饲料中淀粉的测定(蒽酮比色法)

化验室检测标准

饲料中淀粉的测定（蒽酮比色法）———————————————————————————————————————一、原理

用乙醇溶液去除饲料样品中的可溶性糖，再用高氯酸溶液溶解残留物中的淀粉，使淀粉与其他成分分离，在浓硫酸的作用下，蒽酮与淀粉反应生成蓝绿色的化合物，用分光光度计测定在640 nm 下的吸光度.

二、试剂配制

1.80％乙醇溶液；

2.52％高氯酸溶液；

3.蒽酮试剂(将 0.4 g 蒽酮溶于 100 mL浓硫酸溶液中，现用现配)；

4.淀粉标准液(将 200 mg 淀粉倒入 100mL 烧杯中，加入 5 mL 蒸馏水，加入 65 mL52％高氯酸溶液，搅拌全部溶解，转入 100 mL 溶量瓶中，加水定容，浓度 2 mg／mL；取上述标准淀粉溶液10.00 mL 于 250 mL 溶量瓶中，加水定容，此淀粉溶液的浓度为 80 ug／mL. ) 三．标准曲线

在洁净的试管，分别加入 0.0、10.0、20.0、40.0、60.0、80.0 ug 淀粉标准液，每一个浓度2 个重复，加水调整各试管溶液均为 2.00 mL，在冰水中冷却 2 min，加入 6.00 mL 蒽酮－硫酸溶液，摇匀，在冰水中冷却 2 min. 将试管放入沸水中 5 min，各试管显色呈蓝绿色，取出试管，冷却至室温. 用2.00 mL 蒸馏按照上述操作作为空白参比，于 640nm 波长下比色，测定各试管溶液的吸光度. 以吸光度为横坐标，淀粉浓度作为纵坐标，绘制工作曲线，进行曲线拟合，得到吸光度和淀粉浓度之间的回归公式。

四．操作步骤

1.称取 1-2 g 饲料样品于 80 mL 离心管中，可溶性淀粉称取0.5g其中包括 2 个重复，加入 80％乙醇溶液 2 滴使样品湿润。

2.再加入 5 mL 水摇匀，加入 25 mL 热的 80％乙醇溶液, 摇匀后放置 5 min, 以2500 /分钟速度离心 5 min，倾出上清液。

3. 再用 30 mL 80％乙醇溶液提取1次。

4.于上述残留物中加入5 mL水和 30 mL 52％高氯酸溶液，搅拌 10 min，以 2500转/分钟离心 10 min。

5.将上清液转入 100 mL 溶量瓶中，残留物再用 35 mL 52％高氯酸溶液提取，合并提取液，以水定容。

6. 过滤，弃去最初5 mL滤液，吸取4.00 mL滤液于100mL溶量瓶中，加水定容. 取上述淀粉提取液 2.00 mL，测定沸水浴显色后溶液的吸光度.

五．计算公式

淀粉(％)＝G/(8M).

式中：G 为由饲料样品提取液测定的吸光度，由工作曲线回归公式计算出来的淀粉毫克数；M 为饲料样品的质量；

最后换算成每克饲料干物质中淀粉的含量。对于淀粉含量高，而且粗纤维含量低的谷物籽实饲料，推荐使用高氯酸水解－蒽酮比色法，其测定结果差较小，而作步骤快捷简便；对于粗纤维含量高的粗饲料，建议用酶水解法测定，但由于操作步骤繁琐，应尽量减少操作本身造成的实验误差，而且应该选用纯度高、活性强的酶制剂。

(整理)可溶性糖测定.

引言 可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖等单糖和双糖，是植物品质的重要构成性状之一，尤其是以果实为目的产品的植物，可溶性糖与酸的含量及其配比是影响果实风味品质的重要因素。对于鲜食品种，一般来讲，高糖中酸，风味浓，品质优；低糖中酸，风味淡，品质差。因此，可溶性糖的定量研究对植物的品质育种、储藏、加工特性等具有重要意义。而且可溶性糖广泛存在于植物的根、茎块和种子中，是人体热量的最最主要来源，具有较高的营养价值。本文重点介绍蒽酮比色法、铜还原碘量法、费林试剂法、原子吸收法、气相色谱法、液相色谱-蒸发光散射法，及连续流动法这几种实验如何定量测定可溶性糖含量。

1 蒽酮比色法 1.1 原理 糖在硫酸作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用形成绿色络合物，颜色的深浅与糖含量有关。在625 nm波长下的OD值与糖含量成正比。由于蒽酮试剂与糖反应的呈色强度随时间变化，故必须在反应后立即在同一时间内比色。 1.2 仪器与材料 1.2.1实验仪器 分光光度计，电炉，铝锅，电子天平，20ml刻度试管，刻度吸管5ml 1支、1ml 2支，漏斗。1.2.2实验试剂 （1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数星期，如有结晶析出，可微热溶解。 （2）浓硫酸（比重1.84）。 1.2.3实验材料 植物叶片。 1.3 实验方法 1.3.1标准曲线的制作 取20ml刻度试管11支，从0～10分别编号，按表24-1加入溶液和水。 表1 各试管加溶液和水的量 管号 0 1、2 3、4 5、6 7、8 9、10 100μg/ml蔗糖液 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 (ml) 水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 蔗糖量(μg) 0 20 40 60 80 100 然后按顺序向试管内加入1ml 9%苯酚溶液，摇匀，再从管液正面快速加入5ml浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8ml，在恒温下放置30min，显色。然后以空白为参比，在485nm 波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。 1.3.2可溶性糖的提取 取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10～0.30g，共3份，或干材料。

饲料中淀粉的测定(蒽酮比色法)

