启动子

这是一篇有关高考生物：终止子和终止密码，启动子和起始密码的文章信息。

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⑴终止子和终止密码：终止子位于DNA 上，属于基因非编码区下游的核苷酸序列。它特殊的碱基排列顺序能够阻碍RNA 聚合酶的移动，并使其从DNA模板链上脱离下来，从而使转录工作停止。终止密码位于mRNA 上，共有三种：UAA、UAG、UGA，这三种密码子不能决定任何一种氨基酸，只做一条肽链合成的终止信号。

⑵启动子和起始密码：启动子位于DNA 上，属于基因非编码区上游的核苷酸序列。启动子上有与RNA 聚合酶结合点。只有在启动子存在时，RNA 聚合酶才能准确地识别转录起点，并沿着DNA 编码区正常地进行转录。起始密码位于mRNA 上，只有一种：AUG，既决定一种氨基酸，同时做肽链合成的启动信号。

●二者都是对于基因而言的，编码的部分为外显子，不编码的为内含子，内含子没有遗传效应。

●外显子就是在成熟mRNA中保留下的部分，也就是说成熟mRNA对应于基因中的部分。

●内含子是指在mRNA加工过程中被剪切掉的部分，在成熟mRNA中不存在的部分。

●所谓mRNA就是信使mRNA，是将来可以翻译成蛋白质的一种核糖核酸。生物体的各种表型效应都是由于基因的最终产物蛋白质引起的。

●虽然以前认为内含子是没有什么功能的，但现在的研究认为内含子可能有一定的功能，比如在mRNA加工过程中起帮助作用、可能对机体有一定的调控作用，并且内含子只是对一个特定的基因而言是它的内含子，此内含子对于其它的基因而言，也有可能是外显子或者外显子的一部分。

●总之，一切概念和机制都在发展中

内含子：

DNA分为编码区和非编码区。

编码区又分为外显子和内含子。

一般由外显子控制遗传和蛋白质的合成。

目前生物学界对内含子的作用还不大清楚，正在研究之中。基因非编码区的调控作用

控制转录的时间,有启动子和终止子(启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA,而终止子则是让转录在所需要的地方停止下来),还有控制那些基因要表达,那些不表达,笼统的说就是非编码区与基因的表达有关

原核细胞的基因的结构

原核基因:编码区全部编码蛋白质

真核基因:编码区分为外显子和内含子,只有外显子能编码蛋白质

编码区:能转录响应的信使RNA,进而指导蛋白质的合成

非编码区:不能转录为信使RNA,不能编码蛋白质

有调控遗传信息表达的核苷酸序列

最重要的是有位于编码区上游的RNA聚合酶结合位点

真核细胞的基因结构

非编码区:有调控作用的核苷酸序列,包括位于编码区上游的RNA聚合酶结合位点

编码区:特点:间隔的、不连续的

包括：外显子：能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质序列

任何一个基因都一定含有编码区和非编码区

如乳糖操纵子模型

操纵子由调控区与信息区组成，上游是调控区，包括启动子和操纵元件两部分。启动子是RNA聚合酶特异性识别和结合的部位，位于转录起点上游，本身并不被转录。操纵元件也称为操纵基因，是阻遏蛋白识别与结合的一小段DNA 序列，操纵元件紧接在启动子下游，通常与启动子有部分重叠，本身不能转录成mRNA。阻遏蛋白是由操纵子前端的调节基因编码产生的，是一类在转录水平对基因表达产生负调控作用的蛋白质，它主要通过抑制启动子复合物的形成而抑制基因的转录。阻遏蛋白都能与特定的信号分子结合而发生变构，在不同构象时与DNA结合或解离。乳糖操纵子包含lacZ、lacY、lacA 3个结构基因，分别编码β-半乳糖苷酶、透性酶、硫半乳糖苷乙酰转移酶，它们能转录mRNA而合成特定的蛋白质。操纵子上游还有一个启动子P和操纵基因O。

从乳糖操纵子可看出，lacZ、lacY、lacA 3个结构基因内都无非编码区，lacZ、lacY、lacA 3个结构基因都共同受上游的调控区（非编码区）控制。

首先，需要知道，启动子是启动转录的序列，终止子是终止转录的序列，必须把这个概念与翻译的起始/转录的信号——起始密码子/终止密码子区分开。启动子和终止子是DNA链上的一段序列，它们的长度也远远不止3个碱基。

1.DNA链上区域要么是编码区，要么是非编码区。所以，编码区和非编码区肯定是间隔开来的。

编码区指的是可以转录为mRNA的DNA序列。

非编码区指的是不可以转录为mRNA的序列。

对于环状DNA分子来说，是不存在什么两端的说法。对于链式DNA来说，DNA的两端是端粒，端粒是不转录为mRNA 的，所以是非编码区。

2.一般来说，我们认为基因和编码区相对应的，就是说一个基因就是一个编码区。然而，严格来说，一个基因（存在于DNA上）包括两个部分，一个是位于编码区的核心序列，它们转录为mRNA，另一个部分就是起调控作用（起始、增强、弱化、沉默等，不包含终止）的序列，它们位于非编码区。所以，启动子位于非编码区。

我们常说的启动子位于上游非编码区是说启动子位于编码

区（核心序列）上游的那个非编码区内。楼主是不是误解认为启动子位于非编码区上游？

然而，终止子位于核心序列下游的“编码区”内，终止子是可以转录的。

注意！启动子只是起一个信号的作用，启动子本身并不被转录！它们处在非编码区！举例来说，启动子识别RNA聚合酶后，从启动子的后面3到8个碱基处的一个碱基开始转录的。

而终止子是可以被转录的，只有被转录的终止子形成发夹环河多聚核苷酸尾巴才可以帮助转录的终止。终止子位于编码区。

具体的楼主请参看《分子生物学》相关内容。

3.一条DNA至少有一个启动子和一个终止子。

原核生物为了加快基因表达的效率，快刀斩乱麻，所有基因公用一套起始/终止设备。

真核生物需要提高表达的质量，所以慢工出细活，每个基因都特有一套这样的系统。

基因在DNA链上是线性排列，就是一个一个又一个的排列。这样，不同基因之间没有相互影响，表达质量更高。

关于多个基因的表达，这是多基因表达的问题，牵涉到基因的调控，，这里只能说明，多个基因每个基因都有自己的起始/终止序列，然而，拥有起始和终止子并不是基因表达的充要条件，基因得以表达还要其他的条件许可。比如说，一些对启动子启动转录程式有着强烈抑制的反式作用因子或者

顺式作用元件就会使得基因表达率极低甚至无法表达。此外，DNA分子本身的构象也会影响到基因表达程式的运行的。

4.上面已经提到，一般来说，我们说一个基因就是一个编码区（因为这里把基因的启动子也算在编码区内了），编码区是连续的，编码区内所有的序列都被转录为mRNA或者说前体RNA，再加工时必须切除那些没有用的RNA片段，然后连接的连接，折叠的折叠，形成成熟的mRNA。

转录当然是单向的了，一条链上的启动子在另一条链上按照碱基互补配对来看不可能还是启动子了，更不可能是终止子。

5.关于基因的选择性表达，虽然目前科学界没有一致的结论或者非常清晰的结论，但是，人们普遍认可的说法是，基因的选择性表达是多方面的，因为从DNA到性状，中间经历很多环节诸如DNA复制、DNA转录、转录后加工、mRNA 的翻译、翻译后加工。每个环节都可以对基因的表达进行调控。

