细胞生物学实验指导
实验一相差显微镜的使用
一、实验目的
掌握相差显微镜的原理、构造及其使用方法。
二、实验用品
试剂：蒸馏水或生理盐水。
器材：相差显微镜（相差物镜、转盘聚光器、调中合轴望远镜、绿色滤色镜）、载玻片、盖玻片、牙签、滤纸条、指甲油。
三、实验原理
光波有振幅（亮度）、波长（颜色）及相位（指在某一时间上光的波动所能达到的位置）的不同。当光通过物体时，如波长和振幅发生变化，人们的眼睛才能观察到，这就是普通显微镜下能够观察到染色标本的道理。而活细胞和未经染色的生物标本，因细胞各部微细结构的折射率和厚度略有不同，光波通过时，波长和振幅并不发生变化，仅相位有变化（相应发生的差异即相差），而这种微小的变化，人眼是无法加以鉴别的，故在普通显微镜下难以观察到。相差显微镜能够改变直射光或衍射光的相位，并且利用光的衍射和干涉现象，把相差变成振幅差（明暗差），同时它还吸收部分直射光线，以增大其明暗的反差。因此可用以观察活细胞或未染色标本。相差显微镜与普通显微镜的主要不同之处是：用环状光阑代替可变光阑，用带相板的物镜（通常标有PH的标记）代替普通物镜，并带有一个合轴用的望远镜。环状光阑是由大小不同的环状孔形成的光阑，它们的直径和孔宽是与不同的物镜相匹配的。其作用是将直射光所形成的像从一些衍射旁像中分出来。相板安装在物镜的后焦面处，相板装有吸收光线的吸收膜和推迟相位的相位膜。它除能推迟直射光线或衍射光的相位以外，还有吸收光使亮度发生变化的作用。调轴望远镜是用来进行合轴调节的。相差显微镜在使用时，聚光镜下面环状光阑的中心与物镜光轴要完全在一直线上，必需调节光阑的亮环和相板的环状圈重合对齐，才能发挥相差显微镜的效能。否则直射光或衍射光的光路紊乱，应被吸收的光不能吸收，该推迟相位的光波不能推迟，就失去了相差显微镜的作用。
1.相差
同一光线经过折射率不同的介质其相位发生变化并产生的差异。相位是在某一时间上，光的波动所达到的位置。一般由于被检物体（如不染色的细胞）所能产生的相差太小，我们的眼睛很难分辨出这种差别的，只有变相差为振幅差（明暗之差），才能被分辨。当光波通过两种折射率不同的物质时，如由空气→水，或空气玻璃，其波长、振幅和相位均有不同变化。如光波通过1cm厚的水和1cm厚的玻璃时，由于两者折射率不同，通过它们的光波在相位上产生一定的差异。通过玻璃的光波相位落后，因为玻璃的密度和折射率比水大，所以光波的波长和频率都小于水。相差决定于光波通过介质的折射率之差及其厚度，等于折射率与厚度的乘积之差（光程之差）。介质越厚或折射率越大光波减速也越大，即相差显微镜就是利用被检物的光程之差进行镜检的。
2.折射与干扰
肉眼看不见的相差，只要利用衍射和干涉现象，把相差变成明暗的振幅差就可能看见。（1）衍射
波在同一介质里传播是沿直线方向传播，如果在它传播的方向上，遇到迎面档住的孔或障碍物不比它的波长大很多，这次波就会明显地绕到障碍物后面或孔的外面去（传播路线发生弯曲），这种现象叫着波的衍射。
（2）干涉
在同一种媒质里传播的两列波，如果频率与波长同，在两列波相交的区域里，由于叠加的结果，每一点的合振幅都是一定的，并且出现振动加强或减弱，这就是波的干涉现象。光通过小颗粒的物体后产生直射光和衍射光，衍射光的光波振幅小，相位滞后。在光学系统中，这两种光相遇或光的叠加，振幅发生变化，光线或明或暗，这就是光的干涉现象。如果物体粒子是折射率稍大于周围媒质的极小的透明体时，由于光程（折射率与厚度的乘积）比较大，所以通过粒子的光比周围的光在相位上有所推迟。这是因为被检粒子的衍射光相位比折射光相位大约迟1/4波长的缘故。若是在直射光的通过点和大部分的衍射光的通过面放置吸收光的物质或推迟相位的物质时，就能分别改变直射光和衍射光的相位和振幅。如果把直射光相位推迟1/4波长，使与衍射光保持同一相位，合成波（P）等于直射光与衍射光的振幅之和（P=S+D），振幅加大，亮度提高。相反地，把衍射光相位推迟1/4波长，两者的相差变为1/2波长，合成波的振幅等于两波的振幅差（P=S-D），这时亮度减弱变暗。光线的相位肉眼是看不见的，但利用衍射和干涉的现象把相位差变为振幅差（明暗反差）就能用肉眼识别。衍射光的相位比直射光推迟1/4波长，合成波由与两者干涉而生成，形成被检物体的像，振幅与S同，相位稍延迟。
3.相板的作用
为了达到相差效应，在相差显微镜的物镜中，装有由光学玻璃制成的相板。在圆形相的平面上，有一圈与周围（里外）相板厚度不同的或凸或凹的圆环。相板分两部分：
（1）共轭面：通常为环状，是直射光通过部分。其环是凸起的，也可能是凹陷的。
（2）补偿面：共轭面内外两侧部分，是通过衍射光的部分。
在相板的共轭面和补偿面上，涂有改变光波相位或吸收光线的物质，当光线通过时，使光波的相位或振幅改变，从而达到不同目的的观察效果。利用相板把光波相位推迟，振幅改变。相板的作用，除推迟直射光和衍射光的相位之外，还有吸收光，使亮度改变。物镜的后焦点位于透镜中间而相板位于物镜的后焦面上，所以，相板也安装在透镜中间。
不同种类的相板对光吸收率不同，产生不同的反差效果，从反差上可分成两大类：
（A）明反差或负反差：在相差显微镜的视场中，物象亮度大于背景亮度的现象。在被检物体的折射率大于媒质时，被相板的共轭面（因为在共轭面上涂有改变相位和吸收光的物质）推迟1/4波长，同时吸收80%→90%，振幅变小，致使仅由直射光照射的背景变暗。通过补偿面的衍射光没有变化，由于直射光推迟1/4波长，两者（直射光与衍射光）有完全相同的相位，合成波P等于直射光（S）与衍射光（D）之和（P=S+D），故振幅加大。物象是这两种波的合成波造成，即物象等于P，所以只有直射光照射的背景亮得多。
（B）暗反差或正反差：在相差显微镜的视场中，背景亮度大于物象亮度的现象。与明反差相反，把通过补偿面（涂有改变直射光相位的物质）的衍射光推迟1/4波长，使衍射光与直射光的相位相差1/2波长，同时，直射光在共轭面（涂有吸光物质）被部分吸收。由于两者在像点相互干涉的结果，使合成波振幅变小，被检物的影象比背景变暗。
4.光路与成像
相差显微镜的照明光束，由转盘聚焦器环状光阑的环状孔射入聚光镜，投射载物台上的被检样品，经样品后，入射光除投射的直射光外，同时产生衍射光。衍射光的振幅较小，相位滞后直射光和衍射光进入物镜，前者由环状的共轭面、后者由较大的补偿面透过相板，并相互干涉造像。样品的影象由直射光（S）和衍射光（D）经干涉后的合成波造成，背景仅由直射光形成。由于直射光和衍射光两种光波的相位差异不同造成不同的反差效果，或明反差或暗反差不等视所用物镜的相板类型而定。
四、装置
1.相差物镜
在相差物镜内的后焦面上装有不同的相板，造成视场中被检样品影象与背景不同的明暗反差。物镜在明暗反差上可区分为两大类：即明反差（B）或负反差（N）物镜和暗反差（D）或正反差（P）物镜，标志在物镜外壳上，并兼有高（H）、中（M）、低（L）等不同反应。有的相差显微镜用ph字样表示。相差物镜多为消色差物镜或平场消色差物镜。
2.转盘聚光器
由聚光镜和环状光阑构成。环状光阑位于聚光器之下，由不同大小的环状通光孔构成，环状光阑的环宽与直径各不相同，与不同放大率的相差物镜内的相板相匹配，不可滥用。转盘前端朝向使用者一面有标示窗（孔），转盘上的不同部位有0、1、2、3和4或0、10、20、40和100字样。0—表示非相差的明视场的普通光阑；1或10、2或20、3或30、4或100，标示与相应放大率的相差物镜相匹配的不同规格的环状光阑的标志。
3.合轴调中望远镜（CT）
又名合轴调中目镜，作为环状光阑的环孔（亮环）与相差物镜相板的共轭面环孔（暗环）的调中合轴与调焦之用。使用时，转盘聚光器的环状光阑与相差物镜必须匹配，且环状光阑的环孔与相差物镜相板的共轭面环孔在光路中要准确合轴，并完全吻合或重叠，以保证直射光和衍射光各行其道，使成像光线的相位差转变为可见的振幅差。
4.绿色滤色镜
从色差的消除情况看，分为多束消色差物镜或PL物镜。消色差物镜的最佳清晰范围的光谱区510-630nm。欲提高相差显微镜性能最好以波长范围小的单色照明，故在光路上加用透射光线波长为500-600nm左右的绿色滤色镜，使照明光线中的红、蓝光被吸收，只透过绿光，可提高物镜的分辨能力。
五、操作
1.相差装置的安装
相差显微镜区别于普通显微镜的装置主要有相差物镜、转盘聚光器、合轴调中目镜和绿色滤色镜四种部件。
（1）相差物镜的安装
从物镜转换器上拆下普通物镜，旋入相差物镜，与普通目镜配套使用。
（2）转盘聚光器的调换安装
旋转聚光器升降螺旋，把普通明视场聚光器至最低位，放松固紧螺丝，卸下普通显微镜使用的聚光器。把转盘聚光器安放到相应位置上，旋紧固紧螺丝，转动聚光器升降螺旋，使
升至最高位置。标示孔朝向操作者。将环状光阑装在聚光器支架上，把绿色滤光片放在上面。再从转换器上旋下普通物镜，换上相差物镜。
2.聚光器调中
转盘聚光器调换安装后，要进行合轴调中，使聚光器的光轴与显微镜的主光轴合一。方法：
（1）旋转集光器转盘的环状光阑，将“0”位对准标示孔，使普通聚光器的明视场照明用的普通可变光阑进入光路。
（2）旋转聚光器升降螺旋，升至最高位。
（3）打开光源，使视场明亮。
（4）把被检样品放到载物台上，用低倍（4x）物镜聚焦。
（5）缩小镜座上的视场光阑开口，至最小。
（6）从目镜观察，在视场中可见一缩小的、明亮的、多角形的视场光阑图象。
（7）转动转盘聚光器的两个调中杆，推动聚光器，把视场中的明亮的多角形的视场光阑图象，调至视场中央。
（8）开放视场光阑至视场同大，两者周边完全重合。否则，重新调中。
