常用培养基配方
常用培养基配方（微生物学与微生物检验学部分）
渤海大学生物与食品科学学院
2006年3月
目录
01糖发酵管
02 ONPG培养基
03西蒙氏柠檬酸盐培养基
04缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用)
05克氏柠檬酸盐培养基
06丙二酸钠培养基
07葡葡糖铵培养基
08Hugh－Leifson培养基(O/F试验用)
09 马尿酸钠培养基
10营养明胶
11苯丙氨酸培养基
12 氨基酸脱羧酶试验培养基
13蛋白胨水(靛基质试验用)
14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)
15 尿素琼脂
16 氰化钾(KCN)培养基
17 氧化酶试验
18 硝酸盐培养基
19 细胞色素氧化酶试验
20 过氧化氢酶试验
21 过氧化物酶试验
22 磷酸盐缓冲液
23明胶磷酸盐缓冲液
24 乳酸－苯酚溶液
25 肉浸液肉汤
26肉浸液琼脂
27牛肉(或牛心)消化汤
28血消化汤
29豆粉琼脂
30血琼脂
31营养琼脂
32营养肉汤
33 乳糖胆盐发酵管
34乳糖发酵管
35 EC肉汤
36 缓冲蛋白胨水(BP)
37 氯化镁孔雀绿增菌液(MM)
38 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)
39 四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法)
40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)
41 GN增菌液
42 肠道菌增菌肉汤
43 亚硫酸铋琼脂(BS)
44 DHL琼脂
45 HE琼脂
46 SS琼脂
47 WS琼脂
48 麦康凯琼脂
49 伊红美蓝琼脂(EMB)
50三糖铁琼脂(TSI)
51 三糖铁琼脂(换用方法)
52 克氏双糖铁琼脂(KI)
53 克氏双糖铁琼脂(换用方法)
54 葡萄糖半固体发酵管
55 5%乳糖发酵管
56 CAYE培养基
57 Honda氏产毒肉汤
58 Elek氏培养基(毒素测定用)
59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基
60 胰蛋白胨水
61 Rustigian氏尿素培养液
62 氯化钠结晶紫增菌液
63 氯化钠蔗糖琼脂
64 嗜盐菌选择性琼脂
65 3.5%氯化钠三糖铁琼脂
66 氯化钠血琼脂
67 3.5%氯化钠生化试验培养基
68 改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用)
69 CIN－1培养基
70 嗜盐性试验培养基
71 改良Y培养基
72 改良克氏双糖
73 快速硫化氢(H2S)试验琼脂
74 DNA酶甲基绿琼脂(DTA)
75 Cary－Blair氏运送培养基
76 Skirrow氏培养基
77 TTC琼脂
78 甘氨酸培养基
79 改良磷酸盐缓冲液
80 氯化镁孔雀绿肉汤
81 胰酪胨大豆肉汤
82 Baird－Parker氏培养基
83 7.5%氯化钠肉汤
84 匹克氏肉汤
85 甘露醇卵黄多粘菌素琼脂
86 3.8%柠檬酸钠溶液
87 酪蛋白琼脂
88 木糖－明胶培养基
89 庖肉培养基
90 卵黄琼脂培养基
91亚硫酸盐－多粘菌素－磺胺嘧啶琼脂(SPS) 92液体硫乙醇酸盐培养基(FT)
93含铁牛奶培养基
94 动力-硝酸盐培养基（A法）
95 动力－硝酸盐培养基(B法)
96 血清肉汤
97 马丁氏肉汤
98 明胶培养基
99 察氏培养基
100 高盐察氏培养基
101 马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)
102 马铃薯琼脂
103 孟加拉红培养基
104 玉米粉琼脂
105 大米粉培养基
106 亚硒酸盐煌绿增菌液
107 煌绿肉汤增菌液
108 肠毒素产毒培养基
109 0.1%蛋白胨水稀释剂
110半固体琼脂
01 糖发酵管
成分：
牛肉膏5g
蛋白胨10g
氯化钠3g
磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)2g
0.2%滇麝香草酚蓝溶液12mL
蒸馏水1000mL
pH7.4
制法：
1葡萄糖发酵管按上述成分配好后，按0.5%加入葡萄糖，分装于有一个倒置小管的小试管内，121℃高压灭菌15min。
2其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶100mL，121℃高压灭菌15min。另将各种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌。将5mL糖溶液加入于100mL培养基内，以无菌操作分装小试管。
注：蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。
试验方法：从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36℃±1℃培养，一般观察2～3d。迟缓反应需观察14～30d。
02 ONPG培养基
成分：
邻硝基酚β－D-半乳糖昔(ONPG)60mg
(O－Nitrophenyl－β－D－galactopyranoside)
0.01mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5)10mL
1%蛋白胨水(PH7.5)30mL
制法：将ONPG溶于缓冲液内，加入蛋白胨水，以过滤法除菌，分装于10mm×75mm试管，每管0.5mL，用橡皮塞塞紧。
试验方法：自琼脂斜面上挑取培养物1满环接种，于36±1℃培养1～3h和24h观察结果。如果β－半乳糖苷酶产生，则于1～3h变黄色，如无此酶则24h不变色。
03 西蒙氏柠檬酸盐培养基
成分：
氯化钠5g
硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.2g
磷酸二氢铵1g
磷酸氢二钾1g
柠檬酸钠5g
琼脂20g
蒸馏水1000mL
0.2%溴麝香草酚蓝溶液40mL
pH6.8
制法：先将盐类溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热溶化。然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121℃高压灭菌15min。放成斜面。
试验方法：挑取少量琼脂培养物接种，于36±1℃培养4d，每天观察结果。阳性者斜面上有菌落生长，培养基从绿色转为蓝色。
04 缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用)
成分：
磷酸氢二钾5g
多胨7g
葡萄糖5g
蒸馏水1000mL
pH7.0
制法：溶化后校正pH，分装试管，每管1mL，121℃高压灭菌15min。
甲基红(MR)试验：自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中，于36±1℃培养2～5d，哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养。滴加甲基红试剂一滴，立即观察结果。鲜红色为阳性，黄色为阴性。甲基红试剂配法：10mg甲基红溶于30mL95%乙醇中，然后加入20mL蒸馏水。
V－P试验：用琼脂培养物接种本培养基中，于36±1℃培养2～4d。哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养。加入6%α－萘酚－乙醇溶液0.5mL和40%氢氧化钾溶液0.2mL，充分振摇试管，观察结果。阳性反应立刻或于数分钟内出现红色，如为阴性，应放在36±1℃下培养4h再进行观察。
05克氏柠檬酸盐培养基
成分：
柠檬酸钠3g
葡萄糖0.2g
酵母浸膏0.5g
单盐酸半胱氨酸0.1g
磷酸二氢钾1g
氯化钠5g
0.2%酚红溶液6mL
琼脂15g
蒸馏水1000mL
制法：加热溶解，分装试管，121℃高压灭菌15min。放成斜面。
试验方法：用琼脂培养物接种整个斜面，在36±1℃培养7d，每天观察结果。阳性者培养基变为红色。
06 丙二酸钠培养基
成分：
酵母浸膏1g
硫酸铵2g
磷酸氢二钾0.6g
磷酸二氢钾0.4g
氯化钠2g
丙二酸钠3g
0.2%溴麝香草酚蓝溶液12mL
蒸馏水1000mL
pH6.8
制法：先将酵母浸膏和盐类溶解于水，校正pH后再加入指示剂，分装试管，121℃高压灭菌15min。试验方法：用新鲜的琼脂培养物接种，于36±1℃培养48h，观察结果。阳性者由绿色变为蓝色。
07 葡葡糖铵培养基
成分：
氯化钠5g
硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.2g
磷酸二氢铵1g
磷酸氢二钾1g
葡萄糖2g
琼脂20g
蒸馏水1000mL
0.2%溴麝香草酚蓝溶液40mL
pH6.8
制法：先将盐类和糖溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热溶化，然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121℃高压灭菌15min，放成斜面。
试验方法：用接种针轻轻触及培养物的表面，在盐水管内做成极稀的悬液，肉眼观察不见混浊，以每一接种环内含菌数在20～100之间为宜。将接种环灭菌后挑取菌液接种，同时再以同法接种普通斜面一支作为对照。于36±1℃培养24h。阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长；阴性者不生长，但在对照培养基上生长良好。如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果。注：容器使用前应用清洁液浸泡。再用清水、蒸馏水冲洗干净，并用新棉花做成棉塞，干热灭菌后使用。如果操作时不注意，有杂质污染时，易造成假阳性的结果。
08 Hugh－Leifson培养基(O/F试验用)
成分：
蛋白胨2g
氯化钠5g
磷酸氢二钾0.3g
琼脂4g
葡萄糖10g
0.2%溴麝香草酚蓝溶液12mL
蒸馏水1000mL
pH7.2
