丁香叶的研究现状及展望

丁香叶的研究现状及展望

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作者：王录娜李永吉管庆霞王锐

【摘要】随着对丁香叶研究的不断深入，近年来对中药丁香叶多方面的认识和研究取得了较大进展。文章对丁香叶的植物学及生药学研究、化学成分、含量测定、药理、毒理学研究、剂型研究及临床应用、指纹图谱研究加以综述，为开发利用这一天然资源提供科学依据。【关键词】丁香叶化学成分含量测定剂型研究指纹图谱综述

丁香叶系木犀科Oleaceae丁香属Syringa植物紫丁香Syringa oblata Lindl.，朝鲜丁香Syringa diatata Nakai或洋丁香Syringa vulgaris L.的干燥叶。丁香叶的药用价值早为民间所认知，其煎剂用于治疗暴火眼和痢疾。现代对丁香叶已经有了较为全面深入的研究。本研究就其植物学及生药学研究、化学成分、含量测定、药理、毒理学研究、剂型研究及临床应用、指纹图谱研究作一概述，为研究丁香叶及其制剂提供科学可靠的依据。

1 植物学及生药学研究

1.1 植物资源分布木犀科丁香属植物主要分布区在中国、朝鲜、日

本以及欧洲东南部。中国是丁香属的自然分布中心，主要分布区在中国西南、西北、华北、东北等地区［1］。

1.2 原植物形态紫丁香、朝鲜丁香、洋丁香均为灌木，叶宽卵形、卵形、披针形，花白色至紫红色，圆锥花序。重要区别在于紫丁香叶一般宽略大于长；朝鲜丁香叶长略大于宽；洋丁香叶片较大［2］。

1.3 采收期及采收部位研究由于中药材的质量与不同生长季节密切相关，王艳宏等［3］采用RP-HPLC测定不同生长季节紫丁香叶中丁香苦苷的含量，得出9、10月是紫丁香叶采收的最佳时期，此时不仅有效成分高，而且不会影响紫丁香叶资源的长期利用。赵海鹏等［4］的研究也表明不同生长发育期和不同空间的紫丁香叶中丁香苦苷含量动态变化具有一定的规律。

1.4 显微特征［2］紫丁香叶、朝鲜丁香叶、洋丁香叶的横切面显微特征显示出其种间差异，表现在表皮细胞角质层厚度、维管束、腺鳞、气孔等的存在与否。气孔、腺鳞、双腺鳞、导管是其粉末的显微特性。

1.5 理化鉴别［2］

1.5.1 颜色反应取紫丁香、洋丁香和朝鲜丁香叶粉末的供试品溶液：①加l％三氯化铁乙醇液呈绿色；②加2％钼酸铵试液显黄色；

③加新配置的重氮化试液呈深红色。

1.5.2 薄层鉴别紫丁香、洋丁香和朝鲜丁香叶薄层结果基本一致，抑菌活性成分丁香苦苷A、酪醇与3，4-二羟基苯乙醇等对照品均可被检出并分离较好。

2 化学成分

紫丁香叶的活性物质基础主要为酪醇、3,4-二羟基苯乙醇、对羟基肉桂酸和3,4-二羟基苯甲酸、丁香苦苷等［5］成分。卢丹等［6］从紫丁香叶中提取、分离并鉴定出黄柏内酯(obaculactone)、芒柄花素(formonometin)、丁香酯素(syrinaresiol)、呋喃甲酸(2-furancarboxylic acid,)、D-甘露醇(D-mannitol)和丁二酸(succinic acid) 6个单体化合物。魏征骥等［7］从紫丁香叶中分离得到3个单体化合物：羽扇豆烷三萜类化合物lup-20(29)-en-3-one，正二十九烷和4,19-二甲基-12,13-二羟基二十二烷。紫丁香叶挥发油成分的研究亦有报道［8］。

有文献［9］表明洋丁香叶中已分离出酪醇、3,4-二羟基苯乙醇、齐墩果酸、熊果酸、山楂酸、阿魏酸、咖啡酸和桂皮酸等有机酸类成分和紫丁香苷元、丁香苦苷、橄榄苦苷、洋丁香酚苷等25种环烯醚萜苷元和苷类成分以及jamindine和jaminine两种生物碱成分。

据报道［10］，朝鲜丁香叶以水提取浓缩，上HPD500大孔树脂吸附柱，分别用水、30%乙醇、50%乙醇洗脱,收集30%、50%乙醇洗脱液，醋酸乙酯萃取上硅胶柱分离。从中分离得到酪醇、3-甲基-4-羟基苯丙酸、3,4-二羟基苯乙醇、3,4-二羟基苯甲酸、丁香苦苷A、甘露醇等成分。其中以丁香苦苷A含量最高，其相对含量占50%乙醇洗脱部分的1/3以上［11］。另外，木犀科丁香叶中黄酮类化合物［12］、多糖成分［13］等化学成分的研究也有相应的报道。

3 含量测定

丁香叶中成分复杂，现对近几年对其含量测定研究的新进展加以介

绍。

3.1 高效液相色谱（HPLC）法 HPLC法为测定中药有效成分的常用方法，具有快速、简便、分离效率高等特点。付起凤等［14］用HPLC 测定广炎灵粉针中丁香苦苷A的含量。结果显示此方法点样量在0.50～3.00 μg范围内线性关系良好，平均加样回收率为99.61%。张淑蓉等［15］用Symmetry C18柱测定了紫丁香叶中原儿茶酸的含量。

3.2 气相色谱法钦浩等［16］利用溶剂提取的方法对木犀科丁香叶中的丁香酚进行提取,并采用气相色谱对丁香酚进行含量测定。

3.3 气相色谱质谱计算机联用法卢丹等［8］采用此技术对新鲜紫丁香叶中挥发油成分进行了分析，检索出25种化学成分，用归一化法确定了各成分的相对百分含量，累计占挥发油总含量的48．24％。

3.4 比色法张晓燕等［12］用比色法对丁香叶中总黄酮的含量进行测定。该方法方便准确、重现性好。

3.5 紫外可见分光光度法江蔚新等［13］以葡萄糖为参照品,在490nm波长对丁香叶中多糖成分的含量进行测定，该法对测定丁香多糖含量有较好的线性关系。

4 药理、毒理学研究

4.1 药理学研究

4.1.1 抗菌消炎作用用紫丁香水煎液做抑菌试验，发现其对22种常见细菌有不同程度的抑制作用，并发现其提取物3,4-二羟基苯二

醇抑菌作用强。丁香油及丁香酚对多种真菌具有抑制作用［17］。抗炎作用研究结果表明［18］丁香叶与地塞米松具有类似作用，对二甲苯所致小鼠耳廓炎症和角叉菜胶所致的小鼠组织肿胀均有显著抑制作用。