其中，在转录水平上进行调控是最为广泛的，而在翻译水平的调控力度则小得多。

我想再说一次，转录是转录编码区，而不是整条链，链上的非编码区是不可能被转录的！

植物基因启动子的克隆方法及其应用

分子植物育种，２００６年，第４卷，第３（Ｓ）期，第８５－９１页 ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｌａｎｔＢｒｅｅｄｉｎｇ，２００６，Ｖｏｌ．４，Ｎｏ．３（Ｓ），８５－９１ 专题报告 Ｒｅｖｉｅｗ 植物基因启动子的克隆方法及其应用 尹辉李丹张毅李秋莉﹡ 辽宁师范大学生命科学学院，大连，１１６０２９ ﹡通讯作者，ｌｉｑｉｕｌｉ＠ｄｌ．ｃｎ 摘要植物基因的表达调控已成为分子生物学研究热点，启动子是基因表达调控的重要顺式元件，启动子的克隆对于研究基因表达调控、构建基因工程载体、表达目的蛋白有着重要的意义。启动子克隆的方法很多，从常用的启动子陷阱技术筛选启动子到ＰＣＲ方法的应用，此后相继问世的一些基于ＰＣＲ的克隆启动子技术，如载体锚定ＰＣＲ、反向ＰＣＲ、接头ＰＣＲ、交错热不对称ＰＣＲ等，为克隆启动子提供了更可靠，更合理的方法。本文着重介绍了几种植物基因启动子的克隆方法，分析了它们的优缺点，并展望了今后的研究前景。 关键词启动子，启动子陷阱技术，反向ＰＣＲ，锚定ＰＣＲ，交错热不对称ＰＣＲ ＣｌｏｎｉｎｇＭｅｔｈｏｄｓｏｆＰｌａｎｔＧｅｎｅＰｒｏｍｏｔｅｒｓａｎｄＴｈｅｉｒＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ＹｉｎＨｕｉＬｉＤａｎＺｈａｎｇＹｉＬｉＱｉｕｌｉ＊ ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＬｉａｏｎｉｎｇＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄａｌｉａｎ，１１６０２９ ﹡Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ，ｌｉｑｉｕｌｉ＠ｄｌ．ｃｎ ＡｂｓｔｒａｃｔＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｐｌａｎｔｇｅｎｅｈａｓｂｅｅｎｔｈｅｈｏｔｓｐｏｔｓｔｕｄｙｉｎｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｙ．Ｐｒｏｍｏｔｅｒｉｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｃｉｓ－ａｃｔｉｎｇｅｌｅｍｅｎｔ．Ｃｌｏｎｉｎｇｐｒｏｍｏｔｅｒｉｓｉｍｐｏｒｔａｎｔｔｏｓｔｕｄｙｇｅｎｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ｖｅｃｔｏｒｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄｔａｒｇｅｔｐｒｏｔｅｉｎｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｆｒｏｍｔｈｅｆｒｅｑｕｅｎｔｌｙｕｓｅｄｗａｙｔｈａｔａｐｐｌｙｉｎｇｐｒｏｍｏｔｅｒｔｒａｐｐｉｎｇｆｏｒｃｈｏｏｓｉｎｇｐｒｏｍｏｔ－ｅｒｔｏｔｈｅｕｓｉｎｇｏｆＰＣＲ，ｔｈｅｒｅｗｅｒｅｌｏｔｓｏｆｗａｙｓｆｏｒｐｒｏｍｏｔｅｒｃｌｏｎｉｎｇ．Ａｆｔｅｒｗａｒｄｓ，ａｓｅｒｉｅｓｏｆｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｂａｓｅｄｏｎＰＣＲｆｏｒｐｒｏｍｏｔｅｒｃｌｏｎｉｎｇｓｕｃｈａｓＡ－ＰＣＲ，Ｉ－ＰＣＲ，ＬＡ－ＰＣＲ，ＴＡＩＬ－ＰＣＲｗｅｒｅｄｅｖｅｌｏｐｅｄｉｎｓｕｃｃｅｓｓｉｏｎ．Ｔｈｅｙｏｆ－ｆｅｒｅｄｍｏｒｅｒｅｌｉａｂｌｅａｎｄｒｅａｓｏｎａｂｌｅｗａｙｓｏｆｃｌｏｎｉｎｇｔｈｅｐｒｏｍｏｔｅｒ．Ｓｏｍｅｗａｙｓｏｆｃｌｏｎｉｎｇｐｌａｎｔｇｅｎｅｐｒｏｍｏｔｅｒｓｗｅｒｅｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ，ｍｅａｎｗｈｉｌｅｔｈｅｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｓｅｗａｙｓｗａｓｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄａｎｄｔｈｅｉｒｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｐｒｏｓｐｅｃｔｗａｓａｌｓｏｄｉｓ－ｃｕｓｓｅｄｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ． ＫｅｙｗｏｒｄｓＰｒｏｍｏｔｅｒ，Ｐｒｏｍｏｔｅｒｔｒａｐｐｉｎｇ，Ｉ－ＰＣＲ，ＡｎｃｈｏｒｅｄＰＣＲ，ＴＡＩＬ－ＰＣＲ 启动子是ＲＮＡ聚合酶能够识别并与之结合、从而起始基因转录的一段ＤＮＡ序列，是基因表达调控的重要元件。启动子对外源基因的表达水平影响很大，是基因工程表达载体的重要元件。植物基因启动子的克隆，对研究植物基因表达调控和构建表达载体至关重要。本文就近几年来克隆植物基因启动子的各种方法做一综述，以期促进对启动子分离技术的应用。 １植物基因启动子克隆的几种方法 １．１利用常规ＰＣＲ技术克隆启动子 对于序列已知的启动子，只需要根据已知的启动子序列设计引物，然后采用ＰＣＲ扩增的方法就可以获得该启动子。该方法比较简便快捷，是近年来使用较为广泛的一种方法。 王利军等（２００４）根据ＧｅｎＢａｎｋ中拟南芥基因组序列中ａｔｓ１Ａ（核酮糖－１，５－二磷酸羧化酶小亚基）基因启动子的序列设计引物，以拟南芥总ＤＮＡ为模板，ＰＣＲ扩增出ａｔｓ１Ａ的基因启动子区片段，将其克隆到ｐＭＤ１８－Ｔ载体上，得到重组质粒并且进行测序，序列分析表明，所克隆的片段为１１１７ｂｐ，与Ｇｅｎ－Ｂａｎｋ中的ａｔｓ１Ａ基因启动子序列比较，发现只在－７７６位缺失１个碱基。 该方法简便、快捷、操作简单，但不能克隆到全新的启动子。

