花生根腐病茎腐病
花生根腐病
症状
“鼠尾”、“烂根”，是花生枯萎病中的一种真菌性病害，全国各花生产区均有发生，主要引起根腐死苗，造成缺株断垄，甚至使植株大部分或全部死亡。
苗期受害引致根腐、苗枯；成株期受害引致根腐、茎基腐和荚腐，病株地上部表现矮小、生长不良、叶片变黄，终致全株枯萎。由于本病发病部位主要在根部及维管束，使病株根变褐腐烂，维管束变褐，主根皱缩干腐，形似老鼠尾状，患部表面有黄白色至淡红色霉层（病菌的分生孢子梗及分生孢子）
病原
花生根腐病由半知菌亚门的镰刀菌侵染所引起。包括尖镰孢菌、茄类镰孢菌、
花生根腐病症状图
粉红色镰孢菌、三隔镰刀菌和串珠镰孢菌5个菌种，它们都可产生无性态的小孢子、大孢子和厚垣孢子。小孢子卵圆形至椭圆形，无色，多为单胞，大小2-3微米×5-12微米。大孢子镰刀形或新月形，具3-5个分隔。厚垣孢子近球形，单生或串生，直径7-11微米。病菌习居土壤中，在土中能存活数年，属维管束寄生菌，可堵塞导管和分泌毒素而使植株枯萎。
传播途径
病菌在土壤、病残体和种子上越冬，成为翌年初侵染源。病菌主要借助雨水，农事操作传播，从作物伤口或表皮直接侵入，病株产生分生孢子进行再侵染。苗期多阴雨，湿度大发病重。连作田、土层浅、沙质地易发病。
发病规律
病菌主要随病残体在土壤中越冬并成为病害主要初侵染源，带菌的种仁、荚果及混有病残体的土杂肥也可成为病害的初侵染源。病菌主要借流水、施肥或农事操作而传播。初侵接种体主要是厚垣孢子，再侵接种体为大、小分生孢子，能从寄主伤口或表皮直接侵入，在维管束内繁殖蔓延。通常植地连作、地势低洼、土层浅薄、持续低温阴雨或大雨骤晴、或少雨干旱的不良天气发病较重
防治方法
应采取耕作栽培防病为主、药剂防治为辅的综合防治措施。
花生根腐病
①把好种子关：做好种子的收、选、晒、藏等项工作；播前翻晒种子，剔除变色、霉烂、破损的种子，并用种子重量0.3%的40%三唑酮、多菌灵可湿粉加新高脂膜拌种，密封24小时后播种。
②合理轮作：因地制宜确定轮作方式、作物搭配和轮作年限。
③抓好以肥水为中心的栽培管理：整治排灌系统，提高植地防涝抗旱能力，雨后及时清沟排渍降湿；增肥改土，精细整地，提高播种质量；视天气条件适期播种；注意施用净肥，抓好田间卫生，在花生前期管理中应及时喷施促花王3号，抑制促梢旺长，促进花芽的分化，合理追肥浇水，并在开花前期、幼果期、果实膨大期喷施地果壮蒂灵使地下果营养输导管变粗，提高地果膨大活力，增加花生的产量。
④及时施药预防控病：齐苗后加强检查，发现病株随即采用喷雾或淋灌办法施药封锁中心病株。可选用96%天达恶霉灵3000倍液，或40%三唑酮、多菌灵可湿粉1000倍液。与“天达2116”混配隔7－15天1次，连喷2次，交替施用，喷足淋透。
花生茎腐病
简介
花生茎腐病
花生茎腐病俗称烂脖子病，在全国各花生产区均有分布，一般发生在中后期，感病后很快枯萎死亡，后期为感病者。果荚往往腐烂或种仁不满，造成严重损失，一般田地发病率为20%～30%，严重者达到60%～70%，甚至颗粒无收。[1]
主要症状
病菌从子叶或幼根侵入植株，在根颈部产生黄褐色水渍状病斑，后变黑褐色，引起根基组织腐烂。当潮湿环境时，病部产生分生孢子器（即黑色小突起），病部表皮易剥落，纤维组织外露。当环境干燥时，病部表皮凹陷，紧贴茎上，成株期感病后，约10～30天全株枯死，发病部位多在茎基部贴地面，有时也出现主茎和侧枝分期枯死现象。
发病规律
病菌主要在种子和土壤中的病残株上越冬，成为明年发病的来源。如果病株作为饮料或荚果壳饲养牲畜后粪便，以及混有病残株所积造的土杂肥也能传播蔓延。在田间传播，主要是靠田间雨水径流，其次是大风，不过农事操作过程中携带病菌也能传播。在多雨潮湿年份，特别是收获季节遇雨，收获的种子带菌率较高，因此，不仅是病害的主要传播者，而且通过引种还可以远距离的传播。
防治方法
1、防止种子发霉，保证种子质量。
（1）适时收获，避免种子受潮湿、防止发霉；
（2）晒干种子，保证含水量不超过10%；
（3）安全贮藏，注意通风防潮；
（4）不能使用霉种子、变质种子播种；
（5）麦套花生早播的花生发病轻；
（6）选用抗病品种。
2、合理轮作，最好和小麦、高梁、玉米等禾本科作物轮作；
3、施用腐熟肥料，加强田间管理。
4、药剂防治：用25%或50%多菌灵可湿性粉剂，按种子重量的0.3%～0.5%拌种或按种子量0.5%～1%药剂兑水配成药液浸种，以能淹没种子为准，浸泡24小时取出播种。
①药剂浸种。用50%多菌灵可湿性粉剂加新高脂膜按下种子量的5%，掺入细土1．5～2公斤分层喷水撒药，然后拌匀，催芽播种，能驱避地下病虫，隔离病毒感染，不影响萌发吸胀功能，加强呼吸强度，提高种子发芽率。
②农业防治。田间发现病株，应立即拔除，将其带出田外深埋，并喷施新高脂膜600—800倍液喷雾土壤表面，可保墒防水分蒸发、防晒抗旱、保温防冻、防土层板结，窒息和隔离病虫源，提高出苗率。
③药剂喷雾。当田间发病时，可用70%甲基托布津可湿性粉剂1000倍液+新高脂膜800倍液，亩用药液50～75公斤。-般可于基本齐苗后的发病初期喷-次，开花前再喷一次。
④生长期药剂防治。用50%多菌灵可湿性粉剂600倍液，或70%托布津加50%多菌灵粉剂喷雾。在花生齐苗后和开花前后各喷一次，或者发病初期喷1—2次，用普力克800—1000倍液喷雾，还可兼治花生根腐病，立枯病、叶斑病等。
病毒的分离纯化
病毒的分离纯化 我设计了一套方案，请大家批评指正： 1. 新鲜病叶200g，-70℃冰冻30分钟，以2倍体积0.2mol/L磷酸缓冲液（PH7.5，含0.1%巯基乙醇,2%TritionX-100,0.01mol/LEDTA）。组织捣碎机捣碎，双层纱布过滤。 2. 滤液中加入等体积的氯仿，冰浴激烈搅拌15分钟，充分乳化后2000 g离心15分钟 3. 上清液中加入6%聚乙二醇-6000，3%Nacl,0.5%TritionX-100（W/V）。冰浴搅拌，4℃下过夜，次日取出10000g离心20分钟。 4. 沉淀悬浮于0.02mol/L磷酸缓冲液（PH7.2，2%TritionX-100, 0.1%巯基乙醇，1mol/L尿素），2小时后，2000g离心10分钟。 5. 上清液中加入6%聚乙二醇-6000，3%Nacl,0.5%TritionX-100（W/V）。冰浴搅拌4小时，10000g离心30分钟。 6. 沉淀悬浮于0.02mol/L磷酸缓冲液（PH 7.2，2%TritionX-100,0.01mol/LEDTA，1mol/L尿素），4℃下4小时后，10000g离心10分钟。 7. 上清用10%～40%蔗糖密度梯度离心(30000r/min,1.5h)，收集病毒带，用0.02mol/L磷酸缓冲液（PH7.2，2%TritionX-100, 0.1%巯基乙醇，1mol/L尿素）稀释，123000g离心2小时。 8.沉淀用0.02mol/L磷酸缓冲液（PH7.2，2%TritionX-100, 0.1%巯基乙醇，1mol/L尿素）悬浮，5000g离心15分钟，上清即为提纯病毒制品。 lf_12345
