番红O染色

番红O固绿染色液

货号M025

原理:

番红(也称作番红O或基本红2)是个用在组织学和细胞学的生物染色剂。番红在一些染色的实验计划表中用作复染剂，将所有的细胞核染成红色。这在革兰氏染色和内孢子染色都

试剂盒组成:

操作流程：

1. 石蜡切片脱蜡至水，自来水冲洗3min;

2. (取等量的A液B液混合，即为铁苏木素溶液。现用现配，用多少配多少，用后丢弃。混合后的染色液为紫黑色，染色能力强，并不易褪色。但不易久存，24小时后失去染色能力。)铁苏木精染色3min;自来水冲洗3min;

3. 盐酸酒精溶液分化3-5Sec；自来水冲洗3min。

4. 入固绿染色液中染色8min；

5. 在1％的醋酸中快速分化3Sec；

6. 速洗1min;

7. 入番红O染色液中染色3min（最多）

8. 95％酒精冲洗浮色；

9. 100%酒精脱水，二甲苯透明，中性树脂封固。

结果：

细胞核呈黑色，细胞浆、软骨下骨区呈绿色，粘蛋白、软骨及钙化软骨、肥大细胞颗粒呈橙色/红色。

染色注意事项:

1.标本固定尽可能用多聚甲醛固定.脱钙后一定要流水冲洗过夜后再脱水包埋.否则番红不

易着色.

2.如果染色不理想可以考虑在细胞核染色后用饱和苦味酸水溶液处理30min,水洗后再入

固绿染色液染色.

3.番红O固绿染色液分化很关键,步骤5、6时要快；步骤8速度要快，否则红色褪色。

软骨染色液(番红O法)步骤及注意事项

软骨染色液(番红O法)步骤及注意事项 货号：G2540 规格：100ml 有效期：12个月有效 产品简介： 软骨组织由软骨细胞、软骨基质和纤维组成，软骨组织及其周围的软骨膜构成软骨。软骨根据基质内所含纤维素成分不同分为透明软骨、弹性软骨、纤维软骨。软骨染色方法有很多种，例如甲苯胺蓝法、阿利新蓝法、番红O法等。 番红0软骨染色的原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红O结合呈现红色。番红O是一种结合多阴离子的阳离子染料，其显示软骨组织是基于阳离子染料与多糖中阴离子基团（硫酸软骨素或硫酸角质素）结合。 自备材料： 10%福尔马林固定液、脱钙液、蒸馏水、Weigert铁苏木素、系列乙醇等。 操作步骤（仅供参考）： 1.标本的处理：10%福尔马林固定、脱钙、石蜡切片。 2.常规脱蜡至水。 3.入新鲜配制的Weigert染液染色3-5min。 4.酸性乙醇分化液分化15s。 5.蒸馏水洗10min。 6.（可选）在固绿染色液内浸染5min，蒸馏水洗1min。 7.入Safranin O stain内浸染1-2min，蒸馏水洗1min。 8.分别用95%乙醇、无水乙醇脱水。

9.二甲苯透明，光学树脂封固。 染色结果： 软骨基质深红色 软骨细胞核蓝色 软骨细胞浆红色 细胞核灰黑色 注意事项： 1.需要显示细胞核时，尽量采用铁苏木素染色，其着色力强色调浓，一般的苏木素着色力不强。 2.Weigert苏木素染液不可预先配制后放置，配制好后一般24h失去染色能力。 3.切片在Safranin O stain中染色不宜过长，否则易导致背景的深红色不易分化掉。 4.Safranin O stain染色后，不宜在低浓度乙醇脱水，否则易褪色。 5.95%乙醇脱水时间不宜过长。 6.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

番红固绿切片染色快速法不使用石蜡

番红固绿染色简化法 ----------仅限观察植物苗期主根部导管1目的要求： 由于专业的番红固绿需要使用超薄切片机，其功能繁琐，并十分耗时，其主要包括染色，包埋，切片，脱蜡，复染等多个步骤，这里不再赘述。若没有切片机，我们往往要四处奔走求人并支付高昂的费用。经本人亲自实验和总结，采用传统常规染色法，在不使用切片机和钞票的条件下，整理如下流程。若只作为一般实验的验证，样品的容量不大并不需要长期保存的情况下，不需要超薄切片机，只需使用双层刮胡刀片，显微镜可以观察1毫米左右的切片。直径最好大于1mm，肉眼可分辨，一般只用于观察主根。为切片方便，可稍微将根晾干，再进行横切或纵切。 根据对刊用插图(照片)总的要求得出，文稿插图(含照片)的应用以少而精为原则。凡是能用文字说明的,应尽量不用插图,能用线条图表示的,就不用照片图;能用单色图表示的,就不用彩色图。即使是线条图也尽量避免搞成大幅的插页图,以便于编排和印刷。插图的线条必须准确,主次分明,清晰可辨,便于读者理解文字的内容。若切片够均匀，线条够清晰，也可作为论文插图。 2实验步骤： 2.1实验准备： 2.2材料：目的植物新鲜根部，刮胡刀刀片两片，越锋利越好，但注意安全。常规染色用品。 2.3试剂：无水酒精，95%酒精，蒸馏水，预先备制的苯胺番红试剂和苯胺固绿试剂（最好放置一段时间，可提前一月配置，效果更好，但不必要），二甲苯和50%体积无水乙醇和50%体积二甲苯混合液。 3实验步骤： 3.1切片： 按照前文介绍方法切片，若视力好，手法稳，可用单个刀片细细切下，要求，横切厚度在1mm左右，并呈透明圆形，确保中心完好。 3.2染色： 1）滴1-2滴无水酒精； 2）吸去无水酒精用95%酒精冲洗，使其平铺于玻片，酒精分散均匀； 3）第1滴蒸馏水与材料上，是材料包裹于水滴中； 4）滴1-2滴苯胺番红试剂，染色1-3min； 5）使用95%酒精冲去浮色并脱水，处理至透明状态，韧皮部分由于富集细胞壁，颜色可以偏红，其余部分为粉色透明状； 6）少量（一小滴）苯胺固绿复染，并迅速吸去，并滴入无水酒精，操作在2s内完成； 7）继续用无水乙醇洗脱至半透明状，以为无集中色斑为佳； 8）各50%体积的无水酒精和二甲苯混合物，1-2滴； 9）滴1-2滴二甲苯透明； 10）擦去材料以外药剂，使玻片清洁，可不使用盖玻片，一定不能使材料山的二甲苯干掉； 11）镜检。

