医学检验-微生物-肠道杆菌测试题
第9章 肠道杆菌测试题
一、名词解释
1.Vi 抗原：又称毒力抗原，在新分离的伤寒杆菌和丙型副伤寒杆菌具有此抗原。
2.肥达反应：系由已知的伤寒沙门菌O 、H 抗原和甲、乙、丙副伤寒菌的H 抗原与不同稀释度的病人血清做定量凝集试验。根据抗体滴度高低和早期与恢复期抗体增长情况以辅助诊断伤寒和副伤寒。
3.S-R 变异:是指细菌菌落有光滑型到粗糙型的变异，它是由细菌在人工培养基中多次传代，其脂多糖失去O 特异性侧链或O 侧链与核心多糖粘附，仍保有非特异性核心多糖结构造成。此变异出现时，表示细菌毒力、抗原性等也同时发生变异。
4.不耐热肠毒素（LT ）:是由肠产毒性大肠杆菌（ETEC ）产生的致病物质。对热不稳定，65℃、30分钟可灭活。由A,B 两个亚基组成。 二.填空题
1.肠道杆菌是一群生物学形状相似的有动力或无动力的革兰染色 无芽胞杆菌, 随 排出体外。
2.大多数肠道杆菌是 菌群的成员, 在特定条件下也可引起疾病, 故称为 .
3.肠道杆菌中的多数非致病菌能迅速分解 ,而大多数致病菌与之相反 ,故此项生化反应可作为肠道致病菌与非致病菌的 试验 .
4.肠道杆菌的抗原构造主要是 抗原、 抗原和荚膜(K)抗原 .
5.肠道杆菌H 抗原为鞭毛蛋白 ,不耐热， ℃24h 才被破坏 , min 即被破坏 ,细菌失去鞭毛后 ,H 抗原消失 ,菌体抗原为露 ,称细菌的H-O 变异 .
6.伤寒杆菌死亡后释放的内毒素可使宿主体温 ,血循环中白细胞数 .
7.Vi 抗原与 有关 ,含Vi 抗原的菌株比Vi 抗原 的菌株对小鼠毒力强 .
8.大多数志贺菌不分解乳糖 ,只有 志贺菌呈 乳糖 .
9. 试验在初步鉴别肠道致病菌和非致病菌时有重要意义 . 1.阴性，粪便 2.肠道正常，条件致病菌 3.乳糖，初步鉴定
4.菌体(O),鞭毛（H ）
5.60，30
6.升高，下降
7.毒力，丢失
8.宋内，缓慢发酵
9.乳糖发酵
10.IMViC试验是
指、、
、 .
11．肠道杆菌抗原主要有、和 .
12.大肠杆菌为正常菌群成员 ,但当侵犯组织时可引起化脓性感染 .引起肠内感染的大肠杆菌主要有、、
、 .
13.产毒性大肠杆菌产生的肠毒素有、 .
14.伤寒杆菌免疫以为主 .肠热症后可获得 .
15.疑似肠热症病人做病原体分离培养采取标本时 ,发病1～2周
取 ,2～3周可采
取、
或 .
16.志贺菌属的细菌通常称
为 ,是引起的病原菌 .按生化反应不同分
为、、、
四群 .其致病因素主要
有、 ,某些菌株还可产生毒性很强的 . 17.分离肠道杆菌一般选
用、培养基 . 10.吲哚生成试验、甲基红试验、VP 试验、枸橼酸利用试验。
11.H抗原、O抗原、包膜（K）抗原
12.肠外，ETEC、EPEC、EITC、EHEC
13.不耐热肠毒素、耐热肠毒素
14.细胞免疫、牢固免疫力
15.血、粪便、骨髓或尿
16.痢疾杆菌，痢疾志贺痢疾杆菌、福氏痢疾杆菌、鲍氏痢疾杆菌、宋氏痢疾杆菌，菌毛、内毒素，外毒素。
17.SS琼脂、中国蓝培养基
三.单选题
1.C
2.A
3.A
4.C
5.C
6.A
7.B
8.D
9.D 10.B 11.E 12.D 13.D 14.A 15.B 16.D 17.B 18.C 19.D 20.E 21.D 22.C 23.B 24.E
1.关于肠道杆菌的描述不正确的是
A.所有肠道杆菌都不形成芽胞;
B.肠道杆菌都为Gˉ杆菌;
C.肠道杆菌
中致病菌一般可分解乳糖; D. 肠道杆菌中非致病菌一般可分解乳糖;
E. 肠道杆菌中少数致病菌可迟缓分解乳糖
C
2.肠道杆菌不具有的一种抗原是
A.M抗原;
B.H抗原;
C.O抗原;
D.K抗原;
E.Vi抗原
A
3.伤寒杆菌Vi抗原变异属于
A.毒力变异;
B.耐药性变异;
C.菌落变异;
D.形态排列变异;
E.对
外界环境抵抗力变异
A
4.初步鉴定肠道致病菌与非肠道菌常用的试验是
A.IMViC试验;
B.甘露醇分解试验;
C.乳糖发酵试验;
D.胆汁溶菌
试验; E.葡萄糖发酵试验
C
5.肠出血性大肠杆菌(EHEC)的O血清型是
A.O6;
B.O25;
C.O157;
D.O111;
E.O158
C
6.我国城市水饮用卫生标准是
A.每1000ml水中不得超过3个大肠菌群;
B. 每1000ml水中不得超过10个大肠菌群
C.每100ml水中不得超过5个大肠菌群;
D. 每100ml水中不得超过30个大肠菌群;
E.每500ml水中不得超过3个大肠菌群
A
7.我国卫生标准规定: 瓶装汽水、果汁等饮料每100ml中大肠杆菌不得超过
A.3个;
B.5个;
C.10;
D.50;
E.100
B
8.引起肠道疾病的无动力细菌是
A．沙门菌； B.霍乱弧菌; C.副溶血性弧菌; D.痢疾杆菌; E.肠产毒性大肠杆菌
D
9.志贺菌的抗感染免疫在消化道粘膜表面主要的抗体类型是
A.IgM;
B.IgG;
C.IgD;
D.分泌型IgA;
E.IgE
D
10.可迟缓发酵乳糖的志贺菌
A.福氏志贺菌;
B.宋内志贺菌;
C.鲍氏志贺菌;
D.痢疾志贺菌;
E.B群志贺菌Y变种
B
11.初步将志贺菌从肠道杆菌中鉴别出来的生化反应方法是
A.培养基中加亚碲酸钾；
B.菊糖发酵试验；
C.尿素分解试验；
D.胆汁溶解试验；
E.半固体双糖含铁培养基接种试验
E
12.伤寒杆菌破溃后释出内毒素使
A.体温升高，外周血白细胞升高；
B.体温不变，外周血白细胞升高；
C. 体温不变，外周血白细胞降低；
D. 体温升高，外周血白细胞数下降；
E.体温升高，外周血白细胞不变
D
1.C
2.A
3.A
4.C
5.C
6.A
7.B
8.D
9.D 10.B 11.E 12.D 13.D 14.A 15.B 16.D 17.B 18.C 19.D 20.E 21.D 22.C 23.B 24.E
13.目前筛查伤寒带菌者的方法是检测血清的
A.O抗体;
B.H抗体;
C.K抗体;
D.Vi抗体;
E.O加Vi抗体
D
14.肠热症发热一周内, 检出伤寒沙门菌最高阳性率的方法是
A.血培养;
B.尿培养;
C.便培养;
D.痰培养;
E.胆汁培养
A
15.肥达反应阳性开始于病程的
A.第1周;
B.第2周;
C.第3周;
D.第4周;
E. 第5周
B
16.伤寒病人进行粪便培养致病菌的最好时期是
A.潜伏期末;
B.发病1～4天;
C. 发病5～10天;
D. 发病2～3天;
E. 发病4周之后
D
17.肥达反应有诊断价值的抗体效价, 通常是
A.O凝集价≥1:40, H凝集价≥1:40;
B.O凝集价≥1:80, H凝集价≥1:160;
C.O凝集价≥1:40, H凝集价≥1:160;
D.O凝集价≥1:160, H凝集价≥1:80;
E.O凝集价≥1:80, H凝集价≥1:80
B
18.关于大肠杆菌, 下列描述不正确的是
A.能分解乳糖产酸产气;
B.有鞭毛能运动;
C.所有大肠杆菌均是条件致
病菌;
D.在卫生细菌学中有重要意义;
E.是泌尿道感染常见的病原体
C
19.伤寒杆菌Vi抗体的检查可用于
A.早期诊断;
B.判断预后;
C.检查免疫力;
D.调查带菌者;
E.