制法：将蛋白胨和盐类加水溶解后，校正pH至7.2。加入葡萄糖、琼脂煮沸，溶化琼脂，然后加入指示剂。混匀后，分装试管，121℃高压灭菌15min，直立凝固备用。
试验方法：从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种，同时接种两支培养基，其中一支于接种后滴加溶化的1%琼脂液于表面，高度约1cm，于36±1℃培养。
09 马尿酸钠培养基
成分：
马尿酸钠1g
肉浸液100mL
制法：将马尿酸钠溶解于肉浸液内，分装于小试管内，并于管壁画一横线。以标志管内液面高度，高压灭菌121℃20min。
试剂：三氯化铁(FeCl3·6H2O)12g，溶于2%盐酸溶液100mL中即成。
试验方法：用纯培养物接种，于42℃培养48h，观察培养液是否到达试管壁上记号处，如不足时，用蒸馏水补足至原量。经离心沉淀，吸取上清液0.8mL，加入三氯化铁试剂0.2mL，立即混合均匀，经10～15min，观察结果。
结果：出现恒久之沉淀物为阳性。
10营养明胶
成分：
蛋白胨5g
牛肉膏3g
明胶120g
蒸馏水1000mL
pH6.8～7.0
制法：加热溶解、校正至pH7.4～7.6，分装小管，121℃高压灭菌10min，取出后迅速冷却，使其凝固。复查最终pH应为6.8～7.0。
试验方法：用琼脂培养物穿刺接种，放在22～25℃培养，每天观察结果，记录液化时间。或放在36士1℃培养，每天取出，放冰箱内30min后再观察结果。
11苯丙氨酸培养基
成分：
酵母浸膏3g
DI－苯丙氨酸(或L－苯丙氨酸1g)2g
磷酸氢二钠1g
氯化钠5g
琼脂12g
蒸馏水1000mL
制法：加热溶解后分装试管，121℃高压灭菌15min，使成斜面。
试验方法：自琼脂斜面上挑取大量培养物，移种于苯丙氨酸琼脂，在36±1℃培养4h或18～24h。滴加10%三氯化铁溶液2～3滴，自斜面培养物上流下，苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色。
12 氨基酸脱羧酶试验培养基
成分：
蛋白胨5g
酵母浸膏3g
葡萄糖1g
蒸馏水1000mL
1.6%滇甲酚紫－乙醇溶液1mL
L－氨基酸或DL－氨基酸0.5或1g/100mL
pH6.8
制法：除氨基酸以外的成分加热溶解后，分装每瓶100mL，分别加入各种氨基酸：赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸。L－氨基酸按0.5%加入，DL－氨基酸按1%加入。再行校正pH至6.8。对照培养基不加氨基酸。分装于灭菌的小试管内，每管0.5mL，上面滴加一层液体石蜡，115℃高压灭菌10min。
试验方法：从琼脂斜面上挑取培养物接种，于36±1℃培养18～24h，观察结果。氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱，培养基应呈紫色。阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色。对照管应为黄色。
13蛋白胨水(靛基质试验用)
成分：
蛋白胨(或胰蛋白胨)20g
氯化钠5g
蒸馏水1000mL
pH7.4
制法：按上述成分配制，分装小试管，121℃高压灭菌15min。
靛基质试剂
柯凡克试剂：将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中。然后缓慢加入浓盐酸25mL。
欧－波试剂：将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇内。然后缓慢加入浓盐酸20mL。
试验方法：挑取小量培养物接种，在36±1℃培养1～2d，必要时可培养4～5d。加入柯凡克试剂约0.5mL，轻摇试管，阳性者于试剂层呈深红色；或加入欧－波试剂约0.5mL，沿管壁流下，覆盖于培养液表面，阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。
注：蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。每批蛋白胨买来后，应先用已知菌种鉴定后方可使用。
14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)
成分：
牛肉膏3g
酵母浸膏3g
蛋白胨10g
硫酸亚铁0.2g
硫代硫酸钠0.3g
氯化钠5g
琼脂12g
蒸馏水1000mL
pH7.4
制法：加热溶解，校正pH，分装试管，115℃高压灭菌15min，取出直立候其凝固。
试验方法：挑取琼脂培养物，沿管壁穿刺，于36±1℃培养1～2d，观察结果。产硫化氢者使培养基变为黑色。
注：肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生，应采用三糖铁琼脂或本培养基。
15 尿素琼脂
成分：
蛋白胨1g
氯化钠5g
葡萄糖1g
磷酸二氢钾2g
0.4%酚红溶液3mL
琼脂20g
蒸馏水1000mL
20%尿素溶液100mL
pH7.2±0.1
制法：将除尿素和琼脂以外的成分配好，并校正pH，加入琼脂，加热溶化并分装烧瓶。121℃高压灭菌15min。冷至50～55℃，加入经除菌过滤的尿素溶液。尿素的最终浓度为2%，最终pH应为7.2±0.1。分装于灭菌试管内，放成斜面备用。
试验方法：挑取琼脂培养物接种，在36±1℃培养24h，观察结果。尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。
16 氰化钾(KCN)培养基
成分：
蛋白胨10g
氯化钠5g
磷酸二氢钾0.225g
磷酸氢二钠 5.64g
蒸馏水1000mL
0.5%氰化钾溶液20mL
pH7.6
制法：将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。放在冰箱内使其充分冷却。每100mL培养基加入0.5%氰化钾溶液2.0mL(最后浓度为1∶10000)，分装于12mm×100mm灭菌试管，每管约4mL，立刻用灭菌橡皮塞塞紧，放在4℃冰箱内，至少可保存两个月。同时，将不加氰化钾的培养基作为对照培养基，分装试管备用。
17 氧化酶试验
试剂：
1%盐酸二甲基对苯二胺溶液：少量新鲜配制，干冰箱内避光保存。
1%α-萘酚－乙醇溶液。
试验方法：取白色洁净滤纸沾取菌落。加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴，阳性者呈现粉红色，并逐渐加深；再加α-萘酚溶液一滴，阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色。阴性于两分钟内不变色。以毛细吸管吸取试剂，直接滴加于菌落上，其显色反应与以上相同。
18 硝酸盐培养基
成分：
硝酸钾0.2g
蛋白5g
蒸馏水1000mL
pH7.4
制法：溶解，校正pH，分装试管，每管约5mL，121℃高压灭菌15min。
硝酸盐还原试剂：
甲液：将对氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。
乙液：将甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。
试验方法：接种后在36±1℃培养1～4d，加入甲液和乙液各一滴，观察结果。硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色。
注：本试验阴性的原因有三：细菌不能还原硝酸盐；亚硝酸盐继续分解，生成氨和氮；培养基不适于细菌的生长。如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解，可再加入锌粉少许，可使硝酸盐还原
为亚硝酸盐而呈现红色。
19 细胞色素氧化酶试验
试剂：
1%盐酸二甲基对苯二胺溶液。
1%α-萘酚－乙醇溶液。
试验方法：取37℃(或低于37℃)培养20h的斜面培养物一支，将两种试剂各2～3滴，从斜面上端滴下，并将斜面略加倾斜，使试剂混合液流经斜面上的培养物。如系平板培养物，则可用试剂混合液滴在菌落上。
结果：于2min内呈现蓝色者为阳性。阳性培养物大多数于半分钟内出现强阳性反应，2min以后出现微弱或可疑反应均作为阴性结果。
20 过氧化氢酶试验
试剂：3%过氧化氢溶液：临用时配制。
试验方法：挑取固体培养基上菌落一接种环，置于洁净试管内，滴加3%过氧化氢溶液2mL，观察结果。
结果：于半分钟内发生气泡者为阳性，不发生气泡者为阴性。
21 过氧化物酶试验
试剂：2%儿茶酚溶液。
3%过氧化氢溶液。
试验方法：挑取固体培养基上菌落一接种环，置于洁净试管内，滴加2%儿茶酚溶液1mL及3%过氧化氢溶液1mL。静置于室温(20℃)中30～60min，观察结果。
结果：阳性反应，细菌变为黑褐色；阴性反应，细菌不变色。
注：过氧化物酶的作用可受氰化钾的抑制。
22 磷酸盐缓冲液
储存液
磷酸二氢钾34g
1mol/L氢氧化钠溶液175mL
蒸馏水825mL
pH7.2
制法：先将磷酸盐溶解于500mL蒸馏水中，用1mol/L氢氧化钠溶液校正pH后，再用蒸馏水稀释至1000mL。
稀释液：取储存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL。分装每瓶100mL或每管10mL，121℃高压灭菌15min。
23明胶磷酸盐缓冲液
成分：
明胶2g
磷酸氢二钠4g
蒸馏水1000mL
pH6.2
制法：加热溶解，校正pH，121℃高压灭菌15min。
24 乳酸－苯酚溶液
成分：
苯酚10g
乳酸(比重1.21)10g
甘油20g
蒸馏水10mL
制法：将苯酚在水中加热溶解，然后加入乳酸及甘油。
用途：检验真菌形态时用。
25 肉浸液肉汤
成分：
绞碎牛肉500g
氯化钠5g
蛋白胨10g
磷酸氢二钾2g
蒸馏水1000mL
制法：将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000mL，混合后放冰箱过夜，除去液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉渣完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收集全部滤液，加水补足原量。加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐，溶解后校正pH7.4～7.6煮沸并过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌30min。
