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韵涵生物科技有限公司专业专门提供各种细胞、原代细胞、肿瘤细胞、肿瘤耐药细胞、正常遗传变异细胞。配套专业培养基：上皮细胞、内皮细胞、平滑肌细胞、微血管、神经元细胞、系膜细胞、胶质细胞、成纤维细胞、心肌细胞、低血清无血清无动物成分细胞培养基等等；传统的常用培养基：DMEM、IMDM、M199、CMRL、BME、MEM等等；以及细胞培养用的相关试剂：赖氨酸、血清、胎牛血清、细胞冻存培养基、消化液、中和液等等。
一、原代细胞
第一篇：人正常细胞
https://www.wendangku.net/doc/2110239821.html,S Cell System
1000 HBMEC (Human Brain Microvascular Endothelial Cells) 人脑微血管内皮细胞
1100 HBVSMC (Human Brain Vascular Smooth Muscle Cells) 人脑血管平滑肌细胞
1200 HBVP (Human Brain Vascular Pericytes) 人脑血管周边细胞
1300 HCPEC (Human Choroid Plexus Endothelial Cells) 人脉络丛内皮细胞
1310 HCPEpiC (Human Choroid Plexus Epithelial Cells) 人脉络丛上皮细胞
1320 HCPF (Human Choroid Plexus Fibroblasts) 人脉络丛纤维原细胞
1400 HMC (Human Meningeal Cells) 人脑膜细胞
1520 HN (Human Neurons) 人神经元细胞
1530 HCGC (Human Cerebellar Granule Cells) 人小脑颗粒细胞
1600 HOPC (Human Oligodendrocyte Precursor Cells) 人少突先驱胶质细胞
1610 HOPC-os (Human Oligodendrocyte Precursor Cell-oligospheres) 人少突先驱胶质细胞（状态：球形）
1800 HA (Human Astrocytes) 人星形胶质细胞
1810 HAc (Human Astrocytes-cerebellar) 人小脑星形胶质细胞
1900 HM (Human Microglia) 人小胶质细胞
2.PNS Cell System700 HSC (Human Schwann Cells) 人雪旺细胞
1710 HPNC (Human Perineurial Cells) 人周神经细胞
3.Cardiac Cell System
6000 HCMEC (Human Cardiac Microvascular Endothelial Cells) 人心脏微血管内皮细胞
6100 HAEC (Human Aortic Endothelial Cells) 人大动脉内皮细胞
6110 HASMC (Human Aortic Smooth Muscle Cells) 人大动脉平滑肌细胞
6200 HCM (Human Cardiac Myocytes) 人心肌细胞
6210 HCMa (Human Cardiac Myocytes-adult) 成人心肌细胞
6300 HCF (Human Cardiac Fibroblasts) 人心脏纤维原细胞
6310 HCFav (Human Cardiac Fibroblasts-adult ventrical) 人心脏纤维原细胞（来源：成人心室）6320 HCFaa (Human Cardiac Fibroblasts-adult atrial) 人心脏纤维原细胞（来源：成人心房）Coming Soon：HCVSMC (Human Cardiac Vascular Smooth Muscle Cells)! 人心血管平滑肌细胞4.Pulmonary Cell System(肺部）
3000 HPMEC (Human Pulmonary Microvascular Endothelial Cells) 人肺微血管内皮细胞
3100 HPAEC (Human Pulmonary Artery Endothelial Cells) 人肺动脉内皮细胞
3110 HPASMC (Human Pulmonary Artery Smooth Muscle Cells) 人肺动脉平滑肌细胞
3120 HPAF (Human Pulmonary Artery Fibroblasts) 人肺动脉纤维原细胞
3200 HPAEpiC (Human Pulmonary Alveolar Epithelial Cells) 人肺齿槽上皮细胞
3210 HBEpiC (Human Bronchial Epithelial Cells) 人支气管上皮细胞
3300 HPF (Human Pulmonary Fibroblasts) 人肺纤维原细胞
3400 HBSMC (Human Bronchial Smooth Muscle Cells) 人支气管平滑肌细胞
3410 HTSMC (Human Tracheal Smooth Muscle Cells) 人气管平滑肌细胞
5.Hepatic Cell System（肝部细胞系）
5000 HHSEC (Human Hepatic Sinusoidal Endothelial Cells) 人肝窦状腺内皮细胞
5100 HIBEC (Human Intrahepatic Biliary Epithelial Cells) 人肝胆上皮细胞
5200 HH (Human Hepatocytes) 人肝细胞
5300 HHSteC (Human Hepatic Stellate Cells) 人肝星状细胞
Coming Soon：HHSC (Human Hepatic Stem Cells)! 人肝干细胞
Renal Cell System（肾部细胞系）
4000 HRGEC (Human Renal Glomerular Endothelial Cells) 人肾小球内皮细胞
4100 HRPTEpiC (Human Renal Proximal Tubular Epithelial Cellls) 人肾最接近管状上皮细胞4110 HRCEpiC (Human Renal Cortical Epithelial Cells) 人肾皮层上皮细胞
4120 HREpiC (Human Renal Epithelial Cells) 人肾上皮细胞
4200 HRMC (Human Renal Mesangial Cells) 人肾系膜细胞
6.Gastrointestinal Cell System（胃肠部位细胞系）
2700 HEEC (Human Esophageal Epithelial Cells) 人食管上皮细胞
2710 HESMC (Human Esophageal Smooth Muscle Cells) 人食管平滑肌细胞
2900 HIMEC (Human Intestinal Microvascular Endothelial Cells) 人肠微血管内皮细胞
2910 HISMC (Human Intestinal Smooth Muscle Cells) 人肠平滑肌细胞
2940 HCSMC (Human Colonic Smooth Muscle Cells) 人结肠平滑肌细胞
Coming Soon：HGSMC (Human Gastric Smooth Muscle Cells)! 人胃平滑肌细胞7.Dermal Cell System（真皮细胞系）
2000 HDMEC (Human Dermal Microvascular Endothelial Cells) 人真皮微血管内皮细胞2100 HEK (Human Epidermal Keratinocytes) 人表皮角化细胞
2200 HEM (Human Epidermal Melanocytes-light) 人表皮亮黑素细胞
2210 HEM (Human Epidermal Melanocytes-medium) 人表皮中黑素细胞
2220 HEM (Human Epidermal Melanocytes-dark) 人表皮黑黑素细胞
2300 HDF-f (Human Dermal Fibroblasts-fetal) 胎儿真皮纤维原细胞
2310 HDF-n (Human Dermal Fibroblasts-neonate) 婴儿真皮纤维原细胞
2320 HDF-a (Human Dermal Fibroblasts-adult) 成人真皮纤维原细胞
Coming Soon：HELC (Human Epidermal Langerhans' Cells)!
8.Adipose Cell System（脂肪细胞系）
7210 HPA-v (Human Preadipocytes-visceral) 人前脂肪细胞（来源：内脏）
7220 HPA-s (Human Preadipocytes-subcutaneous) 人前脂肪细胞（来源：皮下）
9.Ocular Cell System（视觉部位细胞系）
6510 HCEpiC (Human Corneal Epithelial Cells) 人角膜上皮细胞
6520 HK (Human Keratocytes) 人角膜细胞
6540 HRPEpiC (Human Retinal Pigment Epithelial Cells) 人视网膜色素上皮细胞
6550 HLEpiC (Human Lens Epithelial Cells) 人晶状体上皮细胞
6560 HIPEpiC (Human Iris Pigment Epithelial Cells) 人虹膜色素上皮细胞
6570 HConF (Human Conjunctival Fibroblasts) 人结膜纤维原细胞
6580 HNPCEpiC (Human Non-Pigment Ciliary Epithelial Cells) 人非色素睫毛上皮细胞Coming Soon：HCEC (Human Corneal Endothelial Cells)! 人角膜内皮细胞
10.Urethral Cell System（尿道细胞系）
4310 HBdSMC (Human Bladder Smooth Muscle Cells) 人膀胱平滑肌细胞
Coming Soon：HBdMEC (Human Bladder Microvascular Endothelial Cells)! 人膀胱微血管内皮细胞11.Reproductive Cell System（生殖细胞系）
7100 HAEpiC (Human Amniotic Epithelial Cells) 人羊膜上皮细胞
7120 HAF (Human Villous Trophoblasts) 人长茸毛滋养层
7130 HVT (Human Villous Mesenchymal Fibroblasts) 人长茸毛间叶纤维原细胞
Coming Soon：HEEpiC (Human Endometrial Epithelial Cells)! 人子宫内膜上皮细胞12.Lymphatic Cell System（淋巴细胞系）
2500 HLEC (Human Lymphatic Endothelial Cells) 人淋巴内皮细胞
2530 HLF (Human Lymphatic Fibroblasts) 人淋巴纤维原细胞
Coming Soon：HLBVEC (Human Lymphatic Blood Vessel Edothelial Cells)! 人淋巴血管内皮细胞13.Bone Cell System（骨细胞系）
4600 HCO (Human Calvarial Osteoblasts) 人颅盖造骨细胞Coming Soon：HBMEC (Human Bone Marrow Endothelial Cells)! 人骨髓内皮细胞
14.Skeletal Muscle Cell System（骨骼肌细胞系）
3500 HSkMC (Human Skeletal Muscle Cells) 人骨骼肌细胞
3510 HSkMSC (Human Skeletal Muscle Satellite Cells) 人骨骼肌卫星细胞
3520 HSkMM (Human Skeletal Muscle Myoblasts) 人骨骼肌成肌细胞
15.Oral Cell System（口部细胞系）
2610 HOK (Human Oral Keratinocytes) 人口角化细胞
2620 HGF (Human Gingival Fibroblasts) 人齿龈纤维原细胞
2630 HPDLF (Human Periodontal Ligament Fibroblasts) 人齿根膜韧带纤维原细胞
16.Hair Cell System（毛发细胞系）
2400 HHDPC (Human Hair Dermal Papilla Cells) 人毛发真皮乳状突起细胞
2410 HHGMC (Human Hair Germinal Matrix Cells) 人毛发真皮矩阵细胞
2420 HHORSC (Human Hair Follicular Outer Root Sheath Cells) 人毛发小囊外根鞘细胞
2430 HHIRSC (Human Hair Follicular Inner Root Sheath Cells) 人毛发小囊内根鞘细胞
17.Umbilical Cord Cell System（脐带细胞系）
8000 HUVEC (Human Umbilical Vein Endothelial Cells) 人脐静脉内皮细胞
8010 HUAEC (Human Umbilical Artery Endothelial Cells) 人脐动脉内皮细胞
8020 HUVSMC (Human Umbilical Vein Smooth Muscle Cells) 人脐静脉平滑肌细胞
8030 HUASMC (Human Umbilical Artery Smooth Muscle Cells 人脐动脉平滑肌细胞
19.Mesenchymal stem cell system（间叶干细胞系）
7500 HMSC-bm (Human Mesenchymal Stem Cells-bone marrow) 人骨髓间叶干细胞
7510 HMSC-ad (Human Mesenchymal Stem Cells-adipose) 人脂肪间叶干细胞
7520 HMSC-he (Human Mesenchymal Stem Cells-hepatic) 人肝间叶干细胞
Coming Soon：HMSC-cb (Human mesenchymal stem cells-cord blood)!
