实习报告：动物胚胎移植技术
动物胚胎移植技术
摘要
胚胎移植又称受精卵移植，是把一头雌性动物的早期胚胎从输卵管或子宫内冲洗出来，移植到另一头雌性动物的输卵管或是子宫内，使之继续发育成新个体的技术。
动物胚胎移植主要是通过对优良供体母畜作同期排卵处理和体内胚胎生产或体外人工授精（IVF）的方法，以大量获得优良的动物胚胎后再将其移植给普通代孕受体母牛进行快速繁殖优良动物的生物技术。胚胎移植技术主要用于快速扩大优秀种公牛和核心母牛的数量。尽管单个胚胎的生产成本较高，但由于种公牛和种母牛较高的经济价值和社会价值，以及利用胚胎移植在育种方面可以获得同胞或同卵双生牛进行后裔测定等优势，因此，该技术在种公牛的选育和优质核心母牛群的培育以及加快育种步伐方面均具有极大的优越性。
本论文将对动物胚胎技术作比较全面的阐述，使大家对动物胚胎技术有一个比较全面的认识。
关键词：供受体超数排卵同期发情胚胎回收胚胎检查胚胎移植
1.1 发情后生殖器官的孕向发育
家畜在发情后生殖器官会发生一系列变化，如：卵巢中功能性黄体的形成，孕酮的分泌和维持，子宫内膜组织的增生和分泌机能的增强，以及其他生理生化的特异现象。这些变化都为胚胎的生存和发育创造了适宜的条件，为妊娠作准备。
配种受孕后的动物其生殖系统朝着妊娠的方向继续发生变化以适应胚胎发育的需要，如黄体的持续存在以及孕酮的分泌和维持，子宫内膜的继续发育。而未受孕的动物其生殖系统会退回到发情前状态。
发情供体和受体发情周期的同期化程度前后不超过一天，否则移植成功率就会降低，甚至移植失败
因此发情后或交配刺激后雌性动物生殖器官的孕向变化是进行胚胎移植的主要生理学基础。
1.2 早期胚胎的游离状态
胚胎在发育的早期有相当一段时间是游离存在于子宫内的，和子宫黏膜没有建立紧密联系，其发育主要靠自身贮存的养分。这样，早期的胚胎容易从生殖道中取出，而且在离体情况下，可短期培养，易存活。
早期胚胎处于游离状态是能够进行胚胎移植技术的基础
1.3 子宫对早期胚胎的免疫耐受性
1.4 胚胎遗传物质的稳定性
在同一物种之内进行胚胎移植不会产生排斥现象;同时，受体对胚胎不产生遗传上的影响，不会改变新个体的遗传特性，也不会减弱起优良性状在出生后的表现程度。
2.1 供受体的选择与管理
2.1.1 供体的选择
?遗传学价值
在畜牧生产中，应选择生产性能优秀的母兽作为供体
?健康状况
应选择身体健康，营养水平中等以上未受孕动物作为供体?繁殖性能
供体应是达到配种年龄以上繁殖机能正常的母畜
2.1.2 受体的选择
?身体健康
?繁殖状况正常
?母性良好
包括泌乳性能和护仔能力等
2.1.3 供受体的管理
在供受体选择时，可根据情况进行传染病的检疫，预防注射和驱虫等工作，确保在胚胎移植过程中供受体的健康;观察供受体发情周期，以便超排和同期发情程序的选择和安排；每日供给中等以上营养水平，注意青绿饲料，维生素和微量元素的补充；
2.2 超数排卵处理
在雌性动物发情周期中的适当时间注射促性腺激素，使卵巢上有比自然生理状态下更多的卵泡发育并排卵，这种方法称为超数排卵。
其目的是增加有活力卵子的数量，并获得较多的可移植胚胎。
目前，用于超排的促性腺激素主要是促卵泡素（FSH）和孕马血清促性腺激素（PMSG）。
FSH半衰期短，用于超排时需要多次注射，而PMSG半衰期长，会产生后效应，导致发情期延长，影响超排效果和胚胎质量，结合注射PMSG抗血清，可消除半衰期过长的副作用。
2.3同期发情
2.3.1同期发情的定义
利用某些激素制剂处理,人为地控制并调整一群雌性动物发情周期之间同期化的方法,称同期发情.
胚胎移植时,受体必须和供体处于相同的发情阶段,才能获得较高的成功率.在发情周期的不同阶段,生殖器官的内分泌环境,生化和组织学特性,对不同发育阶段的胚胎有不同的影响,胚胎要移植到和供体处于相同发情周期阶段的受体生殖道的适当部位,才能继续发育.
2.3.2 同期发情的原理
同期发情主要借助外源激素刺激卵巢.使之按预定的要求发生变化,使处理母畜的卵巢生理机能处于相同阶段.通常采用两种途径:一种时延长黄体期,给一群母畜同时使用孕激素药物,抑制卵泡的生长发育和动物的发情表现.经过一定时期后同时停药,由于卵巢同时失去外源性孕激素的控制,且卵巢上的周期黄体已退化,于是同时出项卵泡发育,引起母畜发情采用孕激素移植母畜发情,实际上是认为地延长黄体期,起到延长发情周期,推迟发情地作用.
另一种途径是缩短黄体期,应用前列腺素促使黄体退化,使卵巢提前摆脱内源性激素地控制,于是卵泡得以同同时开始发育从而达到母畜同期发情.这种情况实际上是缩短母畜地发情周期,促使母畜在短时间内发情。
2.3.3 同期发情的药物及其使用方法
2.3.3.1 抑制卵泡发育的制剂
这一类药物主要是孕激素类,包括孕酮,甲孕酮,氟孕酮,甲地孕酮和18-甲基炔诺酮等.他们能够抑制垂体促卵泡素的分泌,延长黄体期,因而间接地抑制卵泡发育和成熟,是母畜不发情.
其用药方法有:
◆阴道栓塞法:将孕酮阴道栓或自制浸吸一定量药剂的阴道海绵塞放置于阴
道前端,药液不断被阴道黏膜吸收,经过一定时间后取出,此法常用于牛和羊
◆埋植法:将成形的药剂或装有药物的带孔容器埋植于母畜皮下组织,药物
被缓慢吸收,经过一丝那个时间后取出,此法可用作群体处理.
◆注射法:每日将定量药物作皮下或肌肉注射,经过一定时间后停药.此法剂
量准确,但操作麻烦.
◆口服法:每日将一定量的药物均匀拌在饲料中,以单个饲喂较为准确,经过
一定时间后停药.这种方法可用于舍饲母畜.但较费时费工,群体饲喂还会造成个体剂量不准确.
2.3.3.2 溶解黄体的制剂
主要是前列腺素及其类似物,如15-甲基PGF2?,氯前列烯醇,氯胎素等.它们具有明显的溶解黄体作用,因此用于正处于黄体期的母畜的同期发情,对卵巢上没有黄体的动物无效.牛和羊的发情周期的7~16d以内的黄体对前列腺素都易产生反应,采用子宫内灌注效果优于肌肉注射.经前列腺素处理后2~4d,母畜发现发情,未发情的间隔10~20d进行第二次注射,在此期间,可能自然发情形成黄体,对第二次注射作出应答反应.此法方便可靠,但费用高。
2.3.3.3 促进卵泡发育,排卵的药剂
主要有FSH,LG,PMSG,hCG和GnRH等及其类似物的那个,一般在应用上述;两类激素的基础上配合使用,以增强发情同期化,并使卵泡更好地成熟和排卵.
2.4胚胎回收
2.4.1 胚胎回收的定义
胚胎回收也称采卵或采胚,就是利用冲胚液把胚胎从供体生殖道中冲洗出来,提供移植或其他胚胎工程应用.
2.4.2 胚胎回收地时间
胚胎回收地时间,可根据所需胚胎地发育阶段来确定.动物种类不同,其胚胎早期地发育速度有所差异.以配种后计算,几种动物的早期胚胎发育进程近似值见表
2.4.3 冲胚液的配制
冲胚液和胚胎的短期培养液通常是用改良的杜氏磷酸盐缓冲液(DPBS)
根据配方要求分别制备I,II,III液,三蒸水加至最终量的80%,在冰箱中冷却至4 ℃,依次混合后用容量瓶定容至1000mL,注意防止沉淀,PH应为7.1~7.2,如不符,可用NaHCO3或HCL调节,渗透压为310mOsm.配好后,用孔径0.45um滤器过滤除菌,分装密封(注意无菌操作),标记,4℃冰箱保存3~4月.临用前加入灭活小牛血清,一般冲胚液加10%~20%,也可在定容时加入血清,然后再过滤分装.
2.4.4 采胚方法
根据动物种类和胚胎的发育阶段,胚胎回收可采用手术法和非手术法
2.4.4.1 手术法
就是对供体进行常规腹部手术将生殖道部分移出腹腔,用冲胚液对输卵管或子宫角进行冲洗,回收胚胎.本法适用于羊,猪和兔等中小动物;在牛中,如需回收进入子宫前的早期胚胎,仍需用此法.
