科研指标测定方法
指标：1、品质指标
硬度、色泽、褐变指数、失重率、腐烂率、可溶性固型物、呼吸强度、乙烯释放率、可滴定酸、Vc
2、抗性指标
抗氧化衰老的有：SOD CAT APX GSH MDA 原果胶（可溶性果胶）
抗病相关指标有：PPO POD CHT GUL PAL总酚类黄酮木质素
3、测定方法：
褐变指数
色泽
失重率
腐烂率
呼吸强度
乙烯释放率
硬度
可溶性固型物
可滴定酸：
试剂：0.1mol/L NaOH(4g纯+1000ml蒸馏水，邻苯二甲酸氢钾标定) 1%酚酞试剂（1g酚酞加入到100ml50%的乙醇溶液中溶解）
方法：1、NaOH的标定：准确称取105℃下烘干至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾0.6g ，加入50ml新煮沸过的冷水，振摇，使其尽量溶解，再滴加2滴1%酚酞指示剂，用配置的NaOH溶液标定，滴定至溶液呈粉红色。每1mlNaOH相当于20.42mg邻苯二甲酸氢钾，计算出NaOH滴定液的浓度。
2、测定步骤：称10g苹果，研磨，转移到100ml容量瓶中，蒸馏水洗研钵3次再定容，摇匀，静置30min后过滤。吸取20ml滤液，转入三角瓶中，加入两滴1%酚酞试剂，用已标定的氢氧化钠溶液进行标定，滴定至溶液初现粉色并30秒内不退色为终点（PH8.1-8.3）,重复三次，再用蒸馏水作为滤液进行滴定作为空白对照。可定丁酸含量=【样品提取液总体积*氢氧化钠滴定液浓度*（滴定滤液消耗的氢氧化钠体积—滴定蒸馏水消耗的氢氧化钠体积）】/（滴定时所取滤液体积*样品质量）
Vc：
试剂：5%钼酸铵溶液（称取5g钼酸铵溶于蒸馏水中，并定容至100ml）草酸-EDTA 溶液（称取 6.3g草酸和0.75g EDTA-Na2溶于蒸馏水中并定容至1000ml）5%H2SO4(体积分数) 偏磷酸-乙酸溶液（取棒状偏磷酸3g加20%冰醋酸48ml，溶解后加蒸馏水稀释至100ml,必要时过滤，在冰箱中可保存3天）Vc标准溶液（称取Vc100mg，置100ml容量瓶中，加适量草酸-EDTA溶液溶解后，在用该溶液定容到100ml，即成1mg/ml标准液，此溶液随配随用（如果纯度不够应进行标定））提取及测定：1、制作标准曲线： 7支25ml具塞试管，按下表加入各种试剂
试剂试管号
1 2 3 4 5 6 7
Vc标准液/ml 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 草酸EDTA溶液/ml 5.0 4.9 4.8 4.6 4.4 4.2 4.0 偏磷酸-乙酸溶液/ml 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 1:19H2SO4/ml 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 5%钼酸铵/ml 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 Vc含量/mg 0 10 20 40 60 80 100 加完试剂摇匀后，置30℃水浴中保温15min，用蒸馏水稀释至25ml，混匀，用1
号空白管调零，在760nm波长下比色，记录吸光度，以Vc含量为横坐标，吸光
度为纵坐标，绘制标准曲线。
2、提取及测定：称取5g果蔬组织，加5ml草酸-EDTA溶液研磨成匀浆，并仔细
转入25ml容量瓶中，再用提取介质冲洗研钵，冲洗液一并倒入容量瓶中。取一
部分匀浆液经3000g离心10min后，取1ml上清液与标准管同法测定，若样品显
色液中出现沉淀，可过滤后进行比色，不影响测定结果。
计算公式：Vc含量（mg*100g-1FW）=标准曲线上查的的Vc的量*样品提取液总
体积/(测定时所用样品液体积*样品鲜重)注意：显色温度和加入显色剂后的时间要一致。
GSH：
试剂：50g/L三氯乙酸（5g三氯乙酸和蒸馏水溶解稀释至100ml，再加入186mg EDTA-Na2.2H2O）0.1mol/LPH7.7磷酸钠缓冲液和0.1mol/LPH6.8磷酸钠缓
冲液4mmol/L二硫代硝基苯甲酸（15.8mg DTNB，用0.1mol/L、PH6.8磷酸缓冲
液溶解，定容至10ml，摇匀，4℃保存）100umol/L还原性谷胱甘肽标准液（3g
还原型谷胱甘肽加入少量无水乙醇用蒸馏水定容至100ml）
实验步骤：1、标准曲线制作：
取六只试管编号，按下表加入各种试剂，混匀，于25℃保温反应10min，以0
号管为参比调零，测定显色液在波长412nm处的吸光度值，以吸光度值为纵坐标，还原型谷胱甘肽为横坐标，绘制标准曲线。
项目管号
0 1 2 3 4 5 还原型谷胱甘肽标液/ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水/ml 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 PH7.7磷酸缓冲液/ml 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 DTNB试剂/ml 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 相当于还原型谷胱甘肽物质的量/umol 0 20 40 60 80 100 2、提取和测定：5g果实加入经预冷的三氯乙酸，在冰浴下研磨匀浆，于4℃、12000xg离心20min，收集上清液测定。取一只试管，依次加入1ml蒸馏水、
1mlPH7.7磷酸缓冲液和0.5mlDTNB，混匀即为绘制标准曲线的0号管溶液，此液
作为参比调零。另取两支试管，分别加入1ml上清液、1mlPH7.7磷酸缓冲液，
然后向一只管中加入0.5mlDTNB，向另一支管中加入0.5mlPH6.8磷酸缓冲液。
将两只管置于25℃下保温反应10min，迅速测定显色液在波长412nm下的吸光度值，分别记作ODs和ODc。重复三次。
根据ODs-ODc的差值从标准曲线上查的还原型谷胱甘肽含量，计算每克果实中还
原型谷胱甘肽的含量：还原型谷胱甘肽含量=（标准曲线上查得的值*样品提取液
总体积）/（吸取样品液体积*样品质量）注意：先做样品本底对照。
MDA：
试剂：100g/L三氯乙酸（称取10g三氯乙酸蒸馏水溶解稀释至100ml）6.7g/L 硫代巴比妥酸（称取0.67g硫代巴比妥酸，用100ml0.05mol/L氢氧化钠溶解）测定步骤：称取1g果蔬样品，加入5ml三氯乙酸溶液，研磨匀浆于4℃10000g 离心20min，收集上清液低温保存备用。取2ml上清液，对照空白管中加入2ml 三氯乙酸代替提取液，分别加入2ml0.67%硫代巴比妥酸，混合后在沸水浴中煮沸20min，取出冷却后再离心一次，分别测定上清液在450nm、532nm、600nm波长处的吸光度值，重复三次。计算：丙二醛含量（umol/L）=6.45*(OD532-OD600)-0.56*OD450
每克果蔬中丙二醛的含量=丙二醛含量*样品提取液总体积/(测定时所取样品液体积*样品质量*1000) 注意：出现负值，表明糖的影响很大，需做预实验确定适宜的条件。
原果胶（可溶性果胶）：
试剂：1.5g/L咔唑-乙醇溶液（称取0.15g咔唑加入无水乙醇溶解并稀释至100ml）100ug/ml半乳糖醛酸标准液（称取10mg半乳糖醛酸M=194,用蒸馏水溶解定容至100ml）浓硫酸95%乙醇0.5mol/L硫酸溶液
测定步骤：1、制作标准曲线：取6支25ml具塞刻度试管，编号，按下表加入半乳糖醛酸标准液，然后小心地沿管壁加入6ml浓硫酸，在沸水浴中加热20min，取出冷却至室温后，各加入0.2ml1.5g/L咔唑-乙醇溶液，摇匀，在暗处放置30min 后，测定反应液在波长530nm处的吸光度值，并以吸光度值为纵坐标，半乳糖醛酸质量（ug）为横坐标，绘制标准曲线求出方程。
项目管号
0 1 2 3 4 5
半乳糖醛酸标准液/ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水/ml 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 相当于半乳糖醛酸的量/ug 0 20 40 60 80 100 2、提取测定：
（1）可溶性果胶提取：称取1g果蔬组织，研磨成匀浆转入50ml刻度离心管中，加入25ml95%乙醇，在沸水浴上加热30min，以除去样品中糖分及其他物质，注意在煮沸过程中要及时补加95%乙醇。取出冷却至室温，于8000r/min离心5min，弃去上清液，再加入95%乙醇在沸水浴上加热，如此重复3-5次。然后将沉淀放入试管中，加入20ml蒸馏水，在50℃水浴中保温30min，以溶解果胶。取出冷却至室温后，于8000r/min下离心15min，将上清液移入100ml容量瓶中，用少量水洗涤沉淀，离心后一并将上清液移入容量瓶中，加蒸馏水至刻度，此溶液即为可溶性果胶。
（2）原果胶提取：将上述遗留的沉淀物，保留在刻度离心管仲，再向其中加入25ml0.5mol/L硫酸溶液，在沸水浴中加热1h以水解原果胶，取出冷却至室温后，于8000r/min下离心15min,将上清液移入100ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，此为原果胶测定液。
（3）测定：吸取1ml提取液，加入到25ml刻度试管中，按标准曲线的操作步骤进行测定，重复三次。计算：根据吸光度值查得半乳糖醛酸质量，计算每克果蔬中果胶含量，以半乳糖醛酸质量分数表示。
半乳糖醛酸含量=查得的半乳糖醛酸量*样品提取液总体积/(测定时所取样品液体积*样品质量) 注意：检验糖分是否除尽的方法：取0.5ml提取液置于试管中，加入2-3滴50g/Lα-萘酚的乙醇溶液，充分混合，此时溶液稍有白色沉淀，然后使试管稍稍倾斜，用吸管沿管壁加入1ml浓硫酸（注意水层与硫酸层不可混合）。待试管静置后，若在两层的界面上产生紫红色环，则证明提取液中含有糖分
总酚：
试剂：钨酸钠(Na2WO4·2H2O)、钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)、硫酸锂(Li2SO4)、磷酸(H3PO4≥85%)、磷钼酸(24MoO3·P2O5·xH2O)、碳酸钠(Na2CO3)、盐酸和溴水为分析纯。一水合没食子酸标样为Sigma -Aldrich 公司产品。水为蒸馏水。1.1.2 FC 显色剂:称取50.0 g 钨酸钠和12.5 g 钼酸钠, 用350 mL 蒸馏水溶于1 000 mL 回流瓶中, 加入25 mL 磷酸和50 mL 盐酸, 混匀, 微沸回流2 h, 加入75.0 g 硫酸锂、25 mL 蒸馏水和数滴溴水, 开口沸腾约15min( 至溴水挥尽为止) , 冷却, 定容至500mL,过滤, 置棕色瓶中保存备用。使用时加入1 倍蒸馏水稀释。
1.1.3 FD 显色剂:称取100.0 g 钨酸钠和20.0 g 磷钼酸, 溶于200 mL 蒸馏水, 加入50 mL 磷酸, 加热回流2 h, 冷却, 定容至1 L。
1.1.4 7.5%碳酸钠溶液：称取37.5 g 碳酸钠, 溶于250 mL 温水, 混匀, 冷却, 定容至500 mL。
1.1.5 一水合没食子酸标准溶液:称取0.110 g 一水合没食子酸, 用蒸馏水溶解、定容至100 mL, 此溶液质量浓度为1 000 mg/L。分别吸取此溶液0.0、1.0、
2.0 、
3.0、
4.0、
5.0 mL 至100 mL 容量瓶中, 用蒸馏水定容至刻度, 所得一水合没食子酸标准溶液的质量浓度分别为0.0、10、20、30、40、50 mg/L。
取试样适量( 葡萄酒吸取2mL,葡萄和柿子称取2 g 匀浆, 其他水果称取5 g 匀浆) ,用80 mL 蒸馏水洗入100 mL 容量瓶中, 至100 ℃沸水浴中保温30 min, 取出, 冷却, 定容, 过滤, 滤液备用。使用5 mL 刻度吸管吸取1.0 mL 滤液( 若多酚含量过高, 可适当稀释) 或一水合没食子酸标准溶液, 分别用刻度吸管加入FC 显色剂或FD 显色剂及7.5%碳酸钠溶液, 用蒸馏水定容至10 mL,混匀, 室温显色( 下同) , 测定765 nm 吸光度, 根据稀释倍数和从标准曲线中查出的浓度, 计算样品多酚含量。
对于FD 法, 最佳的测定条件为分别吸取1 mL 滤液、1 mL FD 显色剂、2 mL 7.5%碳酸钠溶液和6 mL 蒸馏水, 于10 mL离心管中混匀, 室温下显色30～60 min, 测定765 nm吸光度。
对于FC 法, 最佳测定条件为分别吸取1 mL 滤液、1 mL FC 显色剂、3 mL 7.5%碳酸钠溶液和5 mL蒸馏水, 于10 mL 离心管中混匀, 显色30～60 min, 测定765 nm 吸光度。
总酚含量测定:参照王军节：1 g 果皮组织与预冷的5 mL 1 %HCl - 甲醇溶液充分研磨提取,然后在4 ℃下,8 000 r/ min 离心10 min后,取上清液直接用于比色,样品重复测3 次,酚类含量以OD280 / gFW 表示.