20.Endothelial Cells（内皮细胞）
6530 HREC (Human Retinal Endothelial Cells) 人视网膜内皮细胞
Coming Soon：Human Dermal Vascular Smooth Muscle Cells! 人真皮血管平滑肌细胞
第三篇Animal Cell
R1200 RPC (Rat Pituitary Cells) 大鼠垂体细胞
R1400 RMC (Rat Meningeal Cells) 大鼠脑膜细胞
R1510 RN-r (Rat Neurons-raphe) 大鼠脊神经元细胞
R1520 RN-sn (Rat Neurons-substantia nigra) 大鼠黑质神经元细胞
R1530 RN-s (Rat Neurons-striatal) 大鼠条纹神经元细胞
R1540 RN-h (Rat Neurons-hippocampal) 大鼠海马趾神经元细胞
R1550 RN-c (Rat Neurons-cortical) 大鼠皮层神经元细胞
R1560 RGC (Rat Granule Cells) 大鼠颗粒细胞
R1570 RN-vsc (Rat Neurons-ventral spinal cord) 大鼠腹侧脊髓神经元细胞
R1580 RN-dsc (Rat Neurons-dorsal spinal cord) 大鼠脊髓神经元细胞
R1700 RSC (Rat Schwann Cells) 大鼠雪旺细胞
R1800 RA (Rat Astrocytes) 大鼠星形胶质细胞
R1810 RA-c (Rat Astrocytes-cerebellar) 大鼠小脑星形胶质细胞
R1820 RA-h (Rat Astrocytes-hippocampal) 大鼠海马趾星形胶质细胞
R1900 RM (Rat Microglia) 大鼠小胶质细胞
R2530 RLF (Rat Lymphatic Fibroblasts) 大鼠淋巴纤维原细胞
R4100 RRTEpiC (Rat Renal Tubular Epithelial Cells) 大鼠肾导管上皮细胞
R6200 RCM (Rat Cardiac Myocytes) 大鼠心肌细胞
Coming Soon：RSC (Rat Schwann Cells)! 大鼠雪旺细胞
第四篇传统和特殊培养基
1.Classical media：传统培养基
MEM
M199
DMEM
Ham's F10 & F12
DMEM/F12
RPMI 1640
IMDM
2.Low Serum Medium低血清培养基
1801 AM：Astrocyte Medium 星形胶质细胞培养基
6201 CMM：Cardiac Myocyte Medium 心肌细胞培养基
1001 ECM：Endothelial Cell Medium 内皮细胞培养基
4101 EpiCM：Epithelial Cell Medium 上皮细胞培养基
2301 FM：Fibroblast Medium 纤维原细胞培养基
5201 HepM：Hepatocyte Medium 肝细胞培养基
2201 MelM：Melanocyte Medium 黒素细胞培养基
1401 MenCM：Meningeal Cell Medium 脑膜细胞培养基
4201 MCM：Mesangial Cell Medium 系膜细胞培养基
7501 MSCM：Mesenchymal Stem Cell Medium 间叶干细胞培养基
1901 MM：Microglia Medium 小胶质细胞培养基
1621 OM：Oligodendrocyte Medium 少突胶质细胞培养基
1631 OPCDM：Oligodendrocyte Precursor Cell Differentiation Medium 少突先驱胶质细胞区别培养基
4601 ObM：Osteoblast Medium 造骨细胞培养基
1201 PM：Pericyte Medium 周边细胞培养基
7211 PreAM：Preadipocyte Medium 前脂肪细胞培养基
1701 SCM：Schwann Cell Medium 雪旺细胞培养基
3501 SkMCM：Skeletal Muscle Cell Medium 骨骼肌细胞培养基
1101 SMCM：Smooth Muscle Cell Medium 平滑肌细胞培养基
5301 SteCM：Stellate Cell Medium 星状细胞培养基
7121 TM：Trophoblast Medium 滋养层培养基
3.Serum-free Medium无血清培养基
3201 AEpiCM：Alveolar Epithelial Cell Medium 齿槽上皮细胞培养基
3211 BEpicM：Bronchial Epithelial Cell Medium 支气管上皮细胞培养基
2311 FMsf：Fibroblast Medium 纤维原细胞培养基
2101 KM：Keratinocyte Medium 角化细胞培养基
1521 NM：Neuronal Medium 神经元细胞培养基
1611 OsM：Oligosphere Medium 球状少突细胞培养基
1601 OPCM：Oligodendrocyte Precursor Cell Medium 少突先驱胶质细胞培养基
4.Animal Component-free Medium 无动物成分培养基
2321 FMacf：Fibroblast Medium 纤维原细胞培养基
2111 KMacf：Keratinocyte Medium 角化细胞培养基
第六篇Reagents
Cat.No. Code Description Quantity Price 0010 FBS Fetal Bovine Serum, Human Cell Tested 10 ml $14.00
胎牛血清（人细胞测试）
0025 FBS Fetal Bovine Serum, Human Cell Tested 25 ml $24.00 胎牛血清（人细胞测试）
0500 FBS Fetal Bovine Serum, Human Cell Tested 500 ml $270.00 胎牛血清（人细胞测试）
0103 T/E Trypsin/EDTA Solution 100 ml $15.50 胰蛋白酶-EDTA消化液
0113 TNS Trypsin Neutralization Solution 100 ml $16.50 胰蛋白酶中和液
0123 NECDS Non Enzymatic Cell Dissociation Solution 100 ml $15.50 非酶细胞裂解液
0133 CFM Cell Freezing Medium 50 ml $34.50 细胞冻存培养基
0143 SFCFM Serum-Free Cell Freezing Medium 50 ml $34.50 无血清细胞冻存培养基
0203 TB Trypan Blue (0.4%) 50 ml $9.50 台盼蓝
0303 DPBS Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline 500 ml $11.50 Dulbecco's磷酸缓冲盐
0313 HBSS Hank's Balanced Salt Solution 500 ml $11.50 Hank's平衡盐溶液
0403 PLL Poly-L-lysine, 1 mg/ml (500X) 1 ml $11.50 多聚赖氨酸
0413 PLL Poly-L-lysine, 10 mg/ml 1 ml $50.50 多聚赖氨酸
0503 P/S Penicillin/Streptomycin Solution 5 ml $10.50
青链霉素溶液
0513 CCGW Cell Culture Grade Water 500 ml $9.50 细胞培养级超纯水