以上都不是
D
20.关于伤寒杆菌, 下列叙述错误的是
A.有O ,H ,Vi抗原;
B.主要引起细胞免疫;
C.可用免役血清鉴定菌型;
D.有鞭毛;
E.分解葡萄糖产酸产气
E
21.下列肠道致病菌的特征错误的是
A.革兰阴性杆菌;
B.在SS琼脂上为无色半透明菌落;
C.除少数外均不
分解乳糖;
D.抗原构造复杂 ,均有H ,O抗原;
E.可用免疫血清鉴别型别
D
22.伤寒的并发症肠穿孔和肠出血常发生在
A.病程第一周;
B.病程第二周;
C.病程第二周至第三周;
D.病程第三
周; E.病程第四周
C
23.肥达反应的原理是
A.凝集反应 ,用已知抗体测未知抗原;
B.凝集反应 ,用已知抗原测未知抗
体;
C.间接凝集反应;
D.协同凝集反应;
E.沉淀反应
B
24.29岁女性 ,发热1周 ,食欲不振、乏力、腹胀、腹泻、脾肿大 .外周血白细
胞偏低 ,起病后曾服退热药及磺胺药 ,发热仍不退 ,临床怀疑为伤寒病 .为进
一步确诊 ,首选应做的检查是
A.肥达反应;
B.血培养;
C.尿培养;
D.粪便培养;
E.骨
髓培养
E 问答题
1. 致病性大肠杆菌引起腹泻的致病机制与菌株关系是什么？
特点ETEC EPEC EIEC EHEC
机理LT,ST,定居因子细胞毒素侵袭肠黏膜细
胞致病物：
（LPS）
细胞毒素，
菌毛
主要症状腹泻、腹痛、低热腹泻、呕吐、非
血性便
腹痛、痢疾样便腹痛、血性便
2.常见的沙门菌有哪些?致病因素如何?可致哪些疾病?
（1）埃希菌族（大肠杆菌、痢疾杆菌）、沙门菌族（伤寒杆菌）、克垒伯菌族（肺炎和产气杆菌）、变形杆菌族（普通变形杆菌）、耶尔森菌族（鼠疫杆菌）3.简述大肠杆菌的致病特点 .
（1）普通大肠杆菌：引起化脓性炎症，是肠道正常菌群的组分。在寄居部位改变、局部或全身抵抗力降低时可发生化脓性感染。如伤口化脓、胆囊炎、败血症等。
（2）急性腹泻
①肠产毒大肠杆菌（ETEC）:是儿童和旅游者腹泻的主要病原体。可产生耐热肠毒素和不耐热肠毒素、定居因子。
②肠致病大肠杆菌（EPEC）:是婴幼儿腹泻的主要病原菌，具有高度传染性，严重可导致死亡。主要在十二指肠、空肠和回肠上段繁殖而致病。致病物质是细胞毒素。
③肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）:多侵犯较大儿童和成年人，引起类似菌痢的腹泻。主要侵入结肠黏膜上皮细胞生长繁殖，产生内毒素，引起炎症和溃疡。
④肠出血性大肠杆菌（EHEC）：可产生与志贺痢疾杆菌类似的毒素，引起出血性结肠炎。
4.什么是肥达反应?有何意义?分析结果时应注意哪些问题?
（1）肥达反应是指用已知伤寒杆菌菌体抗原、H抗原及甲、乙副伤寒杆菌H抗原测定可疑病人血清中特异性抗体含量的定量凝集试验。
（2）意义：辅助诊断伤寒和副伤寒。
（3）分析结果时应注意：①正常人抗体水平。一般伤寒杆菌O抗体效价在1：80以上，H抗体效价在1：160以上，甲、乙副伤寒杆菌H抗体效价在
2次检测抗体效价比第1次高4倍或4倍以上才有诊断意义。③区别H、O抗体增高的意义：两者同时升高有辅助诊断意义；两者同时低于正常无意义；O抗体效价高而H抗体效价低，可能是感染的早期或其他沙门菌感染引起的交叉反应。若H 抗体效价高而O抗体效价在正常范围内，则可能是以往接种过疫苗或非特异性回忆反应所致。
大肠菌群测定方法
大肠菌群及检验 一、大肠菌群介绍 大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工
作中。 二、大肠菌群检验方法：由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，即：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。目前国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准和原国家商检局制订的行业标准。两个标准方法在检测程序上略有不同。 （一）国家标准：国家标准采用三步法，即：乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。证实试验：挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。报告：根据证实为大肠杆菌阳性的管数，查MPN表，报告每100ml（g）大肠菌群的MPN值。 具体操作参见GB4789.3-94 《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验大肠菌群测定》 （二）原国家商检局制订的行业标准，等效采用美国FDA的标准方法，用于对出口食品中的大肠杆菌进行检测。本方法采用两步法：推测试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管LST肉汤。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。证
医学微生物学表格 全
球菌（一）——革兰阳性化脓菌属 金黄色葡萄球菌A群链球菌肺炎链球菌 形态与染色G+，葡萄串珠状排 列，会发生L型转换 （变成G—）G+，链状排列，早期 有荚膜（后期消失） G+，矛头状，成双排列，宽端相对， 尖端向外 培养基普通培养基血液、葡萄糖培养 基，血清肉汤培养基 血液、血清培养基 菌落特点光滑，边缘整齐，不 透明，金黄色，有β 溶血环灰白色，表面光滑， 边缘整齐，有较宽的 β溶血环（血平板） 草绿色α溶血环，菌落中央下陷，有 自溶酶分泌 生化反应分解甘露醇，触酶 （+），血浆凝固酶 （+）不分解葡萄糖，不被 胆汁溶解，触酶（—） 被胆汁溶解 抗原葡萄球菌A蛋白与 IgG结合抗吞噬，荚 膜多糖，多糖抗原多糖抗原，菌毛样M 蛋白抗原、P抗原 荚膜多糖、C多糖、M蛋白 抵抗力抵抗力较强，耐热耐不耐热、耐干燥，对有荚膜株耐干燥，抵抗力一般较弱
盐，耐干燥，易发生耐药性一般消毒剂、抗生素敏感 致病物凝固酶（使血液凝 固），葡萄球菌溶素 （插入破坏细胞）， 肠毒素（引起食物中 毒），表皮剥脱毒素 （引起剥脱性皮 炎），毒性休克综合 征毒素-1 黏附素、抗吞噬M蛋 白、肽聚糖、致热外 毒素、链球菌溶素 （抗O试验）、透明 质酸酶、链激酶、链 道酶 荚膜、肺炎链球菌溶素O、脂磷壁酸、 神经氨酸酶 致病化脓感染、食物中 毒、烫伤样皮炎综合 征、毒性休克综合征化脓感染、猩红热、 风湿热、急性肾小球 肾炎 （机会致病）大叶性肺炎、支气管炎、 败血症、继发炎症 免疫天然免疫，易再次感 染 型别多，易反复感染较牢固特异性免疫 检测产金黄色素，溶血 （+），凝固酶试验 （+）抗O试验（+）胆汁溶菌（+），Optochin敏感（+）、 荚膜肿胀试验（+） 球菌（二）——奈瑟菌属 脑膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌
临床检验技师-微生物检验(2019)练习第十四章-肠杆菌科及检验.doc
