MS培养基上培养拟南芥

1/2MS培养基上种植拟南芥技术总结

培养基配方：（1L）

MS：2.215g

蔗糖：20g

PH：5.8

固体Agar parder:7.8g

操作步骤：在无菌操作台中进行，（1）洗菌：70%乙醇洗1min；1% Naclo溶液15min，无菌水洗5-6次，2min/次,平铺在培养基上。

4摄氏度春花3天，正常培养，3-4叶期移植。

培养条件：22摄氏度，RH》80%，光照16h/8h暗

注意要点：配置Naclo时一定要注意其原来浓度，如果是分析纯，记得稀释，以免杀死种子；

点播拟南芥种子时，种子间拉开距离，而且最好是成行摆，因为这样根部容易长在一起，移栽时较容易。

MS培养基应该放在短光照下培养，这样植株长的状。

培养基母液配制Word版

培养基母液配制 培养基配制通常先根据各组分性质，配制成较浓的母液（母液浓度为培养基浓度的若干倍如50或100倍），贮存在冰箱中备用，以后配制培养基时根据用量量取。由于培养基成分较多，如果每配制一次即进行多次称量（不少成分用量较微），不仅会造成较大的误差，而且会增加工作量，因而配制母液可使培养基配制方便准确。配制大量成分母液通常为原培养基浓度的20、50或100倍，倍数不宜过高。MS培养基母液及培养基配方法参考表2。 大量成分母液经常将CaCl2·2H2O单独配制保存，以免长期贮存发生沉淀。若将全部大量成分配在一起时，为防止在混合时发生沉淀，须在各药品充分溶解后，按表1.2中化合物出现顺序混合，氯化钙最后加入，以免与硫酸镁形成沉淀.大量成分称量溶解后，在1000 ml容量瓶中定容，然后移入磨口瓶中，贴上标签，置于普通冰箱（4℃）贮存。 微量元素母液配制时，由于培养基中微量元素用量甚微，浓度为 0.l~0.0001mg/l，所以母液浓度宜为原培养基配方中用量的100倍。一般将微量元素分别称量溶解，定容在1000 ml容量瓶中后贮存在一个细口瓶中，但也有将KI分别配制，单独贮存在棕色瓶中。配好后，贴上标签，贮存于4℃冰箱。 培养基中的铁盐母液一般单独配制。目前常用的铁盐为硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二纳的螯合物。称取Na2-EDTA 3.73 g，FeSO4 ·2H2O 2.78 g，分别溶解（可加热），然后混合定溶于1000 ml容量瓶中。转入细口瓶，贴上标签，4℃冰箱中保存。 氨基酸和维生素等有机成分母液可配制时，母液浓度通常为原培养基配方的50倍（或100）。常用氨基酸和维生素为水溶性物质，可用蒸馏水溶解，但叶酸要先用少量稀碱或稀氨水溶解，然后用重蒸馏水定容。配制好后，转入细口瓶，贴上标签，-20℃（或4℃）冰箱中保存。 植物生长调节物质如生长素类和细胞分裂素类可以根据需要，灵活设计其浓度，一般为 0.01、0.1、0.2、0.5或1 mg/l。如配0.5 mg/l NAA母液，称25 mg NAA溶于50 ml重蒸馏水，或50 mg的NAA定溶于100 ml重蒸馏水中。IAA要用棕色瓶暗中贮存，以免光照分解。常用植物生长调节物质和维生素特征见表3。生长素为醇溶性物质，配制时，应用少量95%酒精或稀碱溶解，然后用重蒸馏水溶解定容；细胞分裂素应先用少量1 N NaOH或HCl溶解，然后用重蒸馏水定容。配制好的母液放置在4

实验一 植物组织培养基母液配制的若干关键环节

实验一、植物组织培养基母液配制的若干关键环节目的与要求： 熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法. 植物组织培养（plant tissue culture）是指植物的任何器官、组织或细胞，在人工预知的控制条件下，放在含有营养物质和植物生长调节物质等组成的培养基中，使其生长、分化形成完整植株的过程.植物组织培养具有取材少，培养材料经济；人为控制培养条件，不受自然条件影响；生长周期短，繁殖率高；管理方便，利于自动化控制等特点.因而被广泛应用于各种植物的快速繁殖之中. 为了避免每次配制培养基都要对几十种化学药品进行称量，应该将培养基中的各种成分，按原量10倍、100倍或1000倍称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做母液。这样，每次配制培养基时，取其总量的1/10、1/100、1/1000，加以稀释，即成培养液。现将培养液中各类物质制备母液的方法说明如下。 以MS培养基为例，其母液的配制包括大量元素、微量元素、铁盐、维生素、氨基酸、植物生长调节物质和有机附加物等种类.(见表1) 表1 MS培养基母液的配制 成分规定用量 /mg.L-1 扩大倍 数 称取量/ mg 母液定溶 体积/ml 配1LMS培 养基吸取量 /ml 大量元素 KNO3 NH4NO3 MgSO4·7H2O KH2PO4 CaCl2·2H2O 微量元数 MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O 1900 1650 370 170 440 22.3 8.6 20 20 20 20 20 1000 1000 38000 33000 7400 3400 8800 22300 8600 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 50 50 50 50 50 1 1