3.相板圆环与环状光阑圆环的合轴调中
拔出目镜，插入合轴望远镜，一边从望远镜内观察，并用左手固定其外筒；一边用右手转动望远镜内筒使其下降，当对准焦点就能看到环状光阑的亮环和相板的黑环，此时可将望远镜固定住。再升降集光器并调节其下的螺旋使亮环的大小与黑环一致，然后左右前后调节环状光阑聚光器上的调节钮，使两环完全重合，如亮环比黑环小而位于内侧时，应降低集光器使亮环放大；反之，则应升高聚光器，使亮环缩小。如若升到最高限度仍不能完全重合，则可能是载玻片过厚之故，应更换。合轴调整完毕，抽出望远镜，换回目镜，按常规要领进行观察。在更换不同倍率的相差物镜时，每一次都要使用相匹配的环状光阑和重新合轴调整。使用油镜时，集光器上透镜表面与载玻片之间要同时加上香柏油。在视场中看见环状光阑为一明亮的圆环，而相板的圆环为一暗环，使用时两者要合轴，互相重叠。方法：
（1）相差物镜与环状光阑的匹配。如40x相差物镜的环状光阑转向ph3或40，使相应的环状光阑进入光路。
（2）把CT放入目镜筒。观察视场中明环与暗环图象。
（3）聚焦。转动CT目镜可调部分至清晰地看见明暗环。
（4）与暗环的调中重叠。相板的暗环是固定不动的，处于光路之中，暗环的中心。环状光阑的亮环可调节。
4.相差物镜的选择
20×PH=20倍，正反差，反差程度高
40×PM=40倍，正反差，反差程度中等
100×PL=100倍，正反差，反差程度低
40×NH=40倍，负反差，反差程度高
40×NM=40倍，负反差，反差程度中等
100×NL=100倍，负反差，反差程度低
100×DH=100倍，暗反差，反差程度高
40×DM=40倍，暗反差，反差程度中等
20×DL=20倍，暗反差，反差程度低
10×BH=10倍，明反差，反差程度高
20×BM=20倍，明反差，反差程度中等
40×BL=20倍，明反差，反差程度低
相差物镜应用范围
标示反差应用
P 正观察细胞或细胞内部结构
N 负观察微小物体如孢子、鞭毛和活的样品
H 高样品本身反差低的
L 低样品本身反差高的
六、实验步骤
1.取一张洁净的载玻片，滴一滴生理盐水或蒸馏水，用牙签刮自己的口腔粘膜少许与水混匀，盖上盖玻片。
2.10×相差物镜旋入光路。
3.将相应于10×相差物镜的聚光器环状光阑移入光路中，完全打开聚光器孔径光阑。
4.将样品置于载物台上，聚焦样品。
5.调节聚光器。
6.观察物镜后焦面，调节环状光阑的像和相板中圆环互相吻合。具体方法：取下一个目镜，插入聚焦望远镜，转动望远镜的接目镜，直到在望远镜中观察到清晰的环状光阑和相板的像。
7.如果换用高倍相差物镜观察，需要移入相应的高倍聚光器环状光阑，重复以上调节步骤。
七、结果与讨论
在相差显微镜下观察活细胞，可清楚地分辨细胞的形态，细胞核、核仁以及胞质中存在的颗粒状结构。
八、作业与思考题
1.概述环状光阑的亮环与相板的暗环、合轴、调焦法。
2.用明反差与暗反差物镜分别观察同一物体，阐述其物象的区别。
3.相差显微镜有哪些特有部件，构造如何。
4.明反差与暗反差相板的构成及其原理。
5.相差显微镜的光路图。
6.相差显微镜为什么要用绿色滤色镜。
7.为什么相差显微镜可以直接观察活体样品。
实验二荧光显微镜及荧光染色
一、实验目的
了解荧光显微镜的构造、原理和荧光染料的性质和使用方法。
二、实验用品
试剂：50%、70%、80%、95%乙醇；1%醋酸；1/15mol/L KH2PO4溶液：9.07g+1000ml。
蒸馏水；0.01%丫啶橙染液：丫啶橙1g，蒸馏水100ml（0.1%丫啶橙储存液4℃保存，临用前，用1/15mol/L KH2PO4溶液稀释至0.01%）；0.1mol/L CaCl2溶液：CaCl2 11.1g+蒸馏水1000ml。
器材：荧光显微镜、载盖玻片、染色缸。
材料：叶绿体（叶片）、诺丹明、羊毛、蚕丝、晴伦丝、V A、VB6、Vc。
三、实验原理
某些物质经一定波长的光（如紫外光）照射后，物质中的分子被激活，吸收能量后跃迁至激发态；当其从激发态返回到基态时，所吸收的能量除部分转化为热量或用于光化学反应外，其余较大部分则以光能形式辐射出来，由于能量没能全以光的形式辐射出来，故所辐射出的光的波长比激发光的要长，这种波长长于激发光的可见光就是荧光(fluorescence)。所谓荧光就是某些物质在一定波长光（如紫外光）的照射下、在极短时间内所发出的比照射光波长更长的可见光。由此可见，被照射物质产生荧光必须具备以下两个条件：
①物质分子（或所特异性结合的荧光染料）必须具有可吸收能量的生色团；
②②该物质还必须具有一定的量子产率和适宜的环境（如溶剂、pH、温度等）。
荧光显微术是利用荧光显微镜结可发荧光的物质进行观测的一种实验技术。某些物质在一定短波长的光(如紫外光)的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时, 就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光（如可见光），这种光就称为荧光。有些生物体内的物质受激发光照射后可直接产生荧光, 称为自发荧光（或直接荧光），如叶绿素的火红色荧光和木质素的黄色荧光等。有的生物材料本身不能产生荧光，但它吸收荧光染料后同样却能发出荧光，这种荧光称为次生荧光（或间接荧光），如叶绿体吸附吖啶橙后便可发出桔红色荧光。
荧光显微镜具特殊光源（多为紫外光光源），提供足够强度和波长的激发光，诱发荧光物质发出荧光。在视场中所所观察到的图像，主要是样品的荧光映像。
（一）荧光显微镜的基本装置及其光路
1.光源
采用高压汞灯。汞灯能以最小表面发出最大数量的紫外光和蓝光，且光亮度大，光度稳定。中间为一球形石英玻璃管，有两个钨电极，内充汞滴和少量氩氖混合体。当汞灯熄灭后，不能立刻点亮，经5-10min，汞灯冷却后再通电源点亮。
2.滤色镜系统
按用途功能分两大类：
（1）激发滤色镜，在于为被检样品的荧光染料提供最佳波段的激发光。荧光染料均有一定的吸收光谱（激发峰值），利用滤色镜对光线选择吸收的能力，选用其投射光谱，恰为
荧光染料的最大吸收光谱的激发滤色镜，以便从汞灯发出的广谱光波中，选择透过最宜波段的光线供用。激发滤色镜加放于汞灯和二向色镜之间，物镜之前。
（2）阻断滤色镜，位于物镜之上，二向色镜和目镜之间，用以阻断或吸收光路中的激发光或某些波长较短的光线，以防伤害眼睛，使荧光透过。
3.光路
（二）荧光显微术
（1）转动镜臂旋转台，至相应的标志位。旋转台上有5个定位标志：U、V、B、G、O，分别代表不同的荧光激发方法及其不同的滤色镜系统组合。
（2）接通电源，点亮汞灯。
（3）将镜臂左侧的DIA-EPI旋扭调至EPI位。
（4）确认汞灯点亮，照明系统正确，灯位调中，电弧像聚焦准确。
（5）用荧光染料染色的样品，放在载物台上，10×物镜聚焦。
（6）孔径光阑的调整使用。视场光阑位于孔径光阑之后，由外露手杆操纵；视场光阑用于限定样品表面的照明区域，其开度一般应与孔径光阑的开口相当。
（8）辅助激发滤色镜滑动阀的使用。滑动阀位于镜臂专用槽中，可拉出或推入，有三挡，全拉出供常规使用；中间位用于激发，辅助滤色镜进入光路；全推入位，阻断全光线。（9）激发方法。有四种：UV（紫外）V（紫）B（蓝）G（绿）激发法
四、使用方法
1.荧光显微镜汞灯的点亮打开启动器电源开关，按下起动钮不超过5秒钟，点亮汞
灯，5min后便进行观察。点亮后15min内，不可切断电源；此外，一旦汞灯熄灭后，在20min或稍长时间内，不许重新点亮，须待汞灯冷却后，方能再次点亮。
2.青菜手切片的制备用剔须刀片将新鲜的嫩菠菜叶切削出一斜面置于载玻片上, 滴
加1滴水，加盖片后轻压，置荧光显微镜下观察。
3.样品聚焦将菠菜手切片放在载物台上，先用溴钨灯透射照明，用低倍镜聚焦，待
找到最佳影像后，熄灭溴钨灯，改用高压汞灯。
4.调整荧光显微镜在观察样品时，视场光阑（F）和孔径光阑（A）的开度适当缩小，
同时选择滤镜系统和二向色镜，直至使叶绿体的自发荧光达到最佳的观察效果。
5.荧光染色观察向所制手切片上滴加1~2滴0.01%吖啶橙染液，染色1min，洗去
余液, 加盖片后，在荧光显微镜下观察叶绿体的间接荧光。
五、实验结果与讨论
1. 在荧光显微镜下，叶绿体发出火红色荧光，气孔发绿色荧光，两保卫细胞内的火
红色叶绿体则环绕气孔排列成一圈。
2. 用吖啶橙染色后，叶绿体则发出桔红色荧光，细胞核可发出绿色荧光, 气孔仍为
绿色。
荧光染料的使用
吖啶橙：吖啶橙是最经典的灵敏的荧光染料，它可对细胞中的DNA和RNA同时染色而显示不同颜色的荧光，DNA呈绿色荧光，RNA呈橙红色荧光。
EB：染色DNA和RNA
荧光素双醋酸酯（FDA）：FAD 本身无荧光，无极性，可透过完整的原生质膜。一旦进入原生质体后，由于受到酯酶分解而产生具有荧光的极性物质荧光素。它不能自由出入原生质膜，因此有活力的细胞能产生荧光，无活力的原生质体不能分解FAD无荧光产生。5mg FDA溶于1ml丙酮中，避光4℃下贮存，使用时取0.22ml FDA贮存液加入5ml 0.65mol/L甘露醇中。使用时，使最终浓度为0.01%。
荧光染料Ho33342和若丹明123：活细胞双荧光染色观察细胞核和线粒体。一般的生物染料不能穿透细胞膜，只有当细胞被固定后改变了细胞膜的通透性，染料才能进入细胞内。但有些活体染料能进入活细胞，并对细胞不产生毒性作用。荧光染料Ho33342和若丹明123都是活体染料。Ho33342能与细胞中DNA进行特异的结合，若丹明123能与线粒体进行特异的结合。采用两种荧光染料的混合染液可对一个活细胞的核和线粒体同时染色。