植物制片的染色及显微化学鉴定方法

植物制片的染色及显微化学鉴定方法 一、目的与要求 1、学习植物制片的一般染色方法。 2、学会并掌握常用显微化学鉴定法，即细胞壁化学组成及细胞内主要后含物性质的鉴定方法。 二、材料和用品 1、自备材料：植物叶片、芹菜叶柄、土豆块茎、花生种子等等，解剖器、剃刀或双面刀片。 2、其它材料和用品：显微镜、载玻片、盖玻片、纱布、吸水纸、蒸馏水、染色缸；0.1%番红、0.1% 固绿或1%苯胺蓝等染液、中性树胶、二甲苯、酒精、碘—氯化锌、盐酸—间苯三酚、苏丹Ⅲ、碘—碘化钾、10%氯化铁、盐酸等。 三、实验内容 1、植物制片的染色方法 2、常用显微化学鉴定法 四、实验方法 1、植物制片的染色方法 用徒手切片法切得的薄片，如果仅仅是为了临时观察，制成临时装片即可，这种临时制片不能长久保存，只能作临时观察之用，又由于没经过染色，结构显示的也不够清晰。为了求得更清晰地显示其细微结构及化学成分，并能够较长时间的保存，可以进一步染色及其它处理以至封片，从而可制成半永久或永久制片。常用的染色方法是番红—苯胺蓝（或固绿）二重染色法，具体操作方法有二： 方法一： （1）将植物切片材料放入30%酒精中，5分钟后移入水中。 （2）用0.1%番红水溶液染色12—24小时。 （3）倒去番红液，用清水冲洗数次后，再放回50%酒精中浸泡5分钟。 （4）将材料从50%酒精中转入70%酒精中脱色，直至硬木质化的细胞壁呈现红色，其它部分呈粉红色或近于无色时为止。 （5） 1%苯胺蓝（用70%酒精配制）对染2—5分钟。若用0.1%固绿对染，则仅需半分钟左右即可。 注意：此步染色，要不时地在显微镜下检视，切忌染色过深，当木质化细胞壁呈红色，其它部分为淡蓝或淡绿色时，即可停止。 （6）用95%酒精冲去多余染液，再经无水酒精脱水5分钟。 （7）放入等量无水酒精与二甲苯溶液中及纯二甲苯中透明各3分钟。 （8）将切片材料移入载玻片上，在二甲苯未干时立即加一滴中性树胶封片，尔后将玻片平放，自然凉干或置于摄氏35度温箱中烘干。 染色结果：木质化细胞壁呈现红色，纤维素细胞壁呈现蓝色或淡绿色。 方法二： （1）将切得的薄片移入盛有FAA固定液的小容器中，盖上盖固定半小时到1小时，24小时以上也可。材料经固定如不及时制片可移入70%酒精中长期保存。 （2）材料从固定液中移入盛有蒸馏水的小培养皿中，漂洗半小时到1小时，换水一次。 （3）将材料移入载玻片上，用吸水纸吸去多余水分，加一滴苯胺番红染色约10分钟。 （4）吸去染液，滴入95%酒精洗两次，去浮色及脱水。 （5）加一滴苯胺固绿复染约2～5秒钟，并轻轻晃动玻片，使染色均匀。（注意：此步骤要迅速，若染色时间过长会使红色全部褪去。） （6）吸去染液，滴入无水酒精洗两次，去浮色及脱水。 （7）滴入等量无水酒精与二甲苯溶液约1分钟后吸去，再滴入纯二甲苯冲洗2次，使材料透明。 （8）擦去材料以外的残存药剂，使玻片清洁，但不使材料上的二甲苯干掉，并及时镜检。 （9）镜检后，如材料的构造清晰，红绿对比鲜明，立即加一滴中性树胶封片。 染色结果同样是木质化细胞壁呈现红色，纤维素细胞壁呈现淡绿色。这种方法更节省时间一些。 2、常用显微化学鉴定法 显微化学鉴定法即将材料经化学试剂处理后，在显微镜下检查、判定细胞壁的化学组成及细胞内含物性质的方