分析化学中常用的分离和富集方法教案
第8章 分析化学中常用的分离和富集方法 教学目的：学习各种常用分离和富集方法的原理、特点及应用，掌握复杂体系的 分离与分析；分离法的选择、无机和有机成分的分离与分析。 教学重点：掌握各种常用分离和富集方法的原理、特点及应用。 教学难点：萃取分离的基本原理、实验方法和有关计算。 8.1 概述 干扰组分指样品中原有杂质（溶解）或加入试剂引入的杂质，当杂质量少时可加掩蔽剂消除干扰，量大或无合适掩蔽剂时可采用分离的方法。 分离完全的含义：（1）干扰组分少到不干扰；（2）被测组分损失可忽略不计。 完全与否用回收率表示 100?分离后测得的量回收率＝％原始含量 对回收率的要求随组分含量的不同而不同： 含量（质量分数） 回收率 1％以上 >99.9％ 0.01－1％ >99% 0.01%以下 90－95％ 常用的分离方法：沉淀、挥发和蒸馏、液－液萃取、离子交换、色谱等。 8.1.1沉淀分离法 1.常量组分的分离（自己看书：5分钟） （1） 利用生成氢氧化物 a. NaOH 法 b. NH3法（NH 4＋存在） c. 有机碱法 六次（亚）甲基四胺 pH ＝5-6 d. ZnO 悬浮液法 pH ＝6 （2） 硫化物沉淀 （3） 有机沉淀剂 2.痕量组分的共沉淀分离和富集 （1） 无机共沉淀分离和富集 a. 利用表面吸附进行共沉淀 CuS 可将0.02ug 的Hg 2＋从1L 溶液中沉淀出 b. 利用生成混晶 （2） 有机共沉淀剂 灼烧时共沉淀剂易除去，吸附作用小，选择性高，相对分子质量大，体积也大，分离效果好。 a. 利用胶体的凝聚作用进行共沉淀：辛可宁，丹宁，动物胶b. 利用形成离子缔合物进行共沉淀：甲基紫，孔雀绿，品红，亚甲基蓝c. 利用“固体萃取剂”进行共沉淀。 8.1.2挥发和蒸馏分离法 挥发法：选择性高 As 的氢化物，Si 的氟化物，As 、Sb 、Sn 、Ge 的氯化物 蒸馏法：N －NH 4＋－NH 3↑（酸吸收） 利用沸点不同，进行有机物的分离和提纯。 8.2 液－液萃取分离法 8.2.1萃取分离法的基本原理 萃取：把某组分从一个液相（水相）转移到互不相溶的另一个液相（有机相）的过程。 反萃取：有机相→水相
绿化苗木各时间段的病虫害防治办法
绿化苗木各时间段的病虫害防治办法 一、四月-五月份病虫害防治 1、槐尺蠖槐尺蠖，主要危害龙爪槐等树种。4-5月重点防治一二代幼虫。防治方法：①当百片复叶有5-7条幼虫时，应在一周内进行防治。可用苏云金杆菌乳剂600倍，既具杀虫效果又不伤害天敌。②可喷洒50%杀螟松乳油、80%的敌敌畏乳油1000-1500倍液，50%辛硫磷乳油2000-4000倍液。 2、蚜虫蚜虫主要危害红叶李、紫薇、木槿、碧桃、月季等。随着温度升高，蚜虫日益增多和严重。 防治方法：①蚜虫初迁至树木为害时，随时剪掉树干、树枝上受害严重的萌生枝，或喷洒清水冲洗，防止蔓延。②初发期间向幼树根部施埋3%呋喃丹颗粒剂。 ③保护瓢虫、草蛉、蚜茧蜂、食蚜蝇等天敌。④盛发期间向植株喷洒EB-82灭蚜菌300倍液、1.1%烟-百-索乳油1000至1500倍液。 3、介壳虫介壳虫主要危害雪松、白玉兰、海桐、月季、黄杨、紫薇、火棘等。介壳虫大都在四月中旬至五月中、下旬开始孵化活动。 防治方法：①对少量的虫体于孵化前进行人工清刷；②敌百虫加灭多威肥皂粉喷液。 4、垂柳蛀杆虫垂柳蛀杆虫主要危害垂柳等树种。 防治方法：用毒签或敌百虫注入封杀。 5、立枯病立枯病主要危害新播种花卉、树苗以及一些易烂根的花卉，如果士壤湿度大时，极易发生立枯病。 防治方法：①播种前土壤用敌克松或多菌灵粉剂，均匀拌在土壤里；②在小苗幼嫩期控制浇水，勿使土壤过湿；③初发现病苗时，浇灌1%的硫酸亚铁或200-400倍50%的代森铵液，均为每平方米浇灌4-8斤药水。 6、桧柏-海棠锈病桧柏-海棠锈病于四、五月雨后易大量侵染。主要危害松柏类、海棠类植物。
防治方法：①避免将海棠、桧柏种在一起，减少发病。②用药物防治，对感病严重的植株，可用20%的粉锈宁1400倍液，或50%退菌特可湿性粉剂800倍液，或用65%代森锰锌1600倍液进行叶面喷洒，控制病害发生。③于3月下旬冬孢子堆成熟时，往桧柏上喷施1:2:100的波尔多液，或喷0.3%五氯硝酚钠稀释液，加石硫合剂配成波美1度的混合液。 7、紫薇白粉病紫薇白粉病大多于四、五月侵染，夏季易造成黄叶、枯叶、嫩梢弯曲等症状。 防治方法：①少施氮肥，多施些磷钾肥；②初侵染期喷一次15%的粉锈宁，兑水700-1000倍。 8、蛴螬蛴螬主要危害树木根部。 防治方法：①用50%辛硫磷乳油每667平方米200-250克，加水10倍，喷于25-30千克细土上拌匀成毒土，结合灌水施入。②用2%甲基异硫磷粉每667平方米2-3千克拌细土25-30千克成毒土,或用3%甲基异硫磷颗粒剂，3%呋喃丹颗粒剂，5%辛硫磷颗粒剂，5%地亚农颗粒剂，每667平方米2．5-3千克处理土壤，都能收到良好效果，并兼治金针虫和蝼蛄。 9、杂草清除 防治方法：41%草甘膦水剂1000-1500倍液等喷治。 二、六月-八月份病虫害防治 1、蛀干害虫：天牛、柳蝙蛾、木蠹蛾等。蛀干害虫主要发生在夏季，主要危害大苗木，如栾树、苦楝、国槐多种树等。 防治方法：①结合冬季修剪，消灭越冬体，成虫盛期，进行人工捕杀；②涂干80%敌敌畏乳油或50%杀螟松加水或柴油1：5涂受害处树皮；③成虫盛发期喷药2.5%溴氰菊酯乳油750ml兑水1500kg、50%杀螟松乳油1000ml兑水1500kg、80%敌敌畏乳油1000ml兑水1500kg于病枝主干基部表面，5-7天再治一次。 2、美国白蛾美国白蛾主要危害法桐，杨梅树等树种，6-7月是第一代幼虫危害盛期。 防治方法：①挖白蛾虫蛹、摘卵块、剪除网幕；②对各龄幼虫使用5%氯氰菊酯乳油1500倍液、80%敌敌畏乳油1000倍液、40%久效磷乳油1000-1500倍液、1.8%阿维菌素3000倍液对发生树木及其周围50米范围内所有植物、地面