荧光组化实验中应注意的几个问题：
1．每种荧光染料，均有自己的最适pH值，此时荧光最强。当pH改变时，不仅荧光强度减弱，而且波长将有所改变，因此荧光检测时要在一定的pH值的缓冲液中进行。
2．一般荧光染色在20℃以下时荧光比较稳定，温度升高常出现温度猝灭。
3．在荧光观察中，常因激发光的增强而使样品荧光很快衰竭，造成观察和照相困难。为此最好用能量小的长波长光进行观察，需照相时再适当增强激发光。
4．一般荧光染液的浓度在万分之一以下，甚至亿万分之一，也能使标本着色。在一定的限度内，荧光强度可随荧光素的浓度增加而增强，但超过限度，荧光强度反而下降，这是由于荧光分子间的缔合而使自身荧光猝灭所致。
实验三细胞组分的Fuelgen反应和Brachet反应
一、实验目的
了解核酸细胞化学反应原理，掌握Fuelgen反应和Brachet反应的细胞化学染色方法。
二、实验用品
试剂：无水乙醇、1mol/L HCl、45%醋酸、10%偏重亚硫酸钠、偏重亚硫酸钾、碱性品红、NaHSO3、活性炭、吡咯红（派咯红）、甲基绿、冰醋酸、醋酸钠。
器材：载盖玻片、镊子、刀片、小烧杯、水浴锅。
材料：洋葱鳞茎、蚕豆根尖。
三、实验原理
细胞的组织化学方法，是研究细胞成分常用的方法之一。它是利用化学试剂与细胞内的某些物质进行化学反应，从而在细胞局部形成有色沉淀物，再通过显微镜对组织内的生物化学成分进行定性、定位、定量研究。
（一）Fuelgen反应显示细胞内的DNA
稀酸（1mol/L HCl 60℃）水解DNA，打开嘌呤碱和脱氧核糖间的连接键，然后在脱氧核糖的一端（C1）形成游离醛基，醛基和Shiff试剂结合形成紫红色化合物，故DNA部位呈紫红色。
（二）Brachet反应——显示细胞内的DNA和RNA
利用核酸分子上的磷酸根和碱性染料形成盐键而在原位沉淀显色，可以同时染出DNA 和RNA。Vnna染液中的甲基绿与空间构型完整的DNA亲和力高，甲基绿分子的两个含N基团正电荷只好和DNA分子负电荷基团一致。吡咯红只有一个含N基团易与RNA结合。
四、实验方法
（一）Fuelgen反应
1.取根尖和洋葱表皮于1mol/L HCl 中浸1min。
2.将材料浸入至60℃的1mol/L HCl 水解8min.
3.转入Shiff氏液染色30min，待根尖变为深红色。
4.在新配亚硫酸水中洗2次，每次2min。
5.水洗2min，在载玻片上切取红色根尖。
6.加1滴1%醋酸于根尖上，或洋葱表皮展平观察。
（二）Brachet反应
1.撕取洋葱鳞茎内表皮于载玻片上。
2.加1滴Vnna染液30min。
3.自来水略洗一下盖上盖片，镜检。
五、作业
1绘图描述所观察到的结果。
2.比较洋葱表皮经Fuelgen染色和Brachet染色后显色差异，说明原因。
实验四细胞组分的多糖及液泡系的显示法
一、实验目的
了解核酸细胞化学反应原理，掌握PAS反应和中性红活体染色的实验方法。
二、实验用品
试剂：70%乙醇、1mol/L HCl、Shiff氏液。
新配亚硫酸水：200ml蒸馏水+10%偏重亚硫酸钠10ml+1mol/L HCl，用前混合。
1/3000中性红：0.5g中性红溶于50mlRinger液中加热至30-40℃，滤纸过滤后装入棕色瓶置暗处保存，用前取1%中性红1ml加29mlRinger液混匀即可。
高碘酸酒精溶液：高碘酸0.4g+95%乙醇25ml（原为35ml）+0.2mol/L醋酸钠（醋酸钠27.2g+1000ml蒸馏水）5ml+蒸馏水20ml（原为10ml），在避光下冰箱中保存，变黄则失效；
RINGER氏液：NaCl 8.5g+氯化钙0.12g+重碳酸钠0.2g+氯化钾0.14g+磷酸氢二钠0.01g+葡萄糖2.0g+蒸馏水1000ml。
还原液：碘化钾2g+偏重亚硫酸钾2g+无水乙醇35ml（原为60ml）+蒸馏水65ml（原为40ml）+1mol/L HCl 1ml。
器材：载盖玻片、镊子、刀片、滤纸
材料：马铃薯、绿豆根（活体）
三、实验原理
（一）PAS反应
利用高碘酸打开C-C键，将CH2OH-CH2OH变成CHO-CHO，同样对CH2-OH-CHO、CH2OH-COOH、CH2OH-CH2NH2等物质均有氧化作用而放出醛基，新生醛基和shiff试剂中的无色品红作用产生紫红色化合物。可以将组织中的多糖、粘多糖和粘蛋白显示出来。
（二）中性红活体染色
活体染色是指对活的动植物组织细胞或离体的活组织细胞的染色，染色剂对细胞或生物本身不产生有害的作用。染色剂有中性红、健那绿B、甲基紫、台酚蓝等。中性红是液泡系特殊的活性染料，在细胞处于生活状态时只将液泡及其内部某些颗粒染成红色，而不对核和细胞质染色。
四、实验方法
（一）PAS反应
1.切取马铃薯块茎薄片，放入高碘酸溶液中，10min后用70%乙醇洗一下。
2.将薄片放入Shiff氏液中20~25min。
3.取出放入还原液中1min。
4.70%乙醇冲洗。
5.盖片镜检。
（二）中性红活体染色
1.将黄豆或绿豆幼根培育到1cm左右。
2.切下幼根一纵剖小片。
3.载玻片中央滴1/3000中性红染液5-10min。
4.吸去染液，换上RINGER氏液。
5.盖片镜检。
五、作业
1.绘图描述实验结果。
2.比较中性红对死细胞和活细胞的区别
实验五胞间连丝观察
一、实验目的
观察植物细胞间的胞间连丝，进一步认识细胞并不是“独立王国”，而是与周围细胞有千丝万缕的联系。胞间连丝为细胞间的物质传播与传递起着桥梁的作用。
二、实验用品
试剂：饱和硝酸银溶液、福尔马林、二甲苯、中性树胶。
器材：显微镜、烘箱、培养皿、小刀、镊子、载盖玻片。
材料：红辣椒、玉米、柿子种子。
三、实验方法
1.红辣椒表皮细胞临时制片
剪取一小块红辣椒，用小刀小心刮除果肉，留下一层极薄的表皮，放在载玻片上，滴1滴水，盖片观察。
2.玉米籽粒糊粉层临时制片
玉米籽粒（颖果）浸泡在水中数天，用镊子剥去表皮露出糊粉层，制作徒手切片。刀口与糊粉层平行，把切成的薄片放入培养皿内的清水中，挑取最好的切片放在载玻片上，加1滴清水（番红液更好），盖片观察。
3.柿胚乳细胞永久片制作
1.取柿子种子，用小刀剥去种皮，将胚乳横切成小块。
2.将小块投入硝酸银饱和溶液和甲醛（1：1）的混合液中，黑暗处理1~2周。
3.取出小块，用清水洗净，徒手切片，刀口和柿子胚乳小块平行，切面与种子长轴垂直。
4.将切成的薄片，用纸包好，置于恒温箱（35~40℃）中烘干。
5.干燥后浸在二甲苯中透明1-2min，然后用中性树胶封固。
6.镜检。
四、作业
绘图示柿胚乳细胞、辣椒表皮细胞、玉米籽粒糊粉层细胞间的胞间连丝。
实验六细胞膜的渗透性观察
一、实验目的
了解细胞膜的渗透性及各类物质进入红细胞的速度。
二、实验用品
试剂：0.17mol/L NaCl、0.17 mol/L氯化铵、0.17mol/L醋酸铵、0.17mol/L硝酸钠、0.12mol/L 草酸铵、0.12mol/L硫酸钠、0.32mol/L葡萄糖、0.32mol/L甘油、0.32mol/L乙醇、0.32mol/L 丙醇。
器材：50ml烧杯、10ml移液管、洗耳球、试管、试管架。
材料：哺乳动物血液（羊血、兔血）。
三、实验原理
根据红细胞对各种溶质的透性不同，有的可渗入，有的不能渗入。渗入红细胞的溶质能提高红细胞渗透压，使水进入红细胞，引起溶血。
四、实验方法
（一）红细胞悬液
取50ml小烧杯一个，加1份血和10份0.17mol/L NaCl溶液，形成一种不透明的红色液体，此为稀释的血红细胞溶液。
（二）低渗溶液
取试管1支加入10ml蒸馏水，然后再加入1ml稀释的血溶液，注意观察变化，由透明的红色逐渐澄清，红细胞发生破裂，造成100%的红细胞溶血，使光线比较容易透过溶液。（三）红细胞的渗透性
1.取试管1支，加入0.17mol/L NaCl溶液10ml，再加入1ml稀释的血溶液，轻轻摇动，注意颜色的变化，是否有溶血现象？为什么？
2. 取试管1支，加入0.17mol/L 氯化铵溶液10ml，再加入1ml稀释的血溶液，轻轻摇动，注意颜色的变化，是否有溶血现象？若发生溶血，记下时间（加入1ml稀释的血溶液到溶液变成红色透明澄清所需时间）。
五、作业
根据观察到的现象记录，对结果进行分析。
不同低渗溶液下的溶血现象
编号溶液是否溶血时间结果分析
1 10ml氯化钠+1ml稀释血
2 10ml氯化铵+1ml稀释血
3 10ml醋酸铵+1ml稀释血
4 10ml硝酸钠+1ml稀释血
5 10ml草酸铵+1ml稀释血
6 10ml硫酸钠+1ml稀释血
7 10ml葡萄糖+1ml稀释血
8 10ml甘油+1ml稀释血
9 10ml乙醇+1ml稀释血
10 10ml丙醇+1ml稀释血
实验七细胞骨架观察
一、实验目的
观察植物细胞骨架的网状结构。
二、实验用品
试剂：1. M-缓冲液：50mmol/L米唑、50mmol/L氯化钾、0.50mmol/L氯化镁、1.0mmol/L EGTA （乙二醇双醚四乙酸）、0.1mmol/L EDTA、1.0mmol/L巯基乙醇。
2. 6.0mmol/L pH6.8磷酸缓冲液（碳酸氢钠调节）。
3. 1% Triton X-100，用M-缓冲液配制。
4. 0.2%考马斯亮蓝R-250，其溶剂是甲醇46.5ml、冰醋酸7ml，蒸馏水46.5ml。
5. 3%戊二醛，用2液配。