4.1.2 抗病毒作用紫丁香叶制剂对流行性出血性结膜炎有较好的疗效，对其进行抗HSV-I体外实验研究证明，具有一定的抗病毒作用［19］。薛俊玲等［20］以紫丁香叶为主药的甲丁胶囊对腺病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒和柯萨基病毒所致细胞病变有抑制作用。

4.1.3 保肝利胆作用高士奇等［21］发现紫丁香叶提取物对HBeAg 和HBsAg的分泌具有抑制作用，该抑制作用提示其在体外具有抗乙型肝炎病毒的作用。临床应用紫丁香叶浸膏，发现对病毒性肝炎有一定的疗效。另丁香苦苷具有较强的利胆作用［22］。

4.1.4 其他作用有关丁香叶的增强体液免疫功能［18］、抗氧化［23］等作用也有相关文献报道。

4.2 毒理学研究王峰等［22］对丁香叶片急性和亚急性毒性实验表明,给小鼠250倍的治疗剂量灌胃，未见异常。以1/10和1/5治疗量喂大鼠，未发现该药对主要脏器的毒性作用。

5 剂型研究及临床应用

黑龙江中医药大学课题组已对丁香叶及其制剂进行多年研究。丁香叶片剂、胶囊剂（商品名：炎立消）已收载于1998年《中华人民共和国卫生部药品标准》，经临床验证多年，疗效确切，为新型给药系统的研究奠定了基础。在此基础上，对丁香叶制剂进行开发，研制出

多种新型中药现代化制剂。已有注射剂、滴丸、肠溶微丸等剂型，缓释制剂、经皮给药系统的贴剂等剂型也在研制之中，以期更全面地发挥其疗效,从而推动我国中药现代化进程。

经临床观察，炎立消对314例细菌性痢疾治愈率为90.5%以上，对223例其他细菌感染性疾病有效率为92.0%以上，对30例西药抗菌素治疗无效病例有效79.0%。治疗急性黄疸性肝炎、传染性肝炎178例获得明显疗效［18］。注射用广炎灵粉针是黑龙江中医药大学研制的五类新药，按照《中药新药研究的技术要求》及《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求》等进行试验设计，采用新型精制工艺，有效成分含量高，同时采用冻干技术，产品质量稳定可控而且疗效显著，属国内首创中药广谱抗菌粉针剂，已申请国家发明专利两项。注射用广炎灵粉针抗菌作用明显，对24个种属的细菌均有较强的抑制能力。在临床应用也发现其广谱抑菌作用，用于上呼吸道感染、肠炎、细菌性痢疾、急、慢性支气管炎、急性胃肠炎、急性乳腺炎、黄疸型肝炎,都收到较好的治疗效果。

6 指纹图谱研究

指纹图谱是国际公认的控制中药或天然药物质量最有效的方法之一。指纹图谱技术在中药质量鉴定及加强产品的稳定性方面日趋重要。据报道［24］采用HPLC法对注射用广炎灵冻干粉针（丁香叶）进行指纹图谱研究，采用Waters SunFireTM C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)分析柱，甲醇-水（V/V）梯度洗脱，流速为1 ml·min-1，检测波长为280 nm,得到分离度及重现性较好的丁香叶及其制剂的指纹图

谱，首次建立了丁香叶药材及粉针剂指纹图谱，为其质量评价提供全面可靠的依据。在此基础上制定的制备工艺科学，质量标准完善，制备所得制剂具有安全性、有效性、制备工艺的可操作性和质量标准可控性以及剂型先进的特点，在国内处领先水平，为丁香叶及其产品进入国际市场奠定了基础。建立中药材有效部位、中间体及成品的色谱指纹图谱，并考察三者之间的相关性，从而全面控制药材来源、制备过程等环节，对实现中药生产的现代化具有十分重要的意义。

7 展望

丁香叶是一味具有开发前景的中药，应用广泛，疗效良好，其治疗效果不亚于西药，而且还有其独特的特点。目前对丁香叶的研究多集中在化学成分、含量测定上。随着各种生物学技术的发展，迫切需要建立高效、微量、快速、准确的丁香叶活性成分和指标体系，并加强与化学成分配合的药理筛选。同时建立一个完整的丁香叶及其制剂的质量评价体系，对其更充分地应用于临床具有指导意义。相信随着各项研究的深入，丁香叶将会有更广阔的应用前景。

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酶学性质研究

1.6 酶学性质研究 （1）pH 的影响：分别测定粗酶液在pH3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0下的酶活力，确定其最适反应pH 值；将粗酶液用上述pH 缓冲液稀释后，45℃水浴保温4小时后，测定其剩余酶活力。 （2）温度的影响：分别在40~95℃下测定酶活力，确定其最适反应温度；将酶液在40～90℃范围内的不同温度下保温60 min 后，测定其剩余酶活力。 （3）金属离子的影响：在酶液中分别添加各种金属离子，使其浓度为4 mmol ／L ，然后测定酶活力。 2.5 纤维素酶粗酶液酶学性质 2.5.1酶反应的最适pH 值和酶的pH 稳定性 粗酶液在不同pH 值下测得的酶活及在不同pH 值下处理4小时后测得的相对酶活示于图11。结果表明，CMCase 在pH 3.5～4.5有较高的酶活力，最适反应pH 值为4.0；β-Gluase 在pH 4.5～5.5酶活力较高，最适反应pH 值为5.0，同样方法测得FPA 最适反应pH 为5.0。可见，该菌株所产的各组分纤维素酶是酸性酶。 图11表明，该菌产CMCase 在pH3.0～6.0的范围内，β-Gluase 在pH3.5～5.5的范围内，酶活力均可保持在80％以上，说明该菌株所产酸性纤维素酶可在较宽的pH 值范围内保持其酶活力的稳定性。2.5.2 酶反应的最适温度和酶的热稳定性 在不同温度下直接进行酶促反应测得的酶活及在不同温度下热处理60 min 后于最适反应温度和最适pH 下测得的相对酶活(以4℃保存的酶液活力为100%)示于图12。结果表明，CMCase 、β-Gluase 及FPA 最适反应温度均为65℃。 c e l l u l a s e a c t i v i t y ( U .m l -1) pH r e l a t i v e y a c t i v i t y （%） c e l l u l a s e a c t i v i t y ( U .m l -1) temperature ( o C ) r e l a t i v e y a c t i v i t y （%） 图11 pH 值对酶活力及酶稳定性的影响 Fig.10 Effects of pH value on Cellulase activity and stability 图12 温度对酶活力及酶稳定性的影响 Fig.11 Effects of temperature on activity and stability of cellulase

