稳态-瞬态荧光光谱仪操作说明书

稳态/瞬态荧光光谱仪（FLS 920）操作说明书

一、仪器测试原理

时间相关单光子计数原理是FS920测量荧光寿命的工作基础。

时间相关单光子计数法(time－correlated single photon counting)简称“单光子计数(SPC)法”，其基本原理是，脉冲光源激发样品后，样品发出荧光光子信号，每次脉冲后只记录某特定波长单个光子出现的时间t，经过多次计数，测得荧光光子出现的几率分布P(t)，此P(t)曲线就相当于激发停止后荧光强度随时间衰减的I(t)曲线。这好比一束光(许多光子)通过一个小孔形成的衍射图与单个光子一个一个地通过小孔长时间的累计可得完全相同的衍射图的原理是一样的。

二、测量之前需要特别注意的事项

1.在切换光源、修改设置或放样品之前必须把狭缝（Δλ）关到最小（0.01nm），否则会损坏光电倍增管！

如果打开样品室盖子之后，Em1的Signal Rate增加，请停止实验并立即与工作人员联系！

2.测量样品的瞬态性质之前，请用先对样品的稳态性质进行表征，了解样品的激发光谱与发射光谱及最

佳激发波长和发射波长；

3.用PMT检测时，必须等稳压电源CO1的温度示数在-15oC以下才可以开始采集数据；

4.狭缝范围0.01～18nm，调节时注意不要超过其上限；（L1: 1mm相当于1.8nm, 200-900nm)；（L2: 1mm

相当于5.4nm, 900-1900nm)

5.每次设置完参数后都要点击Apply或者回车键确定；

6.文件保存路径为：C:\data\导师\自己文件夹

7.用专用u盘拷贝数据并到另一台电脑发送数据

8.如实填写仪器使用记录，爱护仪器。

三、稳态荧光光谱的测定

1.紫外可见区稳态荧光光谱的测定步骤

1)打开Xe900电源，待其稳定，稳定后电压约16-17V，电流25A；

2)打开CO1电源和FLS920主机电源；

3)打开计算机，双击桌面上F900图标，进入工作站

4)点击窗口左上角的按钮，进入Signal Rate设置窗口，先将Excitation Wavelength和Em1

Wavelength处的Δλ均设置为0.01nm，按回车键(Enter)或者点击Apply确认，再将Source设置为Xe900，

Em1 Detector设置为R955，然后点击Apply；

5)打开样品室的盖子，放入待测样品，然后盖好；

6)调节slit到合适大小（一般2.5mm）。注意：对于未知样品的最大Em的情况下，Em1的slit第一次只

能开一点（一般< 0.3mm），以避免荧光最强未知的signal rate 大于106，破坏PMT。

7)点击按钮，选择Emission Scan，进入设置窗口，在General标签内选择L1，在Excitation标签

内，将Monochromator Wavelength设置为合适的激发波长，在Emission1标签内根据待检测波长将Detector设置为R928-P A，然后在Emission Scan Parameters内设置波长扫描范围、扫描间隔（step）、停留时间（Dwell Time）和扫描次数（Number of Scans），设置完毕后点击Start即开始测量，得到发射光谱(荧光光谱)；

8)单击按钮，选择Excitation Scan，进入设置窗口，在General标签内选择L1，在Emission1栏内，

将Monochromator Wavelength设置为待检测波长，Detector根据待检测波长设置为R955，然后在Excitation Scan Parameters内设置波长扫描范围、扫描间隔（step）、停留时间（Dwell Time）和扫描次数（Number of Scans），设置完毕后点击Start即开始测量，得到激发光谱；

9)在Signal Rate设置窗口内输入相应的Excitation Wavelength和Em1 Wavelength值，逐渐加大Δλ，使

Em1获得一个合适的Signal Rate（注意：在设置后需要按下回车或者Apply按钮设置才真正生效，Ref的Signal Rate不要超过107，Em1的Signal Rate最好不要超过105，千万别超过106）；按照步骤7）进行测试，得到发射光谱。

注意：对于已知样品的最佳Ex、Em波长情况下，可以直接跳过7）与8）步骤，直接进入9）。2.近红外区稳态荧光光谱的测定步骤

如果测量范围在近红外区(900-1900nm)，需要用到InGaS检测器，具体操作步骤和设置如下：

1)打开Xe900电源，待其稳定，稳定后电压约16-17V，电流25A；

2)打开FLS920主机电源；

3)点击窗口左上角的按钮，进入Signal Rate设置菜单，将Excitation Wavelength和Em2

Wavelength处的Δλ均设置为0.01之后，Source设置为Xe，Em2 Detector设置为InGaS，然后点击Apply （注意：将Source设置为Xe之前一定要将Δλ设置到足够小，此情况下Em2 的Signal Rate应低于400cps，否则请通知工作人员）；