6.50%、70%、95%乙醇。
器材：显微镜、50ml烧杯、载盖玻片、滴管、试剂瓶、镊子。
材料：洋葱鳞茎。
三、实验原理
当用适当浓度的Triton X-100处理时，可将细胞内蛋白质破坏，但细胞骨架系统蛋白质却被保留，经考马斯亮蓝R-250染色，可在显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。
四、实验方法
1.撕取洋葱鳞茎内表皮细胞置于装有pH6.8磷酸缓冲液的50ml烧杯中，使其下沉。
2.去磷酸缓冲液，用1%Triton X-100处理20-30min。
3.吸去Triton X-100，用M-缓冲液洗3次，每次5~10min。
4. 3%戊二醛固定30~60min。
5. pH
6.8磷酸缓冲液洗3次，每次3-6min。
6. 0.2%考马斯亮蓝R-250染色20~30min。
7.用蒸馏水洗1~2次，细胞置于载玻片，加盖片观察。
五、作业
绘图说明实验观察结果。
溶液的配制
（一）1/15mol/L PBS（磷酸缓冲液phosphate buffer solution）
甲液：1/15mol/L Na2HPO4溶液
Na2HPO4 9.465g 加蒸馏水定溶至1000ml
乙液：1/15mol/L KH2PO4溶液
KH2PO4 9.07g 加蒸馏水定溶至1000ml
分装于棕色瓶，4℃下保存。不同pH值的甲、乙两液比例见下表：
pH甲液ml乙液ml pH甲液ml乙液ml
5.29 2.5 97.5
6.81 50.0 50.0
5.59 5.0 95.0
6.98 60.0 40.0
5.91 10.0 90.0 7.17 70.0 30.0
6.24 20.0 80.0
7.38 80.0 20.0
6.47 30.0 70.0
7.73 90.0 10.0
6.64 40.0 60.0 8.04 95.0 5.0
（二）1/3000中性红染液
中性红（neutral red）1g，加300ml蒸馏水，室温保存。
（三） Giemsa染液
1.贮备液
Giemsa 1g 甘油 66ml 甲醇 66ml
先将Giemsa置于研钵中加少许甘油，充分研磨呈无颗粒的糊状。再将全部甘油加入，放入56℃温箱2h，然后加入甲醇，保存于棕色瓶中。两周后使用。
2.工作液
临用时将贮备液与pH 6.8的磷酸缓冲液按照1：20混合。
（四）M缓冲液
米唑 3.404g
氯化钾 3.7g
氯化镁101.65mg
EGTA（乙二醇双醚四乙酸）380.35mg
EDTA29.224mg
巯基乙醇0.07ml
甘油297ml
蒸馏水至1000ml
用1NHCl调pH至7.2室温保存。
（五）1% Triton X-100溶液
量取1% Triton X-100（聚乙二醇辛基苯基醚）液，加M-缓冲液98ml配制。
（六）0.2%考马斯亮兰R-250染液
甲醇46.5ml
醋酸7.0ml
考马斯亮兰R-250 0.2g
蒸馏水至100ml
（七）甲基绿-哌咯宁（methyl green-pyrcnln）染液
1. 1mol/L醋酸缓冲液（pH4.8）
（1）冰醋酸17ml
加蒸馏水至200ml
（2）醋酸13.5g
加蒸馏水至100ml
2. 甲基绿-哌咯宁
2%甲基绿水溶液6ml
5%哌咯宁水溶液6ml
蒸馏水16ml
临用前加1mol/L醋酸缓冲液16ml
（八）Shiff试剂
碱性品红0.5g加入100ml沸水，持续煮沸5min，冷却到50℃时过滤到棕色瓶中，加入
,充分震荡，避光过夜。次日（淡黄色）加入1NHCl 10ml，冷却至25℃时加入1g NaHSO
3
0.25g活性炭剧烈震荡1min，过滤即得，避光低温保存。
（九）RINGER溶液
氯化钠（冷血动物0.65g） 0.9g
氯化钾0.042g
氯化钙0.025g
蒸馏水100ml
细胞生物学实验指导
细胞生物学实验指导
细胞生物学实验指导目录 一．显微镜的使用 实验一、几种光学显微镜的使用 实验二、参观电子显微镜及生物超薄切片标本制备 二．细胞形态结构 实验三、细胞大小的形态观察——测微尺的使用 实验四、细胞活体染色技术 实验五、植物细胞骨架光学显微观察 实验六、胞间连丝观察 三．细胞化学 实验七、鉴定RNA的细胞化学方法——Branchet反应 实验八、DNA显色的观察——Feulgen反应 实验九、固绿染色法鉴定细胞内酸性蛋白与碱性蛋白 实验十、多糖及过氧化酶的显示 实验十一、核仁组成区的银染显示与观察 四．细胞生理 实验十二、细胞膜的通透性 实验十三、细胞电泳 五．细胞和组织培养技术 实验十四、植物原生质体的分离和融合 实验十五、植物细胞的培养与观察 实验十六、动物细胞融合 实验十七、动物细胞的培养与观察 六．细胞化学成分的分离 实验十八、细胞器的分离、纯化——细胞分级分离 实验十九、荧光的细胞化学测定 实验二十、细胞活力的鉴别 实验一几种光学显微镜的使用
一、实验目的 了解几种光学显微镜的结构、工作原理、主要用途和使用方法；掌握使用普通显微镜提高分辨力的方法。 二、实验原理 (一)基本原理 一般实验室经常使用的光学显微镜都是由物镜、目镜、聚光器和光阑组成，普通显微镜它们的放大原理及光路图如下： AB物体．A1B l第一次成像，A2B2第二次成像，O l目镜．O2物镜， F1为O l的前焦点，F2为O2的前焦点 各种光学显微镜的光学放大原理基本相同，各种特殊用途的光镜不过只是在光源、物镜、聚光器等方面作了改动，或在其它方面增设了某些特殊的设备。 (二)几种光学显微镜 l、普通光学显微镜： 普通光学显微镜也叫复式显微镜，是最常见，最简单的显微镜。它适于观察一般固定的，有色的透明度较高的标本。其最大分辨力一般为0.2微米，从构造上可分光学、机械和电子三大系统。 2、暗视野显微镜： 暗视野显微镜是以丁达尔现象(Tyndall phenomenon)(即光的微粒散射现象)为基础设计的,它使用了特殊的聚光器进行斜射照明,因光源中心束不直入物镜，所以视野黑暗，而被检细胞器因斜射照明发生衍射和反射，所以发亮可见。暗视野显微镜可用增加光照方法增加物体与背景的反差，因而可观察到0．2—0．004微米直径的微小粒子，但它分不清被检物的细微构造，它常用于观察物体的存在与运动。而暗视野显微镜与普通光学显微镜的区别，主要在于聚光器的不同，致使照明方法有别。确切地说，称暗视野显微镜为暗视野照明更为贴切。它是照明光线仅照亮被检样品而不进入物镜。使视野背景暗黑，样品明亮的照明方法。 3、相差显微镜： 相差是指同一光线经过折射率不同的介质其相位发生变化并产生的差异。相位是指在某一时间上，光的波动所达到的位置。
细胞生物学实验
1. 什么是细胞培养？ 细胞生物学实验 指从动物活体体内取出组织，并将其分散为单个细胞（机械或酶消化），在体外模拟体内的生理环境，使其在人工培养条件下保持生长、分裂繁殖、细胞的接触性抑制以及细胞衰老过程等生命现象。 最常见的细胞一般有两种，一种是原代细胞，另一种是传代细胞。 原代细胞是指动物组织经过胰酶或胶原酶等酶类的消化，使其分散，从而获得单个细胞，再使这些单个细胞生长于培养容器中的过程。大多数组织可以制备原代细胞，但制备的方法略有不同，制备的细胞生长快慢及难易程度也不相同。 不同的原代细胞，其形态也不尽相同。一般将10代以内的细胞称之为原代细胞。 传代细胞一般指无限繁殖的细胞系，理论上这类细胞可以无限次的传代。做实验的时候也会经常使用这类细胞，如Hela、293、Vero 等细胞。 2. 细胞的生长周期 游离期：细胞刚接种到新的培养容器中到贴壁前的一段时期，这个时期的长短由细胞类型决定，从几分钟到几个小时不等。 贴壁期：细胞从游离状态变为贴附到培养器皿表面并展现出一定细胞形态的时期。 潜伏期：细胞在完成贴壁后，并不会马上进行增殖，会进行增殖所必须的物质和能量的储备，这个时候称之为潜伏期。
对数生长期：细胞在完成物质和能量储备后，开始大量的增殖的时期。这个时期的细胞活力旺盛，且状态稳定，我们所做的绝大多数实验都是在这个时期开展的。 停止期：随着细胞的生长，细胞密度越来越大，由于营养物质的消耗、细胞间的接触抑制等因素，细胞生长缓慢，甚至停止生长。这个时候，我们就要给细胞进行传代了，使细胞可以继续进行增殖，保持旺盛的活力。 3. 细胞生长所需要营养条件 细胞的培养所需要的营养成份一般来自于基础培养基（比如DMEM培养基）和血清。 基础培养基：主要是提供细胞生长所需要的氨基酸（组成蛋白质的基本单位）、维生素（细胞代谢中辅酶的组成成分）、无机离子（K+，Na+等）、碳水化合物（碳源和能量来源）和一些激素等营养物质。 血清：主要是提供一些基础培养基不能提供的生长因子和低分子的营养物质，此外它还有促进细胞的贴壁、中和有害重金属离子等作用。如果只提供基础培养基而不提供血清，绝大多数细胞是无法生长的。血清对于我们实验的重要性就不言而喻了，那么什么样的血清才算是合格的血清呢？ 合格的血清需要通过各种检测，包括无细菌，无真菌，无支原体检测，无病毒污染。血清一般呈现为淡黄色，透明状液体，由于含有大量的蛋白质等成分，会略有黏稠。以全式金公司的TransSerum EQ Fetal Bovine Serum (FS201-02)为例，它通过了牛腹泻病毒、牛副
生物学实验原理与技术 教学大纲
