wnt信号通路与肾纤维化参考模板

wnt信号通路与肾纤维化

陈定国(综述)

【摘要】肾纤维化是各种肾脏疾病进展到慢性肾功能衰竭的共同途径和主要病理基础。研究发现肾纤维化过程中存在Wnt信号传导通路，并且在肾纤维化的发生发展中起重要作用。该文就目前关于wnt

信号传导通路与肾纤维化研究的最新进展作一综述。

【关键词】Wnt通路；肾纤维化

肾纤维化是所有肾脏疾病发展到终末期肾功能衰竭的共同途径，是慢性肾功能衰竭进行性发展过程中的始动因素。Wnt信号传导通路参与细胞生长、分化和凋亡等过程并且在维持组织器官内环境稳定中发挥重要作用。近年来研究证实Wnt信号传导通路在肾纤维化的发生发展中亦起重要作用。

1 Wnt 信号通路

目前共发现Wnt蛋白有19种：Wntl、Wnt2、Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、 Wnt4、Wnt5a，、Wnt5b、Wnt6、Wnt7a、Wnt7b、Wnt8a、Wnt8b、Wnt9a、

Wnt9b、Wnt10a、Wnt10b、wntll及Wntl6[1]

。是一类分泌型糖蛋白，

通过自分泌或旁分泌发挥作用，Port和Basler [2]

研究发现疏水性Wnt

蛋白可以修饰成可溶性蛋白从而进行远距离调控。Wnt蛋白及其受体、调节蛋白等组成的复杂信号传导通路，包括经典通路和非经典通路。目前研究比较清楚的是Wnt／β3-catenin通路，即经典通路。该通路是由Wnt蛋白家族、卷曲蛋白(Frizzled)／低密度脂蛋白受体相关蛋白、胞质内的Dishevelled蛋白、β-catenin、糖原合成激酶3

β(glycogen synthase kinase3β，GSK-3β)、支架蛋白(axin)和T 细胞因子(T cellfactor，TCF)／淋巴样增强因子(1ymphoid enhancingfactor，LEF)转录因子家族等组成。β-catenin在该信

号通路中处于中心位置，当没有Wnt通路时，GSK-3β磷酸化β

-catenin残基，将β-catenin降解，维持胞内β-catenin稳定。当经典通路被激活，GSK-3β活性受抑制使β-catenin不被磷酸化和降解[3-4]

。当细胞内β-catenin达到一定水平，即与TCF／LEF结合，从而激活Snail、Twist等靶基因，实现某些特定基因表达的增强或者减弱。非经典通路不依赖于内源性β-catenin的积累，主要包括三条通路；

Wnt／JNK通路、Wnt／Ca 2+

途径、调节纺锤体定向和不对称细胞分裂

通路"[5]

。

2 Wnt 信号通路与肾纤维化

创伤、感染、炎症、血循环障碍以及免疫反应等多种致病因素刺激肾脏，使其固有细胞受损，释放细胞因子和炎性介质，促进肾脏固有细胞转化成肌成纤维细胞，即上皮间充质转化

(epithelial-mesenchymaltransition，EMT)。研究表明，肌成纤维

细胞来源于肾小管上皮细胞向间充质细胞转化[6]

，虽然此过程在肾

脏体内的直接证据仍存在争议[7-9]

。引，但是wnt通路的确出现在组

织损伤反应中，并在肾纤维化进展中起着重要作用[10]

。EMT是肾纤

维化形成的关键环节，只要不让固有细胞转化为肌成纤维细胞，或通过治疗使受损的细胞向正常细胞逆转，肾纤维化的进程就被阻断。研究表明Wnt信号通路相关蛋白通过对EMT的调控而与肾纤维化进展密

切相关。

2．1 wnt 信号通路相关蛋白在肾纤维化疾病中的表达及调节在输尿管完全梗阻大鼠肾脏纤维化模型中，Nguyen 等[10]首次发现Wnt4和Wntll 表达，其中wnt4在梗阻后48h 出现表达，且持续升高达4周，而Wntll 在梗阻后出现一过性升高后恢复正常。且Wnt4与上皮细胞标志物E 钙黏蛋白、角蛋白变化呈负相关，与肾纤维化改变呈正相关，这些研究表明Wnt4可能通过调节EMT 参与肾纤维化。

随后，Surendran 等[11]在单侧输尿管梗阻模型(UUO)大鼠中，发现间质成纤维细胞wnt4高水平表达且与I 型胶原及α-平滑肌肌动蛋白的高表达呈正相关；Wnt4在体外可以诱导成纤维细胞β-catenin 进入细胞核内。此外，他们还发现：在另外两种实验模型中，即应用叶酸灌注制成的梗阻模型及应用针直接刺伤肾组织的损伤模型，wnt4在损伤的小管间质处均出现了重新表达，同时损伤的小管间质也高表达I 型胶原蛋白和仅一平滑肌肌动蛋白，揭示Wnt4参与肾间质纤维化。 2009年He 等[12]在UUO 小鼠肾脏对wnt 蛋白、受体及拮抗剂进行检测发现，在正常小鼠肾脏Wnt 蛋白及其受体(Fz)均有一定程度表达，表明Wnt 家族成员在维持组织内环境稳定方面发挥重要作用。当单侧输尿管完全结扎后，Wnt 信号通路相关蛋白除Wnt5b 、Wnt8b 和Wnt9b 外，其他wnt 家族成员的表达均上调。其中Wntl 、Wnt7a 和Wnt7b 表达相似，在梗阻后第7天出现最高表达，随后下降；Wnt2b 、Wnt3、Wnt5a 、Wnt9a 和Wntl6在梗阻前7天出现升高，而后稳定表达不变；余8种Wnt 家族成员在输尿管梗阻期间持续升高，认为Wnt 家族多个蛋白协同作