类黄酮:
试剂：1%盐酸-甲醇溶液（取1ml浓盐酸加入到99ml甲醇中，摇匀，于4℃预冷）提取及测定：称取2g果肉组织，加入少许经预冷的1%盐酸-甲醇溶液，冰浴研
磨匀浆，转入20ml刻度试管中，用1%盐酸-甲醇溶液冲洗研钵，一并转移到试管中，定容至刻度，混匀，于4℃避光提取20min，期间摇动数次，然后过滤，收集滤液待用。以1%盐酸-甲醇溶液做参比调零，取滤液分别于波长280nm、325nm 处测定溶液吸光度值，OD280表示总酚含量，OD325表示类黄酮含量。
注意：此测定方法仅能判断样品之间总酚、类黄酮的相对含量，若要准确含量，可以用不同浓度没食子酸做标准曲线，计算总分物质含量，用芦丁制作标准曲线，计算类黄酮含量。
木质素：参照Morrison (1972) 法[12 ] 并修改。1 g 果肉组织与预冷的4 mL 体积分数95 %乙醇研磨,4 ℃下12000 ×g 离心10 min ,沉淀物用体积分数95 %乙醇冲洗3 次,再用乙醇∶正己烷体积比= 1 ∶2 冲洗3 次,然后加1 mL 2 mol/ L NaOH 中止反应。再加2mL冰醋酸和0.1 mL 7.5 mol/ L 盐酸羟胺,离心,取上清0.5 mL ,用冰醋酸定容至10 mL ,280 nm 下测定样品吸光值,样品重复测3 次。木质素含量以OD280 / g(鲜重) 表示。
SOD：
试剂：0.1mol/LPH7.8磷酸钠缓冲液提取缓冲液（5g PVP和35ulβ-巯基乙醇加入到0.1mol/LPH7.8磷酸缓冲液定容至100ml,摇匀，低温4℃贮藏备用。）50mmol/LPH7.8磷酸钠缓冲液 130mmol/L L-蛋氨酸（称取 1.94g L-蛋氨酸，用50mmol/LPH7.8磷酸缓冲液溶解定容至100ml,充分混匀，先用现配，低温避光保存，可使用1-2天） 750umol/L氮蓝四唑溶液（称取61.3mg NBT,用蒸馏水溶解，定容至100ml,充分混匀，现用现配，低温避光保存，可用2-3天）
100umol/L EDTA-Na2溶液（称取37.2mgEDTA-Na，用蒸馏水溶解，定容至100ml,使用时稀释100倍，低温避光保存，可用8-10天）20umol/L核黄素溶液（称取73.2mg核黄素，蒸馏水溶解，定容至100ml,使用时稀释100倍，低温避光保存，随配随用（黑纸包好）。
提取及测定：5g果蔬样品，加入5ml提取缓冲液，在冰浴下研磨成匀浆，转入离心管中，于4℃12000*g离心30min，收集上清液，低温保存备用。取5支试管，按照下表加入各种溶液，注意最后加入核黄素。其中3支为测定管，其余两支为对照管，混匀后，将一只对照管置于暗处，其他各管置于4000lx日光灯下反应15min后立即取出，置于暗处终止反应。以不照光管做空白参比调零，于560nm处分别测定其它各管的吸光度值。
试剂用量/ml 终浓度（比色时）50mmol/LPH7.8磷酸缓冲液 1.7
130mmol/L蛋氨酸溶液 0.3 13mmol/L 750umol/L氮蓝四唑溶液 0.3 75umol/L 100umol/LEDTA-Na2溶液 0.3 10umol/L 20umol/L核黄素溶液 0.3 2umol/L
酶液 0.1 对照两支管以缓冲液代替
总体积 3ml
显色反应后，分别记录样品管反应混合液的吸光度值（ODs）和照光对照管反应混合液的吸光度值（ODc）,以每分钟每克果蔬的反应体系对氮蓝四唑光化还原的抑制为50%为一个SOD活性单位（U）表示。
SOD活性=（ODc-ODs）*样品提取液总体积/(0.5*ODc*测定时所取样品液总体积*光反应时间*样品质量) 注意：需要通过预实验摸索显色反应所需时间，温度以25℃为
宜，低时适当延长时间，高时缩短时间。
CAT ：
试剂：0.1mol/LPH7.5磷酸钠缓冲液 50mmol/LPH7.5磷酸缓冲液提取缓冲液（5g PVP和β-巯基乙醇用0.1mol/L磷酸缓冲液溶解定容至100ml,低温4℃贮藏备用。）20mmol/LH2O2溶液（227ul的30%H2O2溶液用50mmol/L磷酸缓冲液稀释至100ml,先用现配，低温避光保存）
测定步骤：称取5g果蔬样品，加入5ml提取缓冲液，冰浴下研磨至匀浆，于4℃、12000*g离心30min,收集上清液，即为酶提取液。酶促反应体系由2.9ml20mmol/LH2O2溶液和100ul酶提取液组成。以蒸馏水为参比空白，在反应15s时开始记录反应体系在波长240nm处吸光度值，作为初始值，然后每隔30s 记录一次，连续测定，至少获取6个点的数据，重复三次。
制作反应体系吸光度值随时间变化的曲线，根据曲线的初始线性部分计算每分钟吸光度变化值△OD240。然后以每克果蔬样品每分钟吸光度值减少0.01为一个过氧化氢酶活性单位，单位是0.01△OD240/min*g。
计算公式：△OD240*样品提取液总体积/(0.01*测定时所取样品液体积*样品质量)
APX：
试剂：0.1mol/LPH7.5磷酸钾缓冲液 50mmol/LPH7.5磷酸钾缓冲液
提取缓冲液（2.9mg EDTA、17.6mg抗环血酸和2g PVPP,用0.1mol/L磷酸钾缓冲液溶解定容至100ml,4℃预冷保存）
反应缓冲液（2.9mgEDTA和8.8mg抗环血酸，用50mmol/L磷酸钾缓冲液溶解定容至100ml,4℃预冷保存）2mmol/LH2O2(1.14ml30%H2O2,用蒸馏水稀释至100ml,混匀，即得2mmol/LH2O2溶液)
提取测定：5g果蔬样品加入5ml经4℃预冷的提取缓冲液，冰浴研磨匀浆后，在4℃12000*g离心30min，收集上清液，即为酶提取液。取一只试管依次加入2.6ml 反应缓冲液和0.1ml酶提取液，最后加入0.3ml2mmol/LH2O2溶液启动酶反应，立即混匀，并开始计时。从启动后15s开始记录反应体系在290nm处吸光度值，每隔30s记录一次，连续测定，至少获取6个点的数据。以蒸馏水为参比调零。重复三次。计算：制作OD290随时间变化曲线，根据曲线的初始线性部分计算每分钟吸光度值变化△OD290，然后以每克样品APX酶促反应体系在波长290nm处吸光度值降低0.01为一个酶活性单位，单位是0.01△OD290/min*gm
F
计算公式：APX活性=△OD290*样品提取液总体积/(0.01*测定时所取样品提取液体积*样品质量) 注意：预先测试以确定反应条件
PPO：
试剂：0.1mol/LPH5.5乙酸-乙酸钠缓冲液提取缓冲液（340mg PEG6000、4g PVPP 和1ml TritonX-100用0.1mol/L乙酸-乙酸钠缓冲液稀释至100ml）50mmol/L邻苯二酚溶液（275mg邻苯二酚，用0.1mol/L乙酸-乙酸钠缓冲液溶解稀释至50ml）提取测定：5g果蔬样品，加入5ml提取缓冲液，在冰浴下研磨至匀浆，于4℃、12000*g下离心30min，收集上清液，即为酶提取液，低温保存备用。取一只试管，加入4ml50mmol/L乙酸-乙酸钠缓冲液和1ml50mmol/L邻苯二酚溶液，最后加入100ul酶提取液，同时立即开始计时，将反应混合液倒入比色杯中，置于分
管光度计样品室中，以蒸馏水为参比，在反应15s时开始记录反应体系在波长420nm处吸光度值，作为初始值，然后每隔1min记录一次，连续测定，至少获取六个点的数据。重复三次。制作吸光度值随时间变化的曲线，根据曲线的初始线性部分计算每分钟吸光度变化值△OD420，以每克果蔬样品每分钟吸光度变化值增加1为一个活性单位，单位是OD420/min*g，
计算公式：U=△OD420*样品提取液总体积/测定时所取样品液体积*样品质量)
注意：做预实验，确定酶促反应呈线性变化的时间段，以在以后的测定中只需测完线性变化阶段以节省时间。
POD ：
试剂：0.1mol/LPH5.5乙酸-乙酸钠缓冲液（母液A为200mmol/L醋酸溶液，量取11.55ml冰醋酸，加蒸馏水稀释至1000ml;母液B为200mmol/L醋酸钠溶液，量取16.4g无水醋酸钠或称取27.2g三水合乙酸钠，用蒸馏水溶解定容至1000ml;取68ml母液A和432ml母液B，混合后调节PH至5.5，加蒸馏水稀释至1000ml）提取缓冲液（称取340mg PEG6000、4g PVPP和1ml TritonX-100用0.1mol/L乙酸乙酸钠缓冲液稀释至100ml）25mmol/L愈创木酚溶液（取50mmol/L愈创木酚，用50mmol/LPH5.5乙酸乙酸钠缓冲液稀释至100ml）0.5mol/LH2O2溶液（取1.42ml30%H2O2浓度约为17.6mol/L溶液,用50mmol/LPH5.5乙酸乙酸钠缓冲液稀释至50ml,现用现配，避光保存。）
提取及测定：称取5g果蔬组织，加入5ml提取缓冲液，在冰浴条件下研磨成匀浆，于4℃12000*g离心30min，收集上清液即为酶提取液，低温保存备用。取一只试管，加入3ml25mmol/L愈创木酚溶液和0.5ml酶液，再加入200ul0.5mol/LH2O2溶液迅速混合启动反应，同时立即开始计时。将反应混合液倒入比色杯中，置于分光光度计样品室，以蒸馏水为参比，在反应15s开始记录反应体系在波长470nm处吸光度值，作为初始值，然后每隔1min记录一次，至少获取六个点的数据，重复三次。制作吸光度值随时间变化的曲线，根据曲线的初始线性部分计算每分钟吸光度变化值△OD470，以每克果蔬样品每分钟吸光度变化值增加1时为一个过氧化物酶活性单位，单位是△OD470/min*g