DNA启动子概述

启动子概述 启动子是DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成的序列，它是基因表达不可缺少的重要调控序列。启动子是一段位于结构基因5’-端上游区的DNA序列，能活化RNA聚合酶，使之与模板DNA准确地结合，并具有转录起始的特异性。基因的特异性转录取决于酶与启动子能否有效地形成二元复合物。启动子分三类：启动子Ⅰ、启动子Ⅱ、启动子Ⅲ.只有启动子Ⅱ指导mRNA的转录。真核生物启动子Ⅱ由两大部分组成：上游元件(upstream element)和启动子核心(core promoter)。上游元件与转录的效率有关；启动子核心包括3部分：TATA 盒、起始子(initinator)及下游元件(downstream element)。TATA盒为转录调控因子包括各种调节蛋白的结合区，与转录起始位点的精确选择及转录有关，起始子是转录起始所必须，下游元件作用尚不清楚。原核生物启动子区范围较小，包括TATAAT区(Pribnow区)及其上游的TTGACA区。 启动子是一段提供RNA聚合酶识别和结合位点的DNA序列，位于基因上游。启动子具有如下特征： 1序列特异性。在启动子的DNA序列中，通常含有几个保守的序列框，序列框中碱基的变化会导致转录启动活性的改变。 2方向性。启动子是一种有方向性的顺式调控元件，有单向启动子和双向启动子两类。 3位置特性。启动子一般位于所启动转录基因的上游或基因内的前端。处于基因的下4种属特异性。原核生物的不同种、属，真核生物的不同组织都具有不同类型的启动 没有启动子，基因就不能转录。原核生物启动子是由两段彼此分开且又高度保守的核苷酸序列组成，对mRNA的合成极为重要。启动子区域：（1）Pribnow盒，位于转录起始位点上游5—10bp，一般由6～8个碱基组成，富含A和T， 故又称为TATA盒或—10区。启动子来源不同，Pribnow盒的碱基顺序稍有变化。（2）—35区，位于转录起始位点上游35bp处，故称—35区，一般由10个碱基组成。 质粒设计时都需要加入启动子序列，以保证目的基因的表达。启动子可分为诱导型启动子和组成型启动子两大类，后者包括CMV，SV40，T7,pMC1，PGK启动子等。一下介绍几个常见的启动子。 （1）U6启动子 U6是二型启动子，一般发现是启动小片段，不带PolyA尾的序列。由Ⅲ类RNA聚合酶启动子U6启动子转录产生shRNA，经剪切后产生成熟siRNA，产生干扰效果。这一类 启动子在腺病毒和慢病毒干扰载体的构建中应用很多。U6更多的是用在shRNA的启动，来达到敲低一个基因的作用。

启动子克隆方法研究进展

启动子克隆方法研究进展 随着基因工程的发展，常常需要构建一种能高水平表达异源蛋白质的表达载体。启动子对外源基因的表达水平影响很大，是基因工程表达载体的重要元件。因此研究启动子的克隆方法，对研究基因表达调控和构建表达载体至关重要。 迄今为止，国外尚未见到有关启动子克隆方法的综述性报道，国内仅孙晓红等曾就启动子的结构、分类、克隆方法和食用菌中已经分离到的启动子作过综述。而近年来又有许多改进的克隆启动子的方法获得了多方面的成功，本文就近年来改进的启动子克隆方法作一综述，以期促进对启动子分离技术的应用。 1启动子克隆的几种方法 1.1利用启动子探针载体筛选启动子 启动子探针型载体是一种有效、经济、快速分离基因启动子的工具型载体，包含2个基本部分：转化单元和检测单元。其中，转化单元含复制起点和抗生素抗性基因，用于选择被转化的细胞；检测单元则包括1个已失去转录功能且易于检测的遗传标记基因以及克隆位点。 利用启动子探针载体筛选启动子的过程为，先选用1种适当的限制性核酸内切酶消化切割染色体DNA，然后将切割产生的DNA限制片段群体与无启动子的探针质粒载体重组，并按照设计的要求使克隆的片段恰好插在紧邻报告基因的上游位置；随后再把重组混合物转化给寄主细胞，构建质粒载体基因文库，并检测报告基因的表达活性。 当插入段同时满足(1)具有基因启动子序列；(2)具有翻译启始区；(3)具有启始密码子；(4)插入方向正确；(5)插入片段3'端编码区序列抗性基因编码区读码框一致，则有可能形成有功能的抗性融合基因，从而启动抗性基因的表达。 最早由Rachael等在大肠杆菌中以四环素抗性基因作为报告基因构建了启动子探针质粒pBRH3B，并克隆了一些原核和真核启动子片段。其后Donna等以氯霉素抗性基因作为报告基因，Fodor等以大肠杆菌LacZ为报告基因，构建了酵母启动子探针质粒并克隆了一些启动子片段。构建启动子探针型载体，较为常见的检测标记基因有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)、氯霉素乙酰转移酶基因(cat)、四环素抗性基因(Tet')和卡那霉素抗性基因(Kan')。近年来，人们渐渐较多地使用潮霉素B磷酸转移酶(hph)基因作为检测标记基因。李维等曾构建了含有hph抗性基因的启动子探针型载体pSUPV8，直接在大肠杆菌中分离黄孢原毛平革菌基因的启动子。先用Sau3AI酶切黄孢原毛平革菌基因总DNA，再与用BamHI酶切后的pSUPV8相连，转化大肠杆菌，用间接筛选法从氨苄青霉素和潮霉素抗性平板上筛选重组子，得到6个双抗重组子(pCH1～pCH6)，电泳检测插入片段分别命名为CHl～CH6；再用原生质体转化法将重组子分别转化黄孢原毛平革菌，对获得的转化子进行复筛，仅pCH6的转化平板上有稳定生长的菌落，说明了CH6片段在黄孢原毛平革菌中具有启动基因表达的功能。该方法不需要知道具体基因的序列，可随机筛选启动子，避免了引物设计，能获得大量的启动子片段。

基因启动子分析基本流程

“螺旋讲堂”2008 年第十一课----“基因启动子分析基本流程”
“螺旋讲堂”2008年第十一课----“基因启动子分析基本流程”
螺旋 亲爱的螺友们，大家好！欢迎光临螺旋讲堂，很高兴有机会和大家相聚螺旋网，让 我们一同在讨论中学习，在交流中成长！ 分子生物学发展迅猛，新方法新技术新发现层出不穷，但是我想,我们的基础研究从 某种意义上来说，可以简单的分为两大部分，一个是基因的表达，另一个是基因的功能。当 然，这个基因的概念现在已经不仅仅是指编码蛋白的 DNA 序列了。 我们这期主要探讨基因的表达。而转录调控在基因表达中占有很重要的地位。基因 的转录调控机制非常复杂，这些理论有机会我们再详细探讨，这里就不多介绍了，我们主要 谈一下对于一个新的基因，如何开始他的转录调控研究，第一步到底该怎么做呢？ 这里提供一些简单的入门级别的方法，希望对大家有用。相信还有更多更好更实用 的方法，也希望螺友们能够拿出来和大家分享，共同进步！ 本次讲座共分为五个部分主要是讲第一部分,因为这个一般的文献和书籍都很少有 详细说明.
一：克隆目的基因基本启动子序列 我们都知道， 基因的基本启动子一般是在基因转录起始位点上游， 当一个基因在没有 确定其转录起始位点的时候，我们假定 NCBI 上提交的序列就是他的完整转录本，那么他的 第一个碱基就是他的转录起始位点。而基因的基本启动子一般就是在转录起始位点的上游 2000bp 左右和下游200bp 左右，当然,这个是一般情况,具体问题还要具体分析.尤其现在发 现一般的基因都是有几个转录起始位点的. 我们通过该基因 mRNA 序列和基因组序列 BLAST， 就能够在染色体上找到这段基因 组序列。我这里用 human 的 AGGF1基因做个例子给大家具体演示一下.
https://www.wendangku.net/doc/4114624898.html,