26肉浸液琼脂
成分：
肉浸液肉汤(PH7.4)1000mL
琼脂17～20g
制法：加热溶化琼脂，分装烧瓶或试管，121℃高压灭菌30min。根据需要，倾注平板或放成斜面。
27牛肉(或牛心)消化汤
成分：
绞碎牛肉(或牛心)1000g
15%氢氧化钠溶液27mL
胰蛋白酶40mL
三氯甲烷1mL
氯化钠10g
蒸馏水2000mL
制法：
1称取碎牛肉，加蒸馏水，隔水加热到80℃，维持15min。
2加氢氧化钠溶液，对pH试纸呈弱碱性，冷至40℃。
3加胰蛋白酶、氯仿，在36±1℃放置4～5h，每小时摇动一二次。
44h后，吸取上层液5mL于试管中，加5%硫酸铜溶液0.1mL、4%氢氧化钠溶液5mL，混合之。若呈红色，则不须再消化，可由温箱取出。
5加入15%乙酸溶液45mL，对pH试纸呈酸性。
6煮沸15min，使胰蛋白酶破坏，冷后，放冰箱内一夜。
7次日吸取上层清液，加氯化钠10g，并加水补足原量，煮沸。
8校正pH7.4～7.6(加15%氢氧化钠溶液约10mL)，加热，用滤纸过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌20min。
注：①此培养基可作为琼脂培养基的基础，不需加蛋白胨。
②胰蛋白酶之配制：称取去脂绞碎的猪胰500g，加入乙醇500mL、蒸馏水1500mL，混合之，装人玻塞瓶内。每日摇匀三次。3d后，用绒布过滤挤出其汁，加盐酸至0.05%，放冰箱内保存备用。
28血消化汤
成分：
绞碎猪胃100g
绞碎猪血块100g
蒸馏水1000mL
浓盐酸10mL
制法：
1洗涤猪胃，除去油脂，保留胃粘膜，用绞肉机绞碎。
2用绞肉机将猪血块绞碎。
3将蒸馏水加热至55℃，加入猪胃、猪血块和盐酸，置55℃水浴中24h，时常加以摇动。
4从水浴内取出，加入1moL/L碳酸钠溶液5mL，煮沸10min，置于冰箱内一夜。
5吸取上层清液，加磷酸氢二钾1g，加热至75℃，加入1mol/L碳酸钠溶液45mL，煮沸，校正pH7.2～7.4。
6用滤纸过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌20min。
29豆粉琼脂
成分：
牛心消化汤(PH7.4～7.6)1000mL
琼脂20g
黄豆粉浸液50mL
制法：将琼脂加在牛心消化汤内，加热溶解，过滤。加入豌豆粉浸液，分装每瓶100mL，121℃高压灭菌15min。
豌豆粉浸液制法：取豌豆粉5g、氯化钠10g，加入蒸馏水100mL。置100℃水浴内加热1h，放于冰箱中过夜。吸取上清液即为豌豆浸液。
30血琼脂
成分：
pH7.4～7.6豆粉琼脂100mL
脱纤维羊血(或兔血)5～10mL
制法：加热溶化琼脂，冷至50℃，以灭菌手续加入脱纤维羊血，摇匀，倾注平板。亦可分装灭菌试管，置成斜面。亦可用其他营养丰富的基础培养基配制血琼脂。
31营养琼脂
成分：
蛋白胨10g
牛肉膏3g
氯化钠5g
琼脂15～20g
蒸馏水1000mL
制法：将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约2mL，校正pH至7.2～7.4。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。
注：此培养基可供一般细菌培养之用，可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数，琼脂量为1.5%；如作成平板或斜面，则应为2%。
32营养肉汤
成分：
蛋白陈10g
牛肉膏3g
氯化钠5g
蒸馏水1000mL
pH7.4
制法：按上述成分混合，溶解后校正pH，分装烧瓶，每瓶225mL，121℃高压灭菌15min。
33 乳糖胆盐发酵管
成分：
蛋白胨20g
猪胆盐(或牛、羊胆盐)5g
乳糖10g
0.04%滇甲酚紫水溶液25mL
蒸馏水1000mL
pH7.4
制法：将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装每管10mL，并放入一个小倒管，115℃高压灭菌15min。
注：双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。
34乳糖发酵管
成分：
蛋白胨20g
乳糖10g
0.04%溴甲酚紫水溶液25mL
蒸馏水1000mL
pH7.4
制法：将蛋白胨及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，按检验要求分装30mL、10mL或3mL，并放入一个小倒管，115℃高压灭菌15min。
注：①双料乳糖发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。
②30mL和10mL乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用，3mL乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用。
35 EC肉汤
胰蛋白胨20g
3号胆盐(或混合胆盐) 1.5g
乳糖5g
磷酸氢二钾4g
磷酸二氢钾 1.5g
氯化钠5g
蒸馏水1000mL
制法：将上述成分混合，溶解后，分装有发酵倒管的试管中，121℃高压灭菌15min，最终pH为6.9±0.2。
36 缓冲蛋白胨水(BP)
成分：
蛋白胨10g
氯化钠5g
磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)9g
磷酸二氢钾 1.5g
蒸馏水1000mL
pH7.2
制法：按上述成分配好后以大烧瓶装，121℃高压灭菌15min。临用时无菌分装每瓶225mL。注：本培养基供沙门氏菌前增菌用。
37 氯化镁孔雀绿增菌液(MM)
甲液
胰蛋白胨5g
氯化钠8g
磷酸二氢钾 1.6g
蒸馏水1000mL
乙液
氯化镁(化学纯)40g
蒸馏水100mL
4.13.3丙液
0.4%孔雀绿水溶液。
制法：分别按上述成分配好后，121℃高压灭菌15min备用。临用时取甲液90mL、乙液9mL、丙液0.9mL，以无菌操作混合即可。
注：本培养基亦称Rappaport 10(R10)增菌液。
38 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)
基础培养基
多胨或眎胨5g
胆盐1g
碳酸钙10g
硫代硫酸钠30g
蒸馏水1000mL
碘6g
碘化钾5g
蒸馏水20mL
制法：将基础培养基的各成分加入蒸馏水中，加热溶解，分装每瓶100mL。分装时应随时振摇，使其中的碳酸钙混匀。121℃高压灭菌15min备用。临用时每100mL基础培养基中加入碘溶液2mL、0.1%煌绿溶液1mL。
39 四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法)
基础液：
蛋白胨10g
牛肉膏5g
氯化钠3g
碳酸钙45g
蒸馏水1000mL
将各成分加入于蒸馏水中，加热至约70℃溶解，校正pH至7.0±0.1，121℃高压灭菌20min。硫代硫酸钠溶液
硫代硫酸钠(Na2S2O3·5H2O)50g
蒸馏水加至100mL
碘溶液
碘片20g
碘化钾25g
蒸馏水加至100mL
将碘化钾充分溶解于是少量的蒸馏水中，加入碘片，振摇玻瓶至碘片全部溶解，再加入蒸馏水至规定量。贮于棕色玻瓶内，紧塞瓶盖备用。
煌绿水溶液
煌绿0.5g
蒸馏水100mL
存放暗处，不少于1d，使其自然灭菌。
牛胆盐溶液
干燥的牛胆盐10g
蒸馏水100mL
煮沸溶解，121℃高压灭菌20min。
制备：
基础液900mL
硫代硫酸钠溶液100mL
碘液20mL
煌绿溶液2mL
牛胆盐溶液50mL
临用前，按上列顺序，以无菌操作依次加入于基础液中，每加入一种成分，均应摇匀后再加入另一种成分。分装于灭菌瓶中，每瓶100mL。
40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)
蛋白胨5g
乳糖4g
亚硒酸氢钠4g
磷酸氢二钠 5.5g
磷酸二氢钾 4.58
L-胱氨酸0.01g
蒸馏水1000mL
1%L-胱氨酸－氢氧化钠溶液的配法：称取L－胱氨酸0.1g(或DL－胱氨酸0.2g)，加1mol/L氢氧化钠1.5mL，使溶解，再加入蒸馏水8.5mL即成。
制法：将除亚硒酸氢钠和L－胱氨酸以外的各成分溶解于900mL蒸馏水中，加热煮沸，俟冷备用。另将亚硒酸氢钠溶解于100mL蒸馏水中，加热煮沸，候冷，以无菌操作与上液混合。再加入1%L －胱氨酸－氢氧化钠溶液1mL。分装于灭菌瓶中，每瓶100mL，pH应为7.0±0.1。
41 GN增菌液
成分：
胰蛋白胨20g
葡萄糖1g
甘露醇2g
柠檬酸钠5g
去氧胆酸钠0.5g
磷酸氢二钾4g
磷酸二氢钾 1.5g
氯化钠5g
蒸馏水1000mL
pH7.0
制法：按上述成分配好，加热使溶解，校正pH。分装每瓶225mL，115℃高压灭菌15min。
42 肠道菌增菌肉汤
成分：
蛋白胨110g
葡萄糖5g
牛胆盐20g
磷酸氢二钠8g
磷酸二氢钾2g
煌绿0.015g
蒸馏水1000mL
pH7.2
制法：按上述成分配好，加热使溶解，校正pH。分装每瓶30mL，115℃高压灭菌15min。
43 亚硫酸铋琼脂(BS)
成分：
蛋白胨10g
牛肉膏5g
葡萄糖5g
硫酸亚铁0.3g
磷酸氢二钠4g
煌绿0.025g
柠檬酸铋铵2g
亚硫酸钠6g
琼脂18～20g
蒸馏水1000mL
pH7.5
制法：
1将前面5种成分溶解于300mL蒸馏水中。
2将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用50mL蒸馏水溶解。
3将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解，冷至80℃
4将以上三液合并，补充蒸馏水至1000mL，校正pH，加0.5%煌绿水溶液5mL，摇匀。冷至50～55℃，倾注平皿。
注：此培养基不需高压灭菌。制备过程不宜过分加热.以免降低其选择性。应在临用前一天制备，贮存于室温暗处。超过48h不宜使用。