用促进肾纤维化。针对Wnt家族蛋白的定位仍不清楚，因其缺乏特异性抗体进行免疫组织化学检测，目前仅知wnt4表达在集合管及成纤维细胞。另外实验中还发现在UUO小鼠中Fz受体3、10明显上调，β

-catenin在细胞质和肾小管上皮细胞的细胞核大量积累证明经典的Wnt通路被激活，其表达上调与wnt通路靶基因(c—Myc等)表达上调密切相关。说明肾组织发生纤维化病变时Wnt经典通路被激活促进肾间质纤维化。

Wnt信号传导通路除在梗阻性肾病后参与肾间质纤维化外，其在肾移植及糖尿病肾病等多种造成肾纤维化疾病中发挥作用。研究发现，肾移植患者移植后3个月，成纤维细胞表型标志物波形蛋白表达

增高，并伴有β-catenin由细胞膜向细胞质转移的现象[13]

。进入细

胞核内的β-catenin大大增加，与转录因子TCF／LEF家族成员结合，

促进EMT的发生[14]

。vonToeme等

[15]

在肾移植小鼠模型中发现除Wntl

和Wntl6外，其余Wnt蛋白在肾脏均有表达，其中Wnt6和Wnt7a表达增加，Wnt7b表达下调，Wnt2b、Wnt8b和Wnt10a与对照组相比明显减少，LEFl在肾移植早期开始升高，并且持续升高，TCF-1在各个时间点表现进行性下调，β-catenin主要在肾小管上皮及毛细血管内皮细胞内聚集，Wnt通路靶基因激活进一步证实Wnt通路被激活从而促进肾移植后的肾纤维化。

在对2型糖尿病db／db小鼠的研究中发现，磷酸化的GSK-3β(p-GSK-3β)在肾皮质表达明显增高，并与层连蛋白及纤连蛋白表达

水平相关。Mariappan等[16]

应用高糖及高胰岛素诱导肾小管上皮细

胞外基质蛋白合成，发现GSK-3β在基质蛋白合成进程中起到促进作用并且参与肾小管上皮细胞转分化。Cohen 等[17]应用微阵列数据分析发现，经典Wnt 通路调节异常会促进糖尿病肾病的肾纤维化进程。 Wnt 信号传导通路并不是独立存在并调控肾纤维化，其与多种因子及其他通路相互作用。Wnt ／β-catenin 信号通路可以调节E 钙黏蛋白抑制因子snail 的表达，Wnt ／[β-catenin 通路激活后snail 磷酸化受到抑制，snail 蛋白水平和活性增强，进而E 钙黏蛋白表达下降，上皮细胞发生转分化改变[18]。Wnt ／[β-catenin 途径还可通过对基

质金属蛋白酶MMP7表达的调节参与肾小管间质纤维化进程[19]。研究

显示，wnt 与其他信号通路相互整合，促进EMT 的发生发展过程。在正常组织损伤修复及纤维化进程中Hedgehog 通路发挥重要作用，其靶基因Megalin 属于低密度脂蛋白受体相关蛋白家族成员，与Wnt 结合 形成复合物参与调控肾纤维化[20]。另外Wnt ／β-catenin 信号通路与RTK ／RaS ／MAPK 通路及PI3K ／ILK ／PKB 通路相互作用共同抑制GSK-3β活性而上调snail ，降低E 钙黏蛋白的表达，促进EMT 的发生

[21-22]。wnt 通路与肾纤维化的重要调节通路TGF-β存在交互通话彼

此作用

[23-24]。Notch 通路的激活与Wnt 通路共同调控肾小球疾病的进展[23-25]。研究表明，wnt 通路在调节纤维化炎症反应过程中与Toll

样受体及NF-KB 通路存在相互作用[26-27]

另外，Wnt 信号通路对肾纤维化的调控作用还依赖于wnt 调节蛋白，wnt 调节蛋白根据作用机制的不同分为两类：一类是Dickkopf 家族(DKK)，另一类包括分泌性卷曲相关蛋白(sFRP)家族蛋白、Wnt

抑制因子-1和Cerberus。sFRP能与Wnt相互作用，阻止它与Fz结合或与Fz结合但形成无功能复合物，从而阻断Wnt信号，抑制EMT。

He等[28]

研究发现：肾梗阻性损伤后，Wntl增多，同时β

-catenin和PAI-1(纤溶酶原激活剂抑制物)的表达增多，PAI-1被证实为Wnt／β-catenin通路的下游基因，PAI参与炎症反应过程并促进肾纤维化，认为PAI-1可能调节wnt通路的促纤维化过程。

Wnt／β-catenin还被氧化还原反应调控，核氧化还原蛋白与Dvl相互作用，过度表达的核氧化还原蛋白可以选择性地抑制Wnt／β-catenin，通过RNAi沉默核氧化还原蛋白可以导致TCF的激活，促进

细胞的增殖和纤维化的进展[29]