培养基母液的配制方法

培养基母液的配制方法 一、实验目的 1.了解无菌操作 2.掌握培养基母液的配制方法 二、实验原理 配制培养及时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。 三、实验器材和药品 器材：电子天平、烧杯、容量瓶、细口瓶、药勺、玻璃棒、电炉。药品：NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、 MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、 ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、 CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、FeSO4·7H2O、 Na2-EDTA·2H2O、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B6)、盐酸硫胺素 (维生素B1)、甘氨酸。 四、实验步骤 1、大量元素母液的配制

各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍用天平称取，用蒸馏水分 别溶解，按顺序逐步混合。后用蒸馏水定容到 1000ml的容量瓶中，即为10倍的大量元素母液。到入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。 配制培养基时，每配1L培养基取此液100ml。 表1 MS培养基大量元素母液制备 注意： (1) 配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+、SO42－、Mg 2+和H2PO4一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。特别应将Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4 一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。

培养基母液的配置

培养基母液与培养基的配置 摘要：配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。 关键词：培养基母液常用培养基植物激素 1.常用培养基种类，培养基母液的各种成分的量以及配置过程 1.1常用培养基： MS培养基 MS培养基是目前使用最普遍的培养基。其具有较高的无机盐浓度，能够保证组织生长所需的矿质营养还能加速愈伤组织的生长。由于配方中的离子浓度高，在配制、贮存和消毒等过程中，即使有些成分略有出入，也不会影响离子间的平衡。MS固体培养基可用于诱导愈伤组织，也可用于胚、茎段、茎尖及花药的培养，其液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显的成功。MS培养基的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。因此，一般情况下，不用再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。和其它培养基的基本成分相比，MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高，这是它的显著特点。 B5培养基 与其他培养基相比，它的主要特点是含有较低的铵，而铵这一营养成分可能对有些培养基有抑制生长的作用。当愈伤组织和悬浮培养中对B5培养基与MS培养基进行对比培养试验时，发现有些植物的愈伤组织和细胞培养物在MS培养基上生长得好，有些在B5培养基上生长得更适宜。 N6培养基 为水稻的花药培养设计，成分简单，硝酸铵含量高，不含钼，用于花药（谷物）培养。 LS培养基 基本与MS培养基相同，LS成分相对少了。 White培养基 为培养番茄根尖培养设计，无机盐浓度低，属于低盐培养基。适用于生根培养，成熟胚胎培养，后作了改良，多用于本草植物。 1.2几种常用培养基母液的各种成分的量以及配置过程 培养基母液的各种成分包括大量元素、微量元素、Fe盐、有机成分、肌醇、激素等。 1.2.1大量元素母液的配制（10X，1000ml） 成分使用浓度 （mg/L) 配置1000ml培养基称取量（g) MS培养基 硝酸钾KNO3 1900 19 硝酸铵NH4NO3 1650 16.5 磷酸二氢钾KH2PO4 170 1.7 硫酸镁MgSO4.7H2O 370 3.7 氯化钙CaCl2.2H2O 440 4.4

培养基母液的配制

培养基母液的配制 植物在自然状态下生长时，具有完整的营养体，是属于自养型的，很多营养物质可以自制，对外界营养条件的要求比较简单,而在离体条件下生长的植物器官、组织和整体植物不同，属于异养型,要求的营养条件十分复杂,因此在人工合成养基的组成和制备上必须全面考虑，满足供应。 一、实验目的 配制培养基母液是植物组织培养的基本技术。当需要连续和大量配制培养基时,如果每次都称量药品、溶解并定容，工作将十分繁琐，因此需要将大量元素、微量元素、铁盐、有机物质、激素类分别配制成适当的浓缩液。要求拿握植物组织培养培养基母液的配制方法。 二、实验材料仪器 冰箱、电子天平(0.0001g) 容量瓶: 1000 ml, 500ml、250 ml、100 ml、25 ml 广口储液瓶: 500 ml、250ml、50 ml、25 ml 烧杯: 1000ml、500ml 、250m、100ml 、50 ml .数十根玻璃搅棒、大药勺、小药勺、标签纸、胶水、记号笔药品 50%酒精、95%酒精、1N盐酸(1N盐酸(HC1)的配制:取浓盐酸825ml,加入蒸馏水1000ml,即为IN的HCI)、1 N Na0H(1N氢氧化钠(或氢氧化钾)的配制:称40 gNa0H (或氢氧化钾57.1g)加入蒸馏水100ml ,即为1N的Na0H( IN的K0H) 几种常用的培养基所需的大量元素、微量元素、有机物、激素、铁盐等药品、蒸馏水 三、实验步骤 按照培养基配方，把大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物激素分类，每一类中各种药品分别称量。如Ms培养基各种母液的配制步骤如下:1、大量元素母液: 包括用量较大的几种化合物，按表中排列顺序，将每种药品的用量扩大10倍，分别称取，分别溶解,然后按照顺序混合在一-起。如钙盐等易发生沉淀的药品不能混合，应单位定容。最后加上蒸馏水，定容至1升或500毫升。在定容时注意用蒸馏水洗净烧杯和玻璃棒以减少误差。定容后的溶液为大量元素母液，配制培养基时，每配1 L培养基需吸取该母液100 m或50

