结核分枝杆菌IgG抗体TB检测试剂盒

结核分枝杆菌IgG抗体(TB)检测试剂盒

一、检测原理------斑点金免疫渗滤法

二、临床意义------结核分枝杆菌抗体结果呈阳性

（一）、抗细胞壁脂多糖LAM抗体呈阳性

1、脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)是分枝杆菌细胞壁的重要组成部分，具有较强的免疫原性和免疫调节功能，可刺激机体产生相应的抗体。

2、检测到此抗体阳性，结合临床症状和其他检查要考虑是活动性结核病患者。

3、由于在某些呼吸道炎症等良性疾病中，此抗体也会呈现阳性，所以，请医生要结合其他的临床信息加以鉴别诊断。

（二）、38KDa抗体阳性

1、38KDa抗原是定位在质膜上的磷酸盐转运蛋白。

2、检测到此抗体阳性，结合临床病史，非常有助于活动性结核的诊断。

3、由于此抗原和大肠埃希菌(简称大肠杆菌)同源蛋白有30％以上的交叉，所以，在肠道感染患者中有一定的假阳性，要注意加以鉴别。

4、值得注意的是在部分接种过卡介苗（BCG）的患者中，也会出现阳性，要注意鉴别。

（三）、16kDa抗体阳性

1、16kDa蛋白又被称为HSP16.3蛋白，是小分子热休克蛋白（sHSP）家族成员之一。

2、此抗体在结核病患者中有相当高的阳性率（46～50% )，检测到此抗体阳性，并结合临床要考虑是活动性结核病患者。

3、在大多数接种过卡介苗（BCG）的患者中，并不会出现阳性，能将结核病患者与BCG 接种患者区别开来。

4、作为儿童结核的早期诊断指标，敏感性为64.8%左右，特异性96.2%左右。

（四）、MPT63抗体阳性

1、MPT63抗原是结核杆菌的分泌蛋白之一。

2、它的灵敏度为15～40％，特异性很高，约为98％左右。即在检测到此抗体阳性时，临床

上基本就可诊断是活动性结核病患者。

三、临床意义------结核分枝杆菌抗体结果呈阴性

（一）不是结核病患者

（二）病情好转

（三）在结核病患者病情加重、合并人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的结核病患者、痰涂片、

痰培养呈阴性的患者中，由于机体免疫能力低下等原因，导致产生的抗体滴度太低，以至于

不能被检测到，会呈现假阴性的结果，需要结合临床加以鉴别。

四、多指标联合检测的优势

（一）多指标联合检测，提高了阳性率

由于单个抗原不可能捕获全部或大多数抗体，所以，多指标联合检测，提高了阳性率，减少

了漏检，是结核血清学诊断的发展趋势。

指标组合灵敏度

LAM 56.5%

LAM+38KD 68.3%

LAM+38KD+16KD 75.2%

LAM+38KD+16KD+MPT63 77.4%

（二）多指标独立的检测结果，有助于医生对患者病情的监控

结核菌侵入机体后刺激机体产生一系列体液免疫反应，体液免疫随着病变的加重（或血行播散）而增加。当多个抗体呈现阳性时，提示病情有加重的迹象，所以，临床医生可以根据不

同时期的抗体谱，并结合患者的临床病症，进行病情的监控和疗效的判断。

三种结核分枝杆菌抗原的抗体联合检测在临床中的应用

三种结核分枝杆菌抗原的抗体联合检测在临 床中的应用 作者：崔晓利，姚小红，刘春梅，张增贤 【摘要】目的：通过结核菌三种抗原脂阿拉伯甘露糖(LAM)、16KDa、38KDa固相于同一膜片上制作的结核蛋白芯片系统联合检测结核患者血清中的相应抗体，以达到快速诊断结核病的目的。方法：收集西安市结核病胸部肿瘤医院痰涂片或者结核菌培养阳性患者的血清98例，痰涂片或者结核菌培养阴性患者的血清54例，结核性脑炎、结核性胸膜炎患者血清20例，通过结核蛋白芯片系统检测三种抗体，任意一种抗体阳性即为结核抗体阳性。结果：活动性肺结核阳性率86.7%(85/98)，痰涂片阴性的肺结核阳性率66.7%(36/54)，结核性脑炎、结核性胸膜炎阳性率45%(9/20)。结论：三种抗原联合使用具有良好的敏感性与特异性，明显优于任何一种抗原单独使用，联合使用将会对结核病的快速辅助诊断起积极作用。 【关键词】结核分枝杆菌；联合检测；抗原；芯片 结核病是长期以来危害人类生命健康的严重疾患，特别是我们国家患者数约450万，每年病死近20万人。结核病的病原体为结核杆菌，它除了能引起呼吸道感染外，还可引起其他部位的病变，因此，结核病的早期快速诊断对结核病的防治具有极其重要的意义。我们使用基因工程表达的结核菌蛋白16KDa和38KDa以及脂阿拉伯甘露糖(LAM)三种抗原制作的结核蛋白芯片联合检测结核抗体，在临床上取得较理想的快速诊断效果。

1 材料与方法 1.1 血清标本来源 结核患者的血清均来源于西安市结核病医院的住院患者，其中痰直涂或者培养阳性患者98例，痰涂片阴性患者54例，结核性脑炎或者结核性胸膜炎的患者20例。 1.2 结核菌多抗原的IgG抗体芯片检测系统由南京大渊生物技术工程有限责任公司提供。批准文号：国药准字S。 1.3 蛋白芯片阅读仪 南京大渊生物技术工程有限公司自主设计生产，型号：PBT-X4。 1.4 芯片系统操作步骤 在芯片上标记样品编号；在芯片盒窗口内滴加4滴试剂A，使膜表面完全浸湿；待完全渗入后，加入待检血清100ue；待血清完全渗入后，再滴加6滴试剂B；待试剂B完全渗入后，滴加10滴试剂C；待试剂C完全渗入后，最后滴加6滴试剂D；反应完毕后30 min 内，将芯片放入芯片阅读系统进行分析。阴阳性结果根据南京大渊生物技术工程有限公司生产的芯片识别仪器设置参数自动判别。 2 结果 三种抗原的抗体联合测定，任何一种阳性即为结核抗体阳性。痰涂片阳性或者培养阳性的结核患者98例，其中结核抗体阳性85例，阳性率86.7%。痰涂片阴性的肺结核患者54例，其中36例结核抗体阳性，阳性率66.7%。结核性脑炎、结核性胸膜炎患者20例，其中结

