ABO血型正反定型

ABO血型正、反定型操作规程

[目的]

保证ABO血型鉴定准确，确保临床输血安全。

[适用范围]

XXX医院输血科

[职责]

具有专业技术的工作人员主要负责本院输血（或备血）标本的ABO血型鉴定（但只对该单份标本负责）。

[相关文件]

试剂采购、保存和使用管理程序

设备采购、使用管理程序

消毒与清洁管理程序

标本采集、运输、保存和报废管理程序

紧急用血管理程序

[相关记录]

仪器设备的采购、使用和维护记录

仪器的温度记录

恒温水温箱的换水和消毒记录

消毒液的配置记录

清洁消毒记录

试剂采购、使用记录

标本交接和报废记录

紧急用血记录

[实验原理]

ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。存在A凝集原的称为A型，存在B凝集原的称为B型。而血清中还存在凝集素。当A凝集原与抗A凝集素相遇或B凝集原与抗B凝集素相遇时，会发生红细胞凝集反应。一般A型血清中含有抗B凝集素，B型血清中含有抗A凝集素，因此可以用标准血清中的凝集素与被测者的红细胞反应（称为正定型），用标准红细胞与被测者血清中的凝集素反应（称为反定型），以确定其ABO血型。

[仪器器械]

玻璃试管、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、普通离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。

[试剂]

抗A标准血清、抗B标准血清、A型标准红细胞、B型标准红细胞、O型标准红细胞、生理盐水。以上试剂均为有合格证件的正品。

[标本收集与处理]

1．受检者血清：采集受检者静脉血2~3ml，经1000r/min离心1分钟或室温静置1小时后取上清。

2．2~5%的受检者红细胞：采集受检者静脉血或末梢血，用生理盐水制成2~5％红细胞盐水悬液备用，制备方法见本节质量控制和注意事项。

3．标本出现中度以上溶血者，为不合格标本，不能用于检测。

[实验方法与步骤]

1.ABO血型的正定型（试管法）：

⑴、取2支试管，分别标上抗A 和抗B ；

⑵、制备待测标本2~5%的红细胞悬液（取1支试管，加入2ml 生理盐水，再加入1滴待测标本红细胞，混匀备用）；

⑶、在抗A 管中加入2滴抗A 标准血清，在抗B 管中加入2滴抗B 标准血清；

⑷、在抗A 和抗B 管中分别加入1滴已制备好的待测标本2~5%红细胞悬液； ⑸、混匀后，立即对称放入离心机中进行1000r/min 离心1分钟，或室温静置1小时，再轻轻摇动试管，使沉于管底的红细胞浮起，先肉眼观察有无凝集现象，如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。

⑹根据有无凝集现象判定结果如下。注意凝集强

度，此有助于A 、B 亚型、类B 或cisAB 的发现。

⑺凝集强度判断标准

4十 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。

3十 红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。

2十 红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。

1十 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。

土 镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多

游离红细胞。

MF 混合凝集外观(mixed field)是指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细

胞仍呈分散分布。

一 表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。

2.ABO 血型的反定型（试管法）：

⑴、取3支试管，分别标上A 、B 和O ；

⑵、在3支试管中分别加入2滴待测标本的血清；

⑶、将ABO 标准红细胞轻轻地充分混匀后，在A 管中加入1滴A 型标准红细胞，在B 管中加入1滴B 型标准红细胞，在O 管中加入1滴O 型标准红细胞；

⑷、混匀后，对称放入离心机中进行1000r/min 离心1分钟（或3400 r/min 离心15秒）；

⑸、取出后，先观察是否溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染），再轻轻摇动试管，肉眼观察有无凝集现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察；

⑹根据有无凝集现象判定结果如下。注意凝集强度，此有助于A 、B 亚型、类B 或ABO 血型 A 型标准红细胞 B 型标准红细胞 O 型标准红细胞

A 型 － ＋ －

B 型 ＋ － －

O 型 ＋ ＋ －

AB 型 － － －

ABO 血型 抗A 标准血清 抗B 标准血清 A 型 ＋ － B 型 － ＋ O 型 － － AB 型 ＋ ＋

⑺凝集强度判断标准（同ABO血型的试管法正定型）

[质量控制和注意事项]

1、分型标准血清试剂必须为三证齐全的合格产品，质量性能符合要求，且在有效期内使用。试剂开封后必须贴上注有开封日期和开封人的标签，使用后应及时置于2~8℃专用冰箱中保存，以免细菌污染和变质而影响试验结果。试剂开封后有效期为一周。

2、商用分型标准红细胞试剂必须为三证齐全的合格产品，质量性能符合要求，且在有效期内使用；自制分型标准红细胞试剂必须以3个健康者同型新鲜红细胞混和，用生理盐水洗涤 1~3次，以除却存在于血清中的抗体及可溶性抗原，再制成2~5%的红细胞悬液备用。试剂开封或制备后必须贴上注有开封或制备日期和开封人或制备人的标签，使用后应及时置于2~8℃专用冰箱中保存，以免细菌污染和变质而影响试验结果。试剂开封或制备后有效期为一周。

3、生理盐水启用后，有效期为二周。

4、所有试剂在使用时，必须检查是否有浑浊、变色、凝集等变质现象；凡可疑者，必须更换新的试剂进行检测。若分型标准血清使用时间较长后，最好用已知的ABO标准红细胞检查结果是否与已知的血型相符；若分型标准红细胞使用时间较长后，最好用已知的分型标准血清检查结果是否与已知的血型相符，以防标准血清或红细胞制品污染、变质失效而造成鉴定错误。

5、试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。

6、操作方法应按规定进行，一般应先加血清，后加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。

7、IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的反应温度以4℃为最强，但为了防止冷凝集现象的干扰，一般仍在室温(20~24℃)内进行试验，37℃可使反应减弱。

8、离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。用试管法进行ABO血型的正定型时不能测出亚型（如A X），需延长作用时间。

9、在反定型试验中，如果受检者的血清或血浆与O型标准红细胞产生阳性反应，则需要添加自身对照试验。如果自身对照试验为阳性，表明是自身冷凝集素导致。如果自身对照试验为阴性，则表明被检者血清或血浆中可能存在ABO系统以外其它系统的抗体干扰，此时需做其它相关试验加以解决上述定型问题。

10、对含有较多自身冷凝集素的受检者，在使用标准血清进行正定型时往往被误定为AB型，遇到此种情况，需用37℃生理盐水洗涤受检者的红细胞2~3次，以去除吸附在红细胞上的冷凝集素，然后再鉴定血型。

11、观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。对于可疑结果，必须更换所用的试剂，重新检测。

12、对于可能存在不完全抗原的时候，应在各反应中加入凝聚胺试剂，以检验不完全抗原的存在。

13、判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。

14、2~5%红细胞悬液的配制：先用生理盐水洗涤红细胞3次，再根据下表进行红

[临床应用

用于检验人的ABO血型归属。

[血型鉴定的影响因素及解决方法]

准确的血型鉴定是临床安全、有效输血的重要保证之一，但影响血型鉴定结果的因素很多。如发现ABO正反定型结果不一致，应先重复做1次试验。重复做试验时，应严格执行操作规程，使用质量合格的试剂，并细心观察和解释试验结果，就可解决明显的问题。对一些疑难问题必须做如下进一步研究：

1、标本

①血标本的采集错误、稀释和溶血。另从受检者采集l份新鲜血液标本，这样可以纠正因污染或搞错样本造成的不合。标本一般要求离体后尽快实验，最长不能超过3天，每次输血后受血者和供血者的血标本应在2～8℃保存7天。

②患者的药物使用有时也对实验有一定影响，当受血者使用肝素治疗时，应使用硫酸鱼精蛋白对抗使标本凝集；如果受血者使用右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）等治疗，应注意将红细胞洗涤。

