实验5高效液相色谱应用实验
一、实验目的
1、熟悉高效液相色谱分离分析的原理。
2、掌握根据保留值,用已知纯物质对照定性的分析方法。
3、掌握用归一化法定量测定混合物各组分的含量。
4、掌握用微量进样器进样的基本操作和色谱软件的一般操作。
二、方法原理
高效液相色谱法是一种重要的色谱分离技术。根据所用固定相和分离机理的不同,一般将高效液相色谱法分为分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱等。
在分配色谱中,组分在色谱柱上的保留程度取决于它们在固定相和流动相之间的分配系数K:
组分在固定相中的浓度
K= ————————————
组分在流动相中的浓度
显然,K值越大,组分在固定相上的保留时间越长固定相与流动相之间的极性差值也越大。因此,出现了流动相为非极性而固定相为极性物质的正相色谱法和流动相为极性而固定相为非极性的反相色谱法。目前应用最广的固定相是通过化学反应的方法将固定液键合到硅胶表面上,即所谓的键合固定相。若将正构烷烃等非极性物质(如n-C18烷)键合到硅胶基质上,以极性溶剂(如甲醇和水)为流动相,则可分离常用的有机化合物。
三、仪器与试剂
高效液相色谱仪、紫外(254nm)检测器、色谱柱C18柱(250mm×4.6mm)、注射器(25μL)
流动相甲醇+ 水(使用前应超声波脱气)、甲苯、苯甲醇、苯甲酸(均为分析纯)、未知混合样品(甲苯、苯甲醇、苯甲酸的混合溶液)
四、实验步骤
1. 以流动相为溶剂,配制甲苯、苯甲醇、苯甲酸的标准溶液,浓度均为10mg/mL。
2. 在老师的指导下开启液相色谱仪,设定操作条件。
3. 待仪器稳定后,分别用注射器进甲苯、苯甲醇、苯甲酸溶液各5μL,进样的同时,要作好记录保留时间。
4. 进未知混合样品5μL,记下各组分色谱峰的保留时间。
5. 以标准物的保留时间为基准,给未知样品各组分定性。
6. 根据标准物的峰面积,估算未知样品中相应组分的含量。
五、问题讨论
1. 解释未知混合样品中各组分的洗脱顺序。
2、若实验中的色谱峰无法完全分离,应如何改善实验条件?
3、高效液相色谱仪由哪几大部分组成?
4、紫外光度检测器是否适用于所有的有机化合物,为什么?
六、注意事项
1、为获得理想的分离效果,保持较低的柱压力降,准确控制流动相的流量,防止微米级的机械杂质阻塞流路是实验操作中的关键。
2、必须掌握溶剂的纯化技术,样品最好用针头式过滤器(复杂样品事先要经过预处理),流动相须经0.45微米以下滤膜过滤。
实验数组1 实验目的: 1、进一步掌握循环结构的程序设计 2、掌握在循环结构里面使用break、continue 3、掌握一维数组的定义与使用 实验内容: 一、观察下列代码(有语法问题自己解决) 1、利用无限循环输入数据,直到条件满足利用break跳出循环: #include
{ int x,sum=0; while(1) { cin >> x; sum += x; if(x == 0) break; } cout << "The sum is " << sum << endl; return 0; } 2、利用continue语句写一程序:输出1-20之间不能被3整除的数。(参考前面第2题) #include
高效液相色谱实验报告 一、实验目的 1了解液相色谱的发展历史及最新进展 2 学习液相色谱的基本构造及原理 3 掌握液相色谱的操作方法和分析方法,能够通过HPLC分离测定来对目标化合物的分析鉴定。 二、实验原理 液相色谱法采用液体作为流动相,利用物质在两相中的吸附或分配系数的微小差异达到分离的目的。当两相做相对移动时,被测物质在两相之间进行反复多次的质量交换,使溶质间微小的性质差异产生放大的效果,达到分离分析和测定的目的。液相色谱与气相色谱相比,最大的优点是可以分离不可挥发而具有一定溶解性的物质或受热后不稳定的物质,这类物质在已知化合物中占有相当大的比例,这也确定了液相色谱在应用领域中的地位。 高效液相色谱可分析低分子量、低沸点的有机化合物,更多适用于分析中、高分子量、高沸点及热稳定性差的有机化合物。80%的有机化合物都可以用高效液相色谱分析,目前以已经广泛应用于生物工程、制药工程、食品工业、环境检测、石油化工等行业。 三、高效液相色谱的分类 吸附色谱法、分配色谱法、空间排阻色谱法、离子交换色谱法、亲和色谱法、化学键合相色谱法 四、高效液相色谱仪的基本构造 高效液相色谱至少包括输液系统、进样器、分离柱、检测器和数据处理系统等几部分。 