0703 BPE Bovine Pituitary Extract 25 mg $35.00 牛垂体抽提物
0713 BPE Bovine Pituitary Extract 100 mg $125.00 牛垂体抽提物
0803 ITS Insulin-Transferrin-Selenium (100X) 10 ml $25.10 胰岛素铁硒传递蛋白
0813 L-Glu L-Glutamine Solution (200mM) 100 ml $15.10 L-谷氨酰胺
第七篇Molecular biology
1.DNA：Normal human primary cell cDNA 正常人主要细胞cDNA
2.RNA：Normal Human Primary Cell total RNA 正常人主要细胞总RNA
3.Proteins：Normal Human Primary Cell Lysate 正常人主要细胞溶解产物
人类肿瘤细胞
系统细胞名称中文名称
头颈部肿瘤AM 人腺样囊性癌细胞（高转移）
A2 人腺样囊性癌细胞
Hep-2 人喉表皮癌细胞
KB 人口腔上皮癌细胞
CNE-2Z 人鼻咽癌母系细胞
肺癌A549 人肺腺癌细胞
肺793 人肺腺癌细胞
SPC-A-1 人肺腺癌细胞
H125 人肺癌细胞
NCI-H460 人肺癌细胞
LTEP-Sm1 人小细胞肺癌细胞(SCLC)
NCI-H446 人小细胞肺癌细胞
801-D 人巨细胞性肺癌细胞
消化系统肿瘤HT-29 人结肠癌细胞
SW620 人结肠癌细胞
SW480 人结肠癌细胞
LOVO 人结肠癌细胞
HCT-8 人结肠癌细胞
COLO205 人结肠癌细胞
Ls-174-T 人结肠腺癌细胞
CL187/CCL187 人大肠癌细胞
PA319 人大肠癌细胞
AsPc 人胰腺癌细胞
HepG-2 人肝癌细胞
QGY-7701 人肝癌细胞
Bel-7402 人肝癌细胞
SMMC-7721 人肝癌细胞
BGC-803 人胃癌细胞
SGC-7901 人胃癌细胞
MGC-803 人胃癌细胞
BGC-823 人低分化前胃癌细胞
CaEs-17 人食管癌细胞
妇科肿瘤MCF-7 人乳腺癌细胞
ZR75-1 人乳腺癌细胞
MDA-MB-435 人乳腺癌高转移细胞
BCaP-37 人乳腺癌细胞
LCC1 人乳腺癌细胞
MX-1 人乳腺癌细胞
T47D 人乳腺癌细胞
A2780 人卵巢癌细胞
OVCaR-3 人卵巢癌细胞
HO-8910 人卵巢癌细胞
COC1 人卵巢癌细胞
HeLa 人宫颈癌细胞
SiHa 人宫颈癌细胞
泌尿系统肿瘤PC-3 人前列腺癌细胞PC-3M 人前列腺癌细胞
DU-145 人前列腺癌细胞
EJ 人膀胱癌细胞
Ketr-3 人肾癌细胞
神经系统肿瘤TG-905 人脑胶质母细胞瘤细胞U251 人神经胶质瘤细胞
CRT 人神经胶质瘤细胞
Y79 人视网膜母细胞
白血病JK(Jurkat) 人淋巴细胞瘤细胞
K562 人白血病细胞
HL-60 人白血病细胞
NB4 急性早幼粒细胞白血病细胞
U937 人白血病细胞
肉瘤OS－732 人骨肉瘤细胞
HT1080 人成纤维肉瘤细胞
黑色素瘤MV3 人黑色素瘤细胞
A375 恶性黑色素瘤细胞
M14 人黑色素瘤细胞
横纹肌癌A673 人横纹癌细胞
二、动物肿瘤细胞
系统细胞名称中文名称
白血病Friend 小鼠红白血病细胞
M1 小鼠白血病细胞
L1210 小鼠白血病细胞
P388 小鼠白血病细胞
NFS-60 小鼠白血病细胞G-CSF依赖性
L929 小鼠纤维母细胞
P815 小鼠肥大细胞癌细胞
肺癌Lewis 小鼠肺癌
腹水瘤EAC 小鼠艾氏腹水癌细胞
乳腺癌MA-891 小鼠乳腺癌高转移细胞
骨髓瘤SP2/0 小鼠骨髓瘤细胞
P3-X63-Ag8.653 小鼠骨髓瘤细胞
淋巴瘤Yac-1 小鼠淋巴瘤细胞
黑色素瘤B16F10 小鼠黑色素瘤高转移细胞B16BL6 小鼠黑色素瘤细胞
肝癌H22 小鼠肝癌
神经系统肿瘤C6 大鼠神经胶质瘤细胞PC12 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞
三、正常细胞
细胞名称中文名称
VE 人血管内皮细胞
EC-304 人血管内皮细胞
HELF 人胚肺成纤维细胞
293 人胚肾细胞
293A 人胚肾细胞
L-O2 正常肝细胞
L929 小鼠成纤维细胞
Ana-1 小鼠巨噬细胞
CHL 中国仓鼠肺细胞
CHO 中国仓鼠卵巢细胞
Vero 绿猴肾细胞
COS-7 SV40 转化的非洲绿猴肾
MDCK 狗肾细胞
四、肿瘤耐药细胞
细胞名称中文名称
MCF/Adr 人乳腺癌阿霉素耐药细胞株
LCC9 人乳腺癌抗雌激素耐药株
LCC2 人乳腺癌Tamoxifen耐药株
MX-1/T 人乳腺癌紫杉醇耐药株
A549/T 人肺腺癌紫杉醇耐药株
BEL/FU 人肝癌氟尿嘧啶耐药株
HCT-8/V 人结肠癌长春新碱耐药株
KB/V 人口腔上皮癌长春新碱耐药株
肿瘤细胞培养方法和培养基
肝癌细胞培养 一、培养基 1、RPMI-1640+10%胎牛血清培养基 2、DMEM+15%胎牛血清培养基 成分表
二、实验前准备工作: 操作者的皮肤、培养瓶的盖和外壁常用酒精消毒。用紫外线消毒实验室空气、工作台面和一些不能使用其他方法消毒的培养器皿。进无菌室前或做完实验后，均应开灯照射30min进行消毒。紫外线照射60min可以消灭空气中大部分细菌。 1、玻璃器皿的清洗灭菌（5％盐酸溶液、重鉻酸钾120ml、硫酸200ml、蒸馏水200ml）：（1）浸泡:新使用或重复使用的玻璃器皿须经5％盐酸溶液或自来水浸泡过夜或煮沸30min，水洗。以去除新购进玻璃器皿所带有灰尘、铅、砷等物质，并消除其弱碱性。 （2）刷洗:浸泡后用软毛刷和优质的洗洁精进行刷洗。刷洗后经行烘干。 （3）酸浸:刷洗后的玻璃制品酸浸前须适当晾干或烘干，以免造成酸浸液稀释，影响效果。将玻璃制品完全浸泡入清洁液中24h。清洁液具有极强酸蚀作用，操作过程需戴防护用具。（4）冲洗、烘干备用:浸酸后的玻璃器皿先用自来水充分冲洗，吸管需冲洗10min，器皿需每瓶灌满自来水、倒掉反复10次以上，不留任何酸浸液残迹，然后用蒸馏水漂洗2～3次，将清洗好的玻璃器皿放入烘干箱中，烘干后的玻璃器皿要求干净透明，无油烟，不能残留任何有害物质及化学药品等。 （5）包装灭菌:器材经清洗烤干或晾干后，先应严格包装，然后再行消毒灭菌处理，以防止消毒灭菌后再次遭受污染。包装材料常用包装纸、牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒、玻璃或金属制吸管筒、纸绳等。
2、橡胶制品清洗消毒： 0.5mol/L NaOH煮沸15分钟，流水冲洗，0.5mol/L HCl煮沸15分钟，流水冲洗，自来水煮沸2次，蒸馏水煮沸20分钟，50℃烤干备用 3、塑料制品的清洗消毒（瓶盖、离心管）： 使用器皿后立即用清水清洗，浸于自来水过夜，用纱布或棉签和50℃清洗液刷洗，流水冲洗，晾干，浸于清洁液15分钟，流水冲洗（15－20遍）,蒸馏水浸洗三次，双蒸水泡24小时，晾干备用。 三、细胞复苏： 冻存细胞保存管保存在液氮中（-196℃），取出保存管后必须快速冷冻，以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害，致使细胞死亡。在冻存细胞的保存管中含有对细胞有毒害的成分DMSO,故在解冻应马上将其去除。在冷冻活化前应在无菌台上将细胞培养液配好，然后将保存管从液氮中取出，放于37℃的温水中快速使细胞解冻。解冻后悬液快速移入培养液中混匀，离心去掉上清液，再加入细胞培养液。 实验人员穿上无菌实验室操作服用酒精喷于手上消毒，然后就位用酒精棉球擦拭实验台（1）取一15ml离心管用滴管在其内滴加5--9ml培养液（取8ml）。 （2）从液氮罐中取出冻存管，并迅速放入37℃水浴，不时摇动，使其急速融化，30～60s 内完成。 （3）冻存管用70％酒精擦拭消毒后，打开盖子，用吸管将细胞悬液转移入上述离心管中（用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来）。 （4）低速离心(1000r／min) 5min，去上清后再用8ml培养液再清洗离心一次。 （5）离心后倒掉上清液，在离心管中滴加3ml培养液（RPMI-1640），混匀（可用滴管轻柔吹打）。 （6）将离心管中的混合液转移到培养瓶中，并在培养瓶中滴加15滴10%小牛血清，盖上瓶盖，标好细胞种类和日期、培养人姓名等，将培养瓶平放，置于37°C培养箱中培养。2-3天换一次培养基。 四、细胞传代： 当观察到培养瓶中细胞铺满度为90%时（细胞生长处于对数期时），解冻复活成功后的细胞要进行分离培养，否则细胞会因生存空间不足或密度过大，营养障碍，影响细胞生长。细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶中培养的过程称之为传代培养。传代细胞细胞株的最大利处在于提供了大量持久的实验材料，便于实验。 （1）试验台的消毒工作准备好，弃去旧培养液，用PBS液（不含钙，镁离子）洗1-2次，以免剩余培养液影响胰蛋白酶活性。（细胞贴壁生长）。 （2）向瓶内加入1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mEDTA），置于37℃孵箱或室温（25℃温度）下进行消化，1--3min后把培养瓶放在倒置显微镜下进行观察，当发现胞质回缩、细胞间隙增大后，应立即中止消化（将培养瓶翻转过来，以保证细胞没有脱壁）。 备注：若细胞没有脱壁，生长良好，则直接倒掉消化液，加培养液8ml，离心收集细胞；若发现很多细胞已解离已脱壁（即解离过度），则直接加培养液进行离心收集细胞。 （4）倒出消化液，向瓶内用滴管加入培养液少量（约2ml），轻轻转动培养瓶，把残留胰蛋白液消化液冲掉，然后再加3ml培养液+15滴小牛血清。 （5）使用吸管，吸取瓶内培养液，按顺序反复轻轻吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。吹打时动作要轻柔，以防用力过猛损伤细胞。 （6）将准备好的细胞悬液转入离心管中，离心(1000r／min) 5min。 （7）将离心后离心管中液体倒掉，在离心管中加入3ml培养液，并反复吹打细胞，制成细胞悬液。
抑制肿瘤细胞增殖的药物筛选方法
抑制肿瘤细胞增殖的药物筛选方法 09级生科3班余振洋200900140156 一、【实验原理】 1．关于恶性肿瘤和抗肿瘤药物： 恶性肿瘤是一种常见病，严重威胁着人类的生存质量，被称为人类健康的第一杀手。多年来人类一直在不断的进行抗肿瘤药物的研究，抗肿瘤药物的筛选是整个研究过程中很重要的个环节，而进行药物的筛选首先离不开合理的筛选方法和系统。寻找选择性强、对实体瘤有效的新型抗肿瘤药物，是摆在抗肿瘤药物研究人员面前的重要任务。世界各国对抗肿瘤药物的筛选都非常重视，投入了大量的人力、物力、财力，每年都有大量的化合物(合成药、天然产物和微生物发酵产物)待筛，抗肿瘤药物筛选方法的发展经历了一个探索的过程。 8O年代中期以前，普遍采用的筛选方法是以体内小鼠白血病／淋巴瘤模型P388和L1210为基础的 J，所有化合物在进一步的临床研究之前必须通过这种小鼠肿瘤模型的筛选。即小鼠白血病P388和L1210作为第一轮初筛，能通过第一轮初筛的化合物才能被允许进入第二轮筛选。这种方法有一个很明显的缺陷就是一些在临床上有活性的药物将被筛选掉，无法保证所有具有抗肿瘤作用的药物都能通过筛选。鉴于以前的筛选方法存在较大的缺陷，1985年之后以NCI为首的一些研究单位普遍开始采用针对疾病的筛选方法来代替针对化合物的筛选方法，即放弃体内小鼠筛选，代之为体外代表各种常见实体瘤的人类肿瘤细胞株筛选。这种筛选系统是一种高通量的抗肿瘤筛选体系，其主要优势有两点：其一是多种细胞株初筛有可能筛选出对特殊的人类肿瘤或对特殊组织亚型有活性的物质；其二是这种体外筛选尤其适合于复杂天然产物提取物中有效成份的证实，过去动物筛选需较大量的天然产物，而现在天然产物的需要量就大大减少，可以指导有效成份的进一步分离纯化，使得从天然产物中发现新的抗肿瘤药物更加便利。 2．关于筛选方法： 下面为现阶段较为普遍采用的一些抗肿瘤药物的筛选方法的实验原理。 1）以端粒酶活性为作用靶点筛选抗肿瘤药物 端粒是染色体特殊结构，起着保护染色体的完整和稳定性的作用，端粒酶是一种核糖核蛋白返转录酶，由RNA和蛋白质组成，可以以自身的RNA为模板合成端粒末端。已发现在正常的体细胞和良性肿瘤组织中端粒酶活性是阴性，而在人体恶性肿瘤组织和人的肿瘤细胞株中都表达了很高的活性。因此，认为端粒酶与恶性肿瘤的发生发展有密切的关系，有可能成为肿瘤治疗的靶点。 2）应用快速荧光素测定法筛选抗肿瘤药物 快速荧光素测定法是一种近几年发展起来的应用非常广泛的体外药物敏感性测定方法，其原理为采用一些特殊的荧光染料，对细胞的特定成份进行染色或标记。或通过细胞酶的作用使无荧光性的材料分解或转换为荧光材料，通过测定荧光强度从而测定出活细胞的量。现在普遍采用一种特殊的荧光染 FDAL1u(Fluoreseein diacetate)，在正常情况下它不具有荧光，但当它加人到具有完整细胞膜的肿瘤细胞的营养液中时，由于细胞分泌的水解酶的作用，FDA
肿瘤细胞培养(完整版)
第6章肿瘤细胞的培养 肿瘤细胞培养是研究癌变机理、抗癌药的敏感性、肿瘤细胞和癌分子生物学特性的重要手段。癌细胞是比较容易培养的细胞，当前所建立的细胞系中癌细胞是最多的。应用体外细胞培养技术进行肿瘤研究具有许多优点： (1)可免受机体内环境因素的影响，避免了个体差异性，便于探索各种物理、化和生物 因素对肿瘤细胞生命活动的影响。 (2)既便于从细胞水平上研究肿瘤细胞的结构与功能，又便于从基因及分子水平上研究 癌变的发生机理； (3)可长期传代、保存，便于观察肿瘤细胞生物学特性和遗传行为的改变。 (4)可用于快速筛选抗癌药物和研究耐药机理。 (5)研究周期短，比较经济。 但是它也有缺点，如长期培养可使细胞生物学特性发生改变；体外实验所得的结果不能完全代表体内的情况，应与体内试验结合研究更为合理等。 一、肿瘤细胞培养的生物学特性 1、形态和性状 形态不规则，细胞界限清晰，伸展较差，核膜、核仁轮廓明显，核仁多、核浆丰富。折光性强，电镜观察细胞表面微绒毛多而细密，与肿瘤细胞具不定向运动和铺着不依赖性有关。 2、生物特性 癌细胞在无血清或低血清(2%～5%)时仍能生长，营养要求不高，因能自分泌促增殖因子，在软琼脂培养时单个细胞能形成集落，生长方向性消失，再加上失去了接触抑制，癌细胞数量增多时可呈多层重叠生长，细胞饱和密度大，有丰富的三极有丝分裂，分裂指数高，细胞倍增周期短。 3、永生性 永生性也称不死性，在体外培养中表现为可无限制传代而不凋亡(Apoptosis)，体外培养的肿瘤细胞系(株)都表现有这种特性。但体外培养的永生性和体内肿瘤的恶性(包括侵润性)是两种性状，受不同基因调控的，因恶性肿瘤多数在体外培养时并不那么容易获得成功，生长增殖能力并不旺盛，有时只能传若干代，说明体外培养的永生性可在体外培养后获得的。另外，体外培养的许多细胞系，如NIH3T3、Rat-1 10T1/2等均具有永生性而无恶性。但两者有相关性，永生性可能是细胞恶性变的某一阶段。 4、侵润性 侵润性是肿瘤细胞扩张性增殖行为，体外培养的肿瘤细胞仍保持有这种特性，当与正常组织混合培养时，能侵润入其他正常组织中，甚至能穿透人工隔膜。 5、异质性 所有肿瘤细胞都是由增殖能力、遗传性、起源、周期状态等性状不同的细胞组成，属于异质性，其中有的衰老、退化，有的处于周期阻滞状态，只有那些处于活跃增殖的肿瘤干细胞才是支持肿瘤生长的成分，肿瘤干细胞易于生长增殖，分离培养干细胞的方法称干细胞培养(有干细胞系和数个亚系组成)。
生物奥赛细胞生物学及生物化学练习题带答案与解析