4)点击按钮，Emission Scan，进入设置窗口，在General标签内选择L2，选择其它测量步骤与

紫外可见区的稳态荧光测量步骤5～9相同。

3.数据处理

1)测量完成后，直接点击保存图标保存原始文件；

2)数据处理的功能都在Data菜单下：

Scale:将当前的谱图坐标乘以输入的数值显示出来

Normalise：归一化，用此功能可以比较峰位是否相同

Subtract Baseline：扣基线

Crop Range：设置横坐标显示范围

Differentiate：显示微分曲线

Integrate：积分

Reverse：将横坐标刻度倒过来显示

Correction：谱图校正

3)谱图处理完了以后点击File，选择Export ASCII即可以转换成文本文件。

四、荧光寿命的测量

注：目前仪器的配置只能测量紫外可见区的荧光寿命，FLS920配有两个脉冲灯(纳秒和微秒灯)，一般情况下荧光强度在25微秒内衰减到零用纳秒灯，荧光寿命大于25微秒衰减到零用微秒灯，具体设置和步骤如下：

1.紫外可见荧光寿命(荧光强度在25微秒内衰减到零)测量步骤

1)打开CO1，主机和nF900电源；

2)打开计算机，双击桌面上F900图标进入工作站；

3)点击View菜单，选择nF Lamp Setup进入窗口，点击Switch Lamp On，观察纳秒灯的频率，注意在

此窗口不要更改设置，观察正常后关闭窗口。如果发现频率不能稳定在40kHz，请通知工作人员清洗氢灯；

4)点击软件窗口左上角的按钮，进入Signal Rate设置窗口，先将Excitation Wavelength和Em1

Wavelength处的Δλ均设置为0.01，按回车键(Enter)或者点击Apply，再将Source设置为nF Lamp，Em1 Detector设置为R955，然后点击Apply；

5)打开样品室，放入样品，盖好盖子，输入样品的Excitation Wavelength和Em1 Wavelength值，逐渐

加大Δλ，使Em1获得一个合适的Signal Rate(一般不超过2000)；

6)点击按钮，选择Manual Lifetime，进入设置菜单，在mode标签内，选择L1，在Excitation栏

内设置好激发波长和Light Source，在Emission 1栏内设置好发射波长和Detector，将Live选择框勾上，然后开始设置下部的Lifetime Sample 1菜单，在Rates标签内一边观察Stop Rate一边调节Iris Setting使Stop Rate务必在2000以下，再在Time Range标签内选择一个合适的Time Range和Channels （一般为1024），在Stop Condition标签内根据样品情况选择一个合适的条件，设置好之后，点击New开始测试；

2.紫外可见荧光寿命(荧光强度大于25微秒才能衰减到零)测量步骤

对于荧光强度大于25微秒才能衰减到零的样品，需要用到微秒灯，其设置和步骤如下：

1)打开CO1，主机和nF900电源；

2)打开计算机，双击桌面上F900图标进入工作站；

3)点击Options菜单，选择Hardware Configuration在Lamps栏中将Steady State Lamp勾掉，再将

Microsecond Flashlamp勾上，然后确定并重启程序，并把Xe灯处的光路切换开关拨向上方（注意：实验完成后一定要将此开关拨回）；

4)点击软件窗口左上角的按钮，进入Signal Rate设置窗口，先将Excitation Wavelength和Em1

Wavelength处的Δλ均设置为0.01，按回车键(Enter)或者点击Apply，再将Source设置为μF Lamp，Em1 Detector设置为R955，然后点击Apply；

5)打开样品室，放入样品，盖好盖子，输入样品的Excitation Wavelength和Em1 Wavelength值，逐渐

加大Δλ，使Em1获得一个合适的Signal Rate；

6)点击按钮，选择Manual Lifetime，进入设置菜单，在Excitation栏内设置好激发波长和Light

Source，在Emission 1栏内设置好发射波长和Detector，将Live选择框勾上，再在Time Range标签内选择一个合适的Time Range和Channels，在Stop Condition标签内根据样品情况选择一个合适的条件，设置好之后，点击New开始测试；

3.数据处理

1)测量完成后，点击保存将原始文件保存到“C:\data\导师\自己的文件夹”；

2)点击“Zoom In”按钮，然后在图上选取一个需要进行拟合的范围，在Data菜单下选择“Exponential Fit

中的Tail Fit，在弹出的窗口内输入数值进行拟合，得到衰减寿命；

3)对于寿命很短的样品，在样品测量完成后，要做仪器的衰减(即IRF)，液体样品用30％硅胶水溶液

作散射体，固体样品用固体本身作散射体，在Signal Rate设置窗口中将Excitation Wavelength和Em1 Wavelength值都设置为Excitation Wavelength值，然后调整Δλ获得合适的Em1值，完成后关闭窗口。

4)点击按钮，选择Manual Lifetime，进入设置菜单，将Live、IRF和Add选择框勾上，别的设置

与样品一致，设置好之后，点击New开始测试；

5)测量完成后，选择拟合范围，点击Data菜单，选择Exponential Fit中的Rconvolution Fit进行拟合；

6)拟合完成后，保存拟合的文件，共三种类型的文件，原始文件，ASCⅡ文件和图片文件：直接点

击保存可以保存原始文件，点击File选择Export ASCII即可以保存成文本文件；选择save as，保存文件类型选择为Windows MetaFile可以保存成图片格式。

五、关机程序

1)关闭F900程序和计算机；

2)关闭CO1电源、Bentham 225电源、nF900电源和FLS920主机电源；

3)关闭Xe900电源以及其他使用过的仪器；

4)关闭所有的slit

六、培训与预约

该仪器采取专人测试制度，每个课题组派专门的一位研究生接受培训并负责本组测试工作。测试时间采取预约制，每周进行分时段预约，每个时段为1个小时，每周的星期一开始在仪器管理室门口填写预约表（见附件）进行本周的预约，每个课题组原则上每两周只能预约一个时段。