按外科手术常规方法打开腹腔,先把一侧子宫角,输卵管和卵巢牵引至腹壁切口之外,检查卵巢反应情况(黄体数,残留卵泡的大小,数目及排卵情况)并进行记录.
冲胚的方法包括输卵管冲胚法和子宫角冲胚法
2.4.4.1.1 输卵管冲胚法
用冲胚液冲洗输卵管腔,回收进入子宫前的胚胎,分上行法和下行法.上行法时从子宫角的前端刺入注射针,向上冲洗输卵管,注意用手指固定针头并提捏住子宫角,防止冲洗液从进针周围流出后流向子宫体方向.冲洗液通过从输卵管伞插入到壶腹部的玻璃细管或硅胶管等回收到平皿或试管内;下行法时通过从伞部插入到壶腹的玻璃细管或硅胶管等注入冲胚液,向子宫方向冲洗,冲洗液通过插入到子宫角上部的带有充气囊的二路式导管或回收针回收.一侧冲洗完毕后,还纳腹腔,在冲另一侧.
2.4.4.1.2 子宫角冲胚法
冲洗子宫角,回收进入子宫角的胚胎.依据动物子宫角的大小,选用长4~5cm,外径1.2~1.4mm的针头,改制一个回收针.将回收针插入子宫腔,用套有乳胶管的肠钳夹住子宫角和针体.将宫管结合部之前的输卵管用血管夹夹住,以免冲胚液流入输卵管.然后从宫管结合部后端的胶管收集冲出液于平皿或试管内.一侧冲洗完毕后,除去器械,确认针孔无出血后,还纳腹腔,然后冲另一侧.
冲胚完毕后,把生殖器官还纳腹腔,向腹腔注入防粘连剂和抗生素. 按常规腹
部手术方法闭合手术通路,进行常规术后护理.
手术法采胚,冲胚液用量少,胚胎回收率高,但由于手术对动物有一定的损伤,手术不当或多次手术,易引起生殖器官粘连,导致供体不孕.
2.4.4.2 非手术法
是在胚胎进入子宫角后,用冲胚器具通过子宫角冲洗采集胚胎的方法.可以不做手术而采胚,不仅减小了手术对供体的危害,节约时间,降低成本,而且可以重复采胚.本法主要用于牛,马等大家畜.
回收方法: 先要去除子宫颈黏液,术者一手在直肠内握住子宫颈,一手持子宫颈黏液去除器插入子宫颈,由助手抽吸除去子宫颈黏液.如插入困难,可用子宫
颈扩张棒扩张子宫颈,除去子宫颈黏液后,送入两路或三路冲胚管.冲胚管前端插入子宫角前1/3后，给气囊充气。通过冲胚管的进液管向子宫内注入冲胚液.当液体注入使子宫角膨大到相当于妊娠40～60d时，一般20～40ml，如使用三路冲胚管，可打开除夜管，并按摩子宫，时胚胎从子宫皱壁中游离出来，随液体流出，收集在量筒活集卵胚等容器内。反复冲洗，每侧用液300～500ml。
冲洗完毕，向子宫内注入青霉素100万IU，链霉素1.0g。回收的冲胚液，在室温下静置30min，用吸管除去上部液体，将下部回收液放入大检卵杯活平皿中检出胚胎，也可用集卵杯过滤冲胚液，剩下适量用于检胚。
2.5 胚胎检查
2.5.1 胚胎检查的定义
胚检是从回收液中，将受精卵活胚胎检出，并进行必要的净化处理，同时对检得的胚胎进行形态学鉴定，确定其品质，把符合移植的胚胎暂时保存于新鲜培养基中，准备移植或保存。
2.5.2 胚胎的发育
受精后，卵细胞是按2，4，8…….细胞顺序相继分裂，到16细胞为止，可通过显微镜观察来计算分裂球的数目。16细胞以后，分裂球难以计算，形成的细胞团呈桑椹状，故称为桑椹胚。桑椹胚进一步发育，在细胞团中出现小腔，形成囊胚状，这时的胚胎叫囊胚。囊胚逐渐扩张其腔，不久从透明带中脱出（即孵化）。
正常的胚胎透明带应是圆形，有弹性，厚度随着胚胎的发育而变化，胚胎细胞发育均匀一致，轮廓清晰规则。凡出现边缘不整齐，细胞突出，色暗及有空泡和游离分裂球的为异常胚胎。
2.5.3 胚胎质量的形态学评级与分级
超排处理后，卵巢内的卵泡并非同时排卵，加之超排处理使生殖道的内分泌环境发生改变，回收到的胚胎发育程度有很大的变化。这就需要对胚胎进行形态学鉴定，选出形态比较正常的胚胎进行移植或保存。有些形态特征较差或发育迟缓的胚胎移植后也有可能发育，但发育延迟2天以上者，往往难以存活。
胚胎质量的形态评价可在40～200倍的显微镜下观察，评价的主要内容有：1透明带的形态和完整性。2胚胎的发育阶段与胚龄是否一致。3胚胎的形态与匀称性，胚内细胞大小的变化。4细胞质的结构及颜色，胚内是否出现空泡，细胞碎片，有无游离细胞
根据胚胎的形态特征，可将胚胎分为三个等级：
?A级：为优良胚胎，齐形态典型，卵裂球轮廓清晰，紧密充实，细胞质致密，色调和分布均一。
?B级：为普通胚胎，与A级胚胎相比，稍有变形，但卵裂球的轮廓清晰，细胞质较致密，分布均匀，变形细胞和空泡不超过30％。
?C级：为不良胚胎，其形态有明显变异，卵裂球轮廓稍有不清晰或部分不清晰，大小不一，细胞质不致密，分布不均匀，色调发暗，突出的细胞，空泡和变形的细胞占30％～50％。
2.6 胚胎的移植
2.6.1 胚胎移植的定义
胚胎的移植就是把胚胎在放入受体的生殖道的适当部位，使其继续发育为胎儿，是整个胚胎移植技术的关键一环。
2.6.2 胚胎移植的方法
2.6.2.1 常规手术移植
对受体进行腹部手术，取出子宫和输卵管，风巨胚胎发育情况，将胚胎移入输卵管或子宫角，适用于羊、猪、兔等中小动物。
移胚管有玻璃细管、塑料管带塑料套管的针管等，接1ml注射液，吸入新鲜DPBS三段与管中，中段含胚胎。输卵管移植时，将移胚管经伞部腹腔孔插入输卵管2～3cm；注入胚胎；子宫角移植时，在黄体侧子宫角前1/3先用钝针将子宫角开洞，在插入移胚管，确认在子宫角腔内注入胚胎。移植时要避免注入空气，抽出移胚管时要慢，防止将胚胎带出。对移植情况进行记录。
2.6.2.2 简易手术移植
郭志勤（1998）把我国船头猪的小挑去势技术用于绵羊、山羊的胚胎移植上，手术时间由常规的20～30min降为1～3min，粘连率降至5％左右，且减少感染，不易出血。用猪的小挑手术刀，在麻醉后受体羊大腿内侧鼠蹊部（无毛处），经消毒后，将皮肤向腹部拉紧，用手术刀在靠近盆腔处下刀，开约1.2～1.5cm可通入腹腔的道刀口，插入食指，指到子宫后在插入刀柄，用食指和刀柄夹出子宫角，进行移植。术后还纳子宫角，松开皮肤，使腹腔的切口由复原皮肤错开覆盖，刀口皮肤消毒即可。
2.6.2.3 腹腔镜监控移植
利用腹腔镜和配套的器械在不对受体进行常规手术的情况下将胚胎移植到子宫角，适用于羊、猪等动物。以羊为例说明操作方法。在乳房前6cm处的中线两侧各2cm处分别做两个小切口，插入腹腔镜头和固定钳。在腹腔镜监视下，进行黄体数和质量评价，用固定钳固定宫管结合部。再从乳房前6cm处的中线上插入一套长7cm、内径7mm的套管针，伸入18号长针刺入子宫角。推动注射器，注入胚胎。每次移植仅需5～8min，比常规手术移植快1倍，受胎率40.1％～86％。
2.6.2.4 非手术法
用易胚器械通过子宫颈将胚胎移植于子宫角，本法常用于牛、马等大动物，猪、羊也有类似方法，但不常用。
移植器械：目前多采用专用不锈钢活塑套移植器，一般由外套、移植管及内芯组成，用前消毒。也可用凯苏输精枪。
移植操作：似牛的人工受精。用直肠把握法将移胚器通过子宫颈，送至黄体侧子宫角前1/3处（大弯或大弯深处）推入胚胎，缓慢抽回移胚器。操作过程应轻巧，不可损伤生殖道。如果操作过程中生殖道出血，将会降低受胎率。
移植后，要对具体移植情况进行记录。
2.7 供、受体的术后管理
?对术后的供、受体要注意护理和饲养管理，保证其健康。同时要注意观察，确定其状态，并做好记录。
?对于供体，要观察其健康状况，再预定时间是否发情，如果正常发情，可以配种。
?对于受体，要观察其健康状况，是否返情，并在一定时间后要进行妊娠诊断，便于妊娠受体加强饲料管理。诊断方法有直肠检查法和B超诊断法等。
3 胚胎移植技术的应用
3.1 胚胎的国际交流
