2011 年全国HIV 抗体诊断试剂临床质量评估报告

HIV的实验室诊断

HIV实验室诊断 一、HIV病毒是带有包膜的RNA逆转录病毒，在我国流行的是HIV-1。 二、HIV实验室诊断 人体感染HIV后，血液中最先出现HIV抗原，然后很快消失直到疾病后期才重新出现。几周后出现IgM抗体并很快消失，此后,IgG抗体出现并一直存在。因此，HIV感染的实验室诊断以抗体检测为主，病毒及相关抗原的检测为辅。 抗体检测分为初筛试验和确证试验两种，初筛试验为阳性的血清必须进一步确证，确证实验为阳性的方可报告为HIV感染阳性。 多聚酶链式反应(PCR)主要用于检测血浆中HIV的RNA含量，目前主要用于预测母亲将HIV传染给胎儿的可能性以及新生儿的HIV感染状况。此外，尚可用于判断病人的预后及监测抗病毒治疗的效果。 （一）HIV抗体的初筛检测 初筛试验的要求是敏感性高，理论上要求达到100%，尽可能避免漏掉可能阳性的对象，相对来说，对特异性要求不是太严，允许有少量假阳性，这些假阳性可以通过重复试验和确证试验排除。 HIV抗体初筛检测的方法很多，如酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)、明胶颗粒凝集实验(gelatine particle agglutination assay, PA)、乳胶凝集实验(latex agglutination assay, LA)、各种快速检测实验(rapid tests)等。 1．酶联免疫吸附实验检测HIV1/2 型抗体，酶联免疫吸附实验（ELISA）是最常见的HIV抗体检测方法，它具有准确性高、价格低廉、判断结果有客观标准、结果便于记录和保存等优点，适合于大批量标本的检测，是献血员筛选和临床诊断最常用的方法。 3．胶体金法检测HIV1/2抗体实验 胶体金法检测HIV抗体是一种不需要任何仪器设备的血清／血浆检测法，它利用免疫层析分析原理来快速检测血清／血浆中是否含有HIV抗体，从而用于判断人体是否受到HIV1型／HIV2型病毒感染。 注意：由于样本中HIV抗体滴度的不同，测试区（T）内的红色条带会显现出不同深浅的颜色。但是，本试剂盒的测试结果不能做为判定样本中抗体滴度高低的依据。 (二)、初筛试验每一次检测阴性者可报告阴性，若第一次检测阳性，则需进行复测，复测时（最好用不同类型的试剂）可同时测定两孔，判定方法如下：

全国艾滋病检测技术规范(2015年修订版)

附件1 全国艾滋病检测技术规范 National Guideline for Detection of HIV/AIDS （2015年修订版） 中国疾病预防控制中心 二○一五年十二月

全国艾滋病检测技术规范National Guideline for Detection of HIV/AIDS （2015年修订版） 中国疾病预防控制中心 二○一五年十二月

前言 艾滋病在我国的流行已数十年，随着感染者和临床病人的不断增加、感染人群的变化，艾滋病检测工作量逐渐加大，对监测和检测的需求也不断增加，承担艾滋病检测的实验室已遍及全国各级医疗、疾病预防控制、采供血、妇幼保健机构，出入境检验检疫、军队等各个系统。为了尽早发现HIV感染者和艾滋病病人，及早提供咨询、治疗，同时为适应基层艾滋病检测工作需求，在新的形势下，根据《关于艾滋病抗病毒治疗管理工作的意见》、《中国预防与控制艾滋病中长期规划（1998—2010年）》、《中国遏制与防治艾滋病十二五行动计划的通知（国办发[2012]4号）》、“四免一关怀”等国家艾滋病防治重要方针政策和十三五防治工作重点，在广泛征求各省、市疾病预防控制机构和医疗机构意见的基础上，在中华人民共和国卫生和计划生育委员会艾滋病专家及省级专家的参与下，中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心对《全国艾滋病检测技术规范（2009年版）》进行修改、增补和完善，制定出《全国艾滋病检测技术规范（2015年版）》（以下简称《规范》），使其既能满足目前艾滋病检测工作的实际需求，又能体现检测技术的发展。 本次《规范》修订工作立足于我国目前检测状况，结合发达国家使用的指南，主要对以下几个方面内容进行了修改、增补和完善：（1）完善了不同的检测策略，并将其整合为独立的一章；（2）增加了HIV-1新

