四类微生物筛选试验

吉林化工学院

生物工程专业

四类微生物的分离、培养及鉴定

摘要：学习和掌握细菌、放线菌、霉菌、酵母菌常用培养基的配制方法，学习和掌握细菌、放线菌、霉菌、酵母菌常用培养基的配制方法。通过观察和比较分离出来的细菌以及放线菌、酵母菌及霉菌的菌落特征，掌握初步鉴别上述微生物的方法。本实验通过从土壤中分离细菌、放线菌、霉菌[1]以及在面曲中提取酵母菌四类微生物，在各自的培养基分别培养最后在显微镜下观察、鉴定。得出这四类微生物菌落特征不同。

关键字：微生物、分离、培养、鉴定

前言：微生物发酵工业中，要使微生物良好地生长或累积代谢产物，就需要应用微生物纯种培养技术。微生物纯种培养技术的发展表现为：从固体培养法为主发展到液体培养法为主；从浅层培养法为主发展到深层发酵法；从静止培养法发展到通气搅拌培养法；从单罐培养发展到连续培养以及多级连续培养；从利用分散的微生物细胞发展到固定化细胞；从利用自然菌种到利用变异菌株以至“工程菌”等等。分离技术是人类揭开微生物世界奥秘的重要手段，要知晓在自然条件下处于混生状态的某一种微生物的特点以及它对人类是有益或是有害之谜，就必须采用在无菌技术基础上的纯种分离方法。利用固体培养基来分离和纯化微生物。显微镜来鉴别微生物。

1.实验仪器与试剂

1.1主要仪器

显微镜、天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、pH 试纸、棉花、纱布、牛皮纸、线绳、报纸等

1.2主要试剂

牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、可溶性淀粉、琼脂、黄豆芽、NaCl、KNO3、K2HPO4、MgSO4、FeSO4、KH2PO4、MgSO4?7H2O、NaOH溶液（1mol/L）。

2.实验步骤

2.1培养基的配制

2.1.1肉膏蛋白胨培养基的配制

培养基成分

牛肉膏0. 45g

蛋白胨 1.5g

NaCl 0.75g

琼脂 2.25g

水150mL

pH 7.2~7.4

配制方法

（1）称量及溶化：分别称取蛋白胨和NaCl的所需量，置于烧杯中，加入所需水量的2／3左右的蒸馏水；用玻璃棒挑取牛肉膏置于另一小烧杯中，进行称量。然后加入少量蒸馏水于小烧杯中，加热融化，倒入上述烧杯中。

（2）定容：将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。

（3）加琼脂：将所需量的琼脂先放到三角瓶中，再将定容后的培养基倒入三角瓶中。

（4）调pH：待溶液冷至室温时，用1mol/L NaOH溶液调pH至7.2~7.4。

（5）分装、加塞、包扎。

（6）高压蒸汽灭菌20分钟。

待培养基冷却至60℃左右时，倒入已灭菌的培养皿中，等到培养基完全凝固后，放入冰箱中保存。

2.1.2高氏一号培养基的配制

培养基成分

可溶性淀粉3g

KNO3 0.15g

NaCl 0.075g

K2HPO4 0.075g

MgSO4 0.075g

FeSO4 0.0015g

琼脂3g

水150mL

pH 7.2～7.4

配制方法

（1）称量及溶化：先称量可溶性淀粉，置于一小烧杯中，加入少量冷水，将淀粉调成糊状，加热，使淀粉完全融化。再分别称量KNO3、NaCl、K2HPO4、MgSO4，依次逐一加入水中溶解。

（2）定容：将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。

（3）加琼脂：将所需量的琼脂先放到三角瓶中，再将定容后的培养基倒入三角瓶中。

（4）调pH：待溶液冷至室温时，用1mol/lLNaOH溶液调pH至7.2~7.4。

（5）分装、加塞、包扎。

（6）高压蒸汽灭菌20分钟。

待培养基冷却至60℃左右时，倒入已灭菌的培养皿中，等到培养基完全凝固后，放入冰箱中保存。

2.1.3马丁氏培养基的配制

培养基成分

葡萄糖 1.5g

蛋白胨0.75g

K2HPO4 0.15g

MgSO4?7H2O0.075g

琼脂 2.4g

水150mL

链霉素溶液（10000U/ml）0.49mL（临用前加入）的配制方法

（1）称量：称取培养基各成分的所需量。

（2）溶化：在烧杯中加入约2/3所需水量，然后依次逐一加入并溶化培养基各成分。

（3）定容：将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。

（4）加琼脂：将所需量的琼脂先放到三角瓶中，再将定容后的培养基倒入三角瓶中。

（5）加塞、包扎。

（6）高压蒸汽灭菌20分钟。

（7）临用前，加热融化培养基，待冷却至60℃左右，按每1000ml培养基以无菌

操作加入3.3ml的链霉素溶液，迅速混匀。

2.1.4豆芽汁葡萄糖培养基的配制

培养基成分

黄豆芽15g

葡萄糖7.5g

水150mL

配制方法

（1）称取新鲜黄豆芽10g，置于烧杯中，再加入100mL水，小火煮沸30min，用纱布过滤，补足失水，即制成10％豆芽汁。

（2）按100ml 10％豆芽汁加入5g葡萄糖。

（3）加琼脂：将所需量的琼脂先放到三角瓶中，再将定容后的培养基倒入三角瓶中。

（4）分装、加塞、包扎。

（5）高压蒸汽灭菌20分钟。

待培养基冷却至60℃左右时，倒入已灭菌的培养皿中，等到培养基完全凝固后，放入冰箱中保存。

2.2微生物的分离和培养

2.2.1细菌分离

（1）制备土壤稀释液

称取土样1g，加入盛有99ml无菌水的锥形瓶中，振荡10min，使土壤中菌体、芽孢或孢子均匀分散，制成10－2稀释度的土壤稀释液。然后按10倍稀释法进行稀释分离，以制备10－7稀释度为例，具体操作过程如下：取4.5ml无菌水试管6支，按10－3 (10)

－7顺序编号，放置在试管架上。取移液管一支，准确吸取0.5ml10－2土壤稀释液，此为10－3稀释度的土壤稀释液，依次操作，制成10－4、10－5、10－6、10－7的土壤稀释液。

（2）．涂布分离

用无菌移液管分别吸取上述10－7、10－6、10－5、三个稀释度菌悬液0.1ml，依次加入对应编号已经准备好的平板上。右手持无菌玻璃涂棒，左手那培养皿，并用拇指将皿盖打开一缝，在火焰旁右手持玻璃涂棒将菌也自平板中央均匀向四周涂布扩散，切忌用力过猛将菌液直接推向平板边缘或将培养基划破。每个稀释度涂两个平板。