生物学实验原理与技术教学大纲 10.1教学任务： 本课程由植物生物学、生理学、微生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、生物化学和分子生物学等方面相关的实验理论知识、实验技术和实验方法组成，是一门与实验课相衔接的实验理论讲授课程，各部分内容在实验课开课前统一进行集中讲授，学生课后预习，为学生进行的实验操作奠定了理论基础。 10.2教学要求： 本课程是各门基础实验课程的前导课，涉及各个实验项目的原理与基本技术方法。因此，要求学生在实验前认真听教师讲解相关基础知识，积极思考、认真记录。课后认真复习、认真回答思考题，并参加每次实验前的预习测试。 10.3教学目的： 使实验课程与理论课程合理衔接，加强学生对实验的相关理论知识的理解与掌握，促进学生充分预习和对即将进行实验的基本技术和基本方法全面的理解。为学生进行的实验操作奠定理论基础。 11．学生应掌握的实验技术及实验能力 本课程是一门与实验课相衔接的实验理论讲授课，涉及8门生物学基础实验课程的实验原理、技术和方法。具体内容包括显微镜技术、分离类胡萝卜素和叶绿素、提取叶绿体色素、观察叶绿素的荧光现象、观察光对叶绿素的破坏作用、测定种子发芽率、观察呼吸运动的调节、麻醉家兔、气管插管、制备蛙类坐骨神经腓肠肌标本、证实反射弧的完整性与反射活动的关系、验证心肌有效不应期较长的特征、观察蛙期前收缩与代偿间歇、钝性分离气管、无菌操作技术、微生物
简单染色方法、血球计数板的使用、灭菌锅的使用方法、微生物分离纯化技术常规微生物涂片观察技术微生物培养技术、菌种保藏技术、无菌操作技术、微生物简单染色方法、血球计数板的使用、灭菌锅的使用方法、微生物分离纯化技术、常规微生物涂片观察技术、微生物培养技术、菌种保藏技术、显微镜技术、观察胀泡的形成、鉴别纺锤体、鉴别姐妹染色单体、植物染色体制片技术、染色体臂形成、观察细胞内多糖的分布、观察细胞内DNA的分布、原代细胞培养、传代细胞培养、细胞的消化分散、观察细胞融合的现象、詹纳斯绿染色、PEG诱导鸡静脉血的化学融合、植物组织培养技术、制作石蜡切片及HE染色、核酸的乙醇沉淀、测定RNA含量、测定核酸含量、定磷法测定核酸的含量、地衣酚法测定RNA含量、预处理组织、匀浆组织、提取核酸、核酸核蛋白（RNP）苯酚分离、剥离凝胶板、自溶处理、超声破碎、制冰盐浴、目测酶活力、免疫小鼠、颈部皮下注射抗原、腹腔注射抗原、统计处理数据、梯度稀释血清、离心分离血清、摘眼球取血、测抗体效价、体外重组DNA、连接DNA片段、凝胶回收DNA、CaCl2法制备感受态、转化外源DNA、PCR扩增、DNA琼脂糖凝胶电泳、碱裂解法提取质粒、蓝白斑筛选、限制性内切酶使用等。 本课程还加入了安全环保及习惯教育内容。主要内容包括火灾预防与逃生常识，触电防护知识，烧烫伤处理方法，实验室有毒废弃物处理常识，实验动物尸体处理常识，实验习惯教育及实验室环保教育等。 12．开设实验项目 开设实验项目一览表
细胞生物学实验指导(植物版)
细胞生物学实验 实验一不同显微镜的使用及细胞一般形态结构的观测[实验目的] 通过本实验，使学生巩固普通光学显微镜的使用，学习相差显微镜、暗视野显微镜和荧光显微镜的使用方法，学习显微测量及显微摄影的操作方法，增强对细胞的形态和真实大小的感性认识。 通过本实验操作，要求学生掌握细胞形态结构的基本观测方法与技术，为进一步的细胞生物学研究打好基础。 [实验原理] 应用显微镜的成像原理(详见翟中和等主编《细胞生物学》，第三章第一节)，同时借助显微镜的镜台测微尺和目镜测微尺，两尺配合使用，进行测量和运算，观察细胞形态，得出细胞的大小。 该实验完成需时6学时。 [实验材料、试剂和仪器] 一、仪器 普通光学显微镜、相差显微镜、暗视野显微镜、荧光显微镜、显微拍摄系统、37℃温箱、镜台测微尺、目镜测微尺等。 二、材料 洋葱根尖切片标本，念珠藻永久装片，兔肝细胞标本，夹竹桃花丝毛细胞，人口腔上皮细胞等。 三、试剂 生理盐水，10μg/mL罗丹明123染液（溶于甲醇，避光于4℃保存） [实验步骤] 一、暗视野显微镜观察夹竹桃花丝毛细胞 1、取一张清洁的载玻片，滴上一滴生理盐水。用镊子轻轻夹下一根夹竹桃花丝，置生理盐水中，盖上盖玻片，略微压片，用滤纸条吸去盖玻片四周多余的水分。 2、将上述装片置于显微镜载物台上，在10×物镜下找到夹竹桃花丝毛细胞清晰的图像。 3、换上暗视野聚光器，调节至最佳位置，通过聚光器上的调中螺旋调节聚光器的中心位置，得到最好的暗视野图像效果。 4、观察夹竹桃花丝毛细胞内部的显微结构和细胞质环流现象，并拍照。 5、换用高倍物镜观察时，要换用与高倍镜相匹配的暗视野聚光器，重复以上调节步骤。 二、相差显微镜观察夹竹桃花丝毛细胞 1、取一张清洁的载玻片，滴上一滴生理盐水。用镊子轻轻夹下一根夹竹桃花丝，置生
细胞生物学常用研究方法
Southern杂交: 是体外分析特异DNA序列的方法，操作时先用限制性内切酶将核DNA或线粒体DNA切成DNA片段，经凝胶电泳分离后，转移到醋酸纤维薄膜上，再用探针杂交，通过放射自显影，即可辨认出与探针互补的特殊核苷序列。 将RNA转移到薄膜上，用探针杂交，则称为Northern杂交。 RNAi技术: 是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达，所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的基因治疗领域。可以利用siRNA或siRNA表达载体快速、经济、简便的以序列特异方式剔除目的基因表达，所以现在已经成为探索基因功能的重要研究手段。 Southern杂交一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含量]。 扫描电镜技术：是用一束极细的电子束扫描样品，在样品表面激发出次级电子，次级电子的多少与样品表面结构有关，次级电子由探测器收集，信号经放大用来调制荧光屏上电子束的强度，显示出与电子束同步的扫描图像。 细胞显微分光光度计：用来描述薄膜、涂层厚度超过1微米的物件的光学性能的显微技术。 免疫荧光技术：将免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出，从而可对抗原进行细胞定位。 电镜超薄切片技术：超薄切片是为电镜观察提供极薄的切片样品的专门技术。用当代较好的超薄切片机，大多数生物材料，如果固定、包埋处理得合适，可以切成50-100微米的超薄切片。 Northern印迹杂交（Northern blot）。这是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。 放射自显影技术：放射自显影技术是利用放射性同位素的电离辐射对乳胶（含AgBr或AgCl）的感光作用，对细胞内生物大分子进行定性、定位与半定量研究的一种细胞化学技术。放射自显影技术（radioautography；autoradiography）用于研究标记化合物在机体、组织和细胞中的分布、定位、排出以及合成、更新、作用机理、作用部位等等。其原理是将放射性同位素（如14C和3H）标记的化合物导入生物体内，经过一段时间后，将标本制成切片或涂片，涂上卤化银乳胶，经一定时间的放射性曝光，组织中的放射性即可使乳胶感光。 核磁共振技术：可以直接研究溶液和活细胞中相对分子质量较小(20，000 道尔顿以下)的蛋白质、核酸以及其它分子的结构，而不损伤细胞。 DNA序列分析：在获得一个基因序列后，需要对其进行生物信息学分析，从中尽量发掘信
(完整版)细胞生物学实验测试题
细胞生物学实验测试题 1、试述荧光显微镜的原理和用途。（并操作） 原理：荧光显微镜是以紫外线为光源，用以照射被检物体，使之发出荧光，然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。 （滤光镜片：获得所需波长的激发光；光源：高压汞灯） 用途：荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光； 另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研 究的工具之一。 2、试述酸性磷酸酶显示法的原理及主要步骤。 原理：酸性磷酸酶（ACP）是溶酶体的标志酶，通常酸性磷酸酶在pH 为5左右时发挥作用能水解磷酸酯而释放出磷酸基，PO43-与底物中硝酸 铅反应生成磷酸铅沉淀物。由于这些沉淀物是无色的，需再与黄色的硫化 铵反应，生成棕黄色到棕黑色的硫化铅沉淀而被显示出来。其反应过程如 下： β-甘油磷酸钠+酸性磷酸酶→甘油+PO43- PO43-+Pb(NO3)2 →Pb3(PO4)2↓ Pb3(PO4)2+(NH4)2S →PbS↓(棕黑色) 主要步骤： 1、前处理：获取小白鼠或大白兔腹腔液（猪肝） 2、制片： （1）、将腹腔液（肝细胞悬液）滴一滴于冰冻的干净载玻片上，用牙签涂开，自然干燥。 （2）、放入10%中性福尔马林固定液中固定30min。 （3）、蒸馏水中漂洗,3-5次。（洗去固定液） （4）、磷酸酶作用液，37°C，30Min。 （5）、蒸馏水中漂洗3次，5min一次。（洗去游离铅离子） （6）、1%硫化铵处理（3-5min）; （7）、吉姆沙染液复染15min;（使细胞核、轮廓显示出来） （8）、制片观察。 结果：阳性细胞内有大小不等的棕色或棕黑色的颗粒即为酸性磷酸酶。 对照实验：标本放入作用液前先用高温（50℃）处理 30min，使酶失去活 性，做好标记，其他步骤相同。 3、试述DNA的Feulgen染色法的原理及主要步骤。 原理：DNA经稀盐酸（1mol/L HCL溶液）处理后，可使嘌呤碱与脱氧
