细胞培养常见问题的原因及对策

细胞培养常见问题的原因及对策细胞培养中的注意事项

1 冷冻管应如何解冻？

取出冷冻管后，须立即放入37 C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。

2 细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？

除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。

3 可否使用与原先培养条件不同之培养基？

不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。

4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？

不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。

5 何谓FBS, FCS, CS, HS ?

FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思，两者都是指胎牛血清，FCS乃错误的使用字眼，请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS (horseserum) 则是指马血清。

6 培养细胞时应使用5 %或10% CO2？或根本没有影响？

一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g时，细胞培养时应使用10% CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5 g时，则应使用5% CO2培养细胞。

7 何时须更换培养基？

视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。

8 培养基中是否须添加抗生素？

除于特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。

9 附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA浓度？应如何处理？

一般使用之trypsin-EDTA 浓度为0.05% trypsin-0.53m MEDTA.4 Na。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于–20 C，避免反复冷冻解冻造成trypsin之活性降低，并可减少污染之机会。

10 悬浮性细胞应如何继代处理？

一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。

11 欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？

欲回收动物细胞，其离心速率一般为300xg (约1,000rpm)，5 - 10分钟，过高之转速，将造成细胞死亡。

12 细胞之接种密度为何？

依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因。

13 细胞冷冻培养基之成份为何？

动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5 - 10% DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 %原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO 稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成。

14 DMSO之等级和无菌过滤之方式为何？

冷冻保存使用之DMSO等级，必须为Tissue culture grade之DMSO (如Sigma D2650)，其本身即为无菌状况，第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于4 C，避免反复冷冻解冻造成DMSO之裂解而释出有害物质，并可减少污染之机会。若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO之Nylon材质滤膜。

15 冷冻保存细胞之方法？

冷冻保存方法一：冷冻管置于4 C 30~60分钟→(-20 C 30分钟) →-80 C 16~18小时(或隔夜) →液氮槽vapor phase长期储存。

冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 C 至–80 C 以下，再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 C 不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80 C 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

16 细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？

冷冻管内细胞数目一般为1x106 cells/ml vial，融合瘤细胞则以5x106 cells/ml vial 为宜。

17 应如何避免细胞污染？

细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法。

19 支原体(mycoplasma) 污染的细胞，是否能以肉眼观察出异状？

不能。除极有经验之专家外，大多数遭受支原体污染的细胞株，无法以其外观分辨之。

20 支原体污染会对细胞培养有何影响？

支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数，代谢及研究任一数据。故进行实验前，必须确认细胞为mycoplasma-free，实验结果之数据方有意义。

22 CO2培养箱之水盘如何保持清洁？

定期(至少每两周一次) 以无菌蒸馏水或无菌去离子水更换之。

23 为何培养基保存于4 C 冰箱中，颜色会偏暗红色，且pH值会越来越偏碱性？

培养基保存于4 C 冰箱中，培养基内之CO2会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性，而培养基中之酸碱指示剂(通常为phenol red) 的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱之结果，将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时，可以通入无菌过滤之CO2，以调整pH 值。

24 各种细胞培养用的dish，flask是否均相同？

不同厂牌的dish或flask，其所coating的polymer不同，制造程序亦不同，虽对大部分细胞没有太大之影响，惟少数细胞则可能因使用厂牌不同之dish或flask而有显著之生长差异。

25 购买之细胞冷冻管经解冻后，为何会发生细胞数目太少之情形？

研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少，大都是因为离心过程操作上的失误，造成细胞的物理性损伤，以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心，应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可。

26 购买之细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？

研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–80 C太久。

27 收到之冷冻管瓶身破裂，瓶盖有裂纹，或瓶盖脱落之原因？

冷冻管瓶盖裂纹，或瓶身破裂，可能是因为操作者夹取冷冻管时用力不当，造成冷冻管裂损，建议使用止血钳小心夹取。另冷冻管瓶盖松动或松脱，乃因热胀冷缩之物理现象，冷冻管有可能因此而造成细胞污染，故冷冻管于放入和取出液氮桶时，均应立刻将冷冻管再一次扭紧。

28 如何选用特殊细胞系培养基？

培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始，各种目的无血清培养最好首选AIM V（12005）培养基（SFM）。

29 L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？

L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终定论。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。

30 GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？

GlutaMAX-I 二肽是一个L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟，GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解，如果在相同条件下，L-谷氨酰胺几乎完全降解。

32 培养基中丙酮酸钠的作用是什么？

丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。

33 目录上说，Hank’s 平衡盐溶液(HBS)要在空气中使用，不需要CO2培养箱。原因是什么？Hank’s 平衡盐溶液(HBS)和Earle’s平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差别？

HBS和EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平，在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的PH值。Eagles液在空气水平的CO2 中，溶液会变碱，Hanks 液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagles液，。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks液就可以了。

35 当在无血清培养基中添加抗生素时，降低至少在有血清培养基中所使用浓度的50%。血清蛋白会结合和灭活一些抗生素。在无血清培养条件下，抗生素不被灭活，可能对于细胞达到毒性水平。

36 一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

37 大部分添加物和试剂最多可以冻融3次，如果次数更多都会在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，将会影响它的性能。

38 在溶解的一周内使用贮存在4℃冰箱中的液体胰蛋白酶溶液。胰蛋白酶在4℃就可能开始降解，如果在室温下放置超过30分钟，就会变得不稳定。

细胞培养常见问题的原因及对策：

1. 培养液pH值变化太快：

CO2张力不对。培养瓶盖拧得太紧。NaHCO3缓冲系统缓冲力不足。培养液中盐浓度不正确。细菌、酵母或真菌污染。

按培养液中NaHCO3浓度增加或减少培养箱内CO2浓度，2.0g/L到3.7g/L浓度NaHCO3对应CO2浓度为5％到10％。（2）改用不依赖CO2培养液。

松开瓶盖1/4圈。

加HEPES缓冲液至10到25mM终浓度。

在CO2培养环境中改用基于Earle’s盐配制的培养液，在大气培养环境中培养改用Hank’s盐配制的培养液。

丢弃培养物或用抗生素除菌。

2. 培养液出现沉淀，但pH值不变：

用洗涤剂清洗后残留磷酸盐将培养基成分沉淀下来。冰冻保存培养液。

用去离子水反复冲洗玻璃器皿，然后除菌。

将培养液加热到37℃，摇动使其溶解如沉淀仍然存在，丢弃培养液。

3. 培养液出现沉淀，同时pH 发生变化：

细菌或真菌污染。

丢弃培养物或用抗生素除菌。

4. 培养细胞不贴壁：

胰蛋白酶消化过度；支原体污染；培养液中无贴壁因子。

缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度。

分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。

DNA。

分离培养物，检测支原体。如发现支原体污染，丢弃培养物。

用DNase I处理细胞。

7. 培养细胞死亡：

培养箱内无CO2。培养箱内温度波动太大。细胞冻存或复苏过程中损伤。培养液渗透压不正确。培养液种有毒代谢产物堆积。

检测培养箱内CO2

检查培养箱内温度

取新的保存细胞种

检测培养液渗透压。注意：大多数哺乳动物细胞能耐受渗透压为260–350mOsm/kg。加入额外试剂如HEPES或药物都有可能影响培养液渗透压。

换入新鲜培养液

8. 培养细胞生长减慢：

由于更换不同培养液或血清。培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏。培养物中有少量细菌或真菌污染。试剂保存不当。

比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验。

增加起始培养细胞浓度。

让细胞逐渐适应新培养液。

换入新鲜配制培养液。

补加谷氨酰胺或生长因子。

用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物。或用抗生素除菌。

血清需保存在-5℃到-20

接种细胞起始浓度太低，细胞已老化，支原体污染。

增加接种细胞起始浓度。

换用新的保种细胞。

分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。

血清

1. 保存血清最好的方法?