2019第十四章肠杆菌科及 检验 一、A1 1、下列关于肠道感染大肠埃希菌的病原群，说法错误的是 A、ETEC引起霍乱样肠毒素腹泻 B、E PEC主要引起婴儿腹泻 C、E IEC引起黏液脓血便 D、E HEC可引起严重的腹痛、痉挛，严重者可发展为急性肾衰竭 E、E AggEC其中0157:117可引起出血性大肠炎 2、肠杆菌科细菌的鞭毛抗原是 A、0抗原 B、H抗原 C、V i抗原 D、K抗原 E、V i抗原和K抗原 3、肠杆菌科细菌的菌体抗原是 A、0抗原 B、H抗原 C、V i抗原 D、K抗原 E、V i抗原和K抗原 4、志贺菌属分群、分型的依据是 A、0抗原 B、H抗原 C、K抗原 D、V抗原 E、0抗原和K抗原 5、无鞭毛的细菌是 A、埃希菌属 B、沙门菌属 C、志贺菌属 D、变形杆菌属 E、枸椽酸杆菌属 6、宋内志贺菌 A、为A群志贺菌 B、为B群志贺菌 C、包括10个血清型
D、培养中常有扁平的粗糙型菌落 E、快速发酵乳糖 7、下列细菌中，引起细菌性痢疾症状最轻的是 A、痢疾志贺菌 B、福氏志贺菌 C、鲍氏志贺菌 D、宋内志贺菌 E、以上都不对 8、大肠埃希菌与沙门菌、志贺菌具有鉴别性的生化反应是 A、发酵乳糖 13、发酵山梨醇 C、发酵葡篇糖 D、硫化氢试验 E、明胶水解试验 9、根据0抗原，志贺菌属分为多个群，其中A群为 A^痢疾志贺菌 B、福氏志贺菌 C、鲍氏志贺菌 D、宋内志贺菌 E、痢疾杆菌 10、志贺菌属是主要的肠道病原菌之一，包括哪些血清群（型） A、痢疾志贺菌 福氏志贺菌 C、鲍氏志贺菌 D、宋内志贺菌 E、以上都是 11、下列为沙门菌分群依据的抗原是 A、菌体抗原 B、鞭毛抗原 C、Vi抗原 D、M抗原 E、5抗原 12、辅助诊断伤寒病的实验是 A、肥达试验 B、汹涌发酵试验 C、抗溶血素“0”试验 D、Weil-Felix 试验
肠道菌群研究的主要方法
肠道菌群研究的主要方法 长期以来，为了研究肠道菌群的成员及其功能，科学家们建立和发展了众多技术 手段。经典的微生物学研究方法主要通过对细菌进行纯培养，然后在不同的培养条件下对细菌的生理活性进行研究。而随着分子生物学技术的飞速发展，在对环境中的复 杂微生物群落进行研究时，科学家们越来越多地运用不依赖于培养的方法，全面分析 各种微生物在环境中的活动和对环境的影响。 基于分离培养的方法 在肠道微生物学研究中，科学家们通常使用一定的选择性液体或固体培养基，对 粪便或肠道粘膜、肠道内容物等样本进行培养和富集，并对培养得到的细菌种类进行分析。根据肠道细菌的特性，对肠道菌进行培养通常需要在厌氧的条件下进行，严格 的厌氧和培养基的选择对于肠道菌的分离和生长非常重要。但是，局限于纯培养的方法具有很多不足之处。首先，体外培养体系难以模拟微生物在肠道中自然生长繁殖的条件，因此绝大多数的肠道微生物都还不能通过纯培养的方法得到分离；其次，仅仅依靠形态学和生理生化检测也不能对菌株进行准确的鉴定。因此，在研究肠道菌群结构和功能的研究中，研究者们通常结合分离培养方法和分子生物学方法，对感兴趣的细菌种类进行研究。 二．分子生态学研究方法 分子生态学方法通常以环境中各种微生物的基因组核酸（DNA 或RNA）为研究 对象。在以肠道菌群为对象的分子生态学研究中，研究者们最常使用核糖体小亚基 RNA 基因（细菌中的16S r RNA 基因）的全部或部分序列作为分子标签来代表物种，以基 因序列的多样性代表物种的多样性，从而对菌群的组成结构进行分析。细菌16S r RNA 基因具有广泛性、进化变异小、具备高保守区和高变区（V 区）等特点，同时序列还具有信息 量巨大且更新迅速的公开数据库，如Database Project（RDP）、SILVA 、Greengenes 等等，研究者们可以方便地将自己研究中的16S r RNA基因序列与数据库进行比对，确定细菌的分类地位。类似的，为了对肠道菌群中具有特定功能的类群进行检测，研究者们也建立了以功能基因片段为分子标签的分析方法。 常用的分子生态学分析方法分为两大类：基于DNA 指纹图谱的分析方法和基于DNA 测序技术的分析方法。除此之外，可用于实时定量的荧光定量PCR（Real time quantitative PCR）和荧光原位杂交技术（Fluorescence in situ hybridization, FISH）也是常用的分析手段。DNA 指纹图谱技术依据分子大小、核酸序列等特征的不同，将代表微生物群落中各物种的 DNA 分子标记物在凝胶上进行电泳分离，使代表不同物种的分子标记迁移到胶上的不同位置，最终得到的电泳图谱用于显示群落的组成结构。DNA 指纹图谱的最大优点是方便、快速、直观，常用于检测微生物群落结构的动态变化或比较不同群落之间的结构差异。最常用的DNA 指纹图谱技术包括变性梯度凝胶电泳（Denatured gradient gel electrophoresis，DGGE）和末端片段长度多态性（Terminal restriction fragment length polymorphism, T-RFLP）等。 不同于指纹图谱技术，DNA 测序技术的目的在于通过直接获取序列核酸信息的方法， 对群落中各物种的进化地位作出判断。基于单克隆质粒、转化细胞构建和桑格（Sanger）双脱氧法测序的16S r RNA 基因克隆文库长期以来广泛用于研究群落中微生物组成的方法，已被多次应用于人体肠道菌群的多样性分析，并获得了在物种检测深度和物种鉴定水平上均远远优于DNA 指纹图谱技术的结果 肠道菌群与健康相关研究中的应用
菌落总数、大肠菌群测定方法
菌落总数和大肠菌群测定（固体样品） 药品： 1、平板计数琼脂 2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST） 3、煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB） 4、氯化钠 设备材料： 烧杯、三角瓶、广口瓶、培养皿、刻度吸管、倒气管、玻璃 棒、试管、硅胶塞、洗耳球、棉花、布或报纸等。 一、准备工作 （指导书是按一个样品所需物品准备的，实验室可按样品量增加） 1、平板计数琼脂培养基准备----用于菌落总数测定 将三角瓶放在电子称上，去皮，按平板计数琼脂使用说明称量，加 200ml蒸馏水搅拌，放电炉上煮沸加热煮沸，充分溶解，盖上硅胶塞，用报纸或布包好，再用橡皮筋扎紧。 2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤----用于大肠菌群测定 （a）将烧杯放在电子称上，去皮，按使用说明称量，加100ml蒸馏水搅拌，放电炉上煮沸，充分溶解。 （b）用10ml（毫升）的吸管分装到9支（18*180规格）试管中，每支试管加10ml的月桂基溶液LST （合计90毫升）。 （c）9支试管分别放入倒气管（开口向下），排气，盖上硅胶塞。