实验二培养基母液的配制及保存

实验二培养基母液的配制及保存 一、目的要求 了解并掌握植物组织培养中MS培养基母液、生长调节剂母液配制与保存的基本知识及操作规范，能根据配方准确计算各种药品的称取量。 二、基本原理 在配制培养基之前，为了使用方便、简化操作、用量准确，减少每次配药称量各种化学成分所花费的时间和误差，常常将配制培养基所需无机大量元素、微量元素、有机物、铁盐、激素等分别配制成比需要量大若干倍的浓缩母液，置于冰箱内保存。当配制培养基时，按预先计算好的量分别吸取各种母液即可。本实训以MS 培养基为例，学习培养基母液的配制方法。 三、试剂与主要用具 1．仪器、用具 电子天平(感量0.01g和0.0001g)、药匙、玻璃棒、称量纸、吸水纸、滴管、洗瓶、标签纸、烧杯（50ml、100ml、200ml）、容量瓶（100ml、200ml、500ml、1000ml）、试剂瓶（100mL、200mL、500ml、1000ml）、量杯、量筒、移液管、移液枪、洗耳球、电炉、冰箱等。 2．试剂 （1）95%乙醇、1mol/L NaOH、1mol/L HCl （2）MS培养基各成分试剂 （3）植物生长调节剂：2，4-D、6-BA、IAA、NAA等 （4）洗涤剂、蒸馏水 四、方法步骤 1．大量元素母液的配制 按照MS培养基配方的需要量，将各种化合物称量扩大10倍，用电子天平称取，并分别用少量蒸馏水溶解，如溶解速度慢，可稍加热。完全溶解后，按表4-1顺序依次混合已溶解的化合物溶液，并搅拌，以免产生沉淀，注意最后加入氯化钙溶液，混匀，用量筒定容到500ml，倒入试剂瓶中并贴好标签。保存于4℃冰箱待用。 表4-1 MS培养基大量元素母液（10倍）的配制剂量

培养基母液配制 (2)

培养基母液的配制 （一）激素母液 由于多数生长调节物质难溶于水，因此配法各不相同，激素母液可以在2~4℃冰箱中保存。在配制药品前，应准备好一定容积的小烧杯、玻璃棒，用纯净水冲洗干净方可使用： 1、IAA、IBA、GA3、ZT可先用少量95%酒精溶解，再加水 定容，摇匀后贮于试剂瓶中，贴上标签。 2、2,4-D、KT、可用少量10%的Noah溶解，再加水定容。 3、6-BA可用少量1mol/LHCl溶解后，再加水定容。 4、NAA可溶于热水或少量95%酒精中，再加水定容至一定 体积。 5、1mg/ml的2.4-D的配制：称取0.1g2,4-D，用少量1mol/LNaOH 溶解，然后定容到100ml容量瓶中。 6、1mg/ml的6BA的配制：称取0.1g6-BA，用少量1mol/LNaOH 溶解，然后定容到100ml容量瓶中。 7、1mg/ml的NAA的配制：称取0.1gNAA，用少量95%酒精助溶，然后定容到100ml容量瓶中。 8、1mol/L的HCl的配制：量取83.3ml盐酸加水稀释定容至1L。（一般、组培室用量少，配制500ml即可，即：称取盐酸41.65ml 稀释定容至500ml。配制盐酸时。需要带口罩、戴手套。） 9、10%的NaOH的配制：称取10gNaOH，加少量纯净水溶解，然后定容到100ml容量瓶中。

10、HgCl2 的配制：称量1g的HgCl2，加热水后进行溶解定容至1L。 二、培养基配制 配错培养基造成的危害比组培技术中其他任何失误都大。因此，配制培养基和称取其他成分必须绝对小心。为了降低配错培养基的风险，最好准备一张纸，详细地写出配制培养基过程中所需的成分和配置步骤。每配完一种成分或配完一种母液，划掉相应的记录。 1、一般而言，分化配方的配制：除萱草琼脂为5.5g/L外，其它植物为琼脂5g/L。白糖为30g/L。母液粉为4.74g/L。 用自己配制的母液配培养基时，大量母液（1号）50ml/L，微量（2~5号为5 ml/L）。 2、配制?的生根培养基，是大量母液（1号）减半为25ml/L，微量不变（2~5号为5 ml/L）。生根配方中，萱草、红掌白糖为25g/L，其他不变。 配制培养基步骤： 1、称量母液粉→加入少量水溶解→放入琼脂、糖溶解→ 水开后关火→混合均匀定容→加生长调节物质（激素）→ 调pH值→选用干净瓶子分装培养基（每瓶约30ml）→ 培养基凝固→培养基封口→培养基高压灭菌→冷却→备用 2、加入一定量的纯净水→放入琼脂、糖溶解→水开后关火→加大量元素及微量元素→加激素→滴NaOH调pH值→选用干净瓶