七、其它注意事项:

1)在环境湿度大于70%，温度高于30度时，保持空调或除湿机常开；

2)保持实验室安静和整洁，不得在实验室内进行样品化学处理，实验完毕即取出样品室内的样品。

3)样品室窗门应轻开轻关，避免仪器振动受损

4)每次使用前记录仪器必须做好登记；

5)离开实验室前，须注意关灯，关空调，最后拉开总闸刀

稳态瞬态荧光光谱仪(FLS 920)操作说明书

稳态/瞬态荧光光谱仪（FLS 920）操作说明书 中级仪器实验室 一、仪器介绍 1.FLS 920稳态/瞬态荧光光谱仪具有两种功能 稳态测量：激发光谱(荧/磷光强度~激发波长)、发射光谱(荧/磷光强度~发射波长)、同步扫描谱(固定波长差、固定能量差、可变角)。 瞬态测量：荧光(磷光)寿命(100ps—10s)。 适合各类液体和固体样品的测试。 2.主要应用 高分子和天然高分子自然荧光的研究 溶液中大分子分子运动的研究 固体高分子取向的研究 高聚物光降解和光稳定的研究 光敏化过程的研究 3.主要性能指标 光谱仪探测范围：(光电倍增管， 190－870nm；Ge探测器，800－1700nm) 荧光寿命测量范围：100ps－10s 信噪比：6000：1(水峰Raman) 可以配用制冷系统，为样品提供变温环境 液氮系统(77K－320K) 使用Glan棱镜，控制激发光路、发射光路的偏振状态 使用450W氙灯和纳秒、微秒脉冲闪光灯做激发光源 F900系统软件：控制硬件，包括变温系统，数据采集、分析

4. 仪器主要部分结构图

5.仪器光路图 二、仪器测试原理(SPC) 时间相关单光子计数原理是FLS920测量荧光寿命的工作基础。 时间相关单光子计数法(time－correlated single photon counting)简称“单光子计数(SPC)法”，其基本原理是，脉冲光源激发样品后，样品发出荧光光子信号，每次脉冲后只记录某特定波长单个光子出现的时间t，经过多次计数，测得荧光光子出现的几率分布P(t)，此P(t)曲线就相当于激发停止后荧光强度随时间衰减的I(t)曲线。这好比一束光(许多光子)通过一个小孔形成的衍射图与单个光子一个一个地通过小孔长时间的累计可得完全相同的衍射图的原理是一样的。

岛津分子荧光光谱仪RF-5301PC氙灯安装及性能测试(整理的说明书)

岛津分子荧光光谱仪 RF-5301PC 氙灯安装和性能测试

岛津分子荧光光谱仪RF-5301PC 氙灯安装和性能测试 摘要：介绍了岛津分子荧光谱仪RF-5301PC的氙灯安装和仪器的灵敏度，S/N，波长准确度测试，及荧光谱仪的结构和一些主要构件。 面向的对象：主要是化验人员的仪器维护和初次接触荧光光谱仪的工程人员。另一个目的也是自己以后维护便于查看。这个仪器接触不多，也希望其他朋友帮助指正。 目录： 一些安全问题------------------------------------------------------1楼 仪器的一个不能和计算机通信的问题解决------------------------1楼 RF-5301的通信设置---------------------------------------------------2楼 灯的安装及位置的校准------------------------------------------------3楼 仪器灵敏度的调整（增益调整）------------------------------------4楼 仪器性能测试（S/N的测试）----------------------------------------5楼 校准波长准确度---------------------------------------------------------6楼 分子荧光光谱仪介绍---------------------------------------------------7楼 参考文献： 图片后面的【x】表示引用的文献。 仪器专场展示：分子荧光光谱圆二色光谱拉曼光谱

EI操作手册稳态瞬态荧光光谱仪(FLS 920)操作说明书

Edinburgh Instrument FLS920 User Manual

目录 一、开机步骤 (2) 二、实验操作 (4) 1、实验前准备 (4) 2、稳态实验 (6) A、发射光谱实验 (6) B、激发光谱实验 (9) C、同步谱 (10) D、Map (11) E、偏振光谱 (12) 3、低温实验 (17) A、液氮冷却系统(Oxford) (17) B、ARS冷却系统 (19) 4、样品衰减操作 (22) A、纳秒、皮秒级衰减 (22) 纳秒灯为光源 (22) 激光器为光源 (27) B、微妙、毫秒级衰减 (29) 三、数据处理 (32) 1、数据一般处理 (32) 2、稳态光谱 (33) 3、瞬态光谱 (33) 四、附录 (36) 1、氢灯清洗方法 (36)

一、开机步骤 1、打开总电源（开之前保证所有仪器开关关闭） 2、开启PH1 3、开启PMT制冷电源CO1 4、开启光谱仪控制电源CD920（控制盒）或样品室下方的控制板电源 此为控制盒 此为控制板 5、根据需要的光源开启氙灯或是其它灯源电源 此为氙灯电源 此为氢灯电源