③受检者红细胞上抗原位点过少(如亚型)或抗原性减弱(见于白血病或恶性肿瘤)，以及类B或cisAB等。●如疑为A抗原或B抗原减弱，则可将受检红细胞与抗—A或抗—B血清做吸收及放散试验，以及用受检者唾液作A、B、H血型物质测定（只对80％HAB分泌型的人有用）。●如受检者为A型血而疑为有类B抗原时，可用下列方法进行鉴别：(1) 观察细胞与抗—A及抗—B的凝集强度，与抗—A的反应要比与抗—B的反应强，这种区别用玻片法作试验更为明显；(2) 用受检者红细胞与自身血清作试验，血清中的抗—B不凝集自身红细胞上的类B抗原；(3) 检查唾液中是否有A、B物质，如果是分泌型，可检出A物质而无B物质；(4) 核对患者的诊断，类B抗原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰阴性杆菌感染有关。

④受检者血清中蛋白紊乱(高球蛋白血症)，或实验时温度过高，常引起红胞呈缗钱状排列。如试验结果红细胞呈缗钱状排列，加等渗盐水l滴。混和，往往可使缗钱现象消失。注意不应先加盐水l滴于受检者血清中而后和红细胞做试验，以免使血清中抗体被稀释。

⑤细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。如发现多凝集现象，应考虑由遗传产生的Cad抗原活性；被细菌酶激活的T或TK受体；或产生机制不太明了的Tn受体所引起。多凝集红细胞具有以下特点：(1)能被人和许多家兔的血清凝集；(2)能与大多数成年人的血清凝集，不管有无相应的同种抗体。(3)不被脐带血清凝集。(4)通常不与自身的血清凝集。(5)如有条件可用外源凝集素加以鉴别。

⑥检者血清中缺乏应有的抗-A及或抗—B抗体，如丙种球蛋白缺乏症，老年人血清中抗体水平大幅度下降等。如果试验结果未见凝集，应将细胞及血清试验至少在室温和4℃放置30min，用显微镜检查核实。

⑦血清中有意外抗体，如自身抗—I，常引起干扰。用A1、A2、B、O红细胞及自身红细胞检查受检者血清。如果怀疑是抗—I，用O型(或ABO相合的)脐血红细胞检查。

⑧各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集。部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体。将红细胞洗涤数次，配成2~5%生理盐水细胞悬液，用抗—A、抗—B、抗—Al，抗—A十B及抗H做试验可以得到其它有用的信息。对受检红细胞作直接抗球蛋白试验，如结果呈阳性，表示红细胞已被抗体致敏。

2、试剂

①运输、贮存等条件不适可导致试剂变质失效，造成配血错误。实验前进行试剂外观、效价等项目质量控制。②不同抗凝剂制备的标准红细胞质量也不同；另外，红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明显，易误判为阴性反应。应

依据要求正确配制红细胞浓度。③分型血清效价太低、亲和力不强，如抗—A血清效价不高，可将A亚型误定为O型、AB型误定为B型。实验前应进行试剂效价等项目质量控制。

3、冷凝集素

在ABO血型鉴定和交叉配血的过程中，冷凝集素是影响ABO血型正反不符和交叉配血不合的常见原因，尤其是在冬天气温较低时，某些病人血清中含有冷凝集素而导致出现假阳性。正常人血清中冷凝集素效价一般不高，且在4℃以下时才有活性。但由于人免疫系统的差异，在恶性肿瘤或病原体感染后有时冷反应性自身抗体可异常增高，造成溶血性贫血。这种冷凝集素效价在4℃可高于1000，用37℃生理盐水洗涤红细胞，操作时再置于37℃水浴中轻轻摇动可以排除冷凝集素的干扰。

4、自身免疫性溶血性贫血

红细胞被自身抗体强烈致敏后将干扰ABO定型，且自身抗体的存在会导致交叉配血不合，选择合适的试验方法对红细胞上结合的抗体做放散处理，确定抗体的特异性。如果抗体属于同种抗体，则交叉配血时应选取该抗原阴性的献血者的血液。如果该抗体无法确定特异性，则交叉配血时要根据患者自身红细胞与自身血清的对照反应选取较弱反应的献血者血液，因为自身抗体的干扰而发生ABO正反定型不相符时，可用37℃～45℃生理盐水洗涤红细胞三次，或者用放散后的红细胞（放散方法需不破坏红细胞结构），血清定型则可用洗涤或放散后的红细胞将血清中的自身抗体吸收后再进行。

5、弱凝集

血型试验是抗原抗体反应，当患者红细胞上抗原异常或血清中存在ABO血型以外的不规则抗体时，可能会导致减弱的或缺少的凝集反应。抗原异常包括：①亚型，这种亚型红细胞抗原性较弱，可以通过亚型定型试剂来具体定型。②红细胞抗原形成不足或敏感性降低，如新生儿、老年人及少数恶病质患者。鉴定血型时要注意正反定型的结合，加用抗H和抗A，B型标准血清、A2红细胞等检查唾液中的血型物质，必要时作吸收放散试验以确定。若血清中存在不规则抗体可在反定型用O细胞加以鉴定，有些亚型因为抗原的某些位点缺失，也会产生相对于缺失抗原位点的抗体，这些抗体的产生有助于亚型的判定。

6、细菌性凝集

常见有类B凝集，A型或O型病人因大肠杆菌O86感染，从而使红细胞上获得类B抗原，能与抗B抗体发生凝集，表现为B 或AB型。其不受温度影响，病情好转类B凝集即消失。另外红细胞被细菌或细菌酶污染，红细胞上的T抗原被激活，与供血者中抗T抗体发生凝集。此种凝集在4℃和37℃之间随着温度的升高凝集程度逐渐减弱，在37℃时最弱或消失。

7、混合外观凝集现象

出现混合外观凝集的情况时一般要核对标本，必要时可重新抽取血样。患者在近期有过骨髓移植或输血史、胎盘出血和白血病等应在疾病恢复后再确定血型。其他原因如嵌合现象、A3亚型及Tn多凝集反应等在定型时可帮助正确判断血型。

8、不规则抗体及亚型

血型试验是抗原抗体反应，当患者血清中存在ABO型以外的IgM或IgG和IgM 混合型不规则抗体时，必然会导致ABO正反定型不一致。可通过测定唾液中的血型物质来鉴定ABO血型。由于受检者红细胞上有弱抗原，且抗原表达性特别弱，在纸片定型中很可能被错误定型，另外抗A/抗B/抗AB血清的效价低或Ac/Bc/Oc 等其他因素的影响，正反定型不相符，也可能被错定或无法确认，应用试管盐水法镜检显示抗-A/抗-B/抗-AB管呈弱的混合外观，正反定型相符，且经吸收放散试验进一

步确定相应的亚型。由于某些亚型红细胞与抗A，B血清呈现出特异性反应，因此同时采用抗A，B血清，而在反定型时加入O细胞可以检出部分不规则抗体。对ABO血型正反定型不一致的标本，正定型时加入抗-H有助于检测红细胞表面H抗原的量，对鉴别亚型具有重要意义，同时有助于发现稀有血型，如孟买型等。

9、假凝集

血清在室温和37℃中，使红细胞出现了假凝集，造成配血错误。常见于某些肝病、传染病、多发性骨髓瘤、霍金氏病、心肌梗塞、感染等病，或用纸片或玻片作血型鉴定时，时间过长水份蒸发引起红细胞发生凝集，这种凝集在镜下为缗钱状，可看清红细胞形态，患者红细胞直接抗人球蛋白试验阴性，用生理盐水稀释或洗涤红细胞可使凝集消失。