HIV检测方法

HIV 实验室诊断
人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)及其相关标志的检测是预防 HIV 感染和艾滋病临床治疗中重要的环节，在艾滋病的防治工作中具有重要作用，如艾滋病的 诊断、HIV 感染的诊断、血源及器官供体的筛选、流行病学调查、艾滋病病人及 HIV 感染 者的病情动态观察、临床治疗疗效考核以及 HIV 疫苗的安全性和效果鉴定等。 HIV 感染标志分为病毒标志、免疫标志和相关标志三大类。病毒标志是指直接从 HIV 感染者体内分离出病毒或检出 HIV 组成成分(抗原或核酸)。免疫标志是指 HIV 感染所产生 的 HIV 抗原、抗体等免疫物质。相关标志是指 HIV 感染后与艾滋病病情进展有密切关系的 某些标志，如 CD4 细胞、CD8 细胞，β2 微球蛋白、有关细胞因子等。这些标志的测定可 为 HIV 感染及临床疗效的考核提供极为重要的诊断、治疗和预后指征。目前 HIV 抗体的检 测是艾滋病实验室检测中最常用的方法，因为 HIV 抗体是患者感染 HIV 后最容易检出并且 持续时间最长的免疫学标志，而且抗体的检测方法大多简便、经济，易于推广应用。 在介绍各种 HIV 实验室诊断方法之前，为了使实验室工作人员能够有效地确保结果准 确、可靠、优质，我们必须对作为一种感染因子的 HIV 以及由它所导致的致命性危害有基 本的认识。实验室工作人员应特别注意病毒的结构、抗原组成，人体的免疫反应，诊断试 验的基本原理、试验结果的解释，以及为了准确而有效地提供实验诊断所必需的质量保证 措施。如果由于缺乏技术专长或基本知识而造成不正确的试验结果是不可原谅的。现将有 关内容扼要介绍如下： 一、人类免疫缺陷病毒(HIV)概述 （一） 年份 1981 艾滋病病原体的发现和命名 事 由 命 名
美国首先在洛杉矶男性同性恋中发现 5 例以 往很罕见的卡氏肺囊虫肺炎和 26 例卡波济氏 肉瘤患者，这些病人均表现有严重的免疫缺 陷，但原因不明。
1982 年将这种新的疾病命名为 “获得性免疫缺陷综合征” Acquired Immuno Deficiency
Syndrome，AIDS，即艾滋病 淋巴结病相关病毒 Lym phadenopathy Associated
1983
从艾滋病流行学资料分析很可能是由病毒引 起的。 法国巴斯德研究所 Montagnier 等首先从 多发性淋巴结病综合症病人分离到一种新的 逆转录病毒
Virus，LAV
1984
美国国立癌症研究所 Robert Gallo 等报道从艾 滋病病人活检组织分离到一种新的逆转录病 毒与其以前发现的 HTLV-1 和 HTLV-Ⅱ不同。
人类嗜 T 淋巴细胞Ⅲ型病毒 Human T-cell Lymphatropic Virus
typeⅢ，HTLV-Ⅲ AIDS Related Virus， ARV
1984
美国加州大学分离出艾滋病相关病毒

HIV抗体检测

第二章 HIV抗体检测 1 范围 本章规定了HIV抗体的检测方法、检测程序、检测报告及检测策略，适用于各级各类医疗机构、疾病预防控制机构、检验检疫机构、采供血机构及卫生保健机构。可作为对HIV感染者/AIDS 病人的诊断、报告和处理的实验室依据。 2 规范性引用文件 Revised recommendations for the selection and use of HIV antibody tests. WHO/UNAIDS Revised version 2001. 实验室生物安全通用要求（GB 19489-2004）。 3 HIV抗体检测实验室 应符合《全国艾滋病检测工作规范（1997年版）》中对检测实验室人员、建筑设施和设备等条件的要求。 应符合《实验室生物安全通用要求》（GB 19489-2004）对II级生物安全实验室（BSL-2）的各项要求。 实验室的质量保证按本规范第八章规定执行。 实验室安全防护按本规范第七章规定执行。 4 HIV抗体检测的目的和要点 4.1 HIV抗体检测的目的 4.1.1 HIV抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查。 4.1.2 以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势而进行的检测，检测的人群包括各类高危人群和一般人群。 4.1.3 以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状况而进行的检测，包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。 4.1.4 以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。 4.2 HIV抗体检测的要点 4.2.1 筛查试验阳性不能出阳性报告。 4.2.2 严格遵守实验室标准操作程序（SOP）。 4.2.3 严格按照试剂盒说明书操作。 4.2.4 注意防止样品间交叉污染。

HIV抗体检测技术规范

HIV抗体检测技术规范 1 范围 本章规定了HIV抗体的检测方法、程序、结果报告、检测策略及质量控制。适用于各级各类医疗机构、疾病预防控制机构、检验检疫机构、采供血机构及卫生保健机构。可作为对HIV感染者诊断和监测的实验室依据。 2 规范性引用文件 《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》（中华人民共和国卫生行业标准，WS293-2008） Guidance for HIV testing in the Western Pacific Region. WHO Draft 19 July 2008. Statement from the Surveillance and Survey Working Group and the Laboratory Working Group to the Office of the Global AIDS Coordinator.26 Nov.2006. Guidelines for the use of the BED assay for incidence estimation and surveillance in resource-limited countries. Atlanta, 5 June 2006. Revised Guidelines for HIV Counseling, Testing, and Referral. U.S. CDC 2001. Current HIV-2 diagnostic strategy overestimates HIV-2 prevalence in China. Journal of Medical Virology,

艾滋病检测点标准操作规程(胶体金法)

HIV抗体检测标准操作规程（SOP文件） 1、目的： 为了规范本卫生院艾滋病检测点的正常运行，保证艾滋病抗体检测的准确，确保实验室生物安全，特制定本操作规程。 2、适用范围： 适用于本卫生院艾滋病抗体检测从标本的采集、处理、检测到报告的全过程。 3、职责： 各检测工作人员按标准操作规程进行艾滋病抗体检测，本院艾滋病检测工作领导小组负责对检测活动全过程及各项生物安全措施执行情况进行监督。 4、标准操作程序： 4.1样品的采集和处理 4.1.1样品的采集： 4.1.1.1血清样品采集：用真空采血管抽取5mL静脉血，室温下自然放置1-2小时，待血清凝固和血块收缩后在用4000rmp离心15min，吸出血清备用。 4.1.1.2抗凝血样品采集：用加有抗凝剂的真空管或用消毒注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管，反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。 4.1.1.3采样注意事项： 4.1.1.3.1采集样品应按临床采血技术规范及试剂盒说明书要求进行。 4.1.1.3.2采集标本时应注意安全，直接接触HIV感染者或艾滋病病人血液和体液的操作应戴双层手套。 4.1.2样品的保存： 用于抗体检测的血清或血浆样品应存放与-20℃以下，短期（1周）内进行检测的样品可存放于2-8℃。 4.1.3样品的运送： 4.1.3.1实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类、采样时间。