以胚胎代替活体动物进行种质资源交流，不仅可大大降低运输成本，而且可减少疾病的传播。实验证明，牛胚胎只要保持透明带完好，移植前在做适当清洗，其传播疾病的可能性比精液或动物活体都小的多（Sreenan 1989），而且，在国内外已进行的数以万计的胚胎移植，均未爆发传染病。
3.2 优良种畜的扩群
通过胚胎移植技术使优良母畜能较早地获得较多地后代，扩大其在群体遗传改良中的作用，这对于低繁殖力地畜种和一些本身遗传素质十分优秀，却因某些繁殖障碍而不能妊娠地母畜具有重要意义。
3.3 建立胚胎库，保护动物种质资源
将胚胎移植技术和胚胎超低温冷冻贮存技术结合起来，建立胚胎库，不仅为胚胎交流提供方便，而且在保护动物遗传资源，提高家畜生产性能，挽救濒临灭绝地野生动物方面也越来越发挥重要作用。这对于保持动物地多样性具有重要意义。
3.4 其他和科学研究和技术应用地手段
在家畜繁殖学研究中，胚胎移植技术可用于繁殖生理学、生殖内分泌学和遗传学地研究。如利用胚胎移植试验已证实，是奶牛排卵数而不是子宫容纳量限制双胎或多胎率。
胚胎移植技术是其他胚胎工程技术如体外受精、克隆、转基因、胚胎嵌合、胚胎性别鉴定与性别控制等地基础，为其研究合应用提供手段。
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冷冻干燥技术原理解析
第一节冷冻干燥技术原理 干燥是保持物质不致腐败变质的方法之一。干燥的方法有许多，如晒干、煮干、烘干、喷雾干燥和真空干燥等。但这些干燥方法都是在0℃以上或更高的温度下进行。干燥所得的产品，一般是体积缩小、质地变硬，有些物质发生了氧化，一些易挥发的成分大部分会损失掉，有些热敏性的物质，如蛋白质、维生素会发生变性。微生物会失去生物活力，干燥后的物质不易在水中溶解等。因此干燥后的产品与干燥前相比在性状上有很大的差别。而冷冻干燥法不同于以上的干燥方法，产品的干燥基本上在0℃以下的温度进行，即在产品冻结的状态下进行，直到后期，为了进一步降低干燥产品的残余水份含量，才让产品升至0℃以上的温度，但一般不超过40℃。 冷冻干燥就是把含有大量水分物质，预先进行降温冻结成固体，然后在真空的条件下使水蒸汽直接升华出来。而物质本身剩留在冻结时的冰架子中，因此它干燥后体积不变，疏松多孔。在升华时冻结产品内的冰或其它溶剂要吸收热量。引起产品本身温度的下降而减慢升华速度，为了增加升华速度，缩短干燥时间，必须要对产品进行适当加热。整个干燥是在较低的温度下进行的。 冷冻干燥有下列优点： ⑴冷冻干燥在低温下进行，因此对于许多热敏性的物质特别适用。如蛋白质、微生物之类不会发生变性或失去生物活力。因此在医药上得到广泛地应用。 ⑵在低温下干燥时，物质中的一些挥发性成分损失很小，适合一些化学产品、药品和食品干燥。 ⑶在冷冻干燥过程中，微生物的生长和酶的作用无法进行，因此能保持原来的性状。 ⑷由于在冻结的状态下进行干燥，因此体积几乎不变，保持了原来的结构，不会发生浓缩现象。 ⑸干燥后的物质疏松多孔，呈海绵状，加水后溶解迅速而完全，几乎立即恢复原来的性状。 ⑹由于干燥在真空下进行，氧气极少，因此一些易氧化的物质得到了保护。 ⑺干燥能排除95-99％以上的水分，使干燥后产品能长期保存而不致变质。
奶牛胚胎移植技术
奶牛胚胎移植技术 上海交通大学农业与生物学院 朱淑文 一、概述 牛胚胎移植的商业化应用开始于七十年代初期。当时，必须通过手术方法才能采集胚胎，由于奶牛的乳房影响手术的顺利进行，手术后往往还会影响奶牛以后的繁殖性能，因此，胚胎移植主要在肉牛中应用。1976年，一些研究小组报道了应用导管高效采集胚胎的非手术方法。随后，胚胎移植在奶牛中的应用得到了飞速发展。1974年，第一头胚胎移植登记荷斯坦奶牛在美国出生。七十年代后期，胚胎移植（ET）登记荷斯坦奶牛的数量每年以100%以上的速度增长，1980年达到8298头年。进入80年代后，随着非手术采胚法和移植技术的改进以及胚胎冷冻保存技术的发展，每年（ET）登记奶牛的数量在稳步增长，至1990年达到18727头年。截止1991年，美国登记的胚胎移植荷斯坦奶牛总数量已达到142598头。目前，44%的荷斯坦优秀种公牛是由胚胎移植培育的。九十年代以来，胚胎移植在发达国家中的增长速度有所减缓，但是技术含量越来越高，例如体外受精胚胎生产技术、转基因技术以及克隆技术的应用和研究得到加强。近几年来，胚胎移植在亚洲和南美一些国家中增长速度很快。从整个世界范围来看，牛胚胎移植的增长速度仍然很快。 二、胚胎移植技术 （一）体内受精胚的移植 1 超数排卵 在常规胚胎移植技术中，获得大量可用胚胎的主要途径是超数排卵（简称超排），因此，高效率的超排技术是胚胎移植技术能否在生产中推广应用的关键。应用于奶牛的超排激素主要有PMSG（孕马血清促性腺激素）和FSH（促卵胞素）。PMSG尽管只需一次性注射，省时省力，但是半衰期过长，可以导致卵巢的过度刺激以及对排卵、受精和随后的胚胎发育产生不利的影响，因此现在一般已不采用PMSG对奶牛进行超排处理。目前广泛应用于母牛的超排激素是FSH。用于奶牛超排的商品FSH均是从屠宰家畜的脑垂体中提取的，脑垂体不但能够分泌
胚胎移植操作规程
1 1 范围 本标准规定了绵羊的胚胎生产和移植的供体羊的选择和饲养管理、供体羊的超数排卵及人工授精、手术冲卵技术及胚胎质量鉴定、冻胚的解冻、受体羊的选择及饲养管理、胚胎手术移植技术和妊娠受体羊的饲养管理技术。 本标准适用于秦皇岛地区绵羊的胚胎生产和移植。 2 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 DB 1303/T 098-2000 羊的人工授精技术操作规程 3 3 供体羊的选择和饲养管理 3.1 3.1 供体羊的选择 a）a）体羊品种优良、生产性能好； b）b）传性稳定、谱系清楚； c）c）体质健壮。繁殖机能正常，无遗传和传染性疾病。年龄在2岁至7岁为宜； d）d）具有畜牧部门颁发的种畜禽鉴定合格证书。 3.2 3.2 供体羊的饲养管理 3.2.1 3.2.1 保持饲养环境稳定，饲养环境卫生、干燥、棚舍温度适宜。避免应激反应。 3.2.2 3.2.2 制定合理的供体羊日粮配方，保证正常的营养平衡。 3.2.3 3.2.3 满足供体羊清洁饮水的需要。 4 4 供体羊的超数排卵及人工授精 4.1 4.1 超数排卵 4.1.1 4.1.1 超数排卵的季节和发情周期：绵羊最适超数排卵季节为9月下旬至11月上旬。绵羊的发情周期在15d—17.5d。供体母羊在超数排卵前需观察1—2个完整的发情周期。 4.1.2 4.1.2 用于超数排卵的激素选择 FSH—P（垂体促滤泡素） LH—P（垂体促黄体生成素） ICI80996（氯前列烯醇） 4.1.3 4.1.3 激素剂量（注射总量/只） FSH—P剂量（肌注）：120IU—160IU LH—P剂量：根据FSH的注射剂量，肌注100—120IU。 ICI80996：肌注0.08mg/次，注射两次/d。 4.1.4 4.1.4 超数排卵方法 FSH—P 3天注射法 以母羊发情之日作为发情周期的0d，在母羊发情周期的第13d或13.5d（周期大于17.5d的羊在第13.5d）开始，每天早：（6：00—7：00）和晚（18：00—19：00）各注射1次FSH，连续3天，递减注射。 FSH、LH用生理盐水稀释。 在第5、6次注射FSH—P时，同时肌肉注射ICI80996。 确定供体羊发情后立即注射LH。如果FSH—P未注射完供体羊已发情，停止注射FSH—P，立即注射LH。
羊的胚胎移植.doc