2017年新项目结核分枝杆菌IgGIgM抗体检测(2)

湘雅博爱康复医院 开展医疗新技术新项目申请书项目名称：结核分枝杆菌IgG/IgM抗体检测 申请人：张艳 申请人职称：副主任技师 所在科室：检验科 申请日期：2017.06

医务部印制 说明 1、开展新技术新项目是医院可持续发展的重要建设内容，但新技术新项目的开展需严格执行准入制度，并遵循伦理原则，并具有实用、有效、安全、先进等技术特点。 2、项目各栏请认真填写，如无相关内容，请填写“无”，以确认该栏无需填写相关说明；各栏填写内容较多，可另附页。 3、填写本表，如涉及伦理问题，即视为申请者已提请本院医学伦理委员会针对所申请项目进行伦理审查和评议，可不再另行提交申请表。 4、项目审批过程包括填写申请表、专家预审、医疗技术管理或/和医学伦理委员会讨论，表格填写如存在字迹潦草、内容不完整等，视为废表，将不予预审和讨论。 5、凡未履行准入并填写该申请书的新技术新项目，不得参与医院年度新技术新项目成果奖励的申报。 6、本申请书及其审批结果，是申请项目完成后进行成果申请、鉴定的重要基本支持依据。 8、申请项目获得批准后，根据申请人、申请科室承诺，管理部门有责任对批准项目进行全程追踪管理、进度检查、伦理督查，可根据完成情况给予表彰和奖励。

一、新技术新项目开展的目的及主要内容（简述） 结核分枝杆菌IgG/IgM抗体检测基于免疫层析和胶体金显色技术开发而成的一步法检测。用于体外定性检测人血清、血浆或全血样本中的结核分枝杆菌IgG/IgM抗体。 应用目前国际医学基础研究最新进展及公认的最新抗原片段，采用基因工程制备的结核抗原和胶体金免疫层析技术，在确保灵敏度和特异性的基础上，更加符合《结核病管理办法》的核心要旨：“提高肺结核患者的发现水平”进而实现快速普及和广泛应用于结核病的辅助诊断、鉴别诊断和化疗过程中的动态监测及特殊人群体检筛查等。 二、该技术项目相关的国内外进展（简要说明） 肺结核主要由结核分枝杆菌复合群引起的一种慢性传染病，以肺结核常见，其他器官也可受感染致病。结核病主要通过飞沫传播，传染性强，各类人群易感，接种疫苗是有效的预防方式。结核病的常用诊断方法有痰结核菌检查，影像学诊断，PPD试验，抗体诊断方法是近几年引进的结核辅助诊断方法。 该技术的国内外使用单位综述： 《血清中结核分枝杆菌IgG/IgM抗体检测在肺结核诊断中的应用价值》 江西省胸科医院检验科实验与检验医学2015年8月第33卷第4期 《结核抗体IgG/IgM检测在肺结核诊断中的应用价值》 四川省绵竹市人民医院感染科实用临床医药杂志2016年第20卷第15期 该技术项目的国内外参考文献： 胶体金免疫层析法检测结核分枝杆菌特异性IgG/IgM抗体对结核病诊断的应用价值--《中国人兽共患病学报》 现阶段结核抗体检测在我国临床应用的专家共识--《中国防痨杂志》 三、该技术项目的技术原理、先进性、有效性、安全性及应用价值 采用基因工程制备的结核抗原和胶体金免疫层析技术，定性检测血清中的结核分枝杆菌（IgG和IgM）。检测时，样本中的结核抗体可与胶体金标记的抗原形成结核抗体-金标抗原复合物，由于层析作用该复合物沿着试剂条向前移动，经过T1检测线时IgM抗体-金标抗原复合物与膜上包被的小鼠抗人IgM结合而显色，经过T2检测线时IgG抗体-金标抗原复合物与膜上包被的结核抗原结核

抗结核分枝杆菌感染的免疫机制

抗结核分枝杆菌感染的免疫机制 学生：何燕华学号：20111061 一、结核病及结核分枝杆菌 １、结核病简介 趣味背景：林黛玉的不足之症是什么病症呢？ 不足之症是中医的病症名，即民间常说的先天不足，泛指各种虚证。虚证是指人的正气虚弱不足，又分气虚、血虚，气虚可发展为阳虚，血虚可发展为阴虚，有些病人可气血皆虚或阴阳皆虚。气虚主要表现为少气、懒言、心悸、自汗、头晕、耳鸣、小便清而频、脉虚弱等。血虚主要表现为面色苍白、唇舌色淡、头晕目眩、心悸怔忡，疲倦乏力或手足麻木，脉细弱等。 根据小说的描写，林黛玉患的应是一种慢性病。她“从会饮食时便吃药，到今日未断，请了多少名医修方配药，皆不见效。”“每岁至春分秋分之后，必犯旧疾”，并且病症主要表现是咳嗽、咳痰、数量不等的咯血，“又咳嗽数声，吐出好些血来”。王大夫分析她的病症时说“这病时常应得头晕，减饮食，多梦，每到五更，必醒个几次。即日间听见不干自己的事，也必要动气，且多疑多惧。不知者疑为性情乖诞，其实因肝阴亏损，心气衰耗，都是这个病在那里作怪。”从她所患之病的症状及疾病演变和进展分析，林黛玉患的是肺结核病。 结核病是由结核杆菌感染引起的慢性传染病。结核菌可能侵入人体全身各种器官，但主要侵犯肺脏，称为肺结核病。结核病又称为痨病和“白色瘟疫”，是一种古老的传染病，自有人类以来就有结核病。结核病是青年人容易发生的一种慢性和缓发的传染病。人与人之间呼吸道传播是本病传染的主要方式。传染源是接触排菌的肺结核患者。解放后人们的生活水平不断提高，结核已基本控制，随着环境污染和艾滋病的传播，结核病又卷土重来，发病率愈演愈烈。 据世界卫生组织(WorldHealthOrganization,WHO)统计，全世界约有20亿人感染结核分枝杆菌，每年约有880万新发病例，200万人因结核病而死亡，每15s就会有一个死亡病例。并且,随着社会人员流动，HIV感染者增多造成的交叉感染使我国的结核病感染率一直处于上升趋势,已经成为造成全球人类死亡的主要传染病类型。了解宿主的免疫系统及机体相关细胞与病原菌的相互作用机制非常重要,并且能对结核病的预防和治疗提供一定的帮助。 2、结核分枝杆菌 结核分枝杆菌( mycobacteriumtuberculosis,MTB)是一种抗酸阳性棒状杆菌，主要包括人型、牛型、非洲型和鼠型，其中对人致病的主要是人型结核菌。结核菌细长略弯曲，大小约1～4X0.4μm，无鞭毛、无芽孢、不能产生内、外毒素，专性需氧，培养要求高，生长缓慢，菌体成分主要有脂质、多糖、蛋白质等。 大量研究表明结核杆菌属于兼性寄生菌，原因是首先在感染的巨噬细胞内复制，故称为胞内菌；然后，随着病变发展又会出现在坏死组织中即巨噬细胞外进行复制结核杆菌的致病性与其在组织细胞内大量繁殖引起的炎症反应，菌体和细胞壁成分以及代谢物质的毒性和机体产生抗结核免疫反应等有关。 在结核杆菌胞壁中含有许多特殊脂类物质这种特殊的胞壁赋予结核杆菌能在宿主吞噬细胞内生存的能力，也为特异性T淋巴细胞提供了独特的糖脂抗原；而且从其基因组序列可以看出结核杆菌具有潜在的由一种代谢途径转变为其他代谢途径的能力，包括有氧呼吸（如氧化磷酸化）和厌氧呼吸（如硝酸还原反应）。这一代谢途径转换的灵活性对结核杆菌适应生存环境的变化有极大的意义，主要表现为结核杆菌既可以在人高氧压力的肺泡中生存繁殖，还可以在结核肉芽肿的微氧和厌氧的环境中存活。 二、结核分枝杆菌在细胞内的免疫机制 1．非特异性免疫机制

