水中石油类测定荧光分析标准方法

国家环境保护总局标准

PNDF 14.1:2:4.128-98

天然水、饮用水、污水中矿物油（石油类）总浓度的测定荧光分析法

I

俄罗斯

1998

目录

1 引言___________________________________________________________ 2

2 本标准测量误差范围_____________________________________________ 2

3 计量器具、辅助器物、试剂和材料。 _______________________________ 2 3.1 计量器具 ____________________________________________________ 2 3.2 试剂 ________________________________________________________ 3 3.3 辅助器物____________________________________________________ 3 3.

4 试剂配制方法 ________________________________________________ 3

3.4.1 氢氧化钠溶液：5％质量百分比_______________________________ 3

3.4.2 盐酸溶液：3％容量百分比__________________________________ 3

3.4.3 矿物油正己烷标准储备液：100mg/L __________________________ 3

4 测量方法 _______________________________________________________ 4

5 安全要求 _______________________________________________________ 4

6 对分析人员资格要求 _____________________________________________ 4

7 进行测量必备条件 _______________________________________________ 4

8 测量前准备 _____________________________________________________ 5 8.1 样品采集 ____________________________________________________ 5 8.2 正己烷纯度检查方法__________________________________________ 5 8.3 分析仪的校准 ________________________________________________ 6

8.4 分析仪校准特性的稳定性控制__________________________________ 6

9 试样分析 _______________________________________________________ 7

10 数据处理 ______________________________________________________ 8

11 测量结果表示 __________________________________________________ 8

12 测量误差控制 __________________________________________________ 9附录A ________________________________________________________ 10 附录B ________________________________________________________ 12 附录C ________________________________________________________ 14

1 引言

本标准规定用"Fluorat-02" 分析仪在天然水、饮用水、污水中测定

矿物油总质量浓度的方法。定量测定浓度范围为0.005~50mg/L。

自然界存在的脂肪、腐殖质、饱和烃不干扰矿物油的测定。测定水中轻油组分（汽油）以及个别化合物时本标准不能保证(2)中给出的误差值。

在下列情况下试样的正己烷提取液必须经氧化铝吸附柱进行提纯：

－造纸制浆工业、化工业未处理过的废水试样

－根据本标准(9)，如试样的正己烷提取液的透光率低于本标准(9)规定的数值。

2 本标准测量误差范围

执行本标准能保证测量误差不超过表(1)列出的值。

表1

3 计量器具、辅助器物、试剂和材料。

矿物油质量浓度的测定需采用下列计量器具、辅助器物、试剂和材料。

3.1 计量器具

俄罗斯有关国家标准代号："Fluorat-02" 分析仪ТУ4321－001－20506233－94 分析天平，精度二级ГОСТ 24104－88

砝码ГОСТ 7328－82

整量移液管（一个标线），

容量为10ml，精度二级ГОСТ 29169－91

刻度移液管，容量为1、2、

5ml，精度二级ГОСТ 29227－91

两个50 ml容量瓶、两个25 ml

容量瓶，精度二级ГОСТ 1770－74

两个分别为100 ml和25 ml量筒，

精度二级ГОСТ 1770－74

国家标准物质－矿物油正己烷溶液（1mg/ml ）*，

（用于校准分析仪）ГСО 7422－97

国家标准物质－矿物油固体片块，

（用于误差控制）ГСО 7117－94

3.2 试剂

蒸馏水ГОСТ 6709－72

正己烷*** ТУ6－09－3375－78

盐酸，化学纯ГОСТ 3118－77

氢氧化钠，化学纯ГОСТ 4328－77

对正己烷纯度的要求参见本标准（8.2）。

3.3 辅助器物

容量为1000ml的锥形瓶ГОСТ 25336－82

容量为250ml分液漏斗ГОСТ 25336－82 玻璃器皿洗涤方法参见本标准附录A。为进行氧化铝吸附柱上矿物油

提纯所需要试剂和设备详见本标准附录B。

3.4 试剂配制方法

3.4.1 氢氧化钠溶液：5％质量百分比

称取5g氢氧化钠固体颗粒溶解于95g蒸馏水。贮于聚乙烯瓶中，保质期为2个月。

3.4.2 盐酸溶液：3％容量百分比

量取970ml蒸馏水，置于耐热玻璃锥形瓶中，然后边搅拌边缓缓加入30ml盐酸。保质期无限。

3.4.3 矿物油正己烷标准储备液：100mg/L

量取5ml矿物油正己烷溶液标准物质，置于50ml 量筒中，加正己烷至刻度，充分混匀。该溶液贮于带有磨口玻塞的玻璃瓶中，存冰箱保存。

在防止溶剂挥发条件下该溶液保质期不小于3个月。

3.3.4 校准分析仪用的矿物油标准使用液：10mg/L 。

量取5ml浓度为100mg/L矿物油溶液，置于50ml量筒中，加正己烷至刻度，充分混匀。该溶液贮于带有磨口玻塞的玻璃瓶中，在冰箱保存。

在防止溶剂挥发条件下该溶液保质期不小于3个月。

分析仪校准试剂配制和萃取剂均采用统一批号的正己烷。每一次进来新一批正己烷后必须根据本标准(8.2)进行其纯度的检查。如果在新一批正己烷中矿物油浓度测得值与老一批之差超过10％，则必须重新用新一批正己烷配制校准溶液进行分析仪的校准。

配制溶液所使用的玻璃器皿洗涤方法详见本标准附录A。

备注: 在污染物已知组成情况下可以直接采用污染物主成份相应的石油产品来配制校准分析仪用的标准溶液。配制100mg/L石油产品标准溶液方法参见本标准附录C。

4 测量方法

矿物油质量浓度的测定基于荧光分析法。先从水样用正己烷萃取

矿物油，再用"Fluorat-02" 分析仪测定其矿物油浓度。

5 安全要求

在进行矿物油质量浓度的测定时必须遵守以下安全技术条例：

使用化学试剂安全技术条例（ГОСТ 12.4.021－75）、使用电动设备安全技术条例（ГОСТ 12.4.021－75）、"Fluorat-02" 分析仪操作规程中

安全技术条例。

实验室必须符合防火要求（ГОСТ 12.1.004－85）并且应具备

消防设施（按照ГОСТ 12.4.009－83）。室内空气中污染物含量不能超过有关标准（ГОСТ 12.1.007－76）。工作人员安全技术培训应根据有关

标准进行（ГОСТ 12.0.004－90）。

6 对分析人员资格要求

负责分析测量以及数据处理分析人员必须具有化学专业大专以上学历，或者具备在化学实验室相应的工作经验。分析人员必须经过培训掌握分析方法，并且通过误差控制考试（参见本标准(12)）。

7 进行测量必备条件

在进行测量时候实验室应具备以下条件：

室温20±5?C;

大气压 84.0~106.7kPa (630~800汞柱毫米）；

湿度 25?C 下不大于80％； 电压幅度 187~242V ； 交电频率 50±1Hz ；

8 测量前准备

进行测量前必须完成以下手续：水样采集、"Fluorat-02" 分析仪的 校准、正己烷纯度的检验。 8.1 样品采集

取样器用玻璃器皿。采取的水样切不可带有石油薄膜！从取样到分析的 间隔不得超过3h 。对及时不能分析水样，应按照本标准(9)进行萃取。萃取液应贮于带有磨口玻塞的玻璃瓶中。在防止溶剂挥发条件下萃取液可存放1个星期。

采样量为100ml 。采样器经过洗涤与干燥后应通过洗涤质量检查。检查 方法如下：用一定量的正己烷（一般5ml 左右）清洗采样器。将适量清洗废液置于石英池内，置于"Fluorat-02" 分析仪样品光路中。在"Calibration" 工作状态下进入仪器校准窗口。把光标置于"J0"后按"Enter" 键测定其荧光 强度。废液荧光强度与按本标准(8.2)纯正己烷的荧光强度之差不能大于10％。否则应重新清洗采样器。 8.2 正己烷纯度检查方法

将盛有正己烷的石英池置于样品光路中。在校准菜单中把光标置于 "J0"后按"Enter"键 测定其荧光强度。此值记录为Φ正己烷。将盛有矿物油

标准使用液C 矿物油＝10mg/L （3.4.4）的石英池置于样品光路中。在校准仪器窗口把光标置于"J0"后按回车键 "Enter" 测定荧光强度。此值记录为Φ矿物油 。 按下式计算正己烷溶液中矿物油测定限（C min , mg/L ），即为矿物油 检测范围下限。

式中0.1系数反映用正己烷萃取后，有机相体积与原水样体积的比例。 由于正己烷体积是原水样的1/10，故萃取同时进行富集。

如果用上述方法计算的 C min 小于某规定值（一般选为污水排放标准的 相应污染项目的最高允许浓度值的五分之一），正己烷视为符合要求。否则必须选用另一批正己烷或者把正己烷蒸馏提纯。

备注：石英池壁上的沾污会增加荧光信号，从而影响正己烷纯度的 检查。往石英池灌入正己烷，按上述方法测定荧光强度。重新灌入正己烷再一次测定荧光强度。如果荧光强度下降，必须重复以上操作，直至荧光强度

)

1(1.0min 矿物油

正己烷

矿物油正己烷

C C ?Φ-ΦΦ?