细胞生物学及生物化学练习题 1.下列细胞器，光学显微镜下能看到的是( )。 A．核糖体 B.内质网 C.叶绿体 D.A、B、C都不是 2.将小麦种子浸在红墨水中10 min，然后取出。将种子洗净纵向剖开，发现胚白色，而胚乳红色。这说明( )。 A.胚成活、胚乳失去活性 B.胚、胚乳都成活 C.胚死亡、胚乳成活 D.不能判断是否成活 3.生物膜的脂类分子是靠什么键聚集在一起形成磷脂双分子层结构的( )。. A.氢键 B.二硫键 C.疏水键 D.离子键 4.下列关于动物细胞膜上Na+-K+泵的描述正确的是( )。 A.具有ATP酶的活性 B.消耗1分子ATP向胞外泵出2钠离子，向胞内泵入2个钾离子 C.消耗1分子ATP向胞外泵出3个钠离子，向胞内泵入2个钾离子 D. Na+-K+泵在动物细胞膜上可形成离子通道，钠离子和钾离子可选择性地透过 5.线粒体内膜上具有什么酶系统( ) 。 A.糖酵解 B.过氧化氢 C.三羧酸循环 D.电子传递链 6.肝细胞的解毒作用主要是通过什么结构中的氧化酶系进行的()。 A.线粒体 B.叶绿体 C.细胞质膜 D.光面内质网 7.下列对溶酶体功能的描述不正确的是( )。 A.分解消化来自细胞外的物质 B.溶解细胞内由于生理或病理原因破损的细胞器 C.自身膜破裂，导致细胞自溶而死亡 D.使毒性物质失活 8.下列哪一类动物细胞中高尔基体最为丰富( )。 A.随意肌细胞 B.腺细胞 C.红细胞 D.白细胞 9.真核细胞细胞质中的核糖体( )。 A.与细菌的核糖体大小、组成相同 B.较细菌的核糖体大，但组成相似 C.较细菌的核糖体小，组成不同 D.与细菌的核糖体大小相同，但组成完全不同 10. (2007年全国联赛题)在真核细胞中具有半自主性的细胞器为( )。 A.高尔基体 B.内质网 C.线粒体 D.质体 E.溶酶体 11.(2007年全国联赛题)巴氏小体是( )。 A.端粒 B.凝集的X染色体 C.随体 D.巨大染色体 12.端粒的作用是()。 A.它们保护染色体使其免于核酸酶的降解 B.它们能防止染色体之间的末端融合 C.它们是细胞分裂“计时器” D.以上都正确 13.下列四对名词中，哪一对的表述是合适的( )。 A.叶绿体—贮藏酶 B.过氧化(酶)体—细胞中的转运作用 C.核仁—核糖体亚基的组装部位 D.溶酶体—细胞 中的发电站 14.（2007年全国联赛题)减数分裂时，等位基因的DNA片段的交换和重组通常发生在( )。 A.偶线期 B.粗线期 C.双线期 D.终变期 15.机体中寿命最长的细胞是( )。 A.红细胞 B.神经细胞 C.表皮细胞 D.上皮细胞 16.动物细胞间信息的传递主要是通过( )。 A.紧密连接 B.间隙连接 C.桥粒 D.胞间连丝 17.以下哪项不属于第二信使( )。 A, cAMP B. cGMP C. Ach D. DG 18.用某种影响细胞骨架的药水处理体外培养的细胞，群体中出现双核细胞，最可能的原因是( )。 A.微丝被破坏 B.微管被破坏 C.染色体畸变 D.细胞发生融合
肿瘤干细胞培养技术
肿瘤干细胞培养技术 随着干细胞生物学以及肿瘤学研究的不断深入，肿瘤干细胞已成为当前肿瘤研究的热点。肿瘤干细胞的体外培养在肿瘤干细胞研究领域具有不可替代的重要地位，通过分离、纯化及培养肿瘤干细胞可以对其生物学特性如异质性、肿瘤的演化、转移和抗药性等进行研究，为肿瘤的早期诊断与治疗提供了新的思路和策略。 肿瘤干细胞的体外培养多采用无血清培养基(serum free medium, SFM)，根据不同的细胞类型加入适当的细胞因子联合培养以防止其分化。肿瘤细胞系或者是临床肿瘤组织联合采用机械和胶原酶消化肿瘤组织得到单细胞悬液，经过流式细胞仪或者免疫磁珠分选的方法得到肿瘤干细胞使用无血清培养基在37℃，5％CO2饱和湿度的条件下进行体外培养，但值得注意的是临床肿瘤组织的获取应该越新鲜越好，最好是在外科手术后1小时内进行处理否则将影响肿瘤干细胞细胞的活性，不利于体外培养。 无血清培养基有很多种，针对不同的细胞类型有专门的无血清营养液出售。无血清培养基具有以下的优点：各批产品之间成分相对明确、质量相对一致；便于控制培养的生理环境；特殊细胞类型的优化配方有利于提高细胞的稳定性，使不同类型的细胞能在最有利于各自生长的环境中持续传代培养；依据不同类型的细胞、甚至不同的细胞系(株)都可能有各自的无血清培养基。总的来说可以分为基础营养基及附加成分两大部分[1]。基础培养基一般采用人工合成的培养基主要有DMEM、DMEM/F12、UltraCULTURETM、神经干细胞专用无血清培养基、黑色素瘤专用培养基等其中以DMEM/F12(1:1，Invitrogen)最为常用。附加成分是指在基础培养基中加入各种不同细胞生长所需的营养成分，包括①营养因子：胰岛素、转铁蛋白和亚硒酸钠、牛血清白蛋白、B27、L－谷氨酰胺；②细胞因子：白血病抑制因子、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、神经生长因子、血小板衍化生长因子等。使用无血清培养基培养的细胞经胰酶消化传代后不使用血清终止胰酶的作用，可使用0.1％－0.5%大豆胰酶抑制剂(soybean trypsin inhibitor)。 一、肿瘤干细胞培养中几种常见的细胞因子 (一)白血病抑制因子LIF(leukemin inhibitory factor,LIF) 是白介素6(IL-6)细胞因子家族中的一员，是典型的多功能生长因子，具有多种生物学功能：对细胞生长、增殖与分化有着广泛的作用，抑制分化促进干细胞增殖。胚胎干细胞的体外培养需要添加LIF以抑制其分化，维持其多能性。LIF可抑制成纤维细胞生长因子(Fibroblast Growth Factor ,FGF)、β转移生长因子(β-transforming Growth
高中生物奥赛模拟试题及答案
细胞生物学、生物化学、微生物学 1．关于膜蛋白，下列描述错误的是 A．膜蛋白是生物膜最为重要的组成部分 B．外在膜蛋白比内在膜蛋白更易分离 C．根据膜蛋白分离的难易及在膜中分布的位置，分为外在膜蛋白和内在膜蛋白 D．膜蛋白含量和种类与膜的功能密切相关 E．内在膜蛋白露在膜外的部分含较多的非极性氨基酸，属疏水性 2．根据信号假说，错误的是 A．胞浆中存在信号肽识别粒子，B．SRP可识别并结合信号肽 C．SRP不需与对接蛋白结合D．信号肽带动蛋白质进入内质网膜 E．借助转运系统完成蛋白质分泌 3．关于线粒体的叙述，下列哪些是正确的 A．内膜对各种物质的通过具有严格的选择性B．外膜通透性低 C．有内、外两层膜结构D．线粒体大小、形状和数目因细胞而异 4．有关高尔基体是极性细胞器的描述，哪项是正确的 A．高尔基对糖蛋白的加工过程是随机不是有序地进行 B．小囊泡位于高尔基体的顺面，大囊泡位于高尔基体的反面 C．膜脂介于细胞膜和内质网膜之间，反面膜较顺膜含酶的种类不同 D．反面的膜类似于细胞膜，顺面的膜类似于内质网 E．扁平囊顺面的膜较薄，厚约6nm随着顺面向反面过渡，膜逐渐加厚，至反面膜厚约8nm 5．在细胞中，微管的功能之一是 A．组成肌纤维的主要成分B．在有丝分裂中使染色体移向两级 C．参与细胞间的锚定连接而形成桥粒D．在细胞分裂末期形成胞质分裂环而使细胞分裂X是一种激素，而Y是一种细胞生长因子，当X或Y与在特定细胞细胞膜上的专一受体(receptor，R)结合后，会分别引起一连串细胞内反应如下： X→X-R1→G蛋白质1→腺苷环化酶(aderlyl cyclase)→环化腺苷单磷酸(cAMP)→ 蛋白质激酶A(protein kinase A)→整合附着蛋白→细胞附着Y→Y-R2，→G蛋白质2→磷 脂酶C(phospholipase C)→二酰甘油(diacylglycerol)→蛋白质激酶C(protein kinase C)→……→特定基因转录 6．试问环化腺苷单磷酸及二酰甘油在上述反应中的作用是 A．激素B．细胞生长因子C．二级信号分子D．蛋白质激酶受体 E．蛋白质激酶底物 7．下列有关细胞内信息传递的叙述，正确的是 A．G蛋白质为一种膜蛋白，无酶功能B．蛋白质激酶A及C的底物应是蛋白质 C．蛋白质激酶A及C的底物会被硝酸化D．腺苷环化酶及磷脂酶C会磷酸化蛋白质激酶 E．若将X或Y直接注射到细胞内，会引发快速反应 (8--10)细胞周期(cell cycle)可分为G1，S，G2，M等四期，科学家发现有一类蛋白质在细胞内的浓度，会随着每一次的细胞循环而起落，这类蛋白质称为“循环子”(cyclin)，不同的循环子调节细胞进人不同的循环期。下图为有关循环子E(cyclin E)的实验，控制组的细胞只植入载体，实验组细胞则植入含循环子E(cyclin E)基因的载体；横坐标为荧光强度(代表DNA含量)，纵坐标为细胞数目。试依据下图回答第74～76题。 8．由图中数据显