。

2．2 Wnt信号通路在肾纤维化中的应用随着对wnt信号传导通路在肾纤维化发生发展中作用的不断深入研究，wnt信号传导通路中关键蛋白及靶基因在肾纤维化中的表达逐渐清楚，因此针对该通路的特异性靶点设计抗肾纤维化治疗成为可能。目前研究比较多的是通过wnt拮抗剂来阻断信号通路。细胞外的wnt信号通路的拮抗剂可以分为

两类：即DKK家族和sFRP家族。He等[12]

研究表明DKKl可以抑制小鼠

UUO模型中β-catenin的聚集及靶基因的激活，并且还可以阻止成纤维细胞的激活和胶原蛋白的累积。研究表明，肾损伤可以致肾小管上皮细胞β-catenin信号活化，将外源sFRP4蛋白注射入小鼠腹腔内，

可以抑制成纤维细胞的功能使肾纤维化程度减轻[30]

。目前还未见

sFRPl和sFRP2在肾纤维化中的研究报道，但Dahl等[31]

研究表明

sFRPl可以通过抑制wnt信号通路来缩小肿瘤的体积，Mirotsou等

[32]

应用sFRP2

减轻了心肌纤维化，故推测sFRPl和sFRP2可能是肾纤维化治疗的新靶点。

肾素血管紧张素系统在慢性肾脏疾病中发挥重要作用，其主

要通过血管紧张素Ⅱ起作用[33]

。因为TGF-β通路和Wnt／β

-catenin信号通路存在交互通话，而TGF-B通路依赖于血管紧张素Ⅱ发挥功能，故阻断肾素血管紧张素系统很有可能阻断Wnt信号通路，从而抑制肾纤维化。但目前血管紧张素Ⅱ是否在肾纤维化中影响wnt 信号通路，以及肾素血管紧张素系统阻断剂对肾脏的保护作用是否缘

于其对wnt信号通路的调节仍未明确阐述[34]

。另外，β-catenin的

聚集依赖于氧化还原剂[35]

，故如果能阻止氧化反应就可以在β

-catenin水平上抑制Wnt信号通路。

综上所述，Wnt信号传导通路在肾纤维化发生发展中起重要作用，随着了解的深入，有望把Wnt信号传导通路作为抗肾纤维化治疗的一个重要靶点，通过对该途径的干预，调整靶基因表达，使其恢复正常，这将是抗肾纤维化治疗的有效方法之一。

参考文献:

[1]chien AJ．Conrad WH．Moon RT．A Wnt survival guide：from flies to human disease．J Invest Dermatol。2009，129(7)：1614-1627．[2]Port F，Basler K．Wnt trafficking：new insights into Wnt maturation．secretion and spreading．Traffic，2010。11(10)：1265．1271．

肾脏纤维化的检测

新纤维化 为了更好的配合临床、服务患者，检验科对肾脏纤维化的检测进行了重新调整，新的项目如下。 -MG、尿NAG、尿GGT/尿Cr, 早上弃去晨尿，喝500ml水，60min 1.肾小管三项，包括尿β 2 后留尿，尽快送检。收费45元，当日出结果。 一、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C 半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cysstatin C，Cys C)又称胱抑素C，是一种低分子非糖基碱性蛋白。作为检测肾功能的一种新的内源性标志物，近年受到临床上的重视。它与目前临床上常用的反映肾小球滤过功能的指标，如菊粉清除率，同位素标记物清除率，内生肌酐清除率(Ccr)，血尿素氮(BUN)和血清肌酐(CR)等相比，具有独特的优点，稳定、可靠、方便。2004年美国FDA批准将它作为检测肾功能的指标之一。 Cys C作为一种测定肾小球滤过功能的理想的内源性标志物，有其独特的优点： (1) 人体内所有有核细胞均可持续合成，并分泌至细胞外液，如血液、脑脊液、精液中。这是因为编码Cys C的基因属“管家基因”，此基因能在几乎所有的有核细胞中持续、恒定的转录与表达，无组织特异性，故产生稳定。 (2)Cys C分子量小、带正电荷，能够自由通过肾小球滤过膜，在近曲小管几乎被完全重吸收，重吸收后被完全分解代谢，不再重新回到血液循环。 (3)特别是肾脏是清除循环中Cys C的唯一器官，并且肾小管也不分泌Cys C，因而血清Cys C浓度主要由肾小球的滤过功能决定，并且不受性别、年龄、炎症反应、肿瘤、肌肉活动、肌肉量、饮食摄人等因素的影响。因此是反映GFR比较理想的指标之一 (4)Cys C灵敏度高，与肾小球滤过功能相关性良好。许多临床观察证实，当肾功能轻度受损，CR变化不明显时，血清Cys C已增高。Laterza等详细总结24项对比观察结果，l5项研究证明检测肾小球滤过损伤，Cys C优于CR和Ccr。 Cystatin C的临床应用： 1.CysC是肾小球滤过率变化的敏感指标：CysC是应用前景较好的内源性测定GFR物质，大量研究证明Cys C与GFR的线性关系优于所有其他内源性的小分子蛋白质。特别是对早期或肾功能轻度损害的肾脏疾病，Cys C诊断肾小球滤过功能的的变化，其特异性和敏感度均显著优于肌酐。 2.肾移植时Cys C的改变：对于肾移植病人，移植后的肾脏可能会因为急性排斥反应而损伤，甚至导致移植失败。因此敏感而准确监测到GFR的变化，及早的诊断与治疗是非常重要的。Cys C作为一种理想的肾小球滤过率检验的内源性标志物，在肾移植后肾功能监测中的作用倍受关注。 3.急性肾功能损伤的诊断：目前，急性肾功能损伤(AKI)的实验室检查指标是沿用了近百年的肌酐，其诊断的灵敏度不理想。最近的研究表明，Cys C较肌酐可以早1.5天检测到AKI 肾功能的改变，成为急性肾功能损伤的一项重要早期指标。 4.肾脏纤维化的诊断：半胱氨酸蛋白酶是细胞外基质（ECM）的降解酶之一， Cys C通过抑制半胱氨酸蛋白酶的活性来抑制ECM的降解，从而参于了肾脏纤维化，成为诊断肾脏纤维化、判断纤维化程度的一个重要指标。 5.在监测儿童肾功能中的优势 血清肌酐的的浓度受肌肉容量的影响，很难准确反映儿童肾功的善。血清Cys C的浓度不受性别和肌肉容量的影响，也不受大多数药物和炎症、运动的影响，儿童在一岁后就达到成人水平，在监测儿童肾功能中有其独特优势。