=

停止下降为止。这时石英池可视洗净（一般需清洗1~2次）。最后一次测定的荧光强度值记为Φ正己烷 值。 8.3 分析仪的校准

为校准分析仪必须依次测量正己烷纯溶剂和矿物油标准使用液的荧光 强度。校准分析仪以及常规测量前应在激发光路中设置 1号滤光片，在发射 光路中设置 3号滤光片**)。

进入"Calibration"工作状态，用数字键输入 C0=0, C1=10,00 。用箭头 键把光标移至"J0"位置。把盛有纯正己烷的石英池置于光路中，按"Enter"键即进行测量。测量完毕后，将光标移至"J1"位置，将盛有矿物油标准使用液 (C=10mg/L)的石英池置于光路中，按"Enter"键即进行测量。此时"C2"~"C6"以及"J2"~"J6"值应等于零。

备注：本标准采用两个点校准函数。如校准仪器窗口的数值丢失的话，则切不可手动输入！本仪器微处理器采用比较复杂的校准函数即除了荧光强度值，还需要透光率值，而透光率值不能手动输入。 8.4 分析仪校准特性的稳定性控制

为了测试分析仪校准特性的稳定性应准备1~2个浓度为1~10mg/L 矿物油质量控制样品。配制方法如下：在50ml 烘干的量筒中加入V k ml(0.5

在"Measurement"工作状态下测定质控样中矿物油浓度。如浓度实测值 与计算的 C k 值之差不超过10％时，则分析仪校准特性的稳定性视为符合 要求。否则必须重新校准分析仪。

如果待测水样中矿物油预期浓度低于1mg/L （污染物含量较少的

水样），应在低浓度范围内测试分析仪校准特性的稳定性。 为此应再准备1~2个矿物油质控样。浓度为0.1~1mg/L 。 配制方法如下：

在50ml 烘干的量筒中加入V k ml(0.5

在"Measurement"模式下测定质控样中矿物油浓度。对分析仪校准特性 的稳定性有如下要求：

在0.05~0.2mg/L 浓度范围内浓度实测值与C k 计算值之差不应超过40％, 在0.2~0.5mg/L 浓度范围内浓度实测值与C k 计算值之差不应超过40％,

)

2(250

100k

k

k V V C ?=?=

)

3(2.050

10k

k

k V V C ?=?=

在更高的浓度范围内浓度测得值与C k计算值之差不应超过10％。

如不能满足以上要求的话，必须重新校准分析仪。如果液晶显示屏上出现

E13错误信息，必须换新的正己烷溶剂。

备注：用于配制质控样的正己烷溶剂必须满足要求 C min< C k。如果正己烷

溶剂不能达到以上要求，必须换新的正己烷溶剂，重新配制标准溶液及质控样、校准分析仪、测试校准特性的稳定性。

9 试样分析

将水样倒入250ml分液漏斗中。用移液管量取10ml正己烷，用此正己烷

漂洗采样器后将其转移到分液漏斗中。搅拌1min，静置至上层登清。倾取上层液体作为试料进行测定。将石英池用试料充至标线。用"Fluorat-02" 分析仪在"Measurement"模式下进行正己烷提取液中矿物油测定。同时记录被测溶液透光率（液晶屏上自动右下角显示）。水相移入100~200毫升量筒，

并准确地记录其容量。

如提取液中矿物油浓度值大于10mg/L,在 10~50mg/L范围之内，则只有在

以下条件下才可以直接测量（不稀释）。首先用1~2个浓度为10~50mg/L 矿物油质控样检查分析仪在10~50mg/L范围内校准特性的稳定性。质控样浓度实测值误差不应超过10％。与此同时，试样提取液透光率值不应小于浓度为50mg/L矿物油溶液透光率值。如在10~50mg/L范围内稳定性的检查不成功或试样提取液透光率值小于浓度为50mg/L矿物油溶液透光率值，则应对试样加以稀释。为此量取2~5ml提取液，置于烘干的容量瓶中，用正己烷稀释至刻度。在"Measurement"工作状态下测定矿物油浓度。如实测浓度值小于10mg/L,下一步是检查透光率值是否在允许范围之内。如果稀释后被测溶液透光率仍低于0.5(50%)，应采用盐酸和氢氧化钠溶液用下述方法处理提取液以排除极性物质。

具体方法如下：把试样放入分液漏斗，加入20ml氢氧化钠溶液（1.4.1），再加10ml正己烷按上述方法萃取。取有机相，加入10ml盐酸（1.4.2），振荡1min。两液相分开后，倾取有机相按上述方法进行测量。如有必要的话（见上述必须稀释的情况），应对试样进行稀释。

在分析组成复杂的试样时，有可能两液相不能很清楚的分开。

遇此情况，等上层有 3~4 ml液相登清后，倾取上层液体于石英池按上述方法进行测量。

如采用盐酸和氢氧化钠溶液处理有机相，应作空白试验。空白试液准备

方法：量取20ml 氢氧化钠溶液（1.4.1），置于分液漏斗，加正己烷溶剂10ml 按上述方法萃取。取机相，加10ml 盐酸溶液（1.4.2），振荡1min ，等两液相分开后，取有机相进行测量。如试样是被稀释过，空白也应按相应倍数加以稀释。

如经氢氧化钠及盐酸溶液处理未能达到合格透光率值或者是制浆造纸厂 废水的试样，则应采用氧化铝吸附柱来提纯有机相（见本标准附录 B ）。

10 数据处理

水样中矿物油浓度按下式计算：

式中：X 试样－水样中矿物油浓度，mg/L ；

X 测－正己烷溶液中矿物油浓度，mg/L ； V 正己烷－萃取用的正己烷体积，ml ； V 试样－水样体积，ml ；

K 1－有机相稀释倍数，即容量瓶体积与有机相所分取的溶液体积 的比值。如有机相不稀释，则K 1=1。

如有必要准备空白试样的话（9），空白试样中矿物油浓度按（4）式 计算。分析结果，即水样中矿物油浓度（X,mg/L ）按下式计算：

有机相经吸附柱提纯后矿物油浓度计算方法见本标准附录B 。

11 测量结果表示

测量结果为按（10）计算的X 值。在有关分析报告中定量分析结果有 以下形式表示：

? 分析结果X （mg/ml ）,相对误差 δ ,% （表1）, 置信度 P=0.95 ? X ± ?, mg/ml , 置信度 P=0.95, ?按下式计算：

)

4(1

试样

正己烷测试样V K V X X ??=

)

5(空白

试样X X X -=

分析结果数值有效数字的最后一位应与误差的最后一位划齐。

分析结果应记录于分析报告中，化验员应加以签字。如有必要的话，企业 领导人应签字盖公章。

12 测量误差控制

为了保证执行本标准时测量误差在本标准规定范围之内，必须定期的 检查测量误差数值。检查测量误差的周期取决于进行的分析检测工作量，并由检查计划有所规定。

为进行检查应按下述方法制备已知浓度标准试样。将矿物油标准物质片 （国标ГСО7117－94）或其他组成相似的标准物质溶解于蒸馏水。详细制备方法参见有关标准物质（国标ГСО 7117－94）计量鉴定书本标准 附录 2。

用于制备标准试样的蒸馏水应事先经过测定矿物油含量。蒸馏水中 矿物油浓度值不得超过标准试样的20％。未达标的蒸馏水应经正己烷萃取两次处理（1L 蒸馏水萃取一次需50ml 正己烷溶剂）。

对制备好的标准试样应按上述操作进行测量 。矿物油浓度测得值应扣除 蒸馏水中矿物油浓度值，从而得到标准试样中矿物油实测值（X,mg/L ）。 测量误差应满足以下条件：

式中：X －标准试样中矿物油实测值，mg/L; C －标准试样中矿物油实际浓度，mg/L ； K －误差指标，mg/L ；

误差指标按下式计算：

式中K rel 为相对误差指标， ％。K rel 的室内与室间数值见表2。

)

6(100

X

?=

?δ)