病毒分离方法
植物内生菌分离方法 植物内生菌分离方法 匿名提问 2009-02-18 20:04:53 发布 自然科学学术 6个回答 回答 曲恋| 2009-02-18 20:45:40 有0人认为这个回答不错| 有0人认为这个回答没有帮助 植物内生放线菌是一类大有开发潜力的微生物资源。目前使用的分离条件和技术尚不完善，容易被外源菌和内生真菌、细菌污染，因此内生放线菌尤其是稀有内生放线菌的选择性分离技术至少是今后一段时间研究的重点。介绍了植物内生放线菌选择性分离方法并提出值得研究的问题。( 添加评论(0) nk0226 | 2009-07-25 11:13:09 有0人认为这个回答不错| 有0人认为这个回答没有帮助 植物病毒与病毒防治 Plant Virology& Control of Plant Virology 32学时2学分 一、课程性质、地位和任务 植物病毒与病毒防治是研究病原病毒与植物病毒病害相互关系的生物学科。本课程重点讲授植物病毒相关生物学特性与研究进展：病毒侵染寄主植物生理效应与抗病免疫；植物亚病毒病原等基础理论知识。同时，根据植物病毒基础研究需要，课程理论讲授与实验技能训练并重。通过本课程的学习，使学生进一步熟悉病毒病原与其它相关病原的区别要点，病害宏观及微观鉴定基本技术、方法、手段，并能在实践中应用。为独立开展植物病毒及病毒病害研究奠定基础。 二、课程教学的基本要求 要求学生重点掌握以下内容： （1）植物病毒的传播途径及传毒机制；
（2）病毒侵染植物内部症状，侵染增殖过程； （3）植物受病毒侵染的生理效应与抗病免疫； （4）植物亚病毒病原的基本特性； （5）植物病毒与病毒病害诊断鉴定的程序与方法。 三、课程理论教学大纲及学时分配 1. 绪论（2学时） 1.1 病毒的发现与病毒学的发展 1.2 研究病毒的意义与任务 1.3 植物病毒与其他病毒的关系 1.4病毒与其他微生物的区别 2. 病毒的分类与命名（3学时） 主要介绍病毒分类和命名的基本原则相关指标。重点：植物病毒的命名和分类系统。 2.1 病毒命名和分类的发展 2.2 病毒命名的系列 2.3 病毒分类的系列 2.4 植物病毒的命名和分类系统 3. 病毒侵染植物与增殖与增殖过程及遗传与变异（5学时） 主要讲授植物病毒侵染方式，在寄主体内的增殖过程，病毒遗传变异的本质。难点:病毒进入寄主细胞的方式及粒体装配。 3.1病毒粒体的吸附与侵入 3.2病毒粒体的脱壳与生物合成 3.3病毒粒体的装配与释放 3.4病毒的遗传与变异 3.5病毒的体外重新组与生物活性 4. 植物病毒的传播途径及传毒机制（5学时） 主要讲授病毒的介体传播和非介体传播的两大途径，以及不同介体传播机制与病害发生流行关系，难点：介体持久性传毒（口针传毒）与非持久性传毒（巡回传毒）机理。 4.1介体传毒 4.2非介体传毒 4.3种子与花粉传毒 4.4传毒机制 5. 病毒侵染植物生理效应与抗病免疫（5学时） 主要介绍病原侵染植物的内部症状（内含体）、病毒在植物体内的运转及生理活性物质改变与寄主抗病机理。难点：病毒侵染植物的生理变化与寄主的免疫反应。 5.1病毒侵染植物内部症状（内含体及其类型） 5.2病毒在植物体内的运输
常用的分离和富集方法
第十章常用的分离和富集方法 1.试说明定量分离在定量分析中的重要作用。 答：在实际的分析工作中，遇到的样品往往含有各种组分，当进行测定时常常彼此发生干扰。不仅影响分析结果的准确度，甚至无法进行测定，为了消除干扰，较简单的方法是控制分析条件或采用适当的掩蔽剂，但在有些情况下，这些方法并不能消除干扰，因此必须把被测元素与干扰组分分离以后才能进行测定。所以，定量分离是分析化学的主要内容之一。 2.何谓回收率？在回收工作中对回收率要求如何？ 答：回收率是用来表示分离效果的物理量，回收率越大，分离效果越好，一般要求R A>90～95%即可。 3.何谓分离率？在分析工作中对分离率的要求如何？ 答：分离率表示干扰组分B与待测组分A的分离程度，用表示S B/A，S B/A越小，则R B越小，则A与B之间的分离就越完全，干扰就消除的越彻底。通常，对常量待测组分和常量干扰组分，分离率应在0.1%以下；但对微量待测组分和常量干扰组分，则要求分离率小于10-4%。 4.有机沉淀剂和有机共沉淀剂有什么优点。 答：优点：具有较高的选择性，沉淀的溶解度小，沉淀作用比较完全，而且得到的沉淀较纯净。沉淀通过灼烧即可除去沉淀剂而留下待测定的元素。 5.何谓分配系数、分配比？二者在什么情况下相等？ 答：分配系数：是表示在萃取过程中，物质进入有机溶剂的相对大小。 分配比：是该物质在有机溶剂中存在的各种形式的浓度之和与在水中各存在形式的浓度之和的比值，表示该物质在两相中的分配情况。 当溶质在两相中仅存在一种形态时，二者相等。 6.为什么在进行螯合物萃取时控制溶液的酸度十分重要？ 答：在萃取过程中，溶液的酸度越小，则被萃取的物质分配比越大，越有利于萃取，但酸度过低则可能引起金属离子的水解，或其他干扰反应发生，应根据不同的金属离子控制适宜的酸度。 7.解释下列各概念：交联度，交换容量，比移值。 答：交联度：在合成离子交换树脂的过程中，将链状聚合物分子相互连接而形成网状结构的过程中，将链状聚合物分子连接而成网状结构的过程称为交联。 交换容量：表示每克干树脂所能交换的相当于一价离子的物质的量。是表征树脂交换能力大小的特征参数，通常为3～6 mmol/g。 比较值R f：表示某组分再滤纸上的迁移情况。 8.在离子交换分离法中，影响离子交换亲和力的主要因素有那些？ 答：离子亲和力的大小与离子所带电荷数及它的半径有关，在交换过程中，价态愈高，亲和力越大，对于同价离子其水化半径越大，（阳离子原子序数越大）亲和力越小。 9.柱色谱、纸色谱、薄层色谱和离子交换色谱这几种色谱分离法的固定相和流动相各是什么？试比较它们分离机理的异同。
甘薯爪哇黑腐病的病原鉴定
