硒酵母中有机硒及硒代氨基酸含量的测定方法_郝素娥

第18卷第3期分析测试学报Vo l.18N o.3

1999年5月FENXI CESHI XUEBAO(J ou rnal of Instrum ental Analy sis)M ay1999

硒酵母中有机硒及硒代氨基酸

含量的测定方法

郝素娥滕冰

(哈尔滨工业大学应用化学系哈尔滨150001)(东北农业大学分析测试中心哈尔滨150030)摘要报道了人工培养硒酵母中有机硒及硒代胱氨酸(S eC y s)和硒代蛋氨酸(SeM et)含量的测定方法。采用透析处理法使硒酵母中的无机硒和有机硒得以分离,并采用催化分光光度法测定了硒酵母中有机硒的含量;采用氨基酸自动分析仪测定了硒酵母中S eCy s和SeM et的含量。

关键词硒酵母,有机硒,硒代胱氨酸,硒代蛋氨酸

硒是生物体必需的微量营养元素,缺硒会导致很多疾病。人体缺硒会诱发心血管疾病和癌症;动物缺硒会导致白肌病和生长缓慢等。目前用于防治疾病和作为饲料添加剂的主要是无机硒[1]。有机硒与无机硒相比,具有较高的生物活性(比无机硒约高100倍)和较低的毒性[2],故人们越来越重视有机硒的补充。硒酵母中有机硒含量较高[3],是一种比较理想的硒营养剂。

为了测定硒酵母中有机硒的含量,首先建立了一种无机硒和有机硒的鉴别方法,并且采用透析处理法使硒酵母中的无机硒和有机硒得以分离,再利用催化分光光度法,测定了硒酵母中有机硒的含量;为了确定硒酵母中有机硒的存在形式,采用氨基酸自动分析仪,测定了硒酵母中硒代胱氨酸(SeC y s)和硒代蛋氨酸(SeM et)的含量。

1实验部分

1.1材料和仪器

透析袋,SeM et(S3625),SeC y s(S3875)购自美国Si g ma公司。

分析仪器选用美国产的DU-7分光光度计和日立835-50氨基酸分析仪。

其他试剂均为分析纯级化学试剂。

1.2有机硒含量的测定

1.2.1测定原理Se(?)能够催化氯酸钾氧化苯肼生成偶氮离子,继而与变色酸偶合成红色偶氮染料,生成的红色偶氮染料的吸光度与一定含量范围的硒成正比,因而可利用催化分光光度法测定Se(?)的量[4]。采用透析处理使硒酵母中的无机硒和有机硒得以分离,并对透析内液进行消化测定,便可测得硒酵母中有机硒的含量。

收稿日期:1998-11-06;郝素娥,女,34岁,讲师

(上接71页)

Abstract A derivative gas chrom atographic m ethod for the determ ination of the content of dihydroxy2 acetone in its enz y me p roduction is described.D erivation conditions b y usin g trimeth y lchloro_silane,N, O_bis(trimeth y lsil y l)_acetamide,and m ixed a g ent of trimeth y lchloro_silane and hexam eth y l disilaz ane as derivative agent w ere discussed respectively.T he recovery and RSD of the method are98.3%~101.3% and2.02%~3.58%,respectively.

Ke y words G as chromato g ra p h y,Dih y drox y acetone,Gl y cerine,Trim eth y l sil y lation

第3期郝素娥等:硒酵母中有机硒及硒代氨基酸含量的测定方法73

图1硒酵母的分析谱图

Fig.1C hrom atog ram o f selenium y east

1.S eC y s;

2.SeM et

表1硒酵母中有机硒、SeCy s 及S eM et 含量的测定结果Table 1D eterm inatio n results of organic selenium ,SeCy s and

SeM et in seleniu m yeasts w /10-6

Sam ple

1#

2#

3#

4#

5#

有机硒367.18478.92582.36699.16552.18S eC y s 569.34669.89858.28348.35698.28SeM et

226.00

261.02

333.43

318.40

269.10

1.2.2透析方法将新鲜的硒酵母加入pH=8.6三羟甲基氨基甲烷-盐酸-甘油缓冲液中,加入SiO 2研磨,

在电子显微镜下检查,待酵母细胞完全破碎后,装入事先处理好的透析袋内,扎紧上端,于蒸馏水中透析,其间不断换水,用无机硒和有机硒的定性鉴别方法,分别检测透析外液和透析内液,直到透析外液中检测不出硒时,停止透析。

1.2.3无机硒和有机硒的定性鉴别方法

取含一定量硒(浓度大于50L mo l/L)的样品试液放入试管中,加入

15%(w )的半胱氨酸溶液,摇匀后静置,加入1~2滴亚甲蓝溶液,并开始计时,对于有机硒,亚甲蓝的退色时间为5~10min;对于无机硒,亚甲蓝的退色时间为30~60s 。

根据退色时间即可定性鉴别无机硒和有机硒。

1.2.4消化方法准确称取一定量硒酵母样品于锥形瓶中,加入HNO 3-HClO 4混酸(体积比1B 4),加热至发烟,待溶液变为淡黄色后,再加热2~3min,此时溶液变为无色,冷却后,定容,即可进行测定。

1.2.5测定方法分别取含硒0.2m g /L 的亚硒酸标液0、1、2、3、4、5mL ,硒酵母样品3~6mL 于比色管中,然后依次加入0.02m ol #L

-1

ED TA 1mL,0.2mo l #L

-1

HCl-KCl 缓冲液2mL ,0.6mol #L

-1

氯酸钾2

mL ,0.03m ol #L -1

变色酸2mL ,0.03mo l #L

-1

盐酸苯肼l mL ,然后加水至刻度,摇匀,在沸水浴中加热20

min,于冷水中冷却后,用l mL 比色皿于520nm 波长下测定吸光度。

1.3

硒酵母中Se C y s 和Se M et 含量的测定

1.3.1样品前处理准确称取硒酵母样品(0.5g 左右)于试管中,加入6mo l #L -1

HCl 6mL,充氮气后封管,于50e 水解50h 。1.3.2测定方法

采用氨基酸自动分析仪测定硒酵母中SeMet

和SeCy s 的含量,SeM et 的保留时间为(62.9?0.5)m in;SeCys 保留时间为(54.6?0.5)min 。分析谱图见图1。

2

结果与讨论

2.1

实验结果

硒酵母中有机硒、SeCys 及SeMet 含量的测定结

果见表1。1#

、2#

、3#

、4#

、5#

为作者制备的5种不同含硒量的硒酵母,硒酵母的制备过程中,培养基中亚硒酸钠的添加量分别为5、10、15、20、25m g /L 。

2.2硒酵母中有机硒含量测定方法的讨论

如何测定生物样品中有机硒的含量,是目前亟

待解决的一个问题。本实验是利用透析的方法,使硒酵母细胞完全破碎后,选择一种比较合适的透析膜,只允许未被酵母同化的小分子无机硒通过,而与

蛋白质或氨基酸结合的大分子有机硒不能通过。在透析过程中不断换水,使内液中的无机硒不断通过透析膜转移到透析外液中,并利用半胱氨酸与无机硒和有机硒反应情况不同,而导致亚甲蓝退色时间不同来鉴别无机硒和有机硒,当透析外液检不出硒时,即已透析完全,此时透析内液中只能检测出有机硒了。透析方法成功的关键是选择合适的透析袋,并利用新鲜酵母进行透析。