3、0.85%的生理盐水----用于样品稀释 将广口瓶去皮，称取氯化钠1.91g加225ml蒸馏水，摇匀，用报纸 或布包好，再用橡皮筋扎紧；同样配制第二瓶。 4、准备2个空试管，盖上硅胶塞----用于样品稀释。 5、准备8个培养皿，用布包扎好。 6、准备至少3支5ml和1支10ml带有刻度的吸管，用布包扎好（顶部可用棉球塞住，防止吸液时，液体不慎吸入洗耳球）。 7、准备操作的工具：剪刀1把、镊子1个、勺子等打开产品包装所需工具，用布包扎好。 二、使用灭菌锅灭菌 1、检查灭菌锅底部加热管水位是否正常，水位要高过加热丝。 2、将上面准备好的7步骤物品逐一放入锅内，注意：滴定管吸口向下，有棉球的向上。 3、盖上火菌锅盖子时，将排气管插到排气口内，注意从对角线开始拧紧螺丝，将排气阀打开（安全阀始终关闭），通电后，待排气阀放气3分钟后（锅内冷空气已经排完），关闭排气阀。 4、查看灭菌锅的压力表，当温度升到121°，压力升到0.1MP（兆帕）时，灭菌维持15分钟后（温度和压力不能过高或者过低），断电自然冷却到接近“ 0”度后，慢慢打开排气阀，再对角拧开灭菌锅。 三、无菌操作 进无菌室前的准备：放好工具（酒精灯，记号笔，消毒用75%酒精棉球，洗耳球，电子称），打开紫外线杀菌灯，杀菌30分钟后关闭，再等
医学微生物学习题及答案7-肠道杆菌
医学微生物习题 第9章肠道杆菌测试题 一、名词解释 1.Vi抗原 2.肥达反应 3.S-R变异 4.不耐热肠毒素 二.填空题 1.肠道杆菌是一群生物学形状相似的有动力或无动力的革兰染色无芽胞杆菌, 随排出体外。 2.大多数肠道杆菌是菌群的成员, 在特定条件下也可引起疾病, 故称为 . 3.肠道杆菌中的多数非致病菌能迅速分解 ,而大多数致病菌与之相反 ,故此项生化反应可作为肠道致病菌与非致病菌的试验 . 4.肠道杆菌的抗原构造主要是抗原、抗原和荚膜(K)抗原 . 5.肠道杆菌H抗原为鞭毛蛋白 ,不耐热，℃24h才被破坏 , min即被破坏 ,细菌失去鞭毛后 ,H抗原消失 ,菌体抗原为露 ,称细菌的H-O变异 . 6.伤寒杆菌死亡后释放的内毒素可使宿主体温 ,血循环中白细胞数 . 7.Vi抗原与有关 ,含Vi抗原的菌株比Vi抗原的菌株对小鼠毒力强 . 8.大多数志贺菌不分解乳糖 ,只有志贺菌呈乳糖 . 9. 试验在初步鉴别肠道致病菌和非致病菌时有重要意义 . 10.IMViC试验是指、、、 . 11．肠道杆菌抗原主要有、和 . 12.大肠杆菌为正常菌群成员 ,但当侵犯组织时可引起化脓性感染 .引起肠内感染的大肠杆菌主要有、、、 . 13.产毒性大肠杆菌产生的肠毒素有、 . 14.伤寒杆菌免疫以为主 .肠热症后可获得 . 15.疑似肠热症病人做病原体分离培养采取标本时 ,发病1～2周取 ,2～3周可采取、 或 . 16.志贺菌属的细菌通常称为,是引起的病原菌 .按生化反应不同分为、、、四群 .其致病因素主要有、 ,某些菌株还可产生毒性很强的 . 17.分离肠道杆菌一般选用、培养基 . 三.单选题
食品中大肠菌群的测定附mpn检索表)
实验六食品中大肠菌群的测定一、概述 (一)大肠菌群的定义及范围 根据国家1994年颁布的食品卫生检验方法微生物学部分，大肠菌群(coliform bacteria)系指一群在37℃、24h能发酵乳糖，产酸、产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 大肠菌群主要是由肠杆菌科中四个菌属内的一些细菌所组成，即艾希氏菌届、拘橼酸杆菌属、克雷伯氏菌属及肠杆菌属，其生化特性分类见表5-4。 表5-4 大肠菌群生化特性分类表
注：+，表示阳性；—，表示阴性；+/-，表示多数阳性，少数阴性。 由上表可以看出，大肠菌群中大肠艾希氏菌I型和Ⅲ型的特点是，对靛基质、甲基红、v-P和拘橼酸盐利用四个生化反应分别为“十十一一”，通常称为典型大肠杆菌；而其他类大肠杆菌则披称为非典型大肠杆菌。 (二)大肠菌群的测定意义 1、粪便污染的指标细菌 早在1892年，沙尔丁格(Schardinger)氏首先提出大肠杆菌作为水源中病原菌污染的指标菌的意见，因为大肠杆菌是存在于人和动物的肠道内的常见细菌。一年后，塞乌博耳德“斯密斯(Theobold．Smith)氏指出，大肠杆菌因普遍存在于肠道内，若在肠道以外的环境中发现，就可以认为这是由于人或动物的粪便污染造成的；从此，就开始应用大肠杆菌作为水源中粪便污染的指标菌。 据研究发现，成人粪便中的大肠菌群的含量为：108个／g一109个／g。若水中或食品中发现有大肠菌群，即可证实已被粪便污染，有粪便污染也就有可能有肠道病原菌存在。根据这个理由，就可以认为这种含有大肠菌群的水或食品供食用是不安全的。所以目前为评定食品的卫生质量而进行检验时，也都采用大肠菌群或大肠杆菌作为粪便污染的指标细菌。当然，有粪便污染，不一定就有肠道病原菌存在，但即使无病原菌，只要被粪便污染的水或食品，也是不卫生的，不受人喜欢的。 2．粪便污染指标菌的选择 作为理想的粪便污染的指标菌应具备以下几个特性，才能起到比较正确
微生物制剂使用
池塘微生物制剂使用技术 微生态制剂是指在微生态理论指导下采用已知的有益微生物， 经培养、复壮、发酵、包埋、干燥等特殊工艺制成的用于动物的生 物活菌制剂。有时将其称为益生菌、益生素等。我国微生物制剂于 上世纪80年代开始应用于水产养殖，经过20多年的发展，目前已 颇具规模，光合细菌、EM菌、枯草芽孢杆菌、放线菌、硝化细菌、反硝化细菌、乳酸菌等被广泛应用于水产养殖业。 一、水产养殖业应用微生物制剂的背景 随着水产养殖业的迅猛发展，养殖规模越来越大，由于种质退化、池塘老化、饲料不当投喂等原因导致病害频繁发生，可以说，病害问题目前已成为制约我国水产养殖业发展的一个重要因素。为了防治疾病，用药量不断加大，尤其是抗生素的大量使用，不仅使一些致病菌产生较强的抗药性，同时也影响了鱼虾肠道内的有益菌群的正常生长，引起肠道内菌群生态的失调，从而影响鱼虾类的抗病能力。同时，大量使用药物对生态环境产生了不良影响，甚至对人类的健康带来威胁。2001年我国出口欧盟的冻虾仁产品含有违禁物质氯霉素便是敲响了我国水产品质量安全的警钟。因为药物残留超标引发的水产品质量安全事件迫使人们开始思考，如何让水产养殖业走上健康发展的轨道。答案只有一个：推行水产品无公害养殖技术。由于微生物制剂可通过调节养殖水体内的微生态平衡，净化水质，达到提高养殖品种健康水平及改良养殖环境的目的，而且微生物制剂具有无残留、无耐药性、无污染等副作用，它在一定程度上可部分替代或完全替代抗生素，为无公害水产品的生产创造条件。 二、水产微生物制剂的种类及其特点 作为水产动物微生物制剂的主要菌种有光合细菌、酵母菌、乳酸菌、硝化细菌、芽孢杆菌等。以复合型产品为主，如EM菌。 1、光合细菌：在水产养殖业中应用较广泛的微生物制剂，它是一类能进行光和作用原核生物的总称，它们的共同点是体内具有光和色素，可在厌氧、光照条件下进行光合作用。其在养殖水体内，可利用硫化氢或小分子有机物作为供氢体，同时也能将小分子有机物作为
肠道菌群粪便涂片检查—用于菌群失调的诊断和防治
肠道菌群粪便涂片检查—用于菌群失调的诊断和防治 理论和基础 一、粪便直接涂片的优缺点： 1、优点： ①设备简单 ②操作简单 ③时间短 ④形象直观，直接了解粪便菌群的“像”，熟练者对诊断菌群失调有较高的准确性。 2、缺点： ①检验者必须有一定的经验，否则易判断错误 ②主要是定性检查，确定分度较困难。 二、操作技术： 1、涂片将新鲜大便直接涂抹在洁净的玻片上，粪便不可稀释以防细菌变形。标本务求新鲜，涂片厚薄适宜。 2、外观肉眼检查外观颜色、形状（若含有膜状物的大便应补做艰难梭菌培养）。 3、镜检染色技术是诊断准确成功的关键，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌要对比鲜明。镜检时应将涂片视野全面观览，切不可看几个视野就计数或报告。 三、检查方法：