计算公式：U=△OD470*样品提取液总体积/(测定时所取样品液体积*样品质量)
GLU ：
试剂：0.1mol/LPH5.2乙酸乙酸钠缓冲液，见附录；提取缓冲液（称取29mg EDTA，吸取35ulβ-巯基乙醇，加入到0.1mol/LPH5.2乙酸乙酸钠缓冲液中，定容至100ml,低温贮藏备用。）50mmol/LPH5.2乙酸乙酸钠缓冲液 10g/L胶状几丁质（称取1g几丁质，加入4ml经4℃预冷的丙酮在冰浴通风条件下充分研磨，期间可适当加入丙酮，应充分研细，然后边研磨边缓缓加入30ml浓盐酸，几分钟后完全溶解，于4℃8000g离心15min，收集上清液，将上清液缓缓加入到剧烈搅拌的50%乙醇溶液中至少是上清液体积5倍以上，充分搅拌后静置使胶状几丁质沉淀析出，通过过滤弃去上清液，收集胶状几丁质沉淀。用去离子水反复冲洗至PH=7.0后，定容至100ml，即配置成10g/L胶状几丁质悬浮液，避光保存于冰箱中。）30g/L 脱盐蜗牛酶（称取0.6g脱盐蜗牛酶，溶解到20ml0.mol/LPH5.2乙酸乙酸钠缓冲液中，低温避光保存）0.6mol/L四硼酸钾溶液（称取9.71g5水四硼酸钾，用蒸馏水溶解定容至50ml）对二甲氨基苯甲醛储备液（称取10g对二甲氨甲苯甲醛溶于87.5ml冰醋酸和12.5ml10mol/L盐酸混合液中，于4℃保存，使用前用冰
醋酸稀释5倍）0.1mol/LN-乙酰葡萄糖胺标准液（称取2.2mg N-乙酰葡萄糖胺，
用少量乙醇溶解后，用蒸馏水在稀释，定容至100ml）
提取及测定:1、标准曲线的制作：
取6支具塞试管，按下表加如试剂
项目管号
0 1 2 3 4 5
0.1mol/LN-乙酰葡萄糖胺/ml 0 0.3 0.6 0.9 1.2 1.5
蒸馏水/ml 1.5 1.2 0.9 0.6 0.3 0
0.6mol/L四硼酸钾/ml 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
相当于N-乙酰葡萄糖胺物质的量/umol 0 30 60 90 120 150 加入0.2ml0.6mol/L四硼酸钾溶液，将试管置于沸水浴中煮沸5min，然后迅速
冷却，冷却后加入2ml用冰醋酸稀释5倍的对二甲氨基苯甲醛溶液，再在37℃
保温培养20min进行显色反应。以0号管为参比空白，于波长585nm处测定显色
液的吸光度值，以吸光度为纵坐标，N-乙酰葡萄糖胺的量为横坐标，制作标准曲
线，求得方程。
2、提取及测定：称取10g果蔬样品，加入10ml预冷的提取缓冲液，在冰浴条件
下研磨成匀浆，转入离心管中，在4℃12000g下离心30min，收集上清液，低温
保存备用。将上清液盛到透析袋中，置于蒸馏水中，于4℃透析过夜。然后4℃10000g下离心15min，收集上清液备用，若浓度过低，可通过冷冻干燥进行浓缩。
取两只试管，分别加入0.5ml50mmol/LPH5.2乙酸-乙酸钠缓冲液，0.5ml10g/L
胶状几丁质悬浮液，然后一支反应管中加入0.5ml酶提取液，另一支管中加入
0.5ml经煮沸5min的酶液作为对照，混匀。将反应管置于37℃保温培养1h,后，
加入0.1ml30g/L脱盐蜗牛酶，混合继续在37℃保温培养1h，以释放生成N-乙
酰葡萄糖胺单体，保温后取出，立即加入0.2ml0.6mol/L四硼酸钾溶液，并在沸
水浴中煮沸30分钟，然后迅速冷却，冷却后按制作标准曲线的方法操作。重复
三次。根据样品管反应液与对照管反应液吸光度值的差值，在标准曲线上查出相
应N-乙酰葡萄糖胺的量，记作n，以每秒钟每克样品中酶分解胶状几丁质产生
1*10-9mol/LN-乙酰葡萄糖胺作为一个几丁质酶活性单位，单位是
1*10-9mol/s*gmF,计算公式：U=n*样品提取液总体积*1000/（测定时所取样品液
体积*酶促反应时间*样品质量）注意：也可以用丙酮沉淀、透析法或凝胶过滤法对样品
提取液进行脱盐处理，也可以直接测定粗提取液中几丁质酶活性。
CHT ：
试剂：0.1mol/LPH5.2乙酸-乙酸钠缓冲液（母液配制方法见附录，取105ml母
液A和395ml母液B混合后，调节PH值到5.2，稀释至1000ml）提取缓冲液（称
取29mg EDTA、0.1g L-抗坏血酸，吸取35ulβ-巯基乙醇，加入到0.1mol/L乙酸
钠缓冲液中，定容至100ml，摇溶，低温4℃保存）4g/L昆布多糖溶液（称取100mg
昆布多糖加入到25ml0.1mol/L醋酸缓冲液中，溶解后低温储备备用）3,5-二硝
基水杨酸试剂（1、配制500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液，2、配制262ml
的2mol/L NaOH溶液 3、称取6.3g的3,5-二硝基水杨酸 4、称取5g结晶酚 5、
称取5g亚硫酸钠，最后，将上述2、3、4、5各成分加入到1中，搅拌使之溶解，
待冷却后转入到1000ml容量瓶中，并用蒸馏水定容至刻度，贮于棕色瓶中备用，
切勿使二氧化碳进入，若溶液浑浊可过滤后使用）1mg/ml葡萄糖标准液（准确
称取100mg分析纯葡萄糖预先在80℃烘干至恒重，用少量蒸馏水溶解后，转移
到100ml容量瓶中，以蒸馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中保存备用。）
提取及测定：1、标准曲线的制作：取7支具塞刻度试管25ml,按下表加入试剂项目管号
0 1 2 3 4 5 6
1mg/ml葡萄糖标准液/ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 蒸馏水/ml 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 3,5-二硝基水杨酸/ml 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 相当于葡萄糖的质量/mg 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2
精确加完各种试剂后，将各管摇匀，在沸水浴中加热5min，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，在用蒸馏水稀释至25ml，混匀，在540nm处，用0号管做参比调零，测定显色液的吸光度值，以吸光度为纵坐标，葡萄糖质量为横坐标，绘制标准曲线，求得方程。
提取及测定：称取10g果蔬样品组织，加入10ml经预冷的提取缓冲液，在冰浴条件下研磨成匀浆，转入离心管，在4℃12000g下离心30min。收集上清液，低温保存备用。取两只试管，分别加入100ul4g/L的昆布多糖溶液，然后像一支试管中加入100ul酶液，向另一支试管中加入100ul经煮沸5min的酶液作对照，混匀，将反应管置于37℃保温反应40min，保温后向各管中加入1.8ml蒸馏水和1.5mlDNS试剂，在沸水浴中加热3min，在用蒸馏水将反应液稀释至25ml，混匀测定混合液在540nm处吸光度值，重复三次。根据样品管反应液和对照管反应液的吸光度值的差值，在标准曲线上查的葡萄糖质量m，以每秒每克样品中酶分解昆布多糖产生1*10-9mol葡萄糖为一个β-1,3葡聚糖酶活性单位，单位是1*10-9mol/s*g
计算公式：m*样品提取液总体积*106/(测定时所取样品液体积*酶促反应时间*样品质量) 注意：在制备酶液时加入的L-抗坏血酸可作为还原剂保护酶的活性，也可以使用5mmol/L还原型谷胱甘肽保护酶活性。
PAL：
试剂：0.1mol/LPH8.8硼酸硼砂缓冲液（母液配制方法见附录，取66.67ml母液A和33.33ml母液B，混匀，调节PH至8.8，稀释至200ml）50mmol/LPH8.8硼酸硼砂缓冲液提取缓冲液（取4g PVP、58mg EDTA、35ulβ-巯基乙醇加入到0.1mol/L硼酸缓冲液中溶解定容至100ml，低温4℃保存备用）20mmol/L L-苯丙氨酸溶液（称取330mg L-苯丙氨酸，用50mmol/L硼酸缓冲液溶解定容至100ml）6mol/L盐酸溶液（取10ml浓盐酸，稀释到20ml）
提取及测定：称取5克果蔬样品，加入5ml提取缓冲液，冰浴研磨成匀浆，转入离心管，于4℃12000*g下离心30min，收集上清液，低温保存备用。取两只试管，都分别加入3ml50mmol/L硼酸缓冲液，0.5ml20mmol/LL-苯丙氨酸溶液。向一支试管中加入0.5ml酶提取液，向另一支试管中加入0.5ml经煮沸5min的失活酶作为对照。然后将两只管置于37℃保温60min，保温结束时，立即向两支试管中分别加入0.1ml6mol/L盐酸溶液以终止反应。以蒸馏水为参比调零，分别测定样品反应管和对照反应管中溶液在波长290nm处的吸光度值，重复三次。根据反应液的吸光度值差，计算苯丙氨酸解氨酶活性，以每小时每克果蔬酶促反应体系吸光度增加0.01为一个PAL活性单位（U），表示为0.01△OD290/h*gmF
计算公式：PAL活性=（样品管反应液吸光度值-对照管反应液吸光度值）*样品提取液总体积/(0.01*测定时所取样品提取液体积*酶促反应时间*样品质量)
注意：原装的β-巯基乙醇的浓度大约为14.3mmol/L，EDTA的相对分子质量为292.25，L-苯丙氨酸为165.19，浓盐酸为浓度为12mmol/L