6、开启电脑，同时将谱仪样品室上方盖子移开。待进入操作系统后进入F900软件。

二、实验操作 1、实验前准备 在做实验前有几点需要注意： A 、 对于红敏PMT （R928），其制冷必须达到一定温度，一般为室温-40℃左右。待C O 1 显示在-17℃左右的时候，在软件的S i g n a l R a t e 窗口里观察E m 1的C P S 读数显示。 若其读数维持在50C P S 以下，则表明读数正常，P M T 制冷达到工作状态，可以用该探测器进行实验。 Fig.2.1 B 、 对于近红PMT （5509），其必须准备以液氮杜瓦罐（约15升左右），将制冷部件的 管子插入罐中，开启制冷电源 Fig.2.2 制冷电源 杜瓦罐 通气管道

荧光光谱检测技术

荧光光谱技术是一种重要的光电检测技术，具有许多独特优势，选题合理。请尽快确定课题完成方式，完善相关技术路线，开展课题调研论证工作。80 荧光光谱检测技术 荧光光谱技术是一种重要的光电检测技术，特别是在物质种类检测中有着重要的应用。它是对辐射能激发出的辐射强度进行定量分析的发射光谱分析方法。物体经过叫短波长的光照射后辐射出较长波长的光，这种光就是荧光，最常见的日光灯的发光原理就是物质吸收较短波长的光（紫外光）能量辐射出较长波长的光（可将光）的现象。 一、荧光光谱检测技术原理 通常条件下，分子处于单重态的基态。分子受到紫外至红外激励的光子入射作用后，分子得到受激而引起电子能级的跃迁或振动和转动能级的跃迁，分子受激后，处于电子激发的单重态的某种振动激发态( v ≠0)的分子(见图1)或通过内部转换(Internal Conversion)和振动弛豫(Vibrational Relaxation)的非辐射，相继发 射荧光光子，回到电子基态得到荧光光谱 hv；或通过激发单重态S1和激发三重 f 态T1间的系间窜越(Intersystem Crossing)和振动弛豫至T1 ( v =0)，放出能量回到基态S0( v =0,1)得到荧光光谱的光子 hv。 r 图1 光致发光系统部分

每一种物质的分子或原子结构是独一无二的，原子能级图也就有不同的分布，原子能级跃迁也就会辐射出不同频率的电磁波，就好比是人的指纹；每一种物质的荧光效应都有其特定的吸收光的波长和发射的荧光波。利用这一特性，可以定性鉴别物质。研究分子的荧光光谱可为研究分子的微观结构、分子的构象特点及变换情况提供帮助。 任何发荧光的分子都具有两个特征光谱:荧光激发光谱(Excitation Spectrum)和荧光发射光谱(Emission Spectrum)。它们是荧光分析法进行定性和定量分析的基本参数和依据，也是荧光光谱稳态分析中的两个基本特征。 二、荧光光谱检测技术的特点 1.灵敏度高 荧光光谱检测分析有着极高的灵敏度。与常用的紫外—可见分光光度法比较，荧光是从入射光的直角方向检测，即在相对的暗背景下检测荧光的发射，而分光光度法是在人射光的直线方向检测，即在亮背景下检测暗线。因此一般荧光检测分析的灵敏度要比分光光度法大2-3个数量级。例如，对易致癌的3, 4苯并花（3,4-Benzopyrene）的测定，若采用分光光度法，可检测到10-6数量级；而采用荧光法可以达到10-9数量级。 2.选择性强 荧光光谱包括激发光谱和发射光谱。所以荧光法既能依据特征发射，又可按照特征吸收，即用激发光谱来鉴定物质.假如某几种物质的发射光谱相似，可从激发光谱差异区分它们。若其吸收谱相同，则可用发射谱将其区别。因此，与只能得到待测物质的特征吸收光谱的分光光度法相比，在鉴定物质时，荧光法选择性更强。 3.样品用量少及方法简便 由于灵敏度高，所以可大大减少样品用量。特别在使用微量样品时，效果明显。例如用荧光法测定蛋白质中色氨酸的含量时，只用40ug的样品即可。另外荧光分析方法简便，快速。 4.能提供较多的物理参数 可提供包括激发光谱、发射光谱及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等许多物理参数.这些参数反映了分子的各种特性，且通过它们可以得到被研究分子的更多信息，这也是分光光度法不能相比的地方。 5. 环保特点 具备环保性，试验后的样品不污染环境，绿色检测手段，将会获得不断推广。 三、荧光光谱检测技术的应用 由于荧光光谱检测具有如上诸多优点，所以在工程应用中有着广泛的应用，如在食品加工过程中用于食品安全的监测、地质学中用于石油矿物勘探、土壤矿物成分的测定以及物质中微量元素的检测等等。 1.用于元素种类的定性分析 由Moseley 定律可知： 1 =- K Z S () λ