改良番红O-固绿软骨染色液说明书

改良番红O-固绿软骨染色液说明书 货号：G1371 规格：5×50ml/5×100ml 有效期：6个月有效 产品简介： 软骨组织由软骨细胞、软骨基质和纤维组成，软骨组织及其周围的软骨膜构成软骨。软骨根据基质内所含纤维素成分不同分为透明软骨、弹性软骨、纤维软骨。软骨染色方法有很多种，例如甲苯胺蓝法、阿利新蓝法、番红O法等。 改良番红0-固绿软骨染色法的染色原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红O结合呈现红色，嗜酸性的骨和酸性染料固绿结合而成绿色或蓝色，与呈现红色的软骨对比鲜明，从而将软骨组织和骨组织区分开。番红O是一种结合多阴离子的阳离子染料，其显示软骨组织是基于阳离子染料与多糖中阴离子基团（硫酸软骨素或硫酸角质素）结合。番红O着色与阴离子的浓度近似成正比关系，间接反映了基质中蛋白多糖的含量和分布。当软骨受到损伤时，软骨中的糖蛋白会释放出来，使基质成分分布不均匀，从而导致番红O淡染或不着色。通过图像分析软件可对番红O染色的软骨基质进行定量分析。固绿与胶原纤维结合，不宜褪色。番红O-固绿染色的分化很关键，分化过度易导致切片不着色，分化不足易导致切片着色过深。 产品组成： 名称规格5×50ml5×100ml Storage 试剂(A)A1:Weigert A液25ml50ml RT避光 A2:Weigert B液25ml50ml RT避光临用时，取A1、A2等量混合为Weigert染液，24h后失去染色力，不宜预先配制。 试剂(B):酸性分化液50ml100ml RT 试剂(C):固绿染色液50ml100ml RT避光 试剂(D):Safranin O stain50ml100ml RT避光 试剂(E):弱酸溶液50ml100ml RT 自备材料： 10%福尔马林固定液，脱钙液，蒸馏水，系列乙醇。 第1页，共2页

改良番红O-固绿软骨染色液

改良番红O-固绿软骨染色液 简介： 软骨组织由软骨细胞和软骨基质组成，软骨组织及其周围的软骨膜构成软骨。软骨根据基质内所含纤维素成分不同分为透明软骨、弹性软骨、纤维软骨。改良番红O-固绿软骨染色法的染色原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红O结合呈现红色，嗜酸性的骨和酸性染料固绿结合而呈绿色或蓝色，与呈现红色的软骨对比鲜明，从而将软骨组织与骨组织区分开。 组成： 编号名称DB0082 5×50ml DB0082 5×100ml Storage 试剂(A) A1: Weigert A液25ml 50ml RT 避光A2: Weigert B液25ml 50ml RT 试剂(B): 酸性乙醇分化液50ml 100ml RT 试剂(C): 固绿染色液50ml 100ml RT 避光试剂(D): Safranin O stain 50ml 100ml RT 避光试剂(E): 乙酸溶液50ml 100ml RT 使用说明书1份 操作步骤(仅供参考)： 1、标本的处理：10%福尔马林固定、脱钙、石蜡切片。 2、常规脱蜡至水。 3、入新鲜配制的Weigert染液染色。 4、酸性乙醇分化液分化。 5、蒸馏水洗1min。 6、在固绿染色液内浸染，蒸馏水洗1min。 7、入Safranin O stain内浸染色，蒸馏水洗1min。 8、用乙酸溶液洗涤切片，以便去除残留的固绿，蒸馏水洗1min。 9、分别用95%乙醇、无水乙醇脱水。 10、二甲苯透明，光学树脂封固。 染色结果： 软骨基质深红色 软骨细胞核蓝色

细胞浆、肌肉、胶原纤维及骨组织呈灰绿色 注意事项： 1、需要显示细胞核时，尽量采用铁苏木素染色，其着色力强色调浓，一般的苏木素着色力不强。 2、Weigert染液不可预先配制后放置，配制好后一般24h后失去染色力。 3、切片在Safranin O stain中染色不宜过长，否则易导致背景的深红色不易分化掉。 有效期：6个月有效。

改良番红 O-固绿软骨染色液

第1页，共2页 改良番红G1371 5×50ml/5×100ml 6个月有效 软骨组织由软骨细胞、软骨基质和纤维组成，软骨组织及其周围的软骨膜构成软骨。软骨根据基质内所含纤维素成分不同分为透明软骨、弹性软骨、纤维软骨。软骨染色方法有很多种，例如甲苯胺蓝法、阿利新蓝法、番红O 法等。 改良番红0-固绿软骨染色法的染色原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红O 结合呈现红色，嗜酸性的骨和酸性染料固绿结合而成绿色或蓝色，与呈现红色的软骨对比鲜明，从而将软骨组织和骨组织区分开。番红O 是一种结合多阴离子的阳离子染料，其显示软骨组织是基于阳离子染料与多糖中阴离子基团（硫酸软骨素或硫酸角质素）结合。番红O 着色与阴离子的浓度近似成正比关系，间接反映了基质中蛋白多糖的含量和分布。当软骨受到损伤时，软骨中的糖蛋白会释放出来，使基质成分分布不均匀，从而导致番红O 淡染或不着色。通过图像分析软件可对番红O 染色的软骨基质进行定量分析。固绿与胶原纤维结合，不宜褪色。番红O-固绿染色的分化很关键，分化过度易导致切片不着色，分化不足易导致切片着色过深。 10%福尔马林固定液，脱钙液，蒸馏水，系列乙醇。 1、 标本的处理：10%福尔马林固定、脱钙、石蜡切片。 2、 常规脱蜡至水。 3、 入新鲜配制的Weigert 染液染色3-5min ，水洗。 4、 酸性分化液分化15s 。 5、 蒸馏水洗10min 。

6、在固绿染色液内浸染5min。 7、快速用弱酸溶液洗涤切片10-15s，以便去除残留的固绿。 8、入Safranin O stain内浸染5min。 9、分别用95%乙醇、无水乙醇脱水。 10、二甲苯透明，光学树脂封固。 1、需要显示细胞核时，尽量采用铁苏木素染色，其着色力强色调浓，一般的苏木素着色力不强。 2、Weigert苏木素染液不可预先配制后放置，配制好后一般24h失去染色能力。 3、切片在Safranin O stain中染色不宜过长，否则易导致背景的深红色不易分化掉。 4、切片分化时间应恰当，以背景呈绿色为宜。 5、 Safranin O stain染色后，不宜在低浓度乙醇脱水，否则易褪色。 6、95%乙醇脱水时间不宜过长。 7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 第2页，共2页