1 输液系统: 包括贮液及脱气装置、高压输液泵和梯度洗脱装置。贮液装置用于存贮足够量、符合HPLC要求的流动相。高效液相色谱柱填料颗粒比较小,通过柱子的流动相受到的流动阻力很大,因此需要高压泵输送流动相。 2 进样系统: 将待测的样品引入到色谱柱的装置。液相色谱进样装置需要满足重复性好、死体积小、保证柱中心进样、进样时引起的流量波动小、便于实现自动化等多项要求。进样系统包括取样、进样两项功能。 3 分离柱: 色谱柱是色谱仪的心脏、柱效高、选择性好、分析速度快是对色谱柱的一般要求。商品化的HPLC微粒填料,如硅胶和以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球(包括离子交换树脂)等的粒度通常在3μm、5μm、7μm、以及10μm。采用的固定相粒度甚至可以达到1μm,而制备色谱所采用的固定相粒度通常大于10μm。HPLC填充柱效的理论值可以达到50000/m~160000/m理论板,一般采用100-300mm的柱长可满足大多数样品的分析的需要。由于柱效内、外多种因素的影响,因此为使色谱柱达到其应有的效率。应尽量的减小系统的死体积。 4 检测系统: HPLC检测器分为通用型检测器和专用型检测器两类。通用型检测器可连续测量色谱柱流出物(包括流动相和样品组分)的全部特性变化。这类检测仪器包括示差折光检测器、介
VB程序设计实验五 实验目的 ●掌握一维数组和二维数组的操作 ●学习跟数组相关的控件:列表框和组合框 复习 1.列表框 列表框(ListBox)控件允许用户查看和选择列表中的多个元素。 表5-11 列表框的常用属性和事件 2.组合列表框(ComboBox)整合了列表框和文本框的功能,以一个文本框控件(TextBox) 右边加上一个向下箭头的样式显示。有Simple(简单组合框)、DropDown(下拉组合框)和DropDownList(下拉列表框)。其中,Simple选项不显示下拉箭头,而是在控件的旁边显示一个滚动条;DropDown风格(默认值)在单击向下箭头时显示一个下拉列表,且在ComboBox中输入一个值;DropDownList显示一个下拉列表,但不允许用户在ComboBox中输入。 表5-13 组合列表框的常用属性和事件
(1) Items.Count属性:列表框或组合框中项目数量。最后一项的序号为Items.Count-1,该属性只能在程序中设置或引用。 (2) Text属性:被选定的选项的文本内容。该属性只能在程序中设置或引用。 注意:ListBox1.Items(ListBox1.SelectedIndex)等于ListBox1.Text。 (3) Items.Add方法 把一个选项加入列表框,格式:对象.Items.Add(选项);如:ListBox1.Items.Add("周海涛") (4) Insert方法 在指定位置插入一个项目。格式:对象.Items.Insert(序号, 添加项内容) (5)Items.Remove方法 从列表框中删除指定的项。格式:对象. Items.Remove (选项)。 例如:ListBox1.Items.Remove ("华成") (6)Items.RemoveAt方法 格式:对象.RemoveAt(Index) 从列表框中删除指定的项。Index表示被删除项目在列表框中的位置,从0开始。 例如:ListBox1.Items.RemoveAT(4) (7) Items.Clear方法 格式:对象.Items.Clear 用于清除列表框所有项目,例如:ListBox1.Items.Clear 4.单选按钮、复选框和框架 1)单选按钮(RadioButton) 单选按钮以组的形式出现,允许选择其中一项。 ?Text属性:按钮上显示的文本 ?TextAlign属性:文本对齐方式 ?Checked属性:表示单选按钮的状态,True ——被选定,False ——未被选定?Click事件:单击后,使Checked属性为True ?CheckedChanged事件:当某个单选按钮的状态被发生变化,该事件随之被触发。2)复选框(CheckBox) 与RadioButton具有相同属性和事件,之外还有: ?CheckState属性:表示复选框状态,Unchecked——未选定,Checked——被选定,Indeterminate——灰色 3)框架(GroupBox分组框) ?Text属性:标题文本 ?Enabled属性:框架和其中的控件