羊的胚胎移植 一、胚胎移植概述 二、胚胎移植原理 三、胚胎移植技术程序 一、胚胎移植概述 1.胚胎移植的发展历史 2.胚胎生物技术的研究意义及其在畜牧生产中的应用 3.胚胎移植目前存在的问题 4.影响胚胎移植的主要因素 5.胚胎移植的经济效益 6.胚胎移植的发展前景 1.1国外胚胎移植发展史 George是世界上第一个提出动物胚胎移植的人。1890年4月，Walter Heape用兔作为实验动物，成功地获得了世界上第一个动物胚胎移植后代。Heape兔胚胎移植的成功，极大的影响着繁殖生物学和畜牧业的发展。1900年，Heape的杰出接班人FHA Marshall和John Hammond总结了他的主要工作内容，提出了哺乳动物性季节的概念，也就是现在所说的发情周期。1911-1913年，奥地利维也纳的Biedl 等进行了兔的胚胎移植实验，但由于战争，直到1922年才报道了其研究结果。虽然他们做了70多个实验，但由于把输卵管的胚胎移植到子宫，结果只有一只受体兔妊娠，这充分证明了胚胎和受体的同步性是非常重要的。1932年和1933年，Warwick,Berry和Horlache第
一次把胚胎移植技术用在绵羊和山羊上，Dr. Berry也因此成为了第一个国际胚胎移植协会先驱奖的获得者。1948年，张明觉用超数排卵技术从2只母兔获得88枚受精卵，给7只受体母兔移植，成功地产出76只小兔，这次试验的成功具有划时代的意义。1950年12月19日，33岁的美国人Elwyn Willed成功地获得了世界上第一头胚胎移植牛犊。60年代初，全部采用的是手术回收胚胎和移植，1964年Mutter 等和1965年Sugie相继报道了非手术移植胚胎获得成功。70年代中期，牛的非手术移植完全取代了手术移植. 1974年，成立了国际胚胎移植协会(IETS )，随后相继成立了美国胚胎移植协会、加拿大胚胎移植协会、欧洲胚胎移植协会 1.2 国内胚胎移植发展史 我国的胚胎移植研究起步较晚，于20世纪70年代初才开始。1973年首先在家兔上获得成功。1974年，中科院遗传所在绵羊胚胎移植上取得成功。1976年郭志勤、谭丽玲等在家兔胚胎和绵羊胚胎低温(100C)保持1天和10天后移植成功。手术法和非手术法牛胚胎移植在1978年和1980年也相继成功。1980年中国农业科学院畜牧所在绵羊胚胎超低温保存后移植产羔。20世纪80年代，胚胎移植进入了实验阶段，掀起了全国的研究高潮，20几个省近30个单位相继开展了胚胎移植研究工作。20世纪90年代初期，我国的胚胎移植工作逐渐进入了生产应用初始阶段。生产应用比较好的地区主要是内蒙古、新疆和黑龙江、北京 1.3 羊的胚胎移植发展历史
新鲜胚胎移植和冷冻胚胎移植的差别
新鲜胚胎移植和冷冻胚胎移植的差别 患有不孕症的夫妻在成为父母的过程中，有很多决定要做。哪个不孕不育医院合适治疗？你愿意接受什么治疗？在美国试管婴儿过程中移植新鲜胚胎还是冷冻胚胎哪个更好？幸运的是，您的治疗团队可以帮助指导您做出适合您的选择，HRC美中桥这篇文章可以让您深入了解新鲜与冷冻胚胎移植的利弊。 在女性刚开始的第一个美国试管婴儿周期中，她首先服用药物刺激卵巢产生额外的卵子。通过手术取出卵子后，让它们受精。得到胚胎后让胚胎在特殊的培养箱中生长，直到它们准备好移植到子宫中。在大多数情况下，选择1-2个胚胎进行移植，并将剩余的胚胎冷冻。几十年来，新鲜胚胎移植环节是黄金标准......直到最近几年，解冻和冷冻保存方法的快速进步改善了冷冻胚胎移植的结果。 最初胚胎都是采用缓慢冷冻，导致细胞内冰的形成;不幸的是，冰经常损坏胚胎。许多受损的胚胎无法存活，导致剩余被移植的胚胎都是质量不佳的胚胎。然而，在过去几年中，由于玻璃化冷冻技术的引入，我们已经看到冷冻胚胎技术的急剧增涨。玻璃化是一种超快速冷冻方法，它使胚胎冻结的速度比以前的冷冻方法快约60,000倍。这个过程不会再形成冰，使得移植成功的胚胎植入率大幅提升，怀孕成功率接近新鲜胚胎。 我们现在看到的冷冻胚胎移植成功率明显高于几年前的另一个原因是冷冻的胚胎已经和以前不一样。已经表明冷冻胚泡（第5-6天的胚胎）阶段比冷冻早期的胚胎（第2-3天）具有更好的结果。在许多情况下，未成功发育到胚泡阶段的胚胎都是染色体异常的胚胎，这些胚胎不会发育成健康的婴儿。使用胚泡期胚胎进行冷冻胚胎移植的另一个好处是，胚胎移植数量减少- 因为我们能够确定这是最可行的胚胎。这意味着我们可以最大限度地减少多胎妊娠的几率，以及减小对母亲和婴儿的妊娠风险。 研究表明使用冷冻胚胎移植的成功率大约和新鲜胚胎移植的成功率差不多。新鲜胚胎移植具有稍高的成功率是因为通常在第一次移植肯定选择最佳胚胎。但是，在某些情况下冷冻胚胎移植也具有吸引力： 因为您在新的周期中接受了卵巢刺激和取卵，所以您不必再次进行卵巢刺激。让身体做好冷冻胚胎移植准备所需的药物具有较少的潜在副作用，并减少对您身体的影响。 许多患者报告说，冷冻胚胎移植环节没有像新鲜胚胎环节那样紧张，因为他们已经知道它们具有可存活的胚胎。 与新鲜移植相比，时间上安排和规划冷冻胚胎移植更容易。
胚胎移植技术应用
《动物遗传育种与繁殖专论》 课程作业 胚胎移植技术在畜牧业中的应用 姓名： 学号：
胚胎移植技术在畜牧业中的应用 畜牧业发展水平占农业的比重是衡量一个国家和地区现代化水平的重要标志，近年来，畜牧业已成为我国农业发展的重心．胚胎移植技术也称受精卵移植技术，就是将良种母畜配种后的早期胚胎取出，移植到同种的生理状态相同的母畜体内，使之继续发育成为新个体，所以该项技术又被称为“借腹怀胎”。胚胎工程技术是胚胎移植技术发展到一定程度而出现的名词, 是由发育工程演变而来的。由于胚胎移植技术可最大限度的发挥优秀母畜在品种改良和育种中的作用，同时它又是体外受精、转基因、体细胞核移植等胚胎工程的基础性环节，因此，胚胎移植技术被誉为家畜繁殖技术的第二次革命。 胚胎工程技术根据其发展现状包括以下9类:胚胎移植技术;胚胎冷冻保存技术;胚胎分割技术;试管动物技术(体外受精技术);性别控制技术,即XY精子分离和胚胎性别鉴定技术;转基因动物技术;动物克隆技术(细胞核移植技术);胚胎干细胞技术;胚胎嵌合技术。目前, 前5种技术已在生产实践中得到不同程度的应用,但应用较多的是前2种技术, 其他几种技术由于设备投入成本较大、成功率较低, 尚处于实验室向生产转化阶段。 胚胎移植技术可使引进的种畜在较短时间内快速纯种繁殖，成为大群体，满足牛羊业迅猛发展的需要。同时，牛、羊业的快速发展和这种市场化发展的需求，使胚胎移植技术受到更多研究者和生产者的
高度重视，进而促进了胚胎移植技术快速发展和商业化。20世纪90年代后期，胚胎移植技术在畜牧生产中得到应用推广，同时胚胎移植技术又解决了畜牧业发展中的一些难点问题。 胚胎移植技术是继人工授精之后发展起来的繁殖高新技术, 目前已成为扩大优秀家畜遗传资源的主要手段, 有的称作MOET技术( 超数排卵与胚胎移植技术)。作为家畜育种的重要手段之一, 自20 世纪50年代初第一头胚胎移植牛在美国诞生以来, 胚胎移植技术飞速发展。据不完全统计, 全世界目前年产胚胎移植牛超过35万头, 美国、法国等发达国家每年参加后裔测定的青年公牛的80%来自胚胎移植所产的后代。20世纪80年代后期, 我国在生产中开始应用牛、羊胚胎移植技术, 近几年该技术在全国得到迅速发展。本实验室1990年奶牛新鲜胚移植妊娠率达62.2%, 达76%。在6省区规模化生产中, 绵羊和山羊的移植妊娠率在60%左右, 达76.8%。根据国际胚胎协会的统计, 20多年来,进行胚胎移植的动物数量和种类每年都在增加, 胚胎移植已经成为畜牧业中最活跃的产业。 胚胎移植技术在畜牧业发展中的作用主要体现在促进家畜的遗传改良，充分发挥优良母畜的繁殖潜力，提高繁殖效率．优良后代的增加，既取决于种公畜，也有赖于优良母畜。尤其是生产性能取决于父母双方，如果说人工授精技术的出现使公畜的繁殖潜力得到最大限度地发挥的话，那么胚移技术的出现可以使母畜的繁殖潜力得以充分发挥，从而有效促进家畜的遗传改良。更为重要的是，如果超数排卵时利用优良公畜冻精配种优良母畜(供体)，然后利用采出的胚胎进行