（3）．恒温培养

将平板置于30℃恒温培养箱中培养24h后观察结果。

2.2.2放线菌分离

（1）．制备土壤稀释液

称取土样1g，加入盛有99ml无菌水的锥形瓶中，振荡后静置5min，即成10－2稀释度的土壤稀释液。

（2）．涂布分离

用无菌移液管分别吸取上述10－5、10－4、10－3、三个稀释度菌悬液0.1ml，涂平板。每个稀释度涂两个平板。

（3）．培养

将涂好的平板放于28℃恒温培养箱中培养5～7d后观察结果。

2.2.3霉菌的分离

（1）．制备土壤稀释液

称取土样5g，加入盛有95ml无菌水的锥形瓶中，振荡后静置5min，即成10－2稀释度的土壤稀释液。

（2）．涂布分离

将已灭菌的培养基溶化，加入链霉素溶液，待培养基凝固后，用无菌移液管分别吸取10－4、10－3、10－2、三个稀释度菌悬液0.1mL，涂平板。每个稀释度涂两个平板。

（3）．培养

将涂好的平板放于28℃恒温培养箱中培养3～5d后观察结果。

2.2.4酵母菌的分离

（1）．制备菌悬液

称取面曲1g，加入加入盛有99ml无菌水的锥形瓶中，用玻璃帮将面曲捣碎，振荡20min，即成10－2稀释度的面曲稀释液。

（2）．涂布分离

用无菌移液管分别吸取10－6、10－5、10－4、三个稀释度菌悬液0.1ml，涂平板。每个稀释度涂两个平板。

（3）．培养

将涂好的平板放于30℃恒温培养箱中培养2～3d后观察结果。

2.3纯培养菌种的菌落、菌体形态观察

2.3.1菌落形态特征的观察

由于微生物个体表面结构、分裂方式、运动能力、生理特征及产生色素的能力等各不相同，因而个体及它们的群体在固体培养基上的生长状况也不一样。根据微生物的固体培养基上相成的菌落特证，可初步辨别它们的分类地位。观察时，应注意菌落的形状，大小、表面结构、边缘结构、颜色、透明度、气味、黏滞性、质地软硬情况、表面光滑与粗糙情况等。

通常，细菌菌落多为光滑型、湿润、质地软，表面结构及边缘结构特征很多，具有各种颜色。但也有干燥、粗糙的菌落，甚至呈霉状但不起绒毛。

酵母菌菌落呈圆形，比细菌菌落大，表面光滑，质地软，颜色多为白色或红色。

放线菌的菌落硬度较大，干燥致密，且与培养基结合紧密，不易被挑取。菌落表面呈粉状或皱褶呈龟裂状，具有各种颜色，正面和背面颜色不同。

霉菌菌落长成绒状或棉絮状，能扩散生长，疏松，很容易挑取。也具有各种颜色，如白色，绿色，灰色等，正面和背面不尽相同。

2.3.2细菌、放线菌、酵母菌及霉菌菌落特征的比较

对分离培养出来的细菌，酵母菌，放线菌及霉菌的菌落特征仔细观察，并将上述四种微生物进行比较，做仔细记录。

2.3.3细菌、放线菌、酵母菌及霉菌菌体形态的观察

对细菌和放线菌进行简单染色，对霉菌及酵母菌不做染色直接制片，观察这四种微生物的菌体形态。

3.实验结果

表3-1

形状颜色质地表面光泽与培养基结合程度菌体形态菌落特征

名称

细菌圆形白软光滑易挑起小杆状

放线菌粉状乳白硬粗糙难挑起丝状

霉菌絮状白软粗糙易挑起圆形有菌丝

酵母菌圆形乳白软光滑易挑起椭圆

4.结果与讨论

通过实验的结果，我门可以发现这四类微生物的菌落特征，对比他们的相同点和不同点。根据不同微生物对环境的适应能力不同，我们可以添加一些特定抗生素（如链霉素），抑

制其他细菌生长，从而筛选出我们所需的特定菌种。

参考文献

[1] 沈萍.微生物学.高等教育出版社，2006

微生物实验室现场检查

微生物实验室要求 微生物检验实验室操作技术要求 第一节实验室管理制度 一、实验室管理制度 1 ．实验室应制定仪器配备管理、使用制度，药品管理、使用制度，玻璃器皿管理，使用制度，并根据安全制度和环境条件的要求，本室工作人员应严格掌握，认真执行。 2 ．进入实验室必须穿工作服，进入无菌室换无菌衣、帽、鞋，戴好口罩，非实验 室人员不得进入实验室，严格执行安全操作规程。 3 ．实验室内物品摆放整齐，试剂定期检查并有明晰标签，仪器定期检查、保养、 检修 , 严禁在冰箱内存放和加工私人食品。 4 ．各种器材应建立请领消耗记录，贵重仪器有使用记录，破损遗失应填写报告； 药品、器材、菌种不经批准不得擅自外借和转让，更不得私自拿出，应严格执行《菌种保管制度》。 5 ．禁止在实验室内吸烟、进餐、会客、喧哗，实验室内不得带入私人物品，离开 实验室前认真检查水、电、暖气、门窗，对于有毒、有害、易燃、污染、腐蚀的物品和废弃物品应按有关要求执行。 6 ．科、室负责人督促本制度严格执行，根据情况给于奖惩，出现问题立即报告， 造成病原扩散等责任事故者，应视情节直至追究法律责任。 二、仪器配备、管理使用制度 1 ．食品微生物实验室应具备下列仪器：培养箱、高压锅、普通冰箱、低温冰箱、厌氧培养设备、显微镜、离心机、超净台、振荡器、普通天平、千分之一天平、烤箱、冷冻干燥设备、匀质器、恒温水浴箱、菌落计数器、生化培养箱，电位 pH 计、高速离心机。 2 ．实验室所使用的仪器、容器应符合标准要求，保证准确可靠，凡计量器具须经 计量部门检定合格方能使用。 3 ．实验室仪器安放合理，贵重仪器有专人保管，建立仪器档案，并备有操作方法，保养、维修、说明书及使用登记本，做到经常维护、保养和检查，精密仪器不得随意移动，若有损坏需要修理时，不得私自拆动、应写出报告、通知管理人员，经科室负责人同意填报修理申请、送仪器维修部门。

食品微生物检测实验室要求

自来水水池至少有两个，工作台，药品试剂柜，超净工作台（无菌室），灭菌锅，培养箱，冰箱，干燥箱，电子天平，显微镜，平皿，试管，三角瓶等玻璃器皿。这些都是必备基本设备，只要能摆放的下就可以。 一、微生物实验室设计 微生物实验室由准备室、洗涤室、灭菌室、无菌室、恒温培养室和普通实验室六部分组成。这些房间的共同特点是地板和墙壁的质地光滑坚硬，仪器和设备的陈设简洁，便于打扫卫生。 二、微生物实验室基本要求（一）准备室 准备室用于配制培养基和样品处理等。室内设有试剂柜、存放器具或材料的专柜、实验台、电炉、冰箱和上下水道、电源等。（二）洗涤室 洗涤室用于洗刷器皿等。由于使用过的器皿已被微生物污染，有时还会存在病原微生物。因此，在条件允许的情况下，最好设置洗涤室。室内应备有加热器、蒸锅，洗刷器皿用的盆、桶等，还应有各种瓶刷、去污粉、肥皂、洗衣粉等。 （三）灭菌室 灭菌室主要用于培养基的灭菌和各种器具的灭菌，室内应备有高压蒸汽灭菌器、烘箱等灭菌设备及设施。（四）无菌室 无菌室也称接种室，是系统接种、纯化菌种等无菌操作的专用实验室。在微生物工作中，菌种的接种移植是一项主要操作，这项操作的特点就是要保证菌种纯种，防止杂菌的污染。在一般环境的空气中，