建议血清应保存在-5℃至-2O℃。然而，若存放于4℃时，请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。

2. 如何解冻血清才不会使产品质量受损?

建议您将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。

3. 血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理?

血清中沉淀物的出现有许多种原因，但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成，而血纤维蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血清解冻后，也会存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物，并不影响血清本身的质量。若欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞您的过滤膜。

5. 有必要做热灭活吗?

实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。

6. 为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀?

GIBICO的胎牛血清没有预老化，储存在2–8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响血清的质量。推荐在–20℃储存胎牛血清，避免反复冻融。

7. 如何避免沉淀物的产生?

解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温)，若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃)，实验显示非常容易产生沉淀物。解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。

细胞分离试剂

1. 大部分连续细胞系，强贴壁细胞系，许多早代细胞

HBSS或无钙镁PBS

0.25％胰蛋白酶溶解在无钙镁平衡盐溶液中

2. 细胞表面蛋白完整性重要的连续细胞系

HBSS或无钙镁PBS

0.05％胰蛋白酶溶解在0.53mM EDTA

3. 弱贴壁表皮细胞转化成纤维细胞（要求细胞表面完整性），原代细胞

HBSS或无钙镁PBS

EDTA,甘油溶解在柠檬酸钠中

4. 强贴壁早代细胞系

HBSS或无钙镁PBS

0.25％胰蛋白酶溶解在1mM EDTA，Dispase 0.6-2.4单位/ml 溶解在PBS

5. 上皮细胞

0.5mM -1mM EDTA

0.5mM -1mM EDTA，Dispase 0.6-2.4单位/ml 溶解在PBS

6. 强贴壁细胞，上皮细胞，一些肿瘤细胞

0.5mM -1mM EDTA

0.25％胰蛋白酶1mM EDTA，Dispase 0.6-2.4单位/ml 溶解在无钙镁PBS

7. 厚培养物，多层富含胶原的密集培养

1mM EDTA

0.25％胰蛋白酶，200单位/ml胶原酶，1mM EDTA溶解在无钙镁平衡盐溶液中

原代细胞培养和传代培养的方法及其注意事项

初代培养 原理 将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。 仪器、材料及试剂 仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃） 材料：动物组织块 试剂：1640培养基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank′s液，碘酒 初代消化培养法 1. 准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。 2. 布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。 3. 处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。 4. 剪切：用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块，以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角烧瓶中，结扎瓶口或塞以胶塞。 5. 消化：或用恒温水浴，或置于37℃温箱消化均可，消化中每隔20分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。 6. 分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速 （500~1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液。 7. 计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。 8. 培养：置于36.5℃温箱培养，如用CO2温箱培养，瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞，纱布塞易生霉菌，每次换液时需要换新塞。 初代组织块培养法 1. 剪切：把组织小块置于小烧杯或青霉素小瓶中，用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污，吸静Hanks液，用眼科剪反复剪切1mm3块为止。 2. 摆布：用弯头吸管吸取若干小块，置于培养瓶中，用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底部，小块相互距离以0.5cm为宜，每一25ml培养瓶底可摆布20~30块。 3. 轻轻翻转培养瓶，另瓶底向上，注意翻瓶时勿另组织小块流动，塞好瓶塞，置36.5℃温箱培养2小时左右（勿超过4小时），使小块微干涸。 4. 培养：从微箱中取出培养瓶，开塞，46度斜持培养瓶，箱瓶底脚部轻轻注入培养液少许，然后缓缓再把培养瓶翻转过来，让培养液慢慢覆盖附于瓶地上的组织小块。置温箱中静止培养。待细胞从组织块游出数量增多后。再补加培养液。

焊缝出现的几个常见问题及原因分析

焊接常见的主要几个问题及原因分析 1、焊缝焊接区域清理不干净。 问题：焊缝及坡口区域油、绣清理不干净时，在焊接过程中容易产生气孔、裂纹、增加飞溅物等缺陷。 处理方式：要求厂家将焊缝及坡口两侧20 mm范围内的铁锈、油污、氧化物等清理干净，使其露出金属光泽方可施焊。 2、检查中发现焊缝有表面气孔。 问题：焊件清理不干净，杂质在焊接高温时产生气体进入熔池，电弧过长，氩弧焊时保护气体流量过大或过小，保护效果不好等，焊接材料没有经过烘培或烘培不符合要求，焊丝清理不干净， 在焊接过程中自身产生气体进入熔池，焊接过程中由于防风措施不严格，熔池混入气体， 熔池温度低，凝固时间短等。 处理方式：母材、焊丝按照要求清理干净，焊条按照要求烘培。防风措施严格。焊接速度不能过快，电弧不能过长，正确掌握起弧、运条、息弧等操作要领。对有表面气孔的焊缝，机械打磨 清除缺陷，必要时进行补焊. 3、检查中发现焊缝表面夹渣。接头处和焊缝边缘常见。 问题：多层多道焊接时，层间药皮清理不干净，焊接电流小，焊接速度快，焊接操作手法不当等造成焊缝夹渣。 处理方式：加强焊件表面打磨，多层多道焊时层间药皮必须清理干净，选择合理的焊接电流和焊接速度，对出现在焊缝表面的夹渣，进行打磨清除，进行补焊。 4、焊缝接头收弧时弧坑、缩孔。 问题：焊接收弧中熔池未填满就进行收弧，停止焊接，焊材融化时弧坑处停留时间短。 处理方式：延长收弧时间，采取正确的收弧方法，加强焊工责任心，对已经形成对弧坑、缩孔、裂纹进行打磨清理并补焊。 5、检查中发现焊缝有咬边现象，焊缝与母材熔合不好，出现较深沟槽。 问题：焊接电流大，电弧过长，焊条角度不当，焊条送进速度不合适等都是造成咬边的原因。 处理方式：选择合适的电流，掌握好焊条的运条方式，控制好电弧。要求厂家对检查中发现的焊缝咬边，进行打磨清理、补焊，符合验收标准。 6、检查中发现焊缝成型差. 问题：焊缝宽窄度不一致、焊缝高低不平、焊缝表面有焊瘤、焊缝接不上头等。 出现这些原因主要是施工人员水平低， 处理方式：要求厂家使用合格的电焊工和有一定技术能力的人员来进行生产与焊接,严格执行焊接工艺有关要求. 行车梁裂纹：裂纹的危害是最大的。 事情发生的原因分析： 裂纹的产生是多种因素造成的，要从母材、结构、焊接、安装、环境、人员技术等方面进行综合分析，焊接过程是一个不均匀加热和冷却的过程，会产生纵向和横向焊接残余应力。经过分析主要有以下几点： 1、焊接组装工艺不正确，在行车梁对接时，存在随意焊接的情况，由于钢板厚度、焊接顺序、 坡口形式、焊缝位置等具体条件不同，产生不同的约束应力直接影响到焊接接头的裂纹倾向。

