凝胶电泳技术中的常见问题与故障排除

凝胶电泳技术中的常见问题与故障排除

凝胶电泳技术是一种常用的生物分离与分析技术，广泛应用于分子生物学、遗

传学、病毒学、蛋白质研究等领域。然而，在进行凝胶电泳实验时，常会遇到一些问题和故障，这可能会影响实验结果的准确性和可靠性。本文将介绍凝胶电泳技术中的一些常见问题，并提供相应的故障排除方法，以帮助解决实验中的困惑和难题。

1. 样品未呈现预期的电泳结果

当样品未呈现预期的电泳结果时，可能存在以下原因和解决方法：

(1) 样品加载量不足或过多：检查加载体积是否符合实验方案中的要求；如果

加载量过多，可能导致电泳带模糊或扩散；如果加载量不足，可能导致电泳带的强度过低。

(2) 样品处理不当：确保样品在电泳前已经完成相应的处理步骤，如DNA片段

的酶切、RNA的逆转录等。

(3) 缺乏合适的分子量标记物：使用合适的分子量标记物可以更好地确定待测

样品的大小。

(4) 凝胶浓度选择不当：根据待测分子大小选择合适的凝胶浓度，以保证分离

效果。

(5) 电场强度设置不合适：根据待测分子大小和凝胶浓度设置合适的电场强度，以避免分子过快地跑出凝胶。

2. 凝胶溶液聚合不完全或聚合杂质过多

凝胶溶液聚合不完全或聚合杂质过多可能导致凝胶电泳过程中的故障。以下是

一些常见原因和解决方法：

(1) 预聚合剂过期或质量不好：确保使用新鲜且质量良好的预聚合剂。

(2) 常温下保存预聚合液：预聚合液需在4℃下保存，避免过热导致聚合不完全。

(3) 预聚合液pH不适宜：根据所需凝胶的pH要求，调整好预聚合液的pH并

进行彻底混合。

(4) 预聚合液中存在气泡：在配制和混合预聚合液时，尽量避免气泡的产生。

(5) 预聚合液中存在杂质：用滤膜过滤预聚合液，去除杂质。

3. 凝胶电泳带模糊或扩散

当凝胶电泳带出现模糊或扩散时，可能是以下原因导致的：

(1) 电场不稳定：检查电源和电极，确保电场稳定和均匀。

(2) 凝胶浓度选择不当：根据待测分子大小选择合适的凝胶浓度，低浓度凝胶

适用于分离长DNA分子，高浓度凝胶适用于分离短DNA片段。

(3) 电极间距不合适：根据凝胶浓度和待测分子大小设置适当的电极间距。

(4) 卷曲或折叠凝胶：确保凝胶平整、无折叠或卷曲现象，以保证电流的均匀

传导。

(5) 缓冲液浓度不合适：调整缓冲液浓度，使其适应待测分子的离解需求。

4. 臭气或噪音

如果在凝胶电泳过程中出现臭气或噪音，需要进行以下检查和处理：

(1) 电源或电极存在问题：检查电源和电极的接触和质量，确保电流通过完好

的通路。

(2) 凝胶溶液中存在有机物或杂质：使用新鲜的凝胶溶液，去除可能存在的有

机物或杂质。

(3) 缓冲液中添加的试剂缺乏纯度：确保使用纯度高的试剂，避免引入有机物或杂质。

(4) 过高的电压或电流：降低电压或电流，避免过高造成电泳带破裂或离解DNA。

(5) 电源过热：检查电源散热情况，确保电源正常工作。

总结：

凝胶电泳技术是一项重要且常用的实验技术，在实验过程中常会遇到问题和故障。了解这些常见问题的原因和解决方法，可以帮助科研人员准确分析实验结果，并及时排除故障，以保证实验结果的可靠性和准确性。通过不断的实践和掌握有效的故障排除方法，我们可以更好地运用凝胶电泳技术，推动生命科学和医学领域的研究进展。