7(||K

C X ≤-)

8(01.0C

K K rel ??=

如测量误差超过表2给出的指标，应重复测量误差试验。如果还是不能达到要求，应查清并排除其原因。

*注：俄罗斯矿物油标准物质组成成份：2,6,10,14-四甲基正十五烷(75.00%容量百分比)、1,4-二甲基苯(12.18%容量百分比)、萘(10.00%容量百分比)、

菲(2.5%容量百分比)、芴(0.32%容量百分比)。制备标准物质所用试剂必须为化学纯或高效液相色谱专用试剂。主成份含量不能低于98－99％。标准物质包装为封闭安瓿。

俄罗斯矿物油标准物质批准之前，使用了以下石油产品作为标准物质：Shell Turbo T32 汽轮机油。

**注本分析方法对正己烷纯度要求较高。正己烷的纯度一定必须符合本方法要求。在中国市售的如下产品纯度满意：n-Hexane, 96% for

pesticide residue analysis Scharlau。

附录A

玻璃器皿洗涤方法

进行矿物油的常规测量时应保持玻璃器皿清洁无污。为此应遵守下列

规则：

A.1.允许采用以下清洗液：浓硫酸、浓硝酸。切不可用苏打、碱、任何合成

洗涤剂、铬酸洗液。

A.2. 洗涤方法：先用自来水冲洗器皿。往被洗器皿倒入酸（A.1）使其盛满

器皿的1/2容量，充分漂洗玻璃内壁，洗液倾入专用容器。再几次清洗移液管，用洗耳球吸入的酸容量应高于标线。随后用蒸馏水刷洗器皿（至少5次），再用重蒸馏水刷洗（2~3次）并放置于烘干。冷却后用正己烷漂洗2~3次。

在最后一批正己烷洗液中测定矿物油残余量（先按8.2校准分析仪）。如

被测残余矿物油浓度接近于零（不大于0.05mg/L）,玻璃器皿可视为符合要求。否则必须进一步清洗玻璃器皿。也可以在"J0"工作状态下（8.1）按照荧光强度值检查玻璃器皿洗涤质量。

A.3. 每一种溶液应配专用移液管。移液管不宜直接插入容量瓶内。应该先把

容量瓶中的溶液倒入烧杯中，再用移液管吸取。禁止把移液管进入溶液液面下，以免带来污染。

A.4. 最好配备专用于测定矿物油的玻璃器皿一套。

A.5. 分液漏斗磨口切不可涂润滑油。

附录B

含矿物油的有机相在氧化铝吸附柱上提纯

B.1 为进行含矿物油的有机相在氧化铝吸附柱上的提纯需要下列试剂与

设备：

玻璃色谱柱（内径10mm，长度20cm）

马福炉或电炉，能保持温度在150~600?C范围之内，精度在±25?C。

无水硫酸钠，化学纯ГОСТ 4166－76

色谱用的氧化铝ТУ6－09－3916－75

B.2 预备操作

B.2.1 制备薄层板活性度为II的氧化铝

将氧化铝在600?C 下灼烧4个小时。加蒸馏水，加入的量为氧化铝质量的

3％。放置于带有磨口玻塞的玻璃瓶中一昼夜即可使用。在带有磨口玻塞的玻璃瓶中保质期限6个月。

B.2.2 吸附柱的准备

以玻璃色谱柱做吸附柱。吸附柱应即在分析前装填。在吸附柱口嘴上

插入少许事先用正己烷洗过的棉花。给2g氧化铝（B.2.1）加10ml正己烷，摇匀*)。用悬浮在正己烷中的氧化铝装柱。应防止氧化铝上层的干化。在氧化铝上面铺一层0.5g无水硫酸钠。柱装填完毕后用

15ml正己烷洗涤吸附柱。收集洗液最后3~4ml于石英池进行测量。矿物油浓度应接近于零（不大于0.1~0.2mg/L）。否则应继续洗涤吸附柱。

B.3 正己烷有机相的提纯

用移液管吸取有机相试料，倾入柱中。对两液相能清楚的分开的试样

吸取量为5ml。若有机相出现乳化现象，则吸取量为1~2ml。用10~15ml正己烷溶剂进行洗脱。将流出液收集于25ml量筒中。准确记录流出液的容量。

取适量流出液于石英池内，置于"Fluorat-02" 分析仪样品光路中进行

矿物油的测定。同时记录透光率值。如实测浓度值大于10mg/L，或者透光率值小于0.5(50%)，则取2~5ml流出液于25ml烘干的容量瓶中，加正己烷稀释至刻度。在"Measurement"工作状态下测定所得溶液中矿物油浓度。

同时做空白试验。如正己烷有机相经过盐酸和氢氧化钠溶液处理， 过柱空白试样的量应等于被提纯试样的量。如未用盐酸和氢氧化钠溶液处理，过柱空白试样的量应等于萃取矿物油用的正己烷的量。如试样流出液被稀释过，空白试样的流出液应按相同倍数稀释。被测C 空白值记录于工作本中。

B.4 数据处理

水样中矿物油浓度按下式计算：

式中：X 试样－水样中矿物油浓度，mg/L ；

X 实测－正己烷溶液中矿物油浓度，mg/L ； V 正己烷－萃取用的正己烷体积，ml ； V 试样－水样体积，ml ；

K 1－有机相稀释倍数，即容量瓶的体积与有机相所分取的溶液 体积的比值； 如有机相不予以稀释，则K 1=1。

K 2－提纯时流出液的稀释倍数，即流出液体积与有机相 所分取的溶液体积的比值。

类似地计算空白试样中矿物油浓度X 空。

分析结果数据，即水样中矿物油浓度（X,mg/L ）按下式计算：

备注： *)如有必要的话，氧化铝的量可以增至5~6g （被极性物质污染程度较大的 试样）

)

1(2

1B V K K V X X s 试样

正己烷测试样???=

)

2.(B X X X 空白

试样-=

附录C

构成污染物主成份的石油产品正己烷初始溶液配制方法

用分析天平称量容量为100ml 烘干的带有磨口玻塞的容量瓶（称准至

0.2mg ）。用移液管加入100mg 左右(0.10~0.12ml)石油产品，再称量。加正己烷至刻度，摇匀。所得溶液中石油产品质量浓度值（C,mg/L ）按下式计算：

式中：M 0－容量瓶质量，g ；

M 1－容量瓶连同石油产品试样的质量，g ； V 0－容量瓶体积，ml 。

可以使用称量瓶以称量石油产品试样。在这种情况下称量后的称量瓶内容物溶于正己烷中后转入容量为100ml 的容量瓶。称量瓶用正己烷刷洗3次以上。

将洗液合并于容量瓶后，用正己烷稀释至刻度。

初始溶液配制完毕后，应配制浓度为100mg/L 石油产品标准储备液。用移液管吸取含5mg 石油产品的V 1ml 初始溶液置于50ml 容量瓶中。用正己烷稀释至刻度，摇匀。 V 1值按下式计算：

以上溶液贮于带有磨口玻塞的玻璃瓶中。在防止溶剂挥发条件下保质期不小于3个月。

)

1(/)(10000

01C V M M С-?=)

2.(51C C

V =

水中石油类测定荧光分析标准方法

国家环境保护总局标准 PNDF 14.1:2:4.128-98 天然水、饮用水、污水中矿物油（石油类）总浓度的测定荧光分析法 I 俄罗斯 1998

目录 1 引言___________________________________________________________ 2 2 本标准测量误差范围_____________________________________________ 2 3 计量器具、辅助器物、试剂和材料。 _______________________________ 2 3.1 计量器具 ____________________________________________________ 2 3.2 试剂 ________________________________________________________ 3 3.3 辅助器物____________________________________________________ 3 3. 4 试剂配制方法 ________________________________________________ 3 3.4.1 氢氧化钠溶液：5％质量百分比_______________________________ 3 3.4.2 盐酸溶液：3％容量百分比__________________________________ 3 3.4.3 矿物油正己烷标准储备液：100mg/L __________________________ 3 4 测量方法 _______________________________________________________ 4 5 安全要求 _______________________________________________________ 4 6 对分析人员资格要求 _____________________________________________ 4 7 进行测量必备条件 _______________________________________________ 4 8 测量前准备 _____________________________________________________ 5 8.1 样品采集 ____________________________________________________ 5 8.2 正己烷纯度检查方法__________________________________________ 5 8.3 分析仪的校准 ________________________________________________ 6 8.4 分析仪校准特性的稳定性控制__________________________________ 6 9 试样分析 _______________________________________________________ 7 10 数据处理 ______________________________________________________ 8 11 测量结果表示 __________________________________________________ 8 12 测量误差控制 __________________________________________________ 9附录A ________________________________________________________ 10 附录B ________________________________________________________ 12 附录C ________________________________________________________ 14