二氧化碳驱油技术研究现状与发展趋势

二氧化碳驱油技术研究现状与发展趋势 随着世界经济的飞速发展，能源的生产与供求矛盾越发突出，石油作为工业发展的命脉，由于其储量的有限性，使得人们对它的研究和关注程度远胜于其它能源。寻找有效而廉价的采油新技术一直是专家们不断探索的问题。 针对目前世界上大部分油田采用注水开发面临着需要进一步提高采收率和水资源缺乏的问题国外近年来大力开展了二氧化碳驱油提高采收率(EOR)技术的研发和应用。这项技术不仅能满足油田开发的需求，还可以解决二氧化碳的封存问题，保护大气环境。该技术不仅适用于常规油藏，尤其对低渗、特低渗透油藏，可以明显提高原油采收率 （一）二氧化碳驱油技术机理 1、降粘作用 二氧化碳与原油有很好的互溶性，能显著降低原油粘度，可降低到原粘度的1/10左右。原油初始粘度越高，降低后的粘度差越大，粘度降低后原油流动能力增大，提高原油产量。 2、改善原油与水的流度比 二氧化碳溶于原油和水，使其碳酸化。原油碳酸化后，其粘度随之降低，同时也降低了水的流度，改善了油与水流度比，扩大了波及体积。 3、膨胀作用 二氧化碳注入油藏后，使原油体积大幅度膨胀，便可以增加地层的弹性能量，还有利于膨胀后的剩余油脱离地层水以及岩石表面的束缚，变成可动油，是驱油效率升高，提高原油采收率。 4、萃取和汽化原油中的轻烃 在一定压力下，二氧化碳混合物能萃取和汽化原油中不同组分的轻质烃，降低原油相对密度，从而提高采收率。二氧化碳首先萃取和汽化原油中的轻质烃，随后较重质烃被汽化产出，最后达到稳定。 5、混相效应 混相效应是指两种流体能相互溶解而不存在界面，消除了界面张力。二氧化碳与原油混合后，不仅能萃取和汽化原油中轻质烃，而且还能形成二氧化碳和轻质烃混合的油带。油带移动是最有效的驱油过程，可使采收率达到90%以上。 6、分子扩散作用 多数情况下，二氧化碳是通过分子的缓慢扩散作用溶于原油。分子的扩散过程很

五年的western blot经验总结

1.抗体的选择 对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区的实验者而言，感触尤深。在这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。 进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的价最贵；比较有性价比的是CST的抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种，1:1000的稀释比下，还没有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot实验，还有一个优点是通常量比100微升多出来10微升，唯一的不足是CST的品种实在不多。Santa的多克隆抗体质量可以，但是选用Santa的单抗还是有风险，估计这也是业界共识了吧。 进口抗体国内分装包装我也用过不少，呵呵，毕竟是穷人（420元/100微升），大概好抗体的比例约为50%，如果能做出来，也存在一个问题，就是抗体大多只能用一次。我曾经把Santa的原装抗体和分装抗体做过比对（抗体品种，货号等完全一致），在都能做出来的前提下，原装抗体能重复使用的次数要多出许多。具体原因我已经揣测了好几年，不敢说出来，我一直在想是不是冬天西瓜切成牙和整个卖，也会有所不同。揣测归揣测，假如只为了发论文毕业走人，可以考虑选用进口分装的多克隆抗体。 国产抗体比较知名的就几家，但质量确实不敢恭维。western blot能做出来的确实不多，而且杂带多，背景不干净。我们周边的实验室大多买国产抗体做免疫组化，怎么说呢，应付硕士论文够了。 我也帮别人自制过抗体，再用抗原亲和纯化。效价非常不错，夸张的时候1：10000都能做出条带，唯一的麻烦是兔子太骚（骚臭），不知道这是不是“兔女郎”名号的来由。如果读书非常悠闲，老板又特别想拥有手工作坊的情况下，可以自己伺候折腾兔子来玩玩，刚开始的时候还是蛮有成就感的。只是单凭抗原表达和制备多抗，是不是可以写成论文毕业，估计因校而异了。 2.Western Blot设备 目前最好的垂直槽和转移槽还是Biorad（伯乐），尤其是MINI3好用,MINI4可以一次跑

HPLC法对紫丁香苷含量测定的研究

ＨＰＬＣ法对紫丁香苷含量测定的研究 【摘要】目的建立紫丁香苷含量的高效液相色谱法。方法采用Agilent C18（5 μm，150 mm×4．6 mm）色谱柱，甲醇-水（1∶4）为流动相，检测波长为265 nm，流速0．8 ml/min。结果实验表明，紫丁香苷采用高效液相色谱法峰面积与含量有良好的线性关系。结论此方法适于紫丁香苷的含量测定，方法简便，准确，方法学验证好，能够有效的控制紫丁香苷的含量。 【关键词】刺五加；紫丁香苷；HPLC 现代药理研究表明[1]，刺五加具有抗疲劳的作用，其主要化学成分为苷类，而主要的具有生理活性的有效成分为紫丁香苷，因此选择紫丁香苷作为控制刺五加类药品的指标成分，参照有关文献[2-3]，建立高效液相色谱法测定刺五加注射液的含量，经方法学考察，此方法分离效果好，具有良好的准确性、重现性。 1 仪器与试药 仪器：岛津LC-2010A型高效液相色谱仪；岛津UV-2501型紫外分光光度计。 色谱柱：Agilent C18（5 μm，150 mm×4．6 mm）。 试剂：甲醇为色谱纯，水为蒸馏水，其他试剂均为分析纯。 对照品：紫丁香苷对照品（11574-200201）为中国药品生物制品检定所提供。 刺五加注射液：黑龙江完达山药业股份有限公司。 2 实验方法与结果 2．1 色谱条件的选择 2．1．1 色谱柱前后试用了三根柱子：Agilent C18（5 μm，150 mm×4．6 mm）色谱柱、Kromasil C18（5 μm，250 mm×4．6 mm）色谱柱。结果，均可达到较好的分离效果。 2．1．2 流动相的选择根据文献报道[4-7]，先后试用了两种流动相系统：甲醇-水系列和甲醇-水-冰醋酸系列。结果，甲醇-水-冰醋酸系列在应用了不同的比例后，发现杂质峰多；而甲醇-水系列的杂质峰相对较少，通过不同比例的选择，确定1∶4的比例分离效果最好，保留时间适中。 2．1．3 检测波长的选择通过紫外扫描及DAD检测，紫丁香苷在220 nm、265 nm处有最大吸收，由于220 nm处测定有干扰，故选择265 nm为检测波长。 2．1．4 流速的选择试用了3个流速：0．8、1．0、1．2 ml/min，均可获得满意的分离效果。 综上所述，在甲醇-水（1∶4）为流动相，检测波长为265 nm，流速0．8 ml/min，紫丁香苷与样品中其他组分色谱峰可基线分离。 2．2 方法学验证