丰子恺生平简介

丰子恺生平简介 １８９８年１１月９日，丰子恺出生在浙江省崇德县石门湾（今桐乡县石门镇）。 丰子恺出生时，他的母亲已生了六个女儿，他是家里第一个儿子。因为父亲也只有一个妹妹，他便是丰家烟火得继的希望，备受珍惜。父亲为他取乳名为“慈玉”，他确实是家人眼中的宝玉，祖母溺爱他，父母、姑姑疼爱他，姐姐们怜爱他，连家里染坊中的伙计们也喜欢他。丰子恺自小便被包围在脉脉的温情中，这种温情后来跟随了他一生，浸透在他的性格里，使他总是以温柔悲悯的心来看待事物；发散在他的笔下，就变成平易的文字和纯仁的画风。 六岁，在父亲的私塾中读书，学名丰润。 父亲丰璜本是清末举人，废除科举取仕后，就在家开设私塾，教授孩子们读书。丰子恺在父亲那里学《三字经》、学《千

家诗》，也学父亲在中秋之夜饮酒吃蟹赏月的名士风度……９岁时，父亲去世了，母亲把他送到另一个私塾继续就读，一直到１２岁，丰子恺接受的都是传统的教育，这六年的熏陶，在他身上留下了中国传统文人特有的温文敏感，从容和善的气质。也许是家里开染坊的缘故，丰子恺从小就对线条和色彩敏感，那本为他开蒙的《千家诗》里的黑白人物被他用染料涂成彩色，他描摹人物画谱，给同学们画，给乡亲们画，甚至应私塾先生之命为学校画孔子像供人瞻仰，被人们叫做“小画家”。线条和色彩的魅力被他发现，并自此终生吸引着他。 １９１０年，在县立第三高等小学读书，改名丰仁。 县立第三高等小学是应革命风潮建立起的新式学堂，在这里，丰子恺剪掉了辫子，并为了适应民主选举的需要，由先生把名字中难认的“润”字改为易写易认的“仁”字。新学堂开设有音乐课，同学们唱李叔同的《祖国歌》、唱《励学》歌，音符的震撼力使丰子恺大受感染，成为他后来钻研

启动子克隆及活性分析

第6章CpLTP3、CpLTPI.4基因启动子克隆及瞬时表达分析 为了深入探索蜡梅nsLTPs基因家族4个成员CpLTP1、CpLTP2、CpLTP3 、CpLTP4在表达和功能上存在差异的原因，需要进一步克隆各个成员的启动子，以便寻找调控方面的差异。我们利用hiTAIL-PCR法分离得到了CpLTP3、CpLTP4基因的启动子区域，并对调控原件和瞬时表达活性进行了分析，另外两个基因启动子暂时没有得到成功分离，所以没有进行分析。 6.1 实验材料 6.1.1 植物材料 供试蜡梅开花大树品种为罄口蜡梅，种植于西南大学校园内,常规管理。蜡梅小苗通过种子繁殖培育，种子采自西南大学校园罄口蜡梅树。培养条件为湿度85％，16h光照(2000Lx)，温度25℃，8h黑暗，温度20℃。烟草W38（Nicotiana tobacum cv. Wisconsin 38）由本实验室保存扩繁。 6.1.2 菌种和载体 大肠杆菌（Esherichia coli）菌株TOP10，为质粒转化受体菌由本实验室保存。 根癌农杆菌（Agrobacterium tumefacieus）LBA4404，用于农杆菌介导的烟草遗传转化，由本实验室保存。 克隆载体pMD19-T购自TaKaRa公司。植物表达载体pBI121，具有Km抗性和完整的GUS基因表达元件，用于构建瞬时表达载体。 6.1.3 主要试剂 Taq DNA聚合酶、各种限制性内切酶、Mgcl2、dNTP、T4 DNA连接酶等购自TaKaRa公司；DL2000、DNA Maker、质粒提取和胶回收试剂盒均购自BioFlux公司；PCR引物合成及DNA测序均由生物工程有限公司合成；氨苄青霉素(Ampicillin,Amp)和卡拉霉素(Kanamycin,Km)均购自上海生物工程有限公司。 6.1.4 主要设备 紫外分光光度仪（岛津），高速冷冻离心机（HITACHI），台式冷冻离心机（Eppendoff），TGL-16B型台式离心机（上海安亭），Eppendorf PCR仪，IKA型 涡旋器（德国产），高压灭菌锅（日本产），超低温冰箱（sanyo），DYYIII型电泳 仪（北京六一厂），超净工作台（苏州净化设备厂），FR-1型凝胶成像系统（上海复日），722型分光光度计（重庆川仪九厂），恒温振荡摇床，恒温培养箱，水浴锅。

丰子恺绘画作品

现代中国 最像艺术家的艺术家 ----丰子恺

丰子恺（1898—1975）浙江桐乡人。原名丰润，现代画家、文学家、艺术教育家。早年曾从李叔同（弘一法师）学习绘画和音乐，深受其佛学思想影响。1925年出版第一本画册《子恺漫画》，开中国漫画先河。他的漫画善以儿童的眼光来揭示成人世界的本质，风格简易朴实、意境隽永含蓄，是沟通文学与绘画的一座桥梁。

作家作品： ?1931年散文集《缘缘堂随笔》出版。抗战爆发后，丰子恺曾在浙江、重庆等地教书，后在家从事创作。解放后任中国美术家协会主席等职。作品有《缘缘堂随笔》、《缘缘堂再笔》等。 ?他的散文率真、朴素、清幽、玄渺。既包含着人间隔膜和儿童天真的对照，又常有佛教的观念。由于丰子恺的经历与其师李叔同的影响，出世与入世的思想在丰子恺的作品中也时有交织流露，总的说，读他的散文时时可以感悟到一种恬淡的禅味，他思想中的“随缘”。

丰子恺的漫画创作，是从画古诗词意境开始的，他第一幅发表的漫画便是画"人散后，一钩新月天如水"的词意。 丰子恺小的时候，接受过六年中国传统的启蒙教育，刚认字时，读的就是《千家诗》，诗词的美妙给他留下了深刻的印象。丰子恺自己说，他最喜欢看的书是诗话和词话，因为这些书把最优美最动人的句子集锦起来，省去了自己寻找的麻烦，读来很是畅快。

画：诗词 他的诗词漫画也是这样，把最耐人寻味的景象凝固了，定格下来，给人以细细的、长久的回味。在这些以古诗词为题的漫画里，却一点也闻不出陈腐的味道，意古人的意，生活却是今人鲜活的生活，典雅的意境和浓厚的生活气息毫无矛盾，让人感受到二、三十年代典型的文化氛围。