临床研究中的常见问题

课题负责人主要临床研究者地职责 准备研究方案 确定和需要记录问题地设计 提出统计分析要求 定期访问个参加试验地分中心，监督研究进展 对研究过程中遇到地问题作出决断 对治疗过程中出现地严重不良反应作出评估和处理 负责撰写研究总结 统计专业人员地职责 完成研究方案中地统计设计：试验地类型；对象例数计算；随机化方法 参与准备研究方案 负责参与设计和问题表、准备填写说明，参与讨论判断数据有效性地说明和定义撰写统计分析计划 写出统计分析报告 参与撰写临床总结和论文（数据部分为主） 三、程序分析员地职责 参与地设计 设计数据管理计算机系统 编制以及与数据管理、数据检查有关地计算机程序 根据统计人员要求编制数据分析地计算机程序 试验结束后将上述管理系统整理归档 四、数据管理助理地职责 负责与各分中心地联系 参与设计 数据地收集和目视检查 设计并填写对象登记表 准备数据批供录入人员输入计算机 准备研究进展报告 数据检查和清理 为研究人员会议准备材料 五、数据录码员地职责 将上地数据输入计算机 核对数据输入无误：第二次输入 及时将输入过程中发现地问题通报数据管理助理和程序分析员 六、临床试验中地质量管理环节 中央实验室 数据地获取和报告 [远程]数据输入() 病例记录表系统 临床数据管理 不良事件报告 临床供给系统 统计分析系统 七、病例记录表（）地组成

封页 主要研究人员对数据认可签字表 筛选表 接纳表 随访表：每次随访一次 伴随用药记录 不良事件记录表 终止表 研究后表（安全性评价） 临床研究中地常见问题 临床研究资料保存不完整 原始资料不原始或没有原始数据（如何保存） 没有监查和稽查记录 不能严格执行，或者没有 不能严格执行知情同意 药品管理不规范 不采用中心实验室（中心实验室质控达不到要求） 资料保存（一） 每一项临床试验都要有完整地记录，并按一定顺序排列.其中包括： 新药临床研究批件； 药检验报告（试验药物和对照药物）；注意：临床研究用药应是在符合要求地条件下生产，应由申办方提供有关证明资料个人收集整理，勿做商业用途 临床研究合同 伦理批件 资料保存（二） 研究者手册 研究者分工表 试验方案（应有研究者和申办方签字确认，版本号）； 受试者知情同意书（一份应交给受试者自己保留）；注意：在今后地临床研究中，最好建立一有受试者签名地领走知情同意书副本地记录.资料个人收集整理，勿做商业用途 病例观察表（包括有不良事件记录、合用药记录等）； 总结报告 原始数据 没有原始数据 原始数据丢失 修改在原始数据上找不到依据 接受检查时“补充”原始数据 监查和稽查 无稽查 有监查无记录 有记录不保存 从别处抄来地 对没有系统培训

建筑工程总承包项目合同管理常见问题分析与对策

建筑工程总承包项目合同管理常见问题分析与对策 发表时间：2018-09-17T10:10:57.123Z 来源：《基层建设》2018年第25期作者：谭赟[导读] 摘要：作为建筑工程总承包项目，合同的管理是其中的重要内容。 中南建筑设计院股份有限公司湖北省武汉市 430071 摘要：作为建筑工程总承包项目，合同的管理是其中的重要内容。在与对方交谈、拟定、审核、签订和交底等，或者建筑工程项目发生变更、补充和终止等过程中，有很多的情况会使总承包商的经济利益受到损害。然而在现实生活中许多的总承包商在合同管理方面认知不够重视，处理的方法有许多的漏洞。本文就建筑工程总承包合同的管理问题、项目合同的制定不规范和项目合同的内容有漏洞等常见问题进行了分析，并且针对这些问题找到相对可行的解决对策。 关键词：建筑工程项目；常见问题；问题分析及对策；合同管理 引言：从实际的建筑工程总承包项目的合同管理来看，效果并不是很理想，普遍存在着许多常见的问题在现实生活里的建筑工程总承包项目合同的管理中。这些问题如果不加以重视解决，容易给总承包单位带来经济风险，提高工程造价，从而降低了相关的建筑工程项目经济效益。中国有句古话是“磨刀不误砍柴工”，找到问题解决问题，在建筑工程总承包项目合同中科学合理的管理是十分必要的，对于建筑工程总承包项目合同的管理中常见的问题，进行深入探讨并找到切实可行的解决办法是本文的主要目的。 一、建筑工程总承包项目合同管理中常见的问题 （一）建筑工程总承包合同的管理问题 合同管理人员的问题。合同管理人员没有完全具备建筑工程项目管理所具有的知识和技能，比如说在与对方交谈、拟定、审核、签订和交底等过程中正常有效的进行，或者建筑工程项目发生变更、补充和终止能够保障本公司的经济效益不受到损害，这些方面都需要合同管理人员具有足够的专业知识和相关的意识技能。对于建筑工程这种施工过程复杂，建设周期长，回报效益晚的项目来说，签订总承包项目合同具有一定的特殊性很容易给总承包商的利益带来风险。合同管理的问题。刚才提到的在与对方交谈、拟定、审核、签订和交底等，或者建筑工程项目发生变更、补充和终止等过程中，有很多的情况会使总承包商的经济利益受到损害。还有就是在总承包商的利益受到损害时，没能及时的采取项目合同的解决办法导致总承包商的合法利益不能够及时维护。 （二）项目合同的制定不规范 由于总承包商对市场与合同之间的关系认识不足，在建筑工程总承包中，工程项目的合同在制定前没有结合市场的实际状况，盲目的承接建筑工程项目对项目合同的认识不够，导致在合同纠纷时遭到利益侵犯却没有相应的合同条款依据。还有就是在签订总承包合同是前期对施工环境以及建筑工程项目的前期调查的重视程度不够，施工估计不足，从而在后续的施工过程遇到计划外的问题困难，导致建筑工程的建设周期推迟，建设工程的建设资金的抬高。建筑工程项目的建设周期长，合同的履行时间比较长，很容易发生突发情况，比如说是市场价格的变化，不可抗力的影响还有法律法规的更改变化，对建筑工程总承包商的经济利益造成损害。重要的是执行建筑工程总承包的项目合同时，往往头重脚轻、虎头蛇尾，在前期过分的对总承包工程计划墨守成规，而在中期后期忽视了项目合同在建筑工程的施工过程中的作用。 （三）项目合同的内容有漏洞 在合同制定中，合同中的文字往往使用不严谨，容易发生歧义或者是无效的情况。在后期维权的过程中缺乏有效依据给总承包商带来困难麻烦。还有就是主体的指向不明，经常会出现无效代理的情况。当然总承包合同的条款不明，存在漏洞，导致合同的正常履行从而引起纠纷。在合同的协商拟定中，双方缺少有效的沟通，施工交底时没有交代清楚，造成工程的施工情况和原计划存在差别。还有就是对建筑工程总承包的认识不够，项目合同的制定中缺少责任说明和合理的权益，导致在合同纠纷时遭到利益侵犯却没有相应的合同条款依据。 二、加强建筑工程总承包项目合同管理的具体对策 （一）加强工程项目总承包合同的管理 建筑工程项目合同的管理人员应该接受专业的培训。培训合同管理人员相应的管理知识，对市场研究和工程调查进行训练。对上岗员工进行系统的培训与考核，保证员工具备必要的建筑工程总承包项目合同管理的知识和技能，能够在与对方交谈、拟定、审核、签订和交底等，或者建筑工程项目发生变更、补充和终止等过程中能够有效的维护自身的合法利益。因为市场的变化较快，合同管理人员应当密切关注市场环境的变化，提升自己的合同管理水平，学习先进科学的总承包项目合同管理的方法。 （二）规范工程项目总承包合同的制定 充分认识市场关系与合同管理的密切关系，针对现实生活中的市场环境，制定符合自身正当合法利益的合同条款，规范工程项目总承包合同的制定。前期要高度重视施工环境以及建筑工程项目的前期调查，，从而在后续的施工过程遇到计划外的问题困难，导致建筑工程的建设周期推迟的问题能够有效地解决，避免因上面的情况导致建设工程的建设资金的抬高。在中期后期重视项目合同在建筑工程的施工过程中的作用，在合法利益遭受侵犯时能够及时通过规范的流程来保护自己。 （三）严谨制定工程项目总承包合同的内容 比较完善的工程项目总承包合同在投入施工作业、运行维护作业以及竣工检查作业等环节上有相对成熟的技术规范，并且高度认识到了对项目合同的严格管理工作的重要性和必要性，同时对日常作业环节进行了优化补充，并且对突发状况制定了紧急应对措施，对问题的发生也有了比较详细的处理对策。在整个建筑总承包项目过程中的维权方面也有了有效的合同条款，可以有据可依维护总承包商的正当合法利益。 总结语： 作为建筑工程总承包项目，合同的管理是其中的重要内容。在与对方交谈、拟定、审核、签订和交底等，或者建筑工程项目发生变更、补充和终止等过程中，都离不开建筑工程总承包项目合同的介入。然而在现实生活中许多的总承包商在合同管理方面认知不够重视，在合同管理上出现了很多问题，只有针对这些常见问题找到合理科学的解决对策，才可以真正保护自身的正当利益。 参考文献： [1]王腾.建筑工程总承包项目合同管理常见问题分析与对策[J].城市建设理论研究（电子版），2017（33）：28-29. [2]张旭林.建筑工程总承包项目管理中存在的问题及对策研究[D].重庆大学，2016.