兽用中草药研究开发展望

中兽医医药杂志J TCVM 2005年第4期 综述专论兽用中草药研究开发展望 梁剑平1,张应禄2,李滋睿2 (1.中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业部新兽药工程重点开放实验室,甘肃兰州730050;2.中国农业科学院) 中图分类号:S85311文献标识码:A文章编号:1000-6354(2005)04-0021-03 兽用中草药被广泛应用于预防和治疗畜禽疾病,或促进动物生长,提高饲料报酬。由于它无药物残留,对人类健康不构成危害,所以受到了广大消费者和畜禽养殖者的欢迎。有关专家认为,兽用中草药由于不会对食品安全构成威胁,将在很大程度上逐步取代化学药品,有广阔的发展前景,使其开发商机凸现。兽用中草药是我国兽医药学的宝贵遗产,长期以来对畜禽的繁殖和发展做出了不可磨灭的贡献。它不仅在中国得到了继承和发展,而且在国际上也产生了巨大的影响,亚洲的很多国家和地区把兽用中草药当成提高畜禽健康质量的重要手段,与西方现代兽医药共同用于临床。欧美各国在/回归大自然0的口号影响下,也越来越重视兽用中草药的研究,一些兽用中草药的治疗作用逐渐得到了临床的认可。 1畜牧业发展对兽用中草药开发及其技术需求分析近些年来,食品安全、药残与耐药性等问题日益受到重视,许多发达国家已经禁用了许多兽用药品饲料添加剂。美国基于人畜交叉抗药性的顾虑而撤销了恩诺沙星与沙拉沙星在禽类使用的注册标准,并且在可预见的未来也不再审批任何氟喹诺酮类作为兽药。2000年7月23日,世界卫生组织在日内瓦召开会议,提出了限制对家畜使用化学抗菌药新建议。近年来发现化药、抗生素类具有毒副作用及其残留,严重地影响人类健康,甚至引起/三致0和损害免疫功能。自1987年以来,英国和法国植物药的购买力分别上升了70%和50%,而美国市场每年亦以高于20%的速度增长。日本的汉方制剂从90年代开始,每年都以15%以上的速度增长。国际植物药市场份额每年已达270亿美元。 标准化是我国传统医药进入国际市场的突破口,是兽用中草药现代化发展的必要条件。我国物种丰富,药物种植面积大,品种齐全,但所占市场份额还不足5%。其中最大的制约因素是我国中药标准化程度低,生产工艺较落后,缺乏科学规范的质量标准和质量控制手段。这是中兽药界的难点问题,同时也是制约中兽药走出国门,走向世界的/瓶颈0。因此,必须要建立健全中药材的质量规范标准,在现行的《中华人民共和国兽药典》所列的药材的基础上进一步完善。 2国内外科技发展水平比较分析 国外由于受到中药资源的限制,中兽药的发展起步较晚,主要是通过微生物发酵制备多糖、寡糖。多糖能提高动 收稿日期:2004-12-27 项目来源:/十五0国家攻关计划资助 作者简介:梁剑平(1963-),男,研究员,博士,主要从事兽药研究。物免疫力,其中消化道免疫占动物免疫系统的很大部分,因而能对消化道起到很好的保护作用,另外,肠道黏膜内的IgA 抗体还可通过其自身产生的抗体细胞毒素直接杀灭细菌。寡糖为1~9个单糖所组成,由于其能促进猪、鸡肠道内有益菌群优势形成,其中主要是拟杆菌、双歧杆菌及乳酸杆菌等,能有效地降低病原菌的致病力,结合吸收外源性病原菌及调节机体免疫系统,提高动物免疫力等功能,成为研究的热点。在国外寡糖是最有希望替代化药与抗生素的天然物质。其研究主要通过完成了菌种鉴定与系统发育分析、酶的生产条件、酶的纯化与特性、酶基因的克隆表达与序列分析、酶的高产菌株选育、寡糖的组分、结构及生理功能分析,以及酶和寡糖的工业生产试验等涉及多学科的系统工程,结合极端菌及极端酶的特性,以新的方法解决了酶的碱、盐、热稳定性、酶活力、寡糖生成率等,实现了极端B-聚糖酶以及寡糖的生产及应用。国内在多糖、寡糖研究方面也进行了诸多的研究,已通过对酵母菌培养,成功的生产出甘露寡糖。除多糖、寡糖研究外,中兽药主要是围绕我国丰富的中药资源进行了中药的方剂学,有效单体的提取、合成及结构修饰,与中兽药的稳定性方面进行了一系列的研究,因为在新兽药创制中,重要的环节是要保证有高质量的、稳定可控的中药材原料。 2.1中药资源开发取得新的进展 我国现有的中药资源种类已达12807种,其中药用植物11146种,药用动物1581种,药用矿物80种。仅对320种常用植物类药材的统计,总蕴藏量就达850万吨。全国药材种植面积超过580万亩,药材生产基地600多个,常年栽培的药材达200余种。野生变家种取得了积极成果,许多已成为主流商品。对珍稀濒危野生动植物品种开展了人工种植、养殖和人工替代品研究,对进口药材的引种也取得了可喜的成就,形成了一定的生产能力,药材进口的数量明显减少。云南西双版纳分布的植物锡生藤已合成新药/傣肌松0,与进口的/氯化箭毒碱0有相似的肌肉松弛作用。从进口药材的国产近缘植物中寻找代用品的实例还有很多,如以国产安息香代进口安息香;以国产马钱子代进口马钱子;以西藏胡黄连代进口胡黄连;以白木香代沉香等等,应用有效成分为指标,从近缘科、属中扩大药源,这方面中国已做了大量比较系统和深入的研究工作,已进行研究的主要种类有小檗属、薯蓣属、鼠尾草属、葛属、黄连属、大黄属、甘草属、石蒜属、丹参属、金银花属、莨菪类、蒿类、柴胡属、淫羊藿属、苦参属等植物。 2.2科研开发形成新的局面 2.2.1提取和合成制药在提取和合成制药的研究及生产 21