由于存在许多尘埃和杂菌，很易造成污染，对接种工作干扰很大。1. 无菌室的设置 无菌室应根据既经济又科学的原则来设置。其基本要求有以下几点： （1）无菌室应有内、外两间，内间是无菌室，外间是缓冲室。房间容积不宜过大，以便于空气灭菌。最小内间面积2×2.5＝5m2，外间面积1×2＝2m2，高以2.5m以下为宜，都应有天花板。 （2）内间应当设拉门，以减少空气的波动，门应设在离工作台最远的位置上；外间的门最好也用拉门，要设在距内间最远的位置上。（3）在分隔内间与外间的墙壁或“隔扇”上，应开一个小窗，作接种过程中必要的内外传递物品的通道，以减少人员进出内间的次数，降低污染程度。小窗宽60cm、高40cm、厚30cm，内外都挂对拉的窗扇。（4）无菌室容积小而严密，使用一段时间后，室内温度很高，故应设置通气窗。通气窗应设在内室进门处的顶棚上（即离工作台最远的位置），最好为双层结构，外层为百叶窗，内层可用抽板式窗扇。通气窗可在内室使用后、灭菌前开启，以流通空气。有条件可安装恒温恒湿机。 2. 无菌室内设备和用具 （1）无菌室内的工作台，不论是什么材质、用途的，都要求表面光滑和台面水平。 （2）在内室和外室各安装一个紫外灯（多为30W）。内室的紫外线灯应安装在经常工作的座位正上方，离地面2m，外室的紫外线灯可

产酶海洋微生物的筛选

产酶海洋微生物的筛选 前言：浩瀚的海洋是地球生命的摇篮，它覆盖着地球表面积的71%，海水总体积占地球总水量的97%。全球80％以上的物种蕴藏于海洋中，由于独特的生存环境（如高压、高渗、高温、低温等复杂多变的生态环境）及海洋生物物种间的生态作用远比陆生物种复杂和广泛，因此赋予海洋生物均活性远比陆生生物要强，尤其重要的是有些海洋生物活性物质的结构与陆生生物化合物不同，表现出独特的活性，作为产酶资源就具有了突出的特点和优势。人们从海洋环境中已经分离的到各种极端酶，如嗜冷酶、嗜热酶、嗜压酶、嗜盐酶等，由于具有广泛的适应性，在生物技术和工业应用中已担任了重要的角色。 1 材料与方法 1.1样品采集 从连云港海域采集 1.2培养基 1.2.1细菌培养基 蛋白胨5g，酵母粉1g，琼脂20g 陈海水1000ml，pH 7.4-7.6 1.2.1.1细菌富集培养基 将1.2.1的细菌培养基去掉琼脂 1.2.1.2产淀粉酶细菌筛选培养基（初筛） 将1.2.1的细菌培养基加入2%的可溶性淀粉 1.2.1.3产右旋糖酐酶的细菌筛选培养基（初筛） 将1.2.1的细菌培养基加入1%的右旋糖酐 1.2.1.4产淀粉酶发酵培养基（复筛） 将1.2.1.2的培养基去掉琼脂 1.2.2放线菌培养基 可溶性淀粉20g，NaCl 0.5g，MgSO4?H2O 0.5 g, KNO3 1 g，K2HPO4 0.5g，FeSO4 0.01 g，琼脂20 g ，陈海水1000mL，pH7.4～7.6。 注：在制备平板时培养基融化后加入：重铬酸钾80mg?/L 1.2.3真菌培养基 马铃薯去皮，取200g切成小块，加50%陈海水煮沸30min，4-6层纱布过滤，加20g葡萄糖，琼脂20g，溶化后再用陈海水定容至1000mL ，pH7.2～7.4。注：在制备平板时培养基融化冷却至60℃后加入：青霉素50mg?/L，链霉素50mg?/L 1.3菌株筛选方法 将样品分别放入四类微生物富集培养基中，25℃，180rpm, 培养48h。然后将富集培养基10倍递增稀释，取适宜稀释倍数的培养液涂布于3种培养基琼脂平板中，25℃培养（培养时间由菌生长情况而定）。将培养出的菌落进行分离培养，将纯的单菌落进行斜面保藏。 1.4产酶菌株的筛选 将菌株分别点种到产酶筛选培养基中，25℃，培养72h。于淀粉酶筛选平板

食品微生物检测实验

实验一食品中细菌总数的检验 一、实验目的要求 1、了解细菌总数检验的意义。 2、掌握样品稀释处理的方法和菌落总数计数的方法 3、掌握国标法测定菌落总数的方法和技能 4、熟练无菌操作技术。 二、原理 菌落总数是指食品经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1ml检样中所含细菌菌落总数。菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。 菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。 三、试剂和仪器 （一）最先准备的器材（清洗、烘干、包扎、灭菌） 规格名称数量用途 1、500ml广口瓶1个稀释样品 2、500ml三角瓶1个配制生理盐水 3、250ml三角瓶2个配制营养琼脂 4、18×180mm试管3支稀释样品 5、1ml移液管 5 支 6、直径为90mm平皿10套倒营养平板 7、250ml量筒1支 8、玻璃珠：直径约5mm （二）应灭菌、消毒的器材 剪刀1把不锈钢药匙1把称量纸：适量 酒精消毒的器材：吸耳球1个，滴管胶头4只，开瓶器

（三）应制备的培养基 培养基总量所用容器 1、0.85%NaCl生理盐水1瓶300ml/瓶500ml三角瓶 2、平板计数琼脂（PCA）培养基：2瓶100ml/瓶250ml三角瓶 四、实验内容 （一）、基本操作过程： 样品称量→→样品稀释→→倾注平皿→→培养48小时→→计数报告。 （二）、样品的稀释（样品的处理） 样品：袋装乳粉 外包装消毒→→无菌称样品25g→→加无菌生理盐水→→加盖振荡摇均匀 1、用75%酒精棉球擦拭消毒袋口，用无菌剪刀开封取样。称取检样25g，放入装有适量玻璃珠的灭菌广口瓶子中，然后用225mL温热的灭菌生理盐水徐徐加入（先加入少量生理盐水将乳粉调成糊状，再全部加入，以免奶粉结团），采用振摇法（用力快速振摇50次,振幅不小于40cm）振摇均匀，即为1:10的稀释液。固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000~10000r/min的速度处理1min，制成1：10的均匀稀释液。 2、用1ml灭菌吸管，吸取1∶10稀释液1ml，注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内，振摇试管混合均匀，制成1∶100稀释液。 3、另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用另一支1ml灭菌吸管。 4、根据对检样污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的稀释液1ml于灭菌平皿内，每个稀释度做2个平皿。 5、用1ml生理盐水作空白对照试验，做2个平皿。 注意： ①吸管尖端不要触及瓶口或试管口外部，也不得触及管内稀释液。 ②吸管插入检样液内取样稀释时，插入深度要达2.5cm以上,调整时应使管尖与容器内壁紧贴。 ③进行稀释时，应使吸管内的液体沿管壁小心流加入，以免增加检液。 ④每递增稀释一次，即换用一支1ml灭菌吸管。