叶绿素荧光参数及意义

第一节 叶绿素荧光参数及其意义 韩志国，吕中贤（泽泉开放实验室，上海泽泉科技有限公司，上海，200333） 叶绿素荧光技术作为光合作用的经典测量方法，已经成为藻类生理生态研究领域功能最强大、使用最 广泛的技术之一。由于常温常压下叶绿素荧光主要来源于光系统II 的叶绿素a ，而光系统II 处于整个光合 作用过程的最上游，因此包括光反应和暗反应在内的多数光合过程的变化都会反馈给光系统II ，进而引起 叶绿素a 荧光的变化，也就是说几乎所有光合作用过程的变化都可通过叶绿素荧光反映出来。与其它测量 方法相比，叶绿素荧光技术还具有不需破碎细胞、简便、快捷、可靠等特性，因此在国际上得到了广泛的 应用。 1 叶绿素荧光的来源 藻细胞内的叶绿素分子既可以直接捕获光能，也可以间接获取其它捕光色素（如类胡萝卜素）传递来 的能量。叶绿素分子得到能量后，会从基态（低能态）跃迁到激发态（高能态）。根据吸收的能量多少， 叶绿素分子可以跃迁到不同能级的激发态。若叶绿素分子吸收蓝光，则跃迁到较高激发态；若叶绿素分析 吸收红光，则跃迁到最低激发态。处于较高激发态的叶绿素分子很不稳定，会在几百飞秒（fs ，1 fs=10－15 s ）内通过振动弛豫向周围环境辐射热量，回到最低激发态（图1）。而最低激发态的叶绿素分子可以稳定 存在几纳秒（ns ，1 ns=10－9 s ）。 波长吸收荧光红 B 蓝 荧光 热耗散 最低激发态较高激发态基态吸收蓝光吸收红光能量A 图1 叶绿素吸收光能后能级变化（A ）和对应的吸收光谱（B ）（引自韩博平 et al., 2003） 处于最低激发态的叶绿素分子可以通过几种途径（图2）释放能量回到基态(韩博平 et al., 2003; Schreiber, 2004)：1）将能量在一系列叶绿素分子之间传递，最后传递给反应中心叶绿素a ，用于进行光化 学反应；2）以热的形式将能量耗散掉，即非辐射能量耗散（热耗散）；3）放出荧光。这三个途径相互竞 争、此消彼长，往往是具有最大速率的途径处于支配地位。一般而言，叶绿素荧光发生在纳秒级，而光化 学反应发射在皮秒级（ps ，1 ps=10－12 s ），因此在正常生理状态下（室温下），捕光色素吸收的能量主要用 于进行光化学反应，荧光只占约3%～5%(Krause and Weis, 1991; 林世青 et al., 1992)。 在活体细胞内，由于激发能从叶绿素b 到叶绿素a 的传递几乎达到100％的效率，因此基本检测不到 叶绿素b 荧光。在常温常压下，光系统I 的叶绿素a 发出的荧光很弱，基本可以忽略不计，对光系统I 叶 绿素a 荧光的研究要在77 K 的低温下进行。因此，当我们谈到活体叶绿素荧光时，其实指的是来自光系 统II 的叶绿素a 发出的荧光。

水体中八类污染物

●病原体污染物 生活污水、畜禽饲养场污水以及制革、洗毛、屠宰业和医院等排出的废水，常含有各种病原体，如病毒、病菌、寄生虫。水体受到病原体的污染会传播疾病，如血吸虫病、霍乱、伤寒、痢疾、病毒性肝炎等。 受病原体污染后的水体，微生物激增，其中许多是致病菌、病虫卵和病毒，它们往往与其他细菌和大肠杆菌共存，所以通常规定用细菌总数和大肠杆菌指数及菌值数为病原体污染的直接指标。病原体污染的特点是：(1)数量大；(2)分布广；(3)存活时间较长；(4)繁殖速度快；(5)易产生抗药性，很难绝灭；(6)传统的二级生化污水处理及加氯消毒后，某些病原微生物、病毒仍能大量存活。 ●耗氧污染物 在生活污水、食品加工和造纸等工业废水中，含有碳水化合物、蛋白质、油脂、木质素等有机物质。这些物质以悬浮或溶解状态存在于污水中，可通过微生物的生物化学作用而分解。在其分解过程中需要消耗氧气，因而被称为耗氧污染物。这种污染物可造成水中溶解氧减少，影响鱼类和其他水生生物的生长。水中溶解氧耗尽后，有机物进行厌氧分解，产生硫化氢、氨和硫醇等难闻气味，使水质进一步恶化。水体中有机物成分非常复杂，耗氧有机物浓度常用单位体积水中耗氧物质生化分解过程中所消耗的氧量表示，即以生化需氧量(BOD)表示。一般用20℃时，五天生化需氧量(BOD5)表示。 ●植物营养物 植物营养物主要指氮、磷等能刺激藻类及水草生长、干扰水质净化，使BOD5升高的物质。水体中营养物质过量所造成的"富营养化"对于湖泊及流动缓慢的水体所造成的危害已成为水源保护的严重问题。 富营养化(eutrophication)是指在人类活动的影响下，生物所需的氮、磷等营养物质大量进入湖泊、河口、海湾等缓流水体，引起藻类及其他浮游生物迅速繁殖，水体溶解氧量下降，水质恶化，鱼类及其他生物大量死亡的现象。在自然条件下，湖泊也会从贫营养状态过渡到富营养状态，沉积物不断增多，先变为沼泽，后变为陆地。这种自然过程非常缓慢，常需几千年甚至上万年。而人为排放含营养物质的工业废水和生活污水所引起的水体富营养化现象，可以在短期内出现。 植物营养物质的来源广、数量大，有生活污水(有机质、洗涤剂)、农业(化肥、农家肥)、工业废水、垃圾等。生活污水中的磷主要来源于洗涤废水，而施入农田的化肥有50%～80%流入江河、湖海和地下水体中。天然水体中磷和氮(特别是磷)的含量在一定程度上是浮游生物生长的控制因素。当大量氮、磷植物营养物质排入水体后，促使某些生物(如藻类)急剧繁殖生长，生长周期变短。藻类及其他浮游生物死亡后被需氧生物分解，不断消耗水中的溶解氧，或被厌氧微生物所分解，不断产生硫化氢等气体，使水质恶化，造成鱼类和其他水生生物的大量死亡。

21种污水处理中常见污染物的来源及处理方法

21种污水处理中常见污染物的来源及处理方法 科邦达环保 废水中各种污染物众多，来源也比较广泛，都是如何处理的呢？一起来看看这21种常见污染物的来源以及处理方法。 目录 1、耗氧有机物(易生化） (2) 2、难生物降解有机物 (3) 3、有机氮和氨氮 (3) 4、磷和有机磷 (4) 5、酸碱废水 (4) 6、油类污染物 (5) 7、致病微生物 (7) 8、硝酸盐和亚硝酸盐 (7) 9、氟化物 (9) 10、硫化物 (9) 11、氰化物 (10) 12、酚 (10) 13、银 (11) 14、镍 (11) 15、铅 (12) 16、铬 (12) 17、汞 (13) 18、有机氯 (13) 19、苯并芘 (14) 20、镉 (14) 21、砷 (15)

1、耗氧有机物(易生化） 污水中耗氧有机物(易生化)主要有腐植酸、蛋白质、酯类、糖类、氨基酸等化合物，这些物质以悬浮或溶解状态存在于废水中。在微生物的作用下，这些有机物可以分解为简单的CO2等无机物，但因为在天然水体中分解时需要消耗水中的溶解氧，因而称为耗氧有机物。 含有这些物质的污水一旦进入水体，会引起溶解氧含量降低进而导致水体变黑变臭。生活污水和食品、造纸、石油化工、化纤、制药、印染等企业排放的工业废水都含有大量的耗氧有机物。 据统计，我国造纸业排放的耗氧有机物约占工业废水排放总量的1/4，城市污水的有机物浓度不高，但因水量较大，城市污水排放的耗氧有机物总量也很大。污水二级生物处理要重点解决的问题就是将这些物质的绝大部分从污水中去 除掉。 耗氧有机物成分复杂分别测定其中各种胶有机物的浓 度相当困难，实际工作中常用cODCr、BOD5、TOC、TOD 等指标来表示。一般来说上述指标值越高，消耗水中的溶解氧越多，水质越差。自然水体中BOD5低于3mg/L时，水质良好达到7.5 mg/L时，水质已较差超过10mg/L，表明水质已经很差其中的溶解氧已接近于零。