实验七高效液相色谱(HPLC)法测定邻苯二甲酸酯 一.实验目的 1、学习高效液相色谱仪的基本操作方法。 2、了解高效液相色谱仪原理和条件设定方法。 3、了解高效液相色谱法在日常分析中的应用。 二.实验原理 高效液相色谱法是以液体作为流动相,借助于高压输液泵获得相对较高流速的液流以提高分离速度、并采用颗粒极细的高效固定相制成的色谱柱进行分离和分析的一种色谱方法。 在高效液相色谱中,若采用非极性固定相,如十八烷基键合相,极性流动相,即构成反相色谱分离系统。反之,则称为正相色谱分离系统。反相色谱系统所使用的流动相成本较低,应用也更为广泛。 定量分析时,为便于准确测量,要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。分离度(R)的计算公式为: R= 2[t (R2)-t (R1) ] /1.7*(W 1 +W 2 ) 式中 t (R2)为相邻两峰中后一峰的保留时间; t (R1) 为相邻两峰中前一峰的保留 时间; W 1及W 2 为此相邻两峰的半峰宽。除另外有规定外,分离度应大于1.5。 本实验对象为邻苯二甲酸酯,又称酞酸酯,缩写PAE,常被用作塑料增塑剂。它被普遍应用于玩具、食品包装材料、医用血袋和胶管、乙烯地板和壁纸、清洁剂、润滑油、个人护理用品,如指甲油、头发喷雾剂、香皂和洗发液等数百种产品中。但研究表明,邻苯二甲酸酯在人体和动物体内发挥着类似雌性激素的作用,是一类内分泌干扰物。待测物性质见表1。 表1色谱柱测试条件 如果要检测不同条件对谱图分离的影响,可按表1配制几种物质的混合溶液,在不同条件下进行HPLC分离检测。
三.仪器与试剂 1、仪器 Agilent 1100高效液相色谱仪,50ul微量注射器。 2、试剂 甲醇(色谱专用),高纯水 四.实验步骤 1、色谱条件 色谱柱:辛烷基硅烷键合硅胶(C8) 柱温:室温 流动相:初始为高纯水:30%,甲醇:70% 检测器:DAD检测器; 检测波长:220nm; 进样体积:100μl定量环,实际注射每次可控制在200μl。 2、待测溶液的配制 首先用甲醇做溶剂配制储备液:邻苯二甲酸二甲酯(0.3880g/L),邻苯二甲酸二乙酯(0.2770g/L),邻苯二甲酸二丁酯(0.3776g/L)。然后各取1mL储备液用水和甲醇(20:80)稀释至10mL,作为待测溶液。 3、色谱测定 (1) 按操作规程开启电脑,开启脱气机、泵、检测器等的电源,启动Agilent 1100在线工作软件,设定操作条件。流量为1.000ml/min。 (2) 待仪器稳定后,开始进样。将进样阀柄置于“LOAD”位置,用微量注射器吸取混合物溶液50ul,注入仪器进样口,顺时针方向扳动进样阀至“INJECT”位置,此时显示屏显示进样标志。 (3) 记下各组分色谱峰的保留时间及峰面积及分离比。 (4) 实验完毕,清洗系统及色谱柱。依次用甲醇-水(60:40)、甲醇-水(70:30)……直到纯甲醇作流动相清洗,每次清洗至基线走稳,至少清洗15min。 五.实验结果
实验(实训)报告 项目名称实验五数组 所属课程名称 C 语言程序设计 项目类型验证性 实验(实训)日期2011/11.16/11.23/11.30 班级10统计2 学号100112100236 姓名裴晓晓 指导教师刘亚楠 浙江财经学院教务处制
一、实验(实训)概述: 【实验目的】 1. 掌握一维数组和二维数组的定义、赋值和输入输出的方法。 2. 掌握字符数组和字符串函数的使用。 3. 掌握与数组有关的算法(特别是排序算法)。 【实验要求】 1.选择合适的数据类型表达应用要求; 2.正确运用循环结构处理数组问题; 3.输入和输出格式清晰,有提示信息。能对输入数据进行基本的合理性判断。 【基本原理】 见第五章课件和课本内容 【实施环境】(使用的材料、设备、软件) Visual C++ 6.0 二、实验(实训)内容: 第1题 【项目内容】 完成课后第3题。求一个3×3矩阵对角线元素之和。 【方案设计】 提示:请在此粘贴你的完整程序。□ #include 【结论】(结果、分析) 提示: 请记录该程序的运行过程:输入输出。比如: 123 456↙(↙表示输入,如果没有输入,则没有这一行) a+b=579 (输出) 并尽可能对程序的执行结果进行分析。□ 4 5 5 6 2 34 7 23 5 66 sum=104 第2题 【项目内容】 完成课后第4题。 提示:自定义数组a的大小和内容。