化验室检测标准 饲料中淀粉的测定（蒽酮比色法）———————————————————————————————————————一、原理 用乙醇溶液去除饲料样品中的可溶性糖，再用高氯酸溶液溶解残留物中的淀粉，使淀粉与其他成分分离，在浓硫酸的作用下，蒽酮与淀粉反应生成蓝绿色的化合物，用分光光度计测定在640 nm 下的吸光度. 二、试剂配制 1.80％乙醇溶液； 2.52％高氯酸溶液； 3.蒽酮试剂(将 0.4 g 蒽酮溶于 100 mL浓硫酸溶液中，现用现配)； 4.淀粉标准液(将 200 mg 淀粉倒入 100mL 烧杯中，加入 5 mL 蒸馏水，加入 65 mL52％高氯酸溶液，搅拌全部溶解，转入 100 mL 溶量瓶中，加水定容，浓度 2 mg／mL；取上述标准淀粉溶液10.00 mL 于 250 mL 溶量瓶中，加水定容，此淀粉溶液的浓度为 80 ug／mL. ) 三．标准曲线 在洁净的试管，分别加入 0.0、10.0、20.0、40.0、60.0、80.0 ug 淀粉标准液，每一个浓度2 个重复，加水调整各试管溶液均为 2.00 mL，在冰水中冷却 2 min，加入 6.00 mL 蒽酮－硫酸溶液，摇匀，在冰水中冷却 2 min. 将试管放入沸水中 5 min，各试管显色呈蓝绿色，取出试管，冷却至室温. 用2.00 mL 蒸馏按照上述操作作为空白参比，于 640nm 波长下比色，测定各试管溶液的吸光度. 以吸光度为横坐标，淀粉浓度作为纵坐标，绘制工作曲线，进行曲线拟合，得到吸光度和淀粉浓度之间的回归公式。 四．操作步骤 1.称取 1-2 g 饲料样品于 80 mL 离心管中，可溶性淀粉称取0.5g其中包括 2 个重复，加入 80％乙醇溶液 2 滴使样品湿润。 2.再加入 5 mL 水摇匀，加入 25 mL 热的 80％乙醇溶液, 摇匀后放置 5 min, 以2500 /分钟速度离心 5 min，倾出上清液。 3. 再用 30 mL 80％乙醇溶液提取1次。 4.于上述残留物中加入5 mL水和 30 mL 52％高氯酸溶液，搅拌 10 min，以 2500转/分钟离心 10 min。 5.将上清液转入 100 mL 溶量瓶中，残留物再用 35 mL 52％高氯酸溶液提取，合并提取液，以水定容。 6. 过滤，弃去最初5 mL滤液，吸取4.00 mL滤液于100mL溶量瓶中，加水定容. 取上述淀粉提取液 2.00 mL，测定沸水浴显色后溶液的吸光度. 五．计算公式 淀粉(％)＝G/(8M). 式中：G 为由饲料样品提取液测定的吸光度，由工作曲线回归公式计算出来的淀粉毫克数；M 为饲料样品的质量； 最后换算成每克饲料干物质中淀粉的含量。对于淀粉含量高，而且粗纤维含量低的谷物籽实饲料，推荐使用高氯酸水解－蒽酮比色法，其测定结果差较小，而作步骤快捷简便；对于粗纤维含量高的粗饲料，建议用酶水解法测定，但由于操作步骤繁琐，应尽量减少操作本身造成的实验误差，而且应该选用纯度高、活性强的酶制剂。

淀粉含量检测方法

谷物中淀粉含量的测定 本方法参考GB/T5009.9-2008 ?食品中淀粉的测定》的第二法酸水解法。 适用范围：本方法适用于谷物原料中淀粉含量的测定。 原理：试样经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用酸水解成具有还原性的糖，然后按还原糖测定，并折算成淀粉。 方法一 1试剂和材料 1.1洒石酸铜甲液：34.639g CuSQ溶于水，加入0.5mL浓H2SO4,稀释到500mL; 洒石酸铜乙液：173g洒石酸钾钠，加50g NaOH,稀释到500mL; 1.2 氢氧化钠溶液：c(NaOH)=1mol/L ; 1.3硫酸铁溶液：50g/L (称取50g硫酸铁，加入200mL水后，慢慢加入100mL 硫酸，冷后加入稀释至1000mL); 1.4高铤酸钾标准滴定溶液：c(1/5KMnO4)=0.1mol/L; 1.5乙醇溶液：85% v/v; 1.6 HCL: 1+1 和1+3; 1.7 NaOH 溶液：40%; 1.8乙酸铅溶液：20%; 1.9硫酸钠：10%。 2仪器设备 2.1粉碎磨：粉碎样品，使其完全通过孔径0.45mm (40目)筛。

2.3回流冷凝装置：能与250mL锥形瓶瓶口相匹配。 3操作步骤 称取样品（粉碎过40目筛）2.0g?5.0g,准确至0.0002g,置于放有慢速滤纸 的漏斗中，用50mL石油酰分5次洗去样品中脂肪，再用150mL85%乙醇溶液分数次洗涤残渣，以除去可溶性糖类物质，滤十乙醇溶液，将滤纸连同残渣一并转移至250mL锥形瓶中。 加100mL水、30mL（1+1）HCl，在沸水浴上回流2h,回流完毕后，立即在流水中冷却，待样品水解液冷却完全后，加2滴甲基红指示剂，先用NaOH溶 液（400g/L）调至黄色，再用（1+1 ）的HCl调至水解液刚变红色。若水解液颜色较深，可用pH试纸测试，使试样水解液的pH值约为乙然后加20mL的乙酸铅溶液（200g/L）,摇匀，放置10min,再加20mL的硫酸钠溶液（100g/L）,以除去过多的铅。摇匀后，将全部溶液及滤渣转入500mL容量瓶中，用水洗涤锥形瓶，洗液合并于容量瓶中，定容，摇匀，过滤，弃去初滤液20mL,滤液供 测定用。 吸取25.00mL滤液于三角瓶中，加25mL洒石酸铜甲液，再加25mL洒石酸铜乙液，在电炉上加热（在3min内煮沸）并煮沸2min,取下过滤，并用60C 水洗涤烧杯和沉淀至洗液不呈碱性为止，将漏斗连同滤纸一同放至前面使用过的烧杯上，向滤纸内加入硫酸铁（50g/L）40mL,使氧化业铜完全溶解，摇匀溶液，再加25mL 水，用玻璃棒搅拌到看不见Cu2O,以0.1mol/l高铤酸钾标准滴定溶液滴定至呈微红色，10s不褪色为终点。同样条件做空白。 方法二 1试剂 1.1碱性洒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜（CuS04 ? 5H2O）及0.050g业甲蓝加适量水溶解，再加水稀释至1000mL。 1.2碱性洒石酸铜乙液：称取50g洒石酸钾钠与75g氢氧化钠，加适量水溶解，再