荧光定量实验报告(作业)

RT-qPCR比较不同样本中miR-21的相对表达差异 一、实验目的 1、掌握实时荧光定量PCR的实验原理。 2、掌握实时荧光定量PCR相对定量的分析方法。 二、实验原理 实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。荧光定量PCR 最常用的方法是 DNA 结合染料 SYBR Green Ⅰ的非特异性方法和 Taqman 水解探针的特异性方法。本实验中采用非特异性 SYBR Green I 染料法，SYBR Green I 是一种结合于所有ds DNA 双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料，在游离状态下会发出微弱的荧光，但一旦与双链DNA 结合后，荧光大大增强。因此，SYBR Green I 的荧光信号强度与双链DNA 的数量相关，可以根据荧光信号检测出PCR 体系存在的双链DNA 数量。 三、实验仪器、材料和试剂 实验仪器：PCR仪、荧光定量PCR仪 实验材料：MCF7细胞 实验试剂：逆转录试剂盒、SYBR GREEN试剂盒 四、实验步骤 4.1 MCF7细胞RNA提取（RNAiso Plus） 1)将生长至80%的MCF细胞消化为单细胞悬液，准备提取RNA； 2)9000g,2min离心，弃掉培养基，加1 ml RNAiso Plus用移液枪反复吹吸直至 裂解液中无明显沉淀，室温（15-30℃）静置5分钟； 3)加入氯仿（RNAiso Plus的1/5体积量），盖紧离心管盖，混合至溶液乳化呈 乳白色，室温静置5min； 4)12,000 g 4℃离心15分钟。从离心机中小心取出离心管，此时匀浆液分为三 层，即：无色的上清液（含RNA）、中间的白色蛋白层（大部分为DNA）及带有颜色的下层有机相。 5)吸取上清液转移至另一新的离心管中（切勿吸出白色中间层）。 6)向上清中加入0.5-1倍RNAiso Plus体积的异丙醇，上下颠倒离心管充分混匀

环境水中石油类污染物的含量反应说明

环境水中石油类污染物的含量反应说明 摘要：环境水中石油类污染物的含量是反映水质的指标之一，本文采用三波长定量测试水中油含量，样品测试方便，数据准确。 环境中水中的石油类来自工业废水和生活污水的污染。油类物质在水面形成油膜，影响了空气和水的气体交换;分散于水中以及吸附于颗粒上或以乳化状态存在于水中的油，被微生物分解时，将消耗水中溶氧，容易使水质恶化。 矿物油是由烷烃、环烷烃及芳香烃组成的混合物红外碳硫分析仪。本文参照“GB/T16488-1996《水质石油类和动植物油的测定红外光度法》”选择三波长红外光谱法测定地表水，测定结果准确，避免使用“标准油”。 原理： 水中油类物质是由烷烃、环烷烃及芳香烃组成的混合物，可用四氯化碳萃取，测定总萃取物。然后将萃取液用硅酸镁吸附其中动植物油等极性物质后，测定石油类含量。石油类和动植物油的红外谱图在2930cm-1、2960cm-1或3030cm-1处有吸收，可根据上述三个波数位置的吸光度值计算其含量。 实验条件： 仪器及附件： FTIR-650傅里叶变换红外光谱仪 1cm 石英比色皿 试剂： 四氯化碳(CCl4):环保用，天津基准试剂有限公司; 正十六烷[CH3(CH2)14CH3] 分析纯：成都市科龙化工试剂厂; 姥鲛烷(2，6，10，14-四甲基十五烷)分析纯：北京百灵威科技有限公司; 甲苯(C6H5CH3)分析纯：天津市江天化工技术有限公司; 无水硫酸钠(Na2SO4)分析纯：北京化工厂; 氯化钠(NaCl)分析纯：天津化学试剂有限公司; 盐酸(HCl)分析纯：天津化学试剂一厂。 样品前处理： 将水样全部转移至分液漏斗中，用20ml四氯化碳洗涤采样瓶，洗涤液并入分液漏斗中，调PH≤2，加入20g氯化钠，充分震荡2min充分静置，将萃取液流经铺有10mm无水硫酸钠的玻璃砂芯漏斗，用容量瓶收集滤液。取20ml四氯化碳再次萃取、用适量四氯化碳洗涤玻璃砂芯漏斗，将萃取液、洗涤液一并放入容量瓶中。用四氯化碳标至刻线、摇匀。 测定结果： 1、校正系数的测定： 以四氯化碳为溶剂，红外碳硫分析仪分别配置浓度为100mg/L正十六烷、100mg/L姥鲛烷、400mg/L甲苯溶液，用四氯化碳作参比溶液，采用10mm×10mm比色皿，分别测量三种溶液在2930cm-1、2960 cm-1和3030cm-1处的吸光度A2930、A2960、A3030。这三种溶液在上述波数处的吸光度满足公式： C=X·A2930 Y·A2960 Z (A3030- A2930/F)， 式中： C-萃取溶剂中化合物的含量，mg/L; A2930、A2960、A3030-各对应波数下测得的吸光度值; X、Y、Z-与各C-H键吸光度对应的校正系数; F-脂肪烃对芳香烃的校正因子，即正十六烷在2930 cm-1和3030 cm-1处的吸光度之比; 对于正十六烷(H)和姥鲛烷(P)，由于其芳香烃含量为零，即A3030- A2930/F =0，则

相对荧光定量PCR的常用方法和注意事项

相对定量方法实际操作 （常用方法） 1. Comparative Delta-delta Ct法定量流程（RG6000软件设置） 1).先对样品中的目的基因与看家基因分别做标准曲线，通过标准曲线确定两个 基因的扩增效率是否一致或接近；将扩增效率优化为一致。 2).同一样品分别进行看家基因和目的基因的扩增，分列在两页中 公式： P1 P2 相同的样品在两页里命名成相 同的名称，并定义为unknown 分别分析P1和P2页 选delta-delta Ct选项 依次填入，并定义对照样品 完成分析 F=2— 待检样品看 家基因平均 Ct值 对照组目的 基因平均Ct 值 对照组看家 基因平均Ct 值 — 待检样品目 的基因平均 Ct值 ——

Comparative Delta-delta Ct法的特点、注意事项及实际应用 1). Comparative Delta-delta Ct法是很常用的一种相对定量方法，其最大特点 是，当优化的体系已经建立后，在每次实验中无需再对看家基因和目的基因做标准曲线，而只需对待测样品分别进行PCR扩增即可。 2). 其缺点是，每次实验都默认目的基因和看家基因的扩增效率一致，而并非真 实扩增情况的反映，这里势必存在一定的误差。 3). Comparative Delta-delta Ct法展开定量实验前，在预实验中，必需对目的基 因和看家基因做两组标准曲线。Rotor-Gene 的软件会自动给出两组标准曲线的R值、扩增效率等信息，如果两组标准曲线的斜率，即M值的差小于 0.1，那么后续实验中就可以用Comparative Delta-delta Ct法进行相对定量 分析。反之，如果M差值大于0.1，就无法用该方法进行相对定量分析。此时的解决方法有两种，一是优化实验，使两组标准曲线的斜率差值小于0.1，二是换用其它的相对定量方法。 应用实例： 如上图，将标准品进行梯度稀释后，分别对目的基因（Gene of Interest）和看家基因（Housekeeper Gene）做标准曲线。软件自动绘制标准曲线，并给出相应的参数。从上图可知，两组标准曲线的M值分别为-3.525和-3.467，两者的

imagej荧光定量方法

1、安装后首先打开ImageJ： 2、打开要分析图片：File>open（热键为Ctrl+O） 3、转换成8bit的灰度图：Image>Type>8-bit 4、黑白反转（因为对于光密度（OD）来说越白数值越小，纯白为0；越黑数值越大，纯黑理论上是无限 大。因此我们需要将上一步所转换的灰度图进行黑白反转，不然的话测出来的数值就会荧光越亮反而数值越小）：Edit>Invert（热键为Ctrl+Shift+I） 5、校正光密度（软件默认为测量灰度，因此我们要改为更加适用的光密度，其中原理不是一两句话能说 得清的，这里忽略）：Analyze>Calibrate 在弹出来的界面的Function选择Uncalibrated OD，并下界面左下方勾选Global calibration，然后点击右下角的OK 点击OK后会跳出校正后的光密度曲线： 如不勾选Global calibration，光密度的校正只对这张图片有效，一般分析都要分析多张图片，所以需要勾选，勾选后在打开另一图片时会提示是否将此校正应用于所有图片，不勾选Disable Global Calibration，勾选Disable these Messages