PH1085 番红O-固绿软骨染色液使用说明 Phygene

PH1085|改良番红O-固绿软骨染色液 Safranin O-Fast Green Staining Kit(modified) Catalog No：PH1085Size：?5×50mL|?5×100mL Store at RT 试剂简介 软骨组织由软骨细胞和软骨基质组成，软骨组织及其周围的软骨膜构成软骨。软骨根据基质内所含纤维素成分不同分为透明软骨、弹性软骨、纤维软骨。软骨染色方法有很多种，例如甲苯胺蓝法、阿利新蓝法、番红O法等。 改良番红O-固绿软骨染色法的染色原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红O结合呈现红色，嗜酸性的骨和酸性染料固绿结合而呈绿色或蓝色，与呈现红色的软骨对比鲜明，从而将软骨组织与骨组织区分开。番红O是一种结合多阴离子的阳离子染料，其显示软骨是基于阳离子染料与多糖中阴离子基团(硫酸软骨素或硫酸角质素)结合。番红O着色与阴离子的浓度近似成正比关系，间接反映基质中蛋白多糖的含量和分布。当软骨受到损伤时，软骨中的糖蛋白会释放出来，使基质成分分布不均匀，从而导致番红O淡染或不着色。通过图像分析软件可对番红O染色的软骨基质进行定量分析，固绿与胶原纤维结合，不宜褪色，番红O-固绿染色的分化很关键，分化过度易导致切片不着色，分化不足易导致切片着色过深。 试剂组分 Components5×50mL5×100mL Storage A1:Weigert A液25ml50ml RT避光 A2:Weigert B液25ml50ml RT 取A1、A2等量混合即为Weigert染液，24h后失去染色力，不宜预先配制。 试剂(B):酸性乙醇分化液50ml100ml RT 试剂(C):固绿染色液50ml100ml RT避光 试剂(D):Safranin O stain50ml100ml RT避光 试剂(E):乙酸溶液50ml100ml RT 有效期：12个月有效。 操作步骤(仅供参考)： 1、标本的处理：10%福尔马林固定、脱钙、石蜡切片。 2、常规脱蜡至水。 3、入新鲜配制的Weigert染液染色3～5min。 4、酸性乙醇分化液分化15s。 5、蒸馏水洗1min。 6、入固绿染色液内浸染1.5～3min，蒸馏水洗1min。 7、入Safranin O stain内浸染2～5min，蒸馏水洗1min。 8、用乙酸溶液洗涤切片1～2min，以便去除残留的固绿，蒸馏水洗1min。 9、分别用95%乙醇、无水乙醇脱水。

(10)--石蜡切片制作及HE染色实验预习测试(2)

细胞生物学实验 动植物石蜡切片的制作实验预习测试题及答案 1、制作动物石蜡切片，利用______染色方法。（每空1分） 2、番红-固绿对染法，为______上最普遍的一种二重染色法。（每空1分） 3、通常石蜡采用熔点为______或60～62℃两种，可根据季节及操作环境温度来选用。石蜡熔化后应在蜡箱内______后使用，以免因含杂质而影响切片质量，且可能损伤切片刀。（每空1分） 4、经过HE染色，______被苏木精染成蓝紫色，______被伊红染色呈粉红色。（每空1分） 5、番红为______染料，能使细胞核及______染成红色；固绿为______染料，能使细胞质及______染成绿色。（每空1分） 6、凡用水溶液配制的固定液，特别是含有铬酸、重铬酸钾的固定液，一律用水洗。利用卡诺固定液固定的样品，应该用______洗涤。 （每空1分） 7、固定液可分为______固定液及______固定液，卡诺固定液是______。（每空1分） 8、固定材料时，固定液必须充足，一般为材料块的______倍，有些水分多的材料，中间应该更换______次新液。（每空1分） 9、有些混合固定液的成份之间会发生______，一定要在使用前才混合，如果混合太早，______就没有作用了。（每空1分） 10、石蜡切片制作过程中，如需过夜，应停留在______中。脱水必须彻底，否则

不易透明，甚至使______内出现白色混浊现象。（每空1分） 11、______为常用脱水剂，它既能与水相混合，又能与透明剂相混。（每空1分）12、更换每级透明剂，动作要迅速，一方面为了不使材料块______，另一方面能避免吸收______。在透明过程中，如果______出现白色雾状，说明材料中的水未被脱净，应退回______中重新脱水，然后再透明。（每空1分） 13、透蜡温度要______，不可忽高忽低；一般动物材料常用的石蜡熔点为_____ _，植物材料用的石蜡熔点为______。 （每空1分） 14、透蜡时间根据组织的______来进行。透蜡应在恒温箱内进行，并保持箱内温度在______左右，注意温度不要过高，以免组织发脆。置于恒温箱______。（每空1分） 15、包埋时应根据组织材料、切片厚度、气候条件等因素，选择______的石蜡。包埋时，待石蜡完全凝固需要______。（每空1分） 16、在透明过程中， 如果材料周围出现______，说明材料中的水未被脱净，应退回______中重新脱水，然后再透明。（每空1分） 17、脱水时，在高浓度或纯乙醇中，每级停留的时间______，否则会使组织变脆，影响切片。（每空1分） 18、常用的透明剂有二甲苯、苯、氯仿、正丁醇等，各种透明剂均是溶于______的溶剂。透明剂，纯乙醇、二甲苯等量混合液______，二甲苯______（或至透明为止），须换一次二甲苯。（每空1分）