正定型

标准血清（Ab）标本

ABO

血型

标准红细胞（Ag）

反定型抗—A 抗—B 抗—AB A型红细胞B型红细胞O型红细胞

待检红细胞（Ag）

＋

A- Ag

—＋

A型

—＋

B- Ab

—

待检

血清

（Ab）—＋

B- Ag

＋

B型

＋

A- Ab

——

———

O型

＋

A- Ab

＋

B- Ab

—

＋

A- Ag

＋

B- Ag

＋

AB型

———

XXX医院输血科

编写者审批者保管者操作人员

ABO血型正反定型不符与交叉配血不合的原因及其处理方法_杨世明

论著 文章编号:1007-8738(2011)07-0812-02 ABO 血型正反定型不符与交叉配血不合的原因及其处理方法 杨世明*,张勇萍,田 榆,徐 宁,王文婷(第四军医大学唐都医院输血科,陕西西安710038) 收稿日期:2011-01-18; 接受日期:2011-04-28 作者简介:杨世明(1955-),男(苗族),湖北宣恩人,副主任技师 T e:l 029-********;E-m ai:l s hxkysh m@f m https://www.wendangku.net/doc/2717295610.html, .cn *Correspond i ng au t hor [摘要] 目的:探讨引起患者ABO 血型正反定型不符与交叉配血不合的原因及其处理方法,确保输血安全。方法:应用血型血清学检测方法对A BO 血型正反定型不符及交叉配血不合的血标本进行正反定型、不规则抗体筛选及特异性鉴定、吸收放散试验、唾液血型物质测定等系列检测,分析引起血型正反定型不符及交叉配血不合的原因,为患者选择同型及交叉配血相合的血液进行输注。结果:在输血前的血型血清学检测中发现ABO 血型正反定型不符及交叉配血不合的血标本468例,其中自身冷抗体132例(28.2%),血型不规则抗体96例(20.5%),血型抗原性减弱68例(14.5%),血型抗体效价减弱60例(12.8%),自身抗体阳性54例(11.5%),血浆蛋白异常18例(3.8%),实验方法学原因16例(3.4%),ABO 血型不合的干细胞移植13例(2.8%),肝素影响9例(1.9%),血标本污染2例(0.4%)。结论:ABO 血型正反定型不符及交叉配血不合的原因大多数是由自身抗体,不规则抗体,血型抗原抗体减弱及血浆蛋白异常等引起的。因此对ABO 血型正反定型不符及交叉配血不合的血标本,应采用多种血型血清学检测方法进行互相验证,以保证血型鉴定及交叉配血无误,确保临床输血安全。[关键词]血型鉴定;抗体鉴定;交叉配血;输血安全[中图分类号]R 457.1 [文献标识码]B ABO 血型是临床输血和器官移植中最重要的血型系统,在输血前的血型血清学检测中,准确地进行ABO 血型鉴定、不规则抗体筛选及交叉配血试验, 为患者选择不含相应抗原的血液进行输注,是确保临床输血安全和有效的重要措施。但在输血前的血型血清学检测中,常出现AB O 血型正反定型不符及交叉配血不合的现象。如果误定患者或供血者的ABO 血型,交叉配血未及时发现有临床意义的血型不规则抗体,误输异型血,就会严重威胁患者的生命安全。现将468例ABO 血型正反定型不符及交叉配血不合的原因进行分析,并对其处理方法及输血对策进行探讨。1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 标本来源 2000-01/2010-10期间在我院住院及门诊 的患者。进行血型血清学检测中,出现血型正反定型不符及交叉配血不合患者468例,男213例,女255例,年龄2d~82岁。1.1.2 试剂仪器 抗A 、抗B 、抗A +B 、抗H 、抗A 1、抗D 、抗C 、抗c 、抗E 、抗e 血型定型试剂、抗人球蛋白试剂、不规则抗体筛选细胞及谱细胞均由上海血液生物医药有限责任公司提供,反定型红细胞悬液由长春博德生物制品研究所提供(部分由本实验室制备),凝聚胺配血试剂由珠海贝索生物技术有限公司提供,微柱凝胶卡、专用离心机、37 孵育器及其配套试剂由达亚美公司提供。 1.2 方法 用微柱凝胶法进行A BO 正反定型及R h 血型鉴定;用凝聚胺法和微柱凝胶法进行血型不规则抗体筛选及特异性鉴定;吸收放散试验及唾液血型物质测定按参考文献[1]操作;用2-M e 处理被患者自身冷抗体凝集的红细胞;用氯喹放散法检测自身抗体掩盖的同种抗体。 2 结果 通过对468例患者血标本进行ABO 正反定型、吸收放散试验、唾液血型物质测定、抗人球蛋白试验、血型不规则抗体筛选及其特异性鉴定等,发现造成ABO 血型正反定型不符及交叉配血不合的主要原因有:自身冷抗体132例(28.2%),血型不规则抗体96例(20.5%),血型抗原性减弱68例(14.5%),血型抗体效价减弱60例(12.8%),自身抗体阳性54例(11.5%),血浆蛋白异常18例(3.8%),实验方法学原因16例(3.4%),A B O 血型不合的干细胞移植13例(2.8%),肝素影响9例(1.9%),血标本细菌污染2例(0.4%)。 3 讨论 AB O 血型鉴定和交叉配血可受多种因素的干 扰,引起正反定型不符或交叉配血不合。在进行AB O 血型鉴定和交叉配血时,如果发现正反定型不符及交叉配血不合,应重新抽取血标本并使用质量合格的检测试剂重做一次试验,在排除人为因素和技术原因以后,根据具体情况进行综合分析。本研究通过正反定型、吸收放散试验、唾液血型物质测定、血型不规则抗体筛选及其特异性鉴定,并在正定型时加做抗AB 、抗A1和抗H 试剂,反定型时加做A1型细胞、A 2型细胞、O 型细胞及自身对照,排除AB O 亚型的干扰,同时在4 、22 及37 孵育,结果表明引起AB O 血型正反定型不符及交叉配血不合的主要原因有:自身冷抗体132例(28.2%),血型不规则抗体96例(20.5%),血型抗原性减弱68例(14.5%),血型抗体效价减弱60例(12.8%),自身

ABO血型鉴定正反定型试验方法

A B O血型鉴定正反定型 试验方法 This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020

ABO血型鉴定正反定型试验方法 一、试剂和材料： （一）单克隆抗A、抗B试剂（由试剂厂家提供） （二）显微镜、载玻片 （三）A型、B型红细胞（本实验室制备的5%混悬液） （四）EDTA抗凝的待测红细胞全血 （五）竹签 二、方法（玻片法）： （一）正定型： 1.在一块干净的玻片上，间隔一定距离做好标记，分别滴一滴抗A和抗B试剂； 2.在每滴试剂中加一滴待测红细胞全血； 3.用竹签混匀试剂和红细胞，并使混合物直径＞15mm； 4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察； 5.判读、解释并记录反应结果。 （二）反定型： 1.在玻片上间隔一定距离标明Ac和Bc字样。分别滴加5%的A型红细胞悬液、B型红细胞悬液各一滴；

2.在玻片每滴红细胞悬液上滴加待测血清各一滴； 3.混匀（同正定型）； 4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察； 5.判读、解释并记录反应结果。 6.结合正反定型反应结果、判定血型，见表1 表1 ABO血型正反定型试验结果判定 三、附注： （一）表中“O”表示无凝集，“+”表示凝集，一般都是3-4个+的强凝集反应；（二）2分钟后红细胞仍呈均匀混悬状态是阴性反应；

（三）若得到弱的或可凝集反应结果，该标本应用试管法重新试验； （四）由于新生儿在出生4~6个月内，血浆中的ABO抗体活动太弱，并且含有来自母亲的抗体，故新生儿血型只能由检测红细胞抗原的正定型来测定其ABO血型； （五）做正定型时，还可加一抗A、B血清（O型人血清），以检测ABO弱抗原；做反定型时可以加试一O型红细胞，借以证实是否有不规则抗体的存在。