结核分枝杆菌感染

3.结核分枝杆菌感染 3-1,痰结核菌检查阳性 肺阴菌结核的诊断：3次痰涂片及一次培养阴性的肺结核 患者连续三周以上的咳嗽，咳痰，若同时痰中带有血丝，就因想到肺结核病。 包括疑似病例，确诊病例，肺阴菌结核的诊断。 （1）典型肺结核临床症状和胸部X线表现； （2）抗结核治疗有效； （3）临床可排除其他非结核性肺部疾患； （4）PPD(5IU)强阳性，血清抗结核抗体阳性； （5）痰结核菌PCR+探针检查阳性； （6）肺外组织病理证实结核病变； （7）BALF检出抗酸分枝杆菌； （8）支气管或肺部组织病理证实结核病变。（不用写进PPT） 3-2 (1)全身症状表现为午后低热、乏力、食欲减退、消瘦、盗汗等。若肺部病灶进展播散，常呈不规则高热。妇女可有月经失调或闭经。 (2)呼吸系统症状 咳嗽咳痰：通常为干咳或带少量粘液痰，继发感染时，痰呈粘液脓性。 咳血：约1/3患者不同程度咯血，中等程度咯血，多为小血管损伤或空洞血管瘤破裂。咯血后常有低热。大咯血时可发生失血性休克;偶因血块阻塞大气道引起窒息。此时患者极度烦躁、心情紧张、挣扎坐起、胸闷气促、发绀，应立即进行抢救。 气急：慢性重症肺结核时，呼吸功能减退，常出现渐进性呼吸困难，甚至缺氧发绀。若并发气胸或大量胸腔积液，其呼吸困难症状尤为严重。 胸痛：固定性针刺胸痛，随呼吸和咳嗽加重，侧卧位症状减轻，常是胸膜受累缘故；当炎症波及壁层胸膜，可有不剧烈的胸壁刺痛。可放射至肩部或上腹部。 3-3肺结核的特征性病理改变包括肉芽肿和结核结节，病变包括渗出性病变出现浆液性和纤维素性炎症，形成病灶，导致咳嗽咳痰；增生性病灶形成肉芽肿，可发生毛细血管破裂，出现不同程度的咯血症状；当机体出现坏死性病变时，结核

结核抗体检测试剂盒

结核抗体检测试剂盒 康珠生物 一.公司概述： 武汉康珠生物技术有限公司是专业的体外诊断试剂生产企业。也是国内第一批通过国家食品药品监督管理局GMP认证的体外诊断试剂生产厂家。体系覆盖酶联免疫，金标，生化，化学发光等多条生产线。产品涉及传染病，肿瘤筛查等多个领域。现已有国药准（械）字50余个产品文号。拥有诸多自主知识产权专利产品，并获得了多项科研成果奖。公司秉承“厚德载物、诚信待人、团结务实、创新进取”的企业精神，注重以人为本，致力于把“康珠生物”打造成国际先进水平的生物医药高新技术企业。 公司规模： 专注诊断试剂，集研发、生产、经营为一体的高新技术企业； 第一批通过国家食品药品监督管理局GMP认证； 占地30亩的生产基地； 光谷生物产业园5000平方米标准厂房。 公司资质： 药品生产许可证 医疗器械生产许可证 医疗器械经营许可证 拥有完善的体外诊断试剂质量管理体系，体系覆盖胶体金法、乳胶法、酶联免疫法和化学法产品线，并通过国家食品药品监督管理局的现场体系考核。 所获荣誉： 中科院生物高科技创新基金 光谷生物园第5批3551基金 生物创新基金 湖北省科技型中小企业技术创新基金无偿资助项目 十余项专利 二．结核杆菌IgG抗体检测概述：