缓冲液的配制：
1、乙酸-乙酸钠缓冲液（0.1mol/L）：将两种母液混合后，用蒸馏水稀释至200ml。母液A（0.2mol/L乙酸溶液）:量取11.55ml冰醋酸，稀释至1000ml
母液B(0.2mol/L乙酸钠溶液)：称取16.4g无水碳酸钠（M=82.04）或称取27.22g 三水合乙酸钠（M=136.09）,溶解，稀释至1000ml
PH 0.2mol/L乙酸溶液/ml 0.2mol/L乙酸钠溶液/ml
5.2 21.0 79.0
5.4 14.0 8
6.0
5.6 9.0 91.0
5.8
6.0 94.0
2、磷酸钠缓冲液（0.1mol/L）: 将两种母液混合后，用蒸馏水稀释至200ml。母液A(0.2mol/L磷酸氢二钠溶液)：称取35.61gNa2HPO4.2H2O（M=178.05）或53.65gNa2HPO4.7H2O（M=268.25）或71.64gNa2HPO4.12H2O(M=358.22)，溶解，稀释至1000ml
母液B(0.2mol/L磷酸二氢钠溶液)：称取27.60gNaH2PO4.H2O(M=138.01)或31.21gNaH2PO4.2H2O(M=156.03),溶解，稀释至1000ml
PH 0.2mol/L磷酸氢二钠/ml 0.2mol/L磷酸二氢钠/ml
5.8 8.0 92.0
6.8 49.0 51.0
7.5 84.0 16.0
7.7 89.5 10.5
7.8 91.5 8.5
7.0 61.0 39.0
3、磷酸钾缓冲液（0.1mol/L）: 将两种母液混合后，用蒸馏水稀释至200ml。母液A(0.2mol/L磷酸氢二钾溶液)：称取34.84gK2HPO4(M=174.18)溶解，稀释至1000ml
母液B(0.2mol/L磷酸二氢钾溶液)：称取27.22gKH2PO4(M=136.09)溶解，稀释至1000ml
PH 0.2mol/L磷酸氢二钾/ml 0.2mol/L磷酸二氢钾/ml
7.5 84 16
5.8 8.5 91.5
6.8 49.7 50.3
7.0 61.5 38.5
7.8 90.8 9.2
4、硼酸-硼砂缓冲液（0,.1mol/L硼酸根）：将两种母液混合后，用蒸馏水稀释
至200ml。
母液A(0.05mol/L硼砂溶液)：称取19.07gNa2B4O7.10H2O(M=381.43)溶解稀释至1000ml,硼砂易失水，必须在带塞得瓶中保存。
母液B(0.2mol/L硼酸溶液)：称取12.37gH2BO3(M=61.84)溶解，稀释至1000ml 各种缓冲液的优缺点：
磷酸缓冲液：PH缓冲范围最广，缓冲稀释后PH变化小，但易与Ca、Mg及重金属离子结合，抑制某些酶促反应，钾盐比钠盐在低温下易溶，但会与凝胶电泳中
的SDS反应生成难溶物。
Tris（三羟甲基氨基甲烷）缓冲液：在电泳中用的的多。PH在中性范围7.5~8.5 Tris碱性较强，可以与HCl配制从酸性到碱性大范围的PH缓冲液，Tris-HCl 缓冲液对生化反应干扰很小，不与金属离子发生沉淀。但其PH受浓度变化很大，稀释10倍，PH变化大于0.1，还受温度影响，易吸收CO2，对某些PH电极发生干扰作用，要选用与Tris溶液具有兼容性的电极。
有机酸缓冲液：PH范围为酸性，羧酸是天然的代谢产物，会对反应产生干扰
硼酸缓冲液：碱性范围内最常用的缓冲液，易与很多代谢产物反应，尤其是和糖的羟基反应生成稳定的复合物使缓冲液受到干扰。
一些常用缓冲液添加剂：
EDTA:金属离子螯合剂
β-巯基乙醇：还原剂，保护蛋白的巯基不被氧化，24h内被氧化，其后可加速蛋白质的失活。DDT（二硫苏糖醇，一般保存在-20℃）氧化后可形成稳定的分子内二硫键，并不危及蛋白质的巯基，长期储存时可用DDT。
TritonX-100:非离子型去污剂，膜蛋白的提取过程中，使蛋白膜溶解。
最新植物生理指标测定方法
实验一植物叶绿素含量的测定（分光光度法） (张宪政，1992) 一、原理 根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。高等植物中叶绿素有两种：叶绿素a 和b，两者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。叶绿素a和叶绿素b的比值反映植物对光能利用效率的大小，比值高则大，则反之。 二、材料、仪器设备及试剂 试剂：1）95%乙醇（或80%丙酮） 三、实验步骤 称取剪碎的新鲜样品0.2～0.3g，加乙醇10ml，提取直至无绿色为止。把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内，以95%乙醇为空白，在波长663nm和645nm下测定吸光度。四、实验结果按计算 丙酮法（Arnon法）【可以用于丙酮乙醇混合法和80%丙酮提取法的计算】 叶绿素a的含量（mg/g）=（12.71?OD663 – 2.59?OD645）V/1000*W 叶绿素b的含量（mg/g）=(22.88OD645 – 4.67OD663) V/1000*W 叶绿素a、b的总含量（mg/g）=(8.04?OD663 +20.29?OD645) V/1000*W 按Inskeep公式 叶绿素a的含量（mg/g）=（12.63?OD663 – 2.52?OD645）V/1000*W 叶绿素b的含量（mg/g）=(20.47OD645 – 4.73OD663) V/1000*W 叶绿素a、b的总含量（mg/g）=(7.90?OD663 + 17.95?OD645) V/1000*W
科研指标测定方法
指标：1、品质指标 硬度、色泽、褐变指数、失重率、腐烂率、可溶性固型物、呼吸强度、乙烯释放率、可滴定酸、Vc 2、抗性指标 抗氧化衰老的有：SOD CAT APX GSH MDA 原果胶（可溶性果胶） 抗病相关指标有：PPO POD CHT GUL PAL总酚类黄酮木质素 3、测定方法： 褐变指数 色泽 失重率 腐烂率 呼吸强度 乙烯释放率 硬度 可溶性固型物 可滴定酸： 试剂：0.1mol/L NaOH(4g纯+1000ml蒸馏水，邻苯二甲酸氢钾标定) 1%酚酞试剂（1g酚酞加入到100ml50%的乙醇溶液中溶解） 方法：1、NaOH的标定：准确称取105℃下烘干至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾0.6g ，加入50ml新煮沸过的冷水，振摇，使其尽量溶解，再滴加2滴1%酚酞指示剂，用配置的NaOH溶液标定，滴定至溶液呈粉红色。每1mlNaOH相当于20.42mg邻苯二甲酸氢钾，计算出NaOH滴定液的浓度。 2、测定步骤：称10g苹果，研磨，转移到100ml容量瓶中，蒸馏水洗研钵3次再定容，摇匀，静置30min后过滤。吸取20ml滤液，转入三角瓶中，加入两滴1%酚酞试剂，用已标定的氢氧化钠溶液进行标定，滴定至溶液初现粉色并30秒内不退色为终点（PH8.1-8.3）,重复三次，再用蒸馏水作为滤液进行滴定作为空白对照。可定丁酸含量=【样品提取液总体积*氢氧化钠滴定液浓度*（滴定滤液消耗的氢氧化钠体积—滴定蒸馏水消耗的氢氧化钠体积）】/（滴定时所取滤液体积*样品质量） Vc： 试剂：5%钼酸铵溶液（称取5g钼酸铵溶于蒸馏水中，并定容至100ml）草酸-EDTA 溶液（称取 6.3g草酸和0.75g EDTA-Na2溶于蒸馏水中并定容至1000ml）5%H2SO4(体积分数) 偏磷酸-乙酸溶液（取棒状偏磷酸3g加20%冰醋酸48ml，溶解后加蒸馏水稀释至100ml,必要时过滤，在冰箱中可保存3天）Vc标准溶液（称取Vc100mg，置100ml容量瓶中，加适量草酸-EDTA溶液溶解后，在用该溶液定容到100ml，即成1mg/ml标准液，此溶液随配随用（如果纯度不够应进行标定））提取及测定：1、制作标准曲线： 7支25ml具塞试管，按下表加入各种试剂 试剂试管号 1 2 3 4 5 6 7
植物生理生化测定
2.1.8转基因植株在盐胁迫下的超氧化物歧化酶(SOD)活性测定 将转基因植株与非转基因对照植株继代于含有0.5% NaCl的MS固体培养上进行胁迫培养，培养条件为27±1℃，每天13 h、3000 lux光照。胁迫培养4 w后，取其叶片测定其SOD 活性，每个样品设3次重复，求其平均数，并进行多重比较。 2.1.8.1主要试剂及配方 （1）0.1 mol/l pH 7.8磷酸钠（Na2HPO4-NaH2PO4）缓冲液 A液（0.1 mol/l Na2HPO4溶液）：称取Na2HPO4·12H2O 7.163 g，用少量蒸馏水溶解后定容至200 ml，4℃冰箱中保存备用； B液（0.1 mol/l NaH2PO4溶液）：称取NaH2PO4·2H2O 0.780 g，用少量蒸馏水溶解后定容至50 ml，4℃冰箱中保存备用； 取上述A液183 ml与B液17ml充分混匀后即为0.1 mol/l pH 7.8的磷酸钠缓冲液，4℃冰箱中保存备用。 （2）0.026 mol/l甲硫氨酸（Met）磷酸钠缓冲液 称取甲硫氨酸（C5H11NO2S）0.388 g，用少量0.1 mol/l pH 7.8的磷酸钠缓冲液溶解后，再用相同磷酸钠缓冲液定容至100 ml，现用现配，4℃冰箱中保存可用1～2 d。 （3）7.5 × 10-4 mol/l NBT溶液 称取NBT（C40H30Cl2N10O6）0.153 g，用少量蒸馏水溶解后，定容至250 ml，现用现配，4℃冰箱中保存可用2～3 d。 （4）含1.0 μmol/l EDTA的20 μmol/l核黄素溶液 A液：称取EDTA 0.003 g，用少量蒸馏水溶解； B液：称取核黄素0.075 g，用少量蒸馏水溶解； C液：合并A液和B液，定容至100 ml，此溶液即为含0.1 mmol/l EDTA的2 mmol/l 核黄素溶液，避光保存（可用黑纸将装有该液的棕色瓶包好），4℃冰箱中可保存8～10 d，当测定SOD酶活时，将C液稀释100倍，即为含1.0 μmol/l EDTA的20 μmol/l核黄素溶液。 （5）含2% PVP的0.05 mol/l pH7.8磷酸钠缓冲液 取0.1 mol/l pH7.8的磷酸钠缓冲液50 ml，加入2 g PVP（聚乙烯吡咯烷酮），充分溶解后移入100 ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，充分混匀，4℃冰箱中保存备用。 2.1.8.2提取及测定方法 （1）称取1.0 g样品叶片于预冷的研钵中，加入4 ml预冷的提取介质（含2% PVP的0.05 mol/l pH7.8磷酸钠缓冲液），冰浴研磨匀浆，转入10 ml离心管，并用提取介质定容至