琼脂糖凝胶电泳常见问题解答

琼脂糖凝胶电泳常见问题解答 核酸分子是两性解离分子，在高于其等电点的电泳缓冲液中，其碱基不解离，而磷酸基团全部解离，核酸分子因而带负电荷，电泳时向正极迁移。琼脂糖主要从海洋植物琼脂中提取而来并经糖基化修饰，为一种聚合链线性分子，使用琼脂糖凝胶作为电泳支持介质，发挥分子筛功能，使得大小和构象不同的核酸分子的迁移率出现较大差异，从而达到分离的目的。琼脂糖凝胶电泳操作简单、快速，通过调整其使用浓度，使得分辨率达到大多数实验的要求，因此成为分离、鉴定、纯化核酸分子的常用方法。但操作过程中仍有不少要注意的问题。 1 凝胶制作 1．1 凝胶浓度配制凝胶的浓度据实验需要而变，一般在0．8％～2．0％之间，如果一次配制凝胶100 ml，没用完的凝胶可以再次融化，但随着融化次数的增加，水分丢失也越多，凝胶浓度则会越来越高，导致实验结果不稳定，补水办法：一是在容器上标记煮胶前的刻度，煮胶后补充相应的水分至原刻度；二是在煮胶前称重，煮胶后补充水至原重量。粗略一点的方法是通过多次较恒定的煮胶条件得出一个经验补水值。以保证凝胶浓度基本维持在原浓度。核酸染色剂溴化乙锭(ethidium bromide)可加在融化的琼脂糖中，终浓度为0．5 t*g ／ml；也可在电泳结束后染色。 1、2 梳板的选用一般每个制胶模具均配有多个齿型不同的梳板，梳齿宽厚，形成的点样孑L容积较大，用于DNA 片段回收实验等；相反，梳齿窄而薄，形成的点样孑L容积就较小，用于PCR产物、酶切产物鉴定等。梳板的选择主要是看上样量的多少而定，一般来说，上样量小时尽量选择薄的梳板制胶，此时电泳条带致密清晰，便于结果分析。另外，每次制胶时都要注意梳齿与底板的距离至少要1 mm，否则，拔梳板时易损坏凝胶孑L底层，导致点样后样品渗漏。当然，点样孑L的破坏还与拔梳板的时间和方法有关，一般凝胶需冷却30 min以上方可拔梳板，应急的情况下可以将成型的凝胶块放4℃冰箱中冷却15 min 左右，拔梳板的方法是将制胶槽放置在电泳槽中的电泳缓冲液中，然后垂直向上慢慢用力，因为有液体的润滑作用，梳板易拔出且不易损坏点样孑L。 2 点样 点样需加上样缓冲液，因为上样缓冲液中加了甘油或蔗糖增加密度，使样品沉入孑L底；指示样品的迁移过程，上样缓冲液中一般加了两种指示剂，溴酚兰和二甲苯青(值得注意的是指示剂并非染色剂，DNA染色剂是溴化乙锭，而且要在紫外光的激发下才能看见桔红色荧光)。上样缓冲液储存液一般为6× (10×)，表示其浓度为工作浓度的六倍。使用时上样缓冲液应稀释到一倍浓度。点样方法是将移液器基本垂直点样孑L，用另一只手帮助固定移液器下端，移液器枪头(Tip)尖端进入点样孑L即可将样品注入孑L内，千万不可将Tip尖插至孑L底，并点上适合的DNA分子量标准，所谓适合是指样品DNA分子量大小应基本在DNA分子量标准范围之内。

SDS-PAGE(聚丙烯凝胶电泳)常见问题及解决方案.

1.配胶缓冲液系统对电泳的影响? 在SDS-PAGE不连续电泳中,制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统,浓缩胶是pH6.7,分离胶pH8.9;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中,其pH 环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低;而CL离子却很高,两者之间形成导电性较低的区带,蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比,这一区带便形成了较高的电压剃度,压着蛋白质分子聚集到一起,浓缩为一狭窄的区带。当样品进入分离胶后,由于胶中pH的增加,呈碱性,甘氨酸大量解离,泳动速率增加,直接紧随氯离子之后,同时由于分离胶孔径的缩小,在电场的作用下,蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。 所以,pH对整个反应体系的影响是至关重要的,实验中在排除其他因素之后仍不能很好解决问题的情况,应首要考虑该因素。 2.样品如何处理? 根据样品分离目的不同,主要有三种处理方法:还原SDS处理、非还原SDS处理、带有烷基化作用的还原SDS处理。 1还原SDS处理:在上样buffer中加入SDS和DTT(或Beta巯基乙醇后,蛋白质构象被解离,电荷被中和,形成SDS与蛋白相结合的分子,在电泳中,只根据分子量来分离。一般电泳均按这种方式处理,样品稀释适当浓度,加入上样Buffer,离心,沸水煮5min,再离心加样。 2带有烷基化作用的还原SDS处理:碘乙酸胺的烷基化作用可以很好的并经久牢固的保护SH基团,得到较窄的谱带;另碘乙酸胺可捕集过量的DTT,而防止银染时的纹理现象。100ul样品缓冲液中10ul20%的碘乙酸胺,并在室温保温30min。 3非还原SDS处理:生理体液、血清、尿素等样品,一般只用1%SDS沸水中煮3min,未加还原剂,因而蛋白折叠未被破坏,不可作为测定分子量来使用。 3.SDS-PAGE电泳凝胶中各主要成分的作用?

电泳常见问题及处理方法

电泳常见问题及处理方法 电泳是一种常用于分离生物分子的实验技术，但在实验过程中常常会遇到一些问题。以下是电泳实验中常见问题及相应的处理方法： **1. ** 电流不稳定或电流为零： - **可能原因：** 电源故障、电极接触不良、电极泄露或电极材料老化。 - **处理方法：** -检查电源设备，确保其正常工作。 -检查电极接触情况，确保良好接触。 -替换老化的电极材料。 **2. ** 样品移动过快或过慢： - **可能原因：** 缓冲液浓度、电场强度、电泳时间等因素影响。 - **处理方法：** -调整缓冲液的浓度，确保适当的离子浓度。 -调整电场强度。 -控制电泳时间，确保合适的分离时间。 **3. ** 电泳带模糊或扩散： - **可能原因：** 样品浓度过高、电场强度过大、电极材料老化等。 - **处理方法：** -减少样品浓度。 -降低电场强度。 -更新电极材料。 **4. ** 电泳带畸变： - **可能原因：** 缓冲液PH值不合适、电极材料污染、样品准备不当等。 - **处理方法：** -调整缓冲液PH值。 -清理电极材料。 -重新准备样品。 **5. ** 电泳槽泄露： - **可能原因：** 电泳槽密封不良、槽体老化等。 - **处理方法：** -检查槽体密封情况。 -更换老化的槽体。 **6. ** 电泳带粘在电极上： - **可能原因：** 电极表面污染、电场强度过大等。 - **处理方法：** -清理电极表面。