甘薯爪哇黑腐病的病原鉴定 摘要 甘薯爪哇黑腐病是甘薯贮藏期的一种真菌性病害，是全球热带和亚热带地区甘薯贮藏期的重要病害之一。2013年我们从广东湛江采集的甘薯中，发现病薯薯块由两端向中间变黑变硬，切开发病薯块，在伤口处会逐渐长出黑色或灰色的菌丝。发病薯块室内放置30 d后表面龟裂，裂口处有大量的黑色粉末溢出，显微镜下观察发现大量褐色有隔膜孢子。经对病原菌进行分离，采用柯赫氏法则回接验证，依据病原菌的形态特征和rDNAITS及βtubulin基因序列，确定该病害为甘薯爪哇黑腐病，病原菌为可可毛色二孢（Lasiodiplodia theobromae）。致病性测定发现该病具有较强致病性，对于贮藏期甘薯具有较大威胁。这是国内首次对该病进行的报道。 关键词 甘薯；爪哇黑腐病；可可毛色二孢；分子鉴定 我国是世界上最大的甘薯生产国，年均种植面积460万hm2左右，年均总产量占世界总产量的75%左右[1]。但由于甘薯的体积大、水分多、表皮薄易破损、擦伤，而使得其安全贮藏成为我国甘薯生产的重要环节。影响甘薯安全贮藏的因素主要是贮藏环境以及贮藏期病害，其中又以贮藏期病害对甘薯的威胁最大。 甘薯爪哇黑腐病（Java black rot）是由可可毛色二孢[Lasiodiplodia theobromae （Pat.）Griffon & Maubl.]引起的一种贮藏期真菌病害[2]，于1896年在美国首次发现并报道，是美国南部地区甘薯贮藏期最具破坏性的病害之一，也是全球热带和亚热带地区甘薯贮藏期的重要病害之一[3]。该病原菌寄主范围广泛，可以侵染58科的138种植物并导致很多作物
发生贮藏期腐烂病[3]。我国目前为止鲜有对甘薯爪哇黑腐病的研究报道。由于其致病菌可可毛色二孢具有寄主范围广，分布广的特点，目前已经在我国的多种作物上有报道，例如花生茎腐病、沙田柚果腐病、香蕉黑腐病、芒果蒂腐病等[47]。 2013年6月从广东湛江采集的甘薯薯块中发现大量病薯，其症状与甘薯爪哇黑腐病症状极为相似，通过对疑似病原菌进行分离纯化、形态观察、致病性测定以及基因序列分析，最终确定其病原种类，进而为该病的防控及其深入研究提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 材料 供试品种：甘薯样本于2013年6月采自广东湛江；用于回接鉴定的品种为‘烟薯25’；用于致病性测定的品种为：‘冀薯68’、‘烟薯25’、‘商薯19’、‘冀薯98’、‘冀紫薯1号’、‘冀薯4号’、‘徐薯25’。 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（potato dextrose agar，PDA）：马铃薯200 g/L、葡萄糖20 g/L 和琼脂20 g/L。LB培养液：胰蛋白胨10 g/L、酵母提取物5 g/L和NaCl 10 g/L。LB固体培养基含琼脂20 g/L。所有培养基经121℃，湿热灭菌15～20 min后使用。 试剂：Fungal gDNA Kit购自美国Biomiga公司；2×Es T aq MasterMix、DM2000 plus marker、琼脂糖凝胶回收试剂盒、质粒小提试剂盒购自北京康为世纪生物科技有限公司；pMD18T载体、T4连接酶购自宝生物工程（大连）有限公司；感受态大肠杆菌DH5α为本实验室自制；EB、氨苄青霉素购自生工生物工程（上海）股份有限公司；其他试剂均为国产分析纯。 仪器：梯度PCR仪，美国ABI公司；DYY6C型电泳仪，北京六一仪器厂；凝胶成像仪，伯乐公司；光照培养箱，宁波江南仪器厂；振荡培养箱，上海智诚分析仪器制造有限公司；尼康Eclipse 80i显微镜，尼康映像仪器销售（中国）有限公司。
园林绿化常见病虫害防治
园林绿化常见病虫害防治 食叶类害虫 危害：刺蛾的小幼虫常群集啃食树叶下表皮及叶肉，仅留上表皮，形成圆形透明斑；3龄后分散危害，发生严重时把叶片吃光，仅留叶脉与叶柄，严重影响植物生长，甚至造成植物枯死。其幼虫体具毒毛，刺痛人的皮肤，会引起红肿剧痛。因此居民区、公园、行道树等绿化区域尤应防治。
防治方法： 1.药剂防治：刺蛾幼虫对药剂抵抗力弱，可喷90％晶体敌百虫1000倍液、80％敌敌畏乳油、50％辛硫磷乳油、25％亚胺硫磷乳油1500至2000倍液或用拟除虫菊酯类农药3000至5000倍液进行喷杀。 2.生物防治：（1）幼虫发生期施药喷洒青虫菌，每克含100亿孢子1000倍液，可使幼虫感病率在80％以上。如能混入0.3％茶枯或0.2％中性洗衣粉可提高防效。 （2）用每克含孢子100亿的白僵菌粉0.5至1千克，在雨湿条件下防治l至2龄幼虫。 3.黑光灯防治：大多数刺蛾类成虫有趋光性，在成虫羽化期，设置黑光灯诱杀，效果明显。 危害：幼虫取食树叶、嫩枝皮及幼果。大发生时，几天能将全树叶片食尽，残存秃枝光干，严重影响树木生长，开花结实，使枝条枯萎或整株枯死。 防治方法：1、初龄幼虫集中为害，剪除虫枝，消灭幼虫；越冬袋囊，高挂树枝，人工摘除消灭。2、幼虫期喷2.5%敌杀死乳油10000倍液、90%晶体敌百虫、50%辛硫磷乳油、50%乙酰甲胺磷乳油1000-1500倍液，尤为敌百虫效果好，或
喷每克含孢子100亿的青虫菌1000倍液。
危害：关中地区1年3代，5-6月间出现成虫，成虫昼伏夜出，有趋光性，产卵于叶背。初孵幼虫群集叶背取食叶肉，能吐丝下垂，3龄后分散为害，幼虫有假死性。10月初幼虫入土化蛹越冬。 防治方法：选用高效低毒药剂，进行交替喷雾防治，避免产生抗药性，根据夜蛾类害虫活动特点，在下午4时后喷药防治效果最佳。 （1）20%氯虫苯甲酰胺悬浮剂4000倍；
第25章 病毒感染的检查方法