启动子(Promoters)克隆方法研究进展

启动子（Promoters）克隆方法研究进展 1启动子克隆的几种方法1.1利用启动子探针载体筛选启动子1.2利用PCR技术克隆启动子1.3环状PCR 1.4利用载体或接头的染色体步行技术克隆基因启动子1.5YADE法1.6TAlL-PCR 关键词：研究进展方法启动子Promoters克隆方法 随着基因工程的发展，常常需要构建一种能高水平表达异源蛋白质的表达载体。启动子对外源基因的表达水平影响很大，是基因工程表达载体的重要元件。因此研究启动子的克隆方法，对研究基因表达调控和构建表达载体至关重要。 迄今为止，国外尚未见到有关启动子克隆方法的综述性报道，国内仅孙晓红等曾就启动子的结构、分类、克隆方法和食用菌中已经分离到的启动子作过综述。而近年来又有许多改进的克隆启动子的方法获得了多方面的成功，本文就近年来改进的启动子克隆方法作一综述，以期促进对启动子分离技术的应用。 1启动子克隆的几种方法 1.1利用启动子探针载体筛选启动子 启动子探针型载体是一种有效、经济、快速分离基因启动子的工具型载体，包含2个基本部分：转化单元和检测单元。其中，转化单元含复制起点和抗生素抗性基因，用于选择被转化的细胞；检测单元则包括1个已失去转录功能且易于检测的遗传标记基因以及克隆位点。 利用启动子探针载体筛选启动子的过程为，先选用1种适当的限制性核酸内切酶消化切割染色体DNA，然后将切割产生的DNA限制片段群体与无启动子的探针质粒载体重组，并按照设计的要求使克隆的片段恰好插在紧邻报告基因的上游位置；随后再把重组混合物转化给寄主细胞，构建质粒载体基因文库，并检测报告基因的表达活性。

当插入段同时满足(1)具有基因启动子序列；(2)具有翻译启始区；(3)具有启始密码子； (4)插入方向正确；(5)插入片段3'端编码区序列抗性基因编码区读码框一致，则有可能形成有功能的抗性融合基因，从而启动抗性基因的表达。 最早由Rachael等在大肠杆菌中以四环素抗性基因作为报告基因构建了启动子探针质粒pBRH3B，并克隆了一些原核和真核启动子片段。其后Donna等以氯霉素抗性基因作为报告基因，Fodor等以大肠杆菌LacZ为报告基因，构建了酵母启动子探针质粒并克隆了一些启动子片段。构建启动子探针型载体，较为常见的检测标记基因有β-半乳糖苷酶基因(lac Z)、氯霉素乙酰转移酶基因(cat)、四环素抗性基因(Tet')和卡那霉素抗性基因(Kan')。近年来，人们渐渐较多地使用潮霉素B磷酸转移酶(hph)基因作为检测标记基因。李维等曾构建了含有hph抗性基因的启动子探针型载体pSUPV8，直接在大肠杆菌中分离黄孢原毛平革菌基因的启动子。先用Sau3AI酶切黄孢原毛平革菌基因总DNA，再与用BamHI酶切后的pS UPV8相连，转化大肠杆菌，用间接筛选法从氨苄青霉素和潮霉素抗性平板上筛选重组子，得到6个双抗重组子(pCH1～pCH6)，电泳检测插入片段分别命名为CHl～CH6；再用原生质体转化法将重组子分别转化黄孢原毛平革菌，对获得的转化子进行复筛，仅pCH6的转化平板上有稳定生长的菌落，说明了CH6片段在黄孢原毛平革菌中具有启动基因表达的功能。该方法不需要知道具体基因的序列，可随机筛选启动子，避免了引物设计，能获得大量的启动子片段。 1.2利用PCR技术克隆启动子 即根据发表的基因序列，设计引物，克隆基因的启动子，由于PCR法简便快捷，近年来人们较多采用此方法克隆基因启动子。 苏宁等根据已报道的水稻叶绿体16SrRNA启动子基因序列设计5'启动子序列的引物，以水稻叶绿体DNA为模板，PCR扩增出16SrRNA基因5'启动子区的片段，酶切克隆到p SK的SacI和SphI位点，构建测序载体质粒pZ16S，进行序列测定，结果表明所克隆的片

启动子介绍

了解启动子 目录 1. 基因的构成 (2) 2. 启动子（promoter） (3) 3. 终止子（termianator） (4)

1. 基因的构成 基因是由成千上万个核苷酸对组成。组成基因的核苷酸序列可以分为不同区段。在基因表达的过程中，不同区段所起的作用不同。在遗传学上通常将能编码蛋白质的基因称为结构基因。任何一个基因都包括非编码区和编码区。能够转录为相应信使RNA-mRNA，进而指导蛋白质合成(也就是能编码蛋白质）的区段叫做编码区,编码区中可分为内含子和外显子。不能转录为信使RNA、不能编码蛋白质的区段叫做非编码区。非编码区位于编码区前后，同属于一个基因，控制基因的表达和强弱。 非编码区虽然不能编码蛋白质，但对遗传信息的表达是不可缺少的，因为在它上面由调控遗传信息表达的核苷酸序列，该序列中最重要的是位于编码区上游的RNA聚合酶结合位点。启动子、终止子属于非编码区。因为回文序列的特殊排列，大多都位于非编码区。

原核基因的编码区全部编码蛋白质，真核生物的基因是间断的、不连续的、断裂的基因。一个断裂基因能够含有若干段编码序列，可以编码蛋白质的序列称为外显子。在两个外显子之间被一段不编码的间隔序列隔开，这些间隔序列称为内含子。非编码区在每个断裂基因的第一个和最后一个外显子的外侧，有人称其为侧翼序列。在侧翼序列上有一系列调控序列。通常把基因转录起点前面即5’端的序列称为上游(upstream)，起点后面即3’端的序列称为下游(downstream)。并把起点的位置记为+1，下游的核苷酸依次记为+2，+3，……，上游方向依次记为-1，-2，-3，……。 2. 启动子（promoter） 位于编码区上游的非编码区中，含有丰富的转录因子结合位点（transcription factor binding sites, TFBS）。主要包含核心启动子区域（TSS附近-60bp到+40bp）和调控区域。核心启动子区域产生基础水平的转录，对于精确转录是必须的最小单元；调控区域能够对不同的环境条件作出应答，对基因的表达水平做出相应的调节。 启动子的范围非常大，可以包含转录起始位点上游2000bp（主要在transcript start site 上游1kb的范围内），有些特定基因的转录区内部也存在着转录因子的结合位点，因此也属于启动子范围。

找一个基因的启动子

1、UCSC （1）网址：https://www.wendangku.net/doc/4114624898.html,/cgi-bin/hgNear 在Genome里选择物种，比如human，search里输入你的基因名PTEN，点击Go （2）出现新的页面，看到“Known Gene Names”下面的PTEN了吧，点它 （3）又回到了和（1）类似的页面，此时，点击sequence （4）出现一个新的页面，选中promoter，同时可以输入数值修改具体的序列区域，比如Promoter including 2000 bases upstream and 100 downstream，即表示启动子-2000～＋100区域 （5）点击“get sequence”，出现页面中最上面的序列“>uc001kfb.1 (promoter 2000 100) PTEN - phosphatase and tensin homolog”就是你要的人PTEN启动子-2000～＋100区域的序列了 2、Ensembl （1）网址：https://www.wendangku.net/doc/4114624898.html,/index.html 在“Search Ensembl“标题下search后的下拉框中选中物种名homo sapiens（人），for框中输入基因名PTEN，点击Go （2）出现的新页面中比较乱，但不要管它，直接寻找“Ensembl protein coding gene ”字样的，对，也就是第二个，点击它 （3）新出现的页面也很乱，不过依然不用管它，看到左侧有点肉色（实在不知道怎么描述了）的那些选项了吗，对，就是“Your Ensembl”下面那一堆，在里面找“Genomic sequence”，点它 （4）现在的界面就一目了然了，在“5' Flanking sequence”中输入数值确定启动子长度（默认为600），比如1000，点击update； （5）出现的序列中，标为红色的就是基因的外显子，红色之间黑色的序列就是内含子，而第一个红色自然就是第一外显子了，那么从开始的碱基一直到第一个红色的碱基间自然就是启动子-1000~+1的序列啦 这样，你不仅查到了启动子，连它的外显子、内含子序列也全部搞定了

