于 A.慢性粒细胞性白血病 B.血栓性血小板减少性紫癜 C.脾功能亢进 D.急性白血病 E.放射性损伤 12.血小板反应性增多见于 A.慢性粒细胞性白血病 B.原发性血小板增多症 C.急性化脓性感染 D.真性红细胞增多症 E.脾切除 13.不能导致血小板生成障碍的是 A.急性白血病 B.系统性红斑狼疮 C.再生障碍性贫血D巨幼细胞性贫血 E.恶性肿瘤骨髓转移 .14.导致血小板消耗过多的是 A.脾肿大 B.血液被稀释C一巨大血小板综合征 D.脾功能亢进 E.弥漫性血管内凝血 15.不是原发性血小板增多的是 A.常见脾肿大 B.为干细胞缺陷 C.血小板功能减低 D.并发症少 E.血小板常大于1000 X 109 /L 16.不是继发性血小板增多的是 A.多为反应性 B.脾肿大罕见 C.并发症多见 D.血小板功能正常 E.血小板常小于1000 X 109 /L 17.血小板计数质量保证的主要原则是 A.可选用尿素稀释液 B.避免血小板被激活一和破坏 C.准确辨认血小板 D.可用肝素抗凝血 E.血标本可以低温保存 18.普通光镜直接计数血小板，首选的是 A.生理盐水 B.复方尿素稀释液 C.草酸按稀释液 D.高铁氰化钾稀释液 E.自动血细胞分析仪稀释液 19.关于血小板的主要功能，错误的是 A.粘附功能 B.聚集功能 C.促进血块收缩 D.维持血管内皮完整 E.抗凝血功能 二、问答题 1.血小板计数的稀释液必备的条件有哪些? 2.如何鉴别原发性血小板增多和继发性血小板增多? 3.如何评价普通显微镜直接计数血小板的方法?
2013年抗血小板治疗中国专家共识
医 脉 通w w w .m e d l i v e .c n 2013 抗血小板治疗中国专家共识 中华医学会心血管病学分会 中华心血管病杂志编辑委员会 一、前言 中华医学会心血管病学分会和中华心血管病杂志编辑委员会根据近年来抗血小板治疗药物相关临床试验结果，综合美国心脏病学学会基金会( ACCF)／美国心脏协会( AHA)、欧洲心脏病学学会(ESC)、心血管造影和介入治疗学会( SCAI)、欧洲卒中组织等权威机构发布的最新指南，中华医学会心血管病学分会、中华医学会神经科分会等国内学术机构发布的指南和我国心脑血管疾病防治的现状，组织相关专家撰写了本共识，以推进我国抗血小板治疗的规范化。共识制定过程：(1)全面复习各类心脑血管疾病涉及抗血小板治疗的临床研究证据； (2)综合评估心脑血管疾病患者抗血小板治疗临床研究证据，并考虑中国患者的临床特征； (3)讨论现有各类心脑血管疾病治疗指南中涉及抗血小板治疗内容；(4)综合评估证据。 二、抗血小板药物种类及药理作用 动脉粥样硬化血栓形成是影响心、脑血管和外周动脉的全身系统性疾病。血小板在动脉粥样硬化血栓形成和发展中起着重要作用，常用抗血小板药物有以下几种。 1．血栓素A2（TXA2）抑制剂：阿司匹林或乙酰水杨酸是临床上广泛应用的血栓素抑制剂，40年前发现其抑制血小板的作用，是目前抗血小板治疗的基本药物。阿司匹林通过对环氧酶(COX)-l 的作用直接抑制TXA2合成，抑制血小板黏附聚集活性。阿司匹林其他作用包括介导血小板抑制的嗜中性一氧化氮／环磷酸鸟苷以及参与各种凝血级联反应和纤溶过 程[1-2]。阿司匹林口服后吸收迅速、完全，服用后th 达峰值血药浓度。在胃内开始吸收，在小肠上段吸收大部分。阿司匹林以结合代谢物和游离水杨酸从肾脏排泄。嚼服阿司匹林，起效快。 2．二磷酸腺苷( ADP) P2Y12受体拮抗剂：ADP 存在于血小板内的高密度颗粒中，与止血及血栓形成有关。血小板ADP 受体调控ADP 浓度，人类血小板有3种不同ADP 受体：P2Yl 、P2Y12和P2Xl 受体。其中P2Y12受体在血小板活化中最重要。P2Y12受体拮抗剂通过抑制 P2Y12受体，干扰ADP 介导的血小板活化[3]。P2Y12受体拮抗剂有噻吩吡啶类和非噻吩吡啶 类药物。 噻吩吡啶类药物：噻氯匹定和氯吡格雷均是前体药物，需肝脏细胞色素P450酶代谢形成活性代谢物，与P2Y12受体不可逆结合。噻氯匹定虽有较强抗血小板作用，但起效慢且有皮 疹、白细胞减低等不良反应[4]。其后研发出的氯毗格雷具有抗血栓强和快速起效的特性，氯 吡格雷在ST 段抬高型心肌梗死(STEMI)、不稳定性心绞痛(UA)/非ST 段抬高型心肌梗死(NSTEMI)及经皮冠状动脉介入(PCI)治疗的患者中广泛应用，但由于受肝脏代谢酶基因多态 性影响，部分患者氯吡格雷标准剂量无法获得满意疗效[5-7]。普拉格雷也是噻吩吡啶类前体 药物，需在肝脏代谢转变为活性产物发挥抗血小板效应，普拉格雷抗血小板效应强于也快于 氯吡格雷，但其出血风险高于氯吡格雷[8]。