第25章病毒感染的检查方法 与防治原则 第一节病毒的诊断 随着对病毒感染从生物学及分子生物学水平的研究进展，病毒的诊断技术已由传统方法扩展至新的快速诊断技术。病毒感染的快速诊断有利于对病毒感染者的治疗；例如对有些病毒（如疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒）感染已有较特异的抗病毒药物治疗。早期诊断及早期治疗对控制病毒感染十分重要。此外，从群体感染角度分析，确诊病毒感染的病原在监测病毒的流行病学（如新型流感病毒、肺出血型汉坦病毒的发现等）方面也有重要的现实意义。 标本的采集与送检用于分离病毒或检测病毒及其核酸的标本应采集病人急性期标本。根据不同病毒感染采取不同部位的标本（如鼻咽分泌物、脑脊液、粪便或血液）。由于病毒在室温中很易被灭活，应在采集和运送标本中注意冷藏。如欲检测抗体，早期单份血清可用于检测IgM抗体，而欲检测早期与恢复期的抗体效价的变化，则需采集早期与恢复期双份血清。血清抗体检测标本应保存于－20℃。 病毒的分离、培养与鉴定目前最常用的方法是细胞培养。在注明欲检测的病毒后，病毒分离培养的实验室将选择适当的原代培养细胞（敏感性高）及传代细胞系（便于在实验室保存）作病毒分离培养。接种标本后，细胞可出现病变或也可并不出现病变而需用血细胞吸附等方法检测是否有病毒增殖，并进一步还需用特殊的抗体鉴定病毒的种类，例如用特异荧光抗体染色或抗体中和试验等。当无病毒增殖时，可能标本中病毒含量较低，未被检出，则需要盲目传代3次后方可明确标本中是否存在病毒。这一分离与鉴定病毒的全过程有时可长达2～3个月，而且仅在有设备、实验条件及合格工作人员的实验室方可进行。虽然这种方法所需时间长、步骤多，但在确定病原上是“黄金标准”，即其准确性高而无误。如我国台湾省确定由肠道病毒71型引起多数患儿发生脑膜炎并致死的研究报道，就是由分离培养及鉴定病毒所确诊。如欲提高病毒感染细胞培养的敏感性，可将病毒接种于内有盖玻片的细胞培养瓶，经低温离心后，以增加病毒与细胞接触的机率。再将盖玻片进行培养，并用单克隆抗体染色，藉以通过检测病毒的早期抗原进行诊断。 在流感病毒的分离培养中，最敏感而特异的方法是鸡胚接种，并用血凝和血
第七节根茎基部病害
第七节根茎基部病害 一、苗期病害苗期常发生的侵染性病害有猝倒病、立枯病、灰霉病、角斑病、根腐病等。苗期病害发生范围很广，全国各地都有不同程度的发生。水稻、棉花等大田作物，葫芦科、茄科和十字花科等蔬菜，草本和木本花卉的扦插苗，苹果、梨、柑橘等果树幼苗，松杉等针叶树幼苗，还有檫木、香椿、臭椿、榆等树木，都可遭受苗期病害的危害。引起死苗、烂苗，甚至苗床毁灭，造成严重的损失，其中蔬菜和花卉育苗期间受害严重。 1.立枯病立枯病俗称死苗、霉根。发生时间比猝倒病稍晚，但延续时间长，主要危害幼苗或稍大的幼苗（不同于猝倒病）。播种后至出苗前被病菌感染，内部变褐腐烂，即烂种。受害轻的种子虽能萌发，但幼芽被害呈黄褐色，不久腐烂，即烂芽。棉苗出土后，病茎基部产生椭圆形褐色病斑，有明显的缢缩，病斑扩大后绕茎一周，最后病部收缩干枯。病株白天萎蔫，晚间恢复，直至死亡病株仍直立不倒伏。湿度大时，病斑处可长出淡褐色蛛丝状霉。 2.猝倒病 猝倒病俗称“绵腐病” 、“卡脖子” 、“小脚瘟”。幼苗出土前即可发病，可造成烂种和烂芽。幼苗出土后子叶展开到 2 片真叶期最易发生猝倒病。发病后先在茎基部出现淡褐色水渍状病斑，随着病情发展，病斑绕茎扩展而变褐色，幼茎迅速倒伏地面，倒折后苗色依然青绿。在高湿条件下，病部常产生白色絮状物，即病菌的菌丝体。与立枯病不同的是，猝倒病棉苗茎基部没有褐色凹陷病斑。 3.灰霉病：各地主要发生在早春苗床上，危害程度与天气及苗床管理水平有关。轻者局部死苗，重者可造成成棚毁苗。病菌多从幼苗子叶、下部真叶及结露的叶片边缘开始侵染。子叶感病，开始褪绿发黄，逐渐变褐坏死，以至腐烂，表面生有灰色霉层。真叶染病多始自叶尖，病斑呈“ V ”字形，浅褐色，有轮纹，以后干枯。 4.根腐病主要危害幼苗根部和根茎部，病部水渍状，不溢缩，软化腐烂，后期糟朽状，病苗萎蔫枯黄而死。湿度大时，病部长出淡粉色、系数的霉层。 病害种类： 1.立枯病茄果类、瓜类、豆类、莴苣、芹菜、洋葱、茼蒿、甘蓝、油菜等立枯病 [ Rhizoctonia solani ] 芝麻立枯病[Rhizoctonia solani ] 棉花、水稻立枯病[Rhizoctonia solani k ijhn] 2.猝倒病 番茄、甘蓝、洋葱、芹菜、花卉、苗木等猝倒病[Pythium aphanidermatum （Eds.）Fitzp] 3.根腐病 番茄、甘蓝、洋葱、芹菜、花卉、苗木等根腐病[Fusarium sp.] 发病规律 猝倒病、立枯病、灰霉病的病原菌能够在土壤中或病残体上越冬，腐生性较强，在土壤中的病
根茎类药用植物根腐病研究进展
根茎类药用植物根腐病研究进展 廖长宏a,b，周平b，赵明a,c，吕婉婉a,b，陈军文a,b* (云南农业大学, a. 云南省优势中药材规范化种植工程研究中心；b. 农学与生物技术学院;c.龙润普洱茶学院, 昆明650201) 摘要：根腐病为根茎类药用植物比较易发的一种病害，它具有易传染，致死率高，防治难度高等特点，不仅会造成不同中药材减产，也会影响到人们的健康。本文首先回顾了我国主要根茎类中药材的种类，药效成分，检索了根腐病的发病时间，证实了根腐病广泛存在于根茎类中药材中；另一方面从引起根茎类药用植物根腐病的原因包括非生物因素，生物因素方面进行分析，讨论了根腐病可能的致病机理；综述了生物，化学以及人工防治根茎类药用植物根腐病防治方法的进展，同时对根茎类药用植物根腐病防治进行了展望；相信通过本文的一些信息能为有效地对根茎类药用植物根腐病进行防治提供线索与帮助。 关键词：根茎类药用植物；根腐病；根腐病防治 1
Research progress of root rot in tubers medicinal plants Liao Chang-hong a,b,Zhou Ping a,b,Chen Jun-wen a,b*, Zhao Ming a,c,Lv Wan-wan a,b (a. Yunnan ProvincialResearch Center on Good Agricultural Practicefor Dominant Chinese Medicinal Materials; b. College of Agriculture and Biotechnology; c.College of Longrun Pu-erh Tea, Yunnan Agriculture University, Kunming 650201, China,) Abstract: As a kind of serious disease in root, root rot not only lead to cutting in different kinds of Chinese herbal medicine, but also develop a closely relationship between our health. In this paper, Analyzing