培养基母液配制

. 培养基母液配制 培养基配制通常先根据各组分性质，配制成较浓的母液（母液浓度为培养基浓度的若干倍如50或100倍），贮存在冰箱中备用，以后配制培养基时根据用量量取。由于培养基成分较多，如果每配制一次即进行多次称量（不少成分用量较微），不仅会造成较大的误差，而且会增加工作量，因而配制母液可使培养基配制方便准确。配制大量成分母液通常为原培养基浓度的20、50或100倍，倍数不宜过高。MS培养基母液及培养基配方法参考表2。 大量成分母液经常将CaCl2·2H2O单独配制保存，以免长期贮存发生沉淀。若将全部大量成分配在一起时，为防止在混合时发生沉淀，须在各药品充分溶解后，按表1.2中化合物出现顺序混合，氯化钙最后加入，以免与硫酸镁形成沉淀.大量成分称量溶解后，在1000 ml容量瓶中定容，然后移入磨口瓶中，贴上标签， 置于普通冰箱（4℃）贮存。 微量元素母液配制时，由于培养基中微量元素用量甚微，浓度为0.l~0.0001mg/l，所以母液浓度宜为原培养基配方中用量的100倍。一般将微量元素分别称量溶解，定容在1000 ml容量瓶中后贮存在一个细口瓶中，但也有将KI分别配制，单独 贮存在棕色瓶中。配好后，贴上标签，贮存于4℃冰箱。 培养基中的铁盐母液一般单独配制。目前常用的铁盐为硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二纳的螯合物。称取Na2-EDTA 3.73 g，FeSO4 ·2H2O 2.78 g，分别溶解（可加热），然后混合定溶于1000 ml容量瓶中。转入细口瓶，贴上标签，4℃冰箱中保存。 氨基酸和维生素等有机成分母液可配制时，母液浓度通常为原培养基配方的50 倍（或100）。常用氨基酸和维生素为水溶性物质，可用蒸馏水溶解，但叶酸要 先用少量稀碱或稀氨水溶解，然后用重蒸馏水定容。配制好后，转入细口瓶，贴上标签，-20℃（或4℃）冰箱中保存。 植物生长调节物质如生长素类和细胞分裂素类可以根据需要，灵活设计其浓度，一般为0.01、0.1、0.2、0.5或1 mg/l。如配0.5 mg/l NAA母液，称25 mg NAA 溶于50 ml重蒸馏水，或50 mg的NAA定溶于100 ml重蒸馏水中。IAA要用棕色瓶暗中贮存，以免光照分解。常用植物生长调节物质和维生素特征见表3。生长素为醇溶性物质，配制时，应用少量95%酒精或稀碱溶解，然后用重蒸馏水溶解定容；细胞分裂素应先用少量1 N NaOH或HCl溶解，然后用重蒸馏水定容。配制好的母液放置在4℃普通冰箱中备用。这些母液保存时间不宜过长，当出现沉淀、浑浊及霉菌团时，应重新配制。 .. . 椰乳中因含有许多种细胞分裂素物质，如KT类似物（9-β-D-ribofuranosylzeatin）、玉米素及玉米素核糖甙等，有时可与细胞分裂素相互代替。采集到椰子时，应检查其汁液（保证没有变质），煮沸，滤纸过滤掉蛋白，高温高压消毒，贮存在-20℃

实验1 培养基母液的配制

实验1、培养基母液的配制 一、实验目的 1、了解植物组织与细胞培养基的基本类型和组成。 2、掌握植物组织与细胞培养基各种母液的配制方法。 二、实验原理 离体植物组织和细胞的生长、分化所需要的营养物质都是由培养基供给。基本培养基通常包括大量元素、微量元素、有机物以及糖和水，完全培养基是在基本培养基的基础上，附加植物生长调节剂、椰乳、香蕉汁、番茄汁等天然提取物。迄今为止，基本培养基的配方已有几百种，但较常用的有一二十种，如MS、White、N6、B5等。 实验用的培养基一般是先配成10-100倍的母液，用时再按配方配制培养基。 二、实验用品 1、实验器材：冰箱、电炉、电子天平、移液管、量筒、烧杯（1000mL、500mL、50mL）、容量瓶、玻璃棒、试剂瓶（1000mL）、标签纸等。 2、实验试剂：MS培养基配方中的19种试剂，2,4-D，KT，NaOH，HCl，95%乙醇，HgCl2，次氯酸钠，蒸馏水等。 三、实验方法 1、大量元素母液的配制 按表1-1计算并称取各试剂，用蒸馏水依次溶解，最后定容到1000mL，即为10倍的大量元素母液，倒入试剂瓶，贴好标签，保存于4℃冰箱里。 表1-1 MS培养基大量元素母液试的配制 注意1: ①称取量的值（mg）=规定量(mg/L)×扩大倍数×母液体积(L)

②每称量一种试剂，都要在备注栏中相应的部分做好标记，比如写上日期和划出“√”。注意2： ①为避免沉淀现象发生，应将Ca 2+、SO42-、Mg 2+和H 2PO 4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合； ②CaCl 2·2H 2O 要在最后单独加入，在溶解CaCl 2·2H 2O 时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的CO 2，以防沉淀。另外，CaCl 2·2H 2O 放入沸水中易沸腾，操作时要防止其溢出。 ③如遇沉淀，缓慢加入（注意搅拌）1mol/L 的Hcl 将其溶解。 2、微量元素母液的配制 按表1-2计算并用分析天平称取各试剂，用蒸馏水依次溶解，最后定容到1000mL ，即为100倍的微量元素母液，倒入试剂瓶，贴好标签，保存于4℃冰箱里。 表1-2 MS 培养基微量元素母液的配制 3、铁盐母液的配制 MS 培养基硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液。配制时，按照表1-3的数据称取，分别用蒸馏水加热搅拌溶解至沸腾，然后将二者混合，磁力搅拌器搅拌冷却至室温。棕色试剂瓶储存，贴好标签。再冷藏。 表1-3 MS 培养基铁盐母液的配制