重油加氢技术特点和发展趋势

113重油加氢技术特点和发展趋势 卜蔚达 （中国石油大学（北京）化学科学与工程学院，北京 102249） 摘要：本文针对重油加氢技术的重要性和应用情况，从工艺和催化剂角度分别介绍了固定床、悬浮 床、沸腾床、移动床加氢技术的特点和发展现状，通过对四个工艺优缺点的分析提出了重油加氢的研 究方向和发展趋势。 关键词：重油加氢；固定床；悬浮床；沸腾床 引言 随着原油的变重、变稠以及轻质油品的需求量不断增大，重油加工成为现代炼厂面临的主要问题。目前重油加工主要有延迟焦化、减粘裂化、重油催化裂化和重油加氢4个工艺过程[1]。延迟焦化和减粘裂化属于热加工过程，其特点是可以处理各种渣油，但是液体产物的质量差、焦炭产率高。重油催化裂化对原料的要求较高，无法处理劣质的渣油。重油加氢一方面可以处理高硫、高残炭、高金属的劣质渣油，另一方面可以提高液收率和液体产物的质量。同时可以和其它工艺进行组合，特别是重油加氢和催化裂化组合工艺。我国在重油加氢方面和国外存在着较大的差距，但是随着国内环保机制的日益严格化，对油品的质量提出了更高的要求，提高重油加氢技术显得尤为迫切。 1 重油加氢技术 1.1 固定床加氢技术 固定床渣油加氢技术的应用最为广泛，工业化过程也最多。我国引进和自行设计开发的渣油固定床加氢工艺如下[2，3]： 1.1.1 VRDS工艺 我国第一套渣油固定床加氢工艺，于20世纪90年代初由齐鲁石油化工公司从美国Chevoron公司引进。最初的设计以孤岛减压渣油为原料，以生产低硫燃料油为目的，后来发展成VRDS-RFCC组合工艺，即减压渣油经固定床加氢处理后给重油催化裂化提供原料。采用组合工艺后，其渣油能够全部转化，加工深度高，轻质油收率高。 1.1.2 ARDS工艺 我国从UOP公司引进的中东含硫原油常压渣油加氢脱硫装置。对常压渣油进行加氢脱硫、脱氮、脱金属、脱残炭等使加氢后的重馏分可在催化裂化等装置中进一步轻质化。 1.1.3 S-RHT工艺 茂名石油化工公司渣油固定床加氢脱硫装置是我国自行设计开发的固定床加氢处理技术，洛阳石油化工工程公司承担此项目的工程开发、工程设计，设计原料为中东含硫原油的减压渣油及部分减压蜡油混合料，主要产品为少量石脑油、柴油和大量的脱硫改质催化裂化进料。 固定床重油加氢的优点是工艺成熟，产品收率高，精致深度高，脱硫率可以达到90%[4]以上，工艺和设备结构简单，易操作。缺点是无法及时更新催化剂，在处理高金属和高沥青质、高胶质含量的原料时，催化剂减活和结焦较快，床层也易被焦炭和金属有机物堵塞。只能加工金属<200μg/g，残炭<15%的渣油[4]，因此对原料的适应性较差。固定床反应器是非等温反应器，对于放热的加氢反应容易产生飞温现象。另外，固定床加氢工艺单程转化率低(20%-50%)[4]，需要有较大的重油催化裂化、柴油加氢精制装置进行配套，产品中柴汽比较低。1.2 悬浮床加氢技术 我国悬浮床加氢工艺还处于研究和开发阶段，目前主要有两种工艺过程，即[1]。 1.2.1 FRIPP的悬浮床工艺 该工艺采用空筒式反应器和高活性水溶性多金属分散催化剂、现场乳化分散、硫化剂直接加入到原料中，在加热过程中催化剂进行预硫化的方式操作，催化剂具有较强的抑焦功能，可实现长周期连续运转。催化剂水溶液被乳化分散在原料油中直接通过反应器，流程简单、操作方便，克服了早期的悬浮床工艺尾油中含有大量固体颗粒从而难以 2010年第3期2010年3月 化学工程与装备 Chemical Engineering & Equipment

常用细胞凋亡检测方法(图)

常用细胞凋亡检测方法（图） 转载请注明来自丁香园 发布日期：2012-02-16 13:41 文章来源：丁香通 关键词：丁香园生物专题义翘神州细胞培养点击次数：951 一、细胞凋亡的形态学检测 1、光学显微镜和倒置显微镜 ①未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。 ②染色细胞：常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化，核膜裂解、染色质分割成块状和凋亡小体等典型的凋亡形态。 2、荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜 一般以细胞核染色质的形态学改变为指标来评判细胞凋亡的进展情况。常用的DNA 特异性染料有：HO 33342 (Hoechst 33342)，HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI。三种种染料与DNA的结合是非嵌入式的，主要结合在DNA的A-T碱基区。紫外光激发时发射明亮的蓝色荧光。Hoechst是与DNA特异结合的活性染料，储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度，使用时用PBS稀释，终浓度为10 ug/ml。DAPI为半通透性，用于常规固定细胞的染色。储存液用蒸馏水配成1mg/ml的浓度，使用终浓度一般为10 ug/ml。结果评判：细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变分为三期：Ⅰ期的细胞核呈波纹状（rippled）或呈折缝样（creased），部分染色质出现浓缩状态；Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化；Ⅱb期的细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体(图1)。 3、透射电子显微镜观察 结果评判：凋亡细胞体积变小，细胞质浓缩。凋亡Ⅰ期（pro-apoptosis nuclei）的细胞核内染色质高度盘绕，出现许多称为气穴现象（cavitations）的空泡结构(图2)；Ⅱa期细胞核的染色质高度凝聚、边缘化；细胞凋亡的晚期，细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体。 二、磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V法） 磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS）正常位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中(图3)。Annexin-V是一种分子量为35~36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素（FITC、PE）或biotin标记，以标记了的Annexin-V作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。 碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细核红染。因此将Annexin-V 与PI匹配使用，就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。 方法