the Reason of root rot appearance in different plants rhizome, and its including three aspects: pathogenic fungi, ecological factors and nematode. The progress of prevention and treatment of root rot of medicinal plants was summarized, and the prevention of root rot disease in medicinal plants was also discussed ,at last a expectation for prevention of root rot disease had been put forward, believing there will be a effective approach to prevention root rot disease in medicinal plants. Key words: tubers herbal medicine plant; root rot ; prevention of root rot . 2
苗木的维护管理和病虫害防治措施.docx
（一）苗木的维护管理 1、浇水 (1)在园林绿化实践中，浇水大有讲究，树木种植后死亡的主要原因是缺水烧根造成的。当排水不流畅造成根系呼吸受阻烂根现象也时有发生。 (2)浇水的时间，次数和浇水量，应根据植物的种类，天气及土壤状况因地制宜，用老农的话说就是看天、看地、看树木进行浇水。“看天”就是看天气，短至一天的变化，长至季节的变化，都要密切的加以注意。阴天，湿度大温度也不高，树木蒸腾及土壤蒸发比较少，浇水量就要减少，甚至不浇；晴天又加少炎热，浇水次数和浇水量就要增加，干旱季节要勤浇，雨季注意排水。冬天浇水注意防冻，适宜在中午前后浇。夏天在早晨或在傍晚浇，注意防暑。“看地”是指根据土壤种类、质地、结构及施肥情况。如盐碱地最好要用“河水大沱”灌溉。比较肥沃的土壤只需要适量的浇水。当施肥较多时，浇水次数也要增加。以免土壤溶液过浓造成“反渗透”现象而导致植物死亡。“看树木”是重要的环节耐早树木浇水次数和水量少些。而不耐旱树木则因多些。乔木浇水，种植后半个月内基本每天浇水和喷洒叶面。半个月后，可延长至4-5天一次（如天气炎热，应经常喷洒叶面）对灌木，半个月后用2-3天浇水一次。 2、施肥 (1)由于园林苗木新种植不久，不宜立即施肥，除特殊情况下可对乔灌木施浓度较稀的缓效肥，其方法是根外追肥。第二年起在旱春和秋冬施以颗粒复合肥，施肥时要控制好浓度。 (2)乔木的种植洞穴内应施菜啧饼豆饼为基肥，基肥上方盖15厘米种植土，以防基肥发酵烧根，灌木色带采用浅施铺施法或追施法确保苗木健壮成长。 3、除草 (1)由于苗木种植不久，土壤中的杂草较多，如不及时拨除，不仅影响绿化效果，同时对苗木的生长危害极大，甚至会引起各类疾病。因此，除草要本着“除早、除小、除了”原则。初春杂草生长时就要除，但杂草种类繁多，不是一次可除尽的，春夏要进行4-6次，切勿让杂草结籽，否则第二年又会大量滋生。 (2)锄草是一项繁重工作，一般用手拔除或用小铲、锄头除草，结合中耕也可除去杂草，采用化学除草剂除草是一个方便，经济，除草率高的先进手段，应适当应用推广。除草剂有灭生性和内吸性两类。灭生性除草剂能杀死所有杂草，内吸选择性除草剂，往往只杀死双子叶植物，如灰菜、猪芽菜等等。而对单子叶植物如禾木科杂草无效。使用时应注意针对性选择用药。除草剂应在晴天喷洒，注意保护环境。
病毒的分离方法.doc
病毒的分离方法 一般情况下分离病毒可以用传代细胞、原代细胞或者直接用动物接种或者鸡胚接种，只有在找不到适合病毒生长的原代细胞或者传代细胞的情况下才运用动物接种或者鸡胚接种的方法分离病毒。 大致过程应该是这样的： 第一获取病毒分离样品，这个要求比较高，采集后如果不能立即操作则必须低温保存，并尽快送实验室操作。另外也可以冷冻保存，一般情况下病毒是不容易冻死的。当然某些特殊病毒除外，这需要查阅相关资料。 第二病毒分离操作，将获取病样研磨，并冻融至少一次，当然研磨过程中必须低温。同时研磨应充分，在研磨时可以加入生理盐水或PBS或者直接加细胞培养液，研磨完全后冻融一到三次，冻融的目的是为了让细胞完全破裂将细胞内的病毒释放到溶液中。然后低速离心，取上清用0.22微米的滤膜过滤，去过滤后的液体接种细胞。此时须注意，并不是所有病毒接种是都需要让细胞完全长满细胞瓶，一般是不能产生细胞病的病毒最好在细胞长到40%左右接种，而能产生细胞病变的则需要完全长满细胞瓶以后再接种病毒。接种过程中为避免污染可以加入双抗，或者其他抗生素。 第三接种后观察，某些能产生细胞病变的病毒很容易观察，直接在显微镜下就能看是否分离成功；如果病毒不产生细胞病变，则需要用其他的方法来检测，比如可用荧光抗体染色、PCR或者其他方法。不过大部分情况下第一代都不容易看到或者效果不好，这时你可以再传几代试试。如果再传四~五代以后都没有的话，那恭喜你，你失败了，或者你的方法有问题，或者根本就没有你要分离的病毒，或者在分离过程中你的病毒就已经死了。 用细胞分离病毒大概就是这个过程，当然某些病毒可能还没有相应的传代或者原代细胞，如果要分离就只能用易感动物了，操作都是相似的，无非都是采样、样品处理、接种、接种后检测观察、收集病毒而已。上面说到的方法都是从动物组织中分离，当然如果不是组织，比如你要从粪便或者尿液或取的拭子上分离，则可直接将其用生理盐水、PBS或细胞培养液稀释（要尽量摇匀如果是拭子的话应多挤压摇匀）然后离心取上清过滤接种细胞就可以了。
常用的分离和富集方法