肿瘤组织无论在细胞形态和组织结构上,都与其发源的正常组织有不同程度的差异,这种差异称为异型性。
肿瘤(Tumor) 是机体在各种致癌因素作用下，局部组织的某一个细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控，导致其克隆性异常增生而形成的新生物。学界一般将肿瘤分为良性和恶性两大类。 肿瘤组织无论在细胞形态和组织结构上，都与其发源的正常组织有不同程度的差异，这种差异称为异型性。异型性是肿瘤异常分化在形态上的表现。异型性小，说明分化程度高，异型性大，说明分化程度低。区别这种异型性的大小是诊断肿瘤，确定其良、恶性的主要组织学依据。良性肿瘤细胞的异型性不明显，一般与其来源组织相似。恶性肿瘤常具有明显的异型性。 由未分化细胞构成的恶性肿瘤也称为间变性肿瘤，间变是指恶性肿瘤细胞缺乏分化，异型性显著。间变性肿瘤具有明显的多形性，瘤细胞彼此在大小和形状上有很大的变异，因此往往不能确定其组织来源。间变性肿瘤一般具有高度恶性。 我们中国医疗的特色是既有西医又有中医。现在发病率高，我国病例数相当庞大，有资料显示占全世界病例数的55%. 肿瘤在本质上是基因病。各种环境的和遗传的致癌因素以协同或序贯的方式引起DNA损害，从而激活原癌基因和(或)灭活肿瘤抑制基因，加上凋亡调节基因和(或)DNA修复基因的改变，继而引起表达水平的异常，使靶细胞发生转化。被转化的细胞先多呈克隆性的增生，经过一个漫长的多阶段的演进过程，其中一个克隆相对无限制的扩增，通过附加突变，选择性地形成具有不同特点的亚克隆(异质化)，从而获得浸润和转移的能力(恶性转化)，形成恶性肿瘤。 分子生物学基础 (l)癌基因 1)原癌基因、癌基因及其产物 癌基因是具有潜在的转化细胞的能力的基因。由于细胞癌基因在正常细胞中以非激活的形式存在，称为原癌基因。原癌基因可被多种因素激活。 原癌基因编码的蛋白质大都是对正常细胞生长十分重要的细胞生长因子和生长因子受体，如血小板生长因子(PGF)，纤维母细胞生长因子(FGF)，表皮细胞生长因子(EGF)，重要的信号转导蛋白质(如酪氨酸激酶)，核调节蛋白质(如转录激活蛋白)和细胞周期调节蛋白(如周期素、周期素依赖激酶)等。 2)原癌基因的激活 原癌基因的激活有两种方式：①发生结构改变(突变)，产生具有异常功能的癌蛋白。②b.基因表达调节的改变(过度表达)，产生过量的结构正常的生长促进蛋白。 基因水平的改变继而导致细胞生长刺激信号的过度或持续出现，使细胞发生转化。 引起原癌基因突变的DNA结构改变有：点突变、染色体易位、 诊断-影像学方法基因扩增。突变的原癌基因编码的蛋白质与原癌基因的正常产物有结构上的不同，并失去正常产物的调节作用。通过以下方式影响其靶细胞：①生长因子增加;②生长因子受体增加;③产生突变的信号转导蛋白;④产生与DNA结合的转录因子。
生物奥赛—细胞生物学及生物化学练习题带答案与解析
细胞生物学及生物化学练习题 １.下列细胞器,光学显微镜下能看到的是( )。 A．核糖体 B.内质网 C.叶绿体、B、C都不是 2.将小麦种子浸在红墨水中10 ，然后取出。将种子洗净纵向剖开，发现胚白色,而胚乳红色。这说明( ）。 Ａ.胚成活、胚乳失去活性 B.胚、胚乳都成活 C．胚死亡、胚乳成活 D．不能判断是否成活 3.生物膜的脂类分子是靠什么键聚集在一起形成磷脂双分子层结构的？()。. A．氢键 B.二硫键 C.疏水键Ｄ.离子键 4.下列关于动物细胞膜上泵的描述正确的是( )。 Ａ.具有酶的活性Ｂ．消耗1分子向胞外泵出2钠离子，向胞内泵入2个钾离子 C.消耗1分子向胞外泵出3个钠离子，向胞内泵入2个钾离子 D．泵在动物细胞膜上可形成离子通道，钠离子和钾离子可选择性地透过 5.线粒体内膜上具有什么酶系统?( ）。 A．糖酵解B．过氧化氢C．三羧酸循环Ｄ.电子传递链 6.肝细胞的解毒作用主要是通过什么结构中的氧化酶系进行的?()。 A．线粒体 B.叶绿体 C.细胞质膜 D.光面内质网 7.下列对溶酶体功能的描述不正确的是( )。 A.分解消化来自细胞外的物质Ｂ.溶解细胞内由于生理或病理原因破损的细胞器 Ｃ．自身膜破裂,导致细胞自溶而死亡 D.使毒性物质失活 ８.下列哪一类动物细胞中高尔基体最为丰富?( )。 Ａ.随意肌细胞 B.腺细胞Ｃ．红细胞 D.白细胞 ９.真核细胞细胞质中的核糖体()。 A.与细菌的核糖体大小、组成相同 B.较细菌的核糖体大，但组成相似 C.较细菌的核糖体小,组成不同Ｄ．与细菌的核糖体大小相同,但组成完全不同 1０. (2007年全国联赛题)在真核细胞中具有半自主性的细胞器为（)。 A.高尔基体 B.内质网C．线粒体D．质体 E.溶酶体 11．(200７年全国联赛题)巴氏小体是()。 A.端粒 B.凝集的X染色体 C.随体 D.巨大染色体 1２.端粒的作用是（）。 A.它们保护染色体使其免于核酸酶的降解 B.它们能防止染色体之间的末端融合 C.它们是细胞分裂“计时器”Ｄ．以上都正确 1３.下列四对名词中，哪一对的表述是合适的?( )。 Ａ.叶绿体—贮藏酶Ｂ.过氧化(酶)体—细胞中的转运作用 C.核仁—核糖体亚基的组装部位 D.溶酶体—细胞中的发电站 14.（200７年全国联赛题)减数分裂时,等位基因的片段的交换和重组通常发生在( )。 Ａ.偶线期Ｂ.粗线期Ｃ.双线期 D.终变期 15.机体中寿命最长的细胞是（)。 A.红细胞 B.神经细胞Ｃ.表皮细胞Ｄ．上皮细胞
肿瘤细胞培养基本方法
肿瘤细胞培养基本方法 (一)准备和安装过滤器 清洗好过滤器，干燥，放入一张孔径0.22μm的微孔滤膜，用布包装好，15磅20 min进行高压灭菌处理。在超净台内打开过滤器架好，胶管一端接入滤泵再插入待除菌的液体中，出口端胶管深入到已消毒好的瓶子中。用泵过滤，过滤后要检查滤膜是否完好无损。 2、按要求添加碳酸氢钠、谷氨酸钠、HEPES等，充分搅拌使之溶解。 3、调pH至7.2左右。 4、加水至最终体积。 5、在超净台中对溶液进行滤过除菌，分装入250 mL或500 mL玻璃瓶中，用翻帽塞塞紧瓶口。 6、瓶口封好，4℃冰箱贮存。 (三)小牛血清的处理 市场上出售的小牛血清一般做了灭菌处理，但在使用前还应做热灭活处理，即通过加热的方法破坏补体(近
来也有观点认为热灭活处理是不必要的)。胎牛血清不必灭活。 1、将血清加热至56℃并保持30 min，其间要不时轻轻晃动，使受热均匀，防止沉淀析出。 2、处理后的血清贮存于4℃。 3、小牛血清在使用前最好进行筛选以掌握血清的质量。 (四)生长培养基的配制 除无血清培养之外，各种合成培养基在使用前需加入一定量的小牛血清或胎牛血清和抗菌素。 1.培养基分装成小瓶(100～200 mL)以便使用，翻帽塞塞紧瓶口。 2.按如下比例配制：基本培养基占80％~90％，小牛血清或胎牛血清占10％~20％。按1％体积 分数加入双抗贮存液(青霉素+链霉素)，使青霉素和链霉素的终浓度分别为100 U／mL和100 μ／mL，。 (五)冻存细胞的复苏 1.应遵守慢冻快融的原则。先将水浴锅调至37-37。5度，取出冻存的细胞迅速放入后将细胞面浸 至水面以下不断摇动至融化。 2.在无菌台内将完全培养基加入50ml的小培养瓶内，约5ml左右，然后用无菌吸管从冻存管内取 出细胞，置培养并内轻轻摇晃，使细胞均匀后置培养箱内培养。 (六)传代: 1.贴壁细胞: 对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基，吸的越干净越好，以免中和后加入的消化液，使强度减弱（或PBS洗1－3次）。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml，按此比例进行消化，(根据经验)，晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟，镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后，轻轻振动瓶底使 细胞全部脱落，加入2-3ml完全培养基后，轻轻吹打，使细胞基本成单个悬浮，然后分置其它无菌培养瓶内，加入完全培养基后继续培养或实验。 2.悬浮细胞: 一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内，加入完全培养基继续培养，如要高浓度可先离心1000rpm，5min后加入完全培养基，轻轻吹匀后，分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养。 (七)冻存 将贴壁细胞消化后离心收集，悬浮细胞直接离心收集，以完全培养基或胎牛血清重悬细胞至终浓度约 106/ml。加入10%的DMSO。以每管1～2ml分装至冻存管中。用绝热材料包裹置-70摄氏度冰箱冷冻过夜。次日保存到液氮中。 (八)注意事项