QPix400微生物筛选系统-MolecularDevices

特点 ?????QPix400 微生物筛选系统：更多功能，更多微生物 APPLICATION NOTE 快速-每天挑30,000个克隆高效-成功率>98%，琼脂糖厚度感应器，自动调整挑针高度 优化-不同微生物组织特异性挑针 靶向-荧光定量，用户自定义挑选参数 智能-智能的克隆挑选软件 无论你是从事发现新一代抗生素，或者挑选克隆测序，还是把微藻转化为生物燃料工厂的研究，为了发现最好的克隆，你可能需要反复地筛选成千甚至上百万个克隆。 而且除了筛选，还需要克隆涂布和克隆复制。自动化克隆筛选系统能够加速和简化这些费力的过程。你需要用基于荧光和形态学的筛选替代在限制性培养基中生长克隆的手动挑选吗？你需要研究其他微生物，而不仅仅是大肠杆菌吗？QPix400微生物克隆筛选系统能完成上述所有的工作，包括基于形态学和荧光强度的克隆筛选，克隆涂布和克隆板的复制，适用于细菌、真菌、藻类、噬菌斑和酵母。 QPix400微生物克隆筛选系统支持更多微生物筛选和多种功能模块，包括荧光强度，蓝/白挑选，克隆大小和邻近度，抑菌圈。你自定义挑选参数，仪器自动完成挑选。 克隆挑选流程 无论你选择哪个挑选模块，QPix400系统的任何型号都遵照相同的流程。1. 打开QPix的软件，2. 设定挑选的参数，比如：克隆大小，克隆形状和其他的形态学特征，对于抑菌圈的检测，在抑菌圈模块下设定参数。3. 克隆在白光成像模式下检测，如需要的话，可以进一步在荧光成像模式下检测。 白光成像克隆筛选 对大多数研究来说，用QPix400系统在白光成像下筛选克隆是最常用的方 法。举个例子，涂布委内瑞拉链霉 菌，37℃培养过夜，然后克隆在白光下挑选。智能化的软件分析图像，满足设定参数的克隆黄色显示并被自动挑取（图1）。不满足设定参数的克隆红色显示。 荧光成像克隆筛选 荧光挑选，可以大大地减少高价值克隆的早期筛选时间（图2）。使用合适的荧光标记，结合形态学参数和功能的自动筛选，快速获取满足要求的，数量更少的克隆，然后进行进一步的下游功能筛选和鉴定，从而节省时间和人力物力。 图1：涂布的委内瑞拉链霉菌(左侧)。智能软件模块基于用户设定参数检测到想要的克隆(中间和右侧，黄色显示克隆)，排除不满足的克隆(中间和右侧，红色显示克隆)。

【全国三卷地区适用】精品讲练含答案：选修一 微生物的筛选、鉴定、分离与计数

重点题型1 目标微生物的筛选与鉴定 1.分离微生物的原理与措施 (1)原理：自然环境中的微生物是混杂在一起的，因此分离获得纯培养物应首先采用的方法是将单个的细胞与其他细胞分离，再给细胞提供合适的营养和条件，使其生长成为可见的群体。 1

(2)常用措施 ①接种过程中尽量使细胞分散开来，如平板划线法、稀释涂布平板法。 ②运用选择培养基的作用特点，在培养基中添加某种特定的物质，抑制不需要的微生物的生长，促进所需微生物的生长。 2.选择培养基四种常见制备方法或实例 2

【例证1】(2017·全国卷Ⅰ，37)某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。回答下列问题： (1)有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是_______________ ___________________________________________________________________， 但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是_____________(答出两点即可)。 (2)为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素＋NH4NO3”)作为氮源，不选择其他两组的原因是_________________________________________________________________ ____________________________________________________________________。 3

【实验室管理】食品微生物检测实验室操作要求

食品微生物实验室工作人员，必须有严格的无菌观念，许多试验要求在无菌条件下进行，那么，对食品微生物检测实验室操作要求有哪些？ 无菌操作要求 1.接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。 2.进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。 3.接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。 4.进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。 5.从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。 6.接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。 7.接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。 8.吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。 无菌间使用要求 1.无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5～0.7m2的小窗，以备进入无菌间后传递物品。 2.无菌间内应保持清洁，工作后用2%～3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。 3.无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W 紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在

紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。 4.处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。 5.在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置。 消毒灭菌要求 微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。 干热和湿热高压蒸气锅灭菌方法 1.灭菌前准备（1）所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。 （2）装培养基的三角瓶塞，用纸包好，试管盖好盖，注射器须将管芯抽出，用纱布包好。 2.装放（1）干热灭菌器：装放物品不可过挤且不能接触箱的四壁。 （2）大型高压蒸气锅：放置灭菌物品分别包扎好，直接放入消毒筒内，物品之间不能过挤。 3.设备检查 （1）检查门的开关是否灵活，橡皮圈有无损坏，是否平整。 （2）检查压力表蒸气排尽时是否停留在零位，关好门和盖，通蒸气或加热后，观察是否漏气，压力表与温度计所标示的状况是否吻合，管道有无堵塞。 （3）对有自动电子程序控制装置的灭菌器，使用前应检查规定的程序，是否符合于进行灭菌处理的要求。 4.灭菌处理

四类微生物筛选试验

吉林化工学院 生物工程专业 四类微生物的分离、培养及鉴定 摘要：学习和掌握细菌、放线菌、霉菌、酵母菌常用培养基的配制方法，学习和掌握细菌、放线菌、霉菌、酵母菌常用培养基的配制方法。通过观察和比较分离出来的细菌以及放线菌、酵母菌及霉菌的菌落特征，掌握初步鉴别上述微生物的方法。本实验通过从土壤中分离细菌、放线菌、霉菌[1]以及在面曲中提取酵母菌四类微生物，在各自的培养基分别培养最后在显微镜下观察、鉴定。得出这四类微生物菌落特征不同。 关键字：微生物、分离、培养、鉴定 前言：微生物发酵工业中，要使微生物良好地生长或累积代谢产物，就需要应用微生物纯种培养技术。微生物纯种培养技术的发展表现为：从固体培养法为主发展到液体培养法为主；从浅层培养法为主发展到深层发酵法；从静止培养法发展到通气搅拌培养法；从单罐培养发展到连续培养以及多级连续培养；从利用分散的微生物细胞发展到固定化细胞；从利用自然菌种到利用变异菌株以至“工程菌”等等。分离技术是人类揭开微生物世界奥秘的重要手段，要知晓在自然条件下处于混生状态的某一种微生物的特点以及它对人类是有益或是有害之谜，就必须采用在无菌技术基础上的纯种分离方法。利用固体培养基来分离和纯化微生物。显微镜来鉴别微生物。 1.实验仪器与试剂