水质常规指标测定操作方法精
1 / 23 水质常规指标测定操作方法 一、COD： 化学需氧量COD（Chemical Oxygen Demand），是在一定的条件下，采用一定的强氧化剂处理水样时，所消耗的氧化剂量。它是表示水中还原性物质多少的一个指标。采用重铬酸盐法测定（参看GB11914-89） 方法原理： 在强酸性溶液中，用一定量的重铬酸钾氧化水样中还原性物质，过量的重铬酸钾以试亚铁灵作指示剂，用硫酸亚铁铵溶液回滴。根据硫酸亚铁铵的用量算出水样中还原性物质消耗氧的量。 方法的适用范围： 用0.25mol/L浓度的重铬酸钾溶液可测定大于50mg/L的COD值，未经稀释水样的测定上限是700mg/L，用0.025mol/L浓度的重铬酸钾溶液可测定5~50mg/L的COD值，但低于10mg/L时测量准确度较差。 所需仪器和实验用品： 1.硫酸汞： xx 2.硫酸-硫酸银试剂： 向2500ml浓硫酸中加入25g硫酸银，放置1~2天，使之溶解，并混匀，使用前小心摇动。
3.重铬酸钾标准溶液（ 2CrO 7=0.25mol/L）： 2 / 23 称取预先在120℃烘于2h的优级纯重铬酸钾12.258g溶于水中，移入1000m容量瓶，稀释至标线，摇匀。 4.硫酸亚铁铵标准溶液[(NH 4) 2Fe(SO4) 2·6H 2O≈0.1mol/L]： 称取39.5g硫酸亚铁铵溶于水中，边搅拌边缓慢加入20ml浓硫酸，冷却后移入1000ml容量瓶中，加水稀释至标线，摇匀。临用前，用重铬酸钾标准溶液标定。 标定方法： 准确吸取10ml重铬酸钾标准溶液于500ml锥形瓶中，加水稀释至110ml左右，缓慢加入30ml浓硫酸，摇匀。冷却后，加入3滴试亚铁灵指示液（约0.15ml），用硫酸亚铁铵溶液滴定，溶液的颜色由黄色经蓝绿色至红褐色即为终点。 c[(NH 4) 2Fe(SO 4) 2]=0.25×10/V 式中： c----硫酸液铁铵标准溶液的浓度（mol/ L）； V---硫酸亚铁铵标准滴定溶液的用量（ml）。 3 / 23 5.试亚铁xx指示液：
植物生理生化指标测定
小黑豆相关生理指标测定 1.表型变化：鲜重、株高、主根长和叶面积 鲜重：取处理好的植株，擦干根和叶表面水分，测量整株植物的重量，每个测6个重复。 株高：取处理好的植株，测量从根和茎分隔处到植株最高点的高度，记录，每个测6个重复。 主根长：取处理好的植株，测量从根和茎分隔处到主根最远点长度，记录，每个测6个重复。 叶面积：取处理好的植株，选择第二节段的叶片，测量叶面积，叶面积测量方法是测每个叶片最宽处长度作为叶的长，测叶片最窄处长度作为叶的宽，叶片长和宽的乘积即为叶表面积。每个测6个重复。 2.总蛋白、可溶性糖、丙二醛（MDA）和H2O2含量测定 样品处理：取0.5g样品（叶片要去除叶脉、根要先用清水清洗干净），速在液氮中冻存，在遇冷的研钵中加液氮研磨，然后加入1.5ml的Tris-HCl（pH7.4）抽提，将抽提液转移到2ml的EP管中，于4℃，12000rpm离心15min，取上清，保存在-20℃下，上清液可用于总蛋白、丙二醛（MDA）、可溶性糖和H2O2含量测定。 总蛋白测定（Bradford法）：样品反应体系（800ul H2O+200ul Bradford+5ul 样品），空白对照为（800ul H2O+200ul Bradford）。测定后带入标准曲线Y=32.549X-0.224(Y代表蛋白含量，X代表OD595)，计算得出蛋白含量。 可溶性糖测定：样品反应体系（1ml蒽酮+180ul ddH2O+20ul样品提取液）；空白对照（1ml蒽酮+180ul ddH2O），测定OD625后带入标准曲线：Y=0.0345X+0.0204(Y代表OD625，X代表可溶性糖含量（ug）) 蒽酮配方：称取100mg蒽酮溶于100ml稀硫酸（76ml浓硫酸+30mlH2O）.注意：浓硫酸加入水中时，一点一点递加，小心溅出受伤。 丙二醛（MDA）测定：在酸性和高温条件下，丙二醛可与硫代巴比妥（TBA）反应生成红棕色的3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮，在532nm处有最大吸收波长，但该反应受可溶性糖的极大干扰，糖与TBA的反应产物在532nm处也有吸收，但其最大吸收波长在450nm处。采用双组分分光光度法，可计算出MDA含量。MDA的计算公式为：MDA（umol/L）=6.45OD532-0.56OD450. 反应体系为：400ul 0.6%TBA+350ul H2O+50ul样品，80℃水浴10min后，测OD532和OD450。对照用Tris-HCl. 0.6%TBA配方：称取硫代巴比妥0.6g，溶于少量1M NaOH中，待其完全溶解后用10%TCA（称取10gTCA三氯乙酸，溶于100ml蒸馏水中，待其溶解即可）定容至100ml。 H2O2测定（二甲酚橙法）：样品反应体系（82ul溶液A+820ul溶液B （A:B=1:10）+150ul样品提取液），30℃水浴30min，测OD560。标准曲线为:Y=0.01734X-0.0555(Y代表OD560，X代表H2O2含量)
水质指标测定方法手册
水质指标测定方法手册 第一部分总则 1.1 目的 此手册的目的是规范化验室分析工作，保证实验条件、仪器设备、人员操作符合国家标准的规定，确保化验室检验的准确性。 1.2 宗旨 此手册的宗旨是以先进的、科学的分析方法，以准确的分析数据来帮助操作员工了解本废水处理系统实际的运行情况视实调整，以取得最好的工艺处理效果，达到指导的目的。 1.3 依据 本手册介绍的所有指标检测方法均使用国家标准方法或是行业规定标准方法；
第二部分注意事项 1.1进入实验室工作和学习的人员需遵守实验室安全管理规章制度，克 服麻痹大意思想，掌握基本的安全知识和救助知识，非工作需要未经许可不得擅自进入实验室。 1.2工作人员进入实验室后需着工作服，严格实行检验方法标准，遵守 操作规程和一切规章制度不得擅自修改。 1.3 水质分析过程需用到浓硫酸，浓盐酸、硫酸汞等腐蚀、有毒药品， 这些危险品及有毒药品要按规定设专用库房，做到专室专柜储存，并指定专人、双人双锁妥善保管，严格以上物品的管理； 1.4 开启使用硫酸、盐酸等腐蚀刺激性药品时，要带上耐酸手套和防护 眼镜，先用湿布盖上瓶口再开动瓶塞，以防溅出，烧伤眼睛和皮肤等。因为浓盐酸是具有挥发性的，操作应在通风橱内进行。 1.5 为确保分析结果的准确性，建议购买环境标准样品，化验室分析人 员定期拿环境标准样品进行实际测试，将测试结果与参考值进行比较。 1.6 实验人员严格按规定方法取样、制样、留样，经常检查有关设备的 取样管等，确保取样有代表性，留样标记要清楚。
1.7 正确使用并维护好相关仪器，定期对其进行校正。 1.8 测定方法用到标准曲线的，严格上要求每次重新配制药品后需重新 绘制标准曲线。 第三部分操作手册 水质篇 第一章、PH的测定 (4) 第二章、悬浮物（SS）的测定 (8) 第三章、色度的测定 (10) 第四章、化学需氧量（COD）的测定 (11) 第五章、五日生化需氧量（BOD5）的测定 (14) 第六章、溶解氧的测定 (18) 第七章、挥发性脂肪酸（VFA）的测定 (21) 第八章、总氮（TN）、总磷（TP）的测定 (23) 第九章、氨氮的测定 (34) 污泥篇 第一章、颗粒污泥总浓度（TSS）、挥发性污泥浓度（VSS）、灰分
水样COD.BOD.氨氮等指标的测定方法汇总