4.1.3.2将试管放入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒。在试管的周围垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。 4.1.4样品的接收： 4.1.4.1含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的工作人员打开，用后的包裹应进行消毒。 4.1.4.2核对标本与送检单，检查样品管有无破损及遗漏。如发现遗漏应立即将尚存留的样品移出、对样品管和盛器消毒，同时还要报告有关领导和专家。 4.2检验方法和步骤 4.2.2快速检测法（胶体金法） 4.2.2.1原理 采用胶体金免疫技术和层析原理，定性测定血清样本中的HIV1+2抗体。 4.2.2.2操作步骤 4.2.2.2.1将标本平衡至室温。 4.2.2.2.2将所需数量的测试卡从包装盒中拿出平衡至室温，打开铝箔包装袋，平置于台面上并编号（与样本编号相对应）。 4.2.2.2.3用微量加样器取试剂说明书规定的样本血清或血浆，加到测试卡的加样处。 4.2.2.2.4在试剂说明书规定的时间内观察结果。 4.2.2.3结果判定： 4.2.2.3.1阳性：在检测区和对照区位置出现两条紫红色条带。如果检测区的条带隐约可见，建议对该样本重复试验，并使用其他厂家的试剂确认。 4.2.2.3.2阴性：只在对照区出现一条紫红色条带。 4.2.2.3.3无效：对照区未出现紫红色条带。 4.2.2.3.4注意：在规定的时间内不论测试区内的色带颜色深浅与否均应判为阳性。 4.3仪器的使用和维护 4.3.1设立常用仪器的维护制度，以保证正常运转；根据使用情况更换必要的部件： 4.3.2冰箱 定期检查温度并作好记录，必须每天检查和记录冷冻和冷藏室的温度。 4.3.3定期检查其他仪器设备。 4.4 HIV抗体筛查结果的记录、解释与报告 4.4.1筛查试验呈阴性反应出具HIV抗体阴性报告。 4.4.2筛查试验呈阳性反应，可出具“HIV抗体待复检”报告，不能出阳性报告。同时应尽快进行以下处理： 4.4.2.1填写HIV抗体筛查报告，经检测者、复核者和签发者审核签字。 4.4.2.2尽可能重新采集受检者的血样。

常用的HIV诊断方法

HIV/AIDS艾滋病诊断是一个十分严肃的问题，任何诊断的错误结果无论是假阴性还是假阳性，对家庭和社会都会造成十分严重的后果。HIV检测是诊断HIV感染及艾滋病的重要实验室依据之一，要知道是否感染了HIV可以通过检测病毒的抗体、抗原、核酸或通过病毒培养来确定。常用于诊断HIV/AIDS的方法是HIV抗体检测，它是诊断HIV/AIDS的主要指标，也是世界卫生组织和我国卫生部推荐使用的HIV感染诊断方法。为了最大限度地保证诊断结果准确，HIV诊断采用特殊的检测策略，即先用敏感性高的初筛试剂进行初筛，如果阳性再用特异性强的确认试剂进行确认。检测HIV抗体常用的初筛方法有酶联免疫吸附试验(ELISA)、凝集试验和各种快速诊断方法，确认的方法有蛋白印迹法(WB)、放射免疫沉淀试验(RIP)、间接免疫荧光试验(IFA)等。一般先用ELISA做初筛试验;如果阳性，再用蛋白印迹法来确认。以下介绍一下较常用的HIV抗体测定的方法。 一．初筛试验方法 1．酶联免疫吸附试验（ELISA） 酶联免疫吸附试验简称酶标法，是最常用初筛检测方法，在HIV抗体的测定中有四种模式：间接法、双抗原夹心法、捕获法和竞争法，其中以间接法用的最多。 1）间接法：将HIV抗原纯化后固定于微孔板上，然后加入待测标本，清洗后加酶标记抗人免疫球蛋白（IgG），清洗后加入底物，产生有色反应即为阳性。（见图1） 2）双抗原夹心法：将HIV抗原固定于微孔板上,然后加入待测标本，清洗后加入酶标记的HIV抗原，清洗后加入底物，产生有色反应即为阳性。（见图2）

3）捕获法：将非特异性的兔抗人免疫球蛋白抗体固定于微孔板上，然后加入待测标本,清洗后加入酶标记的HIV抗原，清洗后加入底物，产生有色反应即为阳性。（见图3） 4）竞争法：：将HIV抗原固定于微孔板上,然后同时加入待测标本和一定数量的酶标HIV抗体，如果标本中有HIV抗体,即与加入的酶标HIV抗体竞争结合固定在微孔板上的抗原，标本中HIV抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体就愈少，清洗后加入底物。结果判断与间接法相反，产生有色反应即为阴性，无色反应的为阳性（见图4）

HIV抗体检测

HIV抗体检测

第二章 HIV抗体检测 1 范围 本章规定了HIV抗体的检测方法、检测程序、检测报告及检测策略，适用于各级各类医疗机构、疾病预防控制机构、检验检疫机构、采供血机构及卫生保健机构。可作为对HIV感染者/AIDS病人的诊断、报告和处理的实验室依据。 2 规范性引用文件 Revised recommendations for the selection and use of HIV antibody tests. WHO/UNAIDS Revised version 2001. 实验室生物安全通用要求（GB 19489-2004）。 3 HIV抗体检测实验室 应符合《全国艾滋病检测工作规范（1997年版）》中对检测实验室人员、建筑设施和设备等条件的要求。 应符合《实验室生物安全通用要求》（GB 19489-2004）对II级生物安全实验室（BSL-2）的

各项要求。 实验室的质量保证按本规范第八章规定执行。 实验室安全防护按本规范第七章规定执行。 4 HIV抗体检测的目的和要点 4.1 HIV抗体检测的目的 4.1.1 HIV抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查。 4.1.2 以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势而进行的检测，检测的人群包括各类高危人群和一般人群。 4.1.3 以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV 感染状况而进行的检测，包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。4.1.4 以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。 4.2 HIV抗体检测的要点 4.2.1 筛查试验阳性不能出阳性报告。 4.2.2 严格遵守实验室标准操作程序（SOP）。 4.2.3 严格按照试剂盒说明书操作。 4.2.4 注意防止样品间交叉污染。