在利用催化分光光度法测定硒酵母中硒含量的过程中,消化方法和加热时间对测定结果影响较大,实验结果表明,用硝酸-高氯酸进行消化,加热20min 时,测定结果最接近于真实值,重复性也最好。

2.3

硒酵母中Se M et 、SeC y s 含量测定方法的讨论

采用普通的分析方法来分析包括SeMet 、SeC y s 在内的氨基酸混合物时,SeMet 的峰和SeC y s 的峰与其他

氨基酸的峰相重叠,实验中采用了降低流速(1#

泵的流速为0.275mL /min),长柱(4mm @250m m)的方法,使SeMet 、SeCys 与其他氨基酸的分离度达到了90%以上,比文献[5]报道的方法分离度显著提高,分析时间也缩短了7h

。

74分析测试学报第18卷

2.4硒酵母中有机硒的存在形式

硒酵母作为一种有机硒补品,探明其有机硒的存在形式,对研究硒在生物体内的存在形式及其作用机制,对从分子水平阐明某些酶的催化作用以及许多疾病的发病机理等方面具有重要的理论意义;而对其在安全性、营养作用及合理服用等方面具有重要的实际意义。经过实验确定,硒酵母中有机硒的主要存在形式是SeC y s(70%)和SeMet(20%),尚有10%左右有机硒是以其它形式存在,但由于其它有机硒的标准样品难以制备和买到,目前还无法确定其形式和含量。

硒酵母中有机硒及SeMet和SeCys含量的测定方法,对于其他生物制品中有机硒含量及含硒氨基酸含量的测定具有重要的参考价值;硒酵母中有机硒及SeMet和SeCy s的定量分析数据,对硒酵母今后在医药及添加剂领域的应用也具有重要的参考价值。

参考文献

1徐辉碧.生物微量元素)))硒.武汉:华中工学院出版社,1983.15~20

2Schrauzer G N,W hite D A.Elem en tal seleniu m in o rganic selenium co m po und s:their chem istry an d bio lo gy.B io ino rg C hem,1983, 8(3):303

3W estermark T.Selen ium and selenid es.Acta Pharm acal T ox ical,1987,4(1):121

4顾钢,朱万珥,孙林林.利用新的催化显色反应测定人发中痕量硒.分析化学,1988,16(6):559

5Peterso n P J,B utler G W.Pa p er chro m ato g ra p hic and electro p ho retic s y stem s for th e in ten tificatio n o f su l p hu r and selenium am ino acids.J C hrom ato g r,1962,8(1):70

D eterm ination of Co ntent of Or g anic S elenium and S elenium

Am ino Acids in Selenium Yeasts

Hao Su.e

(D e p artment of A pp lied Chemistr y,Harbin Institute of Technolo gy,Haerbin15001)

T en g Bin g

(Analy sis Centre,Northeast A gricultural University,Haerbin150030)

A bstract D etermination of content of organic selenium,selenocystine(SeCys)and selenom ethionine (SeM et)in cultured selenium y easts is re p orted.T he inor g anic selenium and or g anic selenium w ere se p erated w ith dial y sis ba g,and the content of or g anic selenium in selenium y easts w as determined b y catalytic spectrophotometry;the content of selenocystine and selenomethionine in selenium yeasts w ere determined b y amino acid anal y z er.

K e y words Selenium y east,O r g anic selenium,S elenoc y stine,Selenom ethionine

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硒酵母中有机硒及硒代氨基酸含量的测定方法_郝素娥

第18卷第3期分析测试学报Vo l.18N o.3 1999年5月FENXI CESHI XUEBAO(J ou rnal of Instrum ental Analy sis)M ay1999 硒酵母中有机硒及硒代氨基酸 含量的测定方法 郝素娥滕冰 (哈尔滨工业大学应用化学系哈尔滨150001)(东北农业大学分析测试中心哈尔滨150030)摘要报道了人工培养硒酵母中有机硒及硒代胱氨酸(S eC y s)和硒代蛋氨酸(SeM et)含量的测定方法。采用透析处理法使硒酵母中的无机硒和有机硒得以分离,并采用催化分光光度法测定了硒酵母中有机硒的含量;采用氨基酸自动分析仪测定了硒酵母中S eCy s和SeM et的含量。 关键词硒酵母,有机硒,硒代胱氨酸,硒代蛋氨酸 硒是生物体必需的微量营养元素,缺硒会导致很多疾病。人体缺硒会诱发心血管疾病和癌症;动物缺硒会导致白肌病和生长缓慢等。目前用于防治疾病和作为饲料添加剂的主要是无机硒[1]。有机硒与无机硒相比,具有较高的生物活性(比无机硒约高100倍)和较低的毒性[2],故人们越来越重视有机硒的补充。硒酵母中有机硒含量较高[3],是一种比较理想的硒营养剂。 为了测定硒酵母中有机硒的含量,首先建立了一种无机硒和有机硒的鉴别方法,并且采用透析处理法使硒酵母中的无机硒和有机硒得以分离,再利用催化分光光度法,测定了硒酵母中有机硒的含量;为了确定硒酵母中有机硒的存在形式,采用氨基酸自动分析仪,测定了硒酵母中硒代胱氨酸(SeC y s)和硒代蛋氨酸(SeM et)的含量。 1实验部分 1.1材料和仪器 透析袋,SeM et(S3625),SeC y s(S3875)购自美国Si g ma公司。 分析仪器选用美国产的DU-7分光光度计和日立835-50氨基酸分析仪。 其他试剂均为分析纯级化学试剂。 1.2有机硒含量的测定 1.2.1测定原理Se(?)能够催化氯酸钾氧化苯肼生成偶氮离子,继而与变色酸偶合成红色偶氮染料,生成的红色偶氮染料的吸光度与一定含量范围的硒成正比,因而可利用催化分光光度法测定Se(?)的量[4]。采用透析处理使硒酵母中的无机硒和有机硒得以分离,并对透析内液进行消化测定,便可测得硒酵母中有机硒的含量。 收稿日期:1998-11-06;郝素娥,女,34岁,讲师 (上接71页) Abstract A derivative gas chrom atographic m ethod for the determ ination of the content of dihydroxy2 acetone in its enz y me p roduction is described.D erivation conditions b y usin g trimeth y lchloro_silane,N, O_bis(trimeth y lsil y l)_acetamide,and m ixed a g ent of trimeth y lchloro_silane and hexam eth y l disilaz ane as derivative agent w ere discussed respectively.T he recovery and RSD of the method are98.3%~101.3% and2.02%~3.58%,respectively. Ke y words G as chromato g ra p h y,Dih y drox y acetone,Gl y cerine,Trim eth y l sil y lation

(整理)6种方法测定蛋白质含量.