44 DHL琼脂
成分：
蛋白胨20g
牛肉膏3g
乳糖10g
蔗糖10g
去氧胆酸钠1g
硫代硫酸钠 2.3g
柠檬酸钠1g
柠檬酸铁铵1g
中性红0.03g
琼脂18～20g
蒸馏水1000mL
pH7.3
制法：将除中性红和琼脂以外的成分溶解于400mL蒸馏水中，校正pH。再将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解，两液合并，并加入0.5%中性红水溶液6mL，待冷至50～55℃，倾注平板。
45 HE琼脂
成分：
脙胨12g
牛肉膏3g
乳糖12g
蔗糖12g
水杨素2g
胆盐20g
氯化钠5g
琼脂18～20g
蒸馏水1000mL
0.4%溴麝香草酚蓝溶液16mL
Andrade指示剂20mL
甲液20mL
乙液20mL
pH7.5
制法：将前面七种成分溶解于400mL蒸馏水内作为基础液；将琼脂加入于600mL蒸馏水内，加热溶解。加入甲液和乙液于基础液内，校正pH。再加入指示剂，并与琼脂液合并，待冷至50～55℃，倾注平板。
注：①此培养基不可高压灭菌。
②甲液的配制
硫代硫酸钠34g
柠檬酸铁铵4g
蒸馏水100mL
②乙液的配制
去氧胆酸钠10g
蒸馏水100mL
②Andrade指示剂
酸性复红0.5g
1mol/L氢氧化钠溶液16mL
蒸馏水100mL
将复红溶解于蒸馏水中，加入氢氧化钠溶液。数小时后如复红褪色不全，再加氢氧化钠溶液1～2mL。
46 SS琼脂
基础培养基：
牛肉膏5g
眎胨5g
三号胆盐 3.5g
琼脂17g
蒸馏水1000mL
再将两液混合，121℃高压灭菌15min，保存备用。
完全培养基：
基础培养基100mL
乳糖10g
柠檬酸钠8.5g
硫代硫酸钠8.5g
10%柠檬酸铁溶液10mL
1%中性红溶液 2.5mL
0.1%煌绿溶液0.33mL
加热溶化基础培养基，按比例加入上述染料以外之各成分，充分混合均匀，校正至pH7.0，加入中性红和煌绿溶液，倾注平板。
注：①制好的培养基宜当日使用，或保存于冰箱内于48h内使用。
②煌绿溶液配好后应在10d以内使用。
③可以购用SS琼脂的干燥培养基。
47 WS琼脂
成分：
②胨12g
牛肉膏3g
氯化钠5g
乳糖12g
蔗糖12g
十二烷基硫酸钠2g
琼脂15g
Andrade指示剂20mL
0.4%溴麝香草酚蓝溶液16mL
甲液20mL
蒸馏水1000mL
pH7.0
制法：除指示剂和甲液外，将其他成分加热溶解，不需消毒，校正pH后加入指示剂和甲液，倾注平板应呈草绿色。
注：①供沙门氏菌分离用。
②Andrade指示剂和甲液的配制均见HE琼脂。
48 麦康凯琼脂
成分：
蛋白胨17g
眎胨3g
猪胆盐(或牛、羊胆盐)5g
氯化钠5g
琼脂17g
蒸馏水1000mL
乳糖10g
0.01%结晶紫水溶液10mL
0.5%中性红水溶液5mL
制法：
1将蛋白胨、眎、胆盐和氯化钠溶解于400mL蒸馏水中，校正pH7.2。将琼脂加入600mL 加热溶解。将两液合并，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min备用。
2临用时加热溶化琼脂，趁热加入乳糖，冷至50～55℃时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后倾注平板。
注：结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。
49 伊红美蓝琼脂(EMB)
成分：
蛋白胨10g
乳糖10g
实验室常用培养基的配制方法
实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin (100 mg/ml) IPTG (24 mg/ml) X-Gal (20 mg/ml) LB培养基■组份浓度 100 mg/ml Ampicillin ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3. 用0.22 μm滤器过滤除菌。 4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。 ■组份浓度 24 mg/ml IPTG ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3. 用0.22 μm滤器过滤除菌。 4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。 ■组份浓度 20 mg/ml X-Gal ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量1 g X-Gal置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后， 定容至50 ml。 3. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃避光保存。 ■组份浓度 1%（W/V）Tryptone，0.5%（W/V）Yeast Extract， 1%（W/V）NaCl ■配制量 1 L ■配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。 Tryptone 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g 2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5 N NaOH（约0.2 ml），调节pH值至7.0。 4. 加去离子水将培养基定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，4℃保存。
常用缓冲液及培养基配方
常用缓冲液及培养基配方 LB液体培养基： Bacto-蛋白胨10g 酵母抽提物5g 氯化钠10g 加950ml蒸馏水溶解，用5N氢氧化钠调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。LB固体培养基： 每升LB液体培养基中加入12g琼脂粉，高压灭菌后保存。 SOB液体培养基 Bacto-蛋白胨20g 酵母抽提物5g NaCl 0.5g 加950 ml水溶解，加入250mmol/L KCl 溶液10ml，用5 N NaOH调pH至7.0，定容至1000 ml，高压灭菌后保存。使用前加入5ml经灭菌的2mol/LMgCl2。 SOC液体培养基 SOB中加入经灭菌的葡萄糖溶液至终浓度为20mmol/L。 麦康凯固体培养基 每1000ml水中加52g培养基粉，煮沸溶解后分装，高压灭菌。 NA固体培养基 牛肉浸膏3g 酵母浸膏1g 蛋白胨蔗糖琼脂粉 5g 10g 15g 加950ml蒸馏水溶解，调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。 TB培养基： 将下列组分溶解在0.9L水中： Bacto-蛋白胨12g 酵母抽提物24g 甘油4ml 各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/ 0.72 mol/L K2HPO4的溶液。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌。 溶液Ⅰ 葡萄糖2.25 g 50mmol/L 1mol/L Tris·Cl(pH8.0) 6.25ml 20mmol/L 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 5ml 10mmol/L 调pH至8.0后，用水定容至250 ml，高压灭菌后保存。 溶液Ⅱ 10 mol/L NaOH 2ml 10% SDS 10ml 用水定容至100 ml，现配现用。 溶液Ⅲ 5 mol/L 醋酸钾60ml
芽孢杆菌常用培养基配方
芽孢杆菌常用培养基配方 （按理说，该实验的所有培养基都在这了，后红字更为清楚些。。。摘自百度） 一、肉汤琼脂培养基：蛋白胨10g ，牛肉膏15g ，NACL15g ，蒸 馏水1000ml ，琼脂18g 。调节PH7.2,0.1MPA20min 灭菌。如果用液体做培养基，则去掉琼脂即可。100 mL/组，其中20 mL 液体培养基/250 mL△中（内装玻璃珠10颗）；50 mL固体斜面培养基分装在试管中：5mL/支，10支。 2、或是（J-琼脂培养基：胰蛋白胨5g,酵母膏15g, 磷酸 氢二钾3g,葡萄糖2g, 琼脂20g, 蒸馏水1000ml。调节 PH7.3—7.5Mpa 30min灭菌。） 二、过氧化氢酶测定 1、试剂：3-10%过氧化氢 2、接种与培养：一般将测试菌种接种于肉汤琼脂斜面上，30度下 培养1-2天。 3、试验方法：取一干净载玻片，在上面加一滴3-10%的双氧水， 挑取1环1-2天的的菌苔，在双氧水溶液中涂抹，如有气泡出 现（O2），作为过氧化氢酶阳性，无泡为阴性。也可以将过氧 化氢液直接加入斜面上，观察气泡的产生。 三、需氧性测定
1、培养基：酪素水解物20g,葡萄糖 10g, ,NACL5g,HOCH2SO3Na1g,HSCH2COONa2g,琼脂15g,蒸馏水1L。调节PH7.2，分装试管，0.06Mpa，30min灭菌，培养基不摆斜面。 2、接种与观察：用一小环的肉汤菌液，穿刺接种到上述培养基中 （穿刺管底），一般与30 度培养3-7天观察结果。若芽孢杆菌在琼脂柱表面生长为好氧菌，沿穿刺线生长则为厌氧菌。四、酪素水解（用于检测不同种类的芽孢杆菌是否具有分解酪素的 特点） 1、培养基 （1）脱脂牛奶制备取新鲜牛奶，煮沸后去掉上层油脂，再经离心脱脂（3000r/min,10min）,除去上层油脂，即为脱脂牛奶。（2）牛奶平板的制备取50ml的脱脂牛奶放入一只三角瓶中，另外称1.5g琼脂置于含有50ml蒸馏水的另外3只三角瓶中，然后将两液分开灭菌，0.06Mpa-20min，带冷至45-50摄氏度时， 速将两液混匀倒平板，即为牛奶平板。将平板倒置过夜，使表面水分干燥。 2、接种与观察 将测试菌种以三点法点接在牛奶平板上，一般于30度培养1,3,5,7和14天，如菌落周围和下面呈透明，表明酪素已被分解。
常用细菌培养基配方