艾滋病检测质量控制试题

艾滋病检测质量控制试题 （总分：100分） 单位：姓名：得分： 一、填空题：（30分，每空2分） 1、常规HIV抗体检测分为和。 2、在艾滋病病毒感染的窗口期进行HIV抗体检测，结果呈 ，这段时期 已具有 ，时间一般为 。 3、WHO推荐，在为病人提供医疗服务时，无论是血液还是体液，也不论它们 是阳性还是阴性，都应当采取 原则。 4、艾滋病职业暴露的处理原则包 括 、 、和 。 5、HIV检测实验室污物处理的推荐消毒方法为： 。 6、质量管理包 括 、 、 。 二、判断题：（27分，每题3分） 1、HIV抗体快速检测结果阳性即表示受检者已感染HIV。（） 2、HIV抗体快速检测结果阴性一定表示受检者未感染HIV。（） 3、HIV确证结果为阳性，表明受检者感染了HIV。( ) 4、对HIV抗体不确定样本应进行追踪检测。（） 5、艾滋病检测点经现场验收并在卫生行政部门备案后可开展检测工作。（） 6、艾滋病检测点的技术人员需要有相关的检验或医学知识、经过县级以上相关专业技术部门培训并取得合格证书。（） 7、快速检测中，只要检测带出现阳性反应，就可以判断为阳性结果。（） 8、艾滋病检测点必须与艾滋病筛查实验室建立密切的联系，并接受筛查实验室的技术指导和督导。（） 9、艾滋病检测点发现的艾滋病抗体筛查阳性反应样品必须及时送艾滋病 筛查实验室或确证实验室，不得擅自处理。（） 三、问答题：（43分） 1、简述快速检测试剂使用要求。（7分）

2、艾滋病检测点必须具备的条件有哪些？（8分） 3、简述HIV抗体快速检测的原理。（8分） 4、简述艾滋病快速检测点的检测程序。（8分） 5、请分别阐述HIV职业暴露的预防及暴露后的处理原则。（12分）

艾滋病检测

艾滋病检测 包括筛查试验(含初筛和复检)和确证试验。HIV1/2抗体筛查方 法包括ELISA法、化学发光法或免疫荧光试验、快速检测(斑点ELISA和斑点免疫胶体金或胶体硒快速试验、明胶颗粒凝集试验、 免疫层析试验)等，确证试验常用的方法是免疫印迹法。 筛查试验呈阴性反应可出具HIV1/2抗体阴性报告，见于未被 HIV感染的个体，但处于窗口期的新近感染者筛查试验也可呈阴性 反应。若呈阳性反应，应用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂 家的试剂进行重复检测，或另外两种不同原理或不同厂家的试剂进 行重复检测，如两种试剂复测均呈阴性反应，则为HIV抗体阴性;如 有一种或两种试剂呈阳性反应，需进行HIV抗体确证试验。确证试 验无HIV特异性条带产生，报告HIV1/2抗体阴性。确证试验出现 HIV1/2抗体特异带，但不足以判定阳性，报告HIV1/2抗体不确定，可在4周后随访。如带型没有进展或呈阴性反应，则报告阴性;如随 访期间发生带型进展，符合HIV抗体阳性判定标准则为HIV抗体阳性，如带型仍不满足阳性标准，继续随访到8周。如带型没有进展 或呈阴性反应则报告阴性;满足HIV阳性诊断标准则报告阳性，不满 足阳性标准可视情况决定是否继续随访。经确证试验HIV1/2抗体阳 性者，出具HIV1/2抗体阳性确认报告，并按规定做好咨询、保密和 报告工作。 抗原检测：主要检测HIV1的P24抗原核心蛋白。感染早期和晚期，P24抗原以游离形式出现，多数情况下以抗原抗体复合物形式 存在。P24一般在感染后1-2周内即可检出，随P24抗体产生而减少。一般持续0.5-5个月，如持续存在或再度出现则提示预后不良。 HIV感染人体后，出现CD4+T淋巴细胞进行性减少，CD4+/CD8+T 细胞比值倒置，细胞免疫功能受损。如果进行HAART，CD4+T淋巴细 胞在病程的不同阶段可有不同程度的增加。目前常用的CD4+T淋巴 细胞亚群检测方法为流式细胞术，可以直接获得CD4+T淋巴细胞数

艾滋病病毒抗体快速检测技术手册

艾滋病病毒抗体快速检测技术手册

艾滋病病毒抗体 快速检测技术手册 （2011年版） 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心

前言 近年来，在党和政府的高度重视和领导下，各项艾滋病防治措施得到有效落实，艾滋病疫情快速上升的势头有所减缓， 病死率有所下降，艾滋病病毒感染者、病人的生活质量明显改 善，社会歧视有所减少。但我国艾滋病流行形势依然严峻，艾 滋病传播方式更加隐蔽，性传播已成为主要的传播途径，男男 性行为传播上升明显，许多感染者和病人尚未发现。2009年中 国艾滋病疫情估计有74万HIV感染者，但截至2010年底，通过网 络直报累计数只有38.6万人，还有近一半的感染者和病人没有被 发现。 为了尽早、尽快发现感染者，《国务院关于进一步加强艾 滋病防治工作的通知》（国发【2010】48号），明确提出要进 一步加强监测检测网络建设，依托现有医疗卫生资源，配备必 要的设备和人员，扩大检测服务范围，推广使用快速简便的检 测方法，提高检测可及性。组织各级各类医疗卫生机构主动开 展艾滋病病毒检测咨询。目前我国已经建成了较为完整的艾滋 病检测实验室网络，截止2010年底，全国共有318个艾滋病检测 确证实验室、10944个艾滋病检测筛查实验室，它们在艾滋病检 测过程中发挥着不可替代的主导作用。但我国地域辽阔，在一 些有检测需求、尚不具备条件建立实验室的单位，包括医疗机 构、农村乡（镇）卫生院、社区卫生服务中心和艾滋病自愿咨 询点等，需要建立快速检测点，以扩大检测覆盖面、发现更多 的感染者。为规范、有效地开展艾滋病病毒快速检测，在《全 国艾滋病检测技术规范（2009年版）》的基础上，国家参比实 验室对快速检测的使用进行了细化，在广泛征求专家和基层工 作人员意见的基础上，起草了《艾滋病病毒抗体快速检测技术 手册》，以下简称《手册》。