1.1主要仪器 显微镜、天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、pH 试纸、棉花、纱布、牛皮纸、线绳、报纸等 1.2主要试剂 牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、可溶性淀粉、琼脂、黄豆芽、NaCl、KNO3、K2HPO4、MgSO4、FeSO4、KH2PO4、MgSO4?7H2O、NaOH溶液（1mol/L）。 2.实验步骤 2.1培养基的配制 2.1.1肉膏蛋白胨培养基的配制

食品卫生微生物检验实验室操作要求

食品卫生微生物检验实验室操作要求 食品微生物实验室工作人员，必须有严格的无菌观念，许多试验要求在无菌条 件下进行，主要原因：一是防止试验操作中人为污染样品，二是保证工作人员 安全，防止检出的致病菌由于操作不当造成个人污染。 一、无菌操作要求 1.接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。 2.进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。 3.接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精 棉球将手擦干净。 4.进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃 烧灼三次后使用。 5.从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。 6.接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。 7.接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min， 再经火焰烧灼。 8.吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。 二、无菌间使用要求

1.无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5-0.7m2的小窗，以备 进入无菌间后传递物品。 2.无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。 3.无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球 轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。 4.处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。 5.在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置 三、消毒灭菌要求 微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养 物等，必须经灭菌后方能使用。 (一)干热和湿热高压蒸气锅灭菌方法 1．灭菌前准备 (1)所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包 装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。 (2)装培养基的三角瓶塞，用纸包好，试管盖好盖，注射器须将管芯抽出，用纱布包好。 2．装放 (1)干热灭菌器：装放物品不可过挤，且不能接触箱的四壁。

食品卫生微生物检验实验室操作技术

食品卫生微生物检验实验室操作技术要求??第一节实验室管理制度??一、实验室管理制度? 1．实验室应制定仪器配备管理、使用制度,药品管理、使用制度,玻璃器皿管理,使用制度,并根据安全制度和环境条件的要求,本室工作人员应严格掌握,认真执行。??２．进入实验室必须穿工作服,进入无菌室换无菌衣、帽、鞋，戴好口罩，非实验室人员不得进入实验室，严格执行安全操作规程。 ?3．实验室内物品摆放整齐，试剂定期检查并有明晰标签,仪器定期检查、保养、检修, 严禁在冰箱内存放和加工私人食品。? 4．各种器材应建立请领消耗记录,贵重仪器有使用记录，破损遗失应填写报告；药品、器材、菌种不经批准不得擅自外借和转让，更不得私自拿出，应严格执行《菌种保管制度》。??５．禁止在实验室内吸烟、进餐、会客、喧哗,实验室内不得带入私人物品，离开实验室前认真检查水、电、暖气、门窗，对于有毒、有害、易燃、污染、腐蚀的物品和废弃物品应按有关要求执行。? 6.科、室负责人督促本制度严格执行,根据情况给于奖惩,出现问题立即报告，造成病原扩散等责任事故者，应视情节直至追究法律责任。??二、仪器配备、管理使用制度? １．食品微生物实验室应具备下列仪器:培养箱、高压锅、普通冰箱、低温冰箱、厌氧培养设备、显微镜、离心机、超净台、振荡器、普通天平、千分之一天平、烤箱、冷冻干燥设备、匀质器、恒温水浴箱、菌落计数器、生化培养箱,电 2.实验室所使用的仪器、容器应符合标准要求,保位pＨ计、高速离心机。?? 3.实验室仪器安证准确可靠,凡计量器具须经计量部门检定合格方能使用。?? 放合理，贵重仪器有专人保管，建立仪器档案，并备有操作方法，保养、维修、说明书及使用登记本，做到经常维护、保养和检查,精密仪器不得随意移动，若有损坏需要修理时，不得私自拆动、应写出报告、通知管理人员,经科室负责人同意填报修理申请、送仪器维修部门。 ?4．各种仪器（冰箱、温箱除外)，使用完毕后要立即切断电源，旋钮复原归位，待仔细检查后,方可离去。 ?5．一切仪器设备未经设备管理人员同意，不得外借,使用后按登记本的内容进行登记。 7．使用仪器时，应严格按?6．仪器设备应保持清洁,一般应有仪器套罩。?? 操作规程进行，对违反操作规程的因管理不善致使仪器械损坏，要追究当事者责任。 1.依据本室检测任务，制定各种药品试剂采购?三、药品管理、使用制度?? 计划，写清品名、单位、数量、纯度、包装规格,出厂日期等，领回后建立帐目,专人管理，每半年做出消耗表，并清点剩余药品。 2.药品试剂陈列整齐,放置有序、避光、防潮、通风干燥，瓶签完整，剧毒药品 3．领用药品试剂，需填写请加锁存放、易燃、挥发、腐蚀品种单独贮存。?? 领单、由使用人和室负责人签字,任何人无权私自出借或馈送药品试剂，本单位科、室间或外单位互借时需经科室负责人签字。 ? 4.称取药品试剂应按操作规范进行，用后盖好,必要时可封口或黑纸包裹，不使用过期或变质药品。??四、玻璃器皿管理、使用制度 1.根据测试项目的要求，申报玻璃仪器的采购计划、详细注明规格、产地、数量、

检验科微生物室sop文件检验科微生物实验室

检验科微生物室sop文件检验科微生物实验室检验科微生物室SOP文件检验科微生物实验室 作业指导书细菌室工作守则文件编号:LAB,SOP,JX001 细菌室工作守则 1.每日工作前用紫外线照射实验室半小时以上。 2.入室前应穿工作服，并做好实验前的各项准备工作。 3.实验室内应保持肃静，不准吸烟、吃东西及用手触摸面部。尽量减少室内活动，以免引起风动，无关人员禁入。 4.非必要物品禁止带入实验室，必要资料和书籍带入后，应远离操作台。 5.做好标本的登记、编号及试验记录。未发出报告前，请勿丢弃标本。 6.标本处理及各项试验应在操作间进行，接种环用完后应立即火焰灭菌，沾菌吸管、玻片等用后应浸泡在消毒液内。 7.实验时手部污染，应立即用过氧乙酸消毒或浸于3%来苏儿溶液中5-10分，再用肥皂洗手并冲洗干净;如误入口内，应立即吐出，并用1:1000高锰酸钾溶液或3%双氧水漱口，根据实际情况服用有关药物。 8.实验过程中，如污染了实验台或地面，应用3%来苏儿覆盖其上半小时，然后清洗;如污染工作服，应立即脱下，高压灭菌。 9.若出现着火情况，应沉着处理，切勿慌张，立即关闭电闸，积极灭火。易燃物品(如酒精、二甲苯、乙醚和丙酮等)必须远离火源，妥善保存。 10.工作结束时检查电器、酒精灯等是否关闭，观察记录培养箱、冰箱温度及工作情况，用浸有消毒液的抹布将操作台擦拭干净，并将试剂、用具等放回原处，清理台面，未污染的废弃物扔进污物桶，有菌废弃物应送高压灭菌后处理。 11.离室前工作人员应将双手用消毒液消毒，并用肥皂和清水洗净。