植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮法)

Ⅳ、植物组织中可溶性糖含量的测定（蒽酮法） 一、目的 掌握蒽酮法测定糖的原理和技术。 二、原理 糖类（包括单糖、双糖、寡糖）在浓硫酸存在下，脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，然后蒽酮与糠醛或羟甲基糠醛经脱水缩合，生成蓝绿色的糠醛衍生物，颜色深浅与糖浓度成正相关。其反应式如下： 显色反应与反应温度、加热时间、反应系统中水和硫酸比例有关。本实验通过控制反应系统中水和硫酸比例，利用硫酸与水发生水合作用释放的热能，使反应系统自行升温而达到显色效果免去外加热步骤。 蒽酮法具有很高灵敏度，适用于糖的微量测定，且试剂简单，操作简便，因而得到普遍应用。 三、材料、仪器设备及试剂 1.材料：烘干材料粉末（过筛100目）或剪碎混匀鲜样品。 2.仪器设备: 分光光度计；电子分析天平；水浴锅；100ml容量瓶；试管；漏斗；剪刀；移液管；洗耳球等。 3.试剂及配制： 蒽酮试剂：称取蒽酮200mg溶于100ml浓硫酸中。该试剂不能久贮，宜用前配制。 100μg·ml－1 蔗糖标准母液：准确称取蔗糖100mg于烧杯加少量水溶解后，洗入 100ml容量瓶中定容至刻度。 四、实验步骤 1.蔗糖标准曲线制作 1.1取6支试管，编号，按下表配制每管含量为0～100μg蔗糖标准液 加入表中试剂后，向各管沿管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml，并立即摇动使混合均匀，置试管架上室温下显色，冷却后倒入比色杯，以0号管作空白对照，在620nm波长处，以多点校准总量法，制作标准曲线。 2.样品提取 称取干样品粉末100mg或剪碎混匀的鲜样品1g,放入试管中，加入蒸馏水10ml，置于沸水浴中提取20min，冷却后过滤入100ml容量瓶中，以热水冲洗残渣2～3次，一并滤入容量瓶中，待冷至室温，定容至刻度，即为样品待测液。 3.糖含量测定 吸取待测液0.2ml（含糖量30～80μg）,加入试管中，再加蒸馏水2.3ml，摇匀。随后沿试管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml,立刻摇动混合均匀，置于试管架上显色，冷却至室温后，以空白管作对照，在620nm波长处，按多点校准定量法测定待测管中提取液糖含量。 五、结果计算

淀粉酶检测试剂盒(碘-淀粉比色法)

淀粉酶(AMS)检测试剂盒(碘-淀粉比色法) 简介： 淀粉酶(Amylase ，AMS)又称1，4-α-D-葡聚糖水解酶，是水解淀粉和糖原的酶类总称。淀粉酶测定方法主要分为天然淀粉底物方法和确定底物方法，前者的方法有碘-淀粉法，后者有以麦戊糖底物的方法，以4-NP-G 为底物的方法。 Leagene 淀粉酶(AMS)检测试剂盒(碘-淀粉比色法)其检测原理是血清或血浆等样本中α-淀粉酶催化淀粉分子中的α-1,4糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖以及糊精等，碘液与未被水解的淀粉结合，生成蓝色复合。该试剂盒通过分光光度计检测660nm 处吸光度值，可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的淀粉酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、 KI 工作液： 4℃避光可保存一个月。 2、 准备样品： ① 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离 心取上清，-80℃冻存，用于AMS 的检测。 ② 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备，用生理盐水10倍稀释后， 可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-80℃冻存，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。 ③ 高活性样品：如果样品中含有较高活性的AMS ，可以使用生理盐水或PBS 等进行 稀释，也可以采用ALP Assay buffer 稀释。 ④ 样品准备完毕后可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算 单位蛋白重量组织或细胞内的AMS 含量。 3、 AMS 检测：按照下表设置空白管、测定管、待测样本，溶液应按照顺序依次加入，并 注意避免产生气泡。如果样品中的淀粉酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行孔。 如果使用分光光度计，反应体系设置如下： 编号 名称 TE0203 100T TE0203 200T Storage 试剂(A): AMS Assay buffer 50ml 100ml 4℃ 试剂(B): KI Solution 5ml 10ml 4℃ 避光 使用说明书 1份

非结构性碳水化合物的测定方法

水稻糖花比的测定方法 一．茎鞘非结构性碳水化合物(NSC)测定参考酶解方法。 准确称取0.5g左右的粉碎样品,加入20mL水,煮沸,使淀粉糊化后, 再添加上淀粉酶专用磷酸缓冲液(KH2PO4,12.08g/L, Na2HPO4·12H2O,7.96g/L, NaNO3,0.1g/L)20mL,加入耐热性ɑ-淀粉酶(和光公司生产)1.5mg和淀粉转葡萄糖苷酶 AMYLO-GLUCOSIDASE(SIGMA公司制造)0.5mg制备成的悬浮液。40℃水浴24h振荡培养后,再行过滤。残留物与样本的重量差即为非结构性碳水化合物。 二．茎鞘非结构性碳水化合物(NSC)采用蒽酮比色法测定。 1.可溶性糖总量的测定 称取O.1g水稻干样于150mL三角瓶中，加20mL80％乙醇，用带有长玻璃管的橡皮塞塞紧，80℃水浴浸提30min(每隔lOmin摇动一次)，取出冷却，将清液过滤至150mL三角瓶中，残渣再用80％乙醇提取两次(每次lOmL、15min),再将清液滤至三角瓶中,向三角瓶中加0.25g活性炭80℃水浴脱色30min，冷却过滤至50mL容量瓶中用80％乙醇定容，取2mL提取液于25mL容量瓶中加0.5mL蒽酮试剂和5mL浓硫酸，摇匀，沸水浴中逐管保温lmin后620nm处比色。将残渣及滤纸于80℃烘干，以备测定淀粉。 2.淀粉含量的测定 将提取可溶性糖以后的干燥残渣及滤纸剪碎放入150mL三角瓶中，加20mL热蒸馏水，沸水浴中煮沸15min，加9.2mol／L高氯酸2ml提取