HIV抗体快速检测的方法与步骤

标题：HIV抗体快速检测的方法与步骤 1、目的 采用胶体金免疫技术和层析原理，定性测定全血或血浆样本中的HIV1/2型抗体。同时规范本实验室HIV抗体检测的方法与步骤，保证检测质量和实验工作有序进行。 2、适用范围 适用于本中心艾滋病筛查中心实验室及艾滋病确证实验室。 3、职责 3．1 检测人员须严格遵守本操作程序。. 3．2 实验室负责人负责监督检测人员履行相关职责。 4、操作程序 4．1 HIV抗体快速检测步骤： 4.1.1 实验前检测环境应符合要求（温度：湿度：），检查仪器设备是否运行正常。 4.1.2 开启实验室环境消毒设施和生物安全柜紫外线灯进行消毒（不少于30min）。同时取样品与检测试剂放置室温下平衡30min。 4.1.3核对样品编号，填写于《HIV抗体快速检测实验室原始记录》，实验按填写顺序依次加样。 4.1.4 严格按照试剂操作说明书操作，并做好质量控制（见《质量控制程序》）。 4.1.5 将检毕样品分类放入血清库保存，关闭生物安全柜及其它设备，清理消毒实验室。 4.1.6 及时填写实验室各相关记录并发出报告。 4．2 检测方法： 血清、血浆样本： 4.2.1HIV快速抗体快速检测细则： 4.2.1.1 按说明要求，采集静脉的血清、血浆或全血应在无菌条件下、并避免样品溶血。 4.2.1.2 将待测标本从储存条件下取出，平衡至室温并编号。 4.2.1.3 将所需数量的测试试剂从包装盒中取出来平衡至室温，打开铝箔包装袋，平衡于台面。 4.2.1.4用微量加样器取60UL血清或血浆样本，或用试剂盒内所配塑料滴管吸

取样本，垂直滴加两滴于试剂的加样处。 4.2.1.5加样后，阳性标本可在1-30分钟内检出。经过试验确证，反应时间（从加样后计算起）超过30分钟将对实验结果的观察造成影响，因此，建议30分钟内最终观察并记录实验结果。 4.2.1.6 结果分析及判断标准： 阴性：测试条/卡只在对照区位置出现一条紫红色条带。 阳性：测试条/卡在检测区和对照区位置各出现一条紫红色条带如果检测区的紫红色条带隐约可见，建议对该样本重复试验，并使用其他方法确认。 5、支持性文件 5．1 《全国艾滋病检测工作管理办法》 5．2 《全国艾滋病检测技术规范》（2015版） 5.3 《人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒说明说》 6、相关记录表单 6．1《HIV抗体快速检测原始记录》 6．3《I级生物安全实验室使用登记表》 6．4《艾滋病检测实验室检测试剂使用登记表》 6．5《HIV抗体检测样品血清库登记表》