光谱仪荧光寿命模块升级

光谱仪荧光寿命模块升级 一、设备用途 在现有稳态荧光光谱仪上选择一套升级瞬态功能，用于荧光寿命和磷光寿命的测量。 二、技术指标 1，现有两套稳态荧光光谱仪型号：（1）爱丁堡 FLS920；（2）Horiba JY FluoroMax-4。 2，荧光寿命： 2.1工作原理：时间相关单光子计数（TCSPC） 2.2测量寿命范围：100ps-50μs 2.3激发光源：单波长皮秒脉冲LED，或者单波长皮秒脉冲激光器 *2.4实现时间分辨激发光谱、时间分辨发射光谱测量，可以同时测量得出多组分样品中各个组分的荧光寿命 2.5数据采集模块通过USB与计算机连接，通过软件自动切换 3，磷光寿命： *3.1测量寿命范围：1μs-10s 3.2最小时间分辨率≤10ns 3.3激发光源：微秒闪光灯，波长范围200-800nm 3.4完成时间分辨激发光谱、时间分辨发射光谱测量 4，配置清单： 4.1 寿命测试模块一套 4.2 微妙闪光灯一个，波长范围：200-800nm 4.3 405nm，485nm 或波长相近激光器各一个 5, 升级增值项目：可实现低温荧光寿命测量。 三、技术服务 1，设备安装调试 仪器到达用户所在地后, 在接到用户通知后1周内执行安装调试直至达到验收指标。

2，技术培训 在用户所在地对用户进行1~2人、为期至少1天的免费培训。培训内容包括仪器的技术原理、操作、数据处理、基本维护等。 3，保修期：提供1年全面免费保修，保修期自技术验收签字之日起计算。保修期满前1个月内卖方应负责一次免费全面检查，并写出正式报告，如发现潜在问题，应负责排除。 4 维修响应时间：卖方应在24小时内对用户的服务要求作出响应，一般问题应在48小时内解决，重大问题或其它无法迅速解决的问题应在一周内解决或提出明确解决方案，否则卖方应赔偿相应损失。

PTI荧光稳态测量系统操作说明书 20101013

荧光稳态测量系统（PTI QuantaMaster TM 4CW）操作说明书 一．仪器介绍 1．荧光稳态测量系统（PTI QuantaMaster TM 4CW）功能 PTI推出的QuantaMaster／TimeMaster系列荧光稳态／瞬态测量系统具有测量可靠、灵敏度高、使用方便、配制灵活等优点，做稳态时：系统信噪比一般为6000:1，最高可达12000:1，数据采集速度可达1000 点/秒，波长范围从紫外到近红外，样品所处的环境温度可调。在稳态光谱测量中，通过使用光子计数技术，提供最高的微弱信号检出能力，可对荧光物质进行定性检测和定量分析。除常规的荧光稳态测量外，还可进行各向异性（偏振）、双发射、化学和生物发光等方面的测量。做瞬态（荧光寿命）测量时，系统采用了先进的频闪分时测量技术和非线性时标据采集技术，具有测量速度快、精度高、灵敏度高、使用方便、配制灵活等优点，是目前测量速度最快、最先进的荧光寿命测量系统。该系统能够探测7pM荧光素的寿命，最短测量寿命可达100ps。激发光源可采用激光、弧光脉冲及LED灯以满足不同的应用。通过扩展和升级，可实现电致发光、磷光、荧光比率和比率成像等的测量。 主要应用：1、光物理与光化学、光合作用机理；2、分子反应动力学；3、突变筛选；4、缩氨酸结合动力学；5、FRET动力学；6、发射光谱和荧光淬灭； 7、荧光量子产率、荧光偏振及导向性；8、蛋白质结构与折叠的研究；9、DNA 测序研究、ds-DNA中的染料探针；10、膜的渗透性及结构研究、膜的流动性和脂相转移；11、药物与生物体系相互作用的检测；12、溶剂-溶质相互作用； 13、麻醉过程研究；14、蛋白结构和折叠；15、核酸动态特性与结构；16、光合作用机理；17、激发态特性；18、层面研究；19、膜的渗透性与离子转移；20、膜的动态特性和结构；21、分子距离和旋转动态特性；22、溶剂与溶质的相互作用；23、微胞结构与反应动力学；24、污染物质的探测与辨别；25、聚合物结构和动态特性；26、药与生物系统的相互作用；27、混合荧光物质的探测与辨别。

荧光数据的可靠性测定(二)

荧光数据的可靠性测定(二) 刘美蓉 (分析测试中心光谱组电话：62566250 Email: mrliu@https://www.wendangku.net/doc/601795546.html,) 1.背景介绍 在荧光光谱仪的测试过程中,有很多影响因素决定了获得数据的可靠性（本文所有数据均出自Edinburgh FLS980 荧光光谱仪）。比如，杂散光、样品架、样品槽、脉冲周期、积分球污染等。本文从稳态、寿命，量子产率三个方面探讨可能影响测定结果准确性的因素。 2.方法介绍 2.1 技术原理： 一般固体样品散射光较强，溶液样品散射光较弱，散射光的强度与粒径大小的六次方成正比，粒径越小，散射光越弱。稳态光谱或寿命测试中可以通过添加滤光片或者与KBr 研磨压片，来降低杂散光，获得真实的荧光数据。寿命测试中，寿命曲线衰减是否完成直接影响拟合寿命值的准确性。寿命曲线必须衰减完成，才可以得到准确的寿命值。量子产率测定中，样品槽、积分球都会吸收光，造成量子产率测定的不准确性；溶液吸光度不同，会显著影响量子产率测定值；积分球污染会产生不必要的荧光，致使量子产率无法测试。 2.2实验方法： 稳态光谱 （1）杂散光的影响 一般固体样品散射光较强，溶液样品散射光较弱，散射光的强度与粒径大小的六次方成正比，粒径越小，散射光越弱。有的样品散射光非常强，如TiO 类样品，散射光远远 2 超过荧光信号，对测试带来极大的影响，无法获得真实的数据。因此,测试固体样品或浓溶液样品时,需要在激发处加带通滤光片,发射处加截止滤光片，有必要的话在激发、发射处加两片以上滤光片。