15min，冷却过滤至50mL容量瓶中，用I2-KI溶液检验，如有蓝色颗粒重复提取，过滤定容，取滤液2mL，加0.5mL蒽酮试剂和5mL浓硫酸，盖上塞子微微摇动，出现絮状物时剧烈摇动，然后立即放入沸水浴中确保逐管加热lmin，自然冷却至室温620nm比色，以空白提取液为对照。 糖花比=抽穗期茎鞘中非结构性碳水化合物（包括可溶性糖和淀粉）mg/颖花数，表示灌浆始期每朵颖花具有的物质积累。

实验8-植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮比色法)

实验方案 一、实验目的 通过实验，掌握测定萝卜品质的方法 （一）萝卜外部形态的测定 1、实验材料 取鲜样3个∕小区 直尺、蒸馏水、笔、记录本、吸水纸 2、实验方法 ．用自来水将各组萝卜洗净后，再用蒸馏水洗涤，擦干表面水分．每个小区取3个重复，用电子天平称量每株的鲜重，用直尺测量植株的茎长、茎粗、叶长，取平均值作为指标值 实验(二) 植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法） 一、实验目的 了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理；掌握分光光度计的使用二、实验原理 糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。 蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。上述特定的糖类物质，反应较稳定。该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。 三、材料、仪器及试剂

1.材料：植物种子、白菜叶、柑桔 2.仪器：分光光度计；恒温水箱；20ml具塞刻度试管（3支）漏斗；100ml容量瓶；刻度试管；试管架；剪刀；研钵 3.试剂 （1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。 （2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏； （3）浓硫酸 四、实验方法 1.葡萄糖标准曲线的制作 取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml 浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标 2. 称取1克白菜叶，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。置沸水浴中加盖煮沸10分钟，冷却后过滤，滤液收集于100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀备用。 3.糖含量测定 用移液管吸收1ml提取液于20ml具塞刻度试管中，加1ml水和0.5ml蒽酮试剂。再缓慢加入5ml浓H2SO4（注意：浓硫酸遇水会产生大量的热！），盖上试管塞后，轻轻摇匀，再置沸水浴中10分钟（比色空白用2ml蒸馏水与0.5ml蒽酮试剂混合，并一同于沸水浴保温10分钟）。冷却至室温后，在波长620nm下比色，记录光密度值。查标准曲线上得知对应的葡萄糖含量（μg）。 五、结果计算 样品含糖量（g/100g鲜重）=查表所得糖含量（μg）×稀释倍数×100/样品重（g）×106 六、注意事项

水稻、小麦、玉米、谷子、高粱等谷物籽粒中粗淀粉含量的测定

GB 5006—85 本标准适用于水稻、小麦、玉米、谷子、高粱等谷物籽粒中粗淀粉含量的测定。 1 测定原理 淀粉是多糖聚合物，在一定酸性条件下，以氯化钙溶液为分散介质，淀粉可均匀分散在溶液中，并能形成稳定的具有旋光性的物质。而旋光度的大小与淀粉含量成正比，所以可用旋光法测定。 2 仪器和设备 2.1 分析天平：感量0.001 g。 2.2 实验用粉碎机。 2.3 电热恒温甘油浴锅：119±1℃，浴锅内放入工业甘油，液层厚度为2 cm 左右。 2.4 旋光仪：钠灯，灵敏度0.01度。 2.5 锥形瓶：150 ml，250 ml。 2.6 容量瓶：100 ml。 2.7 滤纸直径：15～18 cm，中速。 3 试剂配制 3.1 氯化钙－乙酸溶液：将氯化钙（CaCl 2·2H 2 O，分析纯）500 g溶解于600 ml 蒸馏水中，冷却后，过滤。其澄清液以波美比重计测定，在20℃条件下调溶液比重为1.3±0.02；用精密pH试纸检查，滴加冰乙酸（见GB 676—78《冰乙酸》，分析纯），粗调氯化钙溶液pH值为2.3左右，然后再用酸度计准确调pH值为2.3±0.05。 3.2 30％硫酸锌溶液（W/V）：取硫酸锌（ZnSO4·7H2O，见GB 666—78《硫酸锌》，分析纯）30 g，用蒸馏水溶解并稀释至100 ml。 3.3 15％亚铁氰化钾溶液（W/V）：取亚铁氰化钾（K4Fe（CN）6·3H2O GB 1273—77《亚铁氰化钾》，分析纯）15 g，用蒸馏水溶解并稀释至100 ml。 4 样品的选取和制备 4.1 将样品挑选干净（带壳种子需脱壳），按四分法缩减取样约20 g。

蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶和性糖的含量

实验九蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶和性糖的含量 一、实验目的 掌握蒽酮法测定总糖和可溶性糖含量的原理和方法 二、实验原理 蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。酸可使糖类（如已糖基，戊醛糖及已糖醛酸）脱水生成糠醛，生成的糠醛或烃甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620nm处有最大光吸收值。在10~100ug范围内其他颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当存在含有较多色氨酸蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。而对于上述特定的糖类物质，反映较稳定。多糖和寡糖可用酸水解成单塘和蒽酮试剂反应，因此利用蒽酮法可测组织中总糖和可溶性糖。这一种方法具有很高的灵敏度，糖含量在30ug左右时就能侧进行测定，所以可作为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。 三、仪器，试剂和材料 1、仪器 （1）分光光度计； (6)漏斗，漏斗架个6个 （2）电子天平；（7）容量瓶：50ml2个； （3）三角瓶：50ml2个（8）移液管； （4）刻度具塞试管；10ml13支；（9）水浴锅。 （5）试管架，试管夹各2个； 2、试剂 （1）葡萄糖标准液：100ug/ml；（2）浓硫酸； （2）蒽酮试剂：0.2g蒽酮，溶于100ml浓流酸中，现当日配制使用。 3、材料 小麦幼苗分蕖节或其植物的幼嫩组织（红薯）。 四、操作步骤 1、葡萄糖标准曲线的制作 取7支试管，按下表配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液； 管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液/mL 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 蒸馏水/mL 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.7 0.8 葡萄糖含量/ug 0 10 20 30 40 50 60 在每支试管中，加入蒽酮试剂4.0ml，迅速浸入冰水浴中冷却。各加完后一起浸入沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸10min取出，用流水冷却，室温放置10min，在620nm波长下比色。以标准葡萄糖含量（ug）做横坐标，以吸光值作纵坐标，做出标准曲线。 2、植物样品中可溶性糖的提取