结核分枝杆菌（M.tuberculosis）,简称结核杆菌,此菌主要引起肺结核病，肺结核是一种通过呼吸道传染、具有强烈传染性的慢性消耗性疾病。肺结核的诊断方法主要以细菌学痰涂片显微镜检查，而免疫血清学对结核杆菌IgG抗体水平检测，可辅助诊断结核病，并为结核病监测提供有力的手段。 三.康珠生物结核抗体检测试剂盒简介： 结核杆菌IgG抗体检测试剂盒采用了间接ELISA法定性检测人血清/脑脊液/胸积水样本中的结核分枝杆菌IgG抗体水平，适用于结核病的辅助诊断及结合临床症状该病情发展IgG 抗体水平的监测。 四.试剂盒组成： 1、含纯化TB-IgG抗原包被的酶标反应板 2、样品稀释液1瓶 3、TB-IgG酶结合物试剂1瓶 4、浓缩洗涤液(25×)1瓶 5、TB-IgG阴性对照液和TB-IgG阳性对照液各1瓶 6、显色剂A和显色剂B各1瓶 7、终止液1瓶 8、自封袋2个、封板膜2片、说明书1份 五.产品相关信息 产品名称：结核分枝杆菌IgG抗体检测试剂盒（胶体金法） 包装规格：48T/96T 预期用途：该产品用于定性检测待测血清或血浆中可能存在的结核分枝杆菌IgG抗体。 医疗器械生产企业许可证编号：鄂食药监械生产许20120396 医疗器械注册证书编号：国食药监械（准）字2013第3401627号 产品标准编号：YZB/国5912-2013 储存有效期：2-8℃保存，有效期12个月 生产企业：武汉康珠生物技术有限公司

结核分枝杆菌IgG抗体TB检测试剂盒

结核分枝杆菌IgG抗体(TB)检测试剂盒 一、检测原理------斑点金免疫渗滤法 二、临床意义------结核分枝杆菌抗体结果呈阳性 （一）、抗细胞壁脂多糖LAM抗体呈阳性 1、脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)是分枝杆菌细胞壁的重要组成部分，具有较强的免疫原性和免疫调节功能，可刺激机体产生相应的抗体。 2、检测到此抗体阳性，结合临床症状和其他检查要考虑是活动性结核病患者。 3、由于在某些呼吸道炎症等良性疾病中，此抗体也会呈现阳性，所以，请医生要结合其他的临床信息加以鉴别诊断。 （二）、38KDa抗体阳性 1、38KDa抗原是定位在质膜上的磷酸盐转运蛋白。 2、检测到此抗体阳性，结合临床病史，非常有助于活动性结核的诊断。 3、由于此抗原和大肠埃希菌(简称大肠杆菌)同源蛋白有30％以上的交叉，所以，在肠道感染患者中有一定的假阳性，要注意加以鉴别。 4、值得注意的是在部分接种过卡介苗（BCG）的患者中，也会出现阳性，要注意鉴别。 （三）、16kDa抗体阳性 1、16kDa蛋白又被称为HSP16.3蛋白，是小分子热休克蛋白（sHSP）家族成员之一。 2、此抗体在结核病患者中有相当高的阳性率（46～50% )，检测到此抗体阳性，并结合临床要考虑是活动性结核病患者。 3、在大多数接种过卡介苗（BCG）的患者中，并不会出现阳性，能将结核病患者与BCG 接种患者区别开来。 4、作为儿童结核的早期诊断指标，敏感性为64.8%左右，特异性96.2%左右。

（四）、MPT63抗体阳性 1、MPT63抗原是结核杆菌的分泌蛋白之一。 2、它的灵敏度为15～40％，特异性很高，约为98％左右。即在检测到此抗体阳性时，临床 上基本就可诊断是活动性结核病患者。 三、临床意义------结核分枝杆菌抗体结果呈阴性 （一）不是结核病患者 （二）病情好转 （三）在结核病患者病情加重、合并人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的结核病患者、痰涂片、 痰培养呈阴性的患者中，由于机体免疫能力低下等原因，导致产生的抗体滴度太低，以至于 不能被检测到，会呈现假阴性的结果，需要结合临床加以鉴别。 四、多指标联合检测的优势 （一）多指标联合检测，提高了阳性率 由于单个抗原不可能捕获全部或大多数抗体，所以，多指标联合检测，提高了阳性率，减少 了漏检，是结核血清学诊断的发展趋势。 指标组合灵敏度 LAM 56.5% LAM+38KD 68.3% LAM+38KD+16KD 75.2% LAM+38KD+16KD+MPT63 77.4% （二）多指标独立的检测结果，有助于医生对患者病情的监控 结核菌侵入机体后刺激机体产生一系列体液免疫反应，体液免疫随着病变的加重（或血行播散）而增加。当多个抗体呈现阳性时，提示病情有加重的迹象，所以，临床医生可以根据不 同时期的抗体谱，并结合患者的临床病症，进行病情的监控和疗效的判断。

抗结核分枝杆菌感染的免疫机制

抗结核分枝杆菌感染的免疫机制 1．非特异性免疫机制 结核杆菌作为兼性胞内寄生菌，以巨噬细胞为宿主细胞。组织中的巨噬细胞可以吞噬多种病原微生物并处理衰老死亡的组织, 其自身还能分泌多种细胞因子和其他炎性介质参与局部炎症反应、发热反应等。巨噬细胞可以通过氧依赖性和非氧依赖性杀菌系统发挥杀伤和消除病原菌的作用。 （１）巨噬细胞的识别作用 巨噬细胞是MTB进入机体内首先侵入的细胞, 是MTB感染过程中的主要靶细胞。巨噬细胞有两种识别MTB的方式：①直接识别：巨噬细胞能通过其表面的激素样受体直接识别侵入机体的MTB。②间接识别：巨噬细胞可以通过表达补体受体识别MTB。（２）巨噬细胞的杀菌作用 巨噬细胞能通过自身凋亡等杀灭菌体。巨噬细胞系统的细胞毒素具有两个系统:一个是氧依赖系统, 在抗微生物效应中起决定性的作用；另一个是氧不依赖的系统，溶菌酶等属于该系统产物，这个系统也参与杀微生物活性。巨噬细胞主要通过氧依赖系统杀伤侵入机体的MTB,激活的巨噬细胞发生呼吸暴发，产生反应性氧中间产物(ROIs)和反应性氮中间产物(RNIs)，释放溶菌酶等活性蛋白质，这些物质有强的氧化作用和细胞毒作用，对MTB有强的杀伤作用。另外，巨噬细胞与病原菌作用后处于激活状态的巨噬细胞可以通过病原菌与TLR相互作用激活caspase-8，诱导其自身凋亡，破坏MTB的生存环境，杀灭入侵的MTB。 （３）ＭＴＢ的免疫逃逸机制 MTB能在巨噬细胞内定居存活以及引起机体一系列的病理反应是与其免疫逃逸的机制分不开的。MTB进入巨噬细胞胞膜内化形成吞噬小体，然后与溶酶体结合形成吞噬溶酶体，溶酶体分泌的胞内酶可以促使吞噬溶酶体酸化，外源性抗原在吞噬溶酶体的酸性环境中被水解为抗原多肽。而MTB之所以能够在巨噬细胞内存活是因为它能够阻止吞噬溶酶体的酸化。MTB可以通过降低磷脂酶D的活性，抑制活性氧中间体和活性氮中间体的产生，下调MHCⅡ的表达,抑制吞噬溶酶体的成熟，进而抑制巨噬细胞的氧依赖杀伤作用。 2．特异性免疫在抗结核中的作用 MTB的感染过程，分为初始感染,潜伏感染,再次大量增殖造成的疾病复燃三个阶