12.爱护仪器设备，经常清洁，注意防尘和防潮。 作业指导书细菌室消毒隔离措施文件编号:LAB,SOP,JX002 细菌室消毒隔离措施 1.每天工作前用消毒液消毒工作台，上班前、下班后开紫外灯(最少半小时)进行空气消毒。 2.非必要品禁止带入实验室，必要资料和书籍带入后，应远离操作台。 3.使用后的载玻片、盖片、平皿、试管等用消毒液浸泡，经煮沸后清洗或丢弃。 4.试验后的血液标本用消毒液浸泡后煮沸消毒，所有用于试验的反应板、吸头等用消毒液浸泡(至少24小时以上)后清洗或丢弃。 5.所有微生物培养物(细菌、支原体、真菌等培养物)，不管标本阳性或阴性均用消毒液浸泡后，经煮沸消毒，才能清洗或丢弃。 6.取材、最好采用一次性工具，不能采用一次性工具者，每次取材前均应彻底消毒。 7.用于浸泡各种器械如刮菌刀、持物钳、镊子等的消毒液要定期更换。 8.不慎发生临床标本或培养物污染工作台，不要立即用水冲洗，应先用纸巾、布等敷料加上消毒液(如5%石炭酸、3%来苏儿等)消毒30分钟以上，然后再清洗。如污染工作服，应立即脱下，高压灭菌。 9.实验时手部污染，应立即用肥皂洗手并冲洗干净，再外用消毒药水，如误入口内，应立即吐出，并用1:1000高锰酸钾溶液或3%双氧水漱口，必要时根据实际情况服用有关药物。作业指导书微生物实验室安全与防护文件编 号:LAB,SOP,JX003 在工作区内禁止饮食，吸烟和存放食物及使用化妆品。 实验室里应保持整洁，不存放与工作无关的杂物。 工作台每天至少用消毒剂清洁一次，在溢渗传染物后要立即消毒、清洗; 进入无菌室必须穿工作服，戴口罩、帽子。 在各种操作进程中均应尽量避免或减少气溶胶产生。

食品微生物检验技术

一、定义 通过一定的实验方法测定食品中的微生物，特别是致病微生物的数量、种类、性质，从而判断食品的卫生质量，保证消费者的身体健康。 二、食品微生物检验的内容 卫生指标菌检验 菌落总数测定 细菌检验 大肠菌群数测定 致病菌检验 霉菌、酵母菌数测定 真菌检验 产毒霉菌检验 霉菌毒素测定 三、食品微生物检验的特点 1、具有法规性 2、检验的范围广 3、杂菌含量多，要检验的菌少。 （1）需要增菌（2）抑制杂菌 4、检验结果具有数量界限 5、需要采样后尽快检验，快出结果 四、意义： 检出有害微生物，避免食物中毒，避免造成经济损失。 五、食品卫生细菌常规检验项目 卫生指标菌 菌落总数测定 大肠菌群测定 沙门氏菌检验 u 致病菌 志贺氏菌检验 金黄色葡萄球菌检验 溶血性链球菌检验 六、细菌污染食品的途径 1、食品加工原料的污染 2、产、储、运、销过程中的细菌污染 3、从业人员的污染 4、食品加工过程中的污染 第一章 食品微生物检验中的生理生化实验 设计生化实验的原则：在实验中加入某些化学物质，使细菌代谢途径中分解代谢产物与加入<的化学物质发生反应，产生某些变化或出现某种特征。 一、过氧化氢酶及过氧化物酶实验原理 1、2H 2O 2 过氧化氢酶 2H 2O+O 2 阳性 2、过氧化物酶： RH 2+H 2O 2 过氧化物酶 R+2H 2O 阳性：细菌变为黑褐色； 阴性： 不变色。 阳性 阴性 二、细胞色素氧化酶实验原理 细胞色素C 细胞色素氧化酶 氧化型细胞色素C +对苯二胺 + --奈酚 靛酚兰（蓝色） 阳性： 2分钟内生成蓝色为阳性； 阴性：无变化。 三、氰化钾实验 阳性： 不抑菌，变混浊 阴性：抑菌 无 蓝 四、硝酸盐还原实验原理 KNO 3 还原酶 KNO 2KNO 2 +对氨基苯磺酸+ a -萘胺 红色化合物（立刻或数分钟内）红色 无色 五、糖发酵实验 分解糖产酸，PH 值下降，使 培养基的 酸碱指示剂发生变化。 阳性：产酸产气 六、氧化发酵实验（O/F 实验 有些微生物分解葡萄糖 必须有氧参加，此种细菌菌称为氧化型； 阳 阴 有些细菌有氧无氧均可分解葡萄糖，称发酵型； 有些细菌任何条件都不能分解葡萄糖，称产碱型。 灭菌琼脂（厌氧） 七、甲基红实验（MR 实验）和V-P 实验 1、MR 实验原理：一些细菌分解葡萄糖产 生丙酮酸，丙酮酸可被进一步分解为甲酸、乙酸、乳酸和琥珀酸而使培养基的PH 值下降到4.5以下，加入甲基红指示剂出现红色反应 2、V-P 实验原理 一些细菌分解葡萄糖为丙酮酸，进一步脱羧产生乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中的氧氧化成二乙酰丁二酮，进而与培养基内蛋白胨中所含的精氨酸的胍基发生反应生成红色化合物。（实验结果同MR 实验） 阴 八 、柠檬酸盐实验（枸橼酸盐实验） 一些微生物可以以铵盐作为唯一 的氮源，以柠檬酸盐作为唯一的碳 源，在柠檬酸盐培养基上生长，分 解柠檬酸盐生成碳酸盐，使培养基 变成碱性，酸碱指示剂变色 九、丙二酸钠实验 一些微生物可以以丙二酸钠 作为唯一碳源，分解丙二酸钠生成碳酸钠，使培养基变成碱性，酸碱指示剂变色。 十、马尿酸盐实验 一些细菌可以水解马尿酸生成苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸和Fe3+反应生成有色的苯甲酸盐沉淀。 十一、明胶液化实验 一些细菌可产生胞外酶，使明胶蛋白分解为氨基酸,而失去明胶的凝固能力。 十二、苯丙氨酸脱氨酶实验 一些细菌有苯丙氨酸脱氨酶， 可以脱氨 生成苯丙酮酸， 其与FeCl 3反应产生绿色 。 十三、氨基酸脱羧酶实验 一些细菌可以产生氨基酸 脱羧酶使氨基酸脱酸，产生胺类物质，使培养基