大米淀粉含量的测定

不同品牌的大米中淀粉的含量测定研究 广东石油化工学院化学与生命科学学院 生物技术 摘要 淀粉跟稀硫酸在加热的条件下能够完全水解成葡萄糖、麦芽糖等还原糖。还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖在碱性条件下被氧化成糖酸及其他产物，3，5-二硝基水杨酸则被还原成棕红色的3-氨基-5硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm 波长下测定光密度值，查对标准曲线。由于淀粉完全水解成还原糖的量是成正比的，所以，也与棕红色物质的深浅成正比关系。 关键词水解还原糖吸光度 1 前言 最近网上有人提出疑问：“我们吃的大米淀粉含量究竟有多少？哪种大米的淀粉含量最高？”很多人都不太能准确地回答。对于我们南方人来说，大米是我们的主要食物、能量来源，基于网上有人提出“大米淀粉含量究竟有多少”的疑问，我们决定对某超市出售的某几种大米的淀粉含量进行实验研究。通过实验测出不同品种大米的淀粉含量，比较不同品种大米的淀粉含量的高低。 2 实验目的 1、掌握测定稀酸水解淀粉的原理和方法，利用酸水解法测定淀粉的原理，测定不同品牌的大米中淀粉的含量。 3 实验原理 淀粉是植物体最主要的贮藏多糖，也是人和动物的重要食物来源和发酵工业的基本原料。主要存在于大米、种子和块茎中。淀粉经过稀硫酸水解后生成葡萄糖、麦芽糖等小分子物质而被机体利用。酸水解淀粉产生葡萄糖、麦芽糖等还原糖能使3，5-二硝基水杨酸还原，生成棕红色的的3-氨基-5-硝基水杨酸，后者在540nm处有最大吸收峰。可用比色法进行测定。反应中还原糖被氧化成相应的糖酸。反应如下：

淀粉的含量与产生的还原糖的量成正比。用标准的淀粉溶液制作标准曲线，用比色法测定稀硫酸作用于淀粉后生成的还原糖的量，以单位质量样品在过量酸作用下完全水解生成的还原糖的量从而测定淀粉的含量。 4 实验设备 80℃水浴锅 高速组织捣碎机 分光光度计 20 mL具塞比色管×13 容量瓶（100 mL×7、1000 mL×2） 量筒（20 mL、50 mL） 试管架 移液管（2mL×6、1mL×6） 电子天平 胶头滴管 烧杯 玻璃棒 5 实验材料及试剂 5.1 样品来源 本研究使用的样品包括5种不同品牌的大米。 将这5种不同品牌的大米用蒸馏水进行冲洗以除去大米中的水溶性杂质后待大米晾干后进行实验。 5.2 试剂 5.2.1 2mol/L NaOH 溶液

蒽酮法测定可溶性糖

植物组织可溶性糖及淀粉测定(蒽酮法) 一、材料、仪器设备及试剂 1．材料 新鲜或烘干的植物叶片 2．仪器设备 分光光度计、水浴锅、刻度试管、刻度吸管。 3．试剂 蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，如有结晶析出，可微热溶解； 9.2mol/L HCIO 浓硫酸（相对密度1.84）； l％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。加少量水溶解移入100ml容量瓶中，加入0.5ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度； 100μg蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液1ml加入100ml容量瓶中，加水定容。 淀粉标准溶液：准确称取100mg纯淀粉，放入100ml容量瓶中，加60-70ml热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸，冷却后加蒸馏水稀释至刻度，则每ml含淀粉1mg，吸取此液5.0ml，加蒸馏水稀释至50ml，却为每ml含淀粉100g 的标准液。 二、实验步骤 1．标准曲线的制作 取20ml刻度试管11支，从0~10分别编号，按表加人溶液和水，然后按顺序向试管内加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡,，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白为对照，在630nm波长下测其吸光度。比色液总体积为8ml．以糖含量为横坐标；光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。 表 试剂 管号 01,23,45,67,89,10 100μg·L-1蔗糖液/ml00.20.40.60.8 1.0 水/ ml 2.0 1.812.6 1.4 1.2 1.0 蔗糖量/μg020********* 2．可溶性糖的提取新鲜植物叶片或干材料，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10~0.30g ,共3份，分别放入3支刻度试管中，加人5－10ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min(提取2次)，提取液过滤入25ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至20ml。 3．显色测定：吸取样品提取液0.5ml于20ml刻度试管中，加蒸馏水1.5ml，然后向试管内加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，准 确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白为对照，在630nm波长下测其吸光度。 可溶%）＝（C*V／a*n）／（W*106） 式中C：标准方程求得糖量（g） a：吸取样品液体积(ml)； V：提取液量hal）； n：稀释倍数；

实验二十一可溶性总糖的测定(蒽酮比色法)

实验二十一可溶性总糖的测定（蒽酮比色法） 一、目的 掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 二、原理强酸可使糖类脱水生成糠醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620 nm 处有最大吸收. 在10 -100ug 范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。 这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30ug 左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。 三、仪器、试剂和材料 1 . 仪器 （1）分光光度计 （2 ）电子顶载天平 （3 ）三角瓶：50m1 X 1 （4 ）大试管：9 支 （5）试管架，试管夹 （6 ）漏斗，漏斗架 （7 ）容量瓶：50rnl X 2 （8 ）刻度吸管：1m1X3 ，2m1X1 ，5mlX1 （9 ）水浴锅 2 . 试剂 （1）葡萄糖标准液：l00ug/ml （2 ）浓硫酸 （3）蒽酮试剂:0.2g 蒽酮溶于100 ml 浓H2SO4 中当日配制使用。 3 . 材料小麦分蘖节。 四、操作步骤 1. 葡萄糖标准曲线的制作