结核分枝杆菌抗体检测 (胶体金法) 规程操作

结核分枝杆菌抗体检测(胶体金法) 规程操作 1、检验目的 本试剂盒可定性检测人血清中结构分枝杆菌抗体，用于临床结构病的辅助诊断。 2、检验原理 本试剂盒利用斑点免疫胶体金渗滤技术（DIGFA），将结核分枝杆菌特异性膜蛋白抗原分离纯化，点样并固化在硝酸纤维素膜上，膜上TB抗原捕获人血清样品中结核分枝杆菌抗体，被捕获的结核IgG 抗体可用葡萄球菌A蛋白（SPA）胶体金缀合物标呈色（SPA能与IgG 特异性结合），形成红色斑点，根据是否出现红色斑点即可判断阴、阳结果从而判断是否存在结核分枝杆菌抗体。 3、样本要求 必须使用新鲜血清标本，血浆标本必须用玻璃棒剥离纤维蛋白，保证血清无混浊沉淀。 4、试剂 4.1试剂名称：结核分枝杆菌抗体诊断试剂盒（胶体金法） 4.2生产厂家：上海奥普生物医药有限公司 4.3包装规格：20人份/盒 4.4贮存条件及有效期：2-8℃干燥处保存，有效期12个月。 5、检验方法： 5.1在反应板的反应孔中间，加入2滴封闭液，等待薄膜吸入；5.2 取40μl新鲜的血清标本，加入反应孔中间，等待薄膜吸入； 5.3 在反应孔中间加入6滴洗活液，等待薄膜吸入； 5.4 在反应孔中间加入2滴金标液，等待薄膜吸入；

5.4 在反应孔中间加入6滴洗涤液，等待薄膜吸收，目测结果； 6、结果判断 6.1 阳性——质控点显示红色，反应孔中间有红色斑点出现。 6.2 阴性——质控点显示红色，反应孔中间无红色斑点出现或仅为痕迹。 检验方法的局限性 少数标本（急性感染、高血脂、溶血等）可出现背景偏红，一般不影响结果判断，可通过将标本用封闭液1:3稀释，加样80μl背景将获得改善。严重乳糜血标本可能会阻塞硝酸纤维素膜孔，使背景很红，影响中间红色斑点有无的判别，不宜用本法测定。 7、注意事项 7.1 必须以单人份操作，严禁多标本同时检测，每个标本的操作步骤需要连续进行，不宜停顿过长。 7.2 质控点显示红色表明试剂盒有效；阴、阳性对照也是确保定性结果可靠的一个环节，但临床阳性标本显色深浅可以与阳性对照不同。 7.3 血清、包括健康人血清属潜在生物危害物质，操作者应戴手套，测试后凡接触血清的物品应消毒后再丢弃。

三种不同检测方法诊断结核病的比较

三种不同检测方法对诊断结核病的比较 池云生张东浩吉林省结核病医院检验科 130500 【摘要】目的将诊断结核病的蛋白芯片法与金标法及抗酸染色法三种检测方法进行比较，以评价三种方法在临床中的应用价值。方法用蛋白芯片法、金标法及抗酸染色法检测125例确诊结核病人、50例肺部其它疾病患者和健康体检者的血清标本，并进行相关统计分析。结果蛋白芯片法、金标法及抗酸染色法检出结核分枝杆菌的灵敏度为64%，72%及22.7%，前两者比较无显著性差异(P>0.05)，但均高于抗酸染色法(P<0.05)。三者的特异性分别为90%，76.7%及96.7%。结论蛋白芯片法检测结核分枝杆菌，与金标法及抗酸染色法比较，具有简便、快速、敏感性较高和特异性强等优点，是临床辅助诊断结核病的有效方法。【关键词】蛋白芯片；结核分枝杆菌；比较；诊断 结核病是严重危害人民群众健康的呼吸道传染病，被列入我国法定重大传染病。为了实现早发现、早诊断、早治疗的目标，临床上现已开展了多种针对于结核病诊断的实验室检测项目。我院以开展的检测项目有蛋白芯片法、金标法、抗酸染色法、PCR-荧光探针法、结核菌培养等多种方法。根据临床应用情况，现就相对简便易行的蛋白芯片法、金标法、抗酸染色法进行比较，来评价三种方法在临床中的应用价值，以便更好地为结核病防治的临床应用提供及时准确的信息。 结核蛋白质芯片(protein chip，PC)是近年来蛋白质组学研究中兴起的一种新方法，其基本原理是以微孔滤膜为载体，利用微阵列技术将纯化的结核菌脂阿拉伯甘露糖(LAM)、蛋白16 KDa(rT—PA16)和38KDa(rTPA38)等三种抗原固相于同一膜片上，使抗原抗体反应在固相膜上快速进行，再以免疫金作为标记物在膜上显色，然后放入芯片阅读仪，在专门软件的支持下对抗原点阵的灰度值进行分析，以达到检测结核分枝杆菌的目的。为了评价此方法的临床应用价值，本文将此法与免疫胶体金法及常规的抗酸染色法作一比较，现报告如下： 1 材料与方法 1.1 材料①标本来源：125例确诊结核病人血清由我院内科肺结核确诊病人提供，50例肺部其它疾病患者和健康体检者的血清来源于本院胸外科、内科和门诊体检人员。②主要仪器和试剂：蛋白芯片阅读仪、结核分枝杆菌蛋白芯片试剂盒均为南京大渊生物技术公司提供；结核分枝杆菌免疫胶体金诊断试剂盒为