500 600 700 800 20000 40000 60000 80000 F l u o r e s c e n c e I n t e n s i t y wavelength/nm 470520570620670720770 -5000 05000 1000015000200002500030000 35000 F l u o r e s c e n c e I n t e n s i t y wavelength/nm （a ）激发370nm ，激发处加370nm(带宽10nm) (b) 激发370nm ，激发处加370nm(带宽10nm) 滤光片，发射处加400nm 长通滤光片 滤光片，发射处加400nm 和420nm 长通滤光片 图1 TiO 2类样品荧光发射光谱 TiO 2类样品散射非常强，在370nm 激发下做荧光发射光谱时，图1（a ）激发处加了370nm 带通滤光片，发射处加了400nm 长通滤光片，做出的谱图依旧完全没法用（670nm 后谱图有显著变化是因为仪器自带的自动长通滤光片670nm 在起作用）；发射处又加了420nm 的长通滤光片，对杂散光抑制就非常好，得到样品的正常发射光谱，如图1（b ）显示。 （a ）发射处加400nm 长通滤光片 (b) 激发处加290nm-380nm 带通 （c ）与KBr 混合研磨压片， 滤光片,发射处加400nm 长通滤光片 激发处加290nm-380nm 带通 滤光片，发射处加400nm 长 通滤光片 图2 某有机样品荧光发射光谱（激发350nm ） 某有机样品散射非常强，在350nm 激发下做荧光发射光谱，图2（a ）发射处加了400nm （a ） （b ） （c ）

荧光光谱的相关概念

实验1－4 荧光谱测量 发布时间：2008-06-23 实验1－4 荧光谱测量 某些物质受到电磁辐射而激发时，它们能重新发射出相同或较长波长的光。这种现象称为光致发光，荧光是光致发光现象中最常见的类型。如果停止照射，则荧光很快（ 10-6s）地消失。通常所观察到的荧光现象是指物质吸收了波长较短的紫外光后发出波长较长的可见荧光。实际上，荧光现象并不限于上述情况。有些物质吸收了紫外光，仍然发出波长稍长的紫外荧光。有些物质吸收了比紫外光波长短得多的X射线，然后发出波长比所吸收的X射线的波长稍长的X射线荧光，据此而建立了X射线荧光分析法。通过测量荧光的强度，可用于定量测定许多无机和有机物质，它已成为一种很有用的分析方法，特别在生物化学方面有着广泛的应用。通过实验学习和掌握荧光光度计测定物质荧光光谱的原理和方法；熟悉荧光分光光度计的结构及使用方法；测量物质的荧光光谱 一、实验原理 发光物质因引起发光的原因不同可分为：热致发光、光致发光、电场致发光、阴极射线发光、高能粒子发光及生物发光等多种发光方式。光致发光的原理是分子在吸收了光能后，从基能态跃迁到高能态，在它们再从高能态返回基能态时，以光能的形式向外释放之前吸收的外来能量，即光致发光所发生的光。 （一）荧光的产生 物质吸收光能后所产生的光辐射称之为荧光和磷光单重态和三重态。分子中的电子运动包括分子

轨道运动和分子自旋运动，分子中的电子自旋状态，可以用多重态2S+1描述，S为总自旋量子数。若分子中没有未配对的电子，即S=0，则2S+1＝1，称为单重态；若分子中有两个自旋方向平行的未配对电子，即S=1，则2S+1＝3，称为三重态。 大多数分子在室温时均处在电子基态的最低振动能级，当物质分子吸收了与它所具有的特征频率相一致的光子时，由原来的能级跃迁至第一电子激发态或第二电子激发态中各个不同振动能级，其后，大多数分子常迅速降落至第一电子激发态的最低振动能级，在这一过程中它们和周围的同类分子或其他分子撞击而消耗了能量，因而不发射光。过程如图1－4－1所示。 处在第一激发单重态的电子跃回基态各振动能级时，将产生荧光，在这一过程中除了荧光还有磷光，以及延迟荧光等，本次实验我们主要讨论荧光。荧光的产生在10-7－10-9S内完成。荧光和磷光的根本区别：荧光是由激发单重态最低振动能层至基态各振动能层之间的跃迁产生的；而磷光是由激发三重态最低振动能层至基态各振动能层之间的跃迁产生的。

荧光光谱技术在肿瘤诊断中的应用

荧光光谱技术在肿瘤诊断中的应用 院系： 专业： 学生姓名： 学号： 二〇一年月日

摘要 分析归纳了荧光光谱技术的产生和发展，并说明了其应用中存在的优缺点；阐述了人体正常组织和癌变组织在激光激发下辐射出的荧光光谱存在一定的差异，并以此为依据介绍荧光光谱技术在肿瘤诊断中的应用。 关键词：荧光光谱；肿瘤；诊断

ABSTRACT Analysis and summarizes the emergence and development of fluorescence spectroscopy, and describes the advantages and disadvantages of its application; expounds there are some differences between the fluorescence spectra of the body's normal tissue and cancerous tissue radiated in the laser excitation, and introduces the fluorescence spectroscopy in tumor diagnosis on the basis of the above content. Keywords: Fluorescence spectroscopy; tumor; diagnosis