-降低电场强度。 **7. ** 电泳结束后凝胶上有色斑： - **可能原因：** 染色不充分、凝胶中存在异物等。 - **处理方法：** -加强染色过程。 -小心操作，避免在凝胶中引入异物。 **8. ** 凝胶破裂： - **可能原因：** 凝胶制备不当、电场强度过大等。 - **处理方法：** -仔细制备凝胶，确保无气泡。 -降低电场强度。 电泳实验中出现问题时，及时采取正确的处理方法是确保实验成功的关键。通过检查设备、调整实验条件和注意样品制备，可以有效避免或解决电泳过程中的常见问题。

琼脂糖凝胶电泳常见问题分析

琼脂糖凝胶电泳常见问题分析

DNA凝胶电泳简介 一、实验原理 DNA电泳是基因工程中最基本的技术，DNA制备及浓度测定、目的DNA片段的分离，重组子的酶切鉴定等均需要电泳完成。根据分离的DNA大小及类型的不同，DNA电泳主要分两类：

1、聚丙烯酰胺凝胶电泳适合分离1kb以下的片段，最高分辨率可达1bp，也用于分离寡核苷酸，在引物的纯化中也常用此中凝胶进行纯化，也称PAGE纯化。 2、琼脂糖凝胶电泳可分离的DNA片段大小因胶浓度的不同而异，胶浓度为0.5～0.6%的凝胶可以分离的DNA片段范围为20bp～50kb。电泳结果用溴化乙锭（EB）染色后可直接在紫外下观察，并且可观察的DNA条带浓度为纳克级，而且整个过程一般1小时即可完成。由于该方法操作的简便和快速，在基因工程中较常用。 二、琼脂糖凝胶 琼脂糖是从琼脂中分离得到，由1，3连接的吡喃型b-D-半乳糖和1，4连接的3，6脱水吡喃型阿a-L-半乳糖组成，形成相对分子量为104～105的长链。琼脂糖加热溶解后分子呈随机线团状分布，当温度降低时链间糖分子上的羟基通过氢键作用相连接，形成孔径结构，而随着琼脂糖浓度不同形成不同大小的孔径。表1给出了不同浓度凝胶对DNA片段的线性分离范围。 表1不同类型琼脂糖分离DNA片段大小的范围 由于琼脂糖凝胶是通过氢键的作用，因此过酸或过碱等破坏氢键形成的方法常用于凝胶的再溶化，象NaClO4能用于凝胶的裂解，一般的凝胶回收试剂盒利用的也是这一原理。 随着实验技术的发展，也针对不同用途开发了各种类型的琼脂糖凝胶：（1）低熔点琼脂糖凝胶，用于DNA片段的回收，且由于该种凝胶中无抑制酶，可在胶中进行酶切、连接等；（2）高熔点凝胶，可分离小于1kb的DNA片段，专用于PCR产物的分析；（3）快速凝胶，电泳速度比普通凝胶中快一倍，可节省实验时间；（4）适用于DNA大片段的分离。（5）其它类型。各生产商还开发很多类型的凝胶，可根据实验要求选择不同类型的，选择原则是考虑合适的机械强度和熔点。

聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析

聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理及常见问题分析聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成，聚合过程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有两种：化学聚合法和光聚合法。化学聚合以过硫酸铵（AP）为催化剂，以四甲基乙二胺（TEMED）为加速剂。在聚合过程中，TEMED催化过硫酸铵产生自由基，后者引发丙烯酰胺单体聚合，同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联，从而形成三维网状结构。 PAGE根据其有无浓缩效应，分为连续系统和不连续系统两大类，连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷和分子筛效应。不连续系统中由于缓冲液离子成分，pH，凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应，分子筛效应，还具有浓缩效应，因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳。不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶所组成。浓缩胶是由AP催化聚合而成的大孔胶，凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HC1。分离胶是由AP催化聚合而成的小孔胶，凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HC1。电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液。2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性，这是样品浓缩的主要因素。 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。如果加入一种试剂使电荷因素消除，那电泳迁移率就取决于分子的大小，就可以用电泳技术测定蛋白质的分子量。1967年，Shapiro等发现阴离子去污剂十二烷基硫酸钠（SDS）具有这种作用。当向蛋白质溶液中加入足够量SDS和巯基乙醇，SDS可使蛋白质分子中的二硫键还原。由于十二烷基硫酸根带负电，使各种蛋白质—SDS复合物都带上相同密度的负电荷，它的量大大超过了蛋白质分子原的电荷量，因而掩盖了不同种蛋白质间原有的电荷差别，SDS与蛋白质结合后，还可引起构象改变，蛋白质—SDS复合物形成近似“雪茄烟”形的长椭圆棒，不同蛋白质的SDS复合物的短轴长度都一样，约为18A，这样的蛋白质—SDS复合物，在凝胶中的迁移率，不再受蛋白质原的电荷和形状的影响，而取决于分子量的大小由于蛋白质－SDS复合物在单位长度上带有相等的电荷，所以它们以相等的迁移速度从浓缩胶进入分离胶，进入分离胶后，由于聚丙烯酰胺的分子筛作用，小分子的蛋白质可以容易的通过凝胶孔径，阻力小，迁移速度快；大分子蛋白质则受到较大的阻力而被滞后，这样蛋白质在电泳过程中就会根据其各自分子量的大小而被分离。因而SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳可以用于测定蛋白质的分子量。当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式： logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数，若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图，可获得一条标准曲线，未知蛋白质在相同条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳经常应用于提纯过程中纯度的检测，纯化的蛋白质通常在SDS电泳上应只有一条带，但如果蛋白质是由不同的亚基组成的，它在电泳中可能会形成分别对应于各个亚基的几条带。SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳具