1、细菌总数：观察菌群涂片首先要总览细菌总数。了解涂片上细菌的数量是增多还是减少，有无优势菌或真菌。细菌总数过多的情况较少见或不易引起重视。菌群失调时细菌总数多在正常、减少或消失。 细菌总数评定标准 每油镜视野细菌数评价 ＜10显著减少 11—100明显减少 101—500略微减少 501—5000正常 ＞5000增多 2、观察革兰氏阳性、阴性杆菌及球菌的比率改变 革兰氏阳性杆菌：革兰氏阴性杆菌：革兰氏阳性球菌：革兰氏阴性球菌（包括球菌/杆菌）比率反映了粪便菌群的质素，它一般不受粪便稀释或浓缩的影响，所以较细菌总数有更大的意义，更能反映菌群的本质和预后。 选定有代表性视野中的部分区域作细菌分类计数，需要数100—200个细菌以求得比例。不同年龄的人的比例都不一样，一般杆菌与球菌比例约为75：25。 各年龄组细菌比率平均值的正常参考值（%） 年龄革兰氏阳性杆菌革兰氏阴性杆菌革兰氏阳性球菌革兰氏阴性球菌 1d30.7—61.538.5—60.90—2.20—0.01 2d60.0—71.634.8—36.93.0—3.50—0.01 3d66.9—82.716.0—31.41.3—1.60—0.05 4d79.2—86.212.4—19.21.4—1.70—0.1 5d85.5—87.511.0—12.81.4—1.70.08—0.4 6d—7d75.4—90.17.2—20.81.3—2.90.1—0.6
大肠菌群检测方法
大肠菌群检测方法 进入无菌室步骤 1．进入无菌室前应打开紫光灯进行灭菌，时间为0。5—1小时。 2．关灯后0?5小时后放可进入。 3．进入更衣间更换衣服，佩带口罩、帽子、鞋套 实验步骤 1，进入无菌室后，先把酒精灯点燃，然后在用酒精棉进行手部消毒。（酒精棉是用75%的酒精加入脱脂棉中制成） 2，准备双料管3根，单料管6根，培养皿7个。 3，直接从原液中吸取10ml放入双料管，（3根每根各10ml） 4，再吸取原液1ml放入单料管中（3根每根各1ml） 5，再吸取原液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml） 6，再吸取原液1ml放入盐水管中制成－1梯度的样液 7，更换一根吸管，从－1梯度的样液吸取1ml样液放入单料管中（3根每根各1ml） 8，再吸取－1梯度样液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml） 9，再把每个培养皿中到入营养琼脂平铺底部摇允（注另作3个培养皿：空气空白，把培养皿打开十分钟倒入营养琼脂平铺底部摇匀。琼脂空白，把培养皿中倒入营养琼脂平铺底部摇匀。盐水空白，吸1ml生理盐水放入培养皿中，倒入营养琼脂平铺底部摇匀。） 10，把全部作好的放入培养箱中，温度36C＋－1×C，大肠24H＋－2H，菌落48H＋－2H，（待培养皿中的琼脂凝固后反转过来放入培养箱中） 11，梯度：－1梯度为1ml原液加入9ml生理盐水配成 －2梯度为1ml－1梯度样液加入9ml生理盐水配成 －3梯度－4梯度配制方法和－1、－2梯度的配制方法一样 12，如果大肠初发酵产生气泡，用接种笔沾一个产气的液在伊红美兰平板上画之字形然后放入培养箱中36C，24H＋－2H 。（接种笔在每次使用前必须在酒精灯上消毒。所画之形不能划破伊红美兰琼脂表面） 13，取出后在用接种笔在伊红美兰平板之字形上挑菌，放入乳糖复发酵管中，然后再培养36C＋－1C，24H＋＋－2H。 14，再在伊红美兰平板之字形上挑菌，放到载玻片上作镜检。（方法见标准） 15，只有镜检成紫红色和乳糖复发酵管产气同时成立的情况下，才能断定这根管是不合格。16，清洗消毒这根试管前必须进行消毒霉菌，121C，0。5小时同时不能放气。
第10章 肠道杆菌测试题
第10章肠道杆菌测试题 一、名词解释 1.肥达反应 2.S-R变异 3.不耐热肠毒素 二.填空题 1.肠道杆菌是一群生物学形状相似的有动力或无动力的革兰染色无芽胞杆菌, 随排出体外。 2.大多数肠道杆菌是菌群的成员, 在特定条件下也可引起疾病, 故称为. 3.肠道杆菌中的多数非致病菌能迅速分解,而大多数致病菌与之相反,故此项生化反应可作为肠道致病菌与非致病菌的试验. 4.肠道杆菌的抗原构造主要是抗原、抗原和荚膜(K)抗原. 5.肠道杆菌H抗原为鞭毛蛋白,不耐热，℃24h才被破坏 , min即被破坏 ,细菌失去鞭毛后 ,H抗原消失 ,菌体抗原为露 ,称细菌的H-O变异 . 6.伤寒杆菌死亡后释放的内毒素可使宿主体温 ,血循环中白细胞数 . 7.Vi抗原与有关 ,含Vi抗原的菌株比Vi抗原的菌株对小鼠毒力强 . 8.大多数志贺菌不分解乳糖 ,只有志贺菌呈乳糖 . 9. 试验在初步鉴别肠道致病菌和非致病菌时有重要意义 . 10.IMViC试验是指、、、 . 11．肠道杆菌抗原主要有、和 . 12.大肠杆菌为正常菌群成员 ,但当侵犯组织时可引起化脓性感染 .引起肠内感染的大肠杆菌主要有、、、 . 13.产毒性大肠杆菌产生的肠毒素有、 . 14.伤寒杆菌免疫以为主 .肠热症后可获得 . 15.疑似肠热症病人做病原体分离培养采取标本时 ,发病1～2周取 ,2～3周可采取、或 . 16.志贺菌属的细菌通常称为 ,是引起的病原菌 .按生化反应不同分为、、、四群 .其致病因素主要有、 ,某些菌株还可产生毒性很强的 . 17.分离肠道杆菌一般选用、培养基 . 三.单选题
1.关于肠道杆菌的描述不正确的是 A.所有肠道杆菌都不形成芽胞; B.肠道杆菌都为Gˉ杆菌; C.肠道杆菌中致病菌一般可分解乳糖; D. 肠道杆菌中非致病菌一般可分解乳糖; E. 肠道杆菌中少数致病菌可迟缓分解乳糖 2.肠道杆菌不具有的一种抗原是 A.M抗原; B.H抗原; C.O抗原; D.K抗原; E.Vi抗原 3.伤寒杆菌Vi抗原变异属于 A.毒力变异; B.耐药性变异; C.菌落变异; D.形态排列变异; E.对外界环境抵抗力变异 4.初步鉴定肠道致病菌与非肠道菌常用的试验是 A.IMViC试验; B.甘露醇分解试验; C.乳糖发酵试验; D.胆汁溶菌试验; E.葡萄糖发酵试验 5.肠出血性大肠杆菌(EHEC)的O血清型是 A.O6; B.O25; C.O157; D.O111; E.O158 6.我国城市水饮用卫生标准是 A.每1000ml水中不得超过3个大肠菌群; B. 每1000ml水中不得超过10个大肠菌群 C.每100ml水中不得超过5个大肠菌群; D. 每100ml水中不得超过30个大肠菌群; E.每500ml水中不得超过3个大肠菌群 7.我国卫生标准规定: 瓶装汽水、果汁等饮料每100ml中大肠杆菌不得超过 A.3个; B.5个; C.10; D.50; E.100 8.引起肠道疾病的无动力细菌是 A．沙门菌； B.霍乱弧菌; C.副溶血性弧菌; D.痢疾杆菌; E.肠产毒性大肠杆菌 9.志贺菌的抗感染免疫在消化道粘膜表面主要的抗体类型是 A.IgM; B.IgG; C.IgD; D.分泌型IgA; E.IgE 10.可迟缓发酵乳糖的志贺菌 A.福氏志贺菌; B.宋内志贺菌; C.鲍氏志贺菌; D.痢疾志贺菌; E.B群志贺菌Y变种 11.初步将志贺菌从肠道杆菌中鉴别出来的生化反应方法是 A.培养基中加亚碲酸钾； B.菊糖发酵试验； C.尿素分解试验； D.胆汁溶解试验；