6种方法测定蛋白质含量 一、微量凯氏（kjeldahl）定氮法 样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下： NH2CH2COOH+3H2SO4――2CO2+3SO2+4H2O+NH3(1) 2NH3+H2SO4――(NH4)2 SO4(2) (NH4)2 SO4+2NaOH――2H2O+Na2SO4+2NH3(3) 反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。 为了加速消化，可以加入CuSO4作催化剂，K2SO4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。 计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白 氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。 二、双缩脲法（biuret法） （一）实验原理 双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。

紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、tris缓冲液和某些氨基酸等。 此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。 （二）试剂与器材 1.试剂： （1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（bsa）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用bsa浓度1mg/ml的a280为0.66来校正其纯度。如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液。牛血清清蛋白用H2O 或0.9%NaCl配制，酪蛋白用0．05NaOH配制。 （2）双缩脲试剂：称以1.50克硫酸铜（CuSO4?5H2O）和6.0克酒石酸钾钠（KNaC4H4O6?4H2O），用500毫升水溶解，在搅拌下加入300毫升10% NaOH溶液，用水稀释到1升，贮存于塑料瓶中（或内壁涂以石蜡的瓶中）。此试剂可长期保存。若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。 2.器材： 可见光分光光度计、大试管15支、旋涡混合器等。 （三）操作方法 1.标准曲线的测定：取12支试管分两组，分别加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升的标准蛋白质溶液，用水补足到1毫升，然后加入4毫升双缩脲试剂。充分摇匀后，在室温（20～25℃）下放置30分

含量测定方法学考察

含量测定方法学验证内容及可接受标准 1．准确度 可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在98.0%-102.0%之间，9个回收率数据的相对标准差（RSD）应不大于2.0%。 2．线性 其主峰的面积，计算相应的含量。以含量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析。 可接受的标准为：回归线的相关系数（R）不得小于0.998，Y轴截距应在100％响应值的2％以内，响应因子的相对标准差应不大于2.0%。 3．精密度 1）重复性 件下进行测试，所得6份供试液含量的相对标准差应不大于2.0%。 2）中间精密度 4．专属性 可接受的标准为：空白对照应无干扰，主成分与各有关物质应能完全分离，分离度不得小于2.0。以二极管阵列检测器进行纯度分析时，主峰的纯度因子应大于980。 5．检测限

主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于3。 6．定量限 主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10。另外，配制6份最低定量限浓度的溶液，所测6份溶液主峰的保留时间的相对标准差应不大于2.0%。 7．耐用性 方法：分别考察流动相比例变化±5％、流动相pH值变化±0.2、柱温变化±5℃、 可接受的标准为：主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰与杂质峰必须达到基线分离；各条件下的含量数据（n=6）的相对标准差应不大于2.0%。 8、系统适应性 应不大于2.0%，主峰保留时间的相对标准差应不大于1.0%。另外，主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰与杂质峰必须达到基线分离，主峰的理论塔板数应符合质量标准的规定。 有关物质测定方法学验证内容及可接受标准： 1．准确度 该指标主要是通过回收率来反映。验证时一般要求根据有关物质的定量限与质量标准中该杂质的限度分别配制三个浓度的供试品溶液各三份（例如某杂质的限度为0.2%，则可分别配制该杂质浓度为0.1％、0.2％和0.3％的杂质溶液），分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率，并计算9个回收率数据的相对标准差（RSD）。该项目的可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在80%-120%之间，如杂质的浓度为定量限，则该浓度下的平均回收率可放宽至70%-130%，相对标准差应不大于10%。 2．线性 线性一般通过线性回归方程的形式来表示。具体的验证方法为：在定量限至

富硒酵母简介

摘要 硒元素在机体功能方面具有极其重要的地位，富硒酵母是目前比较理想的有机硒来源，随着人类对富硒酵母的研究越来越深入，富硒酵母已被广泛地应用到人类日常食品、预防和治疗疾病以及动物养殖业等领域。本文中对富硒酵母做一简单介绍。 关键词:富硒酵母；食品；用途 1 硒的生理功能 硒是人体红细胞谷胱甘肽过氧化物酶的重要组成成分，其主要作用是参与酶的合成，保护细胞膜的结构与功能免遭过度氧化与干扰，具有许多重要的生理功能。硒的生物学功能是多方面的，主要通过硒酶和硒蛋白再发挥作用，抗氧化性是硒的最重要的生物学功能之一。 （1）抗氧化作用。硒是谷胱甘肽过氧化物酶的重要组成成分，在体内特异地催化还原谷胱甘肽与过氧化物的氧化还原反应，如过氧化氢、超氧阴离子、羟游离基、脂酰游离基，从而保护生物膜免受损害，维持细胞的正常功能。硒的抗氧化作用主要通过GSH-Pxl酶促反应清除脂质过氧化物。硒在人体生长繁殖功能上与维生素E的作用相类似，对维护组织弹性，延缓不饱和脂肪酸的氧化，防止早期衰老均有积极作用。硒对过氧化物酶的抗氧化能力要比维生素E高出500倍。硒与维生素E构成了动物机体抗氧化的两条防御途径，两者共同发挥作用，硒可与维生素E抗氧化作用相互补充。维生素E控制着磷脂上不饱和脂肪酸不被氧化，成为抗氧的第一道防线。硒以GSH-Px的形式催化脂质过氧化物的还原，在整个细胞中将过氧化物迅速分解成醇和水，使细胞中的膜结构免受过氧化物的损害，起第二道防线的作用。 （2）抗衰老作用。硒作为必需微量元素，一方面作为体内有害自由基的清除剂，并防止体内氧化损伤；另一方面，在一定条件下，硒的化合物由可作为产生活性氧自由基的催化剂。在不同的条件下，硒化合物既能清除自由基，又能产生自由基，视其在研究体系或体内的浓度而定：在较低的浓度下，硒主要表现出对活性氧自由基的清除作用；而在较高浓度下，硒主要表现出活性氧自由基的催化作用。衰老是机体组织中持续进行的自由基反应而引起的有害物质积累的结