肿瘤学研究常用实验技术及方法
精心整理 肿瘤学研究常用实验技术及方法复习题 1.表观遗传的科学内涵 三个特点？ a)基因功能完全、稳定地丧失，有遗传性； b)细胞外环境长期作用的结果，有可逆性； c)分析方法灵敏，可检出少数细胞的变化 2. DHPLC 3. i. ii. 梯度中 iii. SDS- iv. 1.丙烯酰胺有神经毒性，可经皮肤、呼吸道等吸收，故操作时一定要注意防护。 2.制备聚丙烯酰胺凝胶时，小心防止凝胶渗漏。 3.蛋白加样量要合适，加样量太小，条带不清晰，加样量太大，则泳道超载，条带过宽而重 叠，甚至覆盖至相邻泳道。 4.对多种蛋白质而言，电流大则电泳条带清晰，但电流过大，玻璃板会因受热而破裂，故适 合的电流为玻璃板微热。 5.胶转膜后应在膜上标记好正反面及电泳方向。 6.电转移时应注意勿将滤膜和胶的位置放反，而且滤纸、滤膜和胶应等大，以免短路。
4.组织培养/基因的克隆、转化与表达 i.请列举至少3种流式细胞仪的用途? 1.定量检测细胞膜、细胞质和细胞核中的各种细胞成分 2.研究细胞的各种功能状态(细胞增殖，细胞凋亡、细胞分化、酶活性、细胞膜通透性、 氧化还原状态、吞噬性等)。 3.定量检测血清中的各种可溶性生物分子成分 临床中应用：1.白血病和淋巴瘤的免疫分型 1. 2. 3.细胞 磷酸酶（phosphatase） 激酶（Kinase） 连接酶（Ligase） 5.生物质谱简介 生物质谱在蛋白组学中的应用？ 1.ProteinsMWmeasurements； 2.ProteinIdentification；(ID) 3.Peptideandproteinprofiling； 4.ImagingMS； 5.ProteinPTMs；5.ProteinQuantification 6.《常用电泳技术基本原理及应用》课程复习题
骨髓瘤细胞的培养实验
实验一、骨髓瘤细胞的培养 骨髓瘤细胞系应和免疫动物属于同一品系，这样杂交融合率高，也便于接种杂交瘤细胞在同一品系小鼠腹腔内产生大量McAb。 常用骨髓瘤细胞系有：NS1、SP2／0、X63 Ag8.653等。 骨髓瘤细胞的培养适合于一般的培养液，如RPMI1640，DMEM培养基。小牛血清的浓度一般在10～20％，细胞的最大密度不得超106／ml，一般扩大培养以1∶2稀释传代，每2～3天传代一次。细胞的倍增时间为16～20小时，上述三株骨髓瘤细胞系均为悬浮或轻微贴壁生长，只用弯头滴管轻轻吹打即可悬起细胞。 二材料： 1.试剂： （1）培养基杂交瘤技术中使用的细胞培养基主要有RPMI-1640或DMEM（Dulberco Modified Eagles Medium）两种基础培养基，具体配置方法按厂家规定的程序，配好后过滤除菌（0.22um滤膜），分装，4℃保存。 不完全RPMI-1640培养基：RPMI-1640培养基原液96ml,100×L.G.溶液1ml，双抗溶液1ml，7.5% NaHCO3溶液1-2ml，HEPES溶液1ml。 不完全DMEM培养基：DMEM 13.37g,超纯水或四蒸水980ml，NaHCO3 3.7g，100×L.G.溶液10ml，双抗溶液10ml，7.5% NaHCO3溶液1-2ml，用1N HCl调试pH至7.2-7.4，过滤除菌，分装4℃保存。
完全RPMI-1640或DMEM培养基：不完全RPMI-1640或DMEM培养基80ml，灭活小牛血清15-20ml，用于骨髓瘤细胞SP2/0和建株后杂交瘤细胞培养。 （2）小牛血清灭活：从-20℃冰箱取出小牛血清，室温自然融化，56℃ 30min即可充分灭活，分装小瓶（5ml/瓶），-20℃冻存备用，尽量避免反复冻融。 （3）青、链霉素（双抗）溶液（100×）取青霉素G（钠盐）100万单位和链霉素（硫酸盐）1g或100万单位，溶于100ml灭菌超纯水或四蒸水中，分装小瓶（4-5ml/瓶），-20℃冻存。 2.器材： 超净工作台、CO2恒温培养箱、普通冰箱、电子天平，药物天平、巴氏吸管、10ml吸管、100ml细胞培养瓶、滴管、灭菌小瓶等 三方法： 细胞冻存及复苏 先用24孔细胞培养板扩大骨髓瘤细胞或单克隆抗体细胞株，当长满时，再扩大到100ml细胞瓶。当其处于对数生长期时，将细胞洗下，用细胞冻存液（含10﹪DMSO，40﹪FCS的DMEM培养基）将细胞悬浮，调配成1-3×106个/ml,每个细胞冻存管分装1ml，移至液氮罐口悬吊2小时或-70℃冰箱过夜，然后沉入液氮中。复苏时，从液氮中取出冻存管后迅速置入40℃水浴中，在1min内融化，1500rpm离心5min，弃上清，用少量完全培养基轻轻悬浮细胞，移入24孔板中培养。
高中生物竞赛“细胞生物学”复习讲义
高中生物竞赛“细胞生物学”复习讲义 细胞生物学是研究细胞的结构、功能、生活史以及生命活动本质和规律的科学，是生物科学的主要分支之一，也是生命科学和分子生物学研究的基础。本章包括细胞的化学成分，细胞器，细胞代谢，DNA、RNA和蛋白质的生物合成，物质通过膜的运输，有丝分裂和减数分裂，微生物学和生物技术等部分。根据1BO考纲细目和近几年来试题的要求，以下从知识条目和能力要求两方面定出具体目标
第一节细胞的化学成分 尽管自然界细胞形态多样，功能各异，但其化学成分基本相似，主要包括：糖类、脂类、蛋白质、核酸、酶类等。 一、糖类 糖类是多羟基醛、多羟基酮的总称，一般可用Cm(H20)n化学通式表示。由于一些糖分子中氢和氧原子数之比往往是2：1，与水结构相似，故又把糖类称为碳水化合物。糖是生命活动的主要能源，又是重要的中间代谢物，还有些糖是构成生物大分子，如核酸和糖蛋白的成分，因而具有重要意义。糖类化合物按其组成可分为单糖、寡糖、多糖。如果糖类化合物中尚含有非糖物质部分，则称为糖复合物，例如糖蛋白、蛋白多糖、糖脂和脂多糖等。 (一)单糖 单糖是最简单的糖，不能被水解为更小的单位。单糖通常含有3—7个碳原子，分别称为丙糖、丁糖、戊糖、己糖和庚糖。天然存在的单糖一般都是D-构型。单糖分子既可以开链形式存在，也可以环式结构形式存在。在环式结构中如果第一位碳原子上的羟基与第二位碳原子的羟基在环的伺一面，称为α-型；如果羟基是在环的两面，称β-型。 重要的单糖有以下几种： 1．丙糖如甘油醛(醛糖)和二羟丙酮(酮糖)。它们的磷酸酯是细胞呼吸和光合作用中重
要的中间代谢物。 2．戊糖戊糖中最重要的有核糖(醛糖)、脱氧核糖(醛糖)和核酮糖(酮糖)。核糖和脱氧核糖是核酸的重要成分，核酮糖是重要的中间代谢物。 3．己糖葡萄糖、果糖和半乳糖等都是己糖。所有己糖的分子式为C6H1206，但结构式不同，互为同分异构体。葡萄糖是植物光合作用的产物，也是细胞的重要能源物质之一。 (二)寡糖 由少数几个(2—6个)单糖缩合而成的糖称为寡糖。最多的寡糖是双糖，如麦芽糖、蔗糖、纤维二糖、乳糖。 1．麦芽糖麦芽糖是由一个α—D-葡萄糖半缩醛羟基与另一分子α-D-葡萄糖C4上的醇羟基缩合脱去一分子水，通过α-1，4-糖苷键结合而成。麦芽糖是淀粉的基本单位，淀粉水解即产生麦芽糖，所以麦芽糖通常只存在于淀粉水解的组织，如麦芽中。 2．蔗糖一分子α-D—葡萄糖和一分子β-D-果糖缩合脱水即成蔗糖。甘蔗、甜菜、胡萝卜以及香蕉、菠萝等水果中都富含蔗糖。 3.乳糖乳糖由一分子β-D-半乳糖和一分子α-D-葡萄糖通过β-1，4-糖苷键结合而成。乳糖主要存在于哺乳动物乳汁中。 4．纤维二糖纤维二糖是纤维素的基本结构单位，由2分子的p-D-葡萄糖通过β-1，4-糖苷键结合而成。 (三)多糖 自然界数量最大的糖类是多糖。多糖是由很多单糖分子缩合脱水而成的分支或不分支的长链分子。常见的多糖有：淀粉、纤维素、糖原、几丁质和黏多糖等。 1．淀粉天然淀粉由直链淀粉与支链淀粉组成。直链淀粉是α-D-葡萄糖基以α-1，4-糖苷键连接的多糖链。支链淀粉分子中除有α—1，4-糖苷键的糖链外，还有α-1，6-糖苷键连接的分支。淀粉与碘有呈色反应，直链淀粉为蓝色，支链淀粉为紫红色。在稀酸或酶的作用下，淀粉水解：淀粉→糊精→麦芽糖→α-D—葡萄糖。糊精是淀粉水解的最初产物，随着水解，糖分子逐渐变小，它与碘作用分别呈红色、黄色、无色。这个反应可用于淀粉水解过程的检验。 2．糖原糖原是动物组织中贮存的多糖，又称动物淀粉。糖原也是α-D-葡萄糖基以α-1，4-糖苷键连接而成的，但糖原的分支比支链淀粉多。糖原遇碘作用呈红褐色。