实验一水体初级生产力的BOD测定 一、实验目的 1、了解研究水生生态系统初级生产力的重要意义和方法 2、掌握黑白瓶测氧法测定水生生态系统初级生产力的方法及其基本原理。 3、学习利用水生生态系统初级生产力评价水体生产性能或生态环境质量。 二、实验原理 初级生产力是自养生物在单位时间、单位空间内合成有机物质或固定能量的数量，是生态系统生物生产力的重要基础和生态系统最基本、最重要的功能之一。 在许多水生生态系统中，浮游植物是水体自养生物的主要组成部分，其初级生产过程是碳、氧、磷等生源要素的生物地球化学循环和水生生态系统的能量流、物质流的基础，影响到水体生物资源量的变动及生态系统结构和功能。因此，研究浮游植物的初级生产力，对于评价水体生产性能、营养水平和能流与物质转化效率、制定渔业发展战略、合理开发水体生物资源、进行水体环境质量监测及生物资源保护等方面均有重要的理论和实践意义。 目前常用的测定浮游植物初级生产力的方法有黑白瓶测氧法、叶绿素法、同位素法、营养盐类平衡法等。 黑白瓶测氧法：通过测定水中溶解氧的变化，间接计算有机物的生产量，是黑白瓶法的基本原理。黑瓶指完全不透光的玻璃瓶（可套上黑布袋或用其它方法使其完全不透光），而白瓶则可充分透光。当将装有浮游生物样品的密封的黑、白瓶同时悬挂于水中特定深度曝光时，黑瓶中的浮游植物由于得不到光照，只能进行呼吸作用，瓶中的溶解氧将会减少，与此同时，白瓶中的浮游植物在光照条件下，光合作用与呼吸作用同时进行，瓶中的溶氧量一般会明显增加。假定光照条件下与黑暗条件下的呼吸强度相等，就可以根据挂瓶曝光期间内黑、白瓶中的溶解氧变化计算出光合作用与呼吸作用的强度。根据光合作用方程式： 2817.72KJ 6CO2 + 12H2O C6H12O6 + 6O2+ 6H2O 叶绿素 氧生成量与有机质生成量之间存在一定的当量关系，因此可计算出浮游植物有机物质生产量。需要指出的是，在11℃~12℃之间，细菌耗氧量往往可达到总呼吸量的40%~60%，因此黑白瓶测氧法的计算结果常常低估了植物的生成量。
植物生理生化指标测定(精)
小黑豆相关生理指标测定 1. 表型变化:鲜重、株高、主根长和叶面积 鲜重 :取处理好的植株,擦干根和叶表面水分,测量整株植物的重量,每个测 6个重复。 株高 :取处理好的植株,测量从根和茎分隔处到植株最高点的高度,记录,每个测6个重复。 主根长 :取处理好的植株,测量从根和茎分隔处到主根最远点长度,记录,每个测6个重复。 叶面积 :取处理好的植株,选择第二节段的叶片,测量叶面积,叶面积测量方法是测每个叶片最宽处长度作为叶的长, 测叶片最窄处长度作为叶的宽, 叶片长和宽的乘积即为叶表面积。每个测 6个重复。 2. 总蛋白、可溶性糖、丙二醛(MDA 和 H2O2含量测定 样品处理:取 0.5g 样品(叶片要去除叶脉、根要先用清水清洗干净 ,速在液氮中冻存,在遇冷的研钵中加液氮研磨,然后加入 1.5ml 的 Tris-HCl (pH7.4 抽提, 将抽提液转移到 2ml 的 EP 管中, 于 4℃, 12000rpm 离心 15min , 取上清, 保存在 -20℃下,上清液可用于总蛋白、丙二醛(MDA 、可溶性糖和 H2O2含量测定。 总蛋白测定(Bradford 法 :样品反应体系(800ul H2O+200ul Bradford+5ul样品 , 空白对照为(800ul H2O+200ul Bradford 。测定后带入标准曲线 Y=32.549X-0.224(Y代表蛋白含量, X 代表 OD595 ,计算得出蛋白含量。 可溶性糖测定:样品反应体系(1ml 蒽酮 +180ul ddH2O+20ul样品提取液 ; 空白对照 (1ml 蒽酮 +180ul ddH2O , 测定 OD625后带入标准曲线 : Y=0.0345X+0.0204(Y代表 OD625, X 代表可溶性糖含量(ug
实验方法汇总(水质监测指标)
实验方法汇总 第一部分水样的采集和储存 第一节进水取样 用烧杯从进水箱中取样，根据不同指标的测定频率确定取样量的大小，从中取约20mL水样过0.45um滤膜后存于聚乙烯瓶中，标明取样日期后4℃储存于冰箱中用于硝氮、亚硝氮的测定；另取约10mL水样过玻璃纤维膜后用硫酸调pH至小于2，存于玻璃试管中，标明取样日期后4℃储存于冰箱中用于TOC 的测定。其余水样用于COD、氨氮、色度、pH、总铁、蛋白质和多糖指标的测定，测定BOD的当天取样量约300mL。 第二节出水取样 用烧杯从出水口接取一定量水样，其它同进水。 第三节上清液取样 将适量混合液用定性滤纸过滤，取滤液进行各项指标的测定，具体同进水取样，将过滤后余下的污泥倒回反应器内（整个实验中，除测定MLVSS外，其它指标测定完毕后都要将污泥倒回反应器内）。
第二部分理化指标的测定方法 第一节DO、水温的测定 采用溶解氧仪进行DO和水温的测定：将溶氧仪的电极与仪器连接并将电极浸没入反应器内混合液液面以下（每次的测定位置都固定在同一死角处并保证温度感应部分也没入水面以下），打开溶解氧仪，调至显示mg/L单位的状态下，待读数稳定后记录下DO和水温。测试完毕后关掉溶氧仪，拔下电极依次用清水和蒸馏水清洗后，用滤纸小心擦干电极后将溶氧仪放回固定位置处。 第二节pH的测定 1.仪器：pH计10mL小烧杯 2.试剂 用于校准仪器的标准缓冲液，按《pH标准溶液的配制》中规定的数量称取试剂，溶于25 oC水中，在容量瓶内定容至1000ml、水的电导率应低于 2μS/cm，临用前煮沸数分钟，赶走二氧化碳，冷却。取50ml冷却的蒸馏水，加1滴饱和氯化钾溶液，测量pH值，如pH在6～7之间即可用于配制各种标准缓冲液。 pH标准液的配制 标准物质 pH（25 oC）每1000ml水溶液中所含试剂的质量（25 oC） 基本标准 酒石酸氢钾（25 oC饱 3.557 6.4gKHC4H4O6①
有机肥料国家标准及各个指标的检测方法
有机肥料的国家标准及各个指标的检测方法 简介：本文介绍了生物有机肥肥料的国家标准，以及各个指标的检测方法。具体包括：有效活菌数，有机质，水分，PH，粪类大肠菌群数，蛔虫卵死亡率，N，P5O2，K2O,重金属等指标的测定方法和流程。可供同行人士参考，可大大缩减您查阅资料的时间，本文采用word文字编辑，下载后可以直接复制粘贴。一．各个指标的标准 1.各个技术指标 项目指标要求 有效活菌数≧0.2亿/g 有机质（以干计）≧45% 水分≦30% PH 5.5-8.5 粪大肠菌群数≦100个/g 蛔虫卵死亡率≧95% ≧5% 总养分质量分数（N+P5O2+K2O，以烘干 计） 2.重金属指标 项目指标要求 总AS ≦15mg/kg 总Cd ≦3mg/kg 总Pb ≦50mg/kg 总Cr ≦150mg/kg 总Hg ≦2mg/kg 二．各个指标检测方法 1.有效活菌数的测定 （1）稀释 称取固体样品10g，加入带玻璃珠的100ml的无菌水中，静置20分钟，在旋转式摇床上200r/min充分震荡30分钟，即成母液菌悬液。 用5ml无菌转液管分别吸取5ml上述母液菌悬液加入45ml无菌水中，按1
比10进行系列稀释，分别得到10-1,10-2,10-3、、、稀释倍数的菌悬液。 （2）加样及培养 每个样品取3个连续适宜稀释度，用0.5ml无菌移液管分别吸取不同稀释度菌悬液0.1ml，加至预先制备好的固体培养基平板上，分别用无菌玻璃刮刀将不同稀释度的菌悬液均匀地涂布于琼脂表面。 每一稀释度重复3次，同时以无菌水作空白对照，于适宜的条件下培养。 （3）菌落识别 根据所检测菌种的技术资料，每个稀释度取不同类型代表菌落通过涂片、染色、镜检等技术手段确认有效菌。当空白对照培养皿出现菌落数时，检测结果无效，应该重做。 （4）菌落计数 以出现20-30个菌落数的稀释度的平板为计数标准，（丝状真菌为10-150个菌落数），分别统计有效活菌数目和杂菌数目。当只有一个稀释度，其有效菌平均菌落数在20-300个之间时，则以该菌落数计算。若有两个稀释度，其有效菌落数在20-300个之间时，应该两者菌落总数之比值决定，若其比值小于等于2应该计算两者的平均数；若大于2，则以稀释度小的菌落数平均数计算。有效活菌数按下列公式计算，同事计算杂菌数。 N1=(x*k*v1/m0*v2)*108 N2=(x`*k*v1/v0*v2)*108 式中： N1——————质量有效活菌数，单位为亿每克； N2——————体积有效活菌数，单位为亿每毫升； x·——————有效菌落平均数； K———————稀释倍数； V1———————基础液体积，单位为毫升； V2———————菌悬液加入量，单位为毫升； V0———————样品量，单位为毫升； M0———————样品量，单位为克。 2.有机质的测定 (1)方法原理 用定量的重铬酸钾-硫酸溶液，在加热条件下，使有机肥料中的有机碳氧化，
植物生理指标检测方法