定量分析方法的方法学验证

定量分析方法的方法学验证 定量分析方法的方法学验证 定量分析方法验证的目的是证明采用的含量测定方法适合于相应分析要求，在进行定量分析方法学研究或起草药品质量标准时，分析方法需经验证。 验证内容有：线性、范围、准确度、精密度（包括重复性和重现性）、检测限、定量限和耐用性等。 一，线性 线性是指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物质浓度直接呈正比关系的程度。 应在规定的范围内测定线性关系。可用一贮备液经精密稀释，制备一系列供试品的方法进行测定，至少制备五份供试样品；以测得的响应信号对被测物浓度作图，观察是否呈线性，再用最小二乘法进行线性回归。必要时，响应信号可经数学转换，再进行线性回归计算。回归方程的相关系数( r ) 越接近于1 ，表明线性关系越好。 用UV 法测定时，以对照品配制一定浓度范围的对照品系列溶液，吸光度A一般在0.3 ～0.7 ，浓度点n ＝5 ，用浓度C 对A作线性回归，得一直线方程，方程的截距应接近于零，相关系数r 应大于0.9999 。 用HPLC 法测定时，以对照品配制一定浓度范围的对照品系列溶液，浓度点n ＝5 ～7 ，用浓度 C 对峰高h 或峰面积A或被测物与内标物的响应值之比进行线性回归或非线性拟合（如HPLC-ELSD ），建立方程，方程的截距应趋于零，相关系数r 应大于0.999 。 线性关系的数据包括相关系数、回归方程和线性图。 二，范围 范围系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。 范围应根据分析方法的具体应用和线性、准确度、精密度结果及要求确定。对于有毒的、具特殊功效或药理作用的成分，其范围应大于被限定含量的区间。 三，精确度 准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率( ％) 表示。准确度应在规定的范围内测试。用于定量测定的分析方法均需做准确度验证。 1. 测定方法的准确度 可用已知纯度的对照品做加样回收率测定，即于已知被测成分含量的供试品中再精密加入一定量的已知纯度的被测成分对照品，依法测定。用实测值与供试品中含有量之差，除以加入对照品量计算回收率。 在加样回率收试验中须注意对照品的加入量与供试品中被测成分含有量之和必须在标准曲线线性范围之内；加入的对照品的量要适当，过小则引起较大的相对误差，过大则干扰成分相对减少，真实性差。 回收率% = [(C-A)/B]*100% 式中，A为供试品所含被测成分量；B 为加入对照品量；C 为实测值。 2. 数据要求 在规定范围内，取同一浓度的供试品，用 6 个测定结果进行评价；或设计 3 个不同浓度，每个浓度各分别制备 3 份供试品溶液进行测定，用9 个测定结果进行评价，一般中间浓度加入量与所取供试品含量之比控制在l ∶ 1 左右，其他两个浓度分别约为供试品含量的80% 和120% 。应报告供试品取样量、供试品中含有量、对照品加入量、测定结果和回收率( ％) 计算值，以及回收率( ％) 的相对标准偏差(RSD) 或可信限。 四，精密度 精密度是指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间接近的程度。 1. 精密度的表示方法 气相色谱法和高效液相色谱法是对同一供试液进行至少五次以上的测定；精密度一般用相对标准偏差(relative standard deviation, RSD) 表示：RSD= 标准偏差/ 平均值′ 100 ％

粗多糖含量测定方法学验证

粗多糖含量测定方法学研究资料 一、仪器与试药 (1) 二、方法的研究 (2) 1.检测波长的测定 (2) 2.样品及对照制备方法 (2) 三、方法学验证 (3) 1.线性 (3) 2.精密度实验 (4) 3.稳定性实验 (4) 4.重复性试验 (5) 5.中间精密度实验 (5) 6.准确度试验 (6)

芪参颗粒粗多糖含量测定方法起草说明 标志性成分粗多糖含量测定的方法来源于《保健食品功效成分检测方法》白鸿主编（中国中医药出版社)的第二法，该方法的原理是：多糖经乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖及杂质的干扰，糖与硫酸在沸水浴中加热脱水生成羟甲基呋喃甲醛（羟甲基呋喃糠醛），再与蒽酮缩合成蓝绿色化合物，其显色强度与溶液中糖的浓度成正比，在625nm波长下比色测定。 主要研究资料如下： 一、仪器与试药 1、仪器 (1) 离心机（湘南湘仪实验室仪器开发有限公司，型号TD25-WS）； (2) 离心管：50ml； (3) 水浴锅（上海精宏实验设备有限公司，型号 DK-S26）； (4) 旋涡混合器（DioCote，SA8）； (5) SHIMADZU UV-1800 紫外可见光分光光度计； (6) JB760-68 石英比色皿（宜兴市伟鑫仪器有限公司）； (7) TU-1901 双光束紫外可见光分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）； 2、试药 (1) 葡萄糖：广州化学试剂厂，分析纯，批号为-1； (2) 无水乙醇：西陇化学股份有限公司，分析纯，批号为160802 1； (3) 蒽酮：国药集团化学试剂有限公司，分析纯，批号为； (4) 硫酸：广州化学试剂厂，分析纯，批号为-1； (5) 葡萄糖标准液：标准称取干燥恒重的分析纯级葡萄糖，加水溶解，并定容至50ml，此溶液1ml含10mg葡萄糖，用前稀释100倍为使用液（ml）。 (6) %蒽酮硫酸溶液（W/V）：准确称取蒽酮置于烧杯中，缓缓加入100ml 80%硫酸溶解，溶解后呈黄色透明溶液。现用现配。 3、试样

西安交通大学科技成果——富硒酵母及其富硒食品饮料

西安交通大学科技成果——富硒酵母及其富硒食品饮料 项目简介 硒是维持人和动物生命话动和正常生理功能所必需的微量元素之一，具有抗癌，保护心肌等复杂的生理功能。缺硒时，机体免疫功能降低，易发生各种缺硒疾病。已知有40余种疾病与缺硒有关，常见的如克山病、大骨节病、高血压、缺血性心脏病、肝硬化、胰腺炎、纤维瘤、癌症、肌瘤、糖尿病、白内障等。由于抗肿瘤效果显著，被誉为“抗癌之王”。 我国72%面积是缺硒地区，人体普遍缺硒。目前医疗用的硒补充剂是亚硒酸盐，但亚硒酸盐不能通过饮食补硒，过量摄入会中毒。硒在人体和酵母细胞内的存在方式是有机硒，不会导致中毒。 本项目提供硒酵母的生产和相关硒酵母食品的制造技术。富硒酵母是有机硒最好的补充剂之一，可以直接作为保健品，也可以作为饲料或食品添加剂。由于自然界生物富硒能力有限，现有富硒酵母生产成本较高。本技术筛选到一株高耐硒酵母，同时构建了一株人工酵母，均具有更高更强的有机硒转化能力，酵母总硒含量均优于国标。 产品性能优势 1、天然酵母富硒量：700μg/g 2、人工酵母富硒量：1000-1200μg/g 市场前景及应用 国家食品安全检测新标准（2013年6月1日实施）中，将原来作为重金属控制的硒元素检测取消了，专家解读此举是因为我国大部