回转窑运行常见问题及解决方案

回转窑运行常见问题及解决方案 回转窑的处理能力异常丰富，这一特点已将其推向越来越多的应用领域。虽然回转窑是可靠的机器，但它们可能会遇到问题，尤其是在设计，监控或维护不当的情况下。 知道为什么会发生此类问题，以及如何识别和解决这些问题对于最大限度地提高回转窑的使用寿命至关重要。尽管问题通常是特定于手头操作的独特参数，但这里重点介绍了回转窑操作员面临的一些最常见挑战，以及其原因，如何发现它们以及解决问题的潜在途径。这些问题中的许多问题也可以通过过程或设备审核来确定。 环（渣）形成 窑炉中的炉渣或坝环形成是指在窑炉内部周围形成的堆积物，其作用是防止材料通过或受到显着抑制。 在窑炉中形成物料环具有多种含义，包括影响停留时间和引起产品质量问题，在进料端密封件中积聚物料，降低产量以及促进窑炉中的物料备份等问题。它还会大大降低吞吐量。此外，如果环（或环的一部分）断裂，则有可能完全堵塞窑炉出口，从而导致更严重的问题。 形成环经常需要经常停机以清除材料，废品以及对后处理的更高需求。简而言之，它降低了整个过程的效率。 是什么原因导致窑炉成环？ 成环非常普遍，大约占85％的商业窑炉中。通常是结渣温度变化的结果。 结渣温度是材料融合在一起并使其固化的温度。如果允许进料成分发生变化以降低排渣温度，则会形成环。 同样，如果窑温度没有正确测量和控制，则温度可能会超过结渣的温度，从而导致成环。 成环的迹象 窑中形成环的潜在迹象包括从窑中排出的物料显着减少或完全停止。 您如何解决成环问题？

炉渣环可以手动移除，也可以通过提高系统的工作温度使其溶解。如果采用温度调节方法，一旦环破裂，温度可再次降低至可能形成炉渣的温度以下。 为了防止将来产生额外的结渣，应检查燃烧室热电偶和监控系统，以确保它们正常运行以进行足够的温度监控。进料的规格也应与原始工艺参数进行比较，以确保不对原料的变化负责。 在某些情况下，也可以通过提高窑的转速来消除炉渣的形成，从而使物料更快地通过窑。 黏着 由于多种原因，物料在窑中的粘连是一个问题。与成环一样，它限制了物料通过窑的流动，最终破坏了装载量和生产能力。它也有可能破裂并阻塞窑出料，并对耐火材料造成损害。 在间接窑炉中，当物料粘附到窑炉内部时，会形成热量必须通过的附加屏障，从而进一步降低了传热效率。 是什么原因导致窑炉卡死？ 不幸的是，粘连可能是由几乎无数个问题引起的，因此很难找出问题的根源。它通常特定于材料独特的化学成分和物理特性与热量相互作用的方式。当物料通过窑炉引起的化学或物理变化时，物料也可能变得更粘。 由于这些原因，回转窑测试是工艺开发的关键部分。测试有助于在生产之前识别此类问题，从而使窑炉能够针对材料特性进行设计。 与成环一样，粘连问题通常通过减少从窑中出来的物料来表明。 您如何解决卡在窑中的问题？ 虽然粘贴是有问题的，但是有几种方法可以解决。最常见的方法包括： 提高窑速 根据物料的特性，提高窑速会降低物料的粘附机会，因为它与壳体的接触时间更少。窑温升高 某些材料可能仅在给定的温度和湿度范围内粘住。这样，通过提高窑炉温度，材料的粘性可能降低，或者水分含量降低到足以移出其可能粘附的范围之外。

关键词标引常见问题探讨

关键词标引常见问题探讨 通过对关键词标引现状及其常见问题的分析，提出优化词表，重视关键词检索、加强人员培训和制定关键词标引的质控体系。以提高关键词标引质量。 关键词标引已成为现代文献数据加工的重要环节，其原因在于关键词在统一同类文献、涵盖不同专业文献，有利于文献查找方面发挥着不可替代的作用。正因为如此，如何改进和提高关键词标引的质量，吸引了大量研究人员进行探讨并深入挖掘关键词在文献数据库构建中的巨大潜力。本文对关键词标引的现状、常见问题进行分析，并对如何提高关键词标引的质量提出一些建议，供研究者参考。 关键词标引的现状 关键词标引是构建文献数据库的基础。关键词标引的好坏，直接影响文献数据库的质量。正确理解关键词的概念以及关键词标引的要求、作用和意义，对于把握关键词标引有着至关重要的作用。