凝胶电泳技术中的常见问题与故障排除

凝胶电泳技术中的常见问题与故障排除 凝胶电泳技术是一种常用的生物分离与分析技术，广泛应用于分子生物学、遗 传学、病毒学、蛋白质研究等领域。然而，在进行凝胶电泳实验时，常会遇到一些问题和故障，这可能会影响实验结果的准确性和可靠性。本文将介绍凝胶电泳技术中的一些常见问题，并提供相应的故障排除方法，以帮助解决实验中的困惑和难题。 1. 样品未呈现预期的电泳结果 当样品未呈现预期的电泳结果时，可能存在以下原因和解决方法： (1) 样品加载量不足或过多：检查加载体积是否符合实验方案中的要求；如果 加载量过多，可能导致电泳带模糊或扩散；如果加载量不足，可能导致电泳带的强度过低。 (2) 样品处理不当：确保样品在电泳前已经完成相应的处理步骤，如DNA片段 的酶切、RNA的逆转录等。 (3) 缺乏合适的分子量标记物：使用合适的分子量标记物可以更好地确定待测 样品的大小。 (4) 凝胶浓度选择不当：根据待测分子大小选择合适的凝胶浓度，以保证分离 效果。 (5) 电场强度设置不合适：根据待测分子大小和凝胶浓度设置合适的电场强度，以避免分子过快地跑出凝胶。 2. 凝胶溶液聚合不完全或聚合杂质过多 凝胶溶液聚合不完全或聚合杂质过多可能导致凝胶电泳过程中的故障。以下是 一些常见原因和解决方法： (1) 预聚合剂过期或质量不好：确保使用新鲜且质量良好的预聚合剂。

(2) 常温下保存预聚合液：预聚合液需在4℃下保存，避免过热导致聚合不完全。 (3) 预聚合液pH不适宜：根据所需凝胶的pH要求，调整好预聚合液的pH并 进行彻底混合。 (4) 预聚合液中存在气泡：在配制和混合预聚合液时，尽量避免气泡的产生。 (5) 预聚合液中存在杂质：用滤膜过滤预聚合液，去除杂质。 3. 凝胶电泳带模糊或扩散 当凝胶电泳带出现模糊或扩散时，可能是以下原因导致的： (1) 电场不稳定：检查电源和电极，确保电场稳定和均匀。 (2) 凝胶浓度选择不当：根据待测分子大小选择合适的凝胶浓度，低浓度凝胶 适用于分离长DNA分子，高浓度凝胶适用于分离短DNA片段。 (3) 电极间距不合适：根据凝胶浓度和待测分子大小设置适当的电极间距。 (4) 卷曲或折叠凝胶：确保凝胶平整、无折叠或卷曲现象，以保证电流的均匀 传导。 (5) 缓冲液浓度不合适：调整缓冲液浓度，使其适应待测分子的离解需求。 4. 臭气或噪音 如果在凝胶电泳过程中出现臭气或噪音，需要进行以下检查和处理： (1) 电源或电极存在问题：检查电源和电极的接触和质量，确保电流通过完好 的通路。 (2) 凝胶溶液中存在有机物或杂质：使用新鲜的凝胶溶液，去除可能存在的有 机物或杂质。

凝胶电泳仪4大故障排除

凝胶电泳仪4大故障排除 一、胶片和凝胶电泳的问题 问题描述： 电泳后，胶片和凝胶出现不同程度的问题，如凝胶没有漂移，胶片上没有带， 凝胶没有分离，等等。 问题原因： 这些问题可能是由于凝胶电泳操作中的一些错误导致的，包括： •未正确加热和制备缓冲液 •凝胶制备不好或者是老化的凝胶 •样品或者试剂污染 •胶片没有完全浸泡 解决方法： •在凝胶制备之前，确保已经充分混合缓冲液，并将其加热至适当温度。 •制备好用于凝胶电泳的新鲜凝胶，或者使用已知运行良好的凝胶。 •实验样品和实验室操作应保持干净，并确定用于样品加载的提示正确。 •在使用胶片之前，请确保每个胶片完全浸泡在染料中，以充分均匀染色。 二、电源模块问题 问题描述： 凝胶电泳机在电源模块上插入电源后无法工作，或者是该模块在使用过程中断 电或发生其他问题。 问题原因： 这可能是由于电源模块所连接的电源线路问题导致的，例如： •电源线路或插头损坏 •电源过载 •电源模块损坏 解决方法： •检查电源线路和插头是否损坏或者受到振动/拉扯。