尘肺病临床治疗研究概况

实、叙述的写作手法来记录检查的情况,切忌在笔录中作评论、推断。现场笔录应该是执法人员在现场所看、所听的实录,而不应是询问笔录。2.2　贴近案情 可以采取“由大到小”、“由粗到细”的方法,首先简要描述大环境、方位地点,再收缩到具体需要重点检查的位置;从物品总体摆放、堆码再聚焦到具体商品数量,包装标签及现场痕迹等等。同时,对现场从业人员在从事何种活动,也要作好记录。对与具体案情关联不大的内容,可以简写,而对于与案情关联紧密的商品、标识、人员作业情况、工具、原料、广告、检查过程,甚至能证明案件事实的地面污水痕迹、废弃损毁物品的状况都应详记,并尽可能地加以固定、提取。2.3　抓住重点 现场检查中,往往可以意外地发现一些对定案十分关键的证据,要注意策略,可以采取以虚掩实、迂回反抄的方法将这些证据予以固定、提取。3　制作要点 3.1　当事人在被检查场所开展经营活动的由来或 当事人与被检查场所的关系。3.2　场所的概况。情况复杂的场所应交代方位,必 要时绘图说明。 3.3　与违法行为有关的物品、工具、设施的名称、规格、数量、状况、摆放位置、使用情况及相关的书证、物证。3.4　与违法行为有关的人员的活动情况,包括当事人及其职工、帮工以及顾问、消费者的情况。3.5　检查人员检查的活动及结果。3.6　当事人在检查活动中的异常表现及其行为。3.7　交代现场询问当事人、旁证人员,现场摄影、录像、绘图,当事人主动提交的证据的情况。3.8　交代抽样取证、强制措施的情况。情况复杂、 规模较大的场所,可以按照分工,由检查人员按照各自的检查任务,分别制作笔录,但最后应制作汇总笔录,总结整个检查情况。3.9　《现场检查笔录》应在现场检查时当场制作,不能今天检查,第二天才完成笔录。3.10　笔录写好后要交给当事人阅读或向其宣读,并由当事人签章(逐页)。当事人拒绝签名或不能签名的应当注明原因,并且由2名以上执法人员在笔录上签字。有其他人在场时,可由其他人签名。法律、法规和规章对现场检查笔录的制作形式另有规定的,从其规定。 ?综 述? 尘肺病临床治疗研究概况 崔　萍,侯　强 (山东省职业卫生与职业病防治研究院,山东　济南　250002) [收稿日期]2007204230 山东省医药卫生计划科技项目　项目号:(2003-133) [摘要]　我国尘肺病是危害人数最多的职业病,发病率约占所有职业病的80%,建国以来,政府对尘肺病的防治一直十分重视,开展了大量的研究工作,作者回顾了近50年尘肺病临床治疗的几个主要阶段,从基础治疗(营养、运动)、西药、中药、肺灌洗几个方面,分别概述了与其相关的药物成分、作用机制、临床研究和疗效。提倡目前依病人的病情进行肺灌洗、抗纤维化、减轻非特异性炎性反应、调节免疫功能、抗脂质过氧化、对症支持等综合治疗措施。提出霜桑叶有望成为疗效高、无毒副作用、价格低廉、依从性好治疗尘肺病的新药。 [关键词]　尘肺病;治疗方法;药物疗法;中医中药;肺灌洗 [中图分类号]R13512 [文献标识码]A [文章编号]1007-6131(2007)0320226204 尘肺病是由于在职业活动中长期吸入生产性粉尘并在肺内潴留而引起的以肺组织弥漫性纤维化为 主的全身性疾病。尘肺病被称为中国头号职业病,卫生部称截至2005年,中国尘肺累积病例607570

丁香花蕾泡水喝的功效

丁香花蕾泡水喝的功效 丁香花泡水是比较常见的一种饮品，而且很多女生都希望通过丁香花泡水让自己的皮肤有所改善。丁香花泡水不仅可以改善女生的内分泌，而且对于肌肤也是有促进作用，不仅可以消除肌肤表面的痘痘，而且对皮肤的色泽也有一定的调节作用，让皮肤变白。那么，丁香花蕾泡水喝的功效有哪些？ 1、止咳化痰的功效 丁香叶桂花茶具有止咳化痰之功。丁香叶桂花茶可以养阴润肺，可以舒缓喉咙，改善多痰、咳嗽症状，对感冒引起的咽喉肿痛及咳嗽有一定的辅助治疗作用。 2、暖胃的功效 丁香叶桂花茶有一定的暖胃作用。在丁香茶里面加入桂花，能够起到很好的温中散寒，暖胃止痛的作用。对于胃寒胃痛的患者可适当饮用丁香叶桂花茶来保健。丁香叶桂花茶也非常适合老年人饮用。 3、润肠通便的作用 丁香叶桂花茶还能润肠通便的作用。丁香叶桂花茶可以减轻胀气等肠胃不适，对便秘患者有一定的缓解作用。 4、除口臭 丁香叶桂花茶可用于除口臭。桂花气味芳香宜人，而茶叶中所含有的茶多酚，可以溶解脂肪，消除口中的异味。有口臭的人群常喝丁香叶桂花茶可以让口气更清新。

丁香桂花泡水喝的功效 5、美容的作用 丁香叶桂花茶具有美白肌肤、排解体内毒素、润肠通便的作用，因此，女性朋友常喝丁香叶桂花茶有美容养颜的作用。 6、提神的作用 丁香叶桂花茶具有提神的功效。丁香叶桂花茶浓郁的花香能够舒缓紧张的情绪，饮用丁香叶桂花茶可以平衡神经系统，达到提神醒脑的作用。所以当人们感到很疲惫精神不好及压力过大的时候可以喝杯丁香叶桂花茶来缓解调理。 7、清热的作用 丁香叶桂花茶还具有清热的功效。饮用丁香叶桂花茶可以清热消毒，润肠通便。丁香叶桂花茶对口腔炎，牙周炎，声音沙哑等都有一定的疗效。 丁香桂花泡水喝的功效 丁香叶桂花茶的作用和功效很多，营养价值很高，是养生保健的不错的茶饮品。长期饮用让人神清气爽，充满活力。

RP—HPLC测定救必应药材中紫丁香苷的含量

RP—HPLC测定救必应药材中紫丁香苷的含量目的建立反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定救必应药材中有效成分 紫丁香苷的方法。方法采用Aglient 5HC-C18（2）250 mm×4.6 mm色谱柱；流动相：甲醇（A）-0.5%醋酸水（B）为流动相系统梯度洗脱（0～25 min，25%→35%A；25～60 min，35%→60%A）；检测波长：290 nm；流速：1.0 ml/min；柱温：30℃；进样体积：10 μl。结果紫丁香苷的线性范围为0.3051～6.102 μg （r=0.9992），平均回收率为99.67%。结论RP-HPLC检测效率高，专属性强，重复性好，可用于救必应药材中有效成分紫丁香苷的定量测定，可作为该药材的质量控制方法之一。 [Abstract] Objective To establish a method for RP-HPLC determination of syringin in Ilex rotunda Thunb.. Methods A Kromasil-C18 Column （250 mm×4.6 mm）was used with gradient elution using methanol-0.5% acetic acid as mobile phase.The detection wavelength was 290 nm and the column temperature was 30℃with the flow rate of 1.0 ml/min，the samplem injection was 10 μl. Results Linear ranges of syringin was 0.3051-6.102 μg （r=0.9992），respectively.Its average recoveries was 99.67%. Conclusion The RP-HPLC method established in this experiment can be used to determine the contents of syringin in Ilex rotunda Thunb..The method can also be used as the standard for the quality control of Ilex rotunda Thunb. because of simplicity，reliability and accuracy. [Key words] Ilex rotunda Thunb.；Syringin；Quality control；Reverse phase high performance liquid chromatography 救必應别名白木香、白沉香、山冬青等[1-2]，来源于冬青科植物冬青（Ilex rotunda Thunb.）的干燥树皮。夏、秋二季剥取，晒干，具有清热解毒，利湿止痛，用于暑湿发热，咽喉肿痛，湿热泻痢，脘腹胀痛，风湿痹痛，湿疹，疮疖，跌打损伤[3]。其主要含有三萜类、黄酮类、酚类、鞣质类化学成分[4-5]，紫丁香苷是救必应药材的主要有效成分之一[6]。HPLC法测定救必应药材中紫丁香苷含量[7-10]，此方法简便、准确、重复性好等特点，适用于救必应药材中紫丁香苷的含量测定。本研究采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）对其进行含量测定。 1 仪器与材料 1.1 仪器 Waters e2695高效液相色谱系统，Empower工作站，含四元梯度泵、自动进样器、紫外检测器（Waters公司；KQ-100B型超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）；T-214型电子分析天平（Denver公司）。 1.2 材料