常用抗生素 氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml） 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml） 溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 甲氧西林（methicillin）（100mg/ml） 溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。 卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml） 溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml） 溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 链霉素（streptomycin）（50mg/ml） 溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml） 溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 四环素（tetracyyline）（10mg/ml） 溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 常用培养基 LB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨10g 酵母提取物5g 氯化钠10g 如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。(实验室一般都不调PH) SOB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨20g 酵母提取物5g 氯化钠0.5g 1 mol/L 氯化钾2.5ml
常用培养基的配方
伊红美蓝培养基 原理 一般用来鉴定大肠杆菌。 伊红为酸性染料，美蓝为碱性染料。 当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。 在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合，故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。 常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。 用伊红美蓝培养基鉴定水中大肠杆菌 步骤如下： ①制作伊红美蓝培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。 ②用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水，按1：10稀释。 ③取0.1毫升稀释液接种于伊红美蓝培养基上。用平板划线分离法进行分离。 ④将划线后的培养皿倒置37℃温箱中培养18～24小时。培养基中会出现大肠杆菌菌落，菌落中心呈暗蓝黑色，发金属光泽。 ⑤将菌落接种于斜面培养基上（由营养琼脂培养基制成）。 配置方法 蛋白胨 10g 乳糖 10g 磷酸氢二钾 2g 琼脂 20~30g 蒸馏水 1000ml 2%伊红水溶液 20ml 0.5 %美蓝水溶液 13ml 储备培养基的制备 先将琼脂加至900ml蒸馏水，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000ml，调整PH为7.2~7.4。趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器内以115℃灭菌20min，贮存于冷暗处备用。 制法
将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正PH，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至50～55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。 麦康凯培养基 原理 1.全称麦康凯琼脂或是麦康凯培养基 2.一种用于分离鉴定细菌的培养基，大肠杆菌在其上呈红色或粉红色，有的菌落只是中间呈现红色。 配置方法 蛋白胨 17g 脙胨3g 猪胆盐(或牛、羊胆盐) 5g 氯化钠 5g 琼脂 17g 蒸馏水1000mL 乳糖10g 0.01%结晶紫水溶液 10mL 0.5%中性红水溶液 5mL 麦康凯-制法 1 将蛋白胨、胨、胆盐和氯化钠溶解于400mL蒸馏水中，校正pH7.2。将琼脂加入600mL 加热溶解。将两液合并，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min备用。 2 临用时加热溶化琼脂，趁热加入乳糖，冷至50～55℃时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后倾注平板。 注：结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。 吲哚试验 吲哚（indol）试验有些细菌如大肠埃希菌、变形杆菌、霍乱弧菌等能分解培养基中的色氨酸生成吲哚（靛基质），经与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红色，是为吲哚试验阳性。 LB培养基 配方 胰化蛋白胨 1g 酵母提取物 0.5g NaCl 1g 琼脂 1.5-2g 水100ml LB培养基-LB培养基条件 LB培养基-固态培养基 LB固体培养基1L和液体一样，加15g琼脂粉，一定要在温度降下之前加好抗生素，并且倒好板。 LB固体培养基倒板 1.配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉
常用培养基概念及配方复习课程
常用培养基概念及配 方
LB培养基：是微生物学实验中最常用的培养基，用于一般细菌培养，特别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保存和培养。用于培养大肠杆菌、枯草杆菌等细菌，分为液态培养基和加入琼脂制成的固态培养基。加入抗生素的 LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。PDA培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基，即Potato Dextrose Agar （Medium），依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。 改良MC培养基：用于乳酸菌饮料中乳酸菌的菌落计数；原理：大豆蛋白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源；乳酸菌发酵糖产酸使菌落周围碳酸钙溶解，以辨别乳酸菌；琼脂是培养基的凝固剂；中性红为pH指示剂。MRS培养基：乳酸菌培养基，由多种成分组成，适用于乳酸菌的生长，用来分离培养乳酸菌的一类培养基，一种常用的培养基，宜培养分离乳酸菌。由于该培养基十分适于乳酸菌的生长，而且抑制其他菌的生长，因此具有分离乳酸菌的功能。当乳酸菌长成后在培养基上显黄色，之后会变淡黑色。以此分离乳酸菌。 乳酸菌：凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。这是一群相当庞杂的细菌，目前至少可分为18个属，共有200多种。除极少数外，其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。目前已被国内外生物学家所证实，肠内乳酸菌与健康长寿有着非常密切的关系。乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总
称。常见菌种有双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和嗜酸乳杆菌等 自配高浓度污水：葡萄糖5550 mg／L+(NH4)2SO4,1170 mg／L+KH2PO4，170 mg／L+COD为5000 mg／L。 自配污水：葡萄糖555 mg／L+(NH4)2SO4，117mg／L+KH2PO4 17 mg／ L+CaC12 0，08 mg／L+MgSO4，1，534 mg／L+NaHCO3 550．8 mg／ L+FeC13·6H2O 0．25 mg／L+C0D 500 mg／L+氨氮为30 mg／L． 一、LB培养基配制
分子生物学常用培养基配方
1、Ampicillin□组份浓度100mg/ml Ampicillin （100mg/ml）□配制量50mL □配制方法1. 称量5g Ampicillin置于50mL离心管中。 2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。 4. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 2、IPTG □组份浓度24mg/mL IPTG （24mg/mL）□配制量50mL □配制方法1. 称量1.2g IPTG置于50mL离心管中。 2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。 4. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 3、X- Gal□组份浓度20mg/mL X- Gal （20mg/mL）□配制量50mL □配制方法1. 称取1g X-Gal置于50mL离心管中。 2. 加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50mL。 3. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 4、LB培养基□组份浓度1％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）Yeast Extract，1％（W/V）NaCl □配制量1L □配制方法1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中 Tryptone 10g；Yeast Extract 5g ；NaCl 10g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。 4. 高温高压灭菌后，4℃保存。 5、LB/Amp培养基□组份浓度1％（W/V）Tryptone 0.5％（W/V）Yeast Extract 1％（W/V）NaCl 0.1mg/mL Ampicillin □配制量1L □配制方法1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中 Tryptone 10g Yeast Extract 5g NaCl 10g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。 4. 加去离子水将培养基定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，冷却至室温。 6. 加入1mL Ampicillin（100mg/mL）后均匀混合。 7. 4℃保存。 6、TB培养基□组份浓度1.2％（W/V）Tryptone