取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液: 在每支试管中立即加入蒽酮试剂 4.0m1 ，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸lOmin 取出，用流水冷却，室温放置10min ，在620 nm波长下比色。以标准葡萄糖含量（ug）作横坐标，以吸光值作纵坐标，作岀标准曲线。 2. 植物样品中可溶性糖的提取 将小麦分蘖节剪碎至2mm以下，准确称取lg,放入50m1三角瓶中，加沸水25m1，在水浴中加盖煮沸10min，冷却后过滤，滤液收集在50m1容量瓶中，定容至刻度。吸取提取液2m1，置另一50m1容量瓶 中，以蒸馏水稀释定容，摇匀测定。 3 .测定 吸取lml已稀释的提取液于大试管中，加入 4.0ml蒽酮试剂，以下操作同标准曲线制作。比色波长 620nm，记录吸光度，在标准曲线上查出葡萄糖的含量（ug ）。 查表所得糖含量（ug ）乂稀释倍数 五、结果处理 查表所得糖含量Cug）乂稀释倍数心 植物样品含糖壘（%）=： 样品重（町xm% X10° 六、注意事项 1 .该显色反应非常灵敏，溶液中切勿混入纸屑及尘埃。 2 . H 2 SO 4 要用高纯度的。 3. 不同糖类与蒽酮的显色有差异，稳定性也不同。加热、比色时间应严格掌握。 七、思考题 1.用水提取的糖类有哪些? 2 . 制作标准曲线时应注意哪些问题？

食品分析实验设计——小麦中淀粉含量的测定

化学化工与生命科学系 《食品分析》 实验设计 实验题目：小麦中淀粉的测定 姓名：*** 学号：*** 专业：*** 指导老师：*** 2012年1月1日

一、实验名称：小麦中淀粉的测定 二、实验原理： 1．淀粉具有旋光性，在一定条件下旋光度的大小与淀粉的浓度成正比。用氯化钙溶液提取淀粉，使之与其他成分分离用氯化锡沉淀提取液中的蛋白质后，测定旋光度，即可计算出淀粉含量。计算公式如下： 淀粉含量= m ×203×100×L α×100（%） 式中:α—旋光度读数，（o）； L —观测管长度，dm ； m —样品质量，g ； 203—淀粉比旋光度，（o）。 2.氯化钙溶液作为淀粉的提取剂，是因为钙能与淀粉分子上的羟基形成络合物，使淀粉与水有较高的亲和力而易溶于水中。 三、实验仪器与试剂： 1.仪器 旋光仪、烧杯、玻璃棒、捣碎机、电子天平 2.试剂 小麦、氯化钙溶液、氯化锡溶液、小麦 四、实验步骤： 1.用电子天平称取小麦10g ，用捣碎机磨成粉； 2.将小麦粉置于烧杯中，加入适量蒸馏水搅拌； 3.将小麦溶液中加入一定量的氯化钙溶液，充分搅拌； 4.再在上述溶液中加入一定量的氯化锡溶液，充分搅拌，以沉淀蛋白质，避免蛋白质对淀粉测定的干扰 5.上述溶液过滤，用旋光仪测溶液旋光度。 6.记录实验数据，收拾实验器材。 五、实验结果 利用公式： 淀粉= m ×203×100×L α×100(%) 式中: α—旋光度读数，（o）； L —观测管长度，dm ； m —样品质量，g ；

203—淀粉比旋光度，（o）。 六、说明与注意事项 1.本法适用于不同来源的淀粉，具有重现性好、操作简便、快速等特点。由于淀粉的比旋光度大，直链淀粉和支链淀粉的比旋光度又很接近，因此本法对于可溶性糖类含量不高的谷物样品具有较高的准确度。 2.蛋白质也具有旋光性，为消除其干扰，本法加入氯化锡溶液，以沉淀蛋白质。 3.淀粉比旋光度一般按203°计，不同来源淀粉也略有不同，如玉米，小麦淀粉为203°，豆类淀粉为200°。

总糖的测定-蒽酮比色法教学提纲

总糖的测定-蒽酮比色 法

植物组织中总糖和还原糖含量的测定（蒽酮比色法）2010-5-24 一、实验目的 掌握蒽酮比色法测定总糖和还原糖含量的原理和方法，学会正确使用分光光度计。 二、实验原理 游离的己糖或多糖中的己糖基、戊糠醛及己糖醛酸在浓硫酸的作用下脱水生成糠醛衍生物，糠醛衍生物与蒽酮缩合成蓝色的化合物，在620nm处有最大吸收，在一定糖浓度范围内（200ug/ml），溶液吸光度值与糖溶液的浓度成线性关系。用酸将植物组织中没有还原性的多糖和寡糖彻底水解成具有还原性的单糖，或直接提取植物组织中的还原糖，即可对植物组织中的总糖和还原糖进行定量测定。 三、实验材料 1．可见分光光度计、电子天平(1/100)、粉碎机、水浴锅、电炉。 2．研钵、量筒、三角烧瓶、烧杯、容量瓶、玻璃漏斗、试管1.5cm×15cm、刻度吸管、胶头滴管、pH试纸、坐标纸。 3．植物原料，如银耳、木耳、菜叶等。 四、实验试剂 1．蒽酮试剂：取2g蒽酮溶于l000ml体积分数为80％的硫酸中，当日配制使用。 2．标准葡萄糖溶液(0.1mg／m1)：称取100mg葡萄糖，溶于蒸馏水并稀释至1 000ml（可滴加几滴甲苯作防腐剂）。 3．6mol／L HCl溶液：50ml盐酸，加水至100ml。 4．10％NaOH溶液：称取10g NaOH固体，溶于蒸馏水并稀释至100ml。 五、操作步骤 1．葡萄糖标准曲线的绘制 取干净试管6支，按下表进行操作。以吸光度为纵坐标，各标准液浓度(mg／m1)为横坐标做图。 2．样品中还原糖的提取和测定 称取植物原料干粉0.1～0.5g，加水约3ml，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约30ml的蒸馏水冲洗研钵2～3次，洗出液也转入三角烧瓶中。于50℃水浴中保温半小时（使还原糖浸出），取出，冷却后定容至100ml。过滤，取lml滤液进行还原糖的测定：吸取lml总糖类溶液置试管中，浸于冰浴中冷却，再加入4ml蒽酮试剂，沸水浴中准确加热10min，取出用自来水冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同，测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。（样品液显色后若颜色很深，其吸光度超过标准曲线浓度范围，则应将样品提取液适当稀释后再加蒽酮显色测定）。