目录 引言 (1) 1荧光光谱技术简介 (1) 1.1荧光发光机制 (1) 1.2荧光光谱系统 (1) 1.3荧光光谱技术的分类 (2) 2荧光光谱技术在肿瘤诊断方面的应用 (2) 2.1荧光光谱技术应用于肿瘤诊断的基本依据 (2) 2.2荧光光谱技术对于肿瘤的辅助诊断价值 (3) 3荧光光谱技术应用的展望 (3) 结语 (4) 参考文献 (5)

稳态瞬态荧光光谱仪操作说明书范文

稳态瞬态荧光光谱仪操作说明书

稳态/瞬态荧光光谱仪（FLS 920）操作说明书 一、仪器测试原理 时间相关单光子计数原理是FS920测量荧光寿命的工作基础。 时间相关单光子计数法(time－correlated single photon counting)简称“单光子计数(SPC)法”，其基本原理是，脉冲光源激发样品后，样品发出荧光光子信号，每次脉冲后只记录某特定波长单个光子出现的时间t，经过多次计数，测得荧光光子出现的几率分布P(t)，此P(t)曲线就相当于激发停止后荧光强度随时间衰减的I(t)曲线。这好比一束光(许多光子)经过一个小孔形成的衍射图与单个光子一个一个地经过小孔长时间的累计可得完全相同的衍射图的原理是一样的。 二、测量之前需要特别注意的事项 1.在切换光源、修改设置或放样品之前必须把狭缝（Δλ）关到最小 （0.01nm），否则会损坏光电倍增管！如果打开样品室盖子之后，Em1的Signal Rate增加，请停止实验并立即与工作人员联系！ 2.测量样品的瞬态性质之前，请用先对样品的稳态性质进行表征，了解样 品的激发光谱与发射光谱及最佳激发波长和发射波长； 3.用PMT检测时，必须等稳压电源CO1的温度示数在-15oC以下才能够开始 采集数据； 4.狭缝范围0.01～18nm，调节时注意不要超过其上限；（L1: 1mm相当于 1.8nm, 200-900nm)；（L2: 1mm相当于5.4nm, 900-1900nm)

5.每次设置完参数后都要点击Apply或者回车键确定； 6.文件保存路径为：C:\data\导师\自己文件夹 7.用专用u盘拷贝数据并到另一台电脑发送数据 8.如实填写仪器使用记录，爱护仪器。 三、稳态荧光光谱的测定 1.紫外可见区稳态荧光光谱的测定步骤 1)打开Xe900电源，待其稳定，稳定后电压约16-17V，电流25A； 2)打开CO1电源和FLS920主机电源； 3)打开计算机，双击桌面上F900图标，进入工作站 4)点击窗口左上角的按钮，进入Signal Rate设置窗口，先将Excitation Wavelength和Em1 Wavelength处的Δλ均设置为0.01nm，按回车键(Enter)或者点击Apply确认，再将Source设置为Xe900，Em1 Detector设置为R955，然后点击Apply； 5)打开样品室的盖子，放入待测样品，然后盖好； 6)调节slit到合适大小（一般2.5mm）。注意：对于未知样品的最大Em的 情况下，Em1的slit第一次只能开一点（一般< 0.3mm），以避免荧光最强未知的signal rate 大于106，破坏PMT。 7)点击按钮，选择Emission Scan，进入设置窗口，在General标签内选 择L1，在Excitation标签内，将Monochromator Wavelength设置为合适

稳态瞬态荧光光谱仪

稳态瞬态荧光光谱仪 1. 工作条件 1.1 电源：220V（±10%），50Hz，地线 1.2 工作温度：20?C－25?C； 1.3 相对湿度：<75%； 1.4 无特殊水电气要求。 1.5 配置符合中国有关标准要求的插头。否则，应提供适当的转换插座。 2. 设备用途 稳态瞬态荧光光谱仪将主要用于蛋白质、多肽、核酸、以及天然产物等荧光光谱和荧光寿命相关研究。 3. 技术指标 3.1功能：校正的激发光谱、发射光谱、三维光谱、同步扫描光谱、动态扫描、荧光寿命 3.2*高级功能： 1)多波长对动态扫描（最多8对）,独立参数设置； 2)批量执行测试方法文件； 3)自动消除3D光谱的1阶和2阶散射峰带； 4)1~5 指数拟合分析 5)批量模式，可使用相同参数处理10,000条衰减曲线 6)寿命分布分析 7)30项指数级数分析 8)Global分析，可处理5指数，100条衰减曲线 3.3测试波长范围：200 - 870nm 3.4稳态光源：150W 无臭氧氙灯，垂直安装； 3.5寿命光源：兆赫兹皮秒纳秒寿命光源4只，微秒寿命光源1只 3.6*信噪比：＞16,000:1 （室温R928P，5nm带宽，1s响应时间，水拉曼信号, 验收指标） 3.7*分辨率：0-30nm 0.05nm 步进