Gut综述用药需谨慎-药物与肠道微生物群之间的相互作用
人体肠道微生物群是一个复杂的生态系统，可以调节宿主与环境的相互作用。肠道微生物与常用非抗生素药物之间的相互作用是复杂的和双向的：肠道微生物群的组成可以受到药物的影响，但反之亦然，肠道微生物群也可以通过酶促改变药物的结构并改变其生物利用度、生物活性或毒性(药物微生物学)来影响个人对药物的反应。在癌症治疗中，肠道微生物群也可以间接影响个体对免疫治疗的反应。了解微生物群是如何代谢药物和降低治疗效果的，将开启调节肠道微生物群以改善治疗的可能性。 一、肠道微生物与药物 许多常用的非抗生素药物会改变微生物群的组成和功能。还有数据表明，肠道微生物群可以通过酶促改变药物的结构并改变其生物利用度、生物活性或毒性，直接影响个人对特定药物的反应--这一现象现在被称为药用微生物(图1)。肠道微生物群可以通过影响宿主的一般免疫状态来间接影响个体在癌症治疗中对免疫治疗的反应。
图1 肠道微生物群和常用非抗生素药物之间不同相互作用的示意图概述 1.1 影响肠道微生物菌群的内因和外因 基于人类队列的分析表明，肠道生态系统的动态性质反映了宿主与生活方式、饮食、生态和其他因素的复杂相互作用。数以百计的内在和环境因素影响着健康人的肠道菌群，包括饮食、药物、吸烟、生活方式、宿主遗传和疾病。在所有的环境因素中，常用药物在肠道生态系统中起着特别重要的作用。 1.2 人群肠道菌群组成与常用药物的相关性研究
人类队列研究报告了特定药物的使用与改变的微生物组成和功能特征之间的关联。荷兰LifeLines- DEEP队列研究报告了42种常用药物中的19种与微生物的相关性。除了抗生素，许多人类靶向的非抗生素药物都与微生物组成的变化有关。与微生物群相关的药物包括PPI、降脂他汀类药物、泻药、二甲双胍、β-受体阻滞剂和ACE抑制剂，以及选择性5-羟色胺再摄取抑制剂抗抑郁药，在比利时佛兰芒队列和TwinsUK队列中也观察到了类似的关联(表1)。 二、影响肠道菌群的常用药物 2.1质子泵抑制剂（PPI） PPIs是世界上最常用的药物之一，用于治疗胃酸相关疾病，以及预防非甾体丙氨酸炎性药物引起的胃十二指肠病和出血。尽管药物不良反应(ADR)的相对风险很低，但全球PPI使用者的高数量意味着ADR患者的绝对数量可能仍然很高。来自荷兰的大规模基于人群的研究表明，PPI是与肠道微生物群多样性减少和分类变化最相关的药物。这项分析表明使用PPI的人高达20%的细菌分类群的相对丰度发生了改变(或减少或增加)。在一项分析1827对双胞胎粪便样本的16S 数据的研究中，也观察到了类似的结果，表明微生物多样性较低，肠道共生体的丰度也较低。 总体而言，PPI使用者粪便样本的分类变化显示，肠道共生菌数量减少，口腔细菌数量增加。另一项使用了宏基因组测序的研究表明，PPI与24个分类群和133条路径显著相关。预测的功能变化包括脂肪酸和脂质生物合成的增加，发酵烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)的代谢，L-精氨酸的生物合成和嘌呤脱氧核糖核苷的降解。PPIs引起的胃酸降低被认为是观察到的微生物变化的原因，因为它使口腔
医学微生物学笔记(总结得真的很好)
医学微生物学 总结得跟教材一样的哦真的省了不少力气 微生物：存在于自然界的一大群体形微小、结构简单、肉眼直接看不见，必须借助光学显微镜或电子显微镜放大数百倍、数 千倍。甚至数万倍才能观察到的微小生物。 1．微生物的分类： 种类细胞结构核酸特点代表 非细胞型微物无典型细胞结构 构DNA或RNA， 两者不同时存 在 无产生能量的酶系统，只能在活 细胞内生长增值 病毒 原核细胞型微生物无核膜、核仁，仅 有核糖体DNA和RNA 古生菌、细菌（细菌、支原体、 衣原体、立克次体、螺旋体和 放线菌） 真核细胞型微生物细胞核分化程度 很高，有核膜核 仁，细胞器完整 DNA和RNA 真菌 3、病原微生物：少数具有致病性，能引起人类、植物病害的微生物。 机会致病性微生物：在正常情况下不致病，只有在特定情况下导致疾病的微生物。 4，郭霍法则：①特殊的病原菌应在同一种疾病中查见，在健康人中不存在；②该特殊病原菌能被分离培养得纯种；③该纯培养物接种至易感动物，能产生同样病症；④自人工感染的实验动物体内能重新分离得到该病原菌纯培养。 郭霍法则的特殊情况 5、免疫学：㈠主动免疫；㈡被动免疫。 第一篇细菌学 第一章细菌的形态与结构 第一节细菌的大小与形态 1、观察细菌常采用光学显微镜，一般以微米为单位。 2、按细菌外形可分为： ①球菌（双球菌、链球菌、葡萄球菌、四联球菌、八叠球菌） ②杆菌（链杆菌、棒状杆菌、球杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌） ③螺形菌（弧菌、螺菌、螺杆菌） 第二节细菌的结构 1、基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、核质 特殊结构：荚膜、鞭毛、菌毛、芽胞 2、革兰阳性菌（G+）：显紫色；革兰阴性菌（G-）：显红色。 3、 细胞壁结构革兰阳性菌G+革兰阴性菌G- 肽聚糖组成由聚糖骨架、四肽侧链、五肽交 联桥构成坚韧三维立体结构 由聚糖骨架、四肽侧链构成疏 松二维平面网络结构 肽聚糖厚度20～80nm 10～15nm
大肠菌群测定的操作细则(DOC)
大肠菌群测定的操作细则 大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。 食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。 1 设备和材料 1.1 温箱：36±1℃。 1.2 冰箱:0～4℃。 1.3 恒温水浴:44.5±0.5℃。 1.4 天平。 1.5 显微镜。 1.6 均质器或乳钵。 1.7 平皿:直径为90mm。 1.8 试管。 1.9 吸管。 1.10 广口瓶或三角烧瓶:容量为500mL。 1.11 玻璃珠:直径约5mm。 1.12 载玻片。 1.13 酒精灯。 1.14 试管架。 2 培养基和试剂 2.1 乳糖胆盐发酵管:按GB 4789.28中4.9规定。 2.2 伊红美蓝琼脂平板:按GB 4789.28中4.25规定。 2.3 乳糖发酵管:按GB 4789.28中4.10规定。 2.4 EC 肉汤:按GB 4789.28中4.11规定。 2.5 磷酸盐缓冲稀释液:按GB 4789.28中 3.22规定。 2.6 生理盐水。 2.7 革兰氏染色液:按GB 4789.28中2.2规定。 3 操作步骤 3.1 检样稀释 3.1.1 以无菌操作将检样25mL(或g)放于有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器,以8 000-10 000 r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。3.1.2 用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。 3.1.3 另取1mL灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1mL 灭菌吸管。 3.1.4 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度,接种3管。 3.2 乳糖发酵试验 将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内,接种量在1mL以上者,用双料乳糖胆盐发酵管,1mL及1mL以下者,用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管,置36±1℃温箱内,培养24±2h,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产气者,则按下列程序进行。