大米中淀粉含量的测定要点

实验七大米中淀粉含量的测定 一、实验原理 本法是根据GB/T5009.9-2003酸水解法和改良快速直接滴定法进行测定的。 试样经除去脂肪及可溶性糖后，其中的淀粉用酸水解成具有还原性的单糖，然后按还原性单糖的方法测定，并折算成淀粉。 二、实验仪器与试剂 水浴锅粉碎机40目筛附250mL锥形瓶的回流装置台称电炉锥形瓶烧杯量筒容量瓶移液管棕色酸式滴定管手套 乙醚乙醇(85%) 盐酸(1+1) NaOH溶液(400g/L) NaOH溶液(100g/L) 乙酸铅溶液（200g/L）硫酸钠溶液(100g/L) 甲基红溶液(2g/L,用乙醇配) 0.01mol/L KMnO4标准溶液 裴林氏A液：溶解CuSO4·5H2O 35g 及亚甲基蓝0.05g，加水溶解，定容至1000mL，摇匀。 裴林氏B液：称取117g酒石酸钾钠，126.4g 氢氧化钠，9.4g亚铁氰化钾溶解后，定容至1000mL,摇匀。 0 .1% 标准葡萄糖溶液：取分析纯葡萄糖，在150℃下烘干至恒重，准确称取1.000g无水葡萄糖，加水溶解后定容至1000mL。 三、实验操作步骤 1、样品处理 将大米磨碎并过40目筛，称取3.00g米粉置于放有慢速滤纸的漏斗中，用30mL乙醚分三次洗去试样中脂肪，弃去乙醚。用150mL85%乙醇分数次洗涤残渣，除可溶性糖。滤干乙醇溶液，以100mL水洗涤漏斗中残渣并转移至250mL 锥形瓶中，加入30mL(1+1)盐酸，接好冷凝管，置沸水浴中回流2h。回流完毕后，立即置流水中冷却。待试样水解液冷却后，加2滴甲基红溶液，先以NaOH 溶液(400g/L)调至黄色，再以盐酸（1+1）校正至水解液刚变为红色为宜。然后加20mL乙酸铅溶液（200g/L），摇匀，放置10min，再20mL硫酸钠溶液(100g/L)，以除去过多的铅。摇匀后将全部溶液和残渣转入500mL容量瓶中，加入水稀释至刻度。过滤，弃去初滤液20mL，滤液供测定用。

地下水—碘化物的测定—淀粉分光光度法

FHZDZDXS0072 地下水碘化物的测定淀粉分光光度法 F-HZ-DZ-DXS-0072 地下水—碘化物的测定—淀粉分光光度法 1 范围 本方法适用于地下水中碘离子的测定。 最小检测量为0.5μg，若取20mL水样测定，最低检测浓度为2.5μg /L。 测定范围：25μg/ L～500μg /L。 2 原理 在磷酸介质中，加入溴水可以将溶液中存在的碘离子定量地氧化为碘酸根离子。反应生成的碘酸根离子与碘化钾作用生成碘，碘再与淀粉作用生成蓝色化合物，借以进行比色或光度测定。过量的溴用甲酸钠破坏。过剩的甲酸钠，在酸性介质中经煮沸可以除去。 3 试剂 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为二次去离子水。 3.1 饱和溴水：在少量蒸馏水中滴加液态溴（Br2）,直到溶液上层出现橙色溴的蒸气，于磨口瓶中保存（用时现配）。 3.2 磷酸溶液（1+2）。 3.3 甲酸钠溶液（HCOONa,200g/L）。 3.4 碘化钾溶液（KI，10g/L）。 3.6 碘离子标准溶液 3.6.1 碘离子标准贮备溶液，0.20 mg/mL：称取0.2616g碘化钾（KI，99.99%）溶于少量蒸馏水中，移入1000mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。此溶液1.00mL含0.20mg碘离子。 3.6.2 碘离子标准溶液，1.00μg /mL：吸取5.00mL碘离子标准贮备溶液（0.20mg/mL）于1000mL 容量瓶中，用蒸馏水中稀释至刻度，摇匀。此溶液1.00mL含1.00μg碘离子。 3.7 淀粉溶液（5g/L）：称取0.5g可溶性淀粉，加100mL蒸馏水，加热搅拌，直至溶液清亮透明。 4 仪器设备 分光光度计。 5 试样制备 5.1 取澄清原水样进行测定。试样量20mL。 6 操作步骤 6.1 水样分析 取20.0mL水样于100mL烧杯中，加入6滴磷酸溶液（1+2），加10滴饱和溴水，放在电热板上，加热至恰沸腾时取下，趁热加入10滴甲酸钠溶液（200g/L），搅拌，此时溶液中溴的颜色应完全褪去。再将溶液沸腾以破坏过剩的甲酸钠。取下烧杯，放入冷水槽中冷却。将溶液