•确保凝胶电泳机不超过其电源所能承受的负载。 •检查电源模块的熔断器是否被保险丝保护，是否还存在故障。 •如果以上措施没有解决问题，请联系有关制造商或经销商以进行维修。 三、反应室温度问题 问题描述： 凝胶电泳的反应室温度不按照所设定的温度工作，导致实验失败。 问题原因： 可能发生以下情况： •温控器故障 •反应室传感器故障 •反应室及冷却系统不平衡 解决方法： •检查温控器是否正确设置，如故障请更换或修理 •检查传感器的状况，确保其工作正常 •请调整冷却系统，并确保它能够保持恒定的温度 四、运行电流问题 问题描述： 凝胶电泳的运行电流达不到所需值或是变化不稳定。 问题原因： 这个问题可能是由以下原因导致的： •电极板和凝胶之间的联系不良 •非标准或者腐蚀性标本 •电池维护不良或电源损坏 解决方法： •确保电极板已经充分和凝胶接触紧密，这样可以保证电荷载体的更换和转移。 •选择适合的缓冲液和冷却液，以确保实验和操作的质量。 •维护电源系统，包括更换和保护电源。

电泳过程中的不正常现象和对策

辉骏生物 电泳过程中的不正常现象和对策 如果电源上没有显示电压，则说明电源没有输入电压，保险丝断了或电源故障。如果没有电流或电流很小，则说明凝胶，缓冲液凝胶条（或缓冲液滤纸条）及电极三者之间有气泡，接触不好，甚至没有接触。 如果前沿指示剂向相反方向移动（如阳极电泳中溴酚蓝向阴极移动或阴极电泳中焦宁向阳极移动），则说明电源连接的正、负错置或缓冲液选择错误。 如果指示剂前沿呈现两边向上的曲线形，即常称的“微笑”现象。则说明凝胶的不均匀冷却，中间部分冷却不好，所以导致凝胶中的分子有不同的迁移率所致。这种情况在用较厚的凝胶以及垂直电泳时常常发生。如果指示剂前沿呈现两边向下的曲线形，即常称的“皱眉”现象。则常常是由于垂直电泳时电泳槽的装置不合适引起的，特别是当凝胶和玻璃板组成的“三明治”底部有气泡或靠近隔片的凝胶聚合不完全便会产生这种现象。 图示1，电泳时，前沿指示剂的（1）“微笑”现象和（2）“皱眉”现象如果电泳时间比正常要长，则可能是由于凝胶缓冲系统和电极缓冲系统的pH选择错误。即缓冲系统的pH和被分离物质的等电点差别太小或缓冲系统的离子强度太高。 电泳时电流产生的热是大部分电泳方法的主要问题。即使使用冷却装置，也仍然会正在凝胶中产生温度差异。这种温度差异导致相同分子在凝胶的不同部位会有不同的迁移速度，而使蛋白带产生弯曲畸变。特别在使用柱胶和较厚的凝胶时这种现象更为常见。 凝胶厚度、冷却温度、电参数和电泳时间4者之间在电泳时存在着依赖关系。电压应根据加在凝胶上电极之间的距离（即凝胶宽度）而定。电流则与凝胶的长度（加样数和加样量）有关。一般来说，常规聚丙烯酰胺凝胶电泳不需要太高的电压，所以对薄层胶来说，温度要求也不高。如果加双倍的电压，从理论上来说，电泳时间可缩短一倍。但实际上由于高电压产生的副作用，并不能达到预期的目的。所以有时采用伏/小时作为电泳时间参数可能更具有实际应用价值。 电泳过程中如果电泳盖上出现冷凝水，则表示加的电压和功率过高。