常见肿瘤细胞及其形态
A549 肺腺癌细胞 ATCC Number: CCLJB5 Desigration: A-54? U87 人脑胶质瘤细胞 ATCC Number: HTB t4 Designation: U-87 MG Lev Density 駅W 日* ? T OO U 唯 ■ fDOpni High CeciEit^ LQJv Derisit^ 比nle日跡■ 100pm
kasumi-1 急性骨髓细胞白血病细胞系 ATCC Number: CRL-2724 Designation: Kasumi-l ATCC Number: CRL^2724 Designation: Kasumi-l Jurkat 人急性T 淋巴细胞白血病细胞系 餉肌 0#r a nQ0|jrii 0if? f DOjim Law Dencrty High Dersity L QW Denttt/ 3匚肌 Elh H iQ0|Jm High Dersity 日￥■ iD0|m
ATCC Number: TIE-⑷ Desigration: Jurkaf (Clone E4-1) K562 人慢性髓系白血病细胞 ATCC Number: CCL 243 Destgrcition: K-5&2 L ON Derisily 卩匚nk ■ lOOpm Hipl" Cencit^ 寻Gfll 片 B fD0|ini Sc 0*4 0J?r a FOOpm 防■ tOOirq L QW Dentrt/ High Dersity
ATCC Number: CCL 243 Desigration: K-5&2 SW480 人结肠癌细胞 ATCC Number: CCL 22S Designation: SW 480 PC-3 人前列腺癌细胞 L QW Dentrty 騎血 0#r a lQd|jni High Dersity 丽 H 3D多细胞肿瘤球的培养 原创2017-04-20医生科研助手 3D多细胞肿瘤球是在体外应用组织培养方法使肿瘤细胞以多细胞集聚体的形式生长成为具有三维结构的球体。 与传统的2D贴壁细胞培养模型相比，3D多细胞肿瘤球可以通过模拟三维细胞网络、细胞与基质、细胞与细胞之间的相互作用，从而更加贴近肿瘤组织中相应的病理生理特征。 因此，3D多细胞肿瘤球培养模型已经逐渐应用于干细胞培养和分化、癌症研究、药物和毒性筛选及组织工程等特定应用中。 虽然3D多细胞肿瘤球模型具有更显著的实体肿瘤生理相关性，但是与2D贴壁细胞培养模型相比，获得大量相对统一的3D多细胞肿瘤球模型需要一系列的培养过程和表征手段。 本文利用Liquid Overlay的制备方法，以乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7为模型制备3D多细胞肿瘤球并采用倒置显微镜、激光共聚焦显微镜和环境扫描电镜对其进行详细表征。 1 实验前准备工作 1.提前24 h取12 mL DMEM和RPMI 1640完全培养基（含10%FBS，下同）于50 mL离心管内，置于4℃冰箱中预冷； 2. 将分装好的Matrigel基质胶提前24 h从-20℃放入4℃，使其融化成液体状态； 3. 将无菌的1 mL移液器枪头放入无菌50 mL离心管内，置-20℃冰箱预冷。 2 琼脂糖包被96孔板 1. 准确量取6 mL RPMI 1640培养基（或DMEM培养基）于2个10 mL的注射玻璃瓶内，加入90 mg琼脂糖，盖塞后放入80℃的水浴锅内加热溶解30 min； 2. 加热结束后，将注射瓶放入灭菌锅内，115℃灭菌30 min； 3. 灭菌完成后，迅速取出注射瓶放入超净台内。将注射瓶内的琼脂糖溶液倒入无菌的加样槽中，用多通道移液器以每孔60 μL的量加入96孔板内。 注意：由于琼脂糖溶液在室温时会凝固，因此从灭菌锅内取出琼脂糖溶液后一定要快速转移至超净台内并迅速加入至96孔板中。 此外，为保证加样时琼脂糖不冷却，需要同时灭菌加样槽和100 μL的移液器枪头。 4. 加入完成后，96孔板要保持水平约30 min使孔内的琼脂糖凝固。 3 配置含Matrigel基质胶细胞悬液 1. 取对数生长期的MDA-MB-231细胞（或MCF-7细胞），胰蛋白酶消化后进行细胞计数，用RPMI 1640完全培养基（或DMEM完全培养基）将细胞悬液浓度调整至 2.0×105cells/mL，备用。 肿瘤细胞的培养及其实验的方法 肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置，首先癌细胞是比较容易培养的细胞。当前建立的细胞系中癌细胞系是最多的。另外肿瘤对人类是威胁最大的疾病。肿瘤细胞培养是研究癌变机理、抗癌药检测、癌分子生物学极其重要的手段。肿瘤细胞培养对阐明和解决癌症将起着不可估量的作用。 一、组织培养肿瘤细胞生物学特性 肿瘤细胞与体内正常细胞相比，不论在体内或在体外，在形态、生长增值、遗传性状等方面都有显著的不同。生长在体内的肿瘤细胞和在体外培养的肿瘤细胞，其差异较小，但也并非完全相同。培养中的肿瘤细胞具以下突出特点： （－）形态和性状 培养中癌细胞无光学显微镜下特异形态，大多数肿瘤细胞镜下观察比二倍体细胞清晰，核膜、核仁轮廓明显，核糖体颗粒丰富。电镜观察癌细胞表面的微绒毛多而细密，微丝走行不如正常细胞规则，可能与肿瘤细胞具有不定向运动和锚着不依赖性有关。 （二）生长增殖 肿瘤细胞在体内具有不受控增殖性，在体外培养中仍如此。正常二倍体细胞在体外培养中不加血清不能增殖，是因血清中含有很细胞增殖生长的因子，而癌细胞在低血清中（2%?5%） 仍能生长。已证明肿瘤细胞有自泌或内泌性产生促增殖因子能力。正常细胞发生转化后，出现能在低血清培养基中生长的现象，已成为检测细胞恶变的一个指标。癌细胞或培养中发生恶性转化后的单个细胞培养时，形成集落（克隆）的能力比正常细胞强。另外癌细胞增殖数量增多扩展时，接触抑制消除，细胞能相互重叠向三维空间发展，形成堆积物。 （三）永生性 永生性也称不死性。在体外培养中表现为细胞可无限传代而不凋亡（Apoptosis ）。体外培养中的肿瘤细胞系或细胞株都表现有这种性状，体内肿瘤细胞是否如此尚无直接证明。因恶性肿瘤终将杀死宿主并同归于尽，从而难以证明这一性状的存在。体外肿癌细胞的永生性是否能反证它在体内时同样如此？也尚难肯定。从近年建立细胞系或株的过程说明，如果永生性 是体内肿瘤细胞所固有的，肿瘤细胞应易于培养。事实上，多数肿瘤细胞初代培养时并不那么容易。生长增殖并不旺盛；经过纯化成单一化瘤细胞后，也大多增殖若干代后，便出现类似二倍体细胞培养中的停滞期。过此阶段后才获得永生性，顺利传代生长下去。从而说明体外肿瘤细胞的永生性有可能是体外培养后获得的。从一些具有永生性而无恶性性的细胞系，如NIH3T3、Rat－1、 10T1/2 等细胞证明，永生性和恶性（包括浸润性）是两种性状，受不同基因调控，但却有相关性。可能永生性是细胞恶变的阶段。至少在体外是如此。 （四）浸润性浸润性是肿瘤细胞扩张性增殖行为，培养癌细胞仍持有这种性状。在与正常组织混合培养时，能浸润入其它组织细胞中，并有穿透人工隔膜生长的能力。 （五）异质性所有肿瘤都是由有增殖能力、遗传性、起源、周期状态等性状不同的细胞组成。异质性构成同3D细胞培养
肿瘤细胞的培养及其实验的方法