ABO血型正 反定型

ABO血型正、反定型操作规程 [目的] 保证ABO血型鉴定准确，确保临床输血安全。 [适用范围] XXX医院输血科 [职责] 具有专业技术的工作人员主要负责本院输血（或备血）标本的ABO血型鉴定（但只对该单份标本负责）。 [相关文件] 试剂采购、保存和使用管理程序 设备采购、使用管理程序 消毒与清洁管理程序 标本采集、运输、保存和报废管理程序 紧急用血管理程序 [相关记录] 仪器设备的采购、使用和维护记录 仪器的温度记录 恒温水温箱的换水和消毒记录 消毒液的配置记录 清洁消毒记录 试剂采购、使用记录 标本交接和报废记录 紧急用血记录 [实验原理] ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。存在A凝集原的称为A型，存在B凝集原的称为B型。而血清中还存在凝集素。当A凝集原与抗A凝集素相遇或B凝集原与抗B凝集素相遇时，会发生红细胞凝集反应。一般A型血清中含有抗B凝集素，B型血清中含有抗A凝集素，因此可以用标准血清中的凝集素与被测者的红细胞反应（称为正定型），用标准红细胞与被测者血清中的凝集素反应（称为反定型），以确定其ABO血型。 [仪器器械] 玻璃试管、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、普通离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。 [试剂] 抗A标准血清、抗B标准血清、A型标准红细胞、B型标准红细胞、O型标准红细胞、生理盐水。以上试剂均为有合格证件的正品。 [标本收集与处理] 1．受检者血清：采集受检者静脉血2~3ml，经1000r/min离心1分钟或室温静置1小时后取上清。 2．2~5%的受检者红细胞：采集受检者静脉血或末梢血，用生理盐水制成2~5％红细胞盐水悬液备用，制备方法见本节质量控制和注意事项。 3．标本出现中度以上溶血者，为不合格标本，不能用于检测。 [实验方法与步骤] 血型的正定型（试管法）：

ABO血型鉴定正反定型试验方法

A B O血型鉴定正反定 型试验方法 标准化管理处编码[BBX968T-XBB8968-NNJ668-MM9N]

ABO血型鉴定正反定型试验方法 一、试剂和材料： （一）单克隆抗A、抗B试剂（由试剂厂家提供） （二）显微镜、载玻片 （三）A型、B型红细胞（本实验室制备的5%混悬液） （四）EDTA抗凝的待测红细胞全血 （五）竹签 二、方法（玻片法）： （一）正定型： 1.在一块干净的玻片上，间隔一定距离做好标记，分别滴一滴抗A和抗B试剂； 2.在每滴试剂中加一滴待测红细胞全血； 3.用竹签混匀试剂和红细胞，并使混合物直径＞15mm； 4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察； 5.判读、解释并记录反应结果。 （二）反定型： 1.在玻片上间隔一定距离标明Ac和Bc字样。分别滴加5%的A型红细胞悬液、B型红细胞悬液各一滴；

2.在玻片每滴红细胞悬液上滴加待测血清各一滴； 3.混匀（同正定型）； 4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察； 5.判读、解释并记录反应结果。 6.结合正反定型反应结果、判定血型，见表1 表1 ABO血型正反定型试验结果判定 三、附注： （一）表中“O”表示无凝集，“+”表示凝集，一般都是3-4个+的强凝集反应；（二）2分钟后红细胞仍呈均匀混悬状态是阴性反应；

（三）若得到弱的或可凝集反应结果，该标本应用试管法重新试验； （四）由于新生儿在出生4~6个月内，血浆中的ABO抗体活动太弱，并且含有来自母亲的抗体，故新生儿血型只能由检测红细胞抗原的正定型来测定其ABO血型； （五）做正定型时，还可加一抗A、B血清（O型人血清），以检测ABO弱抗原；做反定型时可以加试一O型红细胞，借以证实是否有不规则抗体的存在。

ABO血型鉴定操作规程

ABO血型鉴定操作规程 1.目的： 为准确鉴定ABO血型 2.要求： 要求全科人员熟练掌握原理及操作，对有疑问的结果能够做出解释及妥善解决。 3.原理： 根据红细胞上有无A抗原和/或B抗原，将血型分为A型、B型、O型和AB型四种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO 血型。正定型是用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原和/或B抗原；反定型是用已知的A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的抗A和/或抗B。反定型中使用O细胞是为了检测抗A、抗B以外的不规则抗体。 4.试剂和材料 4.1 A、抗B分型血清，效价1：128以上 4.2 2%~5%A、B、O标准红细胞。 4.3 受检者血样 5.方法．（试管法） 5.1 取洁净小试管2支，分别标明抗A、抗B，分别滴加抗A、抗B分型血清1滴于试管底部，再分别加入受检者2%~5%红细胞1滴，混合。 5.2 另取洁净小试管3支，标明A C、B C、O C，各加入受检者血清2滴

于试管底部，再分别加入A、B和O型2%~5%标准红细胞1滴，混匀。 5.3 以1000g离心15秒，将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，以肉眼观察有无凝集或溶血现象。观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，这将有助于A、B亚型、类B、或CisAB的发现。★ 6.结果判断： 血型抗A血 清 抗B血 清 A细 胞 B细 胞 O细胞 A + - - + - B - + + - - O - - + + - AB + + - - - 7.正反定型不一致的原因： 有技术问题或红细胞和血清本身问题，常见者有以下数种： 7 1 分型血清效价太低，亲和力不强。 7.2 红细胞悬液浓度过高或过低，抗原抗体比例不适当（出现前带或 后带现象），使反应不明显误判为阴性反应 7.3 受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（见于 白血病或恶性肿瘤）以及类B或CisAB等。 7.4 受检者血清蛋白紊乱（高球蛋白血病）或实验时温度过高，常引起红细胞呈缗钱状排列。 7.5 受检者血清中缺乏应有的抗A或抗B抗体，如丙种球蛋白缺乏