√肠道菌群的作用机理
微生态制剂作用机理 动物微生态制剂能有效补充畜禽消化道内的有益微生物、改善消化道菌群平衡、增强机体抗病性、提高饲料转化率，从而达到防治消化道疾病和促进生长等多重作用。微生态制剂具有无毒、无副作用，无残留、无污染，不产生抗药性，成本较低等特点，是理想的抗生素替代品。 益生菌进入动物肠道后，会与肠道中的正常菌群会合，显现出共生、栖生、竞争或吞噬等复杂关系。因此，微生态制剂的作用机理相当复杂，综合国内外微生态的研究结论，宝来利来公司形成以下8大主流学说： 1、优势种群学说——当乳酸菌和双歧杆菌等肠道有益菌群占据优势地位时，动物肠道微生物菌群就处于良性的生态平衡状态，大肠杆菌、沙门氏菌等有害菌被抑制住不能生长繁殖。 2、生物夺氧学说——一些需氧菌微生物制剂能消耗肠道内的氧气，造成厌氧环境，有利于有益微生物的生长，限制了有害需氧菌和兼性厌氧菌的增殖，从而使失调的菌群恢复到正常状态，达到治病促生长的目的。 3、定植抗力学说——有益菌的一个非常重要的作用就是对肠道外籍菌群中的致病菌，肠道内条件性致病菌有定植抗力作用，动物一旦缺乏定植抗力，动物肠道中的病原菌和潜在病原菌极易大量繁殖，并突破肠粘膜进入组织中，最终致全身感染，甚至因此而死亡。 4、生物拮抗学说——一些肠道益生菌通过产生细菌素、乳酸、丁酸、过氧化氢等物质达到抑制病原微生物生长繁殖的目的。 5、粘膜免疫学说——医学界目前已经公布了与粘膜免疫最相关的微生态菌种，包括5种乳酸菌：植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌；以及12种双歧杆菌：青春双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌、两岐双歧杆菌、动物双歧杆菌等。 6、肠道营养学说——肠道益生菌通过产生各种消化酶而几乎参与了全部营养物质的消化过程。之所以动物换料会导致应激甚至腹泻，主要就是肠道益生菌因为饲料的改变而出现菌群失调或者优势菌群易位。动物在用药后导致食欲不振或消化不良，也是这个原因。 7、肠道酸化学说——肠道益生菌如乳酸菌和双歧杆菌等，在畜禽肠道中代谢产生乳酸、乙酸、丙酸、丁酸等酸性物质，降低肠道pH值，而偏酸性环境不利于大肠杆菌等有害菌的生长繁殖；pH值每下降0.1，肉鸡饲料报酬可以提高3%。 8、清除毒素学说——诺贝尔奖获得者梅契尼科夫说：人体和动物90%的毒素产生于自己的肠道，引发内源性感染并破坏自身的免疫系统。可以说，疾病和衰老始于肠道。
肠道菌群细菌的鉴定
肠道菌群细菌的鉴定 一、实验目的 1.掌握革兰染色法。 2.掌握IMViC试验。 二、仪器与试剂 玻片，接种环，生理盐水，酒精灯，结晶紫溶液，卢戈氏染液，石炭酸-复红溶液，沙黄液，光学显微镜，二甲基氨基苯甲醛试剂，葡萄糖蛋白胨水培养基，甲基红试剂（甲基红0.02g，95%酒精60mL，蒸馏水40mL），6%α-萘酚酒精溶液，40% KOH，铵盐作为唯一氮源，并利用枸橼酸盐作为唯一碳源的培养基，层析滤纸，正丁醇，甲酸，1.5%乳酸，1.5%乙酸溶液，3%溴甲酚蓝酒精溶液，层析缸，需氧血琼脂平板，厌氧血琼脂平板，七叶苷培养基，胆汁七叶苷培养基，65g/L NaCl血清肉汤，PYR试剂，DNA琼脂平板，1 mol/L盐酸，MRS培养基，X-Gal。 三、实验步骤 1.革兰染色法 （1）涂片：取玻片在火焰上稍微加温，以清洁纱布擦净，放置桌上，左手握培养皿，右手持接种环，用无菌接种环取生理盐水一滴，置于载玻片的中央，再用接种环在火焰上灭菌，待冷却后，取培养细菌少许与盐水混匀，直接取1~2环菌液作涂片即可，涂片应厚薄均匀。接种环采菌后，要通过火焰灭菌才能放下。 （2）干燥：目的是是菌体水分慢慢蒸发，固定菌形。涂片最好在室温中自然 干燥，必要是将标本面向上，小心断续在弱火高处略烘，以助水分蒸发；但切勿紧靠火焰，以致标本烤枯，不堪检视。 （3）固定：手执玻片一端，标本面向上，在火焰外层快速地来回通过三次，共2-3秒，以玻片反面触及皮肤不觉过烫为度。冷却后，染色。目的是杀死细菌，是菌体与玻片粘附较牢以及改变对染料的通透性，因活的细菌一般不能使许多染料进入细胞。 （4）初染：将涂片标本夹持于左手，滴加结晶紫溶液盖满涂抹面，染色1~3分钟，用流水缓缓冲洗（即将龙头打开使水缓慢流出，将玻片倾斜使水在玻片面上端沿玻片流下冲洗染液）直至无颜色流下为止。 （5）媒染：加卢戈氏染液4~5滴作用30秒到一分钟，再按上法冲洗，并将片上积水轻轻洒净。 （6）脱色：在95%酒精缸中脱色约3~5秒，拿出玻片使酒精由玻片流下，如此反复2~3次，直至流下酒精略呈淡紫色为止，现按上法以流水冲洗，并将玻片轻轻洒净。 （7）复染： 用稀释石炭酸-复红（或沙黄液）复染半分钟后按上法冲洗。 （8）光学显微镜下观察细菌染色情况
2016这一年有关肠道菌群相关研究精华一览(top10)
2016这一年，有关肠道菌群相关研究精华一览（TOP 10） 2016这一年，三大期刊Nature、Science和Cell纷纷发表肠道微生物组方面的重磅研究文章，这些文章从不同的角度揭示了肠道微生物组在人类健康和疾病中发挥着至关重要的作用。本文中小编盘点了近年来肠道微生物相关研究报道。 【1】Nature：肠道微生物竟是这样在幕后操纵我们的胖瘦的 6月9日，顶级期刊《自然》杂志刊登了耶鲁大学医学院Gerald I Shulman教授团队的研究论文(3)，他们的发现几近完美地解释了「肠道菌群究竟是如何引起肥胖的？」这一困扰学界多年的问题。 Shulman教授并不是偶然发现了这个秘密，早在2006年，由微生物领域大牛Jeffrey I. Gordon教授领衔的研究已经表明(4)，肠道微生物是肥胖的一个重要致病因素，尤其是微生物产生的某些短链脂肪酸可能是罪魁祸首。后来，越来越多的研究表明，短链脂肪酸与多食、肥胖和代谢综合症之间存在关联。但是研究人员一直不清楚短链脂肪酸究竟是如何导致肥胖的。 Shulman教授在前人的基础上，对那些短链脂肪酸展开了研究，最终发现醋酸盐（acetate）是导致肥胖的关键所在。