大鼠肾纤维化模型

大鼠肾纤维化模型 肾积水(hydronephrosis)是指尿液从肾盂排出受阻，蓄积后肾内压力增高，肾盂肾盏扩张，肾实质萎缩，导致肾功能减退。梗阻性肾病其主要的病理生理改变是肾积水、肾盂及肾小管压力升高、肾间质水肿、炎性细胞浸润、肾间质内成纤维细胞增生、肾间质胶原蛋白聚集、肾间质增宽、肾小管萎缩，最终导致肾间质纤维化和肾单位减少，引起肾功能衰竭。 单侧输尿管梗阻是比较成熟的肾间质纤维化模型，结扎2周就可有成纤维细胞的增生和间质细胞外基质的生成。但是由于输尿管的结扎使患侧肾盂中的尿液不能外排，加上对侧肾脏的代偿作用，所以一般情况模型组血肌酐、尿素氮、NAG以及24h尿蛋白仅明显高于正常组，但还处于正常范围之内，同时对侧肾一般也无明显改变，而患侧肾脏组织中大量炎症细胞浸润、肾小管和间质的结构严重破坏以及肾间质纤维化，最后肾间质呈现广泛的纤维化，而肾小球几乎没有病变。因此单侧输尿管梗阻模型在研究肾间质纤维化方面使研究的靶点明确，有利于其病变机理及抗间质纤维化治疗的研究。 1.实验动物 SPF级Wistar大鼠，健康，雄性，体重为180g~200g 2.实验分组 实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。 3.实验周期 7d，14d，21d，28d 4.建模方法 1术前一晚禁食,自由饮水。 2称量大鼠，腹腔注射水合氯醛（15%）350mg/kg麻醉，剃毛固定后用碘酒及酒精擦拭手术区域。3在上腹中线偏左约3-4mm剪开腹壁，手术组分离出左肾输尿管。 4在靠近肾下极处结扎并分离输尿管，然后双结扎，在2个结扎中间剪断输尿管，逐层缝合肌层及腹壁，酒精清洁缝合处。待小鼠清醒后，将其放回洁净笼具后放回饲养室饲养，定期观察大鼠状态及死亡情况并做好记录。 5置于加热垫至其苏醒。假手术组不结扎输尿管，其余步骤相同。 6术后三天连续注射青霉素20万单位/天防止感染。 5.模型的评价 5.1 蛋白尿含量、尿NAG活性测定模型组术后2周、4周的24h尿蛋白含量以及尿酶NAG活性比正常组和假手术组明显上升。

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wnt信号通路与肾纤维化 陈定国(综述) 【摘要】肾纤维化是各种肾脏疾病进展到慢性肾功能衰竭的共同途径和主要病理基础。研究发现肾纤维化过程中存在Wnt信号传导通路，并且在肾纤维化的发生发展中起重要作用。该文就目前关于wnt 信号传导通路与肾纤维化研究的最新进展作一综述。 【关键词】Wnt通路；肾纤维化 肾纤维化是所有肾脏疾病发展到终末期肾功能衰竭的共同途径，是慢性肾功能衰竭进行性发展过程中的始动因素。Wnt信号传导通路参与细胞生长、分化和凋亡等过程并且在维持组织器官内环境稳定中发挥重要作用。近年来研究证实Wnt信号传导通路在肾纤维化的发生发展中亦起重要作用。 1 Wnt 信号通路 目前共发现Wnt蛋白有19种：Wntl、Wnt2、Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、 Wnt4、Wnt5a，、Wnt5b、Wnt6、Wnt7a、Wnt7b、Wnt8a、Wnt8b、Wnt9a、 Wnt9b、Wnt10a、Wnt10b、wntll及Wntl6[1] 。是一类分泌型糖蛋白， 通过自分泌或旁分泌发挥作用，Port和Basler [2] 研究发现疏水性Wnt 蛋白可以修饰成可溶性蛋白从而进行远距离调控。Wnt蛋白及其受体、调节蛋白等组成的复杂信号传导通路，包括经典通路和非经典通路。目前研究比较清楚的是Wnt／β3-catenin通路，即经典通路。该通路是由Wnt蛋白家族、卷曲蛋白(Frizzled)／低密度脂蛋白受体相关蛋白、胞质内的Dishevelled蛋白、β-catenin、糖原合成激酶3