微生物检验实验室质量控制

微生物检验实验室质量控制 发表时间：2015-09-16T14:26:19.763Z 来源：《医药前沿》2015年第18期供稿作者：杨再东 [导读] 贵州省黎平县疾病预防控制中心微生物实验室检验是防御疾病、诊断治疗疾病、控制疾病以及卫生监督的主要技术支撑，是疾病防治和卫生执法的主要手段。 杨再东 （贵州省黎平县疾病预防控制中心贵州黎平 557300） 【摘要】随着我国生物医学的不断发展，研究方法和研究技术的不断提高，逐渐加深了对微生物的研究。微生物种类繁多，由微生物感染而引起的疾病不胜枚举。科学家在实验室中对微生物进行研究和探索，而微生物检验的实验结果则是防御疾病、诊断治疗疾病、控制疾病以及卫生监督的主要依据。本文主要阐述了微生物实验室质量检测的措施和微生物检验实验室质量控制的影响因素和对策。 【关键词】微生物检验；实验室；质量控制 【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）18-0322-02 引言 微生物实验室检验是防御疾病、诊断治疗疾病、控制疾病以及卫生监督的主要技术支撑，是疾病防治和卫生执法的主要手段。微生物检验实验室质量控制直接能够影响正常的实验工作的进度，因此要加强对微生物检验实验室的质量控制，避免检验结果出现偏差，确保检验结果的正确性。对检验实验室的质量控制检验包括多方面检验：全面的质量管理、室间质量控制和室内质量控制。全面质量管理是相关部门通过建立质量管理体系对实验室进行全方位的检验；室间质量控制是指实验室与实验室之间通过相互校准检验、实验室的操作和结果来进行对实验室检验微生物能力的验证；室内质量控制是指实验室内部采取对比分析、跟踪以及相关方法，对检验质量进行自我控制的过程。 1.微生物检验实验室质量控制的重要性 1.1 微生物的概念 微生物包括：细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生生物、显微藻类等在内的一大类生物群体，它个体微小，与人类关系密切。涵盖了有益跟有害的众多种类，广泛涉及食品、医药、工农业、环保等诸多领域[1]。 1.2 实验室的质量控制 实验室质量控制的目的是为了提高微生物的检验质量，通常是彻底消除影响检验质量的因素。所谓实验室质量控制管理就是对检验人员、检验方法、所用的仪器设备、用到的相关检验试剂等进行有效的控制，以保证质量控制工作能够正常的进行。通过建立完善的质量管理系统，可以检测整个检验过程的质量并且随时发现问题，及时对检测工作中出现的问题进行处理，确保检测实验质量控制工作能够顺利的进行，因此对实验室质量进行控制管理很重要。 2.微生物检验实验室的质量控制 2.1微生物检验实验室的室内质量控制 （1）技术人员素质要求。 微生物实验室技术人员的能力和素质是保障微生物检验实验室质量控制的关键因素之一。从事微生物检验的技术人员应该有扎实的专业基础，对微生物学、医学以及生物学要有专业理论基础。当技术人员掌握了基础理论知识以后，把相关的理论知识合理的运用到微生物检验中。要严格训练技术人员的检验技术，以便于技术人员能够熟练掌握实验方法并且能够应对实验中的突发事件。技术人员应该具有高度的责任心和严格的无菌观念，对检验对象进行认真检测，降低检测实验中的人为误差。技术人员要经过严格的考核获取岗位资格证以后才能正式上岗。实验室要对技术人员定期培训，不断提高技术人员的实验能力，让技术人员掌握先进的微生物检验技术。此外由于该工作是精密工作，所以对于长期从事微生物实验的技术人员都要对其定期进行健康体检[2]。 （2）微生物实验室检测仪器设备及设施 对微生物进行实验时要保证实验所用的各个仪器设备和设施都处于性能良好并和洁净程度达标的状态。实验室要对仪器设备以及设施定期进行定期检查校正，确保所使用的仪器性能都能达到检测标准。对不同的仪器设备和设施采用不同的检测方法，比如灭菌器，可以使用嗜热芽胞杆菌或者化学方法来测试灭菌效果，洁净室用平皿计数法等等[3]。 （3）检验方法的要求。 微生物检验实验室的方法必须经过相关行业鉴定之后才能使用。在没有可行性检测方法的情况下，应该尽量选择具有权威性技术组织公布的文献或者与国家标准的科技文献中选取一个合理的检测方法，以确保实验结果的准确性和可靠性。 （4）培养基的质量控制 要选择背景雄厚的厂家进行微生物实验室培养基的选择，并且要对培养基进行感官、PH以及生物学指标检定，将被检培养基与相应细菌进行细菌生长率、菌落大小以及生长特征的检测，实验验证合格以后这个培养基才能使用。在配制培养基时要做好培养基的配制的数量、分装情况、灭菌方法、无菌试验检查、配制时间、有效时间等的实验记录，在使用培养基的时候一定要在确认记录完全合格的情况下才可使用[4]。 2.2 微生物检验实验室的室间质量控制 对微生物实验室进行室间的质量控制是指在每一个实验室都能做好室内质量控制的基础上进行的。通过选取两个或者更多的条件相同的实验室相互比较，比较每个实验室的管理能力和技术水平，采用这样的方法对实验室的室间质量控制进行评价。最后由上级质量控制中心的检验机构对实验室进行考核。对各个实验室进行对比考核，是为了了解各个实验室的检验管理能力和技术水平，有助于随时发现问题，及时制定解决方案，不断提高实验室的检验技术水平。 3.总结 现阶段，我国不断的加强教育事业的建设，不断的学习研究新技术，逐渐将探索的对象由宏观物体拓展到了微观世界。而生物医学是一项重要的研究领域，微生物是生物医学中最常见的生命体，也是疾病感染的根源。为此相关人员不断的对微生物进行研究。其中用于微

微生物实验室检测员岗位职责说明书

微生物实验室 职员岗位说明书 6.4 对检测结果的整理、分析、归档； 6.5 完成领导交办的临时性工作； 7.1 对加工厂环境、水质、肉品、饲料辅料进行微 生物检测 7.1.1 样品接收 7.1.2 按照标准《肉品微生物生物检测规程》、《棉拭子检测规程》及行标对送检样品进行检测； 7.1.3 结果报告未能正式出来时,对超标样品进行口头通知； 7.1.4 根据检测结果填写原始记录； 7.1.5 对检测结果进行分析，凡不合格项及时填写纠正措施处理单，同检测结果并传递与加工厂； 7.1.6对纠正措施进行验证； 7.1.7 确保检测数据准确； 1 岗位名称：微生物实验室职员 2 岗位编号：016 3 工资级别：—— 4 直接上级：微生物实验室主任 5 直接下级：—— 6 工作职责 6.1 对加工厂环境、水质、肉品进行微生物检测； 6.3 检验设备的维护和保养； 7． 工作标准