髓鞘染色液(固绿法)

髓鞘染色液(固绿法) 简介： 髓鞘(Myelin Sheath)是包裹在神经细胞轴突外面的一层膜，即髓鞘由髓鞘细胞和细胞膜组成，是神经膜细胞的质膜沿着轴索的轴心螺旋缠绕形成的多层脂双层结构,髓鞘上有郎飞氏结，可使神经冲动跳跃传递。髓鞘染色在病理诊断中有一定意义，髓鞘的病理变化分为早期、中期和晚期。在早期着色较深；病变中期阶段的髓鞘变性形成脂滴，可用脂质染色加以显示，后期彻底溃变并被吞噬细胞清除，故不再有髓鞘的阳性结果。 很多疾病都可以引起髓鞘的变化，Leagene 髓鞘染色液(固绿法可以显示病理情况下髓鞘是否完整、变性、坏死程度及修复情况，对神经组织的病理诊断和研究均有意义,髓鞘呈深蓝色，脱髓鞘纤维不着色。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、固定：采用甲醛钙固定液固定样本。 2、石蜡切片脱蜡至蒸馏水。 3、切片入95%乙醇稍洗。 4、入固绿染色液，37℃恒温箱染色。 5、直接用95%乙醇洗涤。 6、蒸馏水冲洗。 7、入MS 分化液分色。 8、蒸馏水冲洗(如果分色不足，可重复6步骤)。9、常规梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 染色结果： 髓鞘 深绿色，横截面呈环状，纵截面呈条索状或鱼骨刺状 脱髓鞘纤维 不着色，横截面呈半环状或不着 编号 名称 DK00063×50ml Storage 试剂(A):甲醛钙固定液250ml RT 避光试剂(B):固绿染色液50ml RT 避光试剂(C):MS 分化液100ml RT 使用说明书 1份

色，呈空白区。 注意事项： 1、分化这一步很关键，应严格控制分化时间，可在镜下观察分化程度。 2、固定液以10%的甲醛钙固定液为佳。 3、切片不宜太厚，应控制在5～7μm以内，否则易出现脱片或过染等现象。 4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期：12个月有效。 相关： 编号名称 DC0032Masson三色染色液 DF0111中性福尔马林固定液(10%) DG0005糖原PAS染色液 DH0001改良Lillie-Mayer苏木素染色液 DJ0001普鲁士蓝染色液(核固红法) DK0022尼氏染色液(焦油紫法) NH0043SSC缓冲液(20×,pH7.0) TC0713葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)

几种常用的染色方法

几种常用的染色方法 1．美蓝染色法在已干燥、固定好的抹片上，滴加适量的美蓝染色液，经1—2min，水洗，沥去多余的水分，吸干或烘干，镜检。 2．革兰氏染色法 （1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，经1—2min，水洗。 （2）加革兰氏碘溶液于抹片上媒染，作用1—3min，水洗。 （3）加95％酒精于抹片上脱色，约30s---1min，水洗。 （4）加碱性复红液（或沙黄或稀释石炭酸复红液）复染10---30s，水洗。（5）吸干或烘干，镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。3．抗酸性染色法 （1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加较多量的石炭酸复红染色液，在玻片下以酒精灯火焰缓缓加热，至发生蒸汽即止，维持微微发生蒸汽，经3—5min，水洗。 （2）用3％盐酸酒精脱色，直至标本无色脱出为止，充分水洗。 （3）用美蓝染色液复染约1min，水洗。 （4）吸干或烘干，镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌呈蓝色。 以下方法也可：即在干燥、固定好的抹片上，滴加石炭酸复红染色1min，水洗，用1％美蓝染色液复染约20s，水洗。 对光观察，标本务必全呈蓝色，在火焰上烘干、镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌和背景呈蓝色。 4．瑞氏染色法 （1）抹片自然干燥后，滴加瑞氏染色液于其上，为了避免很快变干，染色液可

稍多加些，或看情况补充滴加，经1—3min，加约与染液等量的中性蒸馏水或PBS 液，轻轻晃动玻片，使与染液混匀，约3min左右，直接用水冲洗（不可先将染液倾去），吸干或烘干、镜检。细菌染成蓝色，组织、细胞等物呈其它颜色。（2）另一方法抹片自然干燥后，按涂抹点大小，盖上一块略大的清洁滤纸片，在其上轻轻滴加染色液，至略浸过滤纸，并看情况进行补滴，维持不使变干；染色3--5min，直接用水冲洗，吸干或烘干、镜检。此法使染色液经滤纸过滤，可大大避免沉渣粘附于抹片上影响镜检观察。 5．姬姆萨染色法 （1）于5ml新煮过的中性蒸馏水中滴加5—10滴姬姆萨氏染色液原液，即稀释成为常用的姬姆萨氏染色液。 （2）抹片经甲醇固定干燥后，在其上滴加足量的染色液或将抹片浸入盛有染色液的染色缸中，染色30min，或者染色数小时至24h，取出水洗，吸干或烘干、镜检。细菌呈蓝青色，组织、细胞等呈其它颜色。视野常呈淡红色。 6．克利特氏荚膜染色法 （1）染色液配制 ①美蓝溶液美蓝1g，95％酒精10ml，蒸馏水100ml。将美蓝溶于酒精内，再加蒸馏水混合。 ②碱性复红溶液碱性复红0.03g，95％酒精1ml，蒸馏水99ml。将碱性复红溶于酒精内，再加蒸馏水混合。 （2）染色法 ①涂片经火焰固定后，滴加美蓝溶液，将玻片至火焰上面加热至发生蒸汽为止。 ②水洗，以碱性复红溶液复染15—30s。 ③水洗后、吸干、镜检。 ④染色后，菌体呈蓝色，荚膜呈红色。 7.结晶紫福尔马林荚膜染色法