分地区是缺硒地区或者低硒地区，人们身体内是缺硒的。因此安全富硒食品的大面积上市只是时间问题。随着人们保健意识的加强，富硒食品将会成为家喻户晓的新概念。目前尚未见有类似产品上市。 创新点 （1）将无机硒元素通过我们的专利酵母转化为对人体安全的有机硒形式，可以实现安全的食品补硒。 （2）通过特殊的培养方法，大大提高了酵母细胞内的有机硒含量。 （3）可以添加于固体食品和饮料，开发大量富硒产品。 技术成熟度中试 目前酵母粉制作已达到工艺阶段，饮料添加实验正在小试。 合作方式技术转让 合作条件：企业必须具有或自行建设发酵厂房。

【CN109734516A】一种含氨基酸富硒降镉叶面肥及使用方法【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910163458.1 (22)申请日 2019.03.05 (71)申请人 湖南嘉诚农业科技有限公司 地址 410200 湖南省长沙市望城区高塘岭 街道红建滨水名都2栋1202室 申请人 湖南天翼智慧农业科技有限公司 (72)发明人 刘超　刘杰　 (74)专利代理机构 长沙市和协专利代理事务所 (普通合伙) 43115 代理人 王培苓 (51)Int.Cl. C05G 3/00(2006.01) A01C 21/00(2006.01) (54)发明名称 一种含氨基酸富硒降镉叶面肥及使用方法 (57)摘要 本发明涉及一种含氨基酸富硒降镉叶面肥 及使用方法，本发明是采用氨基酸与葡萄糖酸 锌、亚硒酸钠进行有机螯合制得的氨基酸硒锌， 以卵磷脂和维生素E为载体，制备活性高，安全高 效的含氨基酸富硒降镉叶面肥，实现含氨基酸富 硒降镉叶面肥与植物的亲和性，有效的促进了植 物对硒、锌元素的吸收、移动与运输，提高了对其 硒的吸收转化利用率；通过增加水稻体内的硒、 锌含量，达到阻隔镉、砷等重金属的进入和迁移， 从调控茎叶分配、运输蛋白活性、竞争运输通道 等方面抑制镉、砷等重金属的吸收；本发明制备 方法在常温常压进行，工艺简单，便于操作，因而 易于进行大规模生产，制备的原料来源广泛，价 格低廉， 污染小。权利要求书1页 说明书20页CN 109734516 A 2019.05.10 C N 109734516 A

权　利　要　求　书1/1页CN 109734516 A 1.一种含氨基酸富硒降镉叶面肥，其特征在于，所述叶面肥按照氨基酸50～120g/L、卵磷酯10～50g/L、维生素E 40～80g/L、亚硒酸钠10～60g/L、葡萄糖酸锌8～50g/L、乳化剂2～6g/L的比例混合，其制备步骤如下： (1)称取50g所述氨基酸，在搅拌下完全溶解在300ml水中； (2)加入所述亚硒酸钠10g、所述葡萄糖酸锌8g搅拌溶解； (3)称取所述乳化剂5g，缓慢加入到步骤2获得的溶液中，继续搅拌； (4)用氢氧化钾水溶液调节步骤3获得的溶液PH值呈6.5左右，在70～80℃之间加热反应l小时左右，使金属离子与氨基酸螯合，用有机溶剂乙醇沉淀分离法制得了氨基酸硒锌螯合物； (5)称取10g卵磷脂、40g维生素E，在搅拌下完全溶解在200ml水中； (6)将步骤4获得的氨基酸硒锌螯合物缓慢加入到步骤5获得的溶液中，用水定容至1升，充分搅拌均匀，调配成体积为1升的含氨基酸富硒降镉叶面肥。 2.根据权利要求1所述的一种含氨基酸富硒降镉叶面肥，其特征在于，所述叶面肥按照氨基酸60～120g/L、卵磷酯10～35g/L、维生素E 50～70g/L、亚硒酸钠15～40g/L、葡萄糖酸锌12～35g/L、乳化剂2～5g/L的比例混合。 3.根据权利要求1或2所述的一种含氨基酸富硒降镉叶面肥，其特征在于，所述氨基酸为甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、丝氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、苏氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸和组氨酸中的一种或多种组合。 4.根据权利要求1或2所述的一种含氨基酸富硒降镉叶面肥，其特征在于，所述乳化剂为十二烷基苯磺酸钙、聚氧乙烯聚氧丙稀嵌段化合物、蓖麻油聚氧乙烯醚、烷基酚聚氧乙烯醚、烷基酚聚氧乙烯醚聚、氧丙烯醚、苄基酚聚氧乙烯醚、苯乙基酚聚氧乙烯醚、脂肪醇聚氧乙烯醚、脂肪胺聚氧乙烯醚、脂肪酸环氧乙烷加成物、苯乙基酚聚氧乙烯醚聚氧丙烯醚、烷基酚聚氧乙烯醚甲醛缩合物中的一种或多种组合。 5.根据权利要求4所述的一种含氨基酸富硒降镉叶面肥，其特征在于，所述乳化剂的具体品种为农乳500#系列、600#系列、400#系列、1600#系列、NP系列、OP系列、AEO系列、By系列、斯盘系列、吐温系列、聚乙二醇系列中的一种或多种组合。 6.根据权利要求1所述的一种含氨基酸富硒降镉叶面肥的使用方法，其特征在于，所述叶面肥可以广泛应用于轻、中、重度重金属污染区抑制作物吸收累积重金属，同时达到合理吸收硒、锌的效果，并在作物中转化，提高可食部位硒富集水平，生产出安全的富硒含锌农产品。 7.根据权利要求1所述的一种含氨基酸富硒降镉叶面肥及使用方法，其特征在于，所述叶面肥稀释150～200倍后，使用人工喷雾器在水稻二次枝梗原基分化期，即倒二叶完全展开时，以及齐穗后6～11天叶面喷施。 8.根据权利要求1所述的一种含氨基酸富硒降镉叶面肥及使用方法，其特征在于，所述叶面肥稀释7～10倍后，使用植保无人机超低容量喷雾，在水稻二次枝梗原基分化期，即倒二叶完全展开时，以及齐穗后6～11天叶面喷施。 2