ABO血型鉴定正反定型不符原因分析

【摘要】目的分析临床常见的abo血型正反定型不符的原因及解决方法。方法应用正反定型、吸收放散试验和唾液血型物质测定试验检测abo血型正反定型不符的标本，分析正反定型不符原因，进行正确的分型。结果共出检abo血型正反定型不符标本18例，其中冷自身抗体8例；血浆成分异常4例；亚型2例；ab抗原减弱2例；抗体减弱或缺失1例；同种抗体1例子。结论对abo血型正反定型不符的标本，应采用正确方法鉴定abo血型，从而确保临床输血安全。 【关键词】 abo血型；正反定型不符；原因分析 doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2014.03.733 文章编号：1004-7484（2014）-03-1767-02 血型鉴定及鉴定结果的可靠性对临床安全输血具有至关重要的作用，正确的血型鉴定是临床安全输血的关键，而错误血型的血液一旦输入，则直接危及患者生命安全。但在临床实际工作中，常出现abo血型不符的现象，本文对我院2010年8月至2013年8月鉴定abo血型正反定型不符的标本18例进行分析报告如下： 1 资料与方法 1.1 一般资料我院2010年8月?2013年8月门诊及住院鉴定血型患者标本，其中abo 血型正反定型不符的有18例。 1.2 试剂抗a、抗b、抗ab、抗h、抗a1血清，红细胞ac、bc、oc、a1c、a2c（由长春博德生物制品研究所）；不规则抗体筛查红细胞及谱细胞（上海血液生物医药有限公司）。 1.3 方法血型正反定型（试管法、微柱凝胶法）、吸收放散试验、abo型认定试验、抗人球蛋白试验、抗体鉴定试验、唾液血型物质测定试验。以上试验均按规范进行操作。 2 结果 通过对18例血样标本进行abo正反定型、吸收放散试验、抗体鉴定试验、抗人球试验、唾液血型物质测定等试验，发现造成abo型正反定型不符的原因主要为冷自身抗体8例，其它原因有血浆成分异常4例，血型亚型2例，ab抗原性减弱2例，抗体缺失及减弱1例，同种抗体1例。 3 讨论 在鉴定abo血型时，如果发现正反定型不符，首先严格按照操作规程重新试验，排除人为操作失误、试剂因素后综合分析原因并应用正确的方法解决出现的问题。abo血型正反定型不符的常见原因如下。 3.1 冷自身抗体本组例中标本8例。冷自身抗体是引起正反定型不符的最常见原因。一般健康人血清中含有少量的冷凝集素，且效价很低，一般在1：16以下，冷凝集素是红细胞自身免疫抗体，以igm形式存在于血清中，其效价大于1：64凝集素的患者，能使血型鉴定受到干扰。在进行正定型时，误定a、b、o型为ab型，在反定型时，容易把a、b、ab型误定为o型。冷凝集素属冷反应的自身抗体，其特点是在较低的温度下能使患者自身的红细胞凝集，在体外最适的反应温度为4-27℃，4℃时反应最强，37℃时冷凝集消失。冷抗体效价不超过1：16时，一般不会发生凝集，但某些疾病如支原体肺炎、传染性单核细胞增多症、病毒性肺炎、再生障碍性贫血恶性变、自身免疫性溶血性贫血、红斑狼疮等可引起高效价的冷凝集素，因此，对有高效价凝集素的患者，可将红细胞和血清分别放在37℃预温，并在此条件下进行血型鉴定，对于自身红细胞已凝集的情况，进行血型鉴定时必须用37℃生理盐水反复洗涤红细胞，用洗涤后的红细胞反复吸收血清中的冷凝集素，使血清中自身的冷凝集素消失，再进行血型鉴定。在冷自身抗体效价太高，血样标本已凝固的情况下，可用巯基乙醇处理红细胞再进行abo正定型试验[1]。 3.2 血浆成分异常本组例中标本有4例，某些肝病、多发性骨髓瘤等疾病的患者存在大

ABO血型鉴定操作规程(试管法)

宁晋县中西医结合医院ABO血型鉴定操作规程 一．项目名称ABO 血型鉴定（正定型） 二．方法试管法 三．检验原理根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，以及血清中有无抗A或（和）抗B抗体，可以将红细胞血型分为A型、B型、O型和AB型。根据抗A和抗B抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，可以鉴定ABO血型。 四．试剂上海血液生物医药有限公司 抗A血型定型试剂和抗B血型定型试剂（单克隆抗体） 五．标本采集抗凝或不抗凝的末梢血或静脉血均可，用生理盐水做成2-5%红细胞悬液六．操作 1 取试管2支并分别标注抗A和抗B。 2 抗A试管中加入抗A试剂一滴，在抗B试管中加入抗B试剂一滴。 3 在抗A、抗B试管中分别加入受检者2-5%的红细胞悬液一滴，混匀。 4 用离心机3400离心15秒。 5 检验是否有溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染），然后轻轻摇晃，使细胞 再悬浮。 6 观察凝集情况，并记录结果。必要时借助显微镜。 7 许多红细胞亚型（如Ax）能在抗AB试剂的盐水中凝集，但与抗A不凝，在室温（23±3℃）中放置几分钟，可以增强反应，但放置时间不宜超过30分钟。 8 检验结果的解释 ABO血型反应格局表 正定型 血型抗A试剂抗B试剂 + - A - + B - - O + + AB 七．检验方法的局限性 与反定型一起进行，正反定型不一致须进一步检查。 八．注意事项 1 对含有较多自身冷凝剂素的受检者，需要37℃的生理盐水溶液洗涤受检者红细胞2-3 次，去除吸附在红细胞上的冷凝集素，然后在鉴定血型。 2 新生儿的血样中抗体含量较低，抗原发育不完全。同时可能含有母亲血液中的抗A 或抗B抗体，可能导致假阳性或假阴性的出现。 3 出现ABO正反定型不符，须查明原因并解决问题后在记录结果。

ABO血型鉴定中正反定型不符的原因及对策分析

ABO血型鉴定中正反定型不符的原因及对策分析 摘要：目的：探讨在实施ABO血型鉴定期间导致呈现出正反定型不符原因并研 究具体干预对策。方法：将我院2017年05月～2020年01月收治的40例ABO 血型正反定型不符患者作为实验对象；就正反定型不符原因进行分析，并研究具 体的干预对策。结果：针对ABO血型鉴定患者表现出正反定型不符原因进行分析，主要集中于冷自身抗体干扰、不规则冷抗体干扰以及抗体减弱几方面，对此通过 研究有效干预对策给予对应干预，可获得显著干预效果。结论：针对患者在实施ABO血型鉴定期间，需要依据患者表现型具体情况以及临床资料，合理展开血清 学试验操作，以确保对于ABO血型正反定型不符原因能够充分了解以及掌握，并 且对应完成解决方法的创建，以对血型检查安全性以及准确性做出充分保证，为 患者早期确诊以及治疗方法的快速、有效研究做出充分准备。 关键词：ABO血型鉴定；正反定型不符；原因；对策 针对患者在进行治疗期间，需要对患者临床输血安全性做出充分保证，对此积极展开ABO 血型鉴定工作意义显著[1]。具体在实施ABO血型鉴定期间，往往因为系列因素的影响最终使 得患者红细胞以及血型抗体表面呈现出血型抗原变化的现象，对应表现出ABO血型正反定型 不符的现象[2]。当前针对此种情况需要就具体诱发原因加以充分了解以及掌握，对应完成解 决办法的创建，以使得ABO血型正反定型不符现象获得充分减少，对患者临床诊治效果做出 充分保证。 1、资料与方法 1.1 一般资料 将我院2017年05月～2020年01月收治的40例ABO血型正反定型不符患者作为实验 对象：女26例，男14例；年龄区间为55岁～89岁，平均为（65.25±2.35）岁；纳入标准：①患者均能够配合完成本次实验研究；②对于沟通以及交流工作均可以顺利展开；排除标准：①实验期间呈现出强烈不配合现象；②短期内接受过其他实验研究。 1.2 方法 针对此次研究主要利用贝索离心机完成，水浴恒温箱分别控制为37℃以及56℃。此外，合理进行ABO反定型试剂、抗B试剂以及抗A试剂等选择。针对所有患者血型合理采用试管 法完成鉴定工作，针对不规则抗体主要利用盐水试管法以及抗人球蛋白试管法完成筛查工作。依据试剂盒具体说明合理完成不规则抗体特异性鉴定工作，针对对照谱细胞格局之间合理完 成对比，从而对特异性抗体种类进行有效明确。之后针对完成标化的抗A血清、抗H血清以 及抗B血清，于抗血清以及等量唾液中合理完成中和处理操作，＞10min，准备对应量红细 胞合理加入，对混合均匀性做出保证后，合理展开孵育（30min，在室温条件下展开），利 用离心方法针对获得结果展开对应观察，最终确保血型物质于唾液中有效获得。 2、结果 针对ABO血型鉴定患者表现出正反定型不符原因进行分析，主要集中于冷自身抗体干扰、不规则冷抗体干扰以及抗体减弱几方面，对此通过研究有效干预对策给予对应干预，可获得 显著干预效果。

ABO血型反定型试剂红细胞配制SOP修订版

A B O血型反定型试剂红 细胞配制S O P修订版 IBMT standardization office【IBMT5AB-IBMT08-IBMT2C-ZZT18】

ABO血型反定型试剂红细胞配制（SOP） 1．目的 规范ABO血型反定型检测试剂红细胞配制的操作，以保证该实验在工作中能够正常进行，确保检测结果的准确性。 2．职责 2.1操作者负责试验操作，并作好相关记录及留样。 2.2科主任监督该规程的执行。 3．适用范围 本规程适用于中心血库检验室ABO血型反定型检测试剂红细胞配制的操作工作。 4.材料与设备 5.1 注射器 5.2 试管 5.3 离心机 注：ISO2000不允许从血袋的小辫上留取红细胞样本。 6.检测环境 6.1 温度：23-27℃