1、关键词的概念 《科学技术报告，学位论文和学术论文的编写格式》(GB7713-87)对关键词的定义如下：“关键词是为了文献标引工作从报告、论文中选取出来用以表示全文主题内容信息款目的单词或术语。”学术界对关键词的定义更为具体，如有的学者认为“所谓关键词，是指那些出现在文献的标题(篇名、章节名)、摘要和正文中，对表征文献主题内容具有实质意义的词语，亦即对揭示和描述主题内容来说是重要的、带有关键性的、可作为检索入口的词或短语，是一种近似于自由词的自然语言。”(《医学论文关键词的标引》，陈晶等著)但是，我国尚无国家标准直接将关键词定性为“近似于自由词的自然语言”，为非受控词汇。在实际应用中，关键词标引时受较少控制，可以比较自由地标引，但也不是绝对的自由，其遵循的原则应选择表述文献主题的具有实质意义的词或短语。由于关键词标引是依据被标引文献原文选取关键词，选取的关键词具有一定的专指性，具备及时反映新学科、新理论、新技术、新材料等概念的优点，但不足之处在于查全率不高。 2、关键词标引的要求、作用及意义 一般情况下，标引的关键词必须是表达某个主题概念的具有专业用语性质的词或词组。这个词或词组应该是名词或

细胞培养常见问题的原因及其解决的办法

细胞培养常见问题的原因及其解决的办法： 问题1培养液pH值变化太快 可能原因 (1)CO2张力不对 (2)培养瓶盖拧得太紧 (3)NaHCO3缓冲系统缓冲力不足 (4)培养液中盐浓度不正确 (5)细菌、酵母或真菌污染 建议解决方法 (1)按培养液中NaHCO3浓度增加或减少培养箱内CO2浓度，2.0g/L到3.7g/L浓度NaHCO3对应CO2浓度为5%到10%。 (2)松开瓶盖1/4圈。 (3)改用不依赖CO2培养液。加HEPES缓冲液至10到25mM终浓度。 (4)在CO2培养环境中改用基于Earle′s盐配制的培养液，在大气培养环境中培养改用Hanks盐配制的培养液。 (5)丢弃培养物，或用抗生素除菌。 问题2：培养液出现沉淀，但pH值不变 可能原因 (1)洗涤剂清洗后残留有磷酸盐，将培养基成分沉淀下来 (2)冰冻保存培养液 建议解决方法 (1)用去离子水反复冲洗玻璃器皿，然后灭菌。 (2)将培养液加热到37℃，摇动使其溶解如沉淀仍然存在，丢弃培养液。 问题3：培养液出现沉淀，同时pH发生变化 可能原因 细菌或真菌污染 建议解决方法

丢弃培养物，或用抗生素除菌。 问题4：培养细胞不贴壁 可能原因 (1)胰蛋白酶消化过度 (2)支原体污染 (3)培养瓶瓶底不干净 (4)培养液pH值过碱(NaHCO3分解) (5)消化液或培养液配制错误、过期储存、储存不 细胞老化(如传代前细胞已汇合导致失去贴附性) (7)接种细胞起始浓度太低或太高 建议解决方法 (1)缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度。 (2)分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。 (3)注意刷洗，或换用一次性塑料培养瓶 (4)使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2(将培养液敞口放入培养箱也可) (5)重新配置消化液或培养液 启用新的保种细胞 (7)调节最佳接种细胞浓度 问题5：悬浮细胞成簇 可能原因 (1)培养液中含钙、镁离子 (2)支原体污染 (3)蛋白酶过度消化使得细胞裂解释 (4)DNA污染 建议解决方法 (1)用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻轻吹吸细胞获得单细胞悬液。 (2)分离培养物，检测支原体。如发现支原体污染，丢弃培养物。

最新承包工程常见问题对策

承包工程常见问题对 策

承包工程常见问题对策 工程承包问题对策 1.甲方要求垫资施工怎么办？ 【实务咨询】我公司接到某项工程的招标邀请，了解到中标的一个基本条件是需要前期垫资1000万元。我公司觉得可以垫资施工，但又怕甲方投资资金不到位，导致垫资施工后垫资款不能及时支付给我公司而造成长期拖欠。我公司应该怎么办？ 【评估】如果甲方后期建设资金无法筹集或难以到位，将可能致使施工工程款及垫资款项难以及时支付，也有可能导致工程停工，形成“烂尾工程”，从而使贵公司的垫资款变成呆坏账。 【支招】目前，工程垫资在法律上没有禁止，属于有效法律行为。但为避免风险，贵公司可以在施工合同中约定甲方应当在工程竣工交付前支付全部或大部分垫资款，否则贵公司可以拒绝交付已经完工的工程。同时，贵公司可以在施工合同中明确约定垫资款的利息，如果甲方资金较紧张，一般会同意在合同中约定垫资款利息的。另外，贵公司也可以在施工合同中约定甲方逾期支付垫资款的，应当向贵公司支付违约金，如果有可能，贵公司还可以要求甲方提供垫资担保。 2.甲方拖欠工程款，分包人怎么办？ 【实务咨询】我公司分包了一商住楼工程中的弱电工程，按照合同约定，总包单位还拖欠我公司100多万元的工程款。我公司多次要求总包单位支付，但由于甲方拖欠总包单位800多万元的工程款一直不付，总包单位暂时没有资金支付拖欠我公司的工程款。我公司应该怎么办？ 【评估】工程建设中的这种工程款拖欠行为比比皆是。贵公司要求甲方支付款项时，甲方往往以与贵公司之间没有合同关系为由拒绝支付，从而使贵公司束手无策。 【支招】根据有关法律规定，贵公司可以通过诉讼或仲裁的途径要求甲方支付工程款。贵公司在诉讼或仲裁中可以将总包人作为被告或被申请人，将甲方作为第三人；也可以将甲方作为被告或被申请人，将总包方作为第三人；也可以将总包人和甲方同时作为被告或被申请人进行诉讼或仲裁。需要强调的是，甲方只在拖欠总包单位工程款项的范围内向贵公司承担支付工程款责任。 3.甲方拒不签收联系单怎么办？ 【实务咨询】我公司现在正在负责一家工厂的厂房工程的施工，甲方前段时间口头通知我公司对部分工程材料作调整变更，我公司为此向甲方递交了关于工程材料调整变更的工作联系单，但甲方拒不签收该工作联系单，只是催促我公司抓紧施工，并告诉我公司工程材料的调

锅炉运行常见问题解答

锅炉运行常见问题解答问：燃烧不稳时投油，负压变正即退出油枪，能避免大正压冲击吗？为什么？ 答：不能；因为炉膛负压变正即说明部分熄灭的煤粉被点燃，点燃 部分熄灭煤粉产生的冲击力不会因停运油枪而降低，退油枪的后果 是有可能再次发生灭火。问：投汽压自动压力高，给粉机低转速停留，氧量高应避免灭火发生？ 答：应先投油稳燃，然后解除汽压自动，根据情况提高运行给粉机 转速并停运1～2台给粉机，必要时减少送风量，使氧量和汽压迅速 恢复正常。最下排给粉机转速≮800转/分。问：运行中短时处理给 煤机故障，制粉系统应采取哪些防止锅炉灭火的措施？ 答：关小排粉机入口档板，控制排粉机电流低于运行电流1~1。5A，全开在循环门，控制磨出口温度在80度左右运行，如燃烧难以稳定 时可请示司炉停止该制粉系统运行。问：灭火后投投油点火前为何 应减少送风，关闭小二次风？ 答：灭火后炉膛温度低，过大的下二次风和过大的送风将使油枪的 根部风过大，难以点燃油嘴，或使油的着火点后移，吹灭着火的油嘴，影响重新点火恢复。 问：锅炉灭火后，何时通知减负荷？减负荷幅度和速度应如何控 制？