细胞生物学实验指导(精)
细胞生物学实验指导 细胞生物学的发展总是依赖于技术和实验手段的进步,所以学习细胞生物学的技术和方法至关重要。 实验一普通显微镜及其使用（装片观察） 一、目的要求： 1、掌握显微镜的构造、油浸系的原理、使用方法、保护要点。 2、参观了解其他各类显微镜。 二、材料：普通光学显微镜及其他显微镜、细菌标本片、香柏油、二甲苯、擦镜纸。 三、方法和步骤： 1、介绍普通光学显微镜的构造 机械部分：镜座、镜臂、镜筒、转换器、载物台、调焦螺旋。 光学部分：接目镜、物镜、反光镜、聚光器。 2、油镜的原理及使用方法 原理：油镜头的晶片细小，进入镜中的光线亦少，光线经聚光器，通过载玻片进油镜时，由于空气介质和玻璃介质的折射率不一样，光线因折射而损失，使视野更暗。在载玻片和油镜之间加上和玻璃折光系数相同的香柏油，光线直接进入镜头，不发生折射，视野明亮，便于观察。 3、如何维护显微镜：机械部分的维护，光学部分的维护。 4、注意事项： （1）观察油镜载片时，先在载片上有菌影的地方滴1-2滴香柏油，然后放载物台中央，眼侧面看，慢慢降低油镜浸入香柏油中，镜头几乎接触标本。再用左眼在接目镜观察，同时慢慢旋动粗螺旋提起镜筒至能模糊看到物象时，再转动微调螺旋，直至看清晰为止。注意镜头离开油，就不能看清，重新按刚才的步骤进行。 （2）油镜使用过后，立即用擦镜纸擦拭镜头，如油渍已干，则可用香柏油粘二甲苯擦拭镜
头，再用干净擦镜纸擦去二甲苯。 5、观察几种细菌标本片。 6、示教看相差显微镜和荧光显微镜。 四、作业及思考题： 1、油镜的原理是什么？ 2、光线强弱如何调节？与哪些部件有关？ 实验二、细胞膜的渗透性 实验目的 了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。 实验原理 将红细胞放入数种等渗溶液中，由于红细胞对各种溶质的透性不同，有的溶质可以渗入，有的不能渗入，渗入的溶质能够提高红细胞的渗透压，所以促使水分进入细胞，引起溶血，由于溶质透入速度互不相同，因此溶血时间也不相同。 实验用品 一、器材 50ml烧杯, 试管（1～10cm）, 10ml移液管, 试管架。 二、材料 羊血。 三、试剂0.17mol/L氯化钠，0.17mol/L氯化胺，0.17mol/L醋酸胺，0.17mol/L硝酸钠，0.12mol/草酸胺，0.12mol/硫酸钠，0.32mol/葡萄糖，0.32mol/甘油，0.32mol/乙醇，0.32mol/丙酮。 实验方法 一、羊血细胞悬液 取50ml小烧杯一个，加1份羊血和10份0.17mol/L氯化钠，形成一种不透 明的红色液体，此即稀释的羊血。
细胞生物学实验
实验室规则和要求 一般规定 1.上课第一天请先熟悉环境，牢记“安全”是进行任何实验最重要的事项。 2.在实验室内请穿著实验衣（最好长及膝盖下），避免穿著凉鞋、拖鞋（脚 趾不要裸露）。留有长发者，需以橡皮圈束于后，以防止引火危险或污染实验。 3.在实验室内禁止吸烟、吃东西、饮食、化妆、嚼口香糖、嬉戏奔跑，食 物饮料勿存放于实验室的冰箱中，实验桌上勿堆放书包、书籍、衣服外 套及杂物等。 4.所有实验仪器、耗材、药品等均属实验室所有，不得携出实验室外。每 组分配之仪器、耗材请在课程开始前确定清点与保管，课程结束后如数 清点缴回。公用仪器请善加爱惜使用。实验前后，请把工作区域清理擦 拭，并随时保持环境清洁。 5.实验前详阅实验内容，了解实验细节的原理及操作，注意上课所告知的 注意事项。实验进行中有任何状况或疑问，随时发问，切勿私自变更实 验程序。打翻任何药品试剂及器皿时，请随即清理。实验后，适切记下 自己的结果，严禁抄袭，确实关闭不用之电源、水、酒精灯及瓦斯等。 6.身体不适、睡眠不足、精神不济或注意力无法集中，请立即停止实验。 实验时间若延长，请注意时间的管制及自身的安全，不可自行逗留实验 室。 7.实验完毕，请清理实验室、倒垃圾、灭菌、关闭灯光及冷气，离开实验 室前记得洗手。 8.任何意外事件应立即报告教师或实验室管理人员，并应熟知相关之应变 措施。
药品 1.使用任何药品，请先看清楚标示说明、注意事项，翻阅物质安全资料， 查明是否对人体造成伤害，使用完毕请放回原位。 2.新配制的试剂请清楚注明内容物、浓度、注意事项及配制日期，为避免 污染，勿将未用完的药剂倒回容器内。 3.挥发性、腐蚀性、有毒溶剂（如甲醇、丙酮、醋酸、氯仿、盐酸、硫酸、 -巯基乙醇、甲醛、酚等）要在排烟柜中戴手套量取配制，取用完应随即盖好盖子，若不小心打翻试剂，马上处理。 4.有毒、致癌药剂例如丙稀酰胺（神经毒）、溴化乙啶（突变剂）、SDS（粉 尘）请戴手套及口罩取用，并勿到处污染，脱下手套后，养成洗手的好 习惯。 5.使用后的实验试剂和材料，应放在专用的收集桶内。固体培养基、琼脂 糖或有毒物品不得倒入水槽或下水道中。 6.使用刻度吸管取物时，切勿用嘴吸取，请用自动吸管或吸耳球。 仪器 1.使用仪器前先了解其性能、配备及正确操作方法，零件及附件严禁拆卸， 勿私自调整，并注意插座电压（110V或220V）之类别。 2.使用离心机时，离心管要两两对称、重量平衡，离心机未停下不得打开 盖子。冷冻离心机于开机状态时，务必盖紧盖子，以保持离心槽之低温并避免结霜。 3.电源供应器有高电压，切勿触摸电极或电泳槽内溶液，手湿切勿开启电 源。
细胞生物学发展简史
细胞生物学发展简史公司内部编号：（GOOD-TMMT-MMUT-UUPTY-UUYY-DTTI-
细胞生物学发展简史 一细胞的发现和细胞学说的建立 1665年，英国学者Robert Hooke用自制的显微镜观察栎树软木塞的薄切片，发现了其中有许多蜂窝状的小室，并将这些小室命名为cell。实际上当时看到的是植物细胞的细胞壁。此后，生物学家用cell一词描述生物体的基本结构单位，中文翻译为细胞。Hooke对有关细胞的首次描述见于1665年他的《显微图谱》中，因此人们认为细胞的发现是在1665年。 真正观察活细胞的是荷兰科学家Antony von Leeuwenhoek，他用设计较好的显微镜观察池塘水中的原生动物、蛙肠道内的原生动物、人类和哺乳动物的精子，并于1674年在观察鱼的红细胞时描述了细胞核的结构。 由以上可见，细胞生物学的基础建立于17世纪，并且Hooke和Leeuwenhoek两位科学家为此做出了重要贡献。 在Hooke发现细胞后的近170年中，人们用光学显微镜相继发现了一些不同类型的细胞，但对细胞的认识基本上没什么新的进展。直到19世纪30年代，显微镜制造技术有了明显的改进，分辨率提高到1μm以内；同时还由于切片机的制造成功，从而对细胞的观察有了许多新的进展，细胞核、核仁、细胞的原生质等被揭示，人们才真正认识到细胞的生物学意义。 1838~1839年，德国植物学家Scheleiden（1838年）和动物学家Schwann （1839年）总结前人的工作，综合了植物和动物组织中细胞的结构，提出了“细胞学说（cell theory）”，指出“一切生物，从单细胞生物到高等动、植物都是由细胞组成的；细胞是生物体结构和功能的基本单位”。后来德国科学家
细胞生物学实验指导书09年
实验一普通光学显微镜的构造和使用 一、目的要求 1了解显微镜的基本构造和使用方法 2 掌握油镜的原理和使用方法 二、显微镜的基本结构及油镜的工作原理 1．显微镜的基本构造 光学部分：接目镜、接物镜、照明装置（聚光镜、虹彩光圈、反光镜等）。 机械部分：镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件。 2．显微镜的放大倍数和分辨率 放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放大倍数 显微镜的分辨率：表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力3．油镜的使用原理 当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。 三、器材 1．永久切片 2. 溶液或试剂：香柏油、二甲苯。 3. 仪器或其他用具：显微镜、擦镜纸等。 四、操作步骤 1．观察前的准备 （1）显微镜的安置，检查零件是否齐全，镜头是否清洁。 （2）调节光源 2．显微镜观察
（1）低倍镜观察 （2）高倍镜观察 （3）油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光镜，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。3．显微镜用毕后的处理 观察完毕，上升镜筒，用擦镜纸和二甲苯清洗镜头，后将镜体全部复原。 五、思考题 1．用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间滴加什么油？起什么作用？ 2．为什么在使用高倍镜及油镜时应特别注意避免粗调节器的误操作？ 实验二胞间连丝的观察 一、实验目的 观察植物细胞的胞间连丝，加深对胞间连丝功能的认识． 二、实验原理 植物细胞的细胞壁上有许多原生质的细丝，称胞间连丝。相邻细胞的胞间连丝相互联接，在细胞间的物质运输与信息传递中起桥粱作用，并使细胞的各种生理活动协调一致，使植物体成为统一的有机体。用合适的植物细胞为材料，经简单处理，即能方便地看到胞间连丝。 三、实验材料 红辣椒表皮细胞临时装片、柿胚乳细胞间胞间连丝切片 四、实验步骤