培养基配方及配制方法
培养基配方 1 斜面菌种保存培养基 1.1PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基） 称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸0.5h，纱布过滤，滤液补足1000ml，再加15g葡萄糖和15-20g琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管约5-10ml（视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。 1.2麦芽汁琼脂培养基 麦芽汁的制备：干麦芽首先进行粉碎（不能太粗，也不必太细。太粗影响糖化效率，过细影响过滤速度），按麦芽重量的3~4倍加水，搅拌均匀后，37℃左右浸泡1小时，然后缓缓加温至55~63℃（在升温过程中应不断搅拌使温度均匀），保温4~6小时（用0.02摩尔/升碘液测定为黄色至无色时），糖化结束。在糖化过程中，应每小时搅拌一次。取过滤后的清液，加1.8%琼脂，分装试管，每试管约5-10ml （视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。 2 基菌落总数检测 2.1平板计数琼脂培养基 将胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g 加入蒸馏水1000ml中，煮沸溶解后，调pH，然后在121℃下灭菌15min，取出，稍微冷却后，带热倒入培养皿中。 3志贺氏菌检测
3.1 GN增菌液 成分：胰蛋白胨：20g，葡萄糖：1g，甘露醇：2g，柠檬酸钠：5g，去氧胆酸钠0.5g，磷酸二氢钾4g，磷酸氢二钾1.5g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml。pH7.0 制法：将上述物品加入蒸馏水中，加热溶解煮沸，调pH为7.0，分装，在115℃高压灭菌15min。 3.2 HE琼脂 成分：胨：12g，牛肉膏3g，乳糖12g，蔗糖12g，水杨素2g，胆碱20g，氯化钠5g，琼脂18~20g，蒸馏水1000ml0，0.4%溴麝香草酚蓝溶液16ml，Andrade指示剂20ml.，甲液20ml，乙液20ml。pH7.5 制法：将上述前七种成分加入400ml蒸馏水中作为基础液，将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解，加入甲液乙液到基础液中，调pH，再加入指示剂，并与琼脂液合并，待冷却至50~55℃，倾注浇平板。注1：此培养基不能高温灭菌。 注2：甲液的配置： 硫代硫酸钠：34g，柠檬酸铁钠：4g，蒸馏水：100ml。 注3：乙液的配置： 去氧胆酸钠：10g，蒸馏水：100ml。 注4：Andrade指示剂的配置： 酸性复红：0.5g，1mol/l的氢氧化钠溶液：16ml，蒸馏水：100ml。将酸性复红溶解于蒸馏水中，加入氢氧化钠溶液，数小时后如复红褪色不全，再加氢氧化钠溶液1~2ml。
实验室常用培养基的配制方法
五、实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin(氨卡青霉素)(100 mg/ml) 组份浓度100 mg/ml Ampicillin 配制量50 ml 配制方法 1.称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。 2.加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3.用0.22 μm过滤膜过滤除菌。 4.小份分装(1 ml/份)后，-20℃保存。 IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)(24 mg/ml) 组份浓度24 mg/mL IPTG 配制量50 mL 配制方法 1.称1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。 2.加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3.用0 22 μm过滤膜过滤除菌。 4小份分装(1 ml，份)后，-20℃保存。 X-Gal (20 mg/ml) 组份浓度20 mg/ml X-Gal 配制量50 ml 配制方法 1.称量l g X-Gal置于50 ml离心管中。 2.加入40 ml DMF(二甲基甲酰胺)，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3.小份分装(1 ml/份)后，-20℃避光保存。 LB培养基 组份浓度1%(W/V)Tryptone(胰蛋白胨)，0.5%(W/V)Yeast Extract(酵母提取物)，1%(W/V)NaCl 配制量 1 L 配制方法 1.称取下列试剂，置于l L烧杯中。 Tryptone 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g 2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.滴加5 N NaOH(约0.2 m1)，调节pH值至7.0。 4.加去离子水将培养基定容至1 L。 5高温高压灭菌后，4。C保存。 LB/Amp培养基 组份浓度 1%(W/V) Tryptone 0.5%(W/V) Yeast Extract 1%(W/V) NaCl 0.1 mg/ml Ampicillin
常用培养基配方
常用培养基配方（微生物学与微生物检验学部分） 渤海大学生物与食品科学学院 2006年3月
目录 01糖发酵管 02 ONPG培养基 03西蒙氏柠檬酸盐培养基 04缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用) 05克氏柠檬酸盐培养基 06丙二酸钠培养基 07葡葡糖铵培养基 08Hugh－Leifson培养基(O/F试验用) 09 马尿酸钠培养基 10营养明胶 11苯丙氨酸培养基 12 氨基酸脱羧酶试验培养基 13蛋白胨水(靛基质试验用) 14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用) 15 尿素琼脂 16 氰化钾(KCN)培养基 17 氧化酶试验 18 硝酸盐培养基 19 细胞色素氧化酶试验 20 过氧化氢酶试验 21 过氧化物酶试验 22 磷酸盐缓冲液 23明胶磷酸盐缓冲液 24 乳酸－苯酚溶液 25 肉浸液肉汤 26肉浸液琼脂 27牛肉(或牛心)消化汤 28血消化汤 29豆粉琼脂 30血琼脂 31营养琼脂 32营养肉汤 33 乳糖胆盐发酵管 34乳糖发酵管 35 EC肉汤 36 缓冲蛋白胨水(BP) 37 氯化镁孔雀绿增菌液(MM) 38 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB) 39 四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法) 40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC) 41 GN增菌液
42 肠道菌增菌肉汤 43 亚硫酸铋琼脂(BS) 44 DHL琼脂 45 HE琼脂 46 SS琼脂 47 WS琼脂 48 麦康凯琼脂 49 伊红美蓝琼脂(EMB) 50三糖铁琼脂(TSI) 51 三糖铁琼脂(换用方法) 52 克氏双糖铁琼脂(KI) 53 克氏双糖铁琼脂(换用方法) 54 葡萄糖半固体发酵管 55 5%乳糖发酵管 56 CAYE培养基 57 Honda氏产毒肉汤 58 Elek氏培养基(毒素测定用) 59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基 60 胰蛋白胨水 61 Rustigian氏尿素培养液 62 氯化钠结晶紫增菌液 63 氯化钠蔗糖琼脂 64 嗜盐菌选择性琼脂 65 3.5%氯化钠三糖铁琼脂 66 氯化钠血琼脂 67 3.5%氯化钠生化试验培养基 68 改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用) 69 CIN－1培养基 70 嗜盐性试验培养基 71 改良Y培养基 72 改良克氏双糖 73 快速硫化氢(H2S)试验琼脂 74 DNA酶甲基绿琼脂(DTA) 75 Cary－Blair氏运送培养基 76 Skirrow氏培养基 77 TTC琼脂 78 甘氨酸培养基 79 改良磷酸盐缓冲液 80 氯化镁孔雀绿肉汤 81 胰酪胨大豆肉汤 82 Baird－Parker氏培养基 83 7.5%氯化钠肉汤 84 匹克氏肉汤 85 甘露醇卵黄多粘菌素琼脂
实验室常用培养基配方