含油污泥的处理现状及展望

含油污泥的处理现状和展望 摘要 含油污泥会对环境造成二次污染，必须进行无害化处理和资源化利用。针对含油污泥处理现状，分析了国内外处理含油污泥方法上存在的问题，综述了国内外含油污泥的处理技术现状、及含油污泥处理技术的研究进展。资源化利用将成为含油污泥处理技术的发展趋势。关键词：含油污泥；资源化；除油；综述 Abstract: Oily sludge may do harm to the production and the environment and must be treated harmlessly and be utilized comprehensively.n view of the present situation of oily sludge treatment, the problems existing in oily sludge treatment at home and abroad are analyzed.This article summarized the present situation about domestic and foreign oily sludge treatment, and forecast the development direction about technology of oily sludge treatment. Resources utilization of oily sludge will be the dominant technique for oily sludge treatment in the future. Key Words: oily sludge、comprehensive utilization、oil removal、detoxification 1含油污泥的危害和来源 含油污泥是石油生产的伴随品,是石油生产的主要污染源之一,也是影响油田及周边环境质量的一大难题。含油污泥中大量的有机物和丰富的氮、磷、硫等营养物质,不加稳定处理的污泥任意排入水体,污泥中的有机物和氨氮将大量消耗水体中的氧,导致水体水质恶化,严重影响水生物的生存,营养物质又会使水体富营养化,在沿海海域造成赤潮和绿潮。除此,不同成分的含油污泥对环境和人类造成的危害是不同的。 1.1含油污泥的危害 油田含油污泥的组成成份极其复杂,是一种极其稳定的悬浮乳状液体系,含有大量老化原油、蜡质、沥青质、胶体、固体悬浮物、细菌、盐类、酸性气体、腐蚀产物等,还包括生产过程中投加的大量凝聚剂、缓蚀剂、阻垢剂、杀菌剂等水处理剂[1]。并因其体积庞大,排放后不但占用大量耕地,而且对周围土壤、水体、空气都将造成污染。我国现已对含油污泥的排放加强了重视[2],目前明确规定,肆意排放未经处理的含油污泥将处以1 000元/ m3·d 的罚款。这样虽然限制了部分污染物的排放,但仍然不能从根本上解决问题。所以含油污泥

western blot实验经验总结

western blot实验经验总结 1.抗体的选择 对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区的实验者而言，感触尤深。在这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。 进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的价最贵；比较有性价比的是CST的抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种， 1:1000的稀释比下，还没有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot 实验，还有一个优点是通常量比100微升多出来10微升，唯一的不足是CST的品种实在不多。Santa的多克隆抗体质量可以，但是选用Santa的单抗还是有风险，估计这也是业界共识了吧。 进口抗体国内分装包装我也用过不少，呵呵，毕竟是穷人（420元/100微升），大概好抗体的比例约为50%，如果能做出来，也存在一个问题，就是抗体大多只能用一次。我曾经把Santa的原装抗体和分装抗体做过比对（抗体品种，货号等完全一致），在都能做出来的前提下，原装抗体能重复使用的次数要多出许多。具体原因我已经揣测了好几年，不敢说出来，我一直在想是不是冬天西瓜切成牙和整个卖，也会有所不同。揣测归揣测，假如只为了发论文毕业走人，可以考虑选用进口分装的多克隆抗体。 国产抗体比较知名的就几家，但质量确实不敢恭维。western blot能做出来的确实不多，而且杂带多，背景不干净。我们周边的实验室大多买国产抗体做免疫组化，怎么说呢，应付硕士论文够了。 我也帮别人自制过抗体，再用抗原亲和纯化。效价非常不错，夸张的时候1：10000都能做出条带，唯一的麻烦是兔子太骚（骚臭），不知道这是不是“兔女郎”名号的来由。如果读书非常悠闲，老板又特别想拥有手工作坊的情况下，可以自己伺候折腾兔子来玩玩，刚开始的时候还是蛮有成就感的。只是单凭抗原表达和制备多抗，是不是可以写成论文毕业，估计因校而异了。 2.Western Blot设备 目前最好的垂直槽和转移槽还是Biorad（伯乐），尤其是MINI3好用,MINI4可以一次跑四块胶，但通常用不上，由此造成垂直缓冲液的浪费，而且MINI4用绿色塑料夹住玻璃板来组成内槽，容易漏液，塑料夹应该是有疲劳寿命的，估计日子一长，弹性就会改变，所以如果你们实验室刚买了MINI4，赶紧用，遭殃的肯定是某一级的师弟师妹们。 Biorad的一套系统得两万多，西部能玩得起伯乐的还真不多。好在咱中国人聪明，上海天能的外观和构造和伯乐的MINI3几乎一模一样，而且可以通用，不带电泳仪是5千多一套，挺好用的。唯一的不足是塑料寿命不如伯乐，胶架容易断裂。不过仔细算算，三套天能也就是一套伯乐的价格，值了。北京六一的垂直槽