植物组织中可溶性糖含量的测定 在作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。 Ⅰ蒽酮法测定可溶性糖 一、原理 糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。 该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。 糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为 620 nm ，故在此波长下进行比色。 二、实验材料、试剂与仪器设备 （一）实验材料 任何植物鲜样或干样。 （二）试剂 1. 80 ％乙醇。 2. 葡萄糖标准溶液（100 μg/mL ）：准确称取100 mg 分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至100 mL ，使用时再稀释 10 倍（ 100 μg/mL ）。 3 ．蒽酮试剂：称取 1.0 g 蒽酮，溶于 80% 浓硫酸（将 98% 浓硫酸稀释，把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中） 1000 mL 中，冷却至室温，贮于具塞棕色瓶内，冰箱保存，可使用 2 ～ 3 周。 （三）仪器设备 分光光度计，分析天平，离心管，离心机，恒温水浴，试管，三角瓶，移液管（ 5 、 1 、0.5 mL ），剪刀，瓷盘，玻棒，水浴锅，电炉，漏斗，滤纸。 三、实验步骤 1. 样品中可溶性糖的提取称取剪碎混匀的新鲜样品0.5 ～ 1.0 g （或干样粉末 5 ～100 mg ），放入大试管中，加入15 mL 蒸馏水，在沸水浴中煮沸20 min ，取出冷却，过滤入100 mL 容量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。 2. 标准曲线制作取 6 支大试管，从 0 ～ 5 分别编号，按表 24-1 加入各试剂。 表 24-1 蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量 将各管快速摇动混匀后，在沸水浴中煮10 min ，取出冷却，在620 nm 波长下，用空白调零测定光密度，以光密度为纵坐标，含葡萄糖量（ μg ）为横坐标绘制标准曲线。 3 ．样品测定取待测样品提取液 1.0 mL 加蒽酮试剂 5 mL ，同以上操作显色测定光密度。重复 3 次。
水质指标测定方法 简单版
水中总氮的测定（过硫酸钾氧化紫外分光光度法） （一）主要试剂： 碱性过硫酸钾溶液：称取4g过硫酸钾(K2S208)和1.5g氢氧化钠，溶于无氨水中，稀释至100mL。 1mol/L的HCL ：取8.33 mL的浓盐酸稀释至100 mL。 （二）测定步骤： 水样加5mL碱性过硫酸钾溶液，包扎高温消解30min。于消解完全的试样中加入1mL 1mol/L的HCL，加水至刻度，充分混匀后，分别于220nm和275nm波长处测定吸光值，吸光度计算：A=A220nm-2A275nm。 水中总磷的测定（过硫酸钾氧化-钼锑抗比色法） （一）主要试剂： 6.5mol/L钼锑储备液：取180.6ml分析纯浓硫酸，缓缓加入到400ml蒸馏水中，不断搅拌，冷却。加入20g钼酸铵和0.5g酒石酸锑钾，搅拌，待溶液冷却后定容至1000ml。 钼锑抗混合显色剂：取100ml钼锑贮存液，加入1.5g抗坏血酸，此试剂宜现配现用。 5%的过硫酸钾溶液：5g过硫酸钾溶解于水，定容至100ml。 二硝基酚指示剂：称取0.2克2,6-二硝基酚溶于100ml水中。 （二）测定步骤： 水样加4ml 5%的过硫酸钾溶液，包扎高温消解30min。 测定：经消解后的样品加入2,6-二硝基酚指示剂2滴，用氢氧化钠和盐酸调节至微黄色。再加入2.5 ml 6.5mol/L钼锑抗显色剂，定容摇匀，放置30min后，在700nm波长处测量吸光度。 水中氨氮的测定（苯酚-次氯酸钠分光光度法） （一）主要试剂： 1%EDTA溶液：溶解1g EDTA于100ml水中，用浓氢氧化钠将pH调至10。 溶液B：溶解5g苯酚和25mg亚硝酰氰化钠（亚硝酰铁氰化钠）于水中稀释至500毫升，放棕色瓶中，置于冰箱中贮存。 溶液C：溶解2.5g氢氧化钠，18.7 g磷酸氢二钠和15.9g磷酸三钠于水中，加入含有效氯4.3ml次氯酸钠，定溶至500ml，放棕色瓶中，置于冰箱中贮存。 （二）测定步骤： 于抽滤过后的水样中加1ml 1%EDTA，加入5ml B溶液，5ml C溶液，摇匀，定容，置37℃恒温水浴中发色30分钟。在625nm处测定吸光度。 水中硝态氮的测定（紫外分光光度法） 测定方法：于抽滤后的试样中加入1mL 1mol/L的HCL，加水至刻度，充分混匀后，分别于220nm和275nm波长处测定吸光值，吸光度计算：A=A220nm-2A275nm。 水质高锰酸盐指数的测定 （一）试剂配制： 0.1mol/L KMnO4储备液：3.2g高锰酸钾溶解定容至1L。 0.1mol/L的草酸钠储备液: 称取0.6705g经120℃烘干2h并放冷的草酸钠溶解并定
体格生长常用指标及测量方法
体格生长常用指标及测量方法 1.体重** 为各器官、组织和体液的总重量，是小儿体格生长的代表，是营养情况的重要指标。临床给药、输液、热量的给予常依据体重计算。新生儿出生体重平均为★3kg。生后第1个月增加1-1.5kg，3个月时体重是出生时的2倍（6kg），★1周岁时增至出生时的★3倍（9kg）；2岁时增至出生时体重的4倍（12kg）。2岁以后到12岁前体重稳步增长，平均每年增长2kg，推算公式如下： ★1-6个月：体重（kg)=出生体重（kg）+月龄×0.7（kg） ★7-12个月：体重（kg）=6（kg）+月龄×0.25（Kg） ★2-12岁：体重（kg）=年龄×2+8（Kg） 2.身长（高）* 指从头顶至足底的全身长度。年龄越小增长越快，婴儿期和青春期是两个增长高峰。新生儿出生时身长平均为★50cm；1周岁时达到75cm；2周岁时达到85cm。2-12岁可按下列公式推算：★身长（cm)=年龄（岁）×7+75（cm)。 3.坐高坐高指从头顶至坐骨结节的长度，出生时坐高为身高的67%，以后下肢增长比躯干快，6岁时为55%。此百分数显示了上、下部比例的改变，比坐高绝对值更有意义。
4.头围经眉弓上方、枕后绩节绕头一周的长度为头围，其反映脑和颅骨的发意。出生时平均为33～34cm，★1岁时46cm，2岁时48cm，5岁时50cm，15岁时54-58cm（接近成人）。 5.胸围沿乳头下缘水平绕胸一周的长度为胸围。胸围反映胸廓、胸背肌肉、皮下脂肪及肺的发育程度。出生时平均为32cm，比头围小1-2cm。1岁时胸围与头围大致相等，约46cm，1岁以后胸围超过头围，至青春期前其差数（cm）约等于小儿年龄数减1。 6.腹围平脐（小婴儿以剑突与脉之间的中点）水平绕腹一周的长度为腹围。2岁前腹围与胸围大约相等，2岁后腹围较胸围小。患腹部疾病如有腹水时需测量腹围。 7.上臂围沿肩峰与尺骨鹰嘴连线中点的水平绕上臂一周的长度称 上臂围，代表上臂骨骼、肌肉、皮下脂肪和皮肤的发育水平以*评估小儿营养状况。评估标准为：上臂围>13.5cm为营养良好12.5-13.5cm 为营养中等；<12.5cm为营养不良。 8.牙齿人的一生有乳牙20颗、恒牙32颗，两副牙齿。生后4-10个月乳牙开始萌出，12个月未萌出者为乳牙萌出延迟。约于2岁半乳牙出齐。2岁内乳牙数目为★月龄减4（或6）。6岁左右萌出第1
锅炉水质标准及测定方法总结.docx
GB/T 1576-2008 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法（GB/T 5682-2008，ISO 3696：1987，MOD） GB/T 6903 GB/T 6904 GB/T 6907 GB/T 6908 GB/T 6909 GB/T 6913锅炉用水和冷却水分析方法通则 工业循环冷却水及锅炉用水中pH 的测定 锅炉用水和冷却水分析方法水样的采集方法 锅炉用水和冷却水分析方法电导率的测定 锅炉用水和冷却水分析方法硬度的测定 锅炉用水和冷却水分析方法磷酸盐的测定（ GB/T 6913-2008，ISO 6878：2004，Water quality-Determination of phosphorus-Ammonium molybdate spectrometric method ， NEQ） GB/T 12145 GB/T 12151 GB/T 12152 GB/T 12157火力发电机组及蒸汽动力设备水汽质量 锅炉用水和冷却水分析方法浊度的测定（福马肼浊度） 锅炉用水和冷却水中油含量的测定 工业循环冷却水和锅炉用水中溶解氧的测定（GB/T 12157-2007，ISO 5813：1983，Water quality-Determination of dissolved oxygen-Iodimetric method ，NEQ） GB/T 15453 工业循环冷却水和锅炉用水中氯离子的测定 DL/T 火力发电厂水汽分析方法第 1 部分：总则 DL/T火力发电厂水汽分析方法第25部分：全铁的测定（磺基水杨酸分光光度法） 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 原水 raw water 未经过任何处理的水。 软化水softened water 除掉全部或大部分钙、镁离子后的水。
植物生理学实验指导
植物生理学实验指导主编胡君艳陈国娟张汝民 浙江农林大学植物学科 2013年8月
实验一植物组织水势的测定 水势与渗透势的测定方法可分为3大类：⑴液相平衡法，包括小液流法、重量法测水势，质壁分离法测渗透势；⑵压力平衡法（压力室法测水势）；⑶气相平衡法，包括热电偶湿度计法、露点法等。 Ⅰ小液流法 【实验目的】 了解采用小液流法测定植物组织水势的方法。 【实验原理】 水势表示水分的化学势，像电流由高电位处流向低电位处一样，水从水势高处流向低处。植物体细胞之间，组织之间以及植物体和环境间的水分移动方向都由水势差决定。 当植物细胞或组织放在外界溶液中时，如果植物的水势小于溶液的渗透势（溶质势），则组织吸水而使溶液浓度变大；反之，则植物细胞内水分外流而使溶液浓度变小；若植物组织的水势与溶液的渗透势相等，则二者水分保持动态平衡，所以外部溶液浓度不变，而溶液的渗透势即等于所测植物的水势。可以利用溶液的浓度不同其比重也不同的原理来测定试验前后溶液的浓度变化，然后根据公式计算渗透势。 【实验器材与试剂】 1.实验材料：八角金盘、大叶黄杨等。 2.实验试剂：0.05、0.10、0.15、0.20、0.30mol·L-1蔗糖溶液、甲烯蓝溶液。 3.实验仪器：试管10支、微量注射器、镊子、打孔器、垫板。 【实验步骤】 1.取干燥洁净的试管5支为甲组，标记1~5，各支中分别加入0.05~0.30mol·L-1蔗糖溶液5mL。另取5支干燥洁净的试管为乙组，标记1'~5'，各试管中分别加入0.05~0.30mol·L-1蔗糖溶液2ml。 2.取待测样品的功能叶数片，用打孔器打取小圆片约50片（避开叶脉），混合均匀。用镊子分别夹入10个小圆片到乙组试管中。并使叶圆片全部浸没于溶液中。放置约30~60min，为加速水分平衡，应经常摇动试管。 3.到时间后，在乙组试管中加入甲烯蓝溶液1~2滴，并用微量注射器取各试管糖液少许，将注射器插入对应浓度甲组试管溶液中部，小心地放出一滴蓝色溶液，并观察蓝色小液流的