启动子分析流程

“螺旋课堂”2008 年第十一课----“基因启动子分析基本流程”
“螺旋课堂”2008年第十一课----“基因启动子分析基本流程”
螺旋 亲爱的螺友们好，大家好！欢迎光临螺旋讲堂，很高兴有机会和大家相聚螺旋网， 让我们一同在讨论中学习，在交流中成长！ 分子生物学发展迅猛，新方法新技术新发现层出不穷，但是我想,我们的基础研究从 某种意义上来说，可以简单的分为两大部分，一个是基因的表达，另一个是基因的功能。当 然，这个基因的概念现在已经不仅仅是指编码蛋白的 DNA 序列了。 我们这期主要探讨基因的表达。而转录调控在基因表达中占有很重要的地位。基因 的转录调控机制非常复杂，这些理论有机会我们再详细探讨，这里就不多介绍了，我们主要 谈一下对于一个新的基因，如何开始他的转录调控研究，第一步到底该怎么做呢？ 这里提供一些简单的入门级别的方法，希望对大家有用。相信还有更多更好更实用 的方法，也希望螺友们能够拿出来和大家分享，共同进步！ 本次讲座共分为五个部分主要是讲第一部分,因为这个一般的文献和书籍都很少有 详细说明.
一：克隆目的基因基本启动子序列 我们都知道， 基因的基本启动子一般是在基因转录起始位点上游， 当一个基因在没有 确定其转录起始位点的时候，我们假定 NCBI 上提交的序列就是他的完整转录本，那么他的 第一个碱基就是他的转录起始位点。而基因的基本启动子一般就是在转录起始位点的上游 2000bp 左右和下游200bp 左右，当然,这个是一般情况,具体问题还要具体分析.尤其现在发 现一般的基因都是有几个转录起始位点的. 我们通过该基因 mRNA 序列和基因组序列 BLAST， 就能够在染色体上找到这段基因 组序列。我这里用 human 的 AGGF1基因做个例子给大家具体演示一下.
https://www.wendangku.net/doc/4114624898.html,

丰子恺简介资料

丰子恺简介资料 令狐采学 丰子恺（1898—1975年）漫画家、作家、翻译家、美术教育家。原名丰润，又名丰仁。浙江崇德（现属桐乡）人。 1914年考入浙江省立第一师范学校，从李叔同学习音乐、绘画。 1921年东渡日本，学西洋画。回国后在浙江上虞春晖中学和上海立达学园任教。1925开始文学创作并发表漫画。 1928年任开明书店编辑。 1931年出版第一本散文集《缘缘堂随笔》。以漫画著名艺坛。并写作了以中小学生和一般音乐爱好者为对象的音乐读物32种。文笔浅显生动，起了普及西洋音乐知识的启蒙作用。 50年代还从事介绍苏联的音乐教育、音乐情况及翻译歌曲。 抗战爆发后，举家内迁，在任教的同时积极从事抗日文化活动。 抗战后返沪杭，居家从事创作和翻译。 新中国成立后定居上海，曾任上海中国画院院长、中国美协上海分会主席、上海对外文化协会副会长、上海市文联副主席等职。文学创作以散文为主。 主要有《缘缘堂随笔》、《缘缘堂再笔》、《缘缘堂续笔》等。漫画有《子恺画全集》。译著有日本厨川白村的《苦闷的象征》、俄国屠格涅夫的《初恋》和日本古典名著《源氏物语》等。出版有《丰子恺文集》（7卷）。 他的绘画，文章在几十年沧桑风雨中保持一贯的风格：雍容恬静，其漫画更是脍炙人口。丰先生作品流传极广，失散也很多，就是结集出版的五十余种画册也大多绝迹于市场，给读者带来极大遗憾。在丰子恺先生的作品中，漫画恐怕是最为著名的了。往往是寥寥几笔，就勾画出一个意境，比如《人散后，一钩新月天如水》，几个茶杯，一卷帘栊，便是十分心情。丰先生的许多漫画，都是以儿童作为题材的，我最喜欢其中的《阿宝赤膊》，《你给我削瓜，我给你打扇》和《会议》。读丰先生的

启动子

启动子：RNA聚合酶识别、结合并开始转录所必需的一段DNA序列。 不同的启动子都存在保守的共同序列，包括RNA聚合酶识别位点和结合位点。 （1）、-10序列在转录起点上游大约-10处，有一个6bp的保守序列TATAAT，称Pribnow框。此段序列出现在-4到-13bp之间，每个位点的保守性在45%-100%。 频度：T89 A89 T50 A65 A65 T100 据预测，Pribnow框中，一开始的TA和第6位最保守的T在结合RNA聚合酶时起十分重要的作用。 目前认为，Pribnow框决定转录方向。酶在此部位与DNA结合形成稳定的复合物，Pribnow框中DNA序列在转录方向上解开，形成开放型起始结构，它是RNA聚合酶牢固的结合位点，是启动子的关键部位。 RNA聚合酶的结合，诱导富含AT的Pribnow框的双链解开，然后进一步扩大成17个核苷酸长度的泡状物，在泡状物中RNA聚合酶从模板链开始转录RNA产物。 （2）、-35序列 只含-10序列的DNA不能转录，在-10序列上游还有一个保守序列，其中心约在-35位置，称为-35序列，此序列为RNA酶的识别区域。 各碱基出现频率如下：T85 T83 G81 A61 C69 A52 ，其中TTG十分保守。 -35序列的功能：它是原核RNA聚合酶全酶依靠σ因子的初始识别位点。因此，-35序列对RNA聚合酶全酶有很高的亲和性。-35序列的核苷酸结构，在很大程度上决定了启动子的强度，RNA聚合酶易识别强的启动子。 -35序列提供RNA聚合酶识别信号， -10序列有助于DNA局部双链解开，启动子结构的不对称性决定了转录的方向。 2.熟悉原核生物启动子的结构与功能、其中的－35区、－10区等的结构？ ①域中的基序并与之结合，启动转录的起始。一般将DNA上的转录位点定位+1来排序，其下游（右侧）为正值，其上游（左侧）为负值。原核生物不同基因的启动子虽然结构也有一定的差异，但明显具有共同的特点。◆结构典型，都含有识别（R），结合（B）和起始（I）三个位点；◆序列保守，如-35序列，-10序列结构都十分保守；◆位置和距离都比较恒定；◆直接和多聚酶相结合；◆常和操纵子相邻；◆都在其控制基因的5′端；◆决定转录的启动和方向。 ②-35序列又称为Sextama盒,其保守序列为TTGACA，与-10序列相隔16～19bp。其功能是：◆为RNA 聚合酶的识别位点。RNA 聚合酶的核心酶只能起到和模板结合和催化的功能，并不能识别-35序列，只有σ亚基才能识别-35序列，为转录选择模板链。◆-35序列和-10序列的距离是相当稳定的，过大或过小都会降低转录活性。这可能是因为RNA 聚合酶本身的大小和空间结构有关。 ③-10序列也称为Pribnow框盒,其保守序列为TATAAT，位于-10bp左右，其中3′端的“T”十分保守。A,T较丰富，易于解链。它和转录起始位点“I”一般相距5bp。其功能是：◆与RNA聚合酶紧密结合；◆形成开放启动复合体；◆使RNA聚合酶定向转录。 为什么RNA聚合酶能够仅在启动子处结合呢?显然启动子处的核苷酸顺序具有特异的形状以便与RNA聚合酶结合，就好像酶与其底物的结构相恰恰适合一样。将100个以上启动子的顺序进行了比较，发现在RNA合成开始位点的上游大约10bp和35bp处有两个共同的顺序，称为-10和-35序列。这两个序列的共同顺序如下，-35区“AATGTGTGGAAT”，-10区“TTGACATATATT”。大多数启动子均有共同顺序（consensus sequence)，只有少数几个核苷酸的差别。 转录起点是指与新生RNA链第一个核苷酸相对应DNA链上的碱基，研究证实通常为一个嘌呤。常把起点前面，即5’末端的序列称为上游（upstream），而把其后而即3’未端的序列称为下游（downstream）。在描述碱基的位置时，一般用数字表示，起点为+1，下游方向依次为+2、+3……，上游方向依次为-1、-2、-3…