7.3 检验设备的维护和保养 7.3.1 每天班前对检测设备进行检查,对发现有异常的及时通知维修工或向上级领导汇报，并认真填写仪器使用，维修记录； 7.3.2 每周对设备进行一次保养； 7.3.3 妥善保存检测试剂,并做试剂使用记录； 7.3.4 对无菌室的环境检测并记录检测结果； 7．4 对检测结果的整理、分析、归档 7.4.1每月做一次小结，半年进行一次总结； 7.4.2对检测结果进行分析、对比、评价； 7.4.3对检测报表进行归档； 7.5 完成领导交办的临时性工作 8. 任职要求 8.1 生理要求 8.1.1 年龄:20-50岁； 8.1.2 性别:男女不限； 8.1.3 视力: 正常； 8.1.4 听力: 正常； 8.1.5 身体健康； 8.2 职业道德要求 8.2.1 品行端正、心胸开阔； 8.2.2 诚信敬业,求真务实； 8.3 学历知识技能要求 食品检验等相关专业,中专(含)以上学历从事相关工作1年以上,具

空气食品接触面微生物检验方法检验标准

空气、食品接触面微生物检验方法、检验标准 1、目的： 检测生产车间空气、操作人员手部、与食品有直接接触面的机械设备的微生物指标，生产区域环境当中病原微生物的监控，达到规定标准，以控制食品成品的质量。 2、参照标准： 中华人民共和国国家标准《一次性使用卫生用品卫生标准》GB15979－1995、《HACCP原理与实施》、中华人民共和国国家标准《公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定》GB/T 18204.1－2000、中华人民共和国进出口商品检验行业标准SN 0169-92/SN 0172-92/ SN 0170-92、出入境检验检疫局二000四年《出入食品微生物检验培训教材》中《出入食品生产厂卫生细菌检验方法》、日本东京冷冻食品检验方法。 3、采样与检测方法： 3.1空气的采样与测试方法 3.1.1样品采集： (1)取样频率： a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行采样，以便了解车间卫生清扫消毒情况。 b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行采样。 c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间进行采样，如有检验不合格点，整改后再进行采样检验。 d)实验性新产品，按客户规定频率采样检验。 e)正常生产状态的采样，每周一次。 （2）采样方法 在动态下进行，室内面积不超过30 m2，在对角线上设里、中、外三点，里、外点位置距墙1 m；室内面积超过30 m2，设东、西、南、北、中五点，周围4点距墙1 m。采样时，将含平板计数琼脂培养基的平板(直

径9 cm)置采样点(约桌面高度)，并避开空调、门窗等空气流通处，打开平皿盖，使平板在空气中暴露5 min。采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过6h，若样品保存于0～4℃条件时，送检时间不得超过24h。 3.1.2菌落培养： （1）在采样前将准备好的平板计数琼脂培养基平板置37℃±1℃培养24 h，取出检查有无污染，将污染培养基剔除。 （2）将已采集样品的培养基在6 h内送实验室，细菌总数于37℃±1℃培养48h观察结果，计数平板上细菌菌落数。 （3）菌落计算： a) 记录平均菌落数，用“个/皿”来报告结果。用肉眼直接计数，标记或 在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，不可遗漏。 b) 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2 个或2个 以上菌落计数。 3.2工作台（机械器具）表面与工人手表面采样与测试方法： 3.2.1样品采集： (1)取样频率： a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行擦拭检验，以便了解车 间卫生清扫消毒情况。 b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行全面擦拭检验。 c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间可疑处进行擦拭，如有检验 不合格点，整改后再进行擦拭检验。 d)实验新产品，按客户规定擦拭频率擦拭检验。 e)对工作表面消毒产生怀疑时，进行擦拭检验。 f)正常生产状态的擦拭，每周一次。 （2）采样方法： a) 工作台（机械器具）：用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面（取 与食品直接接触或有一定影响的表面）取25cm2的面积，在其内涂抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的

微生物筛选培养基

用途:用于食品中霉菌和酵母菌总数的测定。 成分(g/L) 蛋白胨 5.0 葡萄糖 10.0 磷酸二氢钾 1.0 硫酸镁 0.5 琼脂 20.0 孟加拉红 0.033 氯霉素 0.1 用法 称取本品 36.6g,加热溶解于 1000ml 纯化水中,分装三角瓶,121℃高压灭菌 15 分钟备用。 蒙金娜基础培养基：葡萄糖10g，(NH4)2SO4 0.5g，NaCl 3g, KCl 0.3g，FeSO4 7H2O 0.03g，MnSO4 H2O 0.03g，MgSO4 7H2O 0.3g，CaCO3 5g，酵母膏0.4g，蒸馏水1000ml，pH7.0~7.5。灭菌前分装为10×100ml小瓶，每组1瓶。 1. 无机磷培养基 100ml的蒙金娜基础培养基加入1g磷矿粉（或磷酸钙2g作为无机磷源）和2g琼脂粉，包装，灭菌。 2. 有机磷培养基 100ml的蒙金娜基础培养基加入2g琼脂粉，包装，灭菌。 用酒精擦净新鲜鸡蛋外壳，用解剖刀切破鸡蛋两端，流去蛋清后将蛋黄流入已灭菌的锥形瓶中，约加入等量的无菌水，摇匀。 待灭菌后的蒙金娜基础培养基冷却至50℃后，立即加入卵黄液，每100ml 的蒙金娜基础培养基加卵黄稀释液1ml作为有机磷源，混匀后分装于培养皿内凝成平板。 溶磷圈直径（D）和菌落生长直径(d)的比值(D/d)是表征解磷菌相对解磷能力的一个指标。

用途 用于利用硅酸盐的微生物的分离培养。 成分（g/L） 蛋白胨10.0g 酵母浸粉 2.0g 胰酪蛋白胨10.0g 氯化钠 5.0g 葡萄糖 1.0g 亚硫酸氢钠 0.1g 琼脂15.0g PH值7.0±0.2 蔗糖5g，Na2HPO4 2g，MgSO4 ·7H2O 0.5g，FeCl3 0.005g，CaCO3 0.1g，铝土矿0.5g，琼脂l0～20g，水1000ml，pH 70～7.5 查了几篇国内的文章基本都是这样，只是铝土矿这里有点变化，有用高岭土的，也有用石骨子粉的，看你自己的需要和条件了。 解磷细菌培养基 用途:用于利用无机磷细菌的分离培养。 成分(g/L) 葡萄糖 10.0 硫酸铵0.5 氯化钠0.3 硫酸镁0.3 硫酸锰 0.03 硫酸钾0.3 硫酸亚铁 0.03 磷酸钙 5.0 琼脂 15.0 pH值7.0-7.5 用法 称取本品 31.4g ,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,分装,116℃高压灭菌30 分钟,备用。 有机磷细菌培养基 用途:用于测定磷细菌肥料中磷细菌解有机磷效能。 成分(g/L)