6.2相对湿度：30-70% 7．方法步骤 7.1 选取的样本分别定型并且准确无误。 7.2 选取每型至少10人份的同型细胞等量混合，越多越好。 7.3 用足量的生理盐水至少洗三遍，最后一遍压积必须扣干。 7.4 经多批次定型试剂鉴定确认血型无误方可使用，并作好明显标记。 7.5 悬浮在含有葡萄糖等保存液的抗凝剂中。 9．注意事项 9.1 特异性鉴定，阴性必须在显微镜下观察，包括红细胞形态。 9.2 每次使用前必须观察溶血现象，并配制成5％左右的红细胞悬液。 9.3 不使用时必须4℃保存。 9.4 配制必须符合《实验室质量管理规范》和《生物安全守则》的规定。操作时必须戴手套、穿工作衣，严格执行消毒隔离制度。所有样品、废液、废弃物都应按污物处理程序进行。 9.2应严格按照以上操作步骤进行。 11质量记录 11.1 《检验室污物处理记录》

ABO-Rh正反定型血型定型操作规程

ABO-Rh正反定型血型定型操作规程 一、项目名称、检验方法名称 1．项目名称：ABO-Rh正反定型血型定型 2．检验方法名称：柱凝集 二、方法学原理 该试剂卡是基于柱凝集的原理而设计。正常具有抗原的人红细胞将与相应的抗体发生凝集反应，BioVue血型诊断试剂卡的微柱中含有玻璃珠介质和试剂。加入红细胞并将试剂卡离心后，发生凝集的红细胞会被阻挡在玻璃珠的上面，而未凝集的游离红细胞则会在离心力的作用下通过玻璃珠之间的间隙到达微柱的底部。 三、试剂卡品牌、代号、包装规格、内含物 1．试剂卡品牌：美国强生奥索(Ortho-Clinical Diagnostica,Inc) 2．代号：BioVue -ABO/Rh-Reverse 3．包装规格： 400卡/箱试剂卡（707100）；100卡/箱试剂卡（707155） 4．试剂成分： BioVue ABO-Rh正反定型血型诊断试剂卡有6根微柱组成，每一柱中含有缓冲液，其成分为牛血清蛋白，大分子增强剂以及0.1％叠氮钠，0.01M的EDTA. 成分描述 第一柱：抗－A试剂抗－A鼠单克隆(lgM)抗体混和；蓝色染料第二柱：抗－B试剂抗－B鼠单克隆(lgM)抗体混和；黄色染料第三柱：抗－D试剂（抗RH）抗－D人单克隆(lgM)抗体 第四柱：质控优化增强剂，用于血型检测的质控对照 第五，第六柱：反定型稀释液优化增强剂，用于反定型血型检测 5．试剂的储存与效期： 储存条件： 2～25℃环境中保存。请勿将试剂存放在自动除霜的冰箱中，也不要冷冻保存。并且不要放在离热源（如孵育箱、辐射器、大型设备、冰箱、冰柜等）很近或阳光直射的地方。 效期：试剂盒上有记载 四、仪器品牌、型号 BioVue专用离心机；BioVue专用孵育器 五、样本的采集与准备： 在采集标本前对病人/献血者无特殊要求，血液采集应符合相关的技术标准及管理规范。含有或不含有抗凝剂的标本均可使用。 标本采集后应尽快进行检测。如果实验不能立即进行，应将标本置于2－8℃保存。已凝集的标本以及用EDTA、肝素或柠檬酸盐抗凝的标本应在7天内检测。献血员标本应在其效期内检测。 采集自脐带血的红细胞应确保没有污染。如怀疑样品污染需用生理盐水洗涤。 抗凝全血标本以900－1000g离心5分钟，即可得到浓度约为80％的浓缩红细胞。 1ml生理盐水＋40ul浓缩红细胞即配制成3％的红细胞悬液。 或 1ml生理盐水＋10ul浓缩红细胞即配制成0.8％的红细胞悬液。 六、试剂准备： BioVue ABO-Rh正反定型血型诊断试剂卡应在铝箔开启后一小时内使用。请勿使用液面在玻璃珠以下的试剂卡。

ABO血型鉴定正反定型试验方法

A B O血型鉴定正反定型试 验方法 The latest revision on November 22, 2020

A B O血型鉴定正反定型试验方法 一、试剂和材料： （一）单克隆抗A、抗B试剂（由试剂厂家提供） （二）显微镜、载玻片 （三）A型、B型红细胞（本实验室制备的5%混悬液） （四）EDTA抗凝的待测红细胞全血 （五）竹签 二、方法（玻片法）： （一）正定型： 1.在一块干净的玻片上，间隔一定距离做好标记，分别滴一滴抗A和抗B试剂； 2.在每滴试剂中加一滴待测红细胞全血； 3.用竹签混匀试剂和红细胞，并使混合物直径＞15mm； 4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察； 5.判读、解释并记录反应结果。 （二）反定型： 1.在玻片上间隔一定距离标明Ac和Bc字样。分别滴加5%的A型红细胞悬液、B型红细胞悬液各一滴； 2.在玻片每滴红细胞悬液上滴加待测血清各一滴； 3.混匀（同正定型）； 4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察； 5.判读、解释并记录反应结果。 6.结合正反定型反应结果、判定血型，见表1 （一）表中“O”表示无凝集，“+”表示凝集，一般都是3-4个+的强凝集反应； （二）2分钟后红细胞仍呈均匀混悬状态是阴性反应； （三）若得到弱的或可凝集反应结果，该标本应用试管法重新试验； （四）由于新生儿在出生4~6个月内，血浆中的ABO抗体活动太弱，并且含有来自母亲的抗体，故新生儿血型只能由检测红细胞抗原的正定型来测定其ABO血型； （五）做正定型时，还可加一抗A、B血清（O型人血清），以检测ABO弱抗原；做反定型时可以加试一O型红细胞，借以证实是否有不规则抗体的存在。

ABO血型正、反定型教学内容

A B O血型正、反定型

ABO血型正、反定型操作规程 [目的] 保证ABO血型鉴定准确，确保临床输血安全。 [适用范围] XXX医院输血科 [职责] 具有专业技术的工作人员主要负责本院输血（或备血）标本的ABO血型鉴定（但只对该单份标本负责）。 [相关文件] 试剂采购、保存和使用管理程序 设备采购、使用管理程序 消毒与清洁管理程序 标本采集、运输、保存和报废管理程序 紧急用血管理程序 [相关记录] 仪器设备的采购、使用和维护记录 仪器的温度记录 恒温水温箱的换水和消毒记录 消毒液的配置记录 清洁消毒记录 试剂采购、使用记录 标本交接和报废记录

紧急用血记录 [实验原理] ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。存在A凝集原的称为A型，存在B凝集原的称为B型。而血清中还存在凝集素。当A凝集原与抗A凝集素相遇或B凝集原与抗B凝集素相遇时，会发生红细胞凝集反应。一般A型血清中含有抗B凝集素，B型血清中含有抗A凝集素，因此可以用标准血清中的凝集素与被测者的红细胞反应（称为正定型），用标准红细胞与被测者血清中的凝集素反应（称为反定型），以确定其ABO血型。 [仪器器械] 玻璃试管、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、普通离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。 [试剂] 抗A标准血清、抗B标准血清、A型标准红细胞、B型标准红细胞、O型标准红细胞、生理盐水。以上试剂均为有合格证件的正品。 [标本收集与处理] 1．受检者血清：采集受检者静脉血2~3ml，经1000r/min离心1分钟或室温静置1小时后取上清。 2．2~5%的受检者红细胞：采集受检者静脉血或末梢血，用生理盐水制成 2~5％红细胞盐水悬液备用，制备方法见本节质量控制和注意事项。 3．标本出现中度以上溶血者，为不合格标本，不能用于检测。 [实验方法与步骤] 1.ABO血型的正定型（试管法）：