6、选择测量单位（一般选择象素，如有明确的比例，也可以选择相应单位）：Analyze>Set scale 点击后在弹出的界面里点击中间的click to Remove Scale，并勾选下面的Global（同样的，如不选Global这个测量单位的选择只对这张图片有效），最后点击OK 7、选择测量项目：Analyze>Set Measurements 在弹出界面中选择我们需要测量的项目Area、Integrated density，并勾选下面的Limit to threshold （这个选项是指只测量我们选中的范围，如不勾选侧会测量整张图片数据），选择后点击OK 8、选择测量域值：Image>Adjust>Threshold（热键为Ctrl+Shift+T） 滑动弹出界面中间的滑块选择适合的域值，以使的你图片中的细胞或待测目标刚好全部被选中，选好之后点击右下角的Set 在弹出来的界面点击OK

石油污染土壤修复技术(总3页)

石油污染土壤修复技术 (总3页) -CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1 -CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除

【前言】随着经济的发展，人类对能源的需求也在不断扩大，石油是最重要的能源之一，被成为“工业的血液”。近些年来各国都加快了对油气资源的开发利用，从沙漠到海洋、从无人区到人口稠密区，越来越多的油气井出现在世界各地。随之土壤污染问题日益突出，石油对土壤的污染危害大，潜伏期厂，涉及面广，有研究者将其比喻为“化学定时炸弹”，已经成为不容忽视的环境问题。 石油主要是由烃类化合物组成的一种复杂化合物，其组成复杂，含有致畸、致癌、致突变的物质(如卤代烃、苯系物、苯胺类、菲、苯并[a]芘等）。土壤作为人类、动植物和微生物赖以生存的重要环境基础，是自然界物质和能量参与转化、迁移和积累等循环过程的重要场所，土壤安全事关人类食品安全。石油一旦进人土壤，将对人类健康和生态环境造成严重危害。根据已公布的环境保护部和国土资源部发布的《全国土壤污染状况调查公告》显示，我国土壤总超标率高达16.1%。其中，有机类污染物，尤其是石油污染物已成为导致土壤安全问题的重要因素之一。据报道在我国，勘探和开发的油气田有4 0 0多个，覆盖面积达 3. 2 X 105 km2，其中约4. 8 X 106 hm2 的土壤受到不同程度的污染。为我国部分油田周边石油污染状况，其周边土壤中的总石油烃（ TPH ) 质量分数已经远远超过临界值500 mg/kg，对人居安全和生态环境造成了严重的威胁。由此可见，石油污染土壤形势严峻，修复工作迫在眉睫。 土壤石油污染：是指原油和石油产品在开采、运输、储存以及使用过程中，进入到土壤环境，其数量和速度超多土壤自净作用的速度，打破了它在土壤环境中的自然动态平衡，使其累积过程占据优势，导致土壤环境正常功能的失调和土壤质量的下降，并通过食物链，最终影响到人类健康的现象。 石油进入土壤的途径： ?石油的泄露和溢油：陆地采油大量的生产设施如油井、集输站、转输站和联合站等，原油会 被直接或间接的倾泻与这些设施附件的地面；产品的开采和运输业会使石油类物质进入土壤环境中；另外发生井喷或泄露，也会污染周围土壤环境。 ?含油固、液体废气无的随意处置：油气的开采和运输过程会产生大量含油、天然气的开采过 程中会产生大量含油废水、有害的废泥浆以及其他的一些污染物，如果处理不好就会污染周边土壤、河流甚至地下水。 ?含油污水的灌溉和农用药剂的使用：一些工业企业产生的含油废水如果不加以回收处理，直 接排入河流、湖泊或海湾,会污染水体,该水体用于农业灌溉，则会导致土壤污染，另外某些农用药剂也会污染土壤。 ?汽车尾气的排放：汽车尾气排放导致交通干线两侧土壤的有机物污染，另外大气沉降也会导 致土壤污染。 石油污染土壤修复技术 石油污染土壤的物理修复方法：

荧光定量PCR的原理、方法及结果分析

荧光定量PCR的原理、方法及结果分析 而实时荧光定量PCR技术，顾名思义，就是在PCR的基础上加入荧光基团，通过荧光信号的变化的实时监测PCR的反应过程，最后通过对未知模板进行定量分析的方法。 目前，实时荧光定量PCR 已成为不同样品间进行基因表达水平定量差异比较的权威性方法。在过去十几年中，该方法迅速流行，涉及科学的多个领域，包括农业、环境、工业和医学研究。 实时荧光定量PCR的应用 目前，qPCR技术已经广泛应用于生物医药食品等行业，应用于疾病的早期诊断、遗传病的早期诊断、药物研究、肿瘤的诊断与研究、食品病原微生物的检测、转基因食品检测、动物疫病检测等，除此之外，还包括： ● 基因扩增 ● 扩增特异性分析 ● 基因定量分析 ● 基因检测 ● 基因分型 ● SNP分析

● RFLP多态性分析 ● 单/多基因表达研究 ● 高通量基因表达谱研究 …… 实时荧光定量PCR的常用方法 染料法 荧光染料可与双链DNA结合，每个循环的延伸阶段，染料掺入双链DNA 中，其荧光信号强度与PCR产物的数量呈正相关。同时，其缺点也在于其非特异性。当PCR反应中有引物二聚体或者非特异性扩增时，该染料也可以和这些非特异性扩增产物结合，发出荧光，从而干扰对特异性产物的准确定量。 常用的染料为SYBR Green I，各公司针对荧光信号强度、抑制作用等进行改进，也推出了很多新的染料供大家选择。 Promega采用新型荧光染料BRYT Green? Dye，对qPCR反应没有抑制作用，与双链DNA结合后荧光信号更强. 探针法 在PCR扩增时加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸：5’端标记一个报告荧光基团，3’端标记一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时，Taq酶的

水体中油类污染物综述

论文 目录 1 水体油类污染物来源、分类和危害............................ 错误！未定义书签。 1.1 水体油类污染物来源.................................. 错误！未定义书签。 1.2 水体油类污染物的分类................................ 错误！未定义书签。 1.3 水体油类污染物的危害................................ 错误！未定义书签。 1.3.1 油类污染物对水体性质的影响................... 错误！未定义书签。 1.3.2 油类污染物对渔业的影响....................... 错误！未定义书签。 1.3.3 油类污染物对水生动物的影响................... 错误！未定义书签。 1.3.4 油类污染物对人体的影响....................... 错误！未定义书签。 2 水体中含油污水的处理技术................................. 错误！未定义书签。 2.1 物理法............................................. 错误！未定义书签。 2.2 化学法............................................. 错误！未定义书签。 2.3 物理化学法......................................... 错误！未定义书签。 2.4 生物化学法......................................... 错误！未定义书签。 3 对油类废水治理的展望 ..................................... 错误！未定义书签。参考文献 ................................................... 错误！未定义书签。 水体中油类污染物的综述 摘要：综述了水环境中石油类污染物的来源，分类以及对水体性质、水生动植物以及人体的危害情况。概述了含石油类污染物废水处理中几种常用技术,并对各类方法的应用进行了分析和评价, 并分析了水中油类污染物物处理技术方法的研究趋势和应用前景。

GUS荧光定量分析方法

GUS荧光定量分析方法 一、GUS 粗蛋白的提取 1、取拟南芥组织100mg，用液氮研磨成粉。 2、加入1ml的GUS提取液（pmsf<蛋白抑制剂>），剧烈震荡。 3、12000rpm离心10分钟，收集上清液，得到GUS粗酶提取液。 二、考马斯亮蓝法测定总蛋白含量 按上表加入不同量的BSA标准蛋白溶液，测定OD595的吸光值，并得出曲线方程。 2、样品总蛋白的测定 自定合适的比例的稀释GUS蛋白溶液，要求稀释后的待测样品颜色介于1中的0到6之间。例如：稀释40倍，5ul样品+195ulGus提取液，取40ul +200ulG-250混匀，室温放置2分钟，测定OD595光吸收值，根据标准曲线计算蛋白含量。 三、GUS活性的测定 用终止液将MU储备液B按上表稀释成0-250nM,用荧光计在激发波长为350nm,发射波长455nm下测定他们的荧光强度做出一条标准曲线，并得出曲线方程。 2荧光定量 1）取两支Ep离心管，各加入1.8mL反应终止液，并编号. 2）在Ep管中加入200提取液，加入50uLGUS粗酶提取液，再加入250ul预热的反应液，混匀。立即取出200ul加入到1号管中，此反应为0时的样品，荧光测定时以此为空白，并开始计时。 3）将反应管放入37摄氏度温箱中进行酶反应，60分钟后，取200ul反应液，加入到2号管中混匀，为反应60分钟时的样品，测定荧光值。 主要溶液的配制：