经过在小鼠体内复杂地探索与反复地验证，Shulman教授以小鼠为模型，帮我们还原了肠道微生物失衡引起啮齿动物肥胖的全过程。（梅斯医学公众号首页回复“ Nature：肠道微生物竟是这样在幕后操纵我们的胖瘦的”，即可查看详细内容）【2】Science：华人科学家揭示肠道微生物不会感染人体自身的机制 来自爱丁堡大学MRC炎症研究中心的科学家们揭示出了，免疫系统阻止我们肠道中的细菌渗入血液中引起败血症一 类全身性炎症的机制。并帮助解释了尽管在我们的肠道中自然存在大量的细菌，我们却不会遭受更多感染的原因。研究发现有可能会改善对危及生命的感染的治疗和预防。他们的论文发布在《科学》（Science）杂志上。 这些研究结果有可能促使开发出一些新方法来阻止全身感染——如果不能早期控制它们可以危及生命。这些称作为败血症或脓毒症的感染是危重患者的最大杀手之一。 爱丁堡大学MRC炎症研究中心的姚成灿（Chengcan Yao，音译）说：“肠道屏障损伤可以导致往往致命的疾病——败血症，它是危重病人最大的杀手之一。我们的研究揭示了可以用来帮助阻止败血症常见原因之一的一种新治疗方法。PGE2是前列腺素分子家族的一个成员，常用抗炎药物包括阿司匹林（aspirin）和布洛芬（ibuprofen）可以阻断前列腺素分子。这些药物是否会带来全身性炎症的风险，值得评估。
几种益生元制剂对肠道菌群作用效果的研究
【收稿日期】2007211230【作者简介】周景欣(19772),女,硕士,主管检验师,从事临床检验和 临床微生物学研究,Email:zhoujingxin116@https://www.wendangku.net/doc/8620195.html,;袁杰利,通讯作者 文章编号:10052376X (2008)022******* 【论 著】 几种益生元制剂对肠道菌群作用效果的研究 周景欣1 ,袁杰利2 ,李新仓 3 (1.抚顺市中心医院检验科,辽宁抚顺 113006;2大连医科大学微生态学研究所,辽宁大连 116027;3辽宁石油化工大学,辽宁抚顺 113001) 【摘要】 目的 探讨几种益生元制剂对肠道菌群作用效果。方法 通过体外实验和体内试验。结果低聚果糖、水苏糖、低聚木糖、低聚异麦芽糖均能促进双歧杆菌和乳杆菌的增殖,并能够酸化肠道的pH;能够显著提高肠道的B /E 值(肠道内双歧杆菌和肠杆菌数量l og 值的比值),增加肠道中有益菌的比例,有益于稳定肠道的微生态平衡。结论 这几种益生元制剂对肠道菌群有较好的调节作用。 【关键词】 肠道菌群;双歧杆菌;乳杆菌;益生元 【中图分类号】R378 【文献标识码】A The effects of the preb i oti cs on norma l i n testi n a l flora ZHOU J ing 2xin 1 ,Y UAN J ie 2li,L I Xin 2cang (1.Fushun Central Hospitai,Fushun 113006,China ) 【Abstract 】 O bjecti ve To study the effects of the p rebi otics on nor mal intestinal fl ora .M ethod By experi m ent in vitro and vivo .Result F OS,XOS,Stachyose and I M O all could p r omote multi p licati on of B ifidobacterium ,L actobacillus and could s our the value of pH,and could p r om inently advance intestinal ′B /E value and raise p r oporti on of p r obi otics and had beneficial t o stabilizati on m icr o 2ecol ogy balance of intestinal fl ora .Conclusi on These p rebi otics have better adjustive effect on nor mal intestinal fl ora . 【Key words 】 I ntestinal fl ora;B ifidobacterium;L actobacillus ;Prebi otics 自从1899年TI SSI ER 发现第一株双歧杆菌以 来,随着微生态学的发展,人们已经认识到肠道正常菌群,特别是双歧杆菌、乳酸菌等对维持一个良好的肠内菌群结构及机体的健康具有重要的作用。鉴于活菌补菌在定植力、活菌存活率、运送、保存等方面存在诸多不足,开发应用价廉、效优、方便并为广大群众接受的寡糖类益生元,提高大众健康水平,是我国微生态保健品的发展方向。本文采用体外实验及体内 试验,并选用B /E 值[1] 作为指标,对市场上几种常见的低聚糖(低聚果糖、低聚水苏糖、低聚木糖、低聚异麦芽糖)进行试验,比较其经细菌发酵后的产酸能力、对益生菌的促进效果、B /E 值,为广大消费者提供使用参考。1 材料与方法1.1 菌群 取至健康成年人的大便悬液。1.2 益生元制剂 低聚果糖粉:低聚果糖≥70%,北京威德生物科技有限公司生产。异麦芽低聚糖粉:异麦芽低聚糖含量≥90%,山东保龄宝生物技术有限公司生产。木糖低聚糖粉:木糖含量≥70%,山东龙力生物科技有限公司生产。水苏糖低聚糖粉:水苏糖含量≥70%,西安德施普生物制品有限责任公司生产。1.3 培养基 肠杆菌:E MB 培养基,杭州微生物试剂有限公司;肠球菌:EC 培养基(自制);乳杆菌:LBS 培养基(自制);双歧杆菌:改良BS 培养基(自制)。1.4 受试人群 血常规、尿常规、肝、肾功能正常的志愿者40人,试验采用自身对照。 1.5 试验方法 1.5.1 体外试验[2] 采用G AM [3] 培养基为基础培养基(未加葡萄糖),对照组1加1%葡萄糖,对照组2不加葡萄糖,试验组1至4分别加1%水苏糖、1%低聚果糖、1%低聚异麦芽糖和1%低聚木糖。每组设3个平行样,每个样装250m l,共计分装18个250m l 输液瓶。加塞并插上针头,然后115℃灭菌20m in,灭菌后拔出针头。取新鲜粪便10g 加入200m l 生理盐水中充分混合,分别取上清液1m l 加入18个样品中培养,37℃发酵。 检测发酵6h 后发酵液中双歧杆菌、乳酸杆菌、肠杆菌、肠球菌的数量;测发酵液的pH:取发酵液1m l,加入生理盐水9m l 中充分稀释,再取此液1m l, 加入生理盐水9m l 中充分稀释,连续稀释至10-6 ,取10-6、10-5、10-4滴种,每个稀释度分别滴种3滴,肠球菌、肠杆菌平板直接放入培养箱中,37℃培养24～48h 后分别计数,双歧杆菌和乳杆菌平板放入厌氧罐中培养48～72h 后计数。同时测定发酵液pH 。按同样方法分别测定12和24h 双歧杆菌、乳酸杆菌、肠杆菌、肠球菌的数量及发酵液的pH 。 1.5.2 体内试验[4] (1)上述4组人群每人每天分别服用水苏糖3g 、低聚果糖3g 、低聚异麦芽糖3g 和低聚木糖1g 。服用14d 后由志愿者将他们各自的粪便样本送到医院做处理。粪便标本的处理:用无菌小棒挑取标本盒内新鲜大便的深部1g,立即加入到含有玻璃珠的9m l 稀释液中,混匀,使稀释成1∶10,在震荡器上振荡30m in,使标本彻底匀浆化,依 次10倍稀释至10-9 。(2)体内试验主要以肠杆菌、 肠球菌、双歧杆菌、乳杆菌为调查对象,根据各种菌在粪便中的含量,选择适宜稀释度,需氧菌稀释度取 5 41中国微生态学杂志 2008年4月第20卷第2期