硒的功效与作用

硒的功效与作用 硒的功效： 由于硒是动物和人体中一些抗氧化酶和硒-P蛋白的重要组成部分，在体内起着平衡氧化还原氛围的作用，研究证明具有提高动物免疫力作用，在国际上硒对于免疫力影响和癌症预防的研究是该领域的热点问题，因此，硒可作为动物饲料微量添加剂，也在植物肥料中添加微量元素肥，提高农副产品含硒量。硒已被作为人体必需的微量元素，目前，中国营养学会推荐的成人摄入量为每日50-250微克，而我国2/3地区硒摄入量低于最低推荐值，因此，中国是一个既有丰富硒资源，又存在大面积硒缺乏地区，这也是国际学者对中国感兴趣的原因。 硒的作用比较宽泛，如下文详述的多个方面，但其原理主要是两个： 第一、组成体内抗氧化酶，能提到保护细胞膜免受氧化损伤，保持其通透性； 第二、硒-P蛋白具有螯合重金属等毒物，降低毒物毒性作用。 硒被科学家称之为人体微量元素中的“防癌之王”（原称“抗癌之王”）科学界研究发现，血硒水平的高低与癌的发生息息相关。大量的调查资料说明，一个地区食物和土壤中硒含量的高低与癌症的发病率有直接关系，例如：此地区的食物和土壤中的硒含量高，癌症的发病率和死亡率就低，反之，这个地区的癌症发病率和死亡率就高，事实说明硒与癌症的发生有着密切关系。同时科学界也认识到硒具有预防癌症作用，是人体微量元素的“防癌之王”。 科学证实：正是由于"硒"的高抗氧化作用，适量补充能起到防止器官老化与病变，延缓衰老，增强免疫，抵御疾病，抵抗有毒害重金属，减轻放化疗副作用，防癌抗癌。 硒的作用： 增强免疫力： 有机硒能清除体内自由基，排除体内毒素、抗氧化、能有效的抑制过氧化脂质的产生，防止血凝块，清除胆固醇，增强人体免疫功能。 防止糖尿病：硒是构成谷胱甘肽过氧化物酶的活性成分，它能防止胰岛β细胞氧化破坏，使其功能正常，促进糖份代谢、降低血糖和尿糖，改善糖尿病患者的症状。 防止白内障：视网膜由于接触电脑辐射等较多，易受损伤，硒可保护视网膜，增强玻璃体的光洁度，提高视力，有防止白内障的作用。 防止心脑血管疾病： 硒是维持心脏正常功能的重要元素，对心脏肌体有保护和修复的作用。人体血硒水平的降低，会导致体内清除自由基的功能减退，造成有害物质沉积增多，血压升高、血管壁变厚、血管弹性降低、血流速度变慢，送氧功能下降，从而诱发心脑血管疾病的发病率升高，然而科学补硒对预防心脑血管疾病、高血压、动脉硬化等都有较好的作用。 防止克山病、大骨节病、关节炎：

酵母硒和蛋氨酸硒的特点与优劣比较

酵母硒和蛋氨酸硒的特点与优 劣比较

酵母硒和蛋氨酸硒的特点与优劣比较
酵母硒和蛋氨酸硒的特点与优劣比较
万建美（四川农业大学动物营养研究所）
1
不同硒源吸收方式与效率
多种形式的硒在小肠中均能被高效地吸收，吸收率高达 98%，如硒酸盐。硒代半
胱氨酸和硒代蛋氨酸通过氨基酸主动转运载体机制被吸收。亚硒酸盐则通过简单扩
散作用吸收，而硒酸盐则与硫酸盐共同使用钠离子介导的转运载体被吸收。
有机硒（氨基酸螯合硒、硒代蛋氨酸、以及小麦和酵母中的有机硒）均有较高的吸
收效率。硒酸盐的吸收效率比亚硒酸盐高，但是硒酸盐和亚硒酸盐中的硒的吸收效
率均高于单质硒。
由于瘤胃中微生物的作用，亚硒酸盐和硒酸盐形式的无机硒容易被还原为不溶于水
的单质硒颗粒，因此反刍动物（牛和羊）对无机硒的利用率较低。当饲粮中硫、铅、
苜蓿及生氰糖苷含量很高，同量饲粮中钙水平过高或过低时，反刍动物对硒的吸收
率降低。
2
硒吸收后的转运
硒被肠道吸收后，血浆中约 65%以上的硒是以硒蛋白 P 的形式存在，并被转运到
其它组织。
但是有机硒与无机硒在转运过程中存在差异。无机硒更多地与谷胱甘肽过氧化物酶
的形式存在，而有机硒则主要沉积到组织蛋白中。
3
蛋氨酸硒（硒代蛋氨酸）
由于化学合成反应的工艺条件复杂，设备规模大、管理难，环保要求严，且生产成
本高，因此国内外都没有达到中试实验生产规模，目前硒代蛋氨酸国内外尚无专业
的硒代蛋氨酸生产厂家，尚未工业化生产。 3.1 硒代蛋氨酸的分子结构式

植物硒蛋白

目前市面上各种“硒”产品种类繁多，国家也在大力倡导“要像补碘一样补硒”，所以，了解科研机构对“硒”元素的研究和进展，就应该是一个人人都要应该知道的事情了。 第一阶段 工业无机硒 主要产品：亚硒酸钠(Sodium Selenite)、硒酸钠 代表性产品：亚硒酸钠 源自工业生产金属冶炼的衍生产品，由亚硒酸和氢氧化钠中和成盐制得。硒与硝酸反应生成氧化硒，再与氢氧化钠作用生成亚硒酸钠，经干燥，研磨得成品，属于无机硒。 我国在20世纪60年代至90年代初的应用范围较广。主要用来防治癌症、高血压、冠心病、心肌炎、克山病、大骨节病等。 无机硒强化剂具有含硒量高和价格低廉的优点，但无机硒（如亚硒酸钠）的吸收和利用不很理想，其生物有效性低，无机硒毒性较大，中毒量与需要量之间范围小，因而被严格限制其使用量。发达国家已不用简单的无机盐形式作为硒的营养补充剂，日本、美国等发达国家已经禁止在食品中添加亚硒酸钠等无机硒。 瑞典规定乳猪饲料中必须使用有机硒作为硒源，支持采用安全性更高的含硒蛋白、氨基酸等有机形态硒，或富含硒的农副产品；日本在1993年则禁止在动物饲料中添加亚硒酸钠类无机硒。 第二阶段 生物合成或转化有机硒 主要产品：富硒酵母、硒化卡拉胶、富硒食用菌粉、L-硒-甲基硒代半胱氨酸。 代表性产品：富硒酵母 富硒酵母就是在培养酵母的过程中加入硒元素（亚硒酸钠），酵母生长时吸收利用了硒，使硒与酵母体内的蛋白质和多糖有机结合转化为生物硒，从而消除了化学硒（如亚硒酸钠）对人体的毒副反应和肠胃刺激，使硒能够更高效、更安全地被人体吸收利用。 这方面技术实力较强或市场规模较大的中国企业有：安琪酵母（Angel），黄金搭档（GlodenPartner），富硒康（Fuxikang，安徽华信药业），南京远望有限公司（Yuanwang）等。国际企业有新西兰的SouthStar、英国的GrowHow、美国AllTech。 但由于富硒酵母的生物转化周期较短，不同酵母菌种对硒的抗性有较大差异，从而对硒离子的吸收转化能力差异也很大。因此有机硒的转化率不高，从而导致人体对硒的吸收利用率较低。同时，由于富硒酵母还含有一定比例的为完全转化的无机硒，对人体的健康易形成隐患。另外，富硒酵母不能完全溶解并且有特殊的气味，限制了应用范围。 第三阶段 天然植物有机硒 主要产品：天然植物硒蛋白 纯天然植物硒蛋白