031*-2./4,+ 5 86779\_V_[_PUY\RQTXYWYS^QO\OWYS YXWUXR:bkkiNIIlllHk_d_j_H`hfH`g Ofic`ceecg EKJJ faIfeF rqq 74p 76z 7:5256658vq 76 ro Jf v 4z 7:5256658-}vq 76eyU .A so ]q uq 76icuEKRZXoaYEQp ,vq 76A to |qoss 17hkWhLcA uo xSR /C r 76p SDYE nsq BGMA UZ\S ELM faIfeF su 74p 76*./}vq 76 ro Jf ros 4*./}-}vq 76eyU .A so ]q uq 76icuEKRZXoaYEQp ,vq 76A to |qoss 17hkWhLcA uo xSR /C r 76p SDYE nsq BGMA ]GS_e ELJ faIfeF nsq BIVGMA r + ro Jlwgt\E -} r +rH .A so ]q~yqq 76Nme 0uEKR_FoaA to O]v ,,1-~C~qos 76@EP`:~+,xoq A uo ]me 0u^j{[Qp ,r +A vo TvTzicYEdn ,svA wo ]q r 76z 7:5256658C rqq 74p 76DYb *ZXA xo u BGMA
031*-2./4,+ 5 9678 :UWPWTW JOSULKNRSQSMV KIUIQSM SRQORL;Y``^HGGaaaF`WZW_WFX][FX\ i x if ]wZjnOFp>hfio y wv j |{l @hfoj y w j v|{l ?ihh 21< aU jfki /wv j |{l M ijfml /w j v|{l r qh 21I_Xyix@TAaUN@R_Xy iJbu ihh 21@LkLm[V 常用培养基的配制 （一）营养琼脂培养基 【用途】供细菌总数测定、保存菌种、细菌纯化、一般细菌培养、血琼脂培养基基础之用。 【成分】牛肉膏 3g NaCl 5g 蛋白胨 10g 琼脂 20g 【pH值】7.2±0.2 【制法】上述成分称取38g加蒸馏水1000ml，经121.3℃ 30min高压灭菌备用。 （二）蛋白胨水培养基 【用途】供细菌培养、吲哚试验之用。 【成分】蛋白胨 10g 氯化钠 5g 【pH值】7.6 【制法】将上述成分溶于1000ml蒸馏水中，过滤，分装于试管，每管2～3ml，经121.3℃20min高压灭菌备用。 （三）半固体培养基 【用途】供观察细菌动力、菌种保存、H抗原位相变异试验等。 【成分】蛋白胨 10g 氯化钠 5g 琼脂 2.5～3g 【pH值】7.6 【制法】上述成分加入1000ml蒸馏水中，加热溶解，分装于试管，每管3～4ml，经121.3℃ 20min高压灭菌备用。 （四）营养肉汤培养基 【用途】供一般细菌培养、转种、复苏、增菌等，也可用于消毒效果的测定。 【成分】蛋白胨 10g 氯化钠 5g 牛肉粉（牛肉浸汁） 3g 【pH值】7.2±0.2 【制法】将上述成分溶于1000ml蒸馏水中，分装小试管，每管2～3ml，经121.3℃ 20min 高压灭菌备用。 （五）葡萄糖蛋白胨水培养基 【用途】供甲基红试验及V-P试验之用。 【成分】蛋白胨5g 葡萄糖5g K2HPO4 (K2HPO4·3H2O) 5g (0.65g) 【pH值】7.0～7.2 【制法】将上述成分溶于1000ml蒸馏水中，过滤，分装试管，每管2～3ml，经112.6 ℃ 20min高压灭菌备用。 （六）伊红美蓝培养基（EMB培养基） 146种常用培养基配方 THE COMPOSITION OF MEDIA 培养基及成分 1. Acetobacter Medium (醋酸菌培养基) Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10g CaCO3 20g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) 1000ml Adjust (调) pH to 6.8 适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种 2. Nutrient Agar (营养肉汁琼脂) Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30g NaCl 5g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.2 [Note]：When cultivation of Bacillus，5mg of to MnSO4.H2O may be added . It is favorable to promote spore formation . 适用范围：产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种（青虫菌）、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌（大肠杆菌）、铜绿假单胞菌（绿脓杆菌）、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌 3. Azotobacter Medium (固氮菌培养基) KH2PO4 0.2g K2HPO4 0.8g MgSO4.7H2O 0.2g CaSO4.2H2O 0.1g Na2MoO4.2H2O Trace(微量) Yeast axtract(酵母膏) 0.5g Mannitol(甘露醇) 20g FeCl3 Tract(微量) Distilled water (蒸馏水) 1000ml Agar (琼脂) 15g Adjust (调) pH to 7.2 适用范围：固氮菌、胶质芽孢杆菌 4. Corn Meal Medium (玉米粉培养基) Maize flour (玉米粉) 5g Peptone (蛋白胨) 0.1g Glucose (葡萄糖) 1g Tap water (自来水) 1000ml D M E M(A)细胞培养基（粉末型）成分 DMEM(H) 细胞培养基（粉末型）成分 DMEM(L) 细胞培养基（粉末型）成分 双蒸水。（2）在室温（20℃到30℃）的水中加入干粉培养基，轻轻搅拌，不要加热。 （3）水洗包装袋的内部，转移全部的痕量干粉到容器内。 （4）加NaHCO3到培养基中。 （5）用双蒸水稀释到想要的体积，搅拌溶解。注意不要过分搅拌。 （6）通过缓慢搅拌加入1N NaOH 或1N HCL调节pH值，由于pH值在过滤时会上升到，因而调节pH值使它比最终想要的pH值低到。培养基在过滤前要保持密封。 配制培养基要注意以下问题： ●认真阅读说明书。说明书都注明干粉不包含的成分，常见的有NaHCO3、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等。这些成分有些是必须添加的，如NaHCO3、谷氨酰胺，有些根据实验需要决定。 ●配制是要保证充分溶解，NaHCO3、谷氨酰胺等物质都要等培养基完全溶解之后才能添加。 ●配制所用的水应是三蒸水，离子浓度很低。 ●所用器皿应严格消毒。 ●配制好的培养基应马上过滤，无菌保存于4度。 ●液体培养基主要是为了科研工作的方便而设计的培养基，它是一种灭菌后保证无菌的溶液，必要时可制成无内毒素等的溶液，可节省科研人员的工作量。 DMEM各种成分都有什么作用 一般的基础培养基包括四大类物质：无机盐、氨基酸、维生素、碳水化合物。 （1）无机盐：对调节细胞渗透压、某些酶的活性及溶液的酸碱度都是必须的。 （2）氨基酸：缬氨酸、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精氨酸、胱氨酸(L型)都是细胞用以合成蛋白质的必需氨基酸，不能由其他氨基酸或糖类转化合成。除此之外，还需要谷氨酰胺(glutamine)。谷氨酰胺具有特殊的作用，对细胞的培养特别重要，能促进各种氨基酸进入细胞膜；它所含的氮是核酸中嘌呤和嘧啶的来源，还是合成—磷酸腺苷、二磷酸腺甘和三磷酸腺苷的原料。细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，谷氨酰胺缺乏可导致细胞生长不良甚至死亡。在配制各种培养液中都应补加一定量的谷氨酰胺。值得注意的是：谷氨酰胺在溶液中很不稳定，故4℃下放置1周可分解50%，使用中最好单独配制，置-20℃冰箱中保存，用前加入培养液中。 （3）维生素：是维持细胞生长的一种生物活性物质，在细胞中大多形成 实验一常用器皿包扎与培养基的配制和灭菌 一、实验目的 1学会常用器皿包扎方法 2学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤 3学会实验室灭菌锅的使用方法 二、常用器具和仪器 试管(testtube)，德汉氏小管(Durhamtube)，玻璃吸管 (glasspipette)，吸器，微量加样器(micropipette)，吸嘴(tip)，培养皿(petri dish)，三角瓶(erlenmeyer flask)，接种铲(inoculatingshovel),玻璃涂布器(glassspreade)，接种环(inoculatingloop)，接种钩(inoculating hook)，接种针(inoculating needle)，小塑料离心管(Eppendorf tube)，滴瓶(dropper bottle )，双层瓶(double bottle)，酒精灯⑻ cohol burner)，煤气喷头(coal gas sprinklerhead，试剂瓶，量筒，烧杯，温度计，石棉网，漏斗，烘箱，卧式灭菌锅，手提式灭菌锅，无菌操作台/ 室，过滤除菌设备，厌氧操作设备，小型发酵罐，离心机，培养箱/摇床，冷冻干燥机，蒸馏水器，超声波清洗仪，磁力搅拌器。 三、玻璃器皿的包装 1、培养皿的包装方法一：用旧报纸密密包紧，一般以5-8 套培养皿作一包。包好后用干热或湿热灭菌(见无菌操作技术)。 方法二：将培养皿放入金属(不锈钢)筒内，干热灭菌。金属筒配有盖子，内部还有一个可以放培养皿的带底框架。框架可以从筒内提出，以便装取培养皿。 