两种HIV抗体检测方法与确证方法比较

两种HIV抗体检测方法与确证方法比较 发表时间：2012-07-24T16:04:40.597Z 来源：《中外健康文摘》2012年第13期供稿作者：马金旗 [导读] 两种HIV抗体检测方法与确证方法比较，选择适合输血前筛查HIV感染患者的方法。 马金旗 (中南大学湘雅三医院湖南长沙410013) 【中图分类号】R575【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）13-0280-02 【摘要】目的两种HIV抗体检测方法与确证方法比较，选择适合输血前筛查HIV感染患者的方法。方法用酶联免疫吸附试验(抗- HIV ELISA)对48621例输血前标本进行HIV抗体筛查，对阳性标本进行金标法测定，同时随机抽取的20例阴性标本也进行金标法测定，作为对照。对任一试剂检测阳性的标本和对照标本都按规定送检HIV确诊实验室进行确证［1］。结果抗-HIV ELISA法特异性较高，达92.0%，HIV金标法特异性高，达98.7%，与确证方法接近。结论抗-HIV ELISA法特异性较高，特别适合批量标本的检测，可以作为临床HIV初筛试验。用金标特异性高操作简便，快速，对ELISA法检测出的阳性标本进行复检，能较快确认标本HIV阳性可能性，评估感染的风险程度。两种方法可相互结合，及时对患者做出诊断，及早采取措施保护职业暴露人员［2］。 【关键词】HIV AIDS ELISA人类免疫缺陷病毒获得性免疫缺陷综合征酶联免疫吸附试验 HIV抗体检测职业暴露 ADIS是一种严重危害人类健康的疾病，当前我国HIV流行呈逐年上升的趋势［3,4］，在一些高危人群中尤为严重。人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）是获得性免疫缺陷综合征（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS）的病原体，以侵犯CD4细胞为主，造成细胞免疫功能缺损，并继发体液免疫功能缺损为基本特征的传染病。其传播途径有三条：性接触传播、血液传播和母婴传播。血液传播途径与临床输血和接受血液制品相关，为了区分患者是否是由于接受血液和血液制品而感染HIV，我们对患者输血前血清样本进行HIV抗体检测。 对输血前标进行HIV抗体筛查，对阳性标本进行金标法测定，同时随机抽取的20例阴性对照标本也进行金标法测定。对阳性标本和对照标本送检HIV确诊实验室进行确证实验，现报道如下。 1 材料和方法 1.1 标本 2009年9 月至1日至2012年2月我科输血患者输血前的标本48621例分离血清后用ELISA法检测HIV抗体，初筛阳性55例，另随机抽取20例阴性结果的标本。 1.2 试剂 HIV ELISA试剂盒（珠海丽珠试剂股份有限公司提供）；胶体金试剂（天津中新科炬生物制药有限公司提供）。 1.3 仪器 RT-6100酶标工作站 (深圳雷杜生命科学股份有限公司)、RT-3000洗板机(深圳雷杜生命科学股份有限公司)。 1.4 试验方法用抗-HIV ELISA法检测全部标本,对阳性标本进行双孔复检，一孔或两孔阳性均视为阳性，获初筛阳性血清55份。对55份阳性标本和随机抽取20例阴性结果的标本用金标法检测，并送检此75份血清至湖南省疾病预防控制中心的 HIV确证实验室进行确证实验。以上各项试验操作及结果判读均严格按操作规程和试剂说明书进行,所有试剂均在有效期内。 2 结果 确认结果阳性即认为感染HIV病毒，阴性即认为未感染，在此基础上得出ELISA法和金标法的真实性指标（见表3）。金标法与确证方法的符合率很高可达到98.7%，漏检率低0.4%（见表3），ELISA法无漏检作为初筛方法是一种较好的方法，其特异性不是很高92.0%，用金标法对其阳性标本进行复查，可以得出与确证方法相近的结果。 表1 59例ELISA法、金标法和确证法检测结果分布情况（例数） 表2 两组患者术中、术后情况比较 表3 ELISA 、金标法与确证方法的符合率 3 讨论 抗HIV检测是一项较为特殊的检测，会涉及病人隐私、工作人员的职业防护、国家传染病防治等许多方面。出现假阳性会给病人造成巨大的精神压力，甚至会引起医疗纠纷，假阴性会漏检感染者，不利于早发现，早诊断，早治疗，早控制病情。 HIV无症状感染期可长达6个月至10年，最后发展为艾滋病，出现中枢神经系统等多器官多系统损害，合并各种条件致病菌、寄生虫、其它病毒感染，或并发肿瘤。5年死亡率约为90%，死亡多发生在出现临床症状的2年之内[5]。 血液传播途径与临床输血和接受血液制品相关，如果输入被HIV感染献血员的血液可能会感染HIV,即输血感染HIV，为了区分是输血前还是输血后感染，输血患者输血前应做抗－HIV的检测，这样既可以保护相关工作人员，也可以减少医疗纠纷，维护医院利益，还可以早发现感染患者，以便治疗及控制疫情。选择敏感性、特异性都高的检测方法有助HIV感染的诊断，HIV抗体的检测是最主要的检查方法，也是疾病预防控制中心规定的初筛实验室的检测方法［1］。 抗-HIV ELISA法特异性较高，特别适合批量标本的检测，可以作为临床HIV初筛试验。用金标特异性高,操作简便、快速，对ELISA法检测出的阳性标本进行复检，能较快确认标本HIV阳性可能性，评估感染的风险程度。两种方法可相互结合[1]，及时对患者做出诊断，及

两种HIV抗体检测方法与确证方法比较

两种HIV抗体检测方法与确证方法比较 摘要】目的两种HIV抗体检测方法与确证方法比较，选择适合输血前筛查HIV 感染患者的方法。方法用酶联免疫吸附试验(抗-HIV ELISA)对48621例输血前标本进行HIV抗体筛查，对阳性标本进行金标法测定，同时随机抽取的20例阴性标本也进行金标法测定，作为对照。对任一试剂检测阳性的标本和对照标本都按规定送检HIV确诊实验室进行确证［1］。结果抗-HIV ELISA法特异性较高，达92.0%，HIV金标法特异性高，达98.7%，与确证方法接近。结论抗-HIV ELISA法特异性较高，特别适合批量标本的检测，可以作为临床HIV初筛试验。用金标特异性高操作简便，快速，对ELISA法检测出的阳性标本进行复检，能较快确认标本HIV阳性可能性，评估感染的风险程度。两种方法可相互结合，及时对患者做出诊断，及早采取措施保护职业暴露人员［2］。 【关键词】HIV AIDS ELISA人类免疫缺陷病毒获得性免疫缺陷综合征酶联免疫吸附试验 HIV抗体检测职业暴露 ADIS是一种严重危害人类健康的疾病，当前我国HIV流行呈逐年上升的趋势［3,4］，在一些高危人群中尤为严重。人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）是获得性免疫缺陷综合征（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS）的病原体，以侵犯CD4细胞为主，造成细胞免疫功能缺损，并继发体液免疫功能缺损为基本特征的传染病。其传播途径有三条：性接触传播、血液传播和母婴传播。血液传播途径与临床输血和接受血液制品相关，为了区分患者是否是由于接受血液和血液制品而感染HIV，我们对患者输血前血清样本进行HIV抗体检测。 对输血前标进行HIV抗体筛查，对阳性标本进行金标法测定，同时随机抽取的20例阴性对照标本也进行金标法测定。对阳性标本和对照标本送检HIV确诊实验室进行确证实验，现报道如下。 1 材料和方法 1.1 标本 2009年9 月至1日至2012年2月我科输血患者输血前的标本48621例分离血清后用ELISA法检测HIV抗体，初筛阳性55例，另随机抽取20例阴性结果的标本。 1.2 试剂 HIV ELISA试剂盒（珠海丽珠试剂股份有限公司提供）；胶体金试剂（天津中新科炬生物制药有限公司提供）。 1.3 仪器 RT-6100酶标工作站 (深圳雷杜生命科学股份有限公司)、RT-3000洗板机(深圳雷杜生命科学股份有限公司)。 1.4 试验方法用抗-HIV ELISA法检测全部标本,对阳性标本进行双孔复检，一孔或两孔阳性均视为阳性，获初筛阳性血清55份。对55份阳性标本和随机抽取20例阴性结果的标本用金标法检测，并送检此75份血清至湖南省疾病预防控制中心的 HIV确证实验室进行确证实验。以上各项试验操作及结果判读均严格按操作规程和试剂说明书进行,所有试剂均在有效期内。 2 结果 确认结果阳性即认为感染HIV病毒，阴性即认为未感染，在此基础上得出ELISA法和金标法的真实性指标（见表3）。金标法与确证方法的符合率很高可达到98.7%，漏检率低0.4%（见表3），ELISA法无漏检作为初筛方法是一种较好的方法，其特异性不是很高92.0%，用金标法对其阳性标本进行复查，可以得出与确证方法相近的结果。