冷冻胚胎移植技术原理
如对您有帮助，可购买打赏，谢谢 冷冻胚胎移植技术原理 导语：现在治疗疾病技术比较多，在对一些特殊技术选择前，需要对它的各方面进行认识，这样在使用的时候，才会知道它的作用都有什么呢，对身体是不 现在治疗疾病技术比较多，在对一些特殊技术选择前，需要对它的各方面进行认识，这样在使用的时候，才会知道它的作用都有什么呢，对身体是不是有损害，也都是能够清楚的知道，冷冻胚胎移植是比较常见的，对冷冻胚胎移植技术原理是什么呢，很多人都不是很清楚。 冷冻胚胎移植技术原理： 冷冻胚胎是保存生育功能的唯一成熟方法。冷冻胚胎的技术是将通过试管培育技术得到的胚胎，存置于零下196℃的液氮环境中，得到长时间保存。如果这个周期治疗失败，可以在以后的自然周期中解冻这些胚胎并进行移植。 将胚胎和冷冻液装入冷冻管中，经过慢速(第2-3天的胚胎)和快速(第5-6天的囊胚)两种降温方式使胚胎能静止下来并可在196度的液氮中保存的一种方法。若有剩余的质量较好的胚胎，可以冷冻保存，待以后自然周期或人工周期解冻后植入子宫腔内，将增加受孕的机会。 可用于一个超排卵周期得到的胚胎数量多，质量好，不能一次全部移植，可将多余的冷冻胚胎保存，以及发生严重卵巢过度刺激综合证的患者，不宜在治疗周期移植胚胎者，可将冷冻胚胎，待以后的自然周期或人工周期进行胚胎复苏移植。冷冻胚胎复苏临床妊娠率为48.28% ，囊胚冷冻复苏临床妊娠率为63.48%。 在对冷冻胚胎移植技术原理认识后，选择冷冻胚胎移植的时候，是可以放心进行，它的成功率都是比较高，对一些难怀孕的夫妻，都是可以选择的，不过进行这样技术选择的时候，都是要进行身体各方面 生活中的小知识分享，对您有帮助可购买打赏
肉种羊胚胎移植扩繁养殖基地建设项目可行性研究报告
2000只肉用种羊胚胎移植扩繁养殖基地扩建可行性研究报告 此文档word版本下载后可任意编辑修改
目录 第一章总论 (3) 第二章项目建设的意义及必要性 (11) 第三章项目选址及建设条件 (15) 第四章建设方案 (18) 第五章环境保护及节能减排措施 (24) 第六章项目投资估算与资金来源 (26) 第七章效益分析 (28)
第一章总论 1.1 项目单位基本情况 1.1.1 概况 项目实施主体：某某市某某生物工程有限责任公司 项目服务对象：全市及周边旗县的农牧民 发展历程：某某生物工程有限责任公司，始建于2003年，公司占地16亩，建筑面积2000㎡，饲草料基地200亩。公司设董事会、理事会、监事会，下设技术服务部，经营服务部，综合管理部，是某某市第一家畜牧业产业化民营企业。内设人工采精、授精，胚胎移植、兽医防疫等多功能配套设施。公司现有员工50人，高级职称2人，中级职称4人；其中：经济师、会计师各1人。同年申请办理了相关手续证书。是我区仅有的几个手续完备，技术专业，较具规模的良种羊扩繁基地之一。原自治区党委书记储波、原政府主席杨晶，盟市各级领导曾多次到我公司视察、调研、指导工作。对我公司所取得的成绩给予充分的肯定。 公司初创时，聘请国家级胚胎移植专家张立博士为技术总顾问，同内蒙古家畜改良站、内蒙古大学、内蒙古农业大学等院校、研究机构建立了稳定的技术合作关系。引进了“多赛特、特克赛尔、萨福克”种公羊4只，种母羊16只，受体羊100只。利用“胚胎移植技术”实现良种羊的迅速扩繁。目前，公司拥有种公羊120只，种母羊508只，受体羊1000多只。几年来，累计扩繁种公羊800多只。全部投放到某某市各乡镇和周边旗县，开创了农民“以养促种，以
一次性使用胚胎移植导管产品技术要求weichuang
一次性使用胚胎移植导管 适用范围：与注射器配合，经阴道向子宫内转移经过体外受精(IVF)的胚胎或受精卵用。 1.1 产品型号 表1一次性使用胚胎移植导管尺寸及公差
1.2 划分说明 XXXXX –d –L XXXXX：表示胚胎移植导管（PTYZ/PTYZ1） d：一次性使用胚胎移植导管外径（F）（1F=0.333mm） L：一次性使用胚胎移植导管长度（cm） 1.3 结构组成 一次性使用胚胎移植导管结构如图1所示。PTYZ型由引导导管、移植管和可塑型的不锈钢内芯组成；PTYZ1型由引导导管、移植管和标记环组成。 引导导管管材：PTYZ-d-L为：医用聚氨酯，针座为ABS；PTYZ1-d-L为：聚醚-聚酰胺共聚物，针座为ABS，标记环：为医用硅胶。 移植管：由304不锈钢管、聚氨酯管和ABS针座组成。 可塑型的不锈钢内芯：由304不锈钢丝和ABS手柄组成。 针座和导管的连接为机械螺旋拧压方法。 PTYZ-3-23/ PTYZ-5-23
PTYZ1-3-23/ PTYZ1-5-23 图1一次性使用胚胎移植导管示意图 2.1 尺寸 一次性使用胚胎移植导管尺寸及公差应符合表1的规定。 2.2 外观 外表面应清洁无杂质，不应有加工缺陷和表面缺陷，末端圆滑、无毛刺。 2.3 物理性能 2.3.1 断裂力 管材的断裂力：直径＜1.15mm的管材最小断裂力为5N，≥1.15mm ~ ＜1.85mm 的管材最小断裂力为10N，≥1.85mm管材最小断裂力为15N。 2.3.2 标记线应清晰可见。 2.3.3 接头 2.3.3.1 移植管的管座头端与引导导管的接头应相匹配，连接后无明显摆动。 2.3.3.2 移植管的接头应符合GB/T 1962.2-2001的要求。 2.3.4 无泄漏 移植管的针座和导管连接部分应无泄漏现象。 2.3.5 耐腐蚀性：一次性使用胚胎移植导管中的不锈钢管和不锈钢内芯不应有腐蚀痕迹。 2.4 化学性能：（除金属部件外）
真空冷冻干燥技术讲解样本
真空冷冻干燥技术讲解 上海东富龙科技有限公司张耀平 第一节冷冻干燥技术原理 干燥是保持物质不致腐败变质的方法之一。干燥的方法有许多, 如晒干、煮干、烘干、喷雾干燥和真空干燥等。但这些干燥方法都是在0℃以上或更高的温度下进行。干燥所得的产品, 一般是体积缩小、质地变硬, 有些物质发生了氧化, 一些易挥发的成分大部分会损失掉, 有些热敏性的物质, 如蛋白质、维生素会发生变性。微生物会失去生物活力, 干燥后的物质不易在水中溶解等。因此干燥后的产品与干燥前相比在性状上有很大的差别。而冷冻干燥法不同于以上的干燥方法, 产品的干燥基本上在0℃以下的温度进行, 即在产品冻结的状态 下进行, 直到后期, 为了进一步降低干燥产品的残余水份含量, 才让产品升至0℃以上的温度, 但一般不超过40℃。 冷冻干燥就是把含有大量水分物质, 预先进行降温冻结成固体, 然后在真 空的条件下使水蒸汽直接升华出来。而物质本身剩留在冻结时的冰架子中, 因此它干燥后体积不变, 疏松多孔。在升华时冻结产品内的冰或其它溶剂要吸收热量。引起产品本身温度的下降而减慢升华速度, 为了增加升华速度, 缩短干燥时间, 必须要对产品进行适当加热。整个干燥是在较低的温度下进行的。 冷冻干燥有下列优点: ⑴冷冻干燥在低温下进行, 因此对于许多热敏性的物质特别适用。如蛋白质、微生物之类不会发生变性或失去生物活力。因此在医药上得到广泛地应用。 ⑵在低温下干燥时, 物质中的一些挥发性成分损失很小, 适合一些化学产品、药品和食品干燥。 ⑶在冷冻干燥过程中, 微生物的生长和酶的作用无法进行, 因此能保持原 来的性状。 ⑷由于在冻结的状态下进行干燥, 因此体积几乎不变, 保持了原来的结构, 不会发生浓缩现象。