答：灭火后当汽压开始下降时应立即通知减负荷。减负荷的速度和 幅度不应使锅炉超压开排汽，应根据汽压和汽温下降幅度和灭火后 点火恢复时间决定减负荷值。根据经验，一般220T/H炉正常灭火减 负荷至20MW，400T/H炉正常灭火减负荷至40MW；问：低负荷运行时为何应在不影响安全的前提下维持稍低的氧量运行？ 答：低负荷运行时炉膛温度相对较低，煤粉气流的着火困难，燃烧 稳定性相对较差，维持高氧量运行会进一步降低炉膛温度，降低炉 膛内煤粉燃烧浓度，燃烧的抗干扰能力降低，导致灭火的发生。 问：锅炉为何要设置防爆门？ 答：发生炉膛爆炸时自动开启泄压，减轻爆炸对锅炉的冲击破坏力，避免炉膛水冷壁，炉墙和烟道的损坏。 问：运行中为何要开启粉仓吸潮管？ 答：排除粉仓和输粉机内的潮气，防止粉仓内的煤粉受潮结块，影 响其流动性，并因潮气的排出使粉仓内的温度维持在合适值，防止 煤粉的自燃爆炸。 问：停止进水时为何要开启省煤器再循环门？ 答：锅炉停止进水时省煤器如仍受热，水通过循环管在省煤器，汽 鼓之间形成循环，以保护省煤器的安全； 问：过热器热水浸泡反冲洗的作用？

研发人员常见问题之剖析与探讨

研发人员常见问题之剖析与探讨 吴英秦 清云科技大学电机系 摘要 本文是作者在2006年3月份在外公开演讲时与学员互动后的心得感想并针对学员的问题作进一步的剖析与探讨。文中有学员问题的汇整、平衡计分卡的四大构面、工程师成长的选择、产品开发流程的掌握、时间管理的第二象限典范、创新之路及系统思考等的介绍。 关键词：研发管理、创新、创新管理、时间管理、第二象限典范、系统思考、IPO模式 前言 2006年3月初，我应邀在青岛及台北两地讲授有关研发管理与创新的课题[1][2][3]。课堂里与学员的互动中，颇有一些感想。当时有许多学员提出一些问题，但限于时间无法给予立即而完整的回答。因此想藉着撰写本文时，针对某些问题作进一步的分析与探讨。有些问题牵涉的范围太大，又限于篇幅，将另外撰文介绍我的看法。 为了增加读者的真实感，我把学员的问题忠实的呈现，从问题中，读者可以发现学员的职务、经验及目前所负的责任均有所不同，但是希望解决问题及提升公司的竞争力的用心却是一致的。事实上，我们从问题的整理当中，发觉学员们关注的主题围绕在企业转型与创新、个人生涯的发展与训练、研发管理技巧、研发绩效的考核与激励、台湾企业的作法及与研发主管的沟通方式及其领导的风格等。坦白的说，光看题目已经就可以体会或领略到平日本身可以改善的部份。如果能借着问题的反应的现实，大家彼此多作一些反省，本文的价值不言而喻。 以下是学员们的问题： 1.策略转换风险大小如何准确的预测？策略转换时应注意什么？ 2.如何在产品研发过程中将经验传承与创新有效的结合起来？ 3.研发战略对公司发展战略的贡献体现在哪些方面？ 4.对于传统产业的技术创新难度较大，尤其是原始的创新有哪些方面可进行突破？ 5.传统行业的研发，创造利润非常困难，如何建立和市场接轨的管理体制？ 6.如果人们比较接受传统口味的产品，新产品开发的出路何在？ 7.什么方法更适合探索传统产业的创新？ 8.研发和创新是否不应只局限于开发新产品及设立技术中心，是否也应包括营销、服 务、企业文化等？。 9.如果领导对研发和创新的理解与认识不够（认为只是专业工程师及技术人员的事 情），如何去作工作？. 10.如何解决创新与企业标准化规范化之间的矛盾？

细胞原代培养细胞生物学实验报告

细胞生物学实验报告 细胞原代培养 姓名： 学号： 班级： 专业： 同组成员： 一、实验原理

细胞培养是生物学和医学研究中最常用的手段之一，可分为原代培养和传代培养两种。原代培养是直接从生物体获取组织或器官的一部分进行培养。由于培养的细胞刚刚从活体组织分离出来，故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段。同时也为以后传代培养创造条件。 原代培养的方法： 1、组织块法在平皿中用弯头剪把组织尽量剪碎，每个组织块小于1mm3大小。用Hanks 液洗涤2—3次，自然沉淀。用吸管吸去上清液。将组织块贴于培养瓶进行培养。 2、酶消化法将1mm3大小的组织块放入1个三角瓶内加入10—30ml的%的胰蛋白酶。370C磁棒搅拌消化20－30分钟。然后终止消化。用几层无菌纱布过滤。取过滤液，离心800rpm 5—10分钟收集细胞。弃上清，加入带有双抗的培养基，放入培养瓶培养。 取材注意事项： 取材要注意新鲜和保鲜。取材应严格无菌。取材和原代细胞制作时，要用锋利的器械，如手术刀或剃须刀片切碎组织，尽可能减少对细胞的机械损伤。要仔细去除所取材料上的血液（血块）、脂肪、坏死组织及结缔组织，切碎组织时应避免组织干燥，可在含少量培养液的器皿中进行。取材应注意组织类型、分化程度、年龄等，一般来讲，胚胎组织较成熟个体组织容易培养，分化低的较分化高的组织容易生长，肿瘤组织较正常组织容易培养。 二、实验目的 1、理解细胞原代培养原理 2、熟悉细胞原代培养方法与过程 3、了解细胞原代培养的应用 4、独立进行细胞原代培养操作 三、实验材料 手术小直剪刀、眼科直镊子、眼科弯镊子、玻璃平皿、培养瓶、试管、移液管、巴斯德吸管、废液缸、75%酒精棉球、酒精灯。 动物：9-12日龄的鸡胚蛋 四、实验步骤

弱电工程施工常见的问题及对策.doc

弱电施工常见的问题及对策 弱电系统是现代建筑物或小区不可缺少的重要组成部分，下文对弱电系统的设备选型、施工管理、系统运维等方面所存在的问题、缺陷进行整理，提出相应解决对策，值得工程人员借鉴。 通讯、数据网络、电视系统 1.桥架 缺陷：建筑单体桥架内线缆长度预留不够，施工结束后，桥架盖板盖不起来。 原因分析：现场施工及管理不规范。 预防措施：线缆敷设时要充分考虑桥架内的长度余量，施工结束后桥架内线缆要梳理整齐，并盖好桥架盖板。 2.电信、网通管道 缺陷：电信、网通共用桥架，但桥架内没做线架，导致各自线缆敷设时不能有效的分隔，造成线缆排放混乱，运行时易引起故障。 原因分析：设计不到位，施工时也没有对桥架进行有效地分配，施工管理不规范。 预防措施：设计时要有线架，并做明确分配，施工时做好现场桥架分配的标识。 3.室内管道 缺陷：弱电室内穿线时，由于弱电预埋管路不通，出现利用强电预埋管路穿弱电线缆，强弱电线缆共用管路的情况，造成设备运行不正常，对设备不利。 原因分析：该现象属于现场施工管理不当造成。 解决措施：管道预埋时要及时检查施工质量，加强施工管理，整改疏通弱电管路，重新穿线。 4.弱电箱内接口的预留 缺陷：某工程户内弱电箱仅考虑一只空箱体，箱内各功能模块要另外购买安装，增加了工程协调的工作量，影响了美观和安装质量。 原因分析：空的弱电箱采购时没有仔细考虑以后功能模块的尺寸及安装方式。 预防措施：现场若需安装空的弱电箱时，其尺寸一定要考虑能够符合安装标准的模块；精装修楼盘建议配置成品的弱电箱，其不但美观而且合理，比较适宜。 5.成品保护 缺陷：施工过程中弱电箱安装并穿线后，线缆裸露在箱体外，没有进行保护。 原因分析：现场的施工管理不当。 解决措施：当穿线完成后，应做好标识，整理好线缆放入箱内并及时关闭各弱电箱门，增强成品保护和安全意识。 6.室外箱 缺陷：公共通讯及有线电视设施使用及管理混乱。 原因分析：设计时考虑不周，运行管理不善。 解决措施：设计时各子系统独立设计，同时加强交付后的管理。 7、接线箱 缺陷：箱内设备安装不规范，接线零乱，箱门关闭不严。