结核分枝杆菌荧光定量检测试剂盒研发步骤

结核分枝杆菌荧光定量检测试剂盒研发步骤 非竞争性内标法 1.模板的获得（TB标品和内标DNA） (1) 普通PCR反应 选用一种工作标准品为模板，根据巨细胞病毒荧光定量检测试剂盒说明书进行普通PCR 反应，反应后溶液进行琼脂糖凝胶电泳，并对目的条带进行切胶回收。 (2) 连接 由于Taq酶的PCR反应产物末端带A，故直接以上述切胶回收的PCR片段为目的PCR 片段，按pGMT克隆试剂盒进行10μl连接体系的配制，4℃过夜连接。 (3) 转化 10μl昨日过夜连接的体系转入50μl TP10感受态细胞中，冰浴30min，42℃90s热激，冰浴2-3min，加入600μl LB培养基后37℃震荡培养90min。分别涂100μl于现倒的蓝白筛选平板，37℃过夜培养。 (4) 检测 挑取白色菌落接种于1-5ml LB培养基中，摇到一定浓度后，以菌液为模板用普通PCR 进行验证。 (5) 测序 选择条带正确的菌液进行测序。 2.基因的查找和比对（TB标品和内标DNA） 从https://www.wendangku.net/doc/3f16779434.html,/网点的genbank中下载所需要的序列，与测序结果进行比对。由于不知道测序基因的具体名称，故需要进行大量的比对以找出其在genebank中的序列。 TB标品DNA序列：CACATCAGCCGCGTCCACGCCGCCAACTACGGTGTTTACGGTGCCCGCAAAGTGTGGCTAACCCTGAACC GTGAGGGCATCGAGGTGGCCAGATGCACCGTCGAACGGCTGATGACCAAACTCGGCCTGTCCGGGACCA CCCGCGGCAAAGCCCGCAGGACCA TB内标DNA序列：CACATCAGCCGCGTCCACATCTGATCCGTAGCGACTACGGACGCGCGCCTACGCCCTTCTCAGTTAA 3.引物和探针的设计（TB标品和内标DNA） (1) 引物设计 引物序列： 上游引物TB-F：5’ CACATCAGCCGCGTCCACG 3’ 19bp

抗分枝杆菌药：抗结核病类

结核病是由结核杆菌引起的一种慢性传染病。全身各器官均可发生，但以肺结核最为多见。其病变特征是结核结节形成并伴有不同程度的干酪样坏死。目前，临床使用的抗结核化学药物基本分为一线和二线用药两类。一线抗结核药物主要有利福平、异烟肼、吡嗪酰胺、乙胺丁醇、链霉素。继利福平之后，利福霉素类的利福喷汀和利福布汀也得到广泛应用。二线抗结核药物有卷曲霉素、卡那霉素、阿米卡星、乙硫异烟胺、对氨基水杨酸、环丝氨酸、环丙沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星和氯苯吩嗪等。近些年来的研究结果，综合起来，新型抗结核药物，主要分为九大类：首先是利福霉素类衍生物，如利福喷丁、利福布丁、苯并恶嗪、利福霉素；此外还有CGP7074、CGP27557，F22等长效抗结核药物；其次为喹诺酮类品种如氧氟沙星、左旋氧氟沙星、环丙沙星等，由于该类药物对结核杆菌有很好的抑制及杀灭效果，价格低廉，毒副作用较小，并且与其它抗结核药物不产生交叉耐药性，故而受到广泛重视，是当前抗结核病类药物研究中的一个主要方面；第三、氨基糖甙类主要有丁胺卡那霉素、硫酸奈替米星、硫酸西索米星、巴龙霉素等；第四、大环内酯类，如克拉霉素、罗红霉素、阿齐霉素等；第五、β-内酰胺类及其酶抑制剂，即阿莫西林、克拉维酸等；第六、多肽类主要是结核放线菌素-N，对耐链霉素或卡那霉素的结核病菌有效，可用于复治联合方案多药耐药的病患者；第七、为吩噻嗪类、主要有吩噻嗪，适合于耐药的结核病联合用药；第八，硝基咪唑类，其代表甲硝唑，与其它抗结核病药物配伍使用，不仅对各种状态的结核病菌有杀灭作用，而且对潜伏感染的患者也有预防发病的作用；第九，其它类，目前上市的有以氨基水杨酸与异烟肼的化合物力排肺痰，现在我国也开始使用，效果较好。[作用机制] 抗结核药亦可按作用机制的不同分为：⑴阻碍细菌细胞壁合成的药物，如环丝氨酸、乙硫异烟胺；⑵干扰结核杆菌代谢的药物，如对氨基水杨酸钠；⑶抑制RNA合成药，如利福平；⑷抑制结核杆菌蛋白合成药，如链霉素，卷曲霉素；⑸多种作用机制共存或作用机制未明的药物，如异烟肼、乙胺丁醇。[适应症] 抗结核病类药物主要对结核杆菌有良好的抗菌作用。[不良反应] 胃肠道反应，肝损害，关节损害，神经系统反应，过敏反应等。[禁忌] 肝功能不良者、孕妇慎用。[用药原则] 1.早期用药早期病灶内结核菌生长旺盛，对药物敏感，同时病灶部位血液供应丰富，药物易于渗入病灶内，达到高浓度，可获良好疗效。 2.联合用药联合用药可提高疗效、降低毒性、延缓耐药性，并可交叉消灭对其他药物耐药的菌株，使不致成为优势菌造成治疗失败或复发。联合用药二联、三联或四联则取决于疾病的严重程度，以往用药情况以及结核杆菌对药物的敏感性。 3.适量是指用药剂量要适当。 4.坚持全程规律用药。[药物相互作用] 和其他种抗结核病类的药物配合使用虽然对结核杆菌有协同的抗菌作用，但是同时也容易加强肝中毒性。