(完整版)16考研厦大生科院初试第一,分享备考经验+复试环节
16考研厦大生科院初试第一，分享备考经验+复试环节 本人是华侨大学的，2016届考厦大生科院，是聚英厦大考研网的学员，今年以初试第一，复试第七名的成绩考进厦门大学生命科学院，广大研友的要求分享一下我的备考经验：包括初试经验分享（已更新），考研时间规划和所用书籍，包括初复试环节和复习注意事项，十分详尽，希望同学们做好笔记~ 环节一、初试 1.考研初试分数分配 初试科目： 英语：100 政治100 832生物化学：150 620细胞生物学150 厦大生科院近几年分数线： 2014年：322分2015年：310分2016年：310分 近几年生命科学院专业课压分比较严重，所以与厦大理科基本保持一致，而厦大理科线每年浮动小，如果没有重大改革，分数线不会有较大变化。总体来说，厦大生科院较之其他学院，虽然分数线比较低，但试卷题目难度大，而且招生特点是宁缺毋滥，近两年都收不满，都需要调剂，调剂的原则上要求考生是985/211的院校出身。 2.620细胞生物学的初试情况 2016年620试卷分数分配 选择题15题，30分；名词解释5题，30分；问答题2题，30分；英译汉3题，30分；实验题3题，30分。 其中选择题、名词解释、问答题最基础，但是以16年情况来看，出的偏题怪题比较多，这类题型主要来自中科院生物学的往年考研题，大家可以关注一下。而英译汉的题型要求熟记基本名词解释的英文，重点掌握关于癌症和癌细胞、生态系统。实验题基本上是厦大生命科学院常用的一些实验技术，重点掌握蛋白质与蛋白质之间的相互作用。另外2015年及之前每年都有考到RNA干扰，但2016年没考，该技术很可能会被基因编辑CRISPR所取代，16年复试有考，要重视这个动向。 关于初试的目标分数，建议至少要考到320分，因为如果初试分数太低，复试很容易被淘汰。由于厦大生科院专业课压分比较严重，主观题给的分数低，政治和英语的平均分最好都要过60,620分子生物细胞学和832生物化学平均要达到100分，这样总分加起来：60+60+100+100=320分，初试基本上没有问题。 在这里推荐一下聚英厦大的英语政治的暑期强化班和最后冲刺班，会邀请北京的大牛老师像陈正康、李海洋来讲课，一方面你可以把握一下考试重点在哪里，另一方面尤其是英语可以学到很多非常实用的应试技巧。专业课的话，推荐聚英官网的《620分子细胞生物学复习全书》和《620分子细胞生物学实验用书》，可以帮你梳理知识点，把握核心考点。 2017厦大生科院考研资料
细胞生物学实验指导
实验一显微镜的结构及使用 [实验目的] （一）熟悉显微镜的结构及各部件性能。 （二）掌握显微镜的使用方法。 （三）了解显微镜的维护方法。 [实验原理] 虽然显微镜的目镜和物镜的结构很复杂，但它的作用相当于一个凸透镜，其成像原理和光路图如图1所示，被检物体AB放在物镜（O1）下方的1—2倍焦距之间，则在物镜（O1）后形成一个倒立的放大实像A1B1，这个实像正好位于目镜（O2）的下焦点之内，通过目镜后形成一个放大的虚像A2B2，这个虚像通过调焦装置使其落在眼睛的明视距离处，即25cm,使所看到的物体最清晰，也就是说虚像A2B2是在眼球晶状体的两倍焦距之外，通过眼球后在视网膜形成一个倒立的A2B2缩小像A3B3。 [实验器材]擦镜纸字母装片羊毛交叉擦片普通光学显微镜二甲苯香柏油 三内容与方法： 普通光学显微镜(Microscope)的外形和结构因类型不同略有差异，但基本结构和功能是相似的。（图2） （一）微镜的基本结构及功能：光学显微镜由机械部分、照明部分和光学部分构成。1.机械部分： （1）镜座：位于底部的金属座。一般为马蹄形，用以支持和稳定整个镜体。 （2）镜柱：镜座与镜臂相连的短柱。 （3）镜臂：镜柱上方弯曲部分，是取用显微镜时握拿的部位。 （4）镜筒：在镜臂的上方倾斜的金属园筒，上端装有目镜、下端转折处装有棱镜，使光线转折450。其上有一固定螺钉将镜筒连接于镜臂上方。 （5）调节器：在镜柱两侧有大小两个螺旋，大螺旋为粗调节器，转动时能使载物台快速升降。调节范围较大，适于低倍镜调焦用。小螺旋为细调节器，转动是载物台仅缓慢升降，调节范围较小，适于调节物象的清晰度。此外，在右侧粗调节器内侧有一窄环，称粗调松紧调节轮，用以调节粗调节器的松紧度。向外转时偏紧，向内转时偏松。左侧粗调节器内侧有一粗调限位调节环凸柄，向上推紧时，镜台上的最高点被固定（这两个环一般不需调节）。（6）旋转盘：又称物镜转换器，安装在镜筒下端，为一可旋转的圆盘，上有4个圆孔，
生物学一级学科(专业)攻读硕士学位研究生培养方案
生物学一级学科（专业）攻读硕士学位研究生培养方案 （专业代码：） 一、培养目标 本学科培养的研究生，要热爱祖国，崇尚科学，诚实守信；应能较好地掌握辨证唯物主义的原理与方法，具有良好的科学素养和合作精神，学风严谨，谦虚、进取、敬业，有较强的事业心和社会责任感；具有健康的身体和心理素质。 本学科研究生应掌握扎实宽广的生物学基础理论和系统的各自相关的专业知识与实验科研技能，掌握一门外语（一般为英语）；具有从事科学研究工作或独立担负专门技术工作的能力。毕业后可从事生命学科及相关学科的科研、教学、环境保护及科技管理等方面的工作。 二、二级学科各专业及研究方向 1. 植物学 2. 动物学 3. 微生物学 4. 遗传学 5. 发育生物学 6. 细胞生物学 7. 生物化学与分子生物学 8. 海洋生物学 9. 生物物理学
三、学制与学习年限 全日制硕士研究生的学制为3年，在校学习期限为2-4年。3年制硕士研究生可申请提前毕业，最长提前时间不能超过一年。成绩优秀，提前完成论文、且在SCI刊物上发表与毕业论文有关的研究论文者，硕士论文经学位委员会指定的3人以上指导小组预答辩，推荐进行硕士论文答辩方可向学校申请。 四、培养方式 1．根据宽口径、厚基础的原则，本学科按生物学一级学科招收硕士研究生，按一级学科开设专业基础课程，在学生进入到实验室后，由导师或导师组对学生进行专业知识和专业技能的培训，完成相应的专业学习。 2．本学科鼓励开展硕士研究生的“三种经历”工作，即海外学习经历、第二校园经历和社会实践经历，在海外学习经历、第二校园经历中实行双导师合作培养。 五、应修总学分数 硕士生的课程学习一般为一年，应修总学分不少于30学分，其中必修课不少于22学分（含前沿讲座与社会实践），选修课不少于8学分；具体课程见课程设置一览表。 六、课程的类别及设置 硕士研究生课程分为必修课与选修课两大类，具体课程见课程设置一览表。 1、必修课22学分
细胞生物学实验
细胞培养基本理论 一细胞培养概述 细胞培养（cell culture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。 群体培养（mass culture）将大量细胞置于培养瓶中，让其贴壁或悬浮生长，形成均匀的单层细胞或单细胞悬液。 克隆培养（clone culture）即将少数的细胞加入培养瓶中，贴壁后彼此间隔距离较远，经过繁殖每一个细胞形成一个集落，称为克隆。 组织培养（tissue culture）指把活体的组织取出，分成小块，直接置于培养瓶底或通过胶原纤维血浆支持物的培养瓶底来进行培养。 特点：1.，组织不失散，细胞保持原有的组织关系。2，形成生长(cut growth)或形成由扁薄细胞构成的单层细胞培养物。3，在体外生长时，细胞间呈相互依存、互相影响的关系。 器官培养（organ culture）将活体中器官或器官一部分取出，在体外生长、生存，并使其保持器官原有的结构和功能特征的培养。 特点：1，培养的器官在合适的条件下能生长和分化，存活数周或1 年。2，观察受限，只能用组织切片的方法观察或用透射电镜、扫描电镜观察。 细胞培养优点：.1．活细胞：同时、大量、均一性、重复性；2．可控制：各种物理、化学、生物等因素可调控；3．研究方法多样：倒置、荧光、电子、激光共焦显微镜、流式细胞术、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记；4．应用广：不同物种、年龄、组织，正常或异常缺点：人工所模拟的条件与体内实际情况仍不完全相同；当细胞被置于体外培养后， 生活在缺乏动态平衡的环境中，时间久了，必然发生变化。 三细胞的形态和类型由不同生长方式造成的差异 呈悬浮生长时，因生长在液体环境中，胞内渗透压高于周围液体环境，因此胞体基本呈圆形。呈贴附于支持物上生长的细胞，开始为圆形，很快过渡成扁平形，并逐渐恢复至原先的细胞形态. 细胞来源：成纤维型细胞；上皮型细胞；其它，不定型 细胞按生长方式：贴壁型细胞（Monolayer cells）；悬浮型细胞（Suspension cells）绝大多数有机体细胞属贴壁型细胞，只有少数细胞类型如某些肿瘤细胞和白细胞可在悬浮状态下生长。 按细胞形态(贴壁细胞）：成纤维型细胞；上皮型细胞；其它，不定型 贴壁型生长细胞或锚着依存性细胞 处于体外培养状态下的贴附生长型细胞在形态上表现单一而失去了在体内原有的某些特征。形态各异反映其胚层起源。如来源于内外胚层的细胞多呈上皮型；来自中胚层的则易呈成纤维细胞型。分为成纤维型细胞；皮型细胞；游走型细胞；多形型细胞 贴壁型细胞形态比较 成纤维型细胞：梭形或不规则三角形；中央有卵圆形核；胞质向外伸出长短不同的突起；中胚层间质起源 上皮型细胞：扁平不规则多角形；细胞中央有圆形核；紧密相连单层膜样生长；内、外胚层细胞如皮肤、表皮衍生物、消化管上皮等 游走型细胞：散在生长，一般不连成片；细胞质经常伸出伪足或突起；活跃的游走或变形运动；羊水细胞培养的早期 多形细胞型：难以确定规律和稳定的形态；如神经组织的细胞等