供热运行常见问题及解决办法

供热运行常见问题及处理方法 一、常见的暖气不热问题 1、测温差：若上供下回系统，每层暖气片的进出口温差不应该超过2.5度 （可用红外测温仪测温），若超过这个值，一般可以判断该立管回路存在循环流量偏小，有垂直失调现象； 2、将该处暖气片卸下，游任上连接两个皮管至窗外，打开进口阀门，冲洗 进水管线，若压力充足（水量大），表示进水管线没有问题，则关闭金水阀门；若压力不足，查找上游管线内部是否有堵塞； 3、打开下游阀门，进行反冲，方法同上； 4、将拆下的暖气片内积存的污物冲洗干净 5、连接好暖气片，若温差恢复正常，则该暖气不热问题解决； 6、若还不能解决，检查该立管的阀门的开度是否正确 7、必要时对上游管道开天窗检查，一般里面会有废塑料、保温泡沫材料等堆 积，清除之； 8、若整栋楼不热，检查供回水压差应大于0.03MPa；否则为热网水力失调 所致，应对热网进行调节，或在适当的位置安装小型循环水泵解决 9、应清除除污器内的脏东西。 二、供暖初期容易出现的问题 1、管道内积存空气排除不干净，容易造成气堵，导致热水系统循环不畅，也 可以采取加大循环压头的方法，将空气携带到安装有自动排空或者集气罐的部位将空气排出。一般供暖初期，随着供水温度的提高，管道内析出的空气会增多，供暖初期应采用较大的循环流量以便于析出溶解气体； 2.管道内的杂质也可以通过加大循环流量的方法将其携带到除污器定期排

出。 3.若供暖初期循环量偏小，可能会出现垂直失调现象，部分立管温差过大， 虽然整个系统干管温差比较正常，但是楼宇部分立管暖气不热现象很难消除。同时由于循环不畅，很容易让赃物沉积在管道，导致管道堵塞，采用拆除暖气片清污的方法冲洗沉积物。 4.最好在系统回水干管自动排气装置和高效节能的除污器； 5、运行15天到20天，应打开全程水处理器或低点排污器检查，是否有污 物锈泥沉积，若有应及时冲洗干净。 三、循环量偏小引起的暖气不热现象及处理方法： 常见现象： 楼宇内有的单元组暖气正常，供回水温差正常，但是，部分末端立管进 出口温差过大，大于25度，底层楼用户暖气基本没有温度或者接近室 温，既可以判断该立管循环量偏小，时间久了可能会造成管道堵塞。 处理方法： 1、若该现象普遍存在，则为送入该小区的总循环量偏小，需要采取措 施加大循环量。 2、若只是个别楼宇存在，则需要对楼宇内暖气过热热的立管阀门进行 调节，限制流量，尽量是个立管流量分配均衡 3、若末端不热，可考虑在合适位置增加小型循环水泵解决。 四、住宅小区大面积暖气不热 常见现象： 住宅小区大面积暖气不热；整个小区所有楼或大多数楼的散热器不热， 室温普遍达不到要求。 形成原因：

研究性学习常见问题及解决方案

研究性学习课堂常见问题及解决方案 一、情境 我们在是常课堂教学中存在着较强的学科化倾向，就情境创设部分不能有效的进行多学科共同创设情境引入的有机整合。新课程改革要求每一位教师均具备研究性学习课程的教学能力，我们在参与研究性学习教学活动中经常会犯学科本位的错误。情境导放高置的不同，势必就会导致课堂教学结果的不同。例如，同样是环保问题，在语文老师的指导下可能就会演化成环保知识累积方面的研究，在科学老师的指导下就有可能成为环保结果的探究，这样就不可能引起所有学生的学习兴趣，这样就不能体现教育要面向全体学生的发展主针。同样，如果我们从学生的兴趣出发，体现研究环保意识的初衷，那么非科学专业教师指导的研究性学习课程难道就不会有科学上的错误吗，这样势必影响学生的研究成果，使很多好的研究性学习问题只能流于形式。 学科本位问题的根源在于教师的知识具有局限性，解决这一问题的关键在于“解放”学生之前，一定要“解放”教师。只有提高教师水平，强化教师的“导师”意识，才可以顺利推进研究性学习进程。这一点是研究性学习课程实施的先决条件。也正是因为研究性学习的内容具有广泛性，课题涉及到课内外、校内外。而教师所掌握的知识又是有限的，这就需要教师根据学生的课题去补充自己的知识，尝试科学的研究手段，亲身体验课题研究，使自己也成为研究性学习的参与者和实践者。有了一定的知识储备，加之科学的研究方法，相信教师就不再是“教”师，而会成为“导”师，也就真正避免了“可怕”的学科本位 二、任务 研究性学性的主要任务就是选题，课题是高度结构化的，是围绕一个基本问题派生出若干带有研究性的小问题的，但我们平时在选题上常常存在以下问题：1．不懂得问题选择的相关原则，选择了不该选择的研究问题。如对选择的问题不感兴趣；选题的范围过于广泛；选择的问题没有价值，无学习意义、生活意义或社会意义，不能解决任何社会生活问题或自然问题；选择的问题没有任何创新性，没有新的研究视角；不具备可行性和科学性，选择的问题与自己的所学学科无关，缺乏理论和相关知识的支撑，没有考虑到学习时间、学习作用、学习能力等诸因素；实践性不足；不能够运用多种研究方法进行研究。2．研究方向过于广泛，研究问题太大、太抽象，使学生不能准确表达自己的想法，不能将课本中