电泳涂装常见问题及解决方法

电泳涂装常见问题及解决方法 1.颗粒（疙瘩） 在烘干后的电泳漆膜表面上，存在有手感粗糙的（或肉眼可见的）较硬的粒子，称为颗粒。 （1）形成原因 1）电泳槽液有沉淀物，凝聚物或其他异物，槽液过滤不良。 2）电泳后冲洗液脏或冲洗水中含漆浓度过高。 3）烘干炉脏，落入颗粒状的污物。 4）进入电泳槽的被涂物不洁净，磷化后的水洗不净。 5）涂装环境脏。 （2）解决方法 1）减少尘埃带入量，加强电泳槽液的过滤。所有循环的漆液应全部经过滤装置，推荐用25dm精度的过滤袋过滤，加强搅拌防止沉淀，消除槽内的“死角”和金属裸露处，严格控制pH值和碱性物质，防止树脂析出或凝聚。 2）提高后冲洗水的清洁度，电泳后冲洗的水中固体含量要尽量低，保持后槽向前槽溢流补充。清洗液要过滤，减少泡沫。 3）清理烘干室，清理空气过滤器，检查平衡系统和漏气情况。 4）加强磷化后的冲洗，洗净浮在工件表面上磷化残渣。检查去离子水循环水洗槽的过滤器是否堵塞，防止被涂物表面的二次污染。 5）涂装环境应保持清洁。磷化至电泳槽之间和电泳后沥干（进入烘干室前）应设置间壁，检查并消除空气的尘埃源。 2.陷穴（缩孔） 由外界造成被涂物表面，磷化膜或电泳湿漆膜上附有尘埃、油等，或在漆膜中混有与电泳涂料不相溶的粒子，它们成为陷穴中心，并造成烘干初期的流展能力不均衡而产生火山口状的凹坑，直径通常为0.5-3.0mm,不露底的呈为陷穴、凹洼，露底的称为缩孔。 （1）形成原因 1）槽液中混入异物（油分、灰尘），油漂浮在电泳槽液表面或乳化在槽液中。 2）被涂物被异物污染（如灰尘、运输链上掉落的润滑油、油性铁粉、面漆尘埃、吹干用的压缩空气中有油污）。 3）预处理脱脂不良，磷化膜上有油污。 4）电泳后冲洗时清洗液中混入异物（油分、灰尘），纯水的纯度差。 5）烘干炉内不净或循环风内含油分。 6）槽液内颜基比失调。 7）补给退奥或树脂溶解不良（不溶解粒子）。 （2）解决方法 1）在槽液循环系统应设脱脂过滤袋，以除去污物。 2）保持涂装环境洁净，运输链、挂具要清洁，所用压缩空气应无油，防止灰尘、面漆尘雾和油污落到被涂工件上。不允许带油污和灰尘的北图工件进入电泳槽，设置间壁。 3）加强预处理的脱脂工序，确保磷化膜上无污染。 4）保持电泳后的冲洗水质，加强清洗液的过滤，在冲洗后至烘干炉之间要设防尘通廊。 5）保持烘干室和循环热风的清洁，第一升温区升温不宜过急。 6）保持电泳槽液的正确颜基比及溶剂含量等。

琼脂糖凝胶电泳条带不清晰的原因

琼脂糖凝胶电泳条带不清晰的原因 介绍 琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离和鉴定DNA、RNA和蛋白质的技术。然而，在执 行琼脂糖凝胶电泳实验时，有时会发现条带不清晰的情况。本文将深入探讨琼脂糖凝胶电泳条带不清晰的原因，并提出相应的解决方案。 二级标题1：样品质量差 在分离和凝胶电泳之前，合理选择、处理和保存样品是确保条带清晰的关键之一。 三级标题1.1：DNA/RNA质量差 1.确保使用高质量的DNA/RNA提取试剂盒，遵循厂家提供的操作指南。 2.在提取DNA/RNA的过程中，注意样品的污染问题，如DNA污染、RNA降解等。 3.波长为260 nm和280 nm的比值是衡量DNA/RNA纯度的指标，确保该比值在 1.8至 2.0之间。 4.使用凝胶电泳仪器前，对DNA/RNA样品进行定量，确保加载足够的样品。 三级标题1.2：蛋白质质量差 1.使用高纯度的蛋白质提取试剂盒提取样品。 2.注意蛋白质样品的保存温度和时间，避免蛋白质降解。 3.使用SDS-PAGE等技术进行蛋白质分离，确保负载均衡。 二级标题2：电泳条件不当 电泳条件的设置对于琼脂糖凝胶电泳的条带清晰度具有重要影响。 三级标题2.1：电泳缓冲液配制问题 1.确保电泳缓冲液的pH值和离子浓度符合实验要求。 2.避免电泳缓冲液的变质和二次污染。

三级标题2.2：凝胶浓度和孔隙度不合适 1.根据DNA/RNA或蛋白质的分子大小选择适当的琼脂糖凝胶浓度，以充分分离 目标分子。 2.考虑使用不同孔隙度的琼脂糖凝胶，以适应不同大小的DNA/RNA或蛋白质。 三级标题2.3：电泳电压和时间错误 1.根据实验要求，设置合适的电泳电压和时间。 2.避免电泳时间过长，以免造成DNA/RNA或蛋白质的扩散和模糊化。 三级标题2.4：电泳缓冲液温度过高 1.调整电泳室的冷却系统，控制电泳缓冲液温度在合适的范围内。 2.避免电泳缓冲液温度过高导致琼脂糖溶解和扩散。 二级标题3：样品加载问题 样品的加载方式和负载量也会影响琼脂糖凝胶电泳的结果。 三级标题3.1：负载量过多或过少 1.根据样品的浓度和实验要求，确定合适的负载量。 2.避免负载量过多或过少导致条带模糊或缺失。 三级标题3.2：负载方式不正确 1.使用微量管等适当的负载器具，确保样品均匀负载。 2.避免负载方式不正确导致样品加载不均匀。 二级标题4：显色和成像问题 显色和成像过程也会对琼脂糖凝胶电泳的条带清晰度产生影响。 三级标题4.1：染料浓度不正确 1.遵循染料使用说明书的操作指南，准确配置染料溶液。 2.避免染料浓度过高或过低导致条带清晰度不理想。