3.8全反射光学系统；包括灯室和样品仓，无透镜导致的色差； 3.9波长分辨率：0.02-200nm 3.10波长准确度：±0.5nm （3波长测试） 3.11波长重复性：±0.1nm 3.12最快响应时间：1ms 4. 产品配置和附件要求（除明确标明国产外，其他必须为国外厂商生产） 1)荧光光谱仪主机1套 2)Origin正版软件及密匙1套 3)信号采集及数据处理计算机各1台 4)积分球量子产率1套 5)透射吸收探测器1台 6)进口250uL比色皿1支 7)国产熔融一体4mL比色皿2支 8)衰减片7片 9)控制和数据处理计算机 5. 技术及售后服务 5.1 保修及维修：设备自验收合格双方签字之日起计算保修1年，终身维修。 5.2 培训：安装同时现场培训，掌握基本操作，时间不少于3天；免费2人次参 加北京应用中心举办的高级应用培训 5.3 包装和运输：投标商对任何不当包装或防护措施导致的设备坏损、费用增加 等后果负责。 6. 报价和付款方式：报价为CIP报价 7. 交货日期：合同生效后4个月内交货。 8. 目标港：CIP 北京首都机场

瞬态稳态荧光光谱仪技术参数

瞬态稳态荧光光谱仪技术参数 （一）功能 1.1样品类型：液体、固体、薄膜及粉末样品，水拉曼峰的信噪比优于20,000:1。 1.2荧光激发和发射光谱、荧光衰减光谱、荧光时间分辨激发和发射光谱(TRES) ，最小荧光寿命100ps。 （二）技术参数 2.1光源 2.1.1 450W除臭氧氙灯(集成式电源)：可以实时显示功率、电压、电流和使用时间 2.1.2 半导体激光光源：375nm激光光源、405nm激光光源 2.2激发和发射单色器 2.2.1焦距不小于320mm，Czerny Turner结构单色仪； 2.2.2电脑控制三光栅位塔轮,最少预留一个光栅位给后期近红外升级； 2.2.3电脑控制自动滤光片轮，用于消除高级衍射光； 2.2.4最小步进0.02nm； 2.2.5检测器接口不少于二个,预留给后期近红外升级 2.3样品仓 2.3.1大型多功能样品室，顶部、底部、侧面多个开口； 2.3.2配置透镜聚焦光学元件； 2.3.3配比色皿样品架，带水浴管路及温度探测器； 2.3.4配前表面样品支架，适用于固体、高浓度及浑浊液体前表面荧光测试。 2.3.5配液氮低温附件 2.3.6配滤光片组件：50mm×50mm ，345nm, 395nm, 455nm, 495nm, 550nm, 590nm, 645nm 2.3.12量子产率测量组件(可内置样品仓中，不需光纤联接) 2.4检测器 2.4.1单光子计数光电倍增管，配置帕尔贴制冷组件，光谱范围：200-870nm； 2.4.2工作温度：-20?C；

2.5数据获取电子部分 2.5.1 TCSPC计数模块 2.5.2检测器(STOP)通道不少于2个； 2.5.3光源(START)通道不少于2个； 2.5.4TCSPC 512-8192通道，最小时间分辨率305fs； 2.6分析软件 2.6.1*基于Windows TM7系统，一个软件能同时完成谱仪控制，状态监控，光谱及寿命测量及数据分析处理： 2.6.2控制及设置单色仪，灯源，探测器等部件； 2.6.3部分第三方产品(如激光、示波器、控温冷头等)通讯功能。 2.7计算机：四核或更好处理器， 3.0GHz以上，4GB以上内存，500GB以上硬盘；DVD 刻录; 22”监视器；品牌激光打印机一台。

日立F-7000荧光分光度计的操作规程

F-7000 偏振稳态荧光光谱仪使用说明 一、荧光光谱仪的开启 开启电脑，待Win XP操作界面显示后，接通光度计左侧电源开关（POWER），约5秒钟后主机右上方绿色氙灯指示灯点亮，表示氙灯已经启动工作，预热15分钟。 二、基本操作步骤 1．双击桌面快捷方式FL Solutions，进入仪器操作主界面； 2．待仪器初始化完成后，点击快捷栏Method按钮后，立即显示了分析方法(Analysis method)的五个重叠界面，分别为“常规”（General），“仪器条件” （Instrument），“模拟画面”（Monitor），“处理”（Processing），“报告”（Report）五个界面； 3．点击常规(General)按钮，在测量方式(Measurement)中选择实验所需的扫描方式； 4．点击实验条件(Instrument)按钮，依次在扫描模式(Scan mode)中选择扫描模式；在数据模式(Data mode)中选择采集类型；并在相应位置设置扫描波长，扫描波长范围、扫描速度、电压（一般为400V）、响应时间（一般为Auto）、狭缝等参数。点击“OK”按钮，返回仪器操作主界面； 5．点击Sample按钮，编辑样品名称(Sample name)，勾选自动保存(Auto File)和选择文件存放路径(File name) 。点击OK按钮，确认上述设置，返回主界面； 6．取四面透光的石英比色皿，手指捏住上端棱角处，先用蒸馏水润洗3次，再用样品液润洗3次，然后装入约1cm高度的样品溶液，用擦镜纸吸干比色皿外壁； 7．打开试样室盖，将比色皿放入试样槽中。若为固体样品时，则放到专用的样品架上测定。盖上试样室盖。 三、数据的采集及处理 1．点击Measure按钮，开始数据采集； 2．待检测自动完成，屏幕出现扫描图谱后，点击工具栏中功能(Utility)下拉菜单的Lamp off，关闭氙灯；