包好的培养皿 金属筒和内部的框架 塑料培养皿架 2、吸管的包装 枯草芽孢杆菌常用培养基配方： 1L蒸馏水+20g葡萄糖+15g蛋白胨+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+20g琼脂 枯草芽孢杆菌原生质体的制备 1 培养枯草芽孢杆菌 取亲本菌株T4412、TT2 新鲜斜面分别接一环到装有液体完全培养基(CM)的试管中，36℃振荡培养14 h，各取1 mL 菌液转接入装有20 mL 液体完全培养基的250 mL 锥形瓶中，36℃振荡培养 3 h，使细胞生长进入对数前期，各加入25 u/mL 青霉素，使其终浓度为0.3 u/mL，继续振荡培养2 h。 2. 收集细胞 各取菌液10 mL，4000 r/min 离心10 min，弃上清液，将菌体悬浮于磷酸缓冲液中，离心。如此洗涤两次，将菌体悬浮10 mL SMM 中，每mL 约含108～109 活菌为宜。 3. 总菌数测定 各取菌液0.5 mL，用生理盐水稀释，取10-5、10-6、10-7 各1mL(每稀释度作两个平板)、倾注完全培养基，36℃培养24 h 后计数。此为未经酶处理的总菌数。 4. 脱壁 二株亲本菌株各取5 mL 菌悬液，加入5 mL 溶菌酶溶液，溶菌酶浓度为100 ug/mL，混匀后于36℃水浴保温处理30 min，定时取样，镜检观察原生质体形成情况，当95%以上细胞变成球状原生质体时，用4000 r/min 离心10 min，弃上清液，用高渗缓冲液洗涤除酶，然后将原生质体悬浮于5 mL 高渗缓冲液中。立即进行剩余菌数的测定。 5. 剩余菌数测定 取0.5 mL 上述原生质体悬液，用无菌水稀释，使原生质体裂解死亡，取10-2、10-3、10-4 稀释液各0.1 mL，涂布于完全培养基平板上，36℃培养24～48 h，生长出的菌落应是未被酶裂解的剩余细胞。 计算酶处理后剩余细胞数，并分别计算二亲株的原生质体形成率。原生质体形成率＝未经酶处理的总菌数一酶处理后剩余细胞数。 培养基配制的基本过程 1.配制溶液 向容器内加入所需水量的一部分，按照培养基的配方，称取各种原料，依次加入使其溶解，最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质，需加热溶解，加热过程所蒸发的水分，应在全部原料溶解后加水补足。 配制固体培养基时，先将上述已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至完全融化。并不断搅拌，以免琼脂糊底烧焦。 2.调节pH值 用pH试纸（或pH电位计、氢离子浓度比色计）测试培养基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH进行调节，直到调节到配方要求的pH值为止。 3.过滤 用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时，最好折叠成六层，用滤纸过滤时，可将滤纸折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤。 4.分装 已过滤的培养基应进行分装。如果要制作斜面培养基，须将培养基分装于试管中。如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基，则须将培养基分装于锥形瓶内。 分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一只手握住几支试管或锥形瓶，依次接取培养基。分装时，注意不要使培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。 装入试管的培养基量，视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时，每只15×150毫米的试管，约装3～4毫升（1/4～1/3试管高度），如制作深层培养基，每只20×220毫米的试管约装12～15毫升。每只锥形瓶装入的培养基，一般以其容积的一半为宜。 5.加棉塞 分装完毕后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气，避免污染。棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。制作棉塞时，要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度，揪取手掌心大小一块，铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中，用右手食指插入棉花中部，同时左手食指与姆指稍稍紧握，就会形成1个长棒形的棉塞。棉塞作成后，应迅速塞入管口或瓶口中，棉塞应紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞的2/3应在管内或瓶内，上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。 6.制作斜面培养基和平板培养基 培养基灭菌后，如制作斜面培养基和平板培养基，须趁培养基未凝固时进行。 (1)制作斜面培养基。在实验台上放1支长0.5～1米左右的木条，厚度为1厘米左右。将试管头部枕在木条上，使管内培养基自然倾斜，凝固后即成斜面培养基。 (2)制作平板培养基。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入10毫升，以铺满皿底为度。铺放培养基后放置15分钟左右，待培养基凝固后，再5个培养皿一叠，倒置过来，平放在恒温箱里，24小时后检查，如培养基末长杂菌，即可用来培养微生物。 大肠杆菌培养 一、菌种冻存液的制备 含有足量细菌的液体培养基离心后在沉淀中加入等量40%甘油，-80o C冻存。 二、培养基制备 LB培养基配方（胰化蛋白胨（Trypton）：10 g/L；酵母提取物（Yeast Extract）：5 g/L；NaCl：10 g/L；pH 7.4） 液体培养基 胰化蛋白胨 10.0g 酵母粉 5.0g 氯化钠 10.0g 水 1000ml pH 7.4 固体培养基在液体培养基的基础上再加入 1.5％－2.0％的琼脂 三、平板的制备 1）称取胰化蛋白胨10.0g，酵母粉 5.0g，NaCl 10.0g，加入800mL二次水溶解，并用玻璃棒搅拌均匀，用1mol/L的NaOH调pH至7.4左右，定容至1L，调pH 7.4（若溶液pH大于7.4，用1mol/L HCl回调）。 2）分装在锥形瓶中，每瓶量不宜太多，没过瓶底一指左右。如需固体培养基在分装后的液体培养基内加入约2%的琼脂（150mL液体培养基加入 2.5g琼脂）。3）在锥形瓶口依次覆盖带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸，用皮筋捆好。所有锥形瓶如上述操作。用记号笔注明培养基名称、配制日期。 4）高压蒸汽灭菌锅121 oC灭菌15min。 5）灭菌后的培养基取出置电热鼓风干燥器内60oC烘干，待锥形瓶的封口纸干燥后取出。液体培养基可直接保存或使用，此时加有琼脂的培养基不会凝固， 可在预先紫外杀菌30min以上的无菌操作台上，将培养基倒入培养皿内，每个培养皿培养基约10-15mL（直径90mm），在培养皿中厚度大约4mm左右。将平皿叠放在无菌操作台上，放置10min左右，待琼脂基本凝固可涂平板。 6）若平板不直接使用，灭菌后将培养基在锥形瓶中保存，待需制备平板时，微波炉中火加热约3min，使琼脂熔化，室温冷却20min至不烫手可制备平板。 四、接种大肠杆菌 1）取实验室储备的大肠杆菌BL21冻存液，管口用酒精灯灼烧，打开离心管。2）接种方法一：用灭菌枪头蘸取冻存液在平板边缘上划横条，每三道为一组，旋转平皿一圈，最后中间划之字；接种方法二：用移液枪吸取100uL溶液于平板上，用酒精灯灭菌厚的涂抹棒划十字，涂布平板。 3）因实验一般都要求挑取单菌落，故涂平板适应考虑冻存液内细菌数量，若菌量过大应适当稀释。一般方法一获得单菌落的可能性比较大。涂平板应在酒 常用微生物培养基配方 大全 Pleasure Group Office【T985AB-B866SYT-B182C-BS682T-STT18】 （1）分离细菌时，在培养基中加入浓度为50U/ml制霉菌素，可以抑制霉菌和菌的生长。 （2）（2）分离放线菌时，在样品中加入%十二烷基磺酸钠（SDS）不仅可以抑制细菌的生长，还能 激活放线菌孢子的萌发。加入氟哌酸（5mg/L）+制霉菌素（50mg/L）+青霉素（L）也可以有效地抑 制细菌和真菌，而不影响放线菌的生长。 （3）（3）分离霉菌和菌时，在培养基中加入青霉素、链霉素和四环素各30U/ml，可以抑制细菌和 放线菌生长。 （4）（4）分离根霉和毛霉时，由于这些微生物的菌丝易蔓延成片，难以得到纯化的菌落，通常在 培养基中添加%去氧胆酸钠或山梨醇防止菌丝蔓延，使菌落长得小而紧密。 （5）一般用于分离单一目的微生物的培养基中均含有抑制其他微生物的抑制剂，这些专用的抑制剂 在小型实验室配制较麻烦，现已有成品供应，只要直接加入基础培养基即可。如氨苄西林，主要用 于分离亲水气单孢菌。 （6） 1、细菌培养基 配方一牛肉膏琼脂培养基 牛肉膏克，蛋白胨克，氯化钠克，琼脂克， 水 1000毫升 在烧杯内加水100毫升，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，用蜡笔在烧杯外作上记号后，放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后，加入琼脂，不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水，用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到～,分装在各个试管里，加棉花塞，用高压蒸汽灭菌30分钟。 配方二马铃薯培养基 取新鲜牛心（除去脂肪和血管）250克，用刀细细剁成肉末后，加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。在烧杯上做好记号，煮沸，转用文火炖2小时。过滤，滤出的肉末干燥处理，滤液pH值调到左右。每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心，灭菌，备用。常用培养基的配制
146种常见培养基的配方
细胞培养基及其配制方法
实验一常用器皿包扎与培养基的配制和灭菌
枯草芽孢杆菌常用培养基配方
培养基配制的基本过程
大肠杆菌培养基配制及培养方法
常用微生物培养基配方大全