插入一个数number到已排好的数组中,可以有以下两种方法:(1)先从数组前面开始比较number和数组元素a[i]的大小,直到找到待插入的正确位置(即a[i-1] 实验5高效液相色谱应用实验 一、实验目的 1、熟悉高效液相色谱分离分析的原理。 2、掌握根据保留值,用已知纯物质对照定性的分析方法。 3、掌握用归一化法定量测定混合物各组分的含量。 4、掌握用微量进样器进样的基本操作和色谱软件的一般操作。 二、方法原理 高效液相色谱法是一种重要的色谱分离技术。根据所用固定相和分离机理的不同,一般将高效液相色谱法分为分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱等。 在分配色谱中,组分在色谱柱上的保留程度取决于它们在固定相和流动相之间的分配系数K: 组分在固定相中的浓度 K= ———————————— 组分在流动相中的浓度 显然,K值越大,组分在固定相上的保留时间越长固定相与流动相之间的极性差值也越大。因此,出现了流动相为非极性而固定相为极性物质的正相色谱法和流动相为极性而固定相为非极性的反相色谱法。目前应用最广的固定相是通过化学反应的方法将固定液键合到硅胶表面上,即所谓的键合固定相。若将正构烷烃等非极性物质(如n-C18烷)键合到硅胶基质上,以极性溶剂(如甲醇和水)为流动相,则可分离常用的有机化合物。 三、仪器与试剂 高效液相色谱仪、紫外(254nm)检测器、色谱柱C18柱(250mm×4.6mm)、注射器(25μL) 流动相甲醇+ 水(使用前应超声波脱气)、甲苯、苯甲醇、苯甲酸(均为分析纯)、未知混合样品(甲苯、苯甲醇、苯甲酸的混合溶液) 四、实验步骤 1. 以流动相为溶剂,配制甲苯、苯甲醇、苯甲酸的标准溶液,浓度均为10mg/mL。 2. 在老师的指导下开启液相色谱仪,设定操作条件。 3. 待仪器稳定后,分别用注射器进甲苯、苯甲醇、苯甲酸溶液各5μL,进样的同时,要作好记录保留时间。 4. 进未知混合样品5μL,记下各组分色谱峰的保留时间。 5. 以标准物的保留时间为基准,给未知样品各组分定性。 6. 根据标准物的峰面积,估算未知样品中相应组分的含量。 仪器分析实验报告实验名称:高效液相色谱分析实验 一、实验目的 1. 了解HPLC的结构,了解仪器的开、关程序。 2. 了解流动相的制备和样品溶液的制备。 3. 知道仪器的运行程序和进行样品分析。 二、仪器和试剂 仪器:美国安捷伦1200型HPLC、10μL的微量注射器 试剂:磷酸乙腈溶液(PH=3)、重蒸水、邻氯苯甲酸 三、实验步骤 1.流动相的准备 流动相只有一组:PH=3的磷酸乙腈溶液,进过脱气,用蠕动泵输送。2.开机,色谱柱平衡 当1完成后,开机,待色谱柱平衡。 3.样品溶液的准备 配置好邻氯苯甲酸溶液,按要求选好滤纸的孔径大小。用低压过滤装置过滤,由于美国安捷伦1200型HPLC配有脱气装置,因此滤液无需事先脱气就可以进行分析。 4.基线的查看 由于仪器内部压力的变化可以引起基线的不断波动,因此,需等待压力稳定后,基线平稳才能进行进样。 5.样品进样分析 用10μL的微量注射器取5μL的邻氯苯甲酸,微量注射器中不能有气泡,将微量注射器的针头插入到注射的孔时,打开微量注射阀,将邻氯苯甲酸注射进去后,迅速关闭阀门,抽出针头,等待仪器的分析结果。 6.色谱柱的清洗 分析工作结束后,要清洗进样阀中的残留样品,也要用适当的液体来清洗色谱柱。 7.关机 实验完毕后,关闭仪器和电脑。 四、实验数据及处理 1.LC参数 2.色谱柱参数 3.四元泵状态 A:0.0%流速:1.000ml/min B:0.0%压力:91bar C:0.0% D:0.0% 5.色谱分析谱图见附页,经过注射5μL的邻氯苯甲酸,得到三组实验色谱图, 根据谱图列表数据如下: 色谱柱长(L)、理论塔板高度(H)与理论塔板数(n)三者的关系为: n = L / H 理论塔板数和色谱参数之间的关系为: n = 16 ( t R / W b ) 2 = 5.54 ( t R / Y1/2 ) 2 则取第五组数据计算得: t R=2.437 min = 146.22s Y1/2 = 2.354(0.1375min / 4 ) = 4.855125 s n = 5.54 ( t R / Y1/2 ) 2 =5025 (块) 实验五数组的应用(1) 一、实验目的: 1、掌握静态数组的定义和使用方法。 2、用数组解决实际问题。 二、实验准备: 1、计算机基本操作练习。 2、VisualBasic软件使用预习。 3、设计出下面问题的程序。 