结核分枝杆菌检测技术研究进展

Advances in Microbiology 微生物前沿, 2014, 3, 64-69 Published Online September 2014 in Hans. https://www.wendangku.net/doc/3f16779434.html,/journal/amb https://www.wendangku.net/doc/3f16779434.html,/10.12677/amb.2014.33008 Research Progress in Detection Technology of Mycobacterium tuberculosis Jinhong Ju Fujian Province Fuqing 73301 Military Hospital, Fuqing Email: ju868@https://www.wendangku.net/doc/3f16779434.html, Received: Aug. 6th, 2014; revised: Aug. 24th, 2014; accepted: Sep. 10th, 2014 Copyright ? 2014 by author and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). https://www.wendangku.net/doc/3f16779434.html,/licenses/by/4.0/ Abstract Tuberculosis (TB) is a notable disease as well as a major global health problem; it is also one of the major infectious diseases in our country. Early diagnosis and treatment is a key step in the process of stopping Tuberculosis. In recent years, with the development of biotechnology, the Tuberculo-sis diagnosis methods have been fully improved, more and more new detection methods are con-stantly emerging, especially the molecular biological techniques for timely diagnosis of Tubercu-losis and pathological research is of great significance. This article summarizes the main domestic detection techniques from the traditional bacteriological, immunological and molecular biological detection aspects, to provide some suggestions and ideas for medical staff and researchers. Keywords Mycobacterium tuberculosis, Traditional Bacteriology Detection, Immunology Detection, Molecular Biology Detection 结核分枝杆菌检测技术研究进展 居金宏 福建省福清市73301部队医院，福清 Email: ju868@https://www.wendangku.net/doc/3f16779434.html, 收稿日期：2014年8月6日；修回日期：2014年8月24日；录用日期：2014年9月10日

结核分枝杆菌抗原及其在结核病诊断中的研究进展

好转率提高，死亡率明显下降。 4．讨论 中医认为脾胃为后天之本，为气血生化之源，而气与血是构成人体和维持人体生命活动的重要物质基础，它来源水谷，为水谷所化，人绝水谷则死。气就是指脏器的功能活动，胃气是脾气和胃气的统称，人有胃气则生，无胃气则死，人以胃气为本，胃气的盛衰对疾病的预后具有决定性作用，也因而使顾护胃气成为中医临床上的重要治疗法则之一。中医脾气和气血的关系十分密切，气为血之帅，血为气之母，与现代医学的血液一样，中医的血也含人体所需的营养物质，它循经脉运行全身。血还必须在气的统摄下循经脉运行，如果气虚不能摄血，则血液就会溢出脉道而形成出血，此外热邪外迫，瘀血内阻等均可导致出血。急性脑血管意外患者由于进食少或禁食后,水谷精微即断,精血无以产生和充血, 必致精血亏虚,精血为有形的阴质,阴虚则生内热，热邪迫血妄行；气血均为水谷化生，水谷既绝，气无以化，血无以统，就会溢出于经脉之外；气无以化则气虚，气虚则血瘀，瘀血内阻，逼血外溢亦为出血。总之，从中医理论分析，应激性溃疡出血与胃气衰弱具有不可分的直接关系。《内经》曰:人以水谷为本,故人绝水谷则死。谷不入半日则气衰，一日则气少矣。因而我们认为禁食是导致胃气衰败的主要原因之一。因而保得一分胃气，便有一分生机。方参、术、苓、山药等健脾益气，三七粉止血活血,可去瘀血生新血；少量佐大黄可通腑降浊，通过上述健脾益胃不但对已发生应激性溃疡的患者有以显治疗作用，还可预防应激性溃疡的发生，从而降低中风患者因发生应激性溃疡的死亡率，说明顾护胃气在急性脑血管意外病人的治疗中占有重要的地位，值得临床借鉴。 结核分枝杆菌抗原及其在结核病诊断中的研究进展 王 霖(昆明市第三人民医院<昆明结核病防治院> 云南昆明 650301) 【中图分类号】R825.2【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）28-0079-02 【摘要】 本文选取2011年5月—2012年5月由某地肺科医院、结核病防治机构等提供的临床上确认为结核病和非结核病患者，以及从社会上招募而来的健康志愿者，共计720例作为研究对象。采用结核分枝杆菌特异性蛋白来对结核病诊断进行研究。研究结果显示，菌阴性肺结核敏感度为66.3%，菌阳性肺结核敏感度为69.9%，肺外结核病敏感度为75.4%，结核总敏感度为70.6%。对于特异度，健康人群为68.4%，结核病以外的其他肺部疾病患者为79.1%，结核总敏感度为71.6%。因此本文得出，在临床结核病诊断中，采用结核分枝杆菌特异性蛋白诊断结核病具有良好应用价值，值得在今后大力推广。 【关键词】结核分枝杆菌抗原 结核病 诊断 Research progress of Mycobacterium tuberculosis antigen in the diagnosis of tuberculosis 【Abstract】 This paper chooses in 2011 May - 2012 May by clinical Chest Hospital, a TB institutions control provides confirmed to the patients with tuberculosis and non tuberculosis, and healthy volunteers recruited from the society, a total of 720 cases as the object of study. To study the diagnosis of tuberculosis by Mycobacterium tuberculosis specific protein. The results show, smear negative pulmonary tuberculosis sensitivity was 66.3%, pulmonary tuberculosis sensitivity was 69.9%, extrapulmonary tuberculosis tuberculosis sensitivity was 75.4%, sensitivity was 70.6%. For specificity, healthy population was 68.4%, other lung diseases other than tuberculosis tuberculosis was 79.1%, sensitivity was 71.6%. Therefore, in this paper, in the clinical diagnosis of tuberculosis, the specificity of diagnosis of tuberculosis mycobacterium tuberculosis protein has good application value in the future, is worth promoting. 【Keywords】 Mycobacterium tuberculosis tuberculosis diagnosis 据全球统计数据显示，大约有1/3的人都感染有结核分枝杆菌，并且每年将会有约200万人死于结核病。我国在第五次结核病流行病学抽样调查的相关报告显示，我国每年结核病的患病人数大约为130万人，在全球发病率中我国位居第2，占14.3%，并且在15岁以上的患病率为每10万人有459人[1]。在全球控制结核病中，如何以最快、最准确的方法对结核病进行诊断是首要解决问题。本文通过运用结核分枝杆菌特异性蛋白抗体诊断试剂盒对结核病患者进行结核分枝杆菌特异性蛋白抗体检测，探讨其所蕴含的价值，从而为临床结核病的诊断提供有效参考。现将具体研究结果报告如下： 1 资料与方法 1.1一般资料 本文选取2011年5月—2012年5月由某地肺科医院、结核病防治机构等提供的临床上确认为结核病和非结核病患者，以及从社会上招募而来的健康志愿者，共计720例作为研究对象。其中，肺结核患者有364例，包括菌阴肺结核患者178例、菌阳肺结核患者186例，且男性为227例、女性为137例，他们的平均年龄为60.5岁。非结核病患者有254例，其中肺外结核患者有187例（男性患者为96例，女性患者为91例，他们的平均年龄为55.8岁），其他肺部疾病患者为67例（男性患者为36例，女性患者为31例，他们的平均年龄为67.3岁）。入选的健康志愿者共有158例，其中男性志愿者91例，女性志愿者67例，他们的平均年龄为30.2岁。在这些研究对象中，他们都没有免疫系统疾病史，并且在近3个月之内也没有使用过免疫抑制剂。 1.2方法 1.2.1仪器配置 本研究所使用的仪器为[2]：第一，结核分支杆菌特异性蛋白抗体检测试剂盒，第二，酶标仪，由芬兰雷勃公司提供，型号为MK3 型。 1.2.2细菌及抗体提取检测 在经过改良的罗氏培养基中对结核分枝杆菌进行连续培养，然后收集菌体。按照试剂盒提供的相关说明书来对结核分枝杆菌特异性蛋白抗体进行检测。 1.2.3结核分枝杆菌特异性蛋白抗体阳性判定临界值 本文对720例患者的检测结果进行分别统计，最终确定结核分枝杆菌特异性蛋白抗体阳性判定的临界值为0.373，只要是大于0.373的都判定为阳性。 1.2.4检测方法 本研究中的720例研究对象都要对其进行结核分枝杆菌特异性蛋白抗体检测。 2 结果 2.1结核分枝杆菌特异性蛋白抗体检测结果 见表1。 表1 结核分枝杆菌特异性蛋白抗体检测结果统计 内容敏感度［n( %) ］特异度［n( %) ］菌阳肺结核130 (69.9)－ 菌阴肺结核118 (66.3)－ 肺外结核病141 (75.4)－ 结核总敏感度389 (70.6)－ 非结核病－53 (79.1) 健康人群－108 (68.4)结核病总特异度－161 (71.6) 通过表1的研究结果显示，在对720例患者进行结核分枝杆菌特异性蛋白抗体检测后得出，菌阴性肺结核敏感度为66.3% (118/178)，菌阳性肺结核敏感度为69.9% (130/186)，肺外结核病敏感度为75.4% (141/187)，结核总敏感度为70.6%(389/551)。 -79 -