玉米中淀粉含量的测定

实验四 玉米粉中淀粉含量的测定 （旋光计法） 二、实验原理 淀粉具有旋光性，在一定条件下旋光度的大小与淀粉的浓度成正比。用氯化钙溶液提取淀粉，使之与其他成分分离，用氯化锡沉淀提取液中的蛋白质后，测定旋光度，即可计算出淀粉含量。 四、操作方法 1.把样品研磨并通过40目以上的标准筛，称取2g 样品，置于250ml 烧杯中。 2.加水10m1，搅拌使样品湿润，加入70ml 氯化钙溶液，盖上表面皿，在5min 内加热至沸并继续加热15min 。加热时随时搅拌以防样品附在烧杯壁上。如泡沫过多可加1～2滴辛醇消泡。 3.迅速冷却后，移入l00ml 容量瓶中，用氯化钙溶液洗涤烧杯上附着的样品，洗液并入容量瓶中。 4.加5mI 氯化锡镕液，用氯化钙溶液定容到刻度，混匀，过滤，弃去初滤液，收集滤液装入旋光管中，并于旋光计中测定样品溶液旋光度。 五、计算 100m 203L 100 (%)????=α淀粉 式中：α——旋光度读数，度； L ——观测管长度，dm ； M ——样品质量，g 203——淀粉的比旋光度，度 六、说明 1.氯化钙溶液可以作为淀粉的提取剂，是因为钙能与淀粉分子上的羧基形成络合物，使淀粉与水有较高的亲合力而易溶于水中。 2.淀粉溶液加热后，必须迅速冷却，以防止淀粉老化，形成高度晶化的不溶性淀粉分子微束。 3.氯化锡溶液的作用是沉淀蛋白质，因为蛋白质也具有旋光性(左旋性)。蛋白质含量较高的样品，如高蛋白营养米粉，用旋光法测定时结果偏低，误差较大。 思考题： 1.样品加盐酸处理时，煮沸时间少于或多于15分钟会对测定结果产生什么影响 答：因为淀粉水解成葡萄糖才有旋光，控制加热时间是为了水解完全保证测定的准确性。若煮沸时间少于15min ，淀粉可能水解不完全；如果煮沸时间多于15min ，会发生副反应，产生糊精，也会影响实验结果。 2.为什么过滤时要弃取初始滤液15mL 答：一是因为本小组在用滤纸做漏斗时未用蒸馏水先弄湿滤纸，直接倒需要过滤的浑浊液，因此会有部分未通过滤纸，直接从滤纸与漏斗的缝隙处流入烧杯；二是为了在滤纸表面形成滤饼层，此样液固体含量较高，适合使用滤饼层过滤，通常，过滤开始阶段得到的是浑浊液，对实验结果会有影响，所以要舍弃前15ml 。

蒽酮比色法快速测定葡萄糖

蒽酮比色法快速测定葡萄糖、果糖、蔗糖及淀粉含量 蒽酮试剂与碳水化合物生成一种蓝绿色物质,是糖类特有的反应。不经分离而进行系统测定葡萄糖、果糖、蔗糖及淀粉含量基于以下三点:第一在室温下葡萄糖与蒽酮试剂不显色,此温度下果糖显色5min的吸收值与果糖在100℃显色5min吸收值几乎相等。第二稀碱与糖溶液共热时,可破坏葡萄糖、果糖,而蔗糖不被破坏。第三淀粉经酸水解后与蒽酮试剂显色。 (二)试剂 (1)蒽酮试剂:称0.4g蒽酮溶于100ml88%硫酸中(约84份体积97%浓硫酸与16份体积水混合,密封在磨口瓶中)。溶解后置水中冷却备用。此液当天配制。 (2)2mol/L氢氧化钾溶液。 (3)3mol/L盐酸溶液 (5)标准糖贮备液:精确称取250mg干燥的分析纯的糖(葡萄糖、果糖、蔗糖),分另移至250ml 容量瓶中,配成1mg/ml浓度溶液。溶剂用蒸馏水和75%乙醇均可。 (6)标准糖工作液:用移液管吸取10ml标准糖贮备液于100ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度、摇匀。此液含糖为100μg/ml。 (三)测定步骤 1.工作曲线绘制用2ml吸量管按表取标准糖工作液(葡萄糖不多于160μg,果糖不多于80μg,蔗糖不多于100μg)于干洁的试管(16×180mm)中,用蒸馏水分别调整其体积为 2.0ml。从滴定管中加入蒽酮试剂6.0ml。摇匀并立即置于沸水浴中加热5min,取出立即在冷水中迅速冷却(不断摇动)。用 2.0ml蒸馏水重复上述操作,作为空白溶液。在分光光度计中,以640nm

2.样品中糖的提取谷物或植株体烘干、粉碎。精确称取烘干样品(谷物0.2g、植株体0.1g 左右)放入研钵中,加加5ml蒸馏水磨至均匀,以5ml蒸馏水将均匀物全部移入离心管中,离心(3000r/min)5min。离心液倒入干净试管中。再向盛有沉淀的离心管加5ml蒸馏水并搅拌沉淀物,离心(重复二次),合并离心液于50ml容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度。此液用干葡萄糖、果糖及蔗糖的测定(A液)。 以10ml3mol/L盐酸将离心管中沉淀物全部转移到容量瓶中,盖上玻塞,放在沸水浴中煮沸40～45min,取出冷却至室温,加3mol/L氢氧化钠溶液10ml中和其酸性,以蒸馏水定容至50ml,从中取2ml溶液,加蒸馏水至50ml,混匀。此液用用淀粉的测定(B液)。 3.蔗糖的测定精确吸取样品液(A)10ml,加入2mol/L氢氧化钾溶液2ml,置沸水浴中煮沸10min。取出迅速冷至室温,加蒸馏水稀释至50ml,摇匀。精确吸取稀释液2ml至一干净试管中,按标准曲线绘制步骤加蒽酮试剂显色测定,得光密度值E蔗。 4.蔗糖的结果计算 从蔗糖工作曲线求得蔗糖量为S(μg),按下式计算样品中蔗糖百分含量。 式中: S──待测样品液中蔗糖量(μg) W──样品称重(g) V1──用于测定的样品稀释液的体积(ml) V2──用于分析的样品稀释液总体积(ml) V3──样品液总体积(ml) V4──用于氢氧化钾水解的样品液体积(ml) 5.葡萄糖、果糖的测定取样品液(A)10ml加蒸馏水至50ml,往两支干净试管中分别加入2ml 样品稀释液其中一支加蒽酮试剂6ml,摇匀,在沸水浴中煮沸5分钟,取出立即浸入自来水冷却至室温,在640nm下测定光密度E100。另一支试管,加蒽酮试剂6ml,摇匀,在常温下显色5min,同上述操作测定光密度E常温。由E常温查果糖工作曲线求得样品液果糖量为F(μg),按下式计算样品中果糖、葡萄糖含量。 6.果糖、葡萄糖的结果计算 由E100-E常温查葡萄糖工作曲线求得样品液中葡萄糖量为G(μg),按下式算葡萄糖百分含量。