冷冻胚胎的法律性质及权利处置研究
冷冻胚胎的法律性质及权利归属研究 摘要：为了保障不能自然生育子女人群的生育权，诞生了人工辅助生殖技术，而冷冻胚胎技术就是在体外受精——冷冻胚胎移植技术应用过程中产生的，实践中出现了涉及冷冻胚胎的法律问题，包括冷冻胚胎的法律性质、权利归属及权利行使规则。首先，在我国没有明确界定前提下，厘清冷冻胚胎的法律性质是解决问题的前提。其次，在明确冷冻胚胎的法律性质后，需要解决夫妻双方对冷冻胚胎权利归属规则。本文就冷冻胚胎的法律性质、冷冻胚胎的权利归属、冷冻胚胎的权利行使规则，结合“无锡冷冻胚胎案”进行探讨，以期对相关立法、司法的完善有所助益。 关键字：冷冻胚胎法律性质权利归属 2014年9月17日，备受关注的中国首例人体冷冻胚胎监管、处置权纠纷案在无锡市中级人民法院二审落槌。“无锡冷冻胚胎案”1判决的问世，其裁判结果以及二审判决书富有人情味的、体现法官智慧的说理都引起法律界人士的高度关注和热议，并引发各界对冷冻胚胎的法律性质、权利归属及权利行使问题的研究。在冷冻胚胎的法律问题中，最核心的问题就是冷冻胚胎的法律性质的界定。 一、冷冻胚胎的法律性质 （一）国外关于冷冻胚胎的法律性质的学说 国外法学界对冷冻胚胎的法律性质界定主要有三种学说，即主体说、客体说、中介说。 1、主体说 1案情简介：作为独生子女的沈某与杨某车祸死亡后，双方父母就死者遗留下的四枚冷冻胚胎的 归属发生争议，诉至法院。2014年5月,法院一审宣判, 依法以冷冻胚胎不能成为继承的标的为由 判决驳回原告的诉讼请求。2014年9月，法院二审宣判，存放于鼓楼医院的4枚冷冻胚胎由双方父 母共同监管和处置。
主体说认为，“人的生命从受精之时开始”。从这一刻起，冷冻胚胎就具有生命，应受到法律保护。该观点还主张，受精卵及早期人类冷冻胚胎不得销毁、抛弃，人们应像对待人那样去尊重其权利。在美国，一些州的立法机关宣布冷冻胚胎为“法律上的拟制人”。并因此赋予冷冻胚胎与新生婴儿一样的法律权利。这些州承认人的生命开始于受孕，因此保证这些冷冻胚胎的安全就是保证未来自然人的利益。所以，在这种保护之下，冷冻胚胎不能被恶意的销毁并严禁将其捐赠给科研机构。美国路易斯安那州1986 年的《人类冷冻胚胎法》第121条规定了人类冷冻胚胎的定义，即指“具有法律授予权利、由一个或多个人体细胞与基因物质构成的试管受精的人类卵子，并于子宫内发育成为胎儿。”第126条还明确宣布冷冻胚胎为“生物学意义上的自然人，其并不是生育的中间媒介也不是医生的财产。”可见，受精的冷冻胚胎即使是极小的细胞团，也是人类的生命，具有法律主体地位。 2、客体说 客体说认为，该说主张冷冻胚胎仅为精子和卵子捐赠者的财产，将其作为民事法律关系中某种权利的客体对待，而不承认其为独立的潜在生命。该说分为财产说和夫妻私人利益说两种观点，财产说认为其属于财产即“物”，在夫妇之间属于共同财产。夫妻私人生活利益说则认为其不是单纯的物，应属于私生活权的客体。“财产说”把冷冻胚胎视为单纯的物，忽视冷冻胚胎的生命属性，由于过于物化，尚无国家立法予以承认，但在判例法国家的司法实践中曾被采用。如在美国，一些州更侧重于保护捐赠者的利益，关于该冷冻胚胎的处理方式，法律赋予捐赠者以完全的自主决定权。佛罗里达州立法承认受精卵的捐赠者对该枚受精卵的处理拥有共同的自治权。对该冷冻胚胎的“控制”权和决定权由捐赠者共同享有，如果一个捐赠者死亡，那么另外一个捐赠者就有完全的决定权。 3、中介说
实习报告：动物胚胎移植技术
动物胚胎移植技术
摘要 胚胎移植又称受精卵移植，是把一头雌性动物的早期胚胎从输卵管或子宫内冲洗出来，移植到另一头雌性动物的输卵管或是子宫内，使之继续发育成新个体的技术。 动物胚胎移植主要是通过对优良供体母畜作同期排卵处理和体内胚胎生产或体外人工授精（IVF）的方法，以大量获得优良的动物胚胎后再将其移植给普通代孕受体母牛进行快速繁殖优良动物的生物技术。胚胎移植技术主要用于快速扩大优秀种公牛和核心母牛的数量。尽管单个胚胎的生产成本较高，但由于种公牛和种母牛较高的经济价值和社会价值，以及利用胚胎移植在育种方面可以获得同胞或同卵双生牛进行后裔测定等优势，因此，该技术在种公牛的选育和优质核心母牛群的培育以及加快育种步伐方面均具有极大的优越性。 本论文将对动物胚胎技术作比较全面的阐述，使大家对动物胚胎技术有一个比较全面的认识。 关键词：供受体超数排卵同期发情胚胎回收胚胎检查胚胎移植
1.1 发情后生殖器官的孕向发育 家畜在发情后生殖器官会发生一系列变化，如：卵巢中功能性黄体的形成，孕酮的分泌和维持，子宫内膜组织的增生和分泌机能的增强，以及其他生理生化的特异现象。这些变化都为胚胎的生存和发育创造了适宜的条件，为妊娠作准备。 配种受孕后的动物其生殖系统朝着妊娠的方向继续发生变化以适应胚胎发育的需要，如黄体的持续存在以及孕酮的分泌和维持，子宫内膜的继续发育。而未受孕的动物其生殖系统会退回到发情前状态。 发情供体和受体发情周期的同期化程度前后不超过一天，否则移植成功率就会降低，甚至移植失败 因此发情后或交配刺激后雌性动物生殖器官的孕向变化是进行胚胎移植的主要生理学基础。 1.2 早期胚胎的游离状态 胚胎在发育的早期有相当一段时间是游离存在于子宫内的，和子宫黏膜没有建立紧密联系，其发育主要靠自身贮存的养分。这样，早期的胚胎容易从生殖道中取出，而且在离体情况下，可短期培养，易存活。 早期胚胎处于游离状态是能够进行胚胎移植技术的基础 1.3 子宫对早期胚胎的免疫耐受性 1.4 胚胎遗传物质的稳定性 在同一物种之内进行胚胎移植不会产生排斥现象;同时，受体对胚胎不产生遗传上的影响，不会改变新个体的遗传特性，也不会减弱起优良性状在出生后的表现程度。
胚胎移植技术的现状与展望
胚胎移植技术的现状与展望摘要：统计与分析了1991-2000年国际胚胎移植状况，结果表明胚胎移植已成为畜牧产业中最活跃的领域之一。胚移比例最大的依然是牛，其他种类的动物胚胎移植，如：绵羊、山羊、猪、马、鹿、美洲驼、羚羊等，也十分活跃。牛的胚胎移植，有几个重要指标分析结果如下：(1)供体牛的品种分布基本相同，肉牛与奶牛所占比例接近，但不同国家之间差别很大；(2)每头供体牛所得可用胚胎数在5-6枚之间；(3)鲜胚移植与冻胚移植的比例基本持平，但近年来冻胚移植的比例稍大于鲜胚移植；(4)通过IVF体外方式生产胚胎数目有所增长，目前每年大约在3-4万枚；(5)妊娠率：鲜胚移植妊娠率在60%以上，冻胚移植妊娠率在50%以上，IVF体外方式生产胚胎妊娠率在40%左右；(6)胚胎移植技术的发展状况在全世界分布不均衡，北美和欧洲胚移技术最成熟；(7)胚胎贸易有所增长。最后，对该技术存在的问题与发展前景提出了探讨和展望。 关键词：胚胎移植；牛；现状；展望 胚胎移植技术是继20世纪六七十年代人工授精之后发展起来的生物技术，是胚胎工程的重要组成技术。胚胎移植最早是1980年在兔子上实验成功的,但直到1977年才开始应用于生产,至今发达国家已经进入商业化应用阶段。在商业化应用上，牛的胚胎移植技术最成熟、占得比例最大。它是将一头良种母畜配种后形成的早期胚胎取出，移植到另一头或几头同种的、生理状态相同的母畜生殖器官的相应部位，使之继续发育成新的个体，也有入人通俗地称之为“借腹怀胎”。