石蜡切片制片流程(番红固绿滴染)

石蜡切片制片流程（番红固绿滴染） 1.鲜样FAA（18：1：1）抽气固定24h以上。 2.易碎的材料可用甘油酒精软化剂（1：1）软化1周以上（乙二胺软化剂容易导致颜色变 深）。 3.70%酒精浸泡1h。 4.80%酒精浸泡1h。 5.95%酒精浸泡1h。 6.吸水纸迅速吸干，100%酒精浸泡1h。 7.100%酒精浸泡1h。 8.含1/2酒精+二甲苯的溶液浸泡1h。（若有浑浊，即脱水不完全，需要重新从95%酒精再 脱水一次）。 9.纯二甲苯浸泡1h。 10.纯二甲苯浸泡1h。 11.加入约1/4二甲苯体积的碎蜡，放置约半小时，再加入1/4体积碎蜡（也可一步到位）。 12.视混合物熔点而定，40-50℃液体状态渗蜡1-2d。 13.视石蜡熔点而定，50-65℃（高于熔点3-5℃），含1/2二甲苯+石蜡的蜡锅浸蜡2h。 14.含1/3二甲苯+2/3石蜡的蜡锅浸蜡2h。 15.纯石蜡锅浸蜡2d以上。 16.包埋（若材料大、中间有空气可调高温度再抽气）（新蜡不易凝固，可在新蜡锅抽气再 用老蜡包埋）。 17.空气中冷却（急剧冷却容易收缩不均而变形），削块成棱台形蜡块。 18.切片（8-20μm，若太薄易碎则调高厚度）。 19.40℃水中展片，用涂有粘片剂的载玻片捞片（展片时间不宜太短，易产生褶皱）（捞片 的展片效果优于滴水展片，气泡少），40℃烘干。 20.40-50℃烤片2-3d（比石蜡熔点低5℃左右），让蜡带充分贴在玻片表面。 21.铅笔做好标记，二甲苯浸泡脱蜡20-30min。 22.二甲苯透明10-20min。 23.取出，滴加含1/2酒精+二甲苯的溶液，放置数秒，倾去。（需要过渡酒精至与染色剂的 酒精含量相同的浓度，染色）（以50%番红酒精溶液和95%固绿为例）。 24.滴加100%酒精，放置数秒，倾去。 25.滴加95%酒精，放置数秒，倾去。 26.滴加80%酒精，放置数秒，倾去。 27.滴加70%酒精，放置数秒，倾去。 28.滴加50%酒精，放置数秒，倾去。 29.滴加含50%酒精溶液的番红染色5min，倾去。 30.滴加50%酒精洗去浮色，倾去。 31.滴加70%酒精，放置数秒，倾去。 32.滴加80%酒精，放置数秒，倾去。 33.滴加95%酒精，放置数秒，倾去。 34.滴加含95%酒精溶液的固绿染色30s，倾去。 35.滴加95%酒精洗去浮色，倾去。 36.滴加100%酒精1min，倾去。 37.滴加100%酒精5min，倾去。

简单染色法

一．简单染色法 吕氏美蓝染色液 A液：美蓝0.30 g；95% 乙醇30mL B液：氢氧化钾0.01g；蒸馏水100mL 将A液B液混合即可。 二．细菌革兰氏染色 1．草酸铵结晶紫染色液 A液：结晶紫 2.0g；95% 乙醇20.0mL B液：草酸铵0.7g；蒸馏水100mL 将A液B液混合，放置48h后使用。 2. 路哥（Lugos）碘液 碘1.0g 碘化钾2.0g 蒸馏水300.0mL 先用少量蒸馏水溶解碘化钾，然后加入碘片，待碘完全溶解后加蒸馏水至300.0mL。 3．95% 乙醇 4.番红染色液 番红 2.5g ；95% 乙醇100mL 配置后放于冰箱中保存。用时取10.0mL加蒸馏水40.0mL混匀即可。 二．芽孢染色液 1.孔雀绿染色液 孔雀绿 5.0g ；蒸馏水100mL 2.番红染液同上 四．荚膜染色液 1.结晶紫1.0 g；蒸馏水100.0mL 2. 20 % 硫酸铜溶液 硫酸铜（CuSO4·5H2O）20.0g；蒸馏水80.0mL 五．鞭毛染色液—硝酸银染色液 A液：单宁酸5.0g ；FeCl3 1.5g；蒸馏水100.0mL 溶解后加入1%NaoH 溶液1mL和15%甲醛溶液2mL，并定容至100mL。 B液：硝酸银2.0g；蒸馏水100.0mL B 液配好后先取出10mL做回滴用，往90mLB液中滴加浓氢氧化铵溶液，当出现大量沉淀时，再继续滴加浓氢氧化铵溶液，直到溶液中沉淀刚刚消失变澄清为止。然后将留用的10mLB液小心逐滴加入，直到出现轻微和稳定的薄雾为止，注意：边滴加边充分摇荡，此步骤尤为关键，应格外小心。配好的染色液4h内效果最佳，即现用现配。 六．乳酸石炭酸溶液（霉菌形态观察） 石炭酸（苯酚）2.0g；甘油40.0mL；乳酸（相对密度1.21）20.0mL 蒸馏水20.0 mL；棉蓝（甲基蓝）0.05g。 石炭酸在蒸馏水中加热溶解，然后加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，使其溶解即成。