MS培养基母液的配制、培养基制备及灭菌

MS培养基母液的配制、培养基制备及灭菌 一、实践目的 通过本实训，学会配制大量元素、微量元素、铁盐、维生素、生长调节剂等培养基母液。通过MS固体培养基的配制，掌握配制培养基的基本技能。通过对培养基和培养用具的灭菌，掌握高压蒸汽灭菌和干热灭菌的一般操作技术。 二、实践用具与材料 移液管、电炉、PH试纸、培养瓶、标签、铅笔、量筒、烧杯、容量瓶、广口瓶、玻棒、电子天平、托盘天平、棉花、报纸等用具。 硝酸铵、硝酸钾、EDTA、硫酸亚铁、甘氨酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、IAA、BA等药品、琼脂、蔗糖、蒸馏水、0.1mol/L的NaOH、0.1mol/L的HCL、95%酒精 三、实践学时与场地 10学时，植物组培实验室。 四、实践内容 （一）三角瓶棉塞的制作 棉塞的作用有：一是防止杂菌污染，二是保证通气良好。 要求：形状，大小，松紧适度 制作：（1）取一大小适当的纱布，将其中心铺于三角瓶口，任其自然下垂至外壁，用玻璃杯将纱布向瓶内推进，至棉塞所需长度，握住瓶壁及纱布，取适量棉花向内填塞并压紧（2）将棉塞尾部加适量棉花并压紧，使其略大于瓶口，收紧尾部纱布，并用棉线扎进，剪去多余线头和纱布，棉塞制作完毕 （3）使用时，再用牛皮纸或二层报纸包扎好 （二）培养基母液的配制 母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍的溶液。 优点：（1）保证各物质成分的准确性。（2）便于配置时快速移取。（3）便于低温保藏。 1、步骤 ⑴测定各类母液保存容器容量，记录。 ⑵根据记录设计各种母液所配浓度倍数和制培养基时取用量 ⑶计算各种药品所需用量

⑷称量药品 大量元素等大于0.1g用托盘天平称量，微量元素等小于0.1g用电子天平称量。 ⑸溶解 ⑹定容 ⑺写上标签 ⑻装瓶 将配制好的母液分别装入试剂瓶中，贴好标签，注明各培养基母液的名称、浓缩倍数、日期。注意将易分解、氧化的溶液，放入棕色瓶中保存。 （9）冰箱保存。 2、母液配方 MS培养基配方=见教材 ⑴MS大量元素母液（10X） 称10升量溶解在1升蒸馏水中。配1升培养基取母液100ml。 ⑵MS微量元素母液（100X） 称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。

HGZ培养基配制

表1 经修改的HGZ-145培养基配方 Tab.1 The components of the amended HGZ -145 culture medium 常量元素 含量（g/L ） 微量元素 含量（g/L ） NaNO 3 0.2（0.4*） HBO 3 0.00286 KNO 3 0.051 MnCl 2·4H 2O 0.00181 K 2HPO 4 0.049 ZnSO 4·7H 2O 0.000222 MgSO 4·7H 2O 0.075 Na 2Mo 4·2H 2O 0.000391 Na 2CO 3 0.02 CuSO 4·5H 2O 0.000079 Ca(NO 3)2·4H 2O 0.059 Fe-EDTA 0.000932 NH 4Cl(NH 4Cl- EDTA) 0.0391** *：共培模拟条件下，NaNO 3的密度。 **: NH 4Cl(NH 4Cl- EDTA)与Fe-EDTA 配置的方法参照文献叶居新等（1999）。 根据上述培养基配方，配好每一种常量营养盐类1000倍的浓缩储备液。同时配制微量营养混合盐类1000倍的浓缩储备液TMS （Trace Metal Solution ）。在900ml 蒸留水中依次加入各储备液1ml ，添加顺序为：NaNO 3(10ml)→KNO 3→K 2HPO 4→MgSO 4·7H 2O →Na 2CO 3→Ca(NO 3)2·4H 2O →NH 4Cl(NH 4Cl- EDTA)→Fe-EDTA →TMS 。每加入一种营养盐必须充分摇动容量瓶，使混合均匀后再加入下一种。