1、GUS提取缓冲液： 1)0.1M磷酸钠缓冲液（pH7.0）50mL: 0.1M磷酸钠缓冲液（pH7.0）：557mL0.1mol/LNa2HPO4+42.3mL1mol/L NaH2PO4定容到1000mL (35.814gNaHPO4.12H2O(358.14)定容到1000mL;15.6g NaH2PO4.2H2O（156.01）定容到100Ml) 2) 0.5M Na2EDTA (pH8.0) 2.00mL: 9.31gEDTA加水剧烈搅拌，加入约1g NaOH, 定容到50 mL. 3) 30% 十二烷基肌氨酸钠0.33 mL：1.5g加水定容到50 4）10% Triton X-100 1 mL: 1 mL Triton X-100 加9 mL水混匀 5）β-巯基乙醇0.07-0.10 mL（马琳论文里面有） 6）甲醇 20ml（网上有的文献里有） 蒸馏水定容至100mL。 2、考马斯亮蓝溶液G-250的配制： 100mg考马斯亮蓝溶液G-250 溶于50 mL95%中，加100 mL85%磷酸，定容到1 mL，过滤后保存于4°C，最终试剂0.01%考马斯亮蓝溶液G-250,4.7%（w/v）乙醇,8.5%（w/v）磷酸. 3、标准蛋白溶液： 50mg牛血清白蛋白（BSA），溶于50 mL0.15M的氯化钠中。配制成1 mg/mL的标准蛋白溶液。 4、0.15M的氯化钠溶液 0.876g氯化钠定容到100 mL 5、4-MU储备液A（4-MU 1 mM）：19.8mg4-MU溶于避光保存 4-MU储备液B（4-MU 1 μM）：10μL4-MU储备液A定容到10 mL 6、终止缓冲液（0.2M Na2CO3） 10.6g Na2CO3 溶于500 mL水。 7、GUS反应缓冲液： 25mg4-MUG溶于25 mL提取缓冲液中 1) 1mol/L Na2HPO4溶液：35.814g Na2HPO4溶于100ml水。 2) 1mol/L NaH2PO4 溶液：15.601g NaH2PO4 溶于100ml水。 3) 0.1M 磷酸缓冲液(PH7.0)：1mol/L Na2HPO4取5.77ml，1mol/L NaH2PO4取4.23ml，定容至100ml。 4) 10％SDS溶液：将90ml水稍微加热，加10g SDS，搅拌溶解，加入几滴浓盐酸调节PH至7.2，然后加水定容至100ml。 5) 0.5 M EDTA (PH8.0)：在80ml水中加入18.61g Na2EDTA?2H2O，用NaOH调PH至8.0（约需2g左右的固体NaOH），溶解后定容至100ml。 6) GUS酶提取液：0.1M 磷酸缓冲液（PH7.0）取50ml；10% SDS取1ml；0.5M EDTA(PH8.0)取2ml；Triton X-100取100ul；β-巯基乙醇100ul；用水定容至100ml。 7) MUG底物：称8.8mg MUG，溶于10ml GUS酶提取液中，配制成2mmol/L的工作浓度。 8) 反应终止液（0.2 mol/L Na2CO3 ）：称2.12Na2CO3 ，用水定容到100ml。 9) 考马斯亮蓝G250溶液：考马斯亮蓝G250 10mg, 95%乙醇5m1, H3PO4 10ml，定容至l00ml，过滤后4℃保存。 10) １mg/ml BSA：20mg BSA，用GUS提取缓冲液定容至20ml。

石油化工水污染物排放标准

石油化工水污染物排放标准 UDC 628.191:665.5.661 GB 4281-84 （1984年5月18日中华人民共和国城乡建设环境保护部发布1985年3月1日实施）标准为贯彻《中华人民共和国环境保护法（试行）》，防治石油化工废水对环境的污染，特制订本标准。 本标准适用于全国石油化工企业。 1标准的分级 石油化工水污染物排放标准分为二级： 第一级：是指新建、改建、扩建的石油化工企业或大型石油化工企业，自本标准实施之日起立即执行的标准。 第二级：是指所有现有具备污水生化处理设施的中、小型石油化工企业，自本标准实施之日起立即执行的标准。 注：大、中、小企业按“化学工业部基本建设基层统计报表制度”中关于“化学工业部基本建设大、中、小型建设项目的划分标准的规定”划分。 2标准值 石油化工工厂和工厂污水处理厂排放口水污染物最高容许排放浓度应符合下表规定。 表石油化工水污染物最高容许排放浓度（mg/L）

3其他规定 3.1 自本标准实施之日起，从外国引进的石油化工建设项目，废水中污染物排放应达到国外同样项目的排放标准，并不得低于国内新建厂水平。 3.2 没建污水生化处理设施的中、小型石油化工企业，达不到第二级标准者，近期标准暂按BOD<300mg/l,COD<500mg/l执行。其他项目按二级标准执行。 3.3 污水排入区域型综合污水处理厂的石油化工企业，排放的污水应符合污水处理厂进水要求。 3.4 当地方执行本标准不适用于当地环境特点时，应按国家有关规定制订地方污染物排放标准。 4标准的监测 4.1 企业的环保部门，应建立分析检测机构，负责对本企业污染物的排放进行分析检测，除五日生化需氧量，至少每月检测一次外，其余规定的污染物至少每天取样检测一次。 4.2 制订本标准所依据的分析方法是《石油化工厂废水水质统一分析方法》。 附加说明： 本标准由原国务院环境保护小组提出。 本标准由化学工业部北京化工研究院负责起草。 本标准委托化学工业部负责解释。

荧光定量PCR之绝对定量分析标准曲线的绘制

荧光定量P C R 之绝对定量分析——标准曲线的绘制 1. 绝对定量定义 绝对定量是用已知浓度的标准品绘制标准曲线来推算未知样品的量。 将标准品稀释至不同浓度，作为模板进行PCR反应。以标准品拷贝数的对数值为横坐标，以测得的CT值为纵坐标，绘制标准曲线，对未知样品进行定量时，根据未知样品的CT 值，即可在标准曲线中得到样品的拷贝数。 * Log（起始浓度）与循环数呈线性关系，通过已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，即得到该扩增反应存在的线性关系 *由样品CT值，就可以计算出样品中所含的模板量 2. 绝对定量标准品 标准品的一些标准 * 必须用与扩增目的基因相同的引物进行扩增，并且扩增效率相同 *标准品必须是经过准确定量的（我们通常用的是ASP-3700紫外光/可见光微量分光光度计）* 标准品必须是标准化的（例如，同一化的细胞数） *在每组实验时，必须用相同的阈值设定来确定CT值 标准品可以是含有目的基因的线性化的质粒DNA也可以是比扩增片段长的纯化 后的PCR产物，当然也可以是基因组DNA甚至cDNA但前提是所有的作为标准品的核酸

都必须保证稳定。 3. 标准品的制备 一般一条标准曲线取四到五个点，浓度范围要能覆盖样品的浓度区间，以保证定量的 准确性。一般一个点重复三至五次，对于常期稳定使用的标准品可以适当减少重复的次数。倍比梯度稀释方法： 1v 原液(标准品i ) +9v 稀释缓冲液，得标准品ii 1v 标准品ii+9v 稀释缓冲液，得标准品iii 1v 标准品iii+9v 稀释缓冲液，得标准品iv 1v 标准品iv+9v 稀释缓冲液，得标准品v 依次倍比稀释 拷贝数的计算：详见核酸拷贝数的计算 4. 实例 标准品的制作：将标准品依次进行10倍稀释，ASP-3700测得其拷贝数1.55 X 108copy /ul 标准曲线的绘制( 1cycle=1min ) 设置对照：浓度为 1.55X107、1.55X106、1.55X105、1.55X104、1.55X103、1.55X102、1.55 X 101的标准样品各一个，设空白对照