当前国际工程承包项目中存在的主要问题及对策

当前国际工程承包项目中存在的主要问题及对策 匿名 简介：本文主要对目前我国企业在国际工程管理中存在的若干问题及对策加以探讨，旨在同相关企业共同努力，提高我国国际工程承包企业的国际竞争力。 关键字：国际工程，承包项目，问题，对策 据统计，我国目前有对外经营权的企业2000多家。大量的工程承包企业涌向国际建筑市场，显示了我们强大的国力，但同时，许多企业由于自身问题，兴致冲冲地出去，垂头丧气地回来，不但经济利益受损，很大程度上也影响了国家的形象。本文主要对目前我国企业在国际工程管理中存在的若干问题及对策加以探讨，旨在同相关企业共同努力，提高我国国际工程承包企业的国际竞争力。 存在的主要问题 企业管理、决策体制上存在的问题。目前我国建设行业走出去的主要是两类公司，一类是国有企业，是我国国际工程承包的主要力量，另一类是新兴的私人经济体，在国内完成了一定的资本积累，希望通过各种渠道在国外市场上创造更大的财富。私营企业近年来的发展势头很猛，但没有品牌和资金优势，进一步的发展受到很大限制。而我们所说的体制问题，主要存在于作为市场主体的大型国有企业。大型国有企业担负着各行业、部门“走出去”先锋的重任，依靠行业优势和政府扶持，第一步走出去相对容易，但是走出去后如何发展壮大，却要靠自己，随着国外业务的不断扩展，许多企业体制上的弊端显露无遗，虽然目前大部分国有企业已经改制，但作为国有独资或控股公司，管理模式与改制前没有太大变化。企业有对外经营权，而在海外的分公司却难有独立经营权，国外工程项目的管理甚至决策权一般都是归口在总公司的某一部门，通常是国外的事情国内定。负责国际工程项目管理的部门仅靠电话、传真、电子邮件同国外保持联系，很难全面、真实地掌握国外工程的进展及运作情况。企业在重大问题决策时，因缺乏国外工程详尽的第一手资料，经常出现决策困难或决策出现偏差的情况。 同时，随着国际承包工程市场的不断变化，国际工程的投资模式朝多元化方向发展，其招投标方式也在多样化，竞争的形势的不断在加剧。我国目前许多公司的国际工程承包管理与决策机制已经明显与快速发展的国际承包工程市场不相适应。对国际工程的管理，从市场考察、投标、合同评审、决策、项目实施、过程控制到竣工审计没有形成一套成熟的、完整的、操作性很强的办法。对项目实施中出现的问题不能及时、有针对性地开展研究讨论，提出解决办法，往往根据国内经验来制定方案，结果贻误战机，使小问题变成大问题，长久下来势必被市场淘汰。

制冷系统十大常见故障原因

制冷系统十大常见故障原因 回液 1、对于使用膨胀阀的制冷系统，回液与膨胀阀选型和使用不当密切相关。 膨胀阀选型过大、过热度设定太小、感温包安装方法不正确或绝热包扎破损、膨胀阀失灵都可能造成回液。 2、对于使用毛细管的小制冷系统而言，加液量过大会引起回液。蒸发器结 霜严重或风扇故障时传热变差，未蒸发的液体会引起回液。温度频繁波动也会引起膨胀阀反应失灵而引起回液。 对于回液较难避免的制冷系统，安装气液分离器控制可以有效阻止或降低回液的危害。 带液启动 1、压缩机内的润滑油剧烈起泡的现象叫带液启动。带液启动时的起泡现象 可以在油视镜上清楚地观察到。根本原因是润滑油中溶解的以及沉在润滑油下面了大量的制冷剂，在压力突然降低时突然沸腾，并引起润滑油的起泡现象，很容易引起液击。 2、压缩机安装曲轴箱加热器（电热器）可以有效防止制冷剂迁移。短时间 停机，维持曲轴箱加热器通电。长时间停机不用后，开机前先加热润滑油几个或十几个小时。回气管路上安装气液分离器，可以增加制冷剂迁移的阻力，降低迁移量。 回油 1、当压缩机比蒸发器的位置高时，垂直回气管上的回油弯是必需的。回油 弯要尽可能紧凑，以减小存油。回油弯之间的间距要合适，回油弯的数量比较多时，应该补充一些润滑油。 2压缩机频繁启动不利于回油。由于连续运转时间很短压缩机就停了，回气 管内来不及形成稳定的高速气流，润滑油就只能留在管路内。回油少于奔油，压缩机就会缺油。运转时间越短，管线越长，系统越复杂，回油问题就越突出。 3缺油会引起严重的润滑不足，缺油的根本原因不在于压缩机奔油多少和快 慢，而是系统回油不好。安装油分离器可以快速回油，延长压缩机无回油运转时间。

原代神经细胞培养方法精编版

原代神经细胞培养方法 精编版 MQS system office room 【MQS16H-TTMS2A-MQSS8Q8-MQSH16898】

神经细胞培养体外神经细胞的培养已成为神经生物学研究中十分有用的技术手段。神 经细胞培养的主要优点是:(1)分散培养的神经细胞在体外生长成熟后,能保持 结构和功能上的某些特点, 而且长期培养能形成髓鞘和建立突触联系,这就提 供了体内生长过程在体外重现的机会。(2)能在较长时间内直接观察活细胞的 生长、分化、形态和功能变化,便于使用各种不同的技术方法如相差显微镜、 荧光显微镜、电子显微镜、激光共聚焦显微镜、同位素标记、原位杂交、免 疫组化和电生理等手段进行研究。(3)易于施行物理（如缺血、缺氧）、化学 和生物因子（如神经营养因子）等实验条件, 观察条件变更对神经细胞的直 接或间接作用。(4)便于从细胞和分子水平探讨某些神经疾病的发病机制，药 物或各种因素对胚胎或新生动物神经细胞在生长、发育和分化等各方面的影 响。我们实验室从80年代始开展了神经细胞的体外培养工作，取得了一些 经验，现将培养细胞分类及方法简要介绍如下: 一. 鸡胚背根神经节组织块培养 主要用于神经生长因子（NGF）等神经营养因子的生物活性测定。在差倒 置显微镜下观 察以神经突起的生长长度和密度为指标半定量评估NGF的活性。 1．材料和方法 （1）选正常受精的鸡蛋，置于37℃生化培养箱内孵化，每日翻动鸡蛋一 次。 （2）取孵化8-12 d 的鸡蛋, 用70% 酒精消毒蛋壳，从气室端敲开蛋壳，用消毒镊剥除气

室部蛋壳。 （3）用弯镊钩住鸡胚颈部，无菌条件下取出鸡胚置小平皿内，除去头部后，腹侧向上置 灭菌毛玻璃片上,用眼科弯镊子打开胸腹腔，除去内脏器官。 （4）在解剖显微镜下，小心除去腹膜，暴露脊柱及其两侧，在椎间孔旁可见到沿脊柱两侧 排列的背根节（图1），用一对5号微解剖镊小心取出。 （5）置背根节于解剖溶液内，用微解剖镊去除附带组织，接种于涂有鼠尾胶的玻璃或塑料 培养瓶中，在DMEM无血清培养液中培养。 2．结果 鸡胚背根神经节在含神经生长因子(NGF, ，20ng/ml)的无血清培养液中培养24 h,神经节长出密集的神经突起。而未加NGF的神经节培养24 h, 未见神经突起生长。 二．新生大鼠、新生小鼠及鸡胚背根神经节分散细胞培养 背根神经节（DRG）细胞起源于神经嵴，NGF研究先驱Levi-Montalcini 的实验表明，外原性NGF能刺激DRG细胞生长发育并形成广泛的神经网络。在体外，分离培养的神经节在NGF存在的情况下，神经突起的生长在一天之内可长达数毫米，因此，利用培养的DRG细胞，进行轴突生长发育的研究，是最为经典而常用的方法之一。 1．材料和方法 取新生一天的大鼠(wistar种)和小鼠(昆明种)。用眼科剪在无菌条件下除去背部皮肤, 然后剪取一段脊髓,背侧朝上置于灭菌毛玻璃片上,在解剖显