年产1000万瓶硒酵母口服液生产工艺设计【毕业作品】

BI YE SHE JI （20 届） 年产1000万瓶硒酵母口服液（100ml,0.5 mg，硒含量5μg每 ml）生产工艺设计

年产1000万瓶硒酵母口服液 （100ml,0.5 mg，硒含量5μg/ml）生产工艺设计 摘要：硒酵母口服液是一种可以增加营养的制剂。体内的含硒酶和蛋白，有保护细胞不受损害的作用。缺硒还有可能影响正常的生育功能。在平时饮食中很容易忽略，故含硒的营养强化剂在生活中的需求越来越高。本着符合GMP要求、可操作性的角度出发，设计有一般中小型制药厂所需具备的简单、经济、合理、安全等优良性质。通过这次的毕业设计，使我们将课本上的理论知识运用到实际设计中来，大大锻炼了我们的整体能力。 关键词：硒酵母口服液GMP 生产工艺

Annual output of 10 million bottles of oral selenium yeast (100ml, 0.5 mg, the selenium content of 5μg / ml) Production process design Abstract :Oral selenium yeast is a way to increase the nutritional formulation. Selenium-containing enzymes and proteins in vivo, to protect cells from damage effects. Selenium deficiency also may affect the normal reproductive function. In the usual diet it is very easy to overlook, so selenium nutritional supplements needs in life is increasing. In the GMP requirements, operational point of view, the design of most small and medium pharmaceutical required of simple good nature of economic, reasonable, and security. With this graduation project, so that the theory of knowledge into actual design to greatly exercise the students' ability. Key word :Selenium yeast Oral GMP Production Process

HPLC含量测定分析方法验证中数据可接受标准讨论.

HPLC 含量测定分析方法验证中数据可接受标准讨论 在进行质量研究的过程中，一项重要的工作就是要对质量标准中所涉及到的分析方法进行方法学验证，以保证所用的分析方法确实能够用于在研药品的质量控制。为规范对各种分析方法的验证要求，中国药典2005年版附录规定了分析方法验证的指导原则。该指导原则对需要验证的分析方法及验证的具体指标做了比较详细的阐述。但是文中未涉及各具体指标在验证时的可接受标准，国际上已颁布的指导原则中也未发现相关的要求。另一方面，大多数药品研发单位在进行质量研究时，已逐步认识到分析方法验证的必要性与重要性，大都也在按照指导原则的要求进行分析方法验证，但验证完后却因没有一个明确的可接受标准，而难以判断该分析方法是否符合要求。本文提出了在对HPLC 含量测定方法进行验证时的可接受标准，供大家讨论。 1．准确度 该指标主要是通过回收率来反映。验证时一般要求分别配制浓度为80％、100％和120％的供试品溶液各三份，分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率。 可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在98.0%-102.0%之间，9个回收率数据的相对标准差（RSD ）应不大于2.0%。 2．线性 线性一般通过线性回归方程的形式来表示。具体的验证方法为： 在80％至120％的浓度范围内配制5份浓度不同的供试液，分别测定其主峰的面积，计算相应的含量。以含量为横坐标（X ），峰面积为纵坐标（Y ），进行线性回归分析。 可接受的标准为：回归线的相关系数（R ）不得小于0.998，Y 轴截距应在100％响应值的2％以内，响应因子的相对标准差应不大于2.0%。

3．精密度 1）重复性 配制6份相同浓度或分别配制浓度为80％、100％和120％的供试品溶液各三份的供试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得6份供试液含量的相对标准差应不大于2.0%。 2）中间精密度 配制6份相同浓度的供试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得12个含量数据的相对标准差应不大于2.0%。 4．专属性 可接受的标准为：空白对照应无干扰，主成分与各有关物质应能完全分离，分离度不得小于2.0。以二极管阵列检测器进行纯度分析时，主峰的纯度因子应大于980。 5．检测限 主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于3。 6．定量限 主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10。另外，配制6份最低定量限浓度的溶液，所测6份溶液主峰的保留时间的相对标准差应不大于2.0%。 7．耐用性 分别考察流动相比例变化±5％、流动相pH 值变化±0.2、柱温变化±5℃、流速相对值变化±20％时，仪器色谱行为的变化，选择至少三个不同厂家或不同批号的同类色谱柱，每个条件下各测试两次。可接受的标准为：主峰的拖尾因子不得大于

最新酵母硒和蛋氨酸硒的特点与优劣比较

酵母硒和蛋氨酸硒的特点与优劣比较
酵母硒和蛋氨酸硒的特点与优劣比较
万建美（四川农业大学动物营养研究所）
1
不同硒源吸收方式与效率
多种形式的硒在小肠中均能被高效地吸收，吸收率高达 98%，如硒酸盐。硒代半胱
氨酸和硒代蛋氨酸通过氨基酸主动转运载体机制被吸收。亚硒酸盐则通过简单扩散
作用吸收，而硒酸盐则与硫酸盐共同使用钠离子介导的转运载体被吸收。
有机硒（氨基酸螯合硒、硒代蛋氨酸、以及小麦和酵母中的有机硒）均有较高的吸
收效率。硒酸盐的吸收效率比亚硒酸盐高，但是硒酸盐和亚硒酸盐中的硒的吸收效
率均高于单质硒。
由于瘤胃中微生物的作用，亚硒酸盐和硒酸盐形式的无机硒容易被还原为不溶于水
的单质硒颗粒，因此反刍动物（牛和羊）对无机硒的利用率较低。当饲粮中硫、铅、
苜蓿及生氰糖苷含量很高，同量饲粮中钙水平过高或过低时，反刍动物对硒的吸收
率降低。
2
硒吸收后的转运
硒被肠道吸收后，血浆中约 65%以上的硒是以硒蛋白 P 的形式存在，并被转运到其
它组织。
但是有机硒与无机硒在转运过程中存在差异。无机硒更多地与谷胱甘肽过氧化物酶
的形式存在，而有机硒则主要沉积到组织蛋白中。
3
蛋氨酸硒（硒代蛋氨酸）
由于化学合成反应的工艺条件复杂，设备规模大、管理难，环保要求严，且生产成
本高，因此国内外都没有达到中试实验生产规模，目前硒代蛋氨酸国内外尚无专业
的硒代蛋氨酸生产厂家，尚未工业化生产。 3.1 硒代蛋氨酸的分子结构式