番红O-快绿染色

1、0.02%固绿溶液：固绿0.02g，蒸馏水100ml 2、0.1%番红O溶液：番红0.1g，蒸馏水100ml 3、1%盐酸酒精分化液：弄HCI1份，95%乙醇99份 染色 1、石蜡切片脱蜡至水 2、苏木精染细胞核1-3min，显微镜观察染色情况决定染色时间长短 3、自来水充分洗涤，去除残留苏木精。 4、1%盐酸酒精分化15-30s，分化时间视颜色深浅而定。 5、自来水充分洗涤，去除残留染液。 6、0.02%固绿水溶液染色3min，固绿为一种酸性染料，呈碱性细胞质或细胞外基质呈绿色 7、1%冰醋酸洗涤切片，去除残留固绿 8、0.1%番红O染色3min，番红是一种碱性染料，呈酸性细胞质或细胞外基质呈橙黄/红色。 9、95%乙醇侵洗，洗去残留番红 10、95%乙醇、无水乙醇脱水、二甲苯透明，中性树胶封片。

1、石蜡切片脱蜡至水 2、Weigert氏苏木素染色3分钟 3、1%盐酸酒精分化 4、水洗 5、0.2%固绿水溶液内染色5分钟 6、水洗 7、0.1%番红O水溶液内染色1-2分钟 8、水洗 9、0.1%醋酸水溶液分化 10、水洗 11、95%乙醇、无水乙醇脱水、二甲苯透明，中性树胶封片。Solutions and Reagents: Weigert's Iron Hematoxylin Solution: Stock Solution A: Hematoxylin ----------------------------- 1 g 95% Alcohol ----------------------------- 100 ml Stock Solution B: 29% Ferric chloride in water ----------- 4 ml Distilled water -------------------------- 95 ml Hydrochloric acid, concentrated ---- 1ml Weigert's Iron Hematoxylin Working Solution: Mix equal parts of stock solution A and B. This working solution is stable for about 4 weeks. 0.05% Fast Green (FCF) Solution: Fast green, FCF, C.I. 42053 ------------- 0.5 g Distilled water ---------------------------- 1000 ml

实验染色方法

一．番红—苯胺蓝（或固绿）二重染色法 《福建农林大学生物学实验教学中心 生物学实验讲义》 (十) 脱蜡和染色 将已干的玻片标本，插人盛有二甲苯的染色缸中，先脱蜡10～15 分钟，然后进行染色。高等植物的根、茎、叶组织切片，常用番红—固绿二重染色法。染色结果是木质化的细胞壁和细胞核被染成红色，薄而具有纤维素的细胞壁及细胞质被染成绿色。 1．染色液的配方： 番红：番红(safranino) 1g 70％酒精100ml 固绿：固绿(pastgreen) 1g 95％酒精100ml 2．二重染色步骤： 经脱蜡的玻片标本→1／2 二甲苯+1／2 纯酒精(3～5min)→纯酒精(3～5min)→95％酒精(3～5min)→85％酒精(3～5min)→70％酒精(3～5min)→番红(2～24h)→85％酒精(约0.5～1min)→95％酒精(约0.5～1min)→固绿(约0.5～1 min)→无水酒精(约1min)→1／2 无水酒精+l／2二甲苯(约2min)→二甲苯(约3min)→二甲苯(约5～30min)。固绿着色很快，当玻片材料刚刚全面转绿，立即停止染色，并迅速通过纯酒精冲洗分色，最后进人二甲苯中。 二、PAS染色方法 《PAS染色方法及应用》付银锋 2008 1 材料与方法 1．1 实验材料新鲜小白鼠肝脏、肾脏标本各30例 1．2 主要试剂 1．2．1 AAF固定液又称酒精醋酸福尔马林混合固定液，其配方：无水乙醇80 mL，冰醋酸5 mL、甲醛10 mL。 1．2．2 Carnoy固定液氯仿300 mL，冰醋酸100mL，95％酒精600 mL。1．2．3 过碘酸溶液 0．5 g过碘酸(HIO )溶于100mL蒸馏水或者70％酒精溶液中，或者按如下配方配制：过碘酸0．8 g，95％乙醇70 mL，醋酸钠0．27 g，水20 mL。待溶解后置于4~C冰箱避光保存。 1．2．4 无色品红液(Sehif氏液) 在三角烧内加入蒸馏水500 mL，煮沸后，在保持微沸的情况下，加入碱性品红2．5 g，并不断摇动约5 min(勿使之沸腾)，使碱性品红彻底溶解(溶解液为深红色)。冷却到50℃时，过滤，加入1N盐酸50 mL，再待冷却至25℃时加入偏重亚硫酸钠2．5 g，塞住瓶口，摇动容器以充分混合(此时颜色明显变淡)，然后避光放置或冰箱内24 h，溶液为淡黄或淡红色，再加入活性炭5 g，混合后振荡数分钟，静置1 h，再用双层滤纸过滤，此时溶液应完全无色、清澈透明，为无色品红。封口，贮存于棕色瓶中(最好外包黑纸避光)存放人4~C冰 箱备用¨。 1．2．5 1N盐酸浓盐酸(比重1．19含量22％)8．5mL加蒸水91．5 mL或者98．3 mL比重1．16盐酸， 加入蒸馏水成1 000 mL。 1．2．6 偏重亚硫酸钠 1N盐酸7．5 mL加10％偏重亚硫酸钠(钾)7．5 mL，再加130 mL蒸馏水混合而成。