β(glycogen synthase kinase3β，GSK-3β)、支架蛋白(axin)和T 细胞因子(T cellfactor，TCF)／淋巴样增强因子(1ymphoid enhancingfactor，LEF)转录因子家族等组成。β-catenin在该信 号通路中处于中心位置，当没有Wnt通路时，GSK-3β磷酸化β -catenin残基，将β-catenin降解，维持胞内β-catenin稳定。当经典通路被激活，GSK-3β活性受抑制使β-catenin不被磷酸化和降解[3-4] 。当细胞内β-catenin达到一定水平，即与TCF／LEF结合，从而激活Snail、Twist等靶基因，实现某些特定基因表达的增强或者减弱。非经典通路不依赖于内源性β-catenin的积累，主要包括三条通路； Wnt／JNK通路、Wnt／Ca 2+ 途径、调节纺锤体定向和不对称细胞分裂 通路"[5] 。 2 Wnt 信号通路与肾纤维化 创伤、感染、炎症、血循环障碍以及免疫反应等多种致病因素刺激肾脏，使其固有细胞受损，释放细胞因子和炎性介质，促进肾脏固有细胞转化成肌成纤维细胞，即上皮间充质转化 (epithelial-mesenchymaltransition，EMT)。研究表明，肌成纤维 细胞来源于肾小管上皮细胞向间充质细胞转化[6] ，虽然此过程在肾 脏体内的直接证据仍存在争议[7-9] 。引，但是wnt通路的确出现在组 织损伤反应中，并在肾纤维化进展中起着重要作用[10] 。EMT是肾纤 维化形成的关键环节，只要不让固有细胞转化为肌成纤维细胞，或通过治疗使受损的细胞向正常细胞逆转，肾纤维化的进程就被阻断。研究表明Wnt信号通路相关蛋白通过对EMT的调控而与肾纤维化进展密

肾纤维化动物模型特点与研究进展

肾纤维化动物模型特点与研究进展 肾纤维化动物模型特点与研究进展本文关键词：纤维化，研究进展，模型，动物 肾纤维化动物模型特点与研究进展本文简介：摘要：肾纤维化为慢性肾病发展至终末期肾衰所必经的相同病理路径，病理改变分为肾间质纤维化和肾小球硬化。肾纤维化的理想动物模型对慢性肾病发病机制的研究及其治疗药物的研发等存在现实意义。目前，肾纤维化动物模型制作包括药物或毒物诱导、手术模型以及基因敲除等多种模型，不同动物模型肾功能、肾组织病理等方面各具特 肾纤维化动物模型特点与研究进展本文内容： 摘要：肾纤维化为慢性肾病发展至终末期肾衰所必经的相同病理路径，病理改变分为肾间质纤维化和肾小球硬化。肾纤维化的理想动物模型对慢性肾病发病机制的研究及其治疗药物的研发等存在现实意义。目前，肾纤维化动物模型制作包括药物或毒物诱导、手术模型以及基因敲除等多种模型，不同动物模型肾功能、肾组织病理等方面各具特点，尚无法完全模拟人类慢性肾疾病，这提示慢性肾疾病发病的复杂性，对于其病理机制认识与防治具有重要意义。 关键词：肾纤维化；肾间质纤维化；肾小球硬化；动物模型； 肾纤维化是肾单位损坏，间质中成纤维细胞的大量增生及肌成纤

维细胞的形成、细胞外基质生成过度并沉积发生的肾小球硬化（glomerulosclerosis, GS）、肾间质纤维化（renal interstitial fibrosis, RIF）, 并最终丧失肾功能。确诊肾纤维化的金指标为肾组织的病理学检查，包括观察肾小管、间质和肾小球基底膜的病理形态。肾纤维化的大体病理观察主要是：肾脏明显硬化、减小，表面不平整、颗粒样变；镜下观：肾间质炎性细胞弥漫性浸润、间质纤维组织增殖、纤维化形成；肾小球大部分发生硬化、透明样改变，毛细血管破坏，系膜基质增生；由于肾小球血流受阻，而造成肾小管发生萎缩，病变轻处，残余肾代偿性增大；生化检测主要表现在血清尿素氮（blood urea nitrogen, BUN）、血清肌酐（serum creatinine, SCr）、24 h尿蛋白定量异常[1]. 诱导肾纤维化的方法主要有药物或毒物（氯化汞、环孢素A、肾毒性药物、氨基糖苷类药物等）、手术（输尿管单侧结扎、5/6肾切除模型、肾缺血-再灌注等）、单侧肾切除复合AngⅡ等复合因素以及转基因模型等等，本文对常见模型综述如下。 1 药物或毒物诱导模型 重金属如汞；抗肿瘤药物如阿霉素；氨基糖苷类抗生素如链脲霉素；含有马兜铃酸的中草药；血管紧张素Ⅱ；器官移植术后的免疫抑

肾纤维化模型研究进展样本

肾纤维化模型研究进展 肾纤维化是各种形式肾脏病发展的最终共同途径, 其结果是肾脏功能进行性不可逆转的损害, 给人类健康带来巨大威胁。肾纤维化类型多种多样, 不同的致肾脏损害因素, 均可导致肾纤维化。因此, 建立好的肾纤维化模型对于研究肾纤维化的发病机制、预防和治疗、延缓肾纤维化的措施均有十分重要的意义。 动物实验证实, 肾纤维化与炎性细胞的侵润、成纤维细胞分化/增殖、细胞外基质蛋白的沉积和肾小管萎缩有关［1］。肾纤维化的发生机制是一个非常复杂的慢性病理过程, 很多细胞介质和生长因子都直接或间接参与了这一过程。当前的研究主要集中于以下3 个方面: 细胞生长因子的作用, 主要包括促纤维化的转化生长因子β( TGF－β)、成纤维细胞生长因子( FGF) 、血管紧张素Ⅱ( Ang Ⅱ) 和起保护作用的肝细胞生长因子( HGF);肾小管上皮细胞－肌成纤维细胞转分 TEMT or EMT) 过程的作用, 包括表示α平滑肌肌动蛋白(α－SMA) 的肌成纤维细胞、细胞外基质成分如胶原( Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ) 、纤维连接蛋白( FN) 等; 信号转导通路的作用, 包括 Smad 依赖性信号转导通路( 主要是Smad2、Smad3 和起负调节作用的Smad7) 和非TGF－β依赖的 Smad 信号转导通路( 如 ERK/P38MAPK) 。