废水水质测定方法
废水水质测定方法 （1）TP的测定 实验中主要考察的水质指标是水中磷的含量，其分析方法严格按照《水和废水监测分析方法（第四版）进行，采用钼酸盐分光光度法测定（GB-11893-89）。 实验的测定的原理是：在酸性的条件下，正磷酸盐与钼酸铵、酒石酸锑氧钾反应，生成磷钼杂多酸，被还原剂抗坏血酸还原，则变成蓝色络合物，通常成为磷钼蓝。在测定中需要的试剂包括： ①（1+1）硫酸； ②10%抗坏血酸溶液：溶解10g抗坏血酸溶于水，并稀释至1000mL； ③钼酸盐溶液：溶解13g钼酸铵于100mL水中，溶解0.35g酒石酸锑氧钾于100mL水中，在不断的搅拌下，将钼酸铵溶液徐徐加到300mL（1+1）硫酸，加酒石酸锑氧钾溶液并且混合均匀。储存在棕色的玻璃瓶里在4℃保存； ④浊度-色度补偿液：混合两份体积的（1+1）硫酸和一份体积的10%抗坏血酸溶液； ⑤磷酸盐储备液：将优级纯磷酸二氢钾于110℃干燥两个小时，在干燥器中放冷。称取 0.2197g溶于水，移入1000mL容量瓶中，加（1+1）硫酸5mL，用水稀释至标线。此溶液每毫升含有50.0ug磷（以P计）； ⑥磷酸盐标准溶液：吸取10.00mL磷酸盐储备液于250mL容量瓶中，用水稀释至标线，此溶液每毫升含2.00ug磷，临用时现配。 测试的主要步骤包括： ①标准曲线的绘制：取数支50mL具塞比色管，分别加入0、0.5、1.00、3.00、5.00、 10.0、15.0mL，加水至50mL。向比色管加入1mL10%抗坏血酸溶液，混匀。30s后加2mL钼酸盐溶液充分混匀，放置15min。然后用10mm或者30mm比色皿，在700nm波长处，以零浓度溶液为参比，测量吸光度。本实验中所绘制的标准曲线如图2-1：
各生理指标的测定方法
各生理指标的测定方法 一、脯氨酸含量的测定 1.茚三酮法 1.1原理 在正常环境条件下，植物体内游离脯氨酸含量较低，但在逆境（干旱、低温、高温、盐渍等）及植物衰老时，植物体内游离脯氨酸含量可增加10-100倍，并且游离脯氨酸积累量与逆境程度、植物的抗逆性有关。 用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波长下比色，从标准曲线上查出（或用回归方程计算）脯氨酸的含量。 1.2步骤 试剂：（1）25%茚三酮：茚三酮------------0.625g 冰乙酸------------15ml 6mol/L磷酸--------10ml 70°C水浴助溶； （2）6mol/L磷酸：85%磷酸稀释至原体积的2.3倍； （3）3%磺基水杨酸：磺基水杨酸------3g 加蒸馏水至------100ml 实验步骤： （1）称取0.1g样品放入研钵，加5ml 3%磺基水杨酸研磨成匀浆，100°C沸水浴15min； （2）冰上冷却，4000rpm离心10min； （3）提取液2ml+冰醋酸2ml+25%茚三酮2ml混合均匀，100°C沸水浴30min，冰上冷却； （4）加4ml甲苯混合均匀，震荡30s，静置30min； （5）以甲苯为空白对照，再520nm下测定吸光值。 1.3计算方法 脯氨酸含量（μg/gFW）＝ X * 提取液总量（ml）/ 样品鲜重（g）*测定时提取液用量（ml）*10^6 公式中：X-----从标准曲线中查得的脯氨酸含量（μg） 提取液总量---------------------------5ml 测定时提取液用量---------------------2ml 问题及质疑： 1.酸性体系下，脯氨酸与茚三酮加热反应后的最终产物为红色，再实验过程中，仅有少数时候能发现红色产物。原因有待确定。 2.经查看文献资料，反应步骤已经是优化的，没有问题。甲苯萃取脯氨酸与茚三酮的反应产物，消除了多余未反应的茚三酮，磺基水杨酸，提取液中其他杂质（如色素）以及PH变化
生理指标测定
生理指标测定_16种 1、冻害指数——3~5株观察形态 【４种常绿水生鸢尾抗寒性的初步研究】张京，2012 李刚，姜卫兵，翁忙玲，等．木兰科６种常绿树幼苗抗寒性的初步研究［Ｊ］．园艺学报，２００７，３４（３）：７８３－７８６． 描述叶色变化： 在最冷月( 2月中旬) , 所有供试树种均有不同程度的冻害表现, 乐东拟单性木兰受冻害最轻,只有部分植株的少量叶片有些许水渍状, 大部分植株完好无损, 冻害指数为041, 基本不受冻害;阔瓣含笑也长势良好, 有少部分叶片出现褐色水渍状, 冻害指数为14, 受轻度冻害; 金叶含笑受到了中度水平的冻害, 部分植株的叶片整个叶面呈现红褐色水渍状, 冻害指数为25; 红花木莲、醉香含笑和观光木受到了重度冻害, 大多数植株的部分叶片呈焦黄、褐色脱落, 有的整个植株呈萎蔫状,长势非常差, 冻害指数分别为3.2、3.9、4.3. 2、相对含水量 叶片相对含水量采用饱和称重法［21］测定。选取各处理部位一致、成熟完好的叶片迅速称其鲜重，再用蒸馏水浸泡8~24 h，使组织吸水达到饱和状态，取出后吸去表面水后立即称其饱和重，然后在105 ℃下杀青30min，在80 ℃下烘干至恒重（1h~24h），放在干燥器中冷却，称其烘干重。根据公式计算:LRWC( %) = [ (鲜重－干重) /(饱和重－干重) ] × 100%
3、光合参数（光合仪测定） 光合速率、CO2浓度、光合有效辐射、叶绿素 或用95%乙醇浸泡法，浸泡4~5d，测定叶绿素。《植物生理生化实验原理和技术》 4、膜质过氧化：相对电导率（略）、MDA MDA（丙二醛）的测定 试剂：三氯乙酸10% （TCA 溶液）：称取100g溶于1L 蒸馏水中； 0.6％硫代巴比妥酸溶液（6%TBA）：1.8g溶于300ml TCA 溶液中（加热溶解） 称取植物叶片0.3克, 先加入2ml TCA和少量石英砂研磨至匀浆，再加入4ml 10%三氯乙酸(TCA)进一步研磨（总体积为6ml），然后以4000g离心10min, 取上清液待测。吸取离心的上清液2ml(对照加2ml蒸馏水)，加入2ml 0.6% TBA，混匀物于沸水浴上反应15分钟，迅速冷却后再离心(在冰箱中冷却较快)。取上清液测定在532，600和450nm波长下比色。 公式C MDA (nmol L-1)＝[(A532－A600)-0.0571×(A450-A600)]/0.155计算MDA量（排除多糖干扰），用每克干（鲜）重中MDA的量表示MDA的含量，单位μmol g-1干（鲜）重或nmol g-1干（鲜）重。 1、含量计算 双组分光光度计法：已知蔗糖与TBA反应产物在450nm和532nm波长下的比吸系数分别为 85.40,7.40；MDA与 TBA显色反应产物在450nm波长下无吸收，其吸收系数为0，532nm下比吸 收系数为155，根据双组分光光度计法建立方程组，计算公式如下： C 1（mmol/L）=11.71 D 450 C 2 =[6.45(D 532 —D 600 ) — 0.56 D 450 ]X提取液总体积/测定时用的提 取液体积*样品鲜重 C 1:可溶性糖的浓度, C 2 为MDA的浓度, D 450 D 532 D 600 分别代表450,532,600nm下的消光度值. 参：Brege J G.Microsomal lipid peroxiodation. Methods in Ezymmology.1978,52:302-306 J.G. Buege and S.D. Aust, Microsomal lipid peroxidation. Methods Enzymol.52(1978), pp. 302–306. 注: 沸水浴时,可使用小试管,然后上部用保鲜膜包扎.(如橡皮筋) 附4.1 MDA、可溶糖含量—硫代巴比妥酸加热显色法 【原理】植物遭遇逆境胁迫或衰老过程中，由于自由基、活性氧的积累引起膜脂过氧化，产生脂质自由基，进一步诱发膜脂连续过氧化并导致蛋白质交联变性，而引起细胞损伤或死亡。MDA 是膜脂过氧化的最终产物，通过其含量的测定可了解膜脂氧化伤害的程度，比较不同植物抗逆性的差异。 在酸性和高温条件下，MDA可与硫代巴比妥酸（TBA）反应，生成红棕色的产物三甲川（3，5，5-三甲基恶唑2，4-二酮）。该产物在532nm处有最大吸收峰，测定反应产物在532nm处的光密度值，可计算出MDA含量。但植物组织中的可溶性糖亦与TBA产生颜色反应，其产物对532nm 光的吸收干扰测定。采用双组分光光度法及其计算式，可排除干扰，计算出MDA的含量。 【器材】分光光度计离心机水浴锅研钵剪刀试管