血型鉴定、交叉配血操作规程

ABO、Rh-D血型鉴定操作规程 1.目的：规范ABO、Rh-D检测的操作过程 2. 标本采集：静脉采血2ml抗凝血,避免溶血试剂 3. 试剂：长春博讯生物技术有限责任公司 4.方法原理 【原理】:标准血清中的完全抗体(lgM)抗A、抗B、和抗D能和红细胞表面相应的抗原在盐水介质中发生特异性的凝集反应。根据红细胞凝聚类型可鉴别出A、B、O、AB四型和RHD阴性或阳性。 5. 操作: 一、玻片法(一般只能做正定型) 【正定型】: 1、取一张玻片,用蜡笔或记号笔将其分为三等份,从左到右每一等份左上角标明A、B、D, 2、对应加入抗A和抗B抗D标准血清一滴; 3、分别加PC(患者10—15%红细胞悬液); 4、用洁净竹签将试剂和红细胞充分混匀,混合物约2cm2大小; 5、轻轻地连续倾斜转动玻片2—5分钟,观察并记录; 【解释】:A端凝集为A型血;B端凝集为B型血;A、B 端均凝集则为AB型;A、B端均不凝集则为O型;D端凝集则为RH阳性者,无凝集则为RH阴性。 备注:玻片法可作为ABO血型初筛或复检;不适用于抗体鉴定和交叉配血;不适合检测ABO亚型。 二、试管法(盐水介质) 【原理】:标准的A型和B型红细胞能和受检者血清(血浆)中相应的抗体发生特异性结合,形成肉眼可见的凝集反应,从而可推断出受检者的血型。 【材料】: 1、标准A型和B型红细胞悬液(浓度4%,商品有售,亦可自行新鲜配制); 2、受试者血清或血清; 3、洁净康氏试管。 【正定型】: 1、取二支洁净试管分别记上抗A和抗B; 2、对应加入抗A和抗B血清1滴; 3、分别加入病人红细胞悬液1滴(浓度为2%-5%); 4、混匀,室温放置5分钟,1000rpm离心1分钟,取出观察结果 【解释】:轻摇试管,检查是否凝集,抗A、抗B管均凝集,受试者为AB型血;抗A、抗B管均不凝集,则为O 型血;抗A管凝集则为A型血;抗B管凝集则为B型血。【反定型】: 1、取二支试管分别记上AC和BC; 2、分别加入病人血清; 3、对应加入A和B型试剂红细胞; 4、混匀室温放置5分钟,1000rpm离心1分钟,取出观察结果; 【解释】:首先检查上清液有无溶血,然后轻摇试管,检查是否凝集,A、B管均凝集受试者为O型血;A、B管均不凝集则为AB型血;A管凝集则为B型血;B管凝集则为A型血。 3.卡式法(微柱凝胶技术) 【原理】:在含有中性胶的微柱管中相继加入红细胞抗体和红细胞,孵育后相应的抗原和抗体则形成免疫复合物,利用凝胶分子排阻原理在一定的离心力下,该复合物不能通过凝胶间隙浮于胶表面或悬于胶中. 无相应的抗原和抗体,则不能形成免疫复合物, 在一定的离心力下,分散的红细胞可以通过凝胶间隙沉于微柱腔底部。可用于ABO血型正反定型,RH血型检测或其它应用完全性抗体的血型检测。 【试剂】:血型检测卡ABO试剂红细胞 【正定型】:在含有红细胞抗体的微柱凝胶管中加入待检红细胞, 孵育后离心观察结果。分散的红细胞可以通过凝胶间隙沉于微柱腔底部,凝集的红细胞不能通过凝胶间隙浮于胶表面或悬于胶中。 【解释】:抗A、抗B管均凝集(浮于胶表面或悬于胶中),受试者为AB型血;抗A、抗B管均不凝集(沉于微柱腔底部),则为O型血;抗A管凝集则为A型血;抗B管凝集则为B 型血。 【反定型】:将抗原吸附在红细胞表面,检测与其相应抗体发生的凝集反应。在ABO血型反定型试验中,将人A 或B型血型多糖抗原经媒介化合物联结到O型红细胞上(可长期保存),然后将该具有A型抗原或B型抗原红细胞分别与被检血清在微柱凝胶中反应,检测被检血清中ABO抗体. 【解释】:A、B管均凝集受试者为O型血(浮于胶表面或悬于胶中);A、B管均不凝集则为AB型血(沉于微柱腔底部);A管凝集则为B型血;B管凝集则为A型血。 交叉配血操作规程 交叉配血的目的是确保为病人选择合适的血液和测定受试者血清中有无任何不规则的抗体,防止输血后产生溶血性输血反应。交叉配血有两类即主侧交叉、次侧交叉,交叉配血实验的结果,主侧是绝对不可以有凝集和溶血现象,次侧在A或B型人输入O型血时,可以有凝集现象,但不可以有溶血现象。 一、盐水交叉配血实验(试管法) 【原理】:完全抗体(lgM)在盐水介质中能和相应的抗原发生免疫反应,形成肉眼可见的凝集反应。 【试剂】:生理盐水

(精选)ABO血型正、反定型

ABO血型正、反定型操作规程 [ 目的] 保证ABO血型鉴定准确，确保临床输血安全。 [ 适用范围] XXX 医院输血科 [ 职责] 具有专业技术的工作人员主要负责本院输血（或备血）标本的ABO血型鉴定（但只对该单份标本负责）。 [ 相关文件] 试剂采购、保存和使用管理程序设备采购、使用管理程序消毒与清洁管理程序标本采集、运输、保存和报废管理程序紧急用血管理程序 [ 相关记录] 仪器设备的采购、使用和维护记录 仪器的温度记录恒温水温箱的换水和消毒记录消毒液的配置记录清洁消毒记录 试剂采购、使用记录标本交接和报废记录紧急用血记录 [ 实验原理] ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。存在A凝集原的称为A型，存在B凝集原的称为B型。而血清中还存在凝集素。当A凝集原与抗A凝集素相遇或B 凝集原与抗B 凝集素相遇时，会发生红细胞凝集反应。一般A型血清中含有抗B凝集素，B型血清中含有抗A凝集素，因此可以用标准血清中的凝集素与被测者的红细胞反应（称为正定型），用标准红细胞与被测者血清中的凝集素反应（称为反定型），以确定其ABO血型。 [ 仪器器械] 玻璃试管、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、普通离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。 [ 试剂] 抗A标准血清、抗B标准血清、A型标准红细胞、B型标准红细胞、0型标准红细胞、生理盐水。以上试剂均为有合格证件的正品。 [ 标本收集与处理] 1受检者血清：采集受检者静脉血2~3ml，经1000r/min离心1分钟或室温静置1小时后取上清。 2．2~5%的受检者红细胞：采集受检者静脉血或末梢血，用生理盐水制成2~5％ 红细胞盐水悬液备用，制备方法见本节质量控制和注意事项。 3．标本出现中度以上溶血者，为不合格标本，不能用于检测。 [ 实验方法与步骤] 1. ABO血型的正定型（试管法）：