凝胶电泳常见问题分析

凝胶电泳常见问题分析 凝胶电泳常见问题分析 2008-09-15 21:43 要跑琼脂糖凝胶电泳，5ng 就能很清楚的跑出来是这样吗？能够照相的清楚的条带，至少需要多少量呢？ 参考见解：5ng 已经可以了，但是或许20ng50ng-200ng效果好，在此范围内呈线性。 把210bp的pcr产物进行酶切,得到190+20bp的两个片段,请问能用琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果吗?用多大浓度的胶和多大的电压呢? 参考见解：可以用琼脂糖凝胶电泳分开,电压不变,可用1.5%到2%的胶,20bp得片断不一定能看得到,所以应用未酶切的PCR片断作对照. 琼脂糖浓度（W/V）大小范围（bp） 0.6%1000-23000 0.8%800-10000 1.0%400-8000 1.2%300-7000 1.5%200-4000 2%100-3000 丙烯酰胺凝胶电泳更适合于分离纯化小分子量核酸（5-500bp）并且分辨率高，可以达到1个bp。所以建议进行丙烯酰胺凝胶电泳试试。 Marker做琼脂糖凝胶电泳，发现Marker在加样孔有一个明显的亮带，什么原因？参考见解：marker有时会出现这样的问题,应该是时间久了。新买时跑胶在点样孔没有,过一段时间就会在点样孔出现亮点。也可能是蛋白，有时DNA提的不纯含有蛋白时就会出现上样孔有条带的现象。 琼脂糖凝胶电泳检测DNA时,跑出的带后面出现拖尾现象,什么原因造成的? 参考见解： DNA带模糊??：

1、 DNA降解??避免核酸酶污染。 2、 DNA上样量过多??减少凝胶中DNA上样量。 3、所用电泳条件不合适??电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃,巨大DNA 链，温度应＜15℃，核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。 4、 DNA样含盐过高??电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。 5、有蛋白污染??电泳前酚抽提去除蛋白。 6、DNA变性，?电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA。 将从组织提取的DNA进琼行脂糖凝胶电泳，用的1.5%的胶加了EB，80V跑1小时，溴酚蓝已经跑到头了，在紫外灯观察什么带也没有，只见孔里面有橘红色的亮光。好象没跑出来，是怎么回事？ 参考见解： 1、根据目的条带长度来调整凝胶浓度，一般1.5％左右，也不一定。 2、紫外灯下没见带，不一定没有出孔，而是量少看不到，可以测一下浓度看一 下，或直接试跑一下PCR。 3、最好加一个marker孔，尤其你第一次跑胶时。 4、电泳时间可能过长，一般75v×30min左右，但是具体看溴酚蓝的离孔距离和目的条带离孔距离。 内切酶酶切后应该产生300+74+25bp的3个片段，用琼脂糖凝胶电泳能不能跑得开？如果能，得用多少浓度？ 参考见解： 1、分是分的开的，只是不知道要不要看到这条带，如果只是对多个样本的分析的，那是完全没有问题的。用2.5~3.0%的胶跑过，不同样本间是肯定看的到的。当然，25BP这条带是看不到的。 2、用10％的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳来进行电泳分离，可以分开的。不过缓冲液要用0.5的TBE，不要用TAE，其效果差些。下面是10ml的配方：

凝胶电泳常见问题分析

凝胶电泳常见问题分析 2008-09-15 21:43 要跑琼脂糖凝胶电泳， 5ng 就能很清楚的跑出来是这样吗？能够照相的清楚的条带，至少需要多少量呢？ 参考见解：5ng 已经可以了，但是或许20ng50ng-200ng效果好，在此范围内呈线性。 把210bp的pcr产物进行酶切,得到190+20bp的两个片段,请问能用琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果吗?用多大浓度的胶和多大的电压呢? 参考见解：可以用琼脂糖凝胶电泳分开,电压不变,可用1.5%到2%的胶,20bp得片断不一定能看得到,所以应用未酶切的PCR片断作对照. 琼脂糖浓度（W/V）大小范围（bp） 0.6%1000-23000 0.8%800-10000 1.0%400-8000 1.2%300-7000 1.5%200-4000 2%100-3000 丙烯酰胺凝胶电泳更适合于分离纯化小分子量核酸（5-500bp）并且分辨率高，可以达到1个bp。所以建议进行丙烯酰胺凝胶电泳试试。 Marker做琼脂糖凝胶电泳，发现Marker在加样孔有一个明显的亮带，什么原因？参考见解：marker有时会出现这样的问题,应该是时间久了。新买时跑胶在点样孔没有,过一段时间就会在点样孔出现亮点。也可能是蛋白，有时DNA提的不纯含有蛋白时就会出现上样孔有条带的现象。 琼脂糖凝胶电泳检测DNA时,跑出的带后面出现拖尾现象,什么原因造成的? 参考见解： DNA带模糊??： 1、 DNA降解??避免核酸酶污染。 2、 DNA上样量过多??减少凝胶中DNA上样量。 3、所用电泳条件不合适??电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃,巨大DNA 链，温度应＜15℃，核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。 4、 DNA样含盐过高??电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。 5、有蛋白污染??电泳前酚抽提去除蛋白。 6、 DNA变性，?电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA。 将从组织提取的DNA进琼行脂糖凝胶电泳，用的1.5%的胶加了EB，80V跑1小时，溴酚蓝已经跑到头了，在紫外灯观察什么带也没有，只见孔里面有橘红色的亮光。好象没跑出来，是怎么回事？ 参考见解： 1、根据目的条带长度来调整凝胶浓度，一般1.5％左右，也不一定。 2、紫外灯下没见带，不一定没有出孔，而是量少看不到，可以测一下浓度看一