表2 HGZ-145培养基母液配制方法 常量元素 母液(各 100ml) 用量 微量元素 母液（共1000ml ） 用量 NaNO 3 200(400)/1L 10ml HBO 3 2.86g 1ml KNO 3 5.1g/100ml 1ml MnCl 2·4H 2O 1.81g 1ml K 2HPO 4 4.9g/100ml 1ml ZnSO 4·7H 2O 0.222g 1ml MgSO 4·7H 2O 7.5g/100ml 1ml Na 2Mo 4·2H 2O 0.391g 1ml Na 2CO 3 2 g/100ml 1ml CuSO 4·5H 2O 0.079g 1ml Ca(NO 3)2·4H 2O 5.9 g/100ml 1ml NH 4Cl(NH 4Cl- EDTA) ：取 3.9g NH 4Cl 和0.51g EDTA-Na 溶于90ml 蒸馏水中，用浓NaOH 调pH 值至8.5，稀释至100ml 。 1ml Fe-EDTA ：0.932取FeC130.90lg ，溶于50ml 1mol/L HC1中。取该溶液1ml ，加入1ml 0.1mol/LEDTA-Na ，稀释至100ml ，其pH 值为6．8。 1ml 根据上述培养基配方，配好每一种常量营养盐类100倍的浓缩储备液。同时配制微量营养混合盐类1000倍的浓缩储备液TMS （Trace Metal Solution ）。在900ml 蒸留水中依次加入各储备液1ml ，添加顺序为：NaNO 3(10ml)→KNO 3→K 2HPO 4→MgSO 4·7H 2O →Na 2CO 3→Ca(NO 3)2·4H 2O →NH 4Cl(NH 4Cl- EDTA)→Fe-EDTA →TMS 。每加入一种营养盐必须充分摇动容量瓶，使混合均匀后再加入下一种。

ms培养基配制方法

MS培养基的配制 2005-12-22 23:49:26 阅读7485次 植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。MS培养基的配制包括以下步骤。 培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。这样每次使用时，取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀释，制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。 大量元素(母液Ⅰ) mg／L NH4NO3 33 000 KNO3 38 000 CaCl2·2H2O 8 800 MgSO4·7H2O 7 400 KH2PO4 3 400 微量元素(母液Ⅱ) KI 166 H3BO3 1 240 MnSO4·4H2O 4 460 ZnSO4·7H2O 1 720 Na2MoO4·2H2O 50 CuSO4·5H2O 5 CoCl2·6H2O 5 铁盐(母液Ⅲ) FeSO4·7H2O 5 560 Na2-EDTA·2H2O 7 460

有机成分(母液Ⅳ) ⅣA 肌醇20 000 ⅣB 烟酸100 盐酸吡哆醇(维生素B6) 100 盐酸硫胺素(维生素B1) 100 甘氨酸400 以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。 上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。其中，母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。 母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5 5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。 各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。 MS培养基中还需要加入2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)、萘乙酸(NAA)、6 苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质，并且分别配成母液(0 1 mg/mL)。其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg，将2，4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶，将6BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L 的NaOH溶液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100 mL，即得质量浓度为0 1 mg/mL的母液。 配制培养液用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量：母液Ⅰ为50 mL，母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB各5 mL。再取2，4 D 5 mL、NAA 1 mL，与各种母液一起放入烧杯中。 配制培养液时应注意：①在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制；②用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次；③量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以免出错。 溶化琼脂用粗天平分别称取琼脂9 g、蒸糖30 g，放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入蒸馏水750 mL，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸馏水定容至1 000 mL，搅拌均匀。 需要注意的是，在加热琼脂、制备培养基的过程中，操作者千万不能离开，否则沸腾的琼脂外溢，就需要重新称量、制备。此外，如果没有搪瓷量杯，可用大烧杯代替。但要注意大烧杯底的外表面不能沾水，否则加热时烧杯容易炸裂，使溶液外溢，造成烫伤。

植物组织培养母液的配制与保存

植物组织培养母液的配制与保存 目的 熟练掌握植物组织培养中各种成分或成分组的母液（比需要量大若干倍）的配制方法。实验仪器 电子天平（感量为0.0001g）、一般天平（感量为0.1g）、烧杯100mL 50 mL 25mL）、量筒（1000 mL 100 mL 50 mL）、容量瓶200 mL 100 mL 50 mL 25 mL）、细口瓶（500 mL 200 mL 100 mL 50 mL）、药勺、玻棒、电炉等。 实验试剂 按培养基配方准备 实验原理 一）培养基的组成 培养基是植物组织培养中的―血液‖，血液的成分及其供应状况直接关系到培养物的生长与分化，因此了解培养基的成分、特点及其配制至关重要。自然状态下生长的绿色植物由于自身能进行光合作用，并且能合成植物生长发育所需的几乎所有有机成分，加上土壤中含有较全面的无机和有机营养成分，所以只需在适当的时候施加少量的无机和有机肥（复合成分），植物就可良好的生长。目前所使用的培养基有10余种之多，大部分都是在前人研究的基础上经过分析综合和改进而成的。例如，White培养基是Uspenski和Uspenskaia（1925）的藻类培养基演化的结果，被广泛用于根的培养；Cautheret培养基是建立在Knop营养液(1865)基础上的。以后的培养基大部分是在White和Cautheret培养基的基础上改进而成。就目前所使用的各种培养基而言，可将它们的成分划分为几大类，常用的有MS、B5 、和White培养基等。 1．水水是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。配制培养基母液时要用蒸馏水，以保持母液及培养基成分的精确性，防止储藏过程发霉变质。大规模生产时可用自来水。但在少量研究上尽量用蒸馏水，以防成分的变化引起不良效果。 2．无机营养成分： 大量元素，主要包括氮、磷、钾、钙、镁和硫六种 微量元素：培养基的微量元素主要包括铁（Fe）、锰（Mn）、铜（Cu）、锌（Zn）、氯（Cl）、硼（B）和钼（Mo）等。这些元素有的对生命活动的某个过程十分有用，有的对蛋白质或酶的生物活性十分重要，有的是参与某些生物过程的调节。 3. 有机营养成分（包括维生素，氨基酸及其它有机物质等） 维生素：硫氨素（维生素B1）盐酸吡哆醇（维生素B6）和烟酸在部分培养基中还添加维生素BX（氨酰苯甲酸）、维生素C（抗坏血酸）、维生素E（生育酚）、维生素H（生物素）、维生素B12（氰钴胺酸）、维生素BC（叶酸）、维生素B2（核黄素）、泛酸钙和氯化胆碱等维生素。 氨基酸：甘氨酸（氨基乙酸）和肌醇（环己六醇）也是一些培养基的添加成分。 其他：在某些植物或某些组织的培养中还加有水解乳蛋白、水解酪蛋白、椰子汁、玉米胚乳、麦芽浸出物、西红柿汁和酵母浸出物等。这些可能对某些植物或植物的某些代谢过程有重要作用，如肌醇主要以磷酸肌醇和磷脂酰肌醇的形式参与由Ca介导的信号转导。 4. 碳水化合物所有的植物组织培养基都需要有碳水化合物作为能源，用作碳源的碳水化合物通常为蔗糖或D-葡萄糖，用量通常为2%-4%，高者可达5%，亦可用市售的白糖所