提高采收率研究的现状及近期发展方向

?油气开发总论? 提高采收率研究的现状及近期发展方向 杨普华 (中国石油天然气集团公司石油勘探开发科学研究院) 摘要　介绍了国外提高油气采收率(EOR )方法的应用现状、应用规模、增油量及其在总产量中的比例;介绍了美国能源部支持的三次采油基础研究情况;分析了EOR 方法与油价的关系;分析了我国在聚合物驱、复合驱、注气、微生物采油等方面的技术状况和应用规模,对近期的发展思路提出了建议。 主题词　提高采收率　方法　研究　分析 1　国外提高采收率技术现状 据1998年美国《油气杂志》 (O il &Gas J ou rnal A p r .20,1998)资料,在1998年初,全世界来自提高采收率(EOR )和重油项目的石油产量大约为213×106b d ,比1996年初的212×106b d 稍有增长,这个数量相当于世界石油产量的315%。美国EOR 产量比两年前增加5%,达到760000b d ,为美国石油年产量的12%。其他各国的EOR 和重油产量为:加拿大,400000b d ;中国,280000b d ;前苏联,200000b d ;其他国家,700000b d 。 111　热采 热采(蒸汽,地下燃烧)仍是最主要的方法。美国EOR 产量中约60%来自热采,其他绝大多数来自注气(轻烃、二氧化碳和氮气)。化学驱主要在我国得到发展,其他国家基本处于停滞状态。热采,尽管实施的项目数有所减少,但自1986年以来产量一直保持稳定,在EOR 产量中始终保持在60%以上。 图1　美国EOR 产量 112　注二氧化碳 近年来,在低油价下,各种提高采收率方 法实施的项目都在减少,只有二氧化碳混相驱 项目一直在稳定增加(见图1)。一方面是由于 美国有十分丰富的天然二氧化碳气源,并在高 油价下已修好了三条输送二氧化碳的管道,可 以把二氧化碳从产地直接输送到二氧化碳的 用地T exas 州;另一方面,二氧化碳驱的技术 得到很快的发展,其成本大幅下降,使一些较 小的项目也有利可图,从而促进了二氧化碳驱 收稿日期:1999207201　改回日期:1999208223 杨普华,教授级高工,博导,享受政府特殊津贴,长期从事油层物理和提高采收率科研工作,石油勘探开发科学研究院副总工程师兼采收率研究所所长。1第6卷　第4期 油气采收率技术

抗体的选择和保存

抗体的选择和保存 当我们要检测目的蛋白在组织中表达情况的时候，如何选择适合我们实验需要的抗体，并恰当保存使用，是每个科研人员需要细心考虑的。抗体种类繁多，品牌众多，技术参数不一，价格和质量更是相差甚大，如何购买到高质量价格合适的抗体，并准确地做出我们想要的结果，其中有很多细节需要注意。 一、怎样选择适合你实验需要的抗体 1. 一抗选择要点 （1）确定抗体的名字，注意中英文名字、它名、亚型等信息。 （2）确定你的实验类型，ELISA，WB，IHC，ICC，还是FACS。一般抗体的说明书都会列出该抗体经验证过适用于何种实验的类型，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种实验验证，请根据说明书列出的已验证的类型来选择适合你实验的抗体。（3）确定实验样本的种属，Human，Mouse，还是Rat。一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种物种实验，请根据说明书列出已验证的种属来选择适合你实验的抗体。对于免疫组化而言，尽可能选择与样本不同种系物种的一抗，从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应，例如：检测小鼠样本蛋白，则不应选择小鼠或大鼠源的一抗，最好选兔源的一抗，则二抗则可选择偶联了检测分子（酶、荧光素、生物素等）的抗兔IgG。 （4）样本蛋白的结构性质。了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，待测样本蛋白的结构域和样本在提取和处理过程中是否会变性，蛋白空间构象的改变，会影响抗体的免疫亲和反应。抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来，其中的免疫原包括：全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞，抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。如果打算用FACS 流式检测活细胞的表面蛋白，则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。 （5）单多克隆抗体的选择。市面上的抗体还是以多克隆抗体为主，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异

酶学研究中的诺贝尔奖

酶学研究中的诺贝尔奖 标签：教育酶学研究诺贝尔奖分类：生物学史与学家 酶学研究中的诺贝尔奖 学习感悟：科学家对酶的研究也经历了很长时间，教材中也有简单的酶的发现过程，学习过程中也涉及到很多酶，今天看到生物学通报中完整的诺贝尔奖中对酶的研究达到了10次，现摘录如下以供学习。 酶在生命体的新陈代谢过程中占有重要地位，几乎所有细胞的生命活动都需要酶的参与。19世纪30年代德国化学家Liebig和他的同事Wohler从苦杏仁汁中发现了一种催化物质，后被命名为苦杏仁酶（emulsion），这是最早发现的酶之一。随后又有许多酶被相继发现，酶学研究也进入飞速发展时期。 从1907年比希纳获得酶学研究史上的首个诺贝尔奖开始，在酶学领域中先后有多次诺贝尔奖获奖记录。 1．1907年诺贝尔化学奖获奖者爱德华·比希纳（德国）获奖理由发现无细胞发酵现象 20世纪初德国科学家爱德华·比希纳利用细沙和酵母菌作为实验材料，混合并加以研磨，随后加上矽藻土，用水力压榨机制备酵母榨出液，利用这种液体为浓蔗糖溶液防腐，经过反复实验发现酵母榨出液引起了蔗糖的发酵。但此榨出液中没有活的酵母细胞。随后，为确保实验结果的准确性，他又利用乙醇和丙酮杀死活的酵母细胞，仍然引起了蔗糖的发酵。1897年他发表题为《无细胞的发酵》论文，引起了学术界的轰动。论文否定了发酵作用是“生命现象”的概念，建立了微生物的生命活动和酶化学之间的联系。 爱德华·比希纳的研究推动了生物化学、微生物学、发酵生理学和酶化学的发展，并获得了1907年的诺贝尔化学奖，这在酶学研究史上是一次巨大的飞跃，开创了微生物生化研究的新篇章。 2．1929年诺贝尔化学奖获奖者亚瑟·哈登（英国）和汉斯.冯·奥伊勒-凯尔平（瑞典）获奖理由阐述了糖发酵过程中酶的作用 亚瑟·哈登（Harden Sir Arthur）是英国生物化学家。1904年他将酵母提取物放入半渗透薄膜袋内进行渗析时发现，酵母酶的活性消失，它不再使糖发酵。然而，如果将渗析至袋外的水加入袋内的物料中，则酵母酶活性又会恢复。同时观察到渗析开始时，酵母提取物迅速将葡萄糖分解并产生二氧化碳，但是随着时间的推移，其活性逐渐降低。他推测酵母酶是由2部分组成的，一部分是小分子，另一部分则是大分子。两者单独作用都不会使糖发酵。只有共同作用才有发酵的效果。如果将袋内的物料煮沸，则活性消失，即使袋内加入了袋外的水也是如此。实验证明大分子是蛋白质，小分子经受住了煮沸，因而多半不是蛋白质。这种小分子是“辅酶”发现的首个实例，它是一种非蛋白质结构的小分子，这种小分子对于酶的作用是不可或缺的。 汉斯.冯·奥伊勒一凯尔平是杰出的瑞典生物化学家。他在访问比希纳的实验室后对发酵产生了浓厚兴趣。由于哈登发现了发酵过程需要酶和辅酶共同发挥作用，因此经过10年潜心