DNA电泳常见问题分析

DNA电泳常见问题 凝胶电泳操作注意事项 1、琼脂糖：不同厂家、不同批号的琼脂糖,其杂质含量不同,影响DNA的迁移及荧光背景的强度,应有选择地使用; 2、凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致,溶化的凝胶应及时倒入板中,避免倒入前凝固结块;倒入板中的凝胶应避免出现气泡,以免影响电泳结果; 3、电泳缓冲液：为保持电泳所需的离子强度和pH,应经常更新电泳缓冲液; 4、 样品加入量：一般情况下,宽的梳子可加μg的DNA量,加样量的多少依据加样孔的大小及DNA中片段的数量和大小而定.当加样孔大时,样品上样量应相应加大,否则会造成条带浅甚至辨认不清;反之则应适当减少加样量,但是上样量过多会造成加样孔超载,从而导致拖尾或弥散,对于较大的DNA此现象更明显;5、DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率,平行对照样品应使用同样的缓冲条件以消除这种影响;6、DNA迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度,迁移分子的形状及大小;采用不同浓度的凝胶有可能分辩范围广泛的DNA分子,制备琼脂糖凝胶可根据DNA分子的范围来决定凝胶的浓度;小片段DNA的检测应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳,以提高分辨率; 7.选择的实验材料要新鲜,处理时间不易过长; 8.在加入细胞裂解缓冲液前,细胞必须均匀分散,以减少DNA团块形成; 9. 提取的DNA不易溶解：不纯,含杂质较多；加溶解液太少使浓度过大;沉淀物太干燥,也将使溶解变得很困难; 10. 电泳检测时DNA成涂布状：操作不慎；污染核酸酶等; 11.分光光度分析DNA的A280/A260小于；不纯,含有蛋白质等杂质;在这种情况下,应加入SDS至终浓度为%,并重复步骤2～8;

【精品】电泳问题解决方案

电泳问题解决方案 Example1 “Smearing”， 导致拖尾效应有很多的原因，最终要的是丙烯酰胺灌制的不够均匀和样品量过大！这是当时学生制胶时底下已经凝固，然后再重新补上一部分的浓缩胶和分离胶所致！当然重叠在一起，无法区分也是难免了。 Example2 样品量过大而出现了样品“交叉”污染，正常的当载样在20to40micrograms/well将会很漂亮。 Example3 样品量过大，当然胶灌制的也不够均匀。由于过量的样品影响了个别泳道的电场，使的有些条带宽，有的窄些。 Example4 “Smearing”（注意泳道4），这可能和样品中的含有大量脂类的膜相关蛋白引起的：由于不连续的胶中，样品被浓缩的很厉害。所有样的迁移速率在样品过积层胶后都会慢下来，当到达分离胶时，PH的改变使得聚集的膜相关蛋白有沉降的倾向，但另一个方面，电泳过程又不断的溶解这些蛋白，因此便出现了泳道4中连续的黑色托尾，通过WESTERN验证后，这些都是一个组分造成的！ Example5

这张还不是太糟糕。泳道4还加上飞纹，原因是样品未能处理好，上样量控制的也不够好，另外跑的过程可能电压过大；另外这张胶当时做的时候，分离胶凝固的并不是很好，蛋白穿过胶孔时，浓度并不均一，因此形成了飞纹而不是一片黑色托尾。由于样品跑的比较直且齐整，因此电场还是比较均匀的。泳道5中的蛋白没有很好的溶解。 Example6

简直一塌糊涂！首先做好分离胶时，没有封闭。另外，样品很快的沉降到不平整的脚面上，随着电泳的进行，样品不断的融解，以至形成托尾而不是一条条清洗的条带。 另外，这个样品可能含有杂质比较多（不溶性杂质或基因组DNA），可见上样前的充分离心也是必要的! Example7 条带太淡。背景脏且不够均匀，说明电泳缓冲液有污染（杂质在电泳过程中不断的进入胶中），或者板子没有洗干净。在溴芬兰线的后面还有连续的细线，说明上样不够小心，致使样品飞了出孔，同时也污染了其他的相临样品。 Example8 完全是染液重复利用惹的祸，对于这张（只有下面着色），只要重新再染，效果还是可以的。 Example9 这是一张银染的结果。本来一切都小心奕奕的，结果把胶放到去离子水中回家了，过了一夜，第二天染色结果变成这个样子了，呵呵~~ 原因：固定在胶中的蛋白都溶到水里了。 Example10 电泳停的太早。如果能继续再跑，效果就好了，当然，缓冲液必须有足够的缓冲能力，否则会引起扩散。 Example11