1 单侧输尿管结扎(UUO)导致的肾纤维化模型 大鼠UUO模型的制作方法: 大鼠氯胺酮麻醉后取右侧卧位, 局部剃毛, 常规消毒铺孔巾, 选择左侧背部肋下约0.5cm为切口, 依次切开皮肤至腹膜后, 游离肾脏及输尿管, 将左侧输尿管用组织钳托起取中段部位, 用止血钳夹住, 在管两端各用丝线结扎后剪断输尿管, 然后连续缝合皮肤。 UUO的特点是: 进行性小管萎缩及间质纤维化。小管和间质细胞增生, 肾实质巨噬细胞、单核细胞浸润,这些改变最终导致小管间质纤维化和小管萎缩[2], 肾实质被纤维组织取代, 而肾小球相对不受影响, 不会产生高血压或脂代谢异常[3]。对UUO肾脏进行组织学观察, UUO术后3天, 能够看到梗阻肾发生间质纤维化损害, 表现为成肌纤维细胞激活, 纤连蛋白过表示, 间质基质沉积, 一直持续到14天(观察期结束)[4]。50%-60%的小鼠UUO模型最终的纤维化依赖于血管紧张素原基因的表示, 从而在肾间质中ANG-ò浓度显著高于血浆浓度。 大鼠UUO是研究肾间质病变较好的动物模型, 其方法简便, 病变均一, 有较好的重复性。UUO已成为一种研究肾纤维化机制的重要模型, 是评价改进肾脏病的有效治疗方法的重要模型。许多可定量的病理生理改变在UUO后一周发生, 这使它成为研究具有吸引力的模型, 此种模型的一些研究结果已同梗阻后肾病的病人的一些观察结果作比较。许多证据表明啮齿类动物的UUO模型可反映

肾脏纤维化.萎缩,尿毒症,

肾脏纤维化.萎缩,尿毒症, 马兜铃科的植物有几百种，它们普遍含有马兜铃酸，其中有几十种被用于做 中药。吃含马兜铃酸草药的人群最大的当然是在中国大陆和台湾。1995年台湾建 立了医保系统，几乎所有的台湾人都可以报销医药费，包括中药费。通过分析台 湾医保报销数据库，就可以知道有多少台湾人曾经吃过含马兜铃酸的中药。结果 十分惊人：在1997～2019年间，有超过三分之一的台湾人曾经吃过含马兜铃酸的 中药。只要曾经服用过含马兜铃酸的中药，哪怕只服用过一次，肾脏就会有不可 逆转的永久损伤，患肾病和上尿路上皮癌的概率就比一般人高。服用的次数越多， 对肾脏的损伤就越大，最终导致尿毒症和癌症。台湾有12%的人患有慢性肾病， 发病率居世界首位，台湾医学界认为其主要因素就是服用含马兜铃酸的草药。 最常见的含马兜铃酸的中药材有关木通、广防已、青木香、马兜铃、木防己、天仙藤、汉中防己、理防己、川防己、木通马兜铃、寻骨风（绵毛马兜铃）、朱砂莲、细辛、威灵仙、青香藤、通城虎、南木香、管南香、假大薯、淮通、鼻血雷、白金古榄等。2019年以后，关木通、广防已、青木香已经被药监局禁止使用，而其余中药材仍然可以使用。 成药： 喘息灵胶囊（马兜铃）肺安片（马兜铃）复方蛇胆川贝散（马兜铃）鸡鸣丸（马兜铃）鸡苏丸（马兜铃）七十味松石丸（马兜铃）青果止嗽丸（马兜铃）润肺化痰丸（马兜铃）十三味疏肝胶囊（马兜铃）胃福颗粒（马兜铃）消咳平喘口服液（马兜铃）新碧桃仙 片（马兜铃）止嗽化痰胶囊（马兜铃）止嗽化痰颗粒（马兜铃）止嗽化痰丸（马兜铃） 和胃降逆胶囊（天仙藤）香藤胶囊（天仙藤）杜仲壮骨胶囊（寻骨风）杜仲壮骨丸（寻骨风）风湿宁药酒（寻骨风）复方风湿药酒（寻骨风）复方拳参片（寻骨风）祛风除湿药 酒（寻骨风）三蛇药酒（寻骨风）伤湿镇痛膏（寻骨风）少林正骨精（酊剂）（寻骨风）神农药酒（寻骨风）益肾蠲痹丸（寻骨风）金朱止泻片（朱砂莲）朱砂莲胶囊（朱砂莲）保胃胶囊（朱砂莲）复方胃痛胶囊（朱砂莲）九龙解毒胶囊（朱砂莲）。 http