石油类污染物在土壤和地下水中的污染模拟

2、土壤污染模拟 土壤是一个多相的疏松的多孔介质，固相中有大量的有机和无机胶体。石油是一种天然的粘油状液体，主要成分为烃类化合物( 占8 0% 一9 0% )。烃类化合物是非极性有机物，其偶极矩< 1，介电常数< 3，在土壤中有一定的吸附作用。地表的石油可以在重力作用下入渗，也可能随地面水或雨水沿着土壤毛细管孔隙向下渗透污染土壤，甚至进一步向下淋滤污染地下水。石油类污染物质在土壤入渗过程中，由于土壤中存在着大量的有机和无机的胶体，使得进入土壤中的污染物不断地被吸附。吸附能力与土壤的质地、石油的性质有密切联系。通常，石油烃类在土壤介质吸附程度以分配系数Kd来表示。 K d=C s C e 式中: Cs为平衡时固相中的浓度( mg/kg)；Ce为平衡时液相中的浓度(mg/l) 根据土壤中溶质运移模型和石油类污染物质在土壤中的迁移转化过程，考虑吸附作用而忽略石油的挥发，建立石油类污染物质在土壤中迁移转化二维综合模型。它包括水运动方程和石油运动方程。 土壤中水运动方程: C?e? et = e ex K x e? ex + e ez K x e? ez + eK z ez 7 土壤中石油类运动方程: θR d ec = e D xx ec + e D zz ec ? eq x c ? eq z c + eθ ?λθR d c8 式中：C( h)为比水容量（cm-1）；K x、K z分别为横向纵向水力传导系数（cm/d）；Dxx、Dzz分别为横向纵向弥散系数（cm2/d）；Rd为滞留因子；c为液相中石油的浓度(mg/l) ；qx、qz分别为x和z方向的达西流速（cm/d）；θ为含水量(% )；λ为降解系数（d-1）；h为土壤中压力水头(cm )。 初始条件和边界条件 根据监测的结果和落地油的分布特征，预测石油类在土壤中迁移过程及石油是否会对地下水造成污染，选择预测范围为：长80 m，深6m剖面区域。并对部分问题可进行简化处理, 作一些基本假设。假设土壤水最初不含石油，即未受到污染，但土壤中存在一定的本底值，经取样测定取平均值为40.3mg/kg。在土壤的预测范围内，土壤被认为是均质的。

水面石油污染物的光催化降解

第20卷第3期催　化　学　报1999年5月Vol.20No.3Chinese Journal of Catalysis May1999 水面石油污染物的光催化降解3 赵文宽覃榆森方佑龄董庆华 (武汉大学化学学院,武汉430072) 提　要　制备了漂浮负载型TiO2光催化剂,并用XRD,BET,TEM和SEM等方法进行了表征. 研究了这类催化剂对水面石油污染物的光催化降解,实验结果表明,掺杂Fe3+的TiO2光催化剂具 有高的光催化活性,经高压汞灯照射8h,水面原油降解75%. 关键词　光催化降解,原油污染物,煤灰漂珠,二氧化钛 分类号　O643/X7 据报道,全世界每年因河流和海上事故进入河流和海洋的石油污染物总量在1000万吨以上,对水体及海洋环境造成了严重的污染.因此治理水体的石油污染已成为世界各国共同关心的问题. 现在人们已注意到半导体TiO2的光催化反应能有效地降解水中的有机污染物,它已成为一种有重要应用前景的污水处理方法[1,2].在已报道的TiO2光催化降解水中有害污染物的研究中,大多数采用的是TiO2微粒分散悬浮体系,但是,由于石油类有机污染物不溶于水而漂浮在水面,TiO2的密度(锐钛矿型为3184g/cm3)远大于水,会沉于水底,因此若采用这种悬浮体系将导致TiO2不能发挥光催化剂的作用.为了使TiO2能漂浮在水面与石油类污染物充分接触进行光催化反应,需要将它负载在一种密度远小于水、能使TiO2良好附着且不被TiO2光催化氧化的载体上,制备成能漂浮在水面的负载型TiO2光催化剂.Berry等[3]报道了用环氧树脂将TiO2粉末粘附在木屑上,Heller等[4]用硅偶联剂将TiO2粉末偶联在空心玻璃球上.本文以火力发电厂粉煤灰的漂珠为载体,用钛醇盐水解(及掺杂)制备TiO2纳米粉体,经烧结将TiO2纳米粉体负载于载体上,从而得到了一种新的漂浮负载型TiO2光催化剂.实验表明,该催化剂能漂浮于水面,与水体表面的石油污染物充分接触,达到有效地光催化降解水面石油污染物质的目的. 1　实验部分 1.1　试剂和仪器　漂珠(北京市石景山电力公司提供,经本实验室分离处理):粒径40～250μm,体积密度0136g/cm3,真实密度0178g/cm3.空心玻璃球SL G(美国PQ公司):粒径10～300μm,体积密度014g/cm3,真实密度0.75g/cm3.原油(马来西亚TAPIS产,武汉石油化工厂提供)经100℃蒸馏,除去低沸点组分.P225TiO2(德国Degussa公司):平均粒径21 nm,锐钛矿型80/金红石型20,比表面积50m2/g.甲基三甲氧基硅烷(武汉大学化工厂).光源为GGZ2125W高压汞灯(上海亚明灯泡厂). 用日本Rigaku D/max2rB型X射线衍射仪(Cu Kα)测定粉体的物相,并通过Sherrer公式计算TiO2纳米粉体的晶粒尺寸;用日本J EOL J EM2100Ⅻ型透射电子显微镜观察粉体的形貌;用美国Micromeritics GEM EN I2360型比表面积分析仪,B ET法测定粉体的比表面积; 收稿日期:1998210212.第一作者:赵文宽,女,1943年生,副教授. 联系人:赵文宽.Tel:(027)87684703. 3国家自然科学基金(批准号29577282)资助项目.

荧光定量实验方法操作手册

Stratagene定量PCR仪标准曲线制作方法 定量PCR定量的基本原理就是用已知拷贝数梯度稀释的样品作出标准曲线，未知样品和标准曲线相比较从而得到未知样品的量。无论是在基因表达分析实验还是在病原微生物检测应用中都有可能要做标准曲线，分别用于绝对定量和相对定量。 标准样品的准备 1、绝对定量。绝对定量就是要确定未知样品的拷贝数。对于这类实验标准品是通过某种方法制备得到的已知拷贝数的含有目标片段的核苷酸序列。最常见的是插入有目标序列的质粒，因为质粒是环状DNA有较强的稳定性，而且分子量比较大定量的时候比较准确。也有用线状的PCR产物作为标准品的，通常要比扩增的目标片段要大一些，这也是为了获得分子量比较大的片段，提高拷贝数的准确性。标准品的拷贝数是通过紫外定量的方法来确定，先得到标准品的浓度C(ng/uL)，因为无论是质粒还是PCR产物它们的序列都是已知的，这样通过核苷酸的相对分子量和标准品序列信息估算出标准品的分子量B，则标准品的拷贝数A(copy/uL)为： A=C/B×6.02E+14 2、相对定量。主要是针对基因表达分析实验而来的，因为要知道都是相对的数值（对照样品和实验样品中基因表达的比值），这样就不需要知道精确的拷贝数，所以标准品也就无须知道精确的拷贝数，只需知道稀释的倍数就可以了。 实验中的标准品可以是来源比较丰富的细胞或组织的RNA转录得到的cDNA。将这种cDNA 进行梯度的稀释，可以是稀释10倍，100，1000，10000等倍（具体实验要根据具体的情况来调整稀释倍数。最好能作一个预实验来看看什么样的稀释倍数比较适合这种基因的扩增）。而对于各个稀释倍数要对它的拷贝数进行赋值，这个值当然不是标准品中真实含有的基因数量，当然在基因表达分析中也不需要，而是要求根据稀释倍数给每一个稀释度人为赋予的拷贝数，这只是为了方便实验最终结果的计算而已。比如可以把前面稀释十倍的样品赋值为10000个拷贝，100倍的赋值为1000个拷贝依次类推把10000倍的赋为10等。要注意，赋值的数目的倍数差异和稀释的倍数应该是一样的，比如前面是10稀释，后面赋值也是10倍变化。 如何做标准曲线 在定量实验中标准品是要和未知样品一起进行定量实验的，这样在实验结束，无论是标准品还是未知样品都将跑出曲线，获得了Ct值。那么先可以把未知样品放到一边，对于标准品来说，既获得了Ct值，还知道他们的拷贝数（虽然对于相对定量来说这个拷贝数是我们自己赋予的）。这样可以通过标准品的Ct值和拷贝数做一条标准曲线（以拷贝数为横坐标，而Ct值为纵坐标）。一旦作出了标准曲线，而未知样品的Ct值知道（通过实验求得的），这时候就在标准曲线上进行定位，就可以得到未知样品的拷贝数了。 事实上，操作起来没有那么复杂，只需要告诉软件哪个孔是标准品，哪个是未知样品，以及标准品的拷贝数等必要信息，软件会自动帮把标准曲线和未知样品的拷贝数计算出来了。