三、实验步骤及内容: 1、静态数组的声明,语法格式如下: Dim 数组名[(各维下标)] [As 数据类型],… 例如:Dim num(6) As Integer 定义了一个包含()个元素的数组,从()到()。 静态数组的上下标必须是(),如果希望数组下标下界默认从1开始,则可在窗体的“通用|声明”部分使用: ________________________________语句来改变默认值。 2、Array函数的使用。 Dim a() As Variant A = Array(154,135,121) 请说明以上语句的作用,()。 Lbound函数和Ubound函数可以分别返回数组的指示维数的最小、最大可用下标。 3、应用一维静态全局数组求10个100以内的最大值、最小值、平均值和方差。程序运行界面如图所示。 4、利用数组排序。按“生成随机数”按钮,在第一个文本框中生成10个10~99之间的随机数,然后按“按大小排序”按钮,将这10个数按从大到小的顺序排列放在第二个文本框中。设计界面及运行结果如图1和图2 所示: 图1 设计界面 图2 运行界面 要求: 提示: (1)设计窗体,添加控件:两个文本框(Text)、两 个按钮(Command)。 (2)如表1 所示设置窗体控件属性。 (4)自行编辑代码。 窗体通用声明代码如下: Option Base 1 Dim a() As Integer 窗体控件代码自行编辑。 Private Sub Command1_Click() 高效液相色谱仿真实验 一、实验概述: 以液体做流动相的色谱称为液相色谱。人们把已经比较成熟的气相色谱理论应用于液相 色谱,使液相色谱得到了迅速的发展。随着其他科学技术的发展,出现了新型的高压输液泵、 高效的固定相和柱填充技术、高灵敏度的检测器,加上计算机的应用,使得液相色谱实现了 高效率和高速度。这种分离效率高、分析速度快的液相色谱称为高效液相色谱(High performanee liquid chromatography, HPLC )。 二、实验装置: Agilent(安捷伦)1100系列液相色谱系统简介: Agile nt1100 系列HPLC组件和系统,将Agile nt长期的化学分析经验与领先的计算机技术结合,把网络技术引入了实验室。从1996年以来,在全球已经安装了超过130,000台1100组件和55,000多套化学工作站数据处理系统,成为目前单一型号市场占有率最高的液 相色谱系统。 本仿真软件是模拟用Agile nt化学工作站的数据处理系统进行样品分析和数据采集(色谱图)的过程。 注:本软件只是模拟分析的过程和内容,并不涉及其原理,所以实验中的参数调节对结果并 没有影响,而真实实验结果是随参数的变化而变化的,这一点需要特别注意! 实验主界面: 3 刮创制画宣 ■ I ; 1 I ■ ■ I ' rill ■■ IB III I I I 1 I 稠环芳S.VXE 回醇和醞的分折 J 监 &]窑无醉的仔高“貂 割有机绥的分离,T 胳 丈件名⑧:|稠环芳咗.孤£ 文件类型 ①:卜站仿宣实验丈祥 2.1狐) 三] 厂以貝读方式打开? 用鼠标左键点中你要做的实验,此文件名会出现在对话框的“文件名” 一栏的文本框 中,在此实验文件上面双击左键或者点击“打开”按钮打开实验文件。 三、实验操作: 第一步:选取实验 点击主菜单上的“实验选取”,会出现如下的对话框: 取消| 化学工作站界面: 实验五结构体 一、实验目的 1.掌握结构体类型变量的定义和使用。 2.掌握结构体类型数组的概念和使用。 二、实验内容 编写一个程序实现下面的功能: A.建立一个数组用于存储学生的学号、姓名和三门课程的成绩和平均成绩 B.输入学号后输出该学生的学号、姓名和三门课程的成绩 C.输入学号后删除该学生的数据 D.插入学生的数据 E.输出平均成绩在80分及以上的记录 F.退出 要求用循环语句实现B--E的多次操作 三、实验具体实验程序代码(要有注释)、测试结果(最好截图)和实验总结 1、实验代码 建立一个数组用于存储学生的学号、姓名和三门课程的成绩和平均成绩 输入学号后输出该学生的学号、姓名和三门课程的成绩 um,&stud[i].name,&stud[i].yingyu,&stud[i].shuxue,&stud[i].cc); stud[i].avg=(stud[i].yingyu+stud[i].shuxue+stud[i].cc)/3; } for(i=0;i实验5 高效液相色谱应用实验
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