肾脏纤维化的分期介绍

肾脏纤维化的分期介绍 概念 肾脏图 肾脏纤维化是一种病理生理改变，是肾脏的功能由健康到损伤，再到损坏，直至功能丧失的渐进过程。肾脏由于受到创伤、感染、炎症、血循环障碍，以及免疫反应等多种致病因素刺激，其固有细胞受损，发展到后期出现大量胶原沉积和积聚，造成肾实质逐渐硬化，形成瘢痕，直至肾脏完全丧失脏器功能。肾脏内固有细胞纤维化、硬化的过程也就是肾脏纤维化的过程。肾脏纤维化是以细胞外基质（ECM）的异常沉积为特征的。 疾病分期 一期炎症反应期 该期是肾脏组织受各种致病原因损伤后，出现的炎症反应阶段，此期在临床上除仅有尿检异常外，无任何不适，亦称无症状期。由于肾小球的滤过功能代偿性很强，此时的肾功能可不受影响或轻度损伤，但在肾脏内部炎症反应后的病理损伤是严重的，部分病人已经出现肾小球硬化，其临床症状的出现是滞后的。该期如果规范治疗。如采用扩血管、抗炎、抗凝、防血栓形成以及降解治疗措施，病情是完全可以逆转的，甚至可以痊愈。如果未经规范治疗，或错过治疗时机，肾脏内部病理损伤会逐渐加重，病情就会迅速发展到纤维化形成期和瘢痕形成期，给治疗会带来很大难度，且困难多，逆转机会少。 二期纤维化形成期 该期是肾脏纤维化形成已发展到全肾脏组织，纤维化形成后的炎症损伤已经破环了健康肾单位，影响了肾功能，病情已进入到失代偿期或肾衰竭期。如果在该期继续规范治疗，继续扩血管、抗炎、抗凝和重点对纤维组织进行降解治疗的措施，只要这四项阻断治疗措施到位，病情就有可能逆转，远离透析；如果没能有效预防与控制易感因素，没能控制好饮食

或治疗不到位，如果对一些可逆因素错过了有利治疗时机，病情很快会进入瘢痕形成期——尿毒症终末期。 三期瘢痕形成期 肾脏纤维组织一旦发展成瘢痕组织，是永远不可能逆转的。如果患者还有1000多毫升尿量，就说明还有保持尿量的残存肾功能，通过微化中药多靶点治疗只要能保护好目前的残存肾单位，使肾功能不再继续恶化进展，就有希望逐渐延长透析时间或逐渐摆脱透析。 为了便于理解，将肾脏纤维化形成过程简化为二期，一是可逆期，即：炎症反应期、纤维化形成前期，此期如及时规范治疗，其纤维化的病理损伤时完全可以治愈的。二是不可逆期，也就是瘢痕形成期，当功能肾单位一旦成为瘢痕组织，就是不可逆转。 疾病关系 由各种致病原因导致肾脏固有细胞受损，并释放一系列炎性介质，出现炎性反映，细胞活性增加，这种肾病发病的初始阶段就是肾炎阶段；随着细胞受损程度的加重，细胞表型发生转化，细胞开始出现硬化，功能开始丧失。当丧失的程度还不足50%时，也就是细胞硬化总数还不超过一半以上时，这就是肾脏纤维化的前期。在这个阶段，由于肾的代偿能力还很强，仍没有临床指标变化，肌酐和尿素氮都没有超出健康范围，但此时肾脏纤维化已经接近中期阶段。随着肾脏纤维化地不断发展，丧失功能的硬化细胞逐渐增多，健康的肾单位越来越少。当健康的肾单位（也称作残存的肾单位）低于20%时，就进入了肾功能的衰竭期，酸中毒等一些尿毒症的症状就开始出现了。这时，沈阳虹桥肾病医院就称之为肾脏纤维化的基质合成期。当90%的肾脏细胞都已经纤维化，也即残存的肾单位低于10%时，患者就会出现严重的代谢性酸中毒症状，心脏、大脑等都会出现一系列恶化症状，这时也就进入了终末期肾衰竭（end stage renal failure ESRF）,即尿毒症时期。此时的肾脏纤维化程度就称之为后基质合成期。在这一时期，残存的肾单位都进入了硬化期，细胞都进入硬化程序，也叫做基质自主生成期。这时的细胞外基质合成不依靠外因促成，而是自主生成和自我增值。 肾脏纤维化 由此可见，慢性肾炎如果得不到有效控制就会导致肾脏纤维化的启动，肾脏纤维化的进程如果不能被阻断，就会导致肾功能逐渐丧失，进而达到尿毒症阶段。所以，尿毒症是肾脏纤维化扩大化的最终表现，无论是预尿毒症还是治疗尿毒症，都必须从阻断肾脏纤维化进