技巧·培养基母液配制方法之大量元素母液导读本文以配制MS培养

技巧·培养基母液配制方法之大量元素母液 导读：本文以配制MS培养基配方为例，分为上下两部分，上半部分讲解培养基各种母液的配制方法，下半部分讲解固体培养基的配制方法。母液主要分为：大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、铁盐母液、植物生长调节剂母液。 材料与用具 1. 药品与试剂 配制MS培养基母液所需的无机盐及有机物（见最后面的MS培养基配方表格）；植物生长调节剂（植物激素）：IAA、IBA、NAA、2，4-D、6-BA、KT；95% 乙醇；1mol/L氢氧化钠，1mol/L盐酸；蒸馏水（或去离子水）。 2. 仪器与用具 电子分析天平（感量0.001g）、普通天平（感量0.1g），烧杯（100mL、500mL、1000Ml），量筒（100mL），移液管（1mL、5mL、10mL）,容量瓶（250mL、500mL、1000mL），棕色广口瓶（100mL、500mL、1000mL），水浴锅、磁 力搅拌器、冰箱、药勺、标签纸、铅笔等。 配制大量元素母液的方法与步骤 将MS培养基配方中的各大量元素的化合物，按其所规定量的10倍分别在普通 天平上称重，如下表：

再分别用100mL烧杯加蒸馏水将其溶解，待充分溶解后将它们按顺序依次移入1000mL 容量瓶中，并加蒸馏水定容至 1000mL；此时混合液若出现白色沉淀则母液配制失败，若清澈透明则已配制成功。然后将已配制好的大量元素母液移入广口瓶中，并贴上标签（标记母液名称、浓缩倍数、配制日期及以后配制1L培 养基时应移取的量）。最后将母液放入冰箱内保存备用。 注意事项 1、配制大量元素母液时，某些无机成分如 Ca2+、SO42－、Mg2+和 H2PO4－等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少 量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。特别应将Ca2+、SO42－、Mg2+和 H2PO4－等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。 2、CaCl2·2H2O 要在最后单独加入，在溶解 CaCl2·2H2O 时，蒸馏水需加热沸腾，除去水中的CO2，以防沉淀。另外，CaCl2·2H2O放入沸水中易沸腾，操作时要防止其溢出。

MS培养基母液的配制与保存(1)

MS培养基母液的配制与保存 一、目的要求 1、通过MS培养基母液的配制，掌握配制培养基母液的基本技能； 2、掌握培养基各种母液的保存方法。 二、仪器与用具 1、仪器：各类天平、磁力搅拌器、冰箱； 2、用具：烧杯、量筒、玻璃棒、试剂瓶、标签； 3、试剂：95%酒精，0. 1 -1N NaOH，0.1-1N HCl，配制MS培养基所需的各种无机物、有 机物，蒸馏水。 三、方法步骤 （一）母液的配制 母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍。 优点：（1）保证各物质成分的准确性； （2）便于配置时快速移取； （3）便于低温保藏。 1、MS大量元素母液（10×） 称10升量溶解在1升蒸馏水中。配1升培养基取母液100ml。 化学药品1升量10升量（10×）50升量（50×） ①NH4NO31650 mg 16.5g ②KNO31900 mg 19.0g ③CaCl2·2H2O （CaCl2）440 mg （） 4.4g ④MgSO4·7H2O（MgSO4）370 mg （） 3.7g ⑤KH2PO4170 mg 1.7g 2、MS微量元素母液（100×） 称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。 化学药品1升量10升量100升量（100×） ① MnSO4·4H2O （MnSO4·H2O） 22.3mg （21.4 mg） 223mg （214 mg） ②ZnSO4·7H2O8.6 mg 86mg ③H3BO3 6.2 mg 62 mg ④KI 0.83 mg 8.3 mg ⑤Na2MoO4·2H2O0.25 mg 2.5mg ⑥CuSO4·5H2O0.025 mg 0.25mg ⑦CoCl2·6H2O0.025mg 0.25mg 注意：CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量（0.25 mg×10=2.5 mg）或100倍量（25 mg）称取后，定容于100ml水中，每次取10ml或1ml，即含0.25 mg的量。