ABO血型鉴定操作规程

成都市青白江区人民医院 对象：全院职工 医疗药事制度文件名称：ABO血型鉴定（4.19.2.1） 编写日期：2014.1 修订日期：2017.4 执行日期：2017.4 注：①本文件仅供本院人员使用，未经同意，不得翻印②本文件最终解释权归输血科 ABO血型鉴定 【原理】人类ABO血型系统包括四种主要的表现型：A、B、O和AB。ABO血型由红细胞上A 和B抗原的有或无决定，ABO系统还以血清中存在自然发生的规则抗体为特点，即血清中含有针 对自身红细胞所缺的A或B 抗原产生的同种凝集素（也称为“天然抗体”）。人类红细胞上A和B 抗原的有或无与血浆中抗A和抗B抗体的产生存在着相反的互补关系。例如O型个体红细胞上缺 少A和B抗原，其血清中含有抗A和抗B抗体。 利用红细胞凝集试验，通过正反定型可以准确鉴定ABO血型。所谓正定型，也称红细胞定型试验，是指用标准抗A和抗B试剂来测定红细胞上的A抗原和B抗原；所谓反定型，也称血清定型试验，是指用标准A型和B型红细胞来测定血清中有无相应的抗A和抗B抗体。“天然抗体”的免疫原可 能是肠道及环境中的细菌，例如在大肠埃希菌的脂多糖外壳中含有ABO类似结构。 1.试管法试管法是ABO定型试验的经典方法。 【样本】抗凝或不抗凝的样本均可用于ABO鉴定试验。红细胞可悬浮在自身血清、血浆或盐水中，也可以洗涤后悬浮于盐水中。通常情况下，试管法正定型被检样本与反定型中试剂红细胞悬液浓度 皆为2%～5%。 【试剂】（1）抗A血清 （2）抗B血清 （3）2%～5%的A型、B型红细胞盐水悬液 1（4）如果需要，可增加抗A,B试剂和A血型红细胞. 2【操作】

（1）正定型：检测红细胞上的A或B 抗原。①加1滴抗A到一支洁净试管中并标记；②加1滴抗 B到一支洁净试管中并标记；③如果需要，可选做加1滴抗A,B在第3支试管，并标记；④向每一支试管滴加1滴2%～5%的待检红细胞悬液；⑤轻轻混匀，按照校准速度和时间离心，通常 （900～1000）×g离心15秒；⑥轻轻重悬细胞扣，检查凝集情况；⑦观察、解释、记录试验结果，并与血清（血浆）试验结果对照（2）反定型：检测血清或血浆中的抗体。①取2支洁净试管，分 别标记A和B，分别向其中滴加2～13滴血清或血浆；②加1滴A试剂红细胞到标记A的试管； ③加1滴B型试剂红细胞到标记B的试管；11④如果需要，加1滴A试剂红细胞到一支已加入2～3滴血清或血浆的试管中，并做好标记；⑤轻轻混匀，2按照校准速度和时间离心，通常（900～1000）×g离心15秒；⑥检测是否有溶血现象，然后轻轻重悬细胞扣，检查凝集情况；⑦观察、解释、记录试验结果，并与红细胞试验结果对照。成都市青白江区人民医院 【结果判定】 （1）细胞试验中的凝集以及血清或血浆试验中的溶血或凝集均为阳性结果 （2）细胞扣重悬后表现为均匀的细胞悬液是阴性结果 （3）凝集强度判断标准参见表1-5-1 （4）ABO定型的血清或血浆试验以及红细胞试验的解释见表1-5-2 （5）如果红细胞定型试验与血清定型试验结果不一致，应通过进一步试验解决，然后才给出ABO 血型结果 （6）混合视野凝集的情况，应进一步找出原因：例如是否混合血样标本，近期有无输血史，是否 白血病急性期或者ABO亚型等 表1-5-1凝集强度判读 4 + = 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。 3 + = 红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。 2 + = 红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。 1 + = 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。

血型鉴定操作规程

血型鉴定操作规程 Document number：BGCG-0857-BTDO-0089-2022

血型鉴定操作规程 一．玻片法（仅适用于正定型） 1 .原理： 根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为A型、B型、AB型和O型。根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定ABO血型。 根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分RhD阳性和RhD 阳性。 2 .标本采集： 用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。紧急情况下可以使用抗凝动脉血。婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者，如不进行反定型试验可采集末梢血。 3. 标本运送与储存： 采集好的标本与申请单同期尽快（一般2小时内）送往输血科。标本采集后和检测后，应置于2~8℃环境下。检测后的标本应至少保存7天，以备结果查对。 4 .仪器与材料： 抗-A/B血型定型试剂（单克隆抗体）、RhD（IgM）血型定型试剂（单克隆抗体）、载玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。 5. 操作步骤： 用标记笔在载玻片上划分成A、B、D三个区域； 在标记好的玻片上分别加1滴抗-A、抗-B和抗-D血型定型试剂；

再各加1滴10%患者红细胞悬液（该红细胞悬液可以是盐水悬液，也可以是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞）； 用干净的搅拌棒将红细胞悬液和试剂充分混合，并把混合物均匀涂开，使其覆盖大约直径20mm的面积； 缓慢连倾斜摇动玻片1-2min，观察结果并记录。 6. 结果判定： 凝集或发生溶血为阳性结果； 细胞混匀2min后仍呈悬液状态的为阴性结果； 对结果有怀疑，应用试管法或微柱凝胶法重复实验。 二、纸板法 1 .原理： 根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为A型、B型、AB型和O型。根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定ABO血型正定型。A1细胞上含有A和A1抗原，B细胞上含有B抗原。用已知的A、B细胞检测被检者血清中有无相应的抗-A或抗-B 抗体，即反定型。综合正反定型结果确定受检标本ABO血型。 根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分RhD阳性和RhD 阳性。 2 .标本采集： 用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。紧急情况下可以使用抗凝动脉血。婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者，可采集末梢血。

血型鉴定操作规程

血型鉴定操作规程 一．玻片法（仅适用于正定型） 1 .原理： 1.1根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为A型、B型、AB型和O型。根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定ABO血型。 1.2根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分RhD阳性和RhD阳性。 2 .标本采集： 用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。紧急情况下可以使用抗凝动脉血。婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者，如不进行反定型试验可采集末梢血。 3. 标本运送与储存： 采集好的标本与申请单同期尽快（一般2小时内）送往输血科。标本采集后和检测后，应置于2~8℃环境下。检测后的标本应至少保存7天，以备结果查对。 4 .仪器与材料： 抗-A/B血型定型试剂（单克隆抗体）、RhD（IgM）血型定型试剂（单克隆抗体）、载玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。 5. 操作步骤： 5.1用标记笔在载玻片上划分成A、B、D三个区域； 5.2在标记好的玻片上分别加1滴抗-A、抗-B和抗-D血型定型试剂； 5.3再各加1滴10%患者红细胞悬液（该红细胞悬液可以是盐水悬液，也可以 是悬浮于自身血浆或血清中的红细胞）； 5.4用干净的搅拌棒将红细胞悬液和试剂充分混合，并把混合物均匀涂开， 使其覆盖大约直径20mm的面积； 5.5缓慢连倾斜摇动玻片1-2min，观察结果并记录。 6. 结果判定： 6.1凝集或发生溶血为阳性结果； 6.2细胞混匀2min后仍呈悬液状态的为阴性结果； 6.3对结果有怀疑，应用试管法或微柱凝胶法重复实验。 二、纸板法 1 .原理： 1.1根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，可以将红细胞血型分为A型、B型、AB型和O型。根据抗-A和抗-B抗体与对应红细胞的凝集反应，可以鉴定ABO血型正定型。A1细胞上含有A和A1抗原，B细胞上含有B抗原。用已知的A、B细胞检测被检者血清中有无相应的抗-A或抗-B抗体，即反定型。综合正反定型结果确定受检标本ABO血型。 1.2根据抗-D抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，区分RhD阳性和RhD阳性。 2 .标本采集： 用EDTA抗凝管采集被检对象静脉血，充分混匀，确保抗凝充分。紧急情况下可以使用抗凝动脉血。婴幼儿及其他不便于真空管采血的患者，可采集末梢血。 3. 标本运送与储存： 采集好的标本与申请单同期尽快（一般2小时内）送往输血科。标本采集后