第十一章 常用的分离和富集方法 【教学目标】 1.学习各种常用分离和富集方法的原理、特点及应用 2.掌握复杂体系的分离与分析 3.了解分离法的选择、无机和有机成分的分离与分析 【重点难点】 掌握各种常用分离和富集方法的原理、特点及应用 【课时安排】计划4课时 【教学内容】共五节 第一节 概述 一、回收率 100 分离后测得的量回收率＝％原始含量 对回收率的要求（随组分含量的不同而不同）： 含量（质量分数） 回收率 1％以上 >99.9％ 0.01－1％ >99% 0.01%以下 90－95％ 常用的分离方法：沉淀、挥发和蒸馏、液－液萃取、离子交换、色谱等。 8.1.1沉淀分离法 1.常量组分的分离（自己看书：5分钟） （1） 利用生成氢氧化物 a. NaOH 法 b. NH3法（NH 4＋存在） c. 有机碱法 六次（亚）甲基四胺 pH ＝5-6 d. ZnO 悬浮液法 pH ＝6 （2） 硫化物沉淀 （3） 有机沉淀剂 2.痕量组分的共沉淀分离和富集 （1） 无机共沉淀分离和富集 a. 利用表面吸附进行共沉淀 CuS 可将0.02ug 的Hg 2＋从1L 溶液中沉淀出 b. 利用生成混晶 （2） 有机共沉淀剂 灼烧时共沉淀剂易除去，吸附作用小，选择性高，相对分子质量大，体积也大，分离效果好。 a. 利用胶体的凝聚作用进行共沉淀：辛可宁，丹宁，动物胶b. 利用形成离子缔合物进行共沉淀：甲基紫，孔雀绿，品红，亚甲基蓝c. 利用“固体萃取剂”进行共沉淀。 8.1.2挥发和蒸馏分离法 挥发法：选择性高 As 的氢化物，Si 的氟化物，As 、Sb 、Sn 、Ge 的氯化物
黑花生简介
黑花生简介 一、黑花生介绍 黑花生,也被称作富硒黑花生,黑粒花生，晴仁谷花生。黑花生是内含钙、钾、铜、锌、铁、硒、锰和8种维生素及19种人体所需的氨基酸等营养成分，还富含硒、铁、锌等微量元素和黑色素的新品种。黑花生与红花生相比，粗蛋白质含量高5%，精氨酸含量高23.9%，钾含量高l9%，锌含量高48%，硒含量高101%。黑花生富含18种氨基酸，氨基酸总量为27.57%，仅次于黑大豆，必需氨基酸比例占22.90%。 二、黑花生的价值 1、经济价值 山东莱阳一品蔬菜开发中心：黑花生报价9元/斤， 淄博裕然农业有限公司：黑花生报价9元/斤。 业内人士分析，后期嫩花生零售价将围绕每斤7元上下波动，但波动幅度不会很大。 2、药用价值 据医疗部门做理疗实验，黑粒花生具有延年益寿，益智养发，抗衰老，抗癌细胞扩散增生等疗效。还具有降压、减缓支气管炎的神奇药用价值。医学专家推荐，每天生食9粒（分3次吃）黑花生果仁，能使白发变黑，血压正常及预防因缺少人体需微量元素而造成的多种病症。有着极大的种植价值和作为保健食品开发的潜在市场，更是新春佳节馈赠亲朋好友的极佳的农特产品。 三、黑花生的栽培管理技术 一、种植黑花生前的四个准备：
1、种植地块选择：选择空气、土壤、水源没有受到任何污染的地块。 2、土壤选择：不可选用太肥沃的土地，以油沙地为最佳。要求地势平坦，排灌方便。 3、栽培时间：3月上旬至5月上旬均可种植。 4、种子处理：剥壳前先晒种3天，剥壳后把有病虫害、已发芽、损伤不能用的果仁剔出，其余分为大、小种子，分级播种。不宜将大小不同的种子混播。每亩用种子9公斤至10公斤，用“生物灵”营养液每支对水15公斤浸种3小时，以增加种子养分；同时用乐果50克进行种子消毒。在播种前每亩用400克多菌灵进行土壤消毒。 二、地块选择: 花生是地上开花，地下结果的作物，对土壤的要求是以耕作层疏松，活土层深厚砂壤土最为适宜。但以黄棕壤土适宜种黑花生。据正阳土壤普查测定每1／15公顷产荚果500kg以上的黄棕壤地块，其土体结构是全土层厚度的45cm以上，熟化耕作层在30cm左右，结荚层是松软的壤土层。土壤质地是l0cm以下的黏土层；10cm-30cm为粉砂黏土层。这样土体结构，其毛管孔隙上小下大，非毛管孔隙上大下小，上层土壤的透性能良好，下层土壤的蓄水保肥能力强，热容量高，使土壤中的水、肥、气、热得到协调统一，有利于花生生长和荚果形成。 三、整地施肥 : 在播种前选择好活土层深厚，土壤肥沃，排灌方便的黄棕壤地块。在秋收后进行深耕，开春后进行浅耕多耙，即耙深耙透，耙实耙平，地平土碎无坷垃、无暗岱，无杂物。每亩施优质有机肥2500kg-3000kg，二铵20kg-25kg，尿素10kg，氯化钾12.5kg-15kg。 四、起垄作畦:
园林苗木病虫害防治及治疗
园林苗木病虫害防治及治疗 乔木 1．蒲葵 习性：蒲葵适宜在温暖、湿润、阳光充足的环境中栽培。在0℃左右的低温和半阴的环境中也能生长。蒲葵对大风、干旱很水湿的土壤，均有较强的抗性。在低盐碱的土地上也能生长，但更适宜在湿润、肥沃的粘性土壤上栽植。 栽培要点：（1）光照、温度。要防止蒲葵长时间的在弱光下，避免给其遮光。在幼苗阶段，要避免强光。一般居室温度都能保证蒲葵正常过冬。（2）水分。蒲葵喜潮湿土壤和空气环境，种植前期注意给土壤及时浇水和叶面喷水。特别是叶面、枝干每日要喷雾3—4次，以后逐渐减少。（3）土壤、肥料。栽培土壤可用河沙、泥炭土以1∶1的比例混合配制。生长季节可每月一次浇灌含氮多的肥水的方法来增加蒲葵叶面颜色效果 病害防治：常有斑叶病、黑粉病和介壳虫为害。（1）病害用50%代森锌可湿性粉剂1000倍液喷洒。（2）介壳虫用40%氧代乐果乳油1000倍液喷杀。 2．大叶紫薇 习性：阳性植物。需强光。耐热、不耐寒、耐旱、耐碱、耐风、耐半荫、耐剪、抗污染、大树较难移植。喜高温湿润气候，栽培在全日照或半日照之地均能适应，对土壤选择不严，抗风，耐寒，耐干旱和耐瘠薄。 病虫害：1.白粉病，植株发病时可喷洒25%粉锈宁可湿性粉剂3000倍液，或70%甲基托布津可湿性粉1000倍液，或80%代森锌可湿性粉剂500倍液，几种药剂交替使用效果更佳。2.紫薇长斑蚜，蚜虫量大时，咳40%氧化乐果，40%乙酰甲胺磷1000-1500倍液或喷鱼藤精1000-2000倍液，但要注意避免发生药害。 3．落羽杉 习性：阳性，喜温暖，耐水湿能生长于浅沼泽中，亦能生长于排水良好的陆地上。在湿地上生长的，树干基部可形成板状根，自水平根系上能向地面上伸出筒状的呼吸根，特别称为“膝根”。土壤以湿润而富含腐殖质者最佳。在原产地能形成大片森林。抗风性强。 病虫害： 1、猝倒病（立枯病）。 2、茎腐病，为害1－4年生苗木和幼树。 3、大袋蛾：在干旱季节（7－8月）大发生时，可人工摘除幼虫（连袋），集而烧毁；或用杀螟松1000倍液喷杀幼虫。 4、赤枯病：梅雨季节结束后立即对树冠喷1％的波尔多液4－5次，每隔10－15天一次，可控制病害发生。
病毒的分离培养标准操作规程