结核分枝杆菌IgG抗体TB检测试剂盒

结核分枝杆菌IgG 抗体(TB) 检测试剂盒 一、检测原理------ 斑点金免疫渗滤法 胶体金 SPA 待测抗体 包被抗原 膜 二、临床意义------ 结核分枝杆菌抗体结果呈阳性 （一）、抗细胞壁脂多糖LAM 抗体呈阳性 1、脂阿拉伯甘露聚糖(LAM) 是分枝杆菌细胞壁的重要组成部分，具有较强的免疫原性和免 疫调节功能，可刺激机体产生相应的抗体。 2、检测到此抗体阳性，结合临床症状和其他检查要考虑是活动性结核病患者。 3、由于在某些呼吸道炎症等良性疾病中，此抗体也会呈现阳性，所以，请医生要结合其他 的临床信息加以鉴别诊断。 （二）、38KDa 抗体阳性 1、38KDa 抗原是定位在质膜上的磷酸盐转运蛋白。 2、检测到此抗体阳性，结合临床病史，非常有助于活动性结核的诊断。 3、由于此抗原和大肠埃希菌(简称大肠杆菌)同源蛋白有30％以上的交叉，所以，在肠道感染患者中有一定的假阳性，要注意加以鉴别。 4、值得注意的是在部分接种过卡介苗（BCG）的患者中，也会出现阳性，要注意鉴别。 （三）、16kDa 抗体阳性 1、16kDa 蛋白又被称为HSP16.3 蛋白，是小分子热休克蛋白（sHSP）家族成员之一。 2、此抗体在结核病患者中有相当高的阳性率（46～50% )，检测到此抗体阳性，并结合临床 要考虑是活动性结核病患者。 3、在大多数接种过卡介苗（BCG）的患者中，并不会出现阳性，能将结核病患者与BCG 接种患者区别开来。 4、作为儿童结核的早期诊断指标，敏感性为64.8%左右，特异性96.2%左右。

（四）、MPT63 抗体阳性 1、MPT63 抗原是结核杆菌的分泌蛋白之一。 2、它的灵敏度为15～40％，特异性很高，约为98％左右。即在检测到此抗体阳性时，临床 上基本就可诊断是活动性结核病患者。 三、临床意义------ 结核分枝杆菌抗体结果呈阴性 （一）不是结核病患者 （二）病情好转 （三）在结核病患者病情加重、合并人类免疫缺陷病毒(HIV) 感染的结核病患者、痰涂片、 痰培养呈阴性的患者中，由于机体免疫能力低下等原因，导致产生的抗体滴度太低，以至于不能被检测到，会呈现假阴性的结果，需要结合临床加以鉴别。 四、多指标联合检测的优势 （一）多指标联合检测，提高了阳性率 由于单个抗原不可能捕获全部或大多数抗体，所以，多指标联合检测，提高了阳性率，减少 了漏检，是结核血清学诊断的发展趋势。 指标组合灵敏度 LAM 56.5% LAM+38KD 68.3% LAM+38KD+16KD 75.2% LAM+38KD+16KD+MPT63 77.4% （二）多指标独立的检测结果，有助于医生对患者病情的监控 结核菌侵入机体后刺激机体产生一系列体液免疫反应，体液免疫随着病变的加重（或血行播散）而增加。当多个抗体呈现阳性时，提示病情有加重的迹象，所以，临床医生可以根据不 同时期的抗体谱，并结合患者的临床病症，进行病情的监控和疗效的判断。