含量测定分析方法验证的可接受标准简介

审评四部黄晓龙 摘要：本文介绍了在对含量测定所用的分析方法进行方法学验证时，各项指标的可接受 标准，以利于判断该分析方法的可行性。 关键词：含量测定分析方法验证可接收标准 在进行质量研究的过程中，一项重要的工作就是要对质量标准中所涉及到的分析方法进行方法学验证，以保证所用的分析方法确实能够用于在研药品的质量控制。为规范对各种分析方法的验证要求，我国已于2005年颁布了分析方法验证的指导原则。该指导原则对需要验证的分析方法及验证的具体指标做了比较详细的阐述。但是文中未涉及各具体指标在验证时的可接受标准，国际上已颁布的指导原则中也未发现相关的要求。另一方面，大多数药品研发单位在进行质量研究时，已逐步认识到分析方法验证的必要性与重要性，大都也在按照指导原则的要求进行分析方法验证，但验证完后却因没有一个明确的可接受标准，而难以判断该分析方法是否符合要求。本文结合国外一些大型药品研发企业在此方面的要求，提出了在对含量测定方法进行验证时的可接受标准，供国内的药品研发单位在进行研究时参考。 1．准确度 该指标主要是通过回收率来反映。验证时一般要求分别配制浓度为80％、100％和120％的供试品溶液各三份，分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率。 可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在98.0%-102.0%之间，9个回收率数据的 相对标准差（RSD）应不大于2.0%。 2．线性

线性一般通过线性回归方程的形式来表示。具体的验证方法为： 在80％至120％的浓度范围内配制6份浓度不同的供试液，分别测定其主峰的面积，计算相应的含量。以含量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析。 可接受的标准为：回归线的相关系数（R）不得小于0.998，Y轴截距应在100％响应值的2％以内，响应因子的相对标准差应不大于2.0%。 3．精密度 1）重复性 配制6份相同浓度的供试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得6份供试液含量的相对标准差应不大于2.0%。 2）中间精密度 配制6份相同浓度的供试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得12个含量数据的相对标准差应不大于2.0%。 4．专属性 可接受的标准为：空白对照应无干扰，主成分与各有关物质应能完全分离，分离度不得小于2.0。以二极管阵列检测器进行纯度分析时，主峰的纯度因子应大于980。 5．检测限 主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于3。 6．定量限 主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10。另外，配制6份最低定量限浓度的溶液，所测6份溶液主峰的保留时间的相对标准差应不大于2.0%。 7．耐用性 分别考察流动相比例变化±5％、流动相pH值变化±0.2、柱温变化±5℃、流速相对值变

甲钴胺片含量测定方法学研究

甲钴胺片的含量测定检测方法研究 徐丽平徐慧娟杭州康恩贝制药有限公司 摘要目的：建立甲钴胺片含量测定方法，为甲钴胺片质量标准相关检测项目提供检测方法和实验依据。方法：样品碾细，以流动相溶解，制备供试品溶液；色谱分析条件：色谱柱为Diamonsil 5u C18，250×4.6mm；流动相：乙腈-0.03mol/L 磷酸二氢钠（磷酸调pH为3.5）（19:81）；流速1.0ml/min；检测波长：342nm。结果：甲钴胺线性关系良好，平均回收率100.7%。结论：本法测定结果准确，可用于甲钴胺的含量测定。 关键词：甲钴胺，高效液相色谱法 甲钴胺片活性成分甲钴胺，主要用于治疗周围神经病。由于甲钴胺对光敏感，故需包衣，包衣材料成分复杂，干扰大，现有的紫外分光光度法重现性差。本实验采用HPLC法测定甲钴胺的含量，结果准确，复现性好。 1 仪器及试药 高效液相色谱仪：安捷伦1100，VWD检测器，？？工作站；电子天平：？2100；超声波清洗器。 甲钴胺对照品，浙江省药品检验所标定，批号：？，含量：？；乙腈为色谱纯，磷酸二氢钠为分析纯；甲钴胺片为本公司生产，规格0.5mg。 2 色谱条件 色谱柱：Diamonsil 5u C18（250×4.6mm）；流动相：乙腈-0.03mol/L磷酸二氢钠（磷酸调pH为3.5）（19:81）；流速1.0ml/min；检测波长：342nm；柱温：常温；进样量：20μl。理论塔板数按甲钴胺峰计算不低于2000，甲钴胺与相邻杂质峰的分离度应符合要求。 3溶液的制备 3.1对照品溶液 3.2供试品溶液 3.3空白溶液 4系统适用性试验 取处方量的空白辅料，照含量测定法进行测定，空白辅料不干扰测定，结果见附图2-1（图谱：c:\HPCHEM\1\DATA\JGAFFX\00009）

含量测定分析方法验证的可接受标准简介

含量测定分析方法验证的可接受标准简介 黄晓龙 摘要：本文介绍了在对含量测定所用的分析方法进行方法学验证时，各项指标的可接受标准，以利于判断该分析方法的可行性。 关键词：含量测定分析方法验证可接收标准 在进行质量研究的过程中，一项重要的工作就是要对质量标准中所涉及到的分析方法进行方法学验证，以保证所用的分析方法确实能够用于在研药品的质量控制。为规范对各种分析方法的验证要求，我国已于2005年颁布了分析方法验证的指导原则。该指导原则对需要验证的分析方法及验证的具体指标做了比较详细的阐述。但是文中未涉及各具体指标在验证时的可接受标准，国际上已颁布的指导原则中也未发现相关的要求。另一方面，大多数药品研发单位在进行质量研究时，已逐步认识到分析方法验证的必要性与重要性，大都也在按照指导原则的要求进行分析方法验证，但验证完后却因没有一个明确的可接受标准，而难以判断该分析方法是否符合要求。本文结合国外一些大型药品研发企业在此方面的要求，提出了在对含量测定方法进行验证时的可接受标准，供国内的药品研发单位在进行研究时参考。 1．准确度 该指标主要是通过回收率来反映。验证时一般要求分别配制浓度为80％、100％和120％的供试品溶液各三份，分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率。 可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在98.0%-102.0%之间，9个回收率数据的相对标准差（RSD）应不大于2.0%。 2．线性 线性一般通过线性回归方程的形式来表示。具体的验证方法为： 在80％至120％的浓度范围内配制6份浓度不同的供试液，分别测定其主峰的面积，计算相应的含量。以含量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析。 可接受的标准为：回归线的相关系数（R）不得小于0.998，Y轴截距应在100％响应值的2％以内，响应因子的相对标准差应不大于2.0%。 3．精密度 1）重复性 配制6份相同浓度的供试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试，所