在一个繁殖季节里产生比自然状态下多几倍甚至十几倍的优秀后代，极大的提高了优良母畜的利用率和繁殖率。因此，胚胎移植技术在畜牧业生产中发挥着巨大的作用。 1.胚胎移植的历史回顾 1890年Heape在英国剑桥大学首次报道获得兔子胚胎移植成功[1]。20世纪30年代后开始大量研究，1951年willett首次成功地进行了牛的胚胎移植。1974年第一头胚胎移植的何斯坦奶牛在美国出生。1976年，一些研究小组报道了采用导管高效采集胚胎的非手术方法，随后胚胎移植在奶牛中的应用得到飞速发展。由于牛经济价值高，产仔数量少，用胚胎移植技术进行纯种扩群繁殖的效果好，且供受体牛均可反复使用，因此牛的胚胎移植技术已较多应用于实际生产中[2]。我国对牛胚胎移植研究起步较晚，1978牛手术法胚胎移植犊牛降生，1980年非手术法移植成功，1982年冷冻胚胎移植成功[3]。本世纪韧，我国先后开展了“万枚高产奶牛胚胎移植富民工程”项目，“奶业重大关键技术研究与产业化技术集成示范”项目，使我国的胚胎移植技术得以较快发展与推广，并逐步向产业化阶段迈进[4]。根据IETS(国际胚胎移植协会)的统计，1991年全世界移植牛胚胎总数为240 730枚，到2000年全世界移植牛胚胎总数达528 540枚。从1991-2000年，国际胚胎移植总数增长120％。胚胎移植已经发展成为畜牧业中最活跃的领域之一[5]。 2.1991—2000年世界胚胎移植，移植的牛的胚胎总数的统计与分析 1991年全世界移植牛胚胎总数为240730枚，1995年牛胚移总数首次超过40万枚，2000年创造50多万枚的新记录。以ITES提供的胚移妊娠率为参考(按平均60％计)。 全世界在该年有30多万头胚移牛产生。而且IETS的统计数据还不能包括世界上所有的
冷冻干燥技术原理
冷冻干燥技术原理-博医康 干燥是保持物质不致腐败变质的方法之一。干燥的方法有许多，如晒干、煮干、烘干、喷雾干燥和真空干燥等。但这些干燥方法都是在0℃以上或更高的温度下进行。干燥所得的产品，一般是体积缩小、质地变硬，有些物质发生了氧化，一些易挥发的成分大部分会损失掉，有些热敏性的物质，如蛋白质、维生素会发生变性。微生物会失去生物活力，干燥后的物质不易在水中溶解等。因此干燥后的产品与干燥前相比在性状上有很大的差别。而冷冻干燥法不同于以上的干燥方法，产品的干燥基本上在0℃以下的温度进行，即在产品冻结的状态下进行，直到后期，为了进一步降低干燥产品的残余水分含量，才让产品升至0℃以上的温度，但一般不超过40℃。 冷冻干燥就是把含有大量水分物质，预先进行降温冻结成固体，然后在真空的条件下使水蒸汽直接升华出来。而物质本身剩留在冻结时的冰架子中，因此它干燥后体积不变，疏松多孔。在升华时冻结产品内的冰或其它溶剂要吸收热量。引起产品本身温度的下降而减慢升华速度，为了增加升华速度，缩短干燥时间，必须要对产品进行适当加热。整个干燥是在较低的温度下进行的。 冷冻干燥有下列优点： ⑴冷冻干燥在低温下进行，因此对于许多热敏性的物质特别适用。如蛋白质、微生物之类不会发生变性或失去生物活力。因此在医药上得到广泛地应用。 ⑵在低温下干燥时，物质中的一些挥发性成分损失很小，适合一些化学产品、药品和食品干燥。 ⑶在冷冻干燥过程中，微生物的生长和酶的作用无法进行，因此能保持原来的性状。 ⑷由于在冻结的状态下进行干燥，因此体积几乎不变，保持了原来的结构，不会发生浓缩现象。 ⑸干燥后的物质疏松多孔，呈海绵状，加水后溶解迅速而完全，几乎立即恢复原来的性状。 ⑹由于干燥在真空下进行，氧气极少，因此一些易氧化的物质得到了保护。 ⑺干燥能排除95-99％以上的水分，使干燥后产品能长期保存而不致变质。 因此，冷冻干燥目前在医药工业、食品工业、科研和其他部门得到广泛的应用。 附： 博医康具备全球领先的真空冷冻干燥机生产制造工艺，可以为客户提供从实验室冻干研发、中试及工业生产全范围的真空冷冻干燥设备。
胚胎冷冻保存技术
胚胎冷冻保存技术 摘要; 胚胎冷冻保存技术可使胚胎移植不受时间地点的限制，从而达到提高胚胎移植效率的目的。研究和优化胚胎冷冻保存技术对胚胎工程的发展有重要的意义。 关键词：胚胎冷冻保存 为便于长途运输和随时供移植使用，将那些６～７日龄已有２０～３０个细胞的新鲜活胚胎（或分割后的半胚胎、１／４胎）在－１９６℃的超低温下冷冻贮存就是胚胎冷冻保存技术。这是在冷冻精子的技术基础上进一步发展起来的一项新技术。目前用冷冻胚胎移植的成功率约为鲜胚胎的７０％～８０％，胚胎冷冻保存技术可使胚胎移植不受时间地点的限制，从而达到提高胚胎移植效率的目的。 现有的胚胎冷冻保存方法有四种： 一、常规冷冻法 常规冷冻法：也叫慢速冷冻法、逐步降温法。将采集到的胚胎用培养液洗涤后置入有不同冷冻保护剂(甘油或二甲亚枫(DMSO)等)浓度的三种冷冻液中(冷冻液浓度由低到高，最终浓度1．4M)，每种冷冻液中平衡5分钟，然后将胚胎和冷冻液装入细管中封口、标记，放入冷冻仪中进行冷冻。冷冻速率先以1～3~C／分下降至-6～-7℃，在此温度诱发结晶，平衡10分钟，然后，以0．3℃／分的速率降温至-35～_38℃，之后投入液氮中保存。胚胎解冻后，需按胚胎进入冷冻液时的相反浓度，即从高到低浓度脱除冷冻保护剂，每步5分钟，最后置入含20％血清的PBS保护液中洗涤3次，彻底脱除冷冻保护剂。或者将解冻后的胚胎放入0．5M(或1．0M)的蔗糖溶液中平衡10分钟，再用上述PBS液洗涤3次。 二、一步冷冻法 一步冷冻法：也叫一步细管法。该方法是由慢速冷冻法改进而来，细管内的冷冻液和蔗糖液是分开的，因此，在细管内用蔗糖液可一步脱除甘油抗冻剂，从而利于在生产中推广应用。 三、程序冷冻法 程序冷冻法主要采用低浓度冻结保存剂梯度脱水,经程序冷冻仪缓慢降温。主要操作步骤包括:将细胞顺序放入一系列逐渐增加保存剂浓度的溶液中梯度脱水,置入程序冷冻仪快速降温至-6℃植冰(人工诱导冰晶形成),然后程序冷冻仪缓慢降温至-30℃~-80℃后液氮贮存。 程序冷冻法主要使用渗透较慢的低温保护剂，如乙二醇(EG)、丙二醇(PG)、甘油(G)、二甲基亚砜(DMSO)，使冷冻保护剂充分渗透人胚胎细胞内，平衡后，利用程序降温仪缓慢降温，最后投入液氮保存。程序冷冻法采用较低浓度的冷冻保护剂，对胚胎毒性损害小，解冻后存活率较高。但因其操作繁琐，降温速度慢，致使所需时间长，需要特殊的降温装置，在不具备实验条件的场所不能使用此法进行胚胎冷冻。目前国内外均较少使用。 通常在程序化慢冷的液体中，各含有一种细胞渗透性冷冻保护剂和一种非细胞渗透性保护剂，于室温下，在低浓度的冷冻保护剂溶液中预平衡，然后放置在终浓度的冷冻液中。在冷冻仪内于预设的程序下降温标本，经过冷冻保护剂的处理后，胞内渗透压增高，意味着细胞内液冰点下降。由于细胞自身的特性，
小鼠胚胎移植技术方法比较_管彤