病毒的分离培养标准操作规程 1．目的：规范病毒分离及鉴定培养操作流程，保证试验结果的重复性和稳定性。 2．术语：EID50/0.1ml，ELD50/0.1ml，TCID50/0.1ml，CPE 3．操作程序与方法： 3.1 采样：对于病死或剖杀动物，采集病毒主要聚集组织部位，一般为淋巴结、脾脏、肺脏、血液等；对于活体动物，可用无菌棉拭子采集含病毒量最多部位（口腔、鼻腔、生殖道、肛门等）的分泌液。采集样品如不能立即处理，应冻存与-20℃备用。长 途运输应用冰盒或4℃低温保存。 3.2 样品处理：组织块可用剪刀剪碎并研磨，加入10倍体积含300-500UI/ml青、 链霉素的生理盐水（PBS），反复冻融2-3次。棉拭子可直接混于3-5倍体积含300-500UI/ml 青、链霉素的生理盐水（PBS），反复冻融2-3次。8000rpm离心15min，取上清液用0.22μm滤膜过滤，透过液即为病毒原液，收集保存，短期保存4℃，长期保存用液氮。 3.3接种培养：将病毒原液接种与特定细胞单层中，连续盲传4-6代，观察细胞是 否产生特异性CPE，并计算及TCID50/0.1ml。禽源类病毒可接适当日龄鸡胚或鸡胚成纤维细胞进行扩增和鉴定，并计算及EID50/0.1ml和ELD50/0.1ml。 3.4 病毒纯化：采用“有限梯度稀释法”结合“噬斑纯化法”对病毒进行纯化； 3.5 动物回归实验：分离培养并纯化好的病毒回归接种动物，观察动物病变是否为该病毒引起及病变特征是否典型。 3.6分子生物学鉴定：基因组提取并设计特异性引物，对分离病毒保守区基因片段 进行特异性扩增，并测序，从分子水平对其进行鉴定。 3.7血清学鉴定：用标准阳性血清与分离病毒作用一段时间后再次接种特异性细胞 或鸡胚验证病毒特异性。或者用荧光标记抗体与病毒作用后荧光显微镜下观察其特异性。 4.注意事项 4.1采样过程应做好自身防护，烈性病不得随意分离。 4.2 实验动物应及时焚烧或深埋等处理，避免病毒扩散到环境中。 4.3 纯化好毒种应及时做好扩毒并建立毒种库。 1
第七节 根茎基部病害
第七节根茎基部病害 一、苗期病害 苗期常发生的侵染性病害有猝倒病、立枯病、灰霉病、角斑病、根腐病等。苗期病害发生范围很广，全国各地都有不同程度的发生。水稻、棉花等大田作物，葫芦科、茄科和十字花科等蔬菜，草本和木本花卉的扦插苗，苹果、梨、柑橘等果树幼苗，松杉等针叶树幼苗，还有檫木、香椿、臭椿、榆等树木，都可遭受苗期病害的危害。引起死苗、烂苗，甚至苗床毁灭，造成严重的损失，其中蔬菜和花卉育苗期间受害严重。 1.立枯病 立枯病俗称死苗、霉根。发生时间比猝倒病稍晚，但延续时间长，主要危害幼苗或稍大的幼苗(不同于猝倒病)。播种后至出苗前被病菌感染，内部变褐腐烂，即烂种。受害轻的种子虽能萌发，但幼芽被害呈黄褐色，不久腐烂，即烂芽。棉苗出土后，病茎基部产生椭圆形褐色病斑，有明显的缢缩，病斑扩大后绕茎一周，最后病部收缩干枯。病株白天萎蔫，晚间恢复，直至死亡病株仍直立不倒伏。湿度大时，病斑处可长出淡褐色蛛丝状霉。 2. 猝倒病 猝倒病俗称“绵腐病”、“卡脖子”、“小脚瘟”。幼苗出土前即可发病，可造成烂种和烂芽。幼苗出土后子叶展开到2片真叶期最易发生猝倒病。发病后先在茎基部出现淡褐色水渍状病斑，随着病情发展，病斑绕茎扩展而变褐色，幼茎迅速倒伏地面，倒折后苗色依然青绿。在高湿条件下，病部常产生白色絮状物，即病菌的菌丝体。与立枯病不同的是，猝倒病棉苗茎基部没有褐色凹陷病斑。 3.灰霉病： 各地主要发生在早春苗床上，危害程度与天气及苗床管理水平有关。轻者局部死苗，重者可造成成棚毁苗。病菌多从幼苗子叶、下部真叶及结露的叶片边缘开始侵染。子叶感病，开始褪绿发黄，逐渐变褐坏死，以至腐烂，表面生有灰色霉层。真叶染病多始自叶尖，病斑呈“V”字形，浅褐色，有轮纹，以后干枯。 4.根腐病 主要危害幼苗根部和根茎部，病部水渍状，不溢缩，软化腐烂，后期糟朽状，病苗萎蔫枯黄而死。湿度大时，病部长出淡粉色、系数的霉层。 病害种类： 1.立枯病 茄果类、瓜类、豆类、莴苣、芹菜、洋葱、茼蒿、甘蓝、油菜等立枯病[Rhizoctonia solani] 芝麻立枯病[Rhizoctonia solani] 棉花、水稻立枯病[Rhizoctonia solani kühn]
园林植物病虫害防治方法
病虫害防治方案 第一部分常见的病虫害防治 一、常见的病害及防治 1、白粉病：可用50%退茵特800-1000倍、或0.1-0.3波美度石硫合剂，或5 0%胶体硫50-100倍液，每周一次连续二、三次均有效。 2、黑斑病：药剂选用75%百菌清可湿性粉剂500-800倍或托布津可湿性粉剂800-1000倍液，50%代森胺600-800倍液，每隔7-10天喷一次，连续多次效果较好。 3、裼斑病：发病后可喷70%托布津可湿性粉剂600-800倍液，或50%多菌灵可湿性粉剂400-600倍液，每周一次连续二、三次。 4、锈病：用福美锌，石硫合剂定期交替喷射，可以减轻病情。 5、炭疽病：发病期定期75%百菌可湿性粉剂800倍液，或灵菌丹500-800倍液，有较好的效果。 6、立枯病：用800倍液的50%托布津功多菌灵喷2-3次（10天一次） 7、青枯病：发病期可喷淋0.2%高锰酸钾液或100-200U农用链霉素，土霉素，并适当增施钾肥。 二、常见的虫害及防治
1、蚜虫类：消灭越冬虫源，秋末喷射40%乐果，300倍液以作保护。当蚜虫发生时，每隔7-10天喷药一次连续2-3次，可用40%氧化乐果或40%乐果20 00倍液或8%滴滴畏1000倍液喷杀。 2、蚧壳虫类：喷射40%氧化乐果，及25%亚胺硫磷1000-2000倍液。如果是盆栽名贵品种，也可以在其根埋入吠喃丹。庭院中的2-3年生小树，每株可用10%吠喃丹40克左右。 3、螨类：用20%三氯杀螨砜可湿性粉剂800倍液，或用50%久效硫乳油200 0倍液，50%滴滴畏乳油1000倍液喷杀。 4、苏马：用40%乐果乳剂300-500倍液，80%滴滴畏乳剂3000倍液，50%马列拉硫磷乳剂4000倍液，50%休养虫螟松乳剂2000倍防治效果良好。 5、5、蓟马：用40%乐果乳剂300-500倍液，80%滴滴畏乳剂300倍液，50%马拉硫磷乳剂400倍液，50%杀虫螟松乳剂2000倍防治效果良好。 三．执行操作要领 1、及时浇水，根据不同品种生长习性，地段（室内或雨水淋不到的墙边2-3天要浇一次水）。 2、随时注意观察检察有没有害虫发生，并及时做好枯枝落叶病枝叶的清理和药物防治工作，并将防治情况向绿化部汇报。 3、日常管理要正常，枯枝弱枝，病枝要及时剪除，定期松土，见杂草就除，保持绿化区内无杂草。