番红O-固绿植物组织染色液

番红O-固绿植物组织染色液 简介： 植物组织染色有多种方式，其操作流程和动物组织染色类似。番红O～固绿染色多用于软骨的染色，有时亦可用于植物染色，木化、栓化和角质的细胞被番红染成鲜红色，纤维素的细胞壁被固绿染成绿色。固绿是一种酸性染料，可将纤维素的细胞壁和细胞质染成蓝绿色，该染色液速度快，通常10-30s即可，不易褪色。 Leagene番红O-固绿植物组织染色液主要由番红O染色液和固绿染色液组成，根茎叶等组织的切片染色后番红使细胞核、木质化细胞壁呈鲜红色，角质化细胞壁呈透明粉红色，木栓化壁呈红褐色；固绿使细胞质和含有纤维素的细胞壁呈蓝绿色。番红O-固绿染色的分化很关键，分化过度易导致切片不着色，分化不足易导致切片着色过深。该试剂仅用于科研领域，不用于临床诊断或治疗。 组成： 编号名称DP0150 3×50ml Storage 试剂(A): 番红O染色液50ml RT 避光 试剂(B): 酸性乙醇分化液100ml RT 试剂(C): 固绿染色液50ml RT 避光 使用说明书1份 自备材料： 1、10%中性福尔马林固定液 2、蒸馏水 3、系列乙醇 操作步骤(仅供参考)： 1、标本的处理：固定，切成石蜡切片。 2、粘片：材料切成薄片，将切片粘在玻璃片上，加热展开，所用载玻片必须清洁。先把 粘贴剂置于载玻片上，再取切片，浮置胶液上，然后置烘片台上，使切片烫平，以材料不出现皱纹为度。温箱30～40℃约1h，采用的粘贴剂有明胶、梅氏蛋白、Land 液等。 3、酸性乙醇分化液分化15s。 4、脱色

染色结果： 木化、栓化、角质鲜红色 纤维素的细胞壁绿色 注意事项： 1、番红染色后，在50%乙醇中脱色需经实践，如果脱色不够绿色会不好染；脱色过度会导致 红色过淡，甚至全部绿色。 2、固绿是一种着色极快的染料，固绿染色时间不宜过长，否则会褪去番红的颜色。 3、染色时间不是绝对的，常因材料种类、切片厚度不同而不同。 4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期：12个月有效。 相关： 编号名称 CC0005磷酸缓冲盐溶液(1×PBS,无钙镁) CS0001ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer) DC0032Masson三色染色液 DF0111中性福尔马林固定液(10%) DM0007瑞氏-姬姆萨复合染色液 TE0002碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(PNP微板法)

石蜡切片制作过程(番红固绿)

番红固绿染色法制取水稻茎穗部石蜡切片 1.苯胺番红溶液配制：番红：5g；95%酒精：50ml；苯胺油：20ml；蒸馏水：100ml 先将番红溶于95%酒精，使其充分溶解后加入苯胺油，充分搅拌，再加入蒸馏水，过滤备用。 2.苯胺固绿染色液配制：固绿：1g；无水酒精：100ml；苯胺油：4ml 先将固绿溶于无水酒精中，使其充分溶解后过滤，再加入苯胺油即成。 （苯胺油具毒，不能与粘膜接触） 3.番红——固绿双重染色法 适用于高等植物根，茎，叶的染色，染色结果是木质化的细胞壁及核呈红色，薄壁细胞，细胞质等呈绿色。步骤如下： 固定后的水稻茎穗部 流水冲洗24h 番红苯胺液染色3天 系列脱水，透明，包埋 切片，粘片，烘片

纯二甲苯脱蜡（蜡脱完为止） 1/2二甲苯+1/2纯酒精对半混合液5-10分钟 纯酒精5分钟 饱和苦味酸95%酒精溶液分色（镜检适度） 纯酒精冲洗1分钟 固绿酒精苯胺溶液复染1分钟 纯酒精冲洗1分钟 1/2二甲苯+1/2纯酒精对半混合液5分钟 纯二甲苯5分钟 封片 4.脱水： 按照以下乙醇质量分数梯度进行脱水，括号里面的是每一级的时

间： 30%（15min）→50%（15min）→70%（15min，如果当天做不完可将材料放入其中过夜，第二天再处理）→83%（30min，用83%代替85%是因为83%正好处于85%与95%之间，效果最好）→90%（30min）→100%（15min）→100%（15min）→1/2酒精+1/2二甲苯3 5.透明： （1）滴加纯二甲苯至与100%乙醇等量，此时二甲苯占总体积的1/2；（若此时溶液变浑浊，证明脱水不彻底，要重新退回到100%乙醇中）；（2）再滴加二甲苯超过100%乙醇的量，此时乙醇占总体积的1/3，二甲苯占总体积的2/3； （3）换纯二甲苯直到材料变得透明为止。 6.浸蜡与包埋： （1）室温浸蜡：往含有二甲苯及已经透明材料的坩埚中加入蜡屑至过饱和，放置3d或者更长（“更长”的意思是做到这一步可以停下来，以后可以想什么时候做下面的步骤都行）。 （2）温箱内浸蜡： ①先将温箱温度调至37度，在已熔的材料中加入蜡屑至过饱和，放置1d； ②再将温箱温度升高到45度，在已熔的材料中加入蜡屑至过饱和，放置1d； ③最后将温箱温度升高到60-62度，换三次纯蜡，并进行包埋，此过程不超过2h，否则材料会变脆。如果材料太多，2小时内完成不了，可做到②后即将材料全部取出，然后再分批次进行③，再进入③时先将温箱温度调至45度，将材料放入，再慢慢将温度调至60-62度。 7.切片、粘片、烘片： 选择蛋白胶粘剂粘片，将一滴胶粘剂滴到载玻片的中央，然后加上水，将切片平放于载玻片上，然后放在温箱上，待粘完很多片子后，用一张大的滤纸覆盖在所有的盖玻片上，用手轻轻压一遍，压平且吸走多余的水分。