第18卷 第1期2001年3月实验动物科学与管理 LABORATORY ANIMAL SCIENCE AND ADMINSTRATION Vol .18 No .1Mar .2001 小鼠胚胎移植技术方法比较 管 彤,王凤山,王 静,王晓军,于国德,杨梦礼 (天津市劳动卫生职业病研究所,天津 300204) 摘要:以近交系小鼠C 57BL 6J 、BDF 1小鼠作为供体胚小鼠,封闭群昆明种小鼠作为代母,对实验小鼠胚胎移植的三种方法,即:对小鼠受精卵(或2个细胞期胚)经由代母输卵管口移植、经由代母输卵管壁移植及对小鼠进行子宫移植(8细胞期胚)的方法了进行实验研究,并对各方法适于使用的动物对象、实验要求、产仔率、优势与不足等做了进一步的探讨,为今后的实验动物与动物实验提供参考依据。关键词:近交系小鼠;输卵管口(壁);移植;子宫移植 中图分类号:S865.13 文献标识码:A 文章编号:1006-6179(2001)01-0029-03 收稿日期:2000-07-07 第一作者简介:管彤(1968-),女,助理研究员,主要从事野生小鼠资源开发及实验小鼠胚胎毒理学研究。 自五十年代以来人类建立了受精卵和早期胚胎的采集技术之后,很快就完成了早期胚向代母体内 输卵管及子宫移植的胚胎移植技术的开发和研究[1] 。小鼠的胚胎移植技术对于实验动物学研究及生命科学研究具有重要价值。人类由小鼠进行发育生物学研究,包括胚胎的发生、发育、突变基因的研究、转基因动物的研究、基因打靶技术及小鼠胚胎冷冻种子库技术等涉及胚胎体外操作的各种研究,均需要进行胚胎移植入代母体内来完成。按照胚胎发 生的阶段不同,移植部位也不同[2] 。1～2个细胞期胚胎进行输卵管口移植,8细胞期至桑椹期胚进行 子宫移植。1992年,日本学者Nakagata [3] 又报道了经由输卵管壁进行输卵管移植的技术,以解决移植中一些代母品系输卵管口较小、较短的问题。 本文主要是将此三种移植方法引入,使之在本实验室成为常规后,将其应用于实验小鼠并进行了方法上的比较,重点比较了方法上的难易程度、产仔率、方法选择的前提因素。 1 材料与方法 1.1 实验动物 实验动物作为参比对照的成年近交系C 57BL 6J 小鼠、B DF 1小鼠(♀C 57BL 6J ×♂DBA 2)和作为代母的昆明种封闭群小鼠。 1.2 试剂 PMSG (pregnant mare serum gonadotropin )、HC G (human chorionic gonadotropin )、胚胎移植用Injection Medium 培养液、M 2培养基等。1.3 假孕代母的准备 1.3.1 昆明种雄性小鼠的结扎 为输卵管移植及子宫移植用代母(昆明种封闭群小鼠)交配用的雄性昆明种小鼠进行输精管结扎手术,以便制备假孕代母。进行输精管结扎手术的雄性昆明种小鼠应提前三周施行手术,术后备用。1.3.2 制备假孕代母 胚胎移植前一日(子宫移植,前三日)将已施行输精管结扎手术术后三周的昆明种雄性小鼠以1∶2与其雌性小鼠进行同笼交配,次日检查阴道栓有无,以阴道栓形成者作为移植用代母。1.4 卵的采集 1.4.1 超排卵 [4] 取出生后8～10周的C 57BL 6J 及B DF 1雌性小鼠进行PMSG 处理(腹腔注射,5IU 只),48h 后进行HC G 超排卵处理,方法、剂量相同,HC G 处理14～17h 后可进行受精卵的采集(子宫移植,为HC G 处理后第三日)。 1.4.2 交配 取已注射PMS 、HCG 后的C 57BL 6J 、B DF 1雌性小鼠与其相应的C 57B L 6J 、BDF 1雌性小鼠进行同笼
冷冻电镜技术
冷冻电镜技术课程学习报告 一、课程所讲基础知识回顾 1、电子显微镜成像技术的发展历史 （1）上世纪50年代的负染技术（分辨率2mm）： 该技术的原理为重金属燃料与H结合，特点为对电子散射强，视野暗，衬度大，易观察到生物材料。但不足之处在于染料颗粒较大，不易进入分子内部。此外，因样品需要脱水处理，会造成结构失真。 （2）上世纪60年代的三维重构技术 三维重构的数学原理为傅里叶变换，其关键性质为：三维函数投影的傅里叶变换等于该三维函数傅里叶变换在垂直于投影方向上的中央截面。因此，通过对待测立体物质的多角度投影信息采集，可以借助数学的桥梁，重构出该物质的三维结构。显然，对待测物质投影采集的角度越多，越精确，重构出的三维图像越接近真实。 在60年代，T4噬菌体的结构通过该方法被成功解析。 （3）上世纪70年代的电子晶体学 即根据电子衍射的花样确定物质的晶体结构。被观测的物体通过物镜形成衍射图样，而这些衍射光束的低散射角部分再通过透镜而形成显微像。该方法相当于对原物体进行两次傅里叶变换，一为将物体转换成衍射谱，二为逆傅里叶变换使衍射谱重构成显微图像。 在70年代，电子晶体学的发展使得第1个膜蛋白结构被成功解析。 （4）上世纪80年代的快速冷冻技术（分辨率达到0.2nm） 主要原理为将样品快速冷冻在玻璃态的水中，样品不需脱水，结构与在溶液中相同，呈天然状态。因此，电镜成像得到的更接近原物质的真实结构，且分辨率高。 2、冷冻电镜技术介绍 （1）关于玻璃态冰： 冰的结构多种多样，包括六角形冰、立方体冰等，其物理状态与冷冻速率有关。若要形成玻璃态（即无定形态）的冰，需要冷冻速率达到每秒钟104摄氏度。此时，冰的结构呈现各向同性，不会因成像角度不同导致图像产生偏差。 （2）操作步骤概要： 冷冻包埋——转移至液氮或液氦中——观测，图像采集——三维重构 （3）图像采集的质量要求： 应保证样品在玻璃态冰中的分布均一，厚度一致切适当，避免污染。此外，特别应注意的是，该方法对电子剂量很敏感，最适为10e/A2，明显超过最适剂量即容易因受到过量电子辐射而破坏物理结构，导致冰迅速汽化，出现气泡，造成图像采集不成功。 因此，必须采用低剂量技术（≤20e/A2），用1k~3k倍的低倍镜寻找，在目标域的临近区聚焦，使记录区域仅在拍摄时（1s左右）受到电子辐射，保证样品不被损坏。 二、课外补充学习：冷冻电镜技术难点的扩展阅读 1、冰晶污染 冰晶污染是冷冻电镜的主要问题和最重要的难点，可发生在冷冻电镜的各个
真空冷冻技术讲解
真空冷冻干燥技术讲解⑴ 上海东富龙科技有限公司张耀平 第一节冷冻干燥技术原理 干燥是保持物质不致腐败变质的方法之一。干燥的方法有许多，如晒干、煮干、烘干、喷雾干燥和真空干燥等。但这些干燥方法都是在0℃以上或更高的温度下进行。干燥所得的产品，一般是体积缩小、质地变硬，有些物质发生了氧化，一些易挥发的成分大部分会损失掉，有些热敏性的物质，如蛋白质、维生素会发生变性。微生物会失去生物活力，干燥后的物质不易在水中溶解等。因此干燥后的产品与干燥前相比在性状上有很大的差别。而冷冻干燥法不同于以上的干燥方法，产品的干燥基本上在0℃以下的温度进行，即在产品冻结的状态下进行，直到后期，为了进一步降低干燥产品的残余水份含量，才让产品升至0℃以上的温度，但一般不超过40℃。 冷冻干燥就是把含有大量水分物质，预先进行降温冻结成固体，然后在真空的条件下使水蒸汽直接升华出来。而物质本身剩留在冻结时的冰架子中，因此它干燥后体积不变，疏松多孔。在升华时冻结产品内的冰或其它溶剂要吸收热量。引起产品本身温度的下降而减慢升华速度，为了增加升华速度，缩短干燥时间，必须要对产品进行适当加热。整个干燥是在较低的温度下进行的。 冷冻干燥有下列优点： ⑴冷冻干燥在低温下进行，因此对于许多热敏性的物质特别适用。如蛋白质、微生物之类不会发生变性或失去生物活力。因此在医药上得到广泛地应用。 ⑵在低温下干燥时，物质中的一些挥发性成分损失很小，适合一些化学产品、药品和食品干燥。 ⑶在冷冻干燥过程中，微生物的生长和酶的作用无法进行，因此能保持原来的性状。 ⑷由于在冻结的状态下进行干燥，因此体积几乎不变，保持了原来的结构，不会发生浓缩现象。 ⑸干燥后的物质疏松多孔，呈海绵状，加水后溶解迅速而完全，几乎立即恢复原来的性状。 ⑹由于干燥在真空下进行，氧气极少，因此一些易氧化的物质得到了保护。 ⑺干燥能排除95-99％以上的水分，使干燥后产品能长期保存而不致变质。 因此，冷冻干燥目前在医药工业、食品工业、科研和其他部门得到广泛的应用。 第二节冻干机的组成和冻干程序 产品的冷冻干燥需要在一定装置中进行，这个装置叫做真空冷冻干燥机或冷冻干燥装置，简称冻干机。