母液的配制及培养基的制备

实验一母液的配制及培养基的制备 一、实验目的 （1）掌握配制培养基母液的基本技能 （2）掌握培养基各种母液的保存方法 （3）掌握高压蒸汽灭菌锅的操作步骤及方法 （4）掌握各种培养基的组成和配制 （5）掌握培养基消毒灭菌的方法 二、实验原理 培养基是外植体生长的营养物质，通常包括大量元素、微量元素（无机盐类）、维生素、氨基酸、糖和水。至今，基本培养基的配方有几百种，但较常用的仅有一二十种，一是基本培养基如White、Nirsch、Blaydes、N6、B5、NT等；二是完全培养基，即在基本培养基的基础上，根据各种不同实验要求，附加一些物质，如各种植物生长调节剂：BA、ZT、KT、2,4-D、NAA、IAA、IBA、GA等，以及其他复杂的有机附加物，包括有些成分尚不完全清除的天然提取物，如，椰乳、香蕉汁、酵母提取物等。 培养基的成分中，除上述各种试剂外，若加入适量凝固剂（如琼脂、冷凝胶），则构成固体培养基，不加凝固剂，则为液体培养基。固体培养基和液体培养基各有优缺点：固体培养基所需设备简单，使用方便。培养物仅能吸收接触培养基部分及周围小部分营养，不能充分利用培养容器中的养分，而且培养物生长过程中，排除的有害物质积累，造成自我毒害，必须及时转移。液体培养基则需要摇床，转床之类的设备，通过振荡培养，给培养物提供良好的通气条件，营养供应周期化，有害物质能在一定程度上稀释有利于外植体的生长。 配制培养基的水应为纯水或单蒸馏水。化学药品用分析纯或化学纯，称量须准确。对于常用基本培养基的配制，可分别配制成10倍或100倍的混合母液，贮存于冰箱中，用时再按比例稀释混合。 配制混合母液，要根据药剂的化学性质，分别配成混合液。通常对大量无机盐类，原则上可以混在一起，配成10倍浓度的母液，但若配成100倍浓度，在

实验1 培养基母液的配制

实验1 培养基母液的配制 实验目的 二、实验用具 o．5二尝二二·揣二二二：蕊；乳誓 1004、50n尢、25毗)、细口瓶(1阗0址)。药勺、小玻璃棒。 三、实验药品 按培养基配方准备 四、培养基母液的配制 …(一)大量元素母液的配制无机盐中大量元素母液，按照培养基配方的 尸苎，把各种化合物扩大10倍，用感量为0．01g的扭力天平，分别用50mL 苎杯称量，用重蒸馏水溶解。以佃配方为例(表1)。溶解时在每只烧杯中加 A30-40n正重蒸馏水，置于酒精灯上，加热使其溶解(注意温度不可过高， 甲～70、)。溶解后，在10叩证量筒中，混合定容于1阗0n厶重蒸馏水中。 苎混苎定容时，必须最后加入氯化钙，因为氯化钙与磷酸二氢钾，形成磷酸三苎：磷酸钙之类不溶于水的沉淀。将配好的混合液，倒人细口瓶中，贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时，每配1咖n止培养基取此液1mn尢。 …，(二)微量元素母液的配制无机盐中微量元素母液，按照培养基配方用 §的1m倍，用感量为0．0叩1g的电光分析天平，分别用50毗烧杯称量，用苎苎苎水溶解，以肥配方为例(表2)。溶解时，在每只烧杯中加入重蒸痴汞 A毫升(切勿加多)。在酒精灯上缓缓加热以增加溶解速度。待全部溶解后， 混合定容于100mL容量瓶中保存于冰箱中，配制培养基时，每配制1 000毗 培养基取此液1mLo KN％ ~-hN03 Ca02'2H20 Mg,~)4'7H20 KH：P03 化合物名称 MnS04．4H20 ZnS04．7H20 CuS04．5H20 ~3B03 Na2M004．2HzO Ⅺ COCl2．6H20 定容于1 000mL重蒸馏 水中，最后加入Caf：12·2H20 每升培养取此液100吐 (三)铁盐母液的配制铁盐不是都需要单独配成母液，如柠檬酸铁，只 需和大量元素一起配成母液即可。目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液。这种螯合物使用起来方便，又比较稳定，不易发生沉淀。这种母液的配制方法是：用感量为0．01g扭力天平称取5；57g 硫酸亚铁(FeS04．7U20)和7．45g乙二胺四乙酸二钠(Na：—EDTA)，分别用 蒸馏水溶解。定容于1 000mL蒸馏水中，常温保存。配制培养基时，每配制