丰子恺介绍

丰子恺介绍 丰子恺（1898年11月9日－1975年9月15日），光绪二十四年生，原名丰润，又名仁、仍，号子觊，后改为子恺，笔名TK。师从弘一法师（李叔同），以中西融合画法创作漫画以及散文而著名。中国浙江桐乡石门镇人。中国现代漫画家，散文家，美术教育家和音乐教育家、翻译家，是一位多方面卓有成就的文艺大师；曾任中国美术家协会常务理事、美协上海分会主席、上海中国画院院长、上海对外文化协会副会长等职。被国际友人誉为“现代中国最像艺术家的艺术家” 。丰子恺风格独特的漫画作品影响很大，深受人们的喜爱。 中文名丰子恺 外文名ZikaiFeng 别名名：润、仁、仍，号：子凯 国籍中国 民族汉族 出生地浙江省崇德县石门湾 出生日期1898年（戊戌年）11月9日 逝世日期1975年（乙卯年）9月15日 职业散文家，教育家，漫画家，画家，音乐家 毕业院校浙江省立第一师范学校 代表作品《缘缘堂随笔》、《缘缘堂再笔》、《随笔二十篇》 主要成就他是中国现代漫画的开端 笔名TK 子女子女十人 师承弘一法师 人物生平 丰子恺原名丰润，我国现代画家、散文家、美术教育家、音乐教育家、漫画家和翻译家。他的母亲将他生下来后，由于父母亲十分喜爱他，取小名“慈玉”。他在家乡念小学时，有一次，乡下要搞什么选举。小学老师说，乡下人文化低，笔画多的字不好写，为日后考虑，名字应尽量用笔画少的字，因此，“润”字改为“仁’，字，老师说，浙江读音“仁”与“润”

差不多，“仁”在意义上与“慈玉”的“慈”接近，因此，他的名字就叫“丰仁”了。他就以这个名字进入杭州浙江第一师范学校。 在第一师范时，他因善于写文章，国文常得第一名，很受国文老师单不庵的器重。单不庵觉得在“丰仁”这个单名之外应该有一个双名，而“慈玉”是小名，应另取一个名字。因此单不庵就给他取了“子颛”。后改为“子恺”(“恺”与“颛”同，均为安乐意)。从此，他就取名叫“丰子恺”了。后来写文、作画均用此名。 丰子恺在早期作画时，曾用TK署名。那是“子恺”二字的英文拼写缩写。当时的子读作“TSU”。 丰子恺自幼爱好美术，1914年入浙江省立第一师范学校，从李叔同学习绘画和音乐。另一位对他有较大影响的老师则是夏丏尊，他称李叔同对他的教育方式为“爸爸般的教育”，而夏丏尊老师的则为“妈妈般的教育”，这两位老师，尤其是李叔同，对他的一生影响甚大。1918年秋，李叔同在杭州虎跑寺出家，丰子恺曾作文《怀念李叔同先生》以纪念恩师。1917年与同学组织桐荫画会。1919年师范学校毕业后，与同学数人在上海创办上海专科师范学校，并任图画教师。1921年东渡日本短期考察，学习绘画、音乐和外语。1922年回国到浙江上虞春晖中学教授图画和音乐，与朱自清、朱光潜等人结为好友。回国后从事美术、音乐教学，曾任上海开明书店编辑、上海大学、复旦大学、浙江大学美术教授。同时进行绘画、文学创作和文学、艺术方面的编译工作。1924年，与友人创办立达学院。抗战期间，辗转于西南各地，在一些大专院校执教。文艺刊物《我们的七月》4月号首次发表了他的画作《人散后，一钩新月天如水》。 1925年成立立达学会，参加者有茅盾、陈望道、叶圣陶、郑振铎、胡愈之等人。1926年，任教职于上海艺术大学。1929年被开明书店聘为编辑。1931年，他的第一本散文集《缘缘堂随笔》由开明书店出版。 七七事变后，率全家逃难。1937年编成《漫画日本侵华史》出版。 1939年任浙江大学讲师、副教授。1942年任重庆国立艺专教授兼教务主任。1943年结束教学生涯，专门从事绘画和写作。陆续译著出版《音乐的常识》《音乐入门》《近世十大音乐家》《孩子们的音乐》等面向中小学生和普通音乐爱好者的通俗读物，为现代音乐知识的普及作了许多有益的工作。1946年返上海。出版画册《子恺漫画选》。1952年后历任上海文史馆馆员、中国美术家协会上海分会副主席、中国美术家协会常务理事、上海市对外文化协会副会长、上海市文联副主席、全国政协委员、上海中国画院院长、中国美术家协会上海分会主席，上海文学艺术界联合会副主席等。工绘画、书法，亦擅散文创作及文学翻译。