艾滋病快速抗体检测标准操作规程

艾滋病快速抗体检测标准操作规程(sop) 编写日期：2012-7-4 报送日期：2012年7月 生效日期：2012年7月 审批人员：毕永章 版本号: 1.0 批准日期:2012-7-4 审阅人:毕永章 1、目的 1.1本SOP规定本实验室HIV快速检测标准操作程序。 1.2本SOP为本院临床检验室HIV检测操作手册。 2、范围 2.1实用于本院临床检验室HIV1+2抗体快速检测。 3、责任和要求 3.1为保证HIV检测结果准确无误，实验室操作人员请按此标准操作程序要求操作。 3.2凡违反此SOP操作程序的检测，将视为无效检验。 4、试剂与方法 4.1试剂：人类免疫缺陷病毒（HIV1+2）抗体检测试剂盒。 4.2方法：胶体金法。 5、检测原理 5.1本检测采用基因工程制备的gP41、gP120、gP36抗原为包被和金标抗原，应用双抗原夹心法检测HIV抗体。当待检标本中含HIV抗体时，先与金标抗原反应，形成抗体—金标抗原复合物，在虹吸作用

下向前移动，遇到包被抗原形成抗原—抗体—金标抗原复合物，并出现红色沉淀线。 6、样本要求及实验条件 6.1样本为血清或血浆，无明显溶血、污染、混浊及脂质。 6.2样本在2小时内完成HIV快速检测，注意无菌操作。 6.3检测在8——30℃下进行，多余试剂存冰箱2——8℃保存，检测前需要与室温平衡。 6.4样本冷冻保存一年以上，申请上报经领导批复后方能作消毒消毁处理。 7、检测流程 7.1以发现更多的HIV感染者为目的，本实验室只做初筛检测。 7.2阳性结果报送CDC复检，附HIV检测流程图。 8、检测方法 8.1撕开HIV1+2检测板包装袋，取出检测板水平放置于实验台。8.2在S加样孔中滴2——3滴血清或血浆，不再加稀释液。 8.3在15——30分钟内观察结果，超时需重新检测。 9、检测结果判断 9.1阳性：出现质控线和任意一条或两反应线均为阳性。 9.2阴性：仅在质控区出现一条红线，则实验结果为阴性。 9.3无效：无质控红线，或只有反应线，检测无效。须重新检测。 10、结果解释与咨询 10.1阳性结果解释为可疑或待复查，填HIV抗体复检表（HIV抗体

艾滋病抗体检测初筛实验室资格评审考核标准

艾滋病抗体检测初筛实验室资格评审考核标准 一、人员要求： 有3名以上的医技人员，其中中级技术职称人员1名以上（采供血机构从事HIV抗体检测人员须具有技师以上卫生技术职称）；从事病毒血清学检测技术工作2年以上；接受过省疾病预防控制中心艾滋病确认实验室举办的HIV抗体检测技术培训，并获得合格证书。 二、设备要求： （一）有独立的实验用房，实验室墙面、地板及工作台面必须采用耐酸、耐碱材料，工作台面上方按规定安装紫外灯。实验室内污染区和清洁区标志明显，易于区分。 （二）具有从事艾滋病抗体检测工作所必需的仪器设备并能正常使用，通过强制性计量检定合格。 仪器设备包括： 1、酶标读数仪和洗板机各1台； 2、可调精确微量移液器（10—50ul;50—250ul;1000ul）各2支； 3、普通冰箱1台； 4、低温冰箱1台； 5、离心机1台； 6、恒温培养箱或水浴锅1台； 7、恒温空调设备1台以上； 8、相应的消毒与污物处理设施。 （三）所用检测试剂齐全,符合国家质量要求，并经国家药品监督管理局批准，有批准检验号和注册文号，经过检定合格且在有效期内。 三、实验室质量管理 （一）实验室工作管理制度健全并上墙。包括：样品采集运送与保存制度，样品处理制度，实验室消毒隔离制度，检测仪器使用、保管与维护制度，安全和事故处理制度，实验操作规程等，并遵照执行。

（二）仪器设备有专人管理。千元以上仪器设备建卡，万元以上仪器设备建档（包括使用说明书，使用、维护记录等，并按照计量检定的规定进行检定且有检定证书）。 （三）采用国家和省艾滋病抗体检测确认实验室规定的检测方法进行检测，遵守操作规程，不得自行更改检测方法及操作规程。 （四）检测所用的仪器、试剂必须采用国家推荐的产品，不得使用过期试剂或劣质品牌试剂。 （五）原始记录有专用记录本。记录内容包括：送样单位（样品来源）、样品名称、收（采）样日期、送（采）样人；被采样人姓名、性别、年龄、职业、国籍或民族、住址；检测日期、检测方法、所用试剂名称及厂家、批号、有效期；空白、阴性和阳性及样品检测所呈现现象及结果等； （六）原始记录书写规范。要用钢笔或签字笔，不得用铅笔和圆珠笔书写，字迹清晰。如记录有错误应在错误处划2条横线，在其上方写下纠正文字，不随意涂改、删减，不得在其它纸上记录然后再誊抄。 （七）检测报告按照《全国艾滋病检测工作规范》中规定的“HIV抗体初筛阳性送检化验单”统一格式填写，检验人员签名齐全，文字简洁，字迹清楚。检测报告书由检验人员填写或打印。 （八）原始记录和检验报告书必须经同一检测室的审核人员审核签字，由检测机构负责人终审签字发出。 四、检测资料的档案管理 检测技术资料完整，原始记录及有关资料随检测报告书编号按顺序存档。 五、考核方法 根据本考核标准要求，逐条逐项进行资料核查，同时进行现场条件考核及质控样品考核，符合标准要求的，由现场考核组写出书面意见，省艾滋病抗体检测初筛实验室资格评审委员会评审后，报省卫生厅审批，颁发资格证书。