细胞生物学实验员招聘实验考试
细胞生物学实验 1 考核方式 平时实验记录，实验报告，实验操作，考试笔试 2 考核内容 仪器设备使用；所开设实验：实验原理、步骤作用、试剂作用、结果分析、注意事项、实验异常原因分析；其它：实验安全，试剂使用注意事项，试剂配制，试剂标签包括的内容，等等。 2.1仪器设备使用 本课程重点掌握：普通双目显微镜，离心机，微量取液器，组织匀浆机 一般通用仪器：电子天平，恒温水浴，恒温培养厢，低温冰箱，烧杯，量筒，容量瓶，离心管，血球计数板。 生物技术专业加：系统显微镜及其自动曝光系统 2.2 开设实验 细胞化学：细胞总体蛋白和碱性蛋白的定位 理解运用固绿染色原理（例：pH5.5固绿染色的是哪些蛋白质？） 蛋白质两性电解质性质 固绿染色特点 细胞内蛋白质酸碱性 10%福尔马林作用？ 5%三氯乙酸作用？ 染色异常的原因分析 实验成功需要注意事项？ 细胞化学：孚尔根（Feulgen）DNA染色法 理解运用实验原理。 固定液有什么作用？ 热盐酸处理的作用？ Schiff试剂的有效成分是什么？ 漂洗液的有效成分是什么，有什么作用？ 显示DNA时，根材料的哪部分最好？ 显微镜下怎样分辨细胞的间、前、中、后、末五个时期？ 一个良好的压片至少具备哪些特征？（列举3个） 实验成功的关键是什么？ 细胞生理：细胞膜的通透性 理解运用实验原理。 能够从实验数据推理，得出结论。（例：从下表中数据和描述，你能得出什么结论？）从EXCEL制图。 三线表制作。 图表格式的规范。（例：指出下表格式的欠规范之处）。 细胞分离技术：叶绿体的分离及荧光观察 掌握细胞分离的一般原理。取样原则？保护方法？细胞裂解方法及选择？ 差速离心。
细胞生物学实验实验报告
细胞生物学实验 班级：生科142 姓名：旷江 学号：10143131 组号： 2 小组成员：旷江、韦立尧、莫霞指导老师：范立强、李鹏飞 华东理工大学 应用生物学系
摘要 本次细胞生物学实验通过细胞形态与结构的观察技术，细胞化学，细胞生理，细胞培养与分析，细胞周期分析，细胞成分分离与分析，细胞增殖与染色等技术对动植物细胞进行细胞形态结构的观察、细胞生理过程的研究、细胞培养与细胞分析、细胞冻存与复苏等，以此来研究动植物细胞的结构、功能和各种生命规律。 关键词：细胞增殖、细胞染色、冻存复苏、生理过程、形态结构
Abstract The cell biology experiment was carried out by cell morphology and structure observation technique, cytochemistry, cell physiology, cell culture and analysis, cell cycle analysis, cell fractionation and analysis, cell proliferation and staining. Observation of cell physiological processes, cell culture and cell analysis, cell cryopreservation and resuscitation, in order to study the structure of animals and plants, functions and a variety of laws of life. Key words: cell proliferation, cell staining, cryopreservation, physiological processes, morphological structur
(完整版)细胞生物学学习心得
细胞生物学学习体会 通过网络课程学习,有幸聆听到王金发教授对《细胞生物学》课程的讲授，使我不仅学到了细胞生物学专业新的知识与研究技术、方法,而且在教学方面也受益非浅。下面就我的学习谈一些体会。 一、全面学习了细胞生物学的专业知识 《细胞生物学》是一门包容量大、发展迅速的学科。内容涉及生物膜的结构与功能；内膜系统区室化形成及各种细胞器的结构与功能；细胞信号转导；细胞核、染色体以及基因表达；细胞骨架体系；细胞增殖及其调控；细胞分化、癌变及其调控；细胞的衰老与程序性死亡；细胞的起源与进化；细胞工程技术等多个方面。 (一)对细胞生物学的专业知识有了更深的认识。 1、细胞通讯方面 记得第一次听王老师的课就是讲授细胞的通讯，在多细胞生物中，细胞不是孤立存在的，而是生活在细胞社会中，它们必须协调一致，才能维持机体的正常生理机能，它们的协调是通过细胞通讯来完成的。细胞通讯是通过信号分子与受体的识别，从而在靶细胞内产生一系列反应的过程。信号分子有第一信使和第二信使之分，第二信使位于细胞内，由第一信使与受体识别后最先在胞内产生的，它主要与细胞内受体作用，所以受体也可分为表面受体和胞内受体。信号分子与受体的识别作用具有特异性。细胞信号传递所发生的反应有快速反应和慢速反应。快速反应是信号分子与受体作用后直接引起细胞内的一系列代谢反应；慢速反应则需要引起基因表达，再表现出各种代谢反应。细胞通讯过程是个复杂的过程，一个细胞的周围有上百种不同的信号分子，细胞要对这些信号分子进行分析，做出正确的反应。信号转换的研究在近年很热门，但进展缓慢，主要是因为信号转换的复杂性，不同信号的组合产生的效应是不一样的。 2、蛋白质的合成和分选机理 蛋白质的合成是在核糖体上，有两种合成体系，一种是在细胞质中游离的核糖体上，另一种是在膜旁核糖体上合成，它们合成的蛋白质将分布到不同的部
细胞生物学实验教案大全
细胞生物学实验教案 【经典学习资料，收藏必备】
实验一、细胞形态结构与几种细胞器的观察 【实验目的】 在普通光学显微镜下识别细胞和细胞器的形态结构，掌握生物绘图的方法。 【实验原理】 细胞在形态上是多种多样的，有球形、椭圆形、扁平形、立方形、梭形、星形等。虽然细胞的形状各异，但是它们却有共同的基本结构特点，都由细胞膜（动物）、细胞壁（植物）、细胞质和细胞核组成。细胞中的各种细胞器，如线粒体、高尔基体、中心体、核仁、染色体等，一般经过一定固定染色处理后，大多数在光学显微镜下是可以看见的（图）。细胞器的形态结构在普通光学显微镜下与电子显微镜下所看到的结构有很大的差别。 （自拍图） （a）（b） （c）（d） 图 1 细胞形态结构 a. 柿胚乳细胞示胞间连丝； b. 马蛔虫受精卵分裂中期示中心粒； c. 兔的神经细胞中高尔基体； d.小鼠肝细胞线粒体 【实验仪器、材料和试剂】 1. 仪器：复式显微镜、擦镜纸 2．材料：洋葱根尖切片、小白鼠肝切片、兔神经节切片、马蛔虫受精卵切片3．香柏油或石蜡油、二甲苯 【方法与步骤】
一、洋葱根尖切片细胞的观察 先用低倍镜观察根尖的纵切面，注意分生区、伸长区、成熟区细胞的异同，然后再仔细观察细胞的形态结构，特别注意细胞的形状、大小，以及细胞壁、细胞核、核仁、细胞质、液泡的形态结构。 二、兔神经节细胞切片高尔基体的观察 先在低倍镜下找到兔神经节细胞，然后转用高倍镜观察，可看到细胞内淡黄色的背景上有黄褐色的细胞核，核的周围分布着许多深褐色的（硝酸银镀染）高尔基体，呈弯曲的线状，颗粒状，少量分散在细胞质。 三、小白鼠肝细胞切片线粒体的观察 先用低倍镜后用高倍镜观察，可见到许多肝小叶，每小叶有许多紧密排列成索状的多角形的肝细胞，细胞中央有大而圆的细胞核。这时，转用油镜观察，可见到细胞质内分布着许多被苏木精染成深紫色的线粒体，呈颗粒状和线状。 四、马蛔虫受精卵切片中心体的观察 1．取马蛔虫受精卵切片，在显微镜下找到充满子宫腔的受精卵，每个马蛔虫受精卵外围有一层较厚的卵膜，膜内有宽大的围卵腔，各围卵腔内有处在不同分裂期的卵细胞。找到分裂中期的细胞，在细胞中央被染成蓝色条状或棒状的结构，这就是染色体。在染色体两侧可见各有一个较小的，亦被染成蓝色的小粒，称中心粒。在中心粒的周围可见呈放射状的星丝。 实验一、细胞的显微测量 【实验目的】 掌握显微测微计的基本原理及使用方法。 【实验原理】 细胞长度、面积、体积的测量是研究正常的或病理组织细胞的基本方法之一。在显微镜下用来测量细胞长度的工具叫显微测量计，由目镜测微尺（ocular micrometer）和镜台测微尺（stage micrometer）组成，两尺要配合使用。目镜测微尺是放在目镜内的一直径为2cm圆形玻片上，里面有100等分格的刻度尺。每一小格表示的实际长度随不同的显微镜、不同放大倍数的物镜而不同。镜台测微尺是一块特制的载玻片，在它的中央由一片圆形盖片封固着一具有精细刻度的标尺，标尺全长为lmm，分为100等份的小格，每小格的长度为0.01 mm（10μm），标尺的外围有一小黑环，便于找到标尺的位置。显微测量时，先用镜台测微尺标定目镜测微尺每小格所表示的实际长度。在测量细胞时，移去镜台测微尺，换上被测标本，用目镜测微尺即可测得观察标本的实际长度。 【实验仪器、材料和试剂】 （一）仪器：显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、解剖剪、解剖镊、注射器、载玻片、盖玻片、试管、无菌采血针 （二）材料：血涂片 （三）试剂：生理盐水、瑞氏（Wright）染色液 【方法与步骤】