CMV启动子教案资料

C M V启动子

精品资料 CMV启动子 质粒设计时都需要加入启动子序列，以保证目的基因的表达。启动子可分为诱导型启动子和组成型启动子两大类，后者包括CMV，SV40，T7, pMC1，PGK启动子等。zhengzzh对CMV和T7的来源做了介绍。 启动子是基因（gene）的一个组成部分，控制基因表达（转录）的起始时间和表达的程度。启动子（Promoters）就像“开关”，决定基因的活动。既然基因是成序列的核苷酸（nucleotides），那么启动子也应由DNA组成。启动子本身并不控制基因活动，而是通过与称为转录（transcription）因子的这种蛋白质（proteins）结合而控制基因活动的。转录因子就像一面“旗子”，指挥着酶（enzymes）(RNA聚合酶polymerases) 的活动。这种酶制造着基因的RNA复制本。基因的启动子部分发生改变（突变），则导致基因表达的调节障碍。 T7启动子是当今大肠杆菌表达系统的主流，这个功能强大兼专一性高的启动子经过巧妙的设计而成为原核表达的首选，尤其以Novagen公司的pET系统为杰出代表。强大的T7启动子完全专一受控于T7 RNA 聚合酶，而高活性的T7 RNA 聚合酶合成mRNA的速度比大肠杆菌RNA聚合酶快5倍——当二者同时存在时，宿主本身基因的转录竞争不过T7表达系统，几乎所有的细胞资源都用于表达目的蛋白；诱导表达后仅几个小时目的蛋白通常可以占到细胞总蛋白的50%以上。由于大肠杆菌本身不含T7 RNA 聚合酶，需要将外源的T7 RNA 聚合酶引入宿主菌，因而T7 RNA 聚合酶的调控模式就决定了T7系统的调控模式——非诱导条件下，可以使目的基因完全处于沉默状态而不转录，从而避免目的基因毒性对宿主细胞以及质粒稳定性的影响；通过控制诱导条件控制T7 RNA 聚合酶的量，就可以控制产物表达量，某些情况下可以提高产物的可溶性部分。有几种方案可用于调控T7 RNA 聚合酶的合成，从而调控T7表达系统。1.噬菌体DE3是lambda噬菌体的衍生株，含有lacI抑制基因和位于lacUV5启动子下的T7 RNA 聚合酶基因。DE3溶源化的菌株如BL21(DE3)就是最常用的表达菌株，构建好的表达载体可以直接转入表达菌株中，诱导调控方式和lac一样都是IPTG诱导。2.另一种策略是用不含T7 RNA聚合酶的宿主菌克隆目的基因，即可完全避免因目的蛋白对宿主细胞的潜在毒性而造成的质粒不稳定。然后用λCE6噬菌体侵染宿主细胞——CE6是lambda噬菌体含温度敏感突变(cI857ts)和pL/pR启动子控制T7 RNA 聚合酶表达的衍生株，在热诱导条件下可以激活T7 RNA 聚合酶的合成。此了噬菌体之外，还可以通过共转化质粒提供T7 RNA 聚合酶。比如有人用受溶氧浓度控制的启动子调控T7 RNA 聚合酶合成，据说这比较适合工业化发酵的条件控制。由于T7 RNA 聚合酶的调控方式仍有可能有痕量的本底表达，控制基础表达的手段之一是培养基外加葡萄糖，有助于控制本底表达水平；之二是采用带有T7 lac 启动子的载体——在紧邻T7 启动子的下游有一段lacI操纵子序列编码表达lac 阻遏蛋白(lacI)，lac 阻遏蛋白可以作用于宿主染色体上T7 RNA 聚合酶前的lacUV5 启动子并抑制其表达，也作用于载体T7 lac 启动子，以阻断任何T7 RNA聚合酶导致的目的基因转录。pLacI转化也是同样的原理。如果这还不够，更为严谨调控手段还有——在宿主菌中表达另一个可以结合并抑制T7 RNA 聚合酶的基因——T7溶菌酶基因，降低本底。常用的带溶菌酶质粒有pLysS 和pLysE，相容的ori都不会影响后继的表达质粒转化，前者表达的溶菌酶的水平要比后者低得多，对细胞生长影响小，而pLysE会明显降低宿主菌的生长水平，容易出现过度调节，增加蛋白表达的滞后时间，从而降低表达水平。通过几种不同方法来巧妙调控T7聚合酶合成，T7启动子发展出了史上功能最强大，最丰富的表达系统。 CMV：CMV基因组有229kb，属疱疹病毒亚β科。CMV DNA只有一个单向性的IE启动子复合体，可指导多个基因的表达[1]。在IE94基因上游存在一个强启动子，IE94的上游区比SV40病毒的72bp重复序列具有更高的增强子功能。IE94基因启动子区序列分析证明这一区段内有多个回文结构，并相间着保守的序列。在这一区段的-50～-580bp之间至少有4套13～18bp的重复序列。IE1和IE2蛋白的表达受增强子的调控，此增强子也称为主要增强子立即早期启动了一增强子、IE1/IE2增强子或CMV增强子，是上游调节区复合体的一部分。因集中了细胞转录因子结合位点而具有异常高的活性，并且在多种类型的细胞的影响 仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢2

嘉兴文化简介

嘉兴市简介
嘉兴市位于浙江省东北部、 长江三角洲杭嘉湖平原腹心地带， 是长江三角洲重要城市之 一。市境介于北纬30度21分至31度2分与东经120度18分至121度16分之间，东临上海，南 倚钱塘江，北负太湖，西接天目之水，大运河纵贯境内。市城处于江、海、湖、河交会之位， 扼太湖南走廊之咽喉，与沪、杭、苏、湖等城市相距均不到百公里，区位优势明显，尤以在 人间天堂苏杭之间著称。
中文名称： 别名： 行政区类别： 所属地区： 下辖地区： 嘉兴市 嘉禾，禾城 地级市 中国浙江 南湖区，秀洲区，嘉善县，海盐 县 政府驻地： 电话区号： 邮政区码： 地理位置： 南湖区 0573 314000、314001、314033 位于长江三角洲的杭嘉湖平原 面积： 人口： 方言： 气候条件： 著名景点： 火车站： 车牌代码： 市花： 市树： 3915平方千米 450.17万(2010年) 吴语太湖片方言 亚热带季风气候 南湖，南北湖，乌镇，古镇西塘 嘉兴站，七星桥站，丁冬站 浙F 石榴花 香樟树
嘉兴是马家浜文化的发祥地。春秋战国时期。是吴越争战之地，有吴根越角之称。秦时 置县，称由拳。三国吴时，喜见“野稻自生”，更名为禾兴，后改称嘉兴。至明代，嘉兴已有 “江东一大都会”’之美誉。嘉兴文化深厚，名人辈出。 《中国大百科全书》记载的全国名人有 1800 人，其中嘉兴就占了 80 余人；明清两代江浙共出进士 2000 多人，其中嘉兴就有 600 多人；现中科院和中国工程院院士当中，嘉兴籍的有 39 位。古今名人中，有唐代著名诗人 顾况、刘禹锡，中国十大名相之一陆贽，晚清大儒沈曾植，国学大师王国维，被周恩来总理 赞誉为“民主人士左派的旗帜”的沈钧儒，文坛巨匠茅盾，新月派诗人徐志摩，漫画家丰子皑 和张乐平，著名物理学家黄昆，著名数学家陈省身，武侠小说大师金庸等。嘉兴水乡泽国， 旅游资源丰富， 自然风光与人文景观交相辉映， 是中国优秀旅游城市。 有革命圣地南湖、 “天 下第一潮”海宁钱江潮、“一片真山水”海盐南北湖、东南沿海“北戴河”平湖九龙山海滨浴场、 江南水乡古镇嘉善西塘和桐乡乌镇等。目前，全市已拥有国家 AAAA、AAA 级景区各 1 个， AA 级景区 9 个；全国重点文物保护单位 6 处。 上世纪初，伟大的革命先行者孙中山 曾到嘉兴平湖乍浦一带勘察，并在《建国方略》中计划在此建设“东方大港”。八十多年后的 今天，位于乍浦的嘉兴港已建成全国唯一的海河联运港，2001 年 4 月嘉兴港正式作为一类 口岸对外开放。嘉兴港已拥有外海泊位 10 个，其中万吨级以上泊位 6 个，千吨级泊位 4 个， 年吞吐能力 1500 万吨。2003 年全港完成货物吞吐量 1327 万吨，步入了全国中型港口群行 列。目前，正在进行“沿海”生产力布局，高起点规划对外开放新平台。即依托位于乍浦的国 家级嘉兴出口加工区和国家一类对外开放口岸一一嘉兴港， 整合嘉兴港区、 海盐经济开发区 和杭州湾大桥新区、平湖经济开发区和滨海工业区，形成浙北沿海产业带，重点发展石化、 钢铁、机械设备、造纸、新型建材、电子信息等临港工业。