HIV抗体检测实验室结果解释、报告工作规程

1目的 规范HIV抗体检测的结果解释、报告、追踪和处理的工作。 2适用范围 HIV抗体筛查、复检、确认检测工作 3 职责 3.1 检测人员负责检测原始记录的记录，检测报告的编制、审核，检测样品的登记等工作。 3.2 质量监督员负责监督，并做好相关的记录。 3.3 授权签字人负责检测报告的签发。 4 工作规程 4.1结果解释: 4.1.1 HIV抗体筛查试验阴性: 报告“HIV抗体阴性”，表示受检者未受HIV病毒感染。但由于HIV感染到能在血液中查到HIV抗体有一个“窗口期”，因此建议3个月后复查以排除感染“窗口期”。 4.1.2“窗口期”: 是指从被感染到身体产生足够多的特定抗体的这段时间，“足够多”是指能被我们当前的测试手段检测出来。人被感染后身体会制造抗体来对抗病毒，当身体产生足够多的抗体后，抗体测试将呈阳性。 4.1.3 HIV抗体筛查试验阳性: 不能出具阳性报告，需进行HIV抗体确证试验。如HIV抗体确证试验为阳性（确证试验结果判定参见《HIV抗体确证检测操作规程》），则报告“HIV 抗体阳性”，表示受检者已受到HIV病毒感染。 4.1.4 HIV抗体确证试验结果不能肯定则报告“HIV抗体不确定”。不确定结果是指在进行HIV抗体检测的确认试验时，试验条带上出现了蛋白带型，但按照《全国艾滋病检测工作规范》的要求，这些带型不足以诊断为HIV抗体

阳性。出现不确定结果应随访复检，每3个月随访复检1次，连续2次，共6个月。如果检测时暴露时间已超过3个月，则在3个月后随访1次即可。将前后2份样品同时检测，仍呈不确定或阴性则报告HIV抗体阴性，表明受检者没有感染；如果在随访期间发生带型进展，符合HIV抗体阳性判定标准则报告HIV-1或HIV-2抗体阳性。表明受检者已经感染HIV。

HIV抗体检测的标准操作程序(ELISA法和快速法)

HIV测定（ELISA法）标准操作规程 1、检验目的 应用双抗原夹心酶联免疫法原理（ELISA）定性检测人血清、血浆标本中的HIV（1+2）型抗体的测定，用于HIV感染的辅助诊断，抗HIV药物治疗的效果的监测。 2、原理 采用夹心ELISA方法检测血清或血浆标本中人类免疫缺陷病毒HIV（1+2）型抗体，预包被高纯度基因重组HIV（1+2）型抗原，可与标本中的抗-HIV抗体反应，加入HRP标记HIV （1+2）型抗体抗原结合，形成抗原－抗体－酶标抗原复合物，然后加入TMB底物产生显色反应。通过酶标仪检测吸光度（OD值），根据OD值判断HIV抗体的存在与否。 3、性能参数 灵敏度高（0.5ng/ml） 4、标本要求 （1）标本类型：血清，血浆。 （2）标本采集：见标本采集手册 （3）标本储存和运输：室温放置不超过8小时，2-8℃不超过72小时，-20℃可长期保存，应避免反复冻融 （4）标本拒收状态：细菌污染，严重溶血或脂血标本不能作测定。本文来自检验地带网 5、容器和添加剂类型 6、试剂 （1）试剂名称：人类免疫缺陷病毒HIV(1+2)型抗体诊断试剂盒。 （2）试剂生产厂家：上海科华生物工程股份有限公司 （3）包装规格：96T/Kit （4）试剂盒组成：①、HIV酶标板；②、HIV酶标试剂；③、HIV（1+2）型阳性及阴性对照血清；④、显色剂A液和B液；⑤、此外还有浓缩洗涤液、终止液、自封袋、封板膜、说明书等。 7、仪器设备： 酶标仪：ZS板式，北京普朗生物技术有限公司，每年由计量单位进行一次校准。 洗板机：DNM-9620型，北京普朗生物技术有限公司，每年由国家计量单位进行一次校准。移液器：上海求精，每年由国家计量单位进行一次校准。 8、校准程序 9、操作步骤 ①、配液：将50ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水25倍稀释至1000ml备用。 ②、编号：将样品对应微孔按序编号，每板设阴性对照2孔、阳性对照3孔，空白对照2孔。 ③、加样：分别在相应孔加入待检标本、阴性、阳性对照100μl，用封板膜封板后置37℃温育60min。 ④、洗涤：小心把封板膜揭去，用洗板机选择5次程序，洗板后在干净纱布上拍干。 ⑤、加酶：每孔加酶结合物100μl（空白对照孔除外），充分混匀，用封板膜封板后置37℃温育30min。 ⑥、洗涤：小心把封板膜揭去，用洗板机选择5次程序，洗板后在干净纱布上拍干。 ⑦、显色：每孔加入底物缓冲液50μl，TMB 50μl，轻轻振荡混匀，封板后置37℃避光显色10min。 ⑧、测定：每孔加终止液50μl，轻轻振荡混匀。设定酶标仪波长为450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630 nm），空白调零，读取各孔OD值。