抗纤灵颗粒剂改善慢性肾衰竭肾纤维化的研究

抗纤灵颗粒剂改善慢性肾衰竭肾纤维化的研究 王　怡1,　何立群2,　高建东2 (1.岳阳中西医结合医院肾内科,上海200437;2.曙光医院肾内科,上海200021) 收稿日期:2002211208 基金项目:教育部骨干教师资助计划项目(项目编号:200035) 作者简介:王　怡,(1971～),女,上海市人,博士,副主任医师,研究方向:中医药防治慢性肾衰竭、慢性肾炎及慢性尿路感染,电话:0212 65161782X3233或2118。 关键词:抗纤灵颗粒剂;慢性肾衰竭;肾纤维化 摘要:目的:研究抗纤灵颗粒剂(丹参、制大黄、牛膝等)对慢性肾衰竭肾纤维化、肾功能的作用。方法:与蒙诺相对照,观察抗纤灵颗粒剂对慢性肾衰竭患者及5/6肾切除制作的慢性肾衰实验大鼠的肾功能指标即血清肌酐(Scr )、尿素氮 (BUN )和纤维化指标即血浆层粘连蛋白(LN )、纤维联结蛋白(FN )、Ⅲ型前胶原(PC 2Ⅲ)、Ⅳ型胶原(C 2Ⅳ )的影响,并应用免疫组化技术观察抗纤灵颗粒剂及其拆方对实验大鼠残余肾组织细胞外基质FN 、C 2Ⅳ的作用。结果:抗纤灵颗粒剂有明显的降低慢性肾衰竭患者及实验大鼠的血清Scr 、BUN 、LN 、PC 2Ⅲ、C 2Ⅳ和升高FN 的作用,并有降低CRF 大鼠肾小球硬化指数和肾组织FN 、C 2Ⅳ的表达,具有统计学意义。结论:抗纤灵颗粒剂能减轻肾纤维化、延缓慢性肾衰竭的进程。中图分类号:R285.6 文献标识码:A 文章编号:100121528(2003)1020820204 E ffect of K angqianling G ranules on renal f ibrosis in chronic renal failure WAN G Y i 1,　HE Li 2qun 2,　G AO Jian 2dong 2 (1.Y ueyang Hospital A f f iliated to S hanghai U niversity of TCM ,S hanghai 200437,Chi na ; 2.S huguang Hospital A f f iliated to S hanghai U ni 2versity of TCM ,S hanghai 200021,Chi na ) K ey w ords :Kangqianling Granules ,chronic renal failure ,renal fibrosis Abstract :Objective :To observe the effect of Kangqianling Granules (Radix Salviae miltiorrhizae ,Radix et Rhi 2zoma Rhei ,Radix Achyranthis Bidentatae ,etc.)on renal function and renal fibrosis in chronic renal faiure (CRF ).Methods :Effect of Kangqianling Granules on Serum Creatinine (SCR ),Blood Urea Nitrogen (BUN ), Laminin (LN ),Fibronectin (FN ),Precollagen Ⅲ(PC 2Ⅲ )and Collagen Ⅳ(C 2Ⅳ)were observed in CRF pa 2tients and rats with 5/6nephrectomy.The expression of FN and C 2Ⅳin remnent renal tissue of model rats were determined by immunhistochemistry.R esults :Kangqianling Granules decreased significently serum volume for Scr ,BUN ,LN ,PC 2Ⅲ,C 2Ⅳand elevated FN considerably in CRF patients and rats.Kangqianling Granules inhibited the expressions of FN and C 2Ⅳprotein in remnant renal tissue of model rats.Conclusion :Kangqianling Granules could relieve renal fibrosis and delay process of CRF. 各种肾脏病变不论其始发因素的种类是否持续存在,进展至慢性肾衰竭阶段都有共同的病理特征,即肾小球硬化、系膜基质增多和肾小管间质纤维化。因此,治疗慢性肾功能衰竭、改善肾功能,其实质是减轻肾脏的纤维化。因此,我们观察了抗纤灵颗粒剂及其组方对慢性肾衰竭肾纤维化的影响。1　临床部分1.1　病例选择 病例选择标准:血肌酐(Scr )为1332442umol/L , 临床诊断为慢性肾衰竭(CRF )患者60例,并排除了慢性肝病、肝间质纤维化等影响纤维化指标的疾病。随机分组,蒙诺对照组30例,抗纤灵颗粒剂治疗组30例,两组一般情况基本相同。1.2　治疗方法 治疗组用抗纤灵颗粒剂(1包,tid )口服。抗纤灵颗粒剂组成:丹参15g 、制大黄15g 、牛膝10g 、当归10g 、桃仁10g ,由本院中药制剂室加工成颗粒剂,每包10g 。对照组予以蒙诺(成分为福辛普利钠,由 28

肾间质纤维化与Vimentin 和α-SMA的表达

肾间质纤维化与Vimentin 和α-SMA的表达 肾间质纤维化是以肾间质中细胞及胶原成分聚集增多、伴肾小管萎缩和扩张变形、小管周围毛细血管减少、肾单位进行性破坏、肾小球滤过率持续下降为特点的病理变化。肾小管间质纤维化(renal interstitial fibrosis ,RIF)与肌成纤维细胞密切相关。RIF主要表现为肾小管上皮细胞变性，萎缩和消失，肾间质单核细胞的浸润，同时肌成纤维细胞增生和细胞外基质过渡集聚。在肾间质纤维化的过程中,主要效应细胞是成纤维细胞,但肾小管上皮细胞对其发生、发展具有重要作用。故肾小管上皮细胞与肌成纤维细胞在肾间质纤维化中起重要作用，而纤维化标志蛋白的表达程度可以用来预测纤维化的程度。 1 肌成纤维细胞与肾间质纤维化 肌成纤维细胞是一种超微结构介于平滑肌细胞和成纤维细胞之间的特殊类型的细胞，具有活跃的增殖和分泌胶原的能力，是细胞外基质（extra cellular matrix,ECM）沉积增多的主要来源，而后者是组织纤维化的特征，Lama[1]提出成纤维细胞的过渡生长了和凋亡减少与肾间质纤维化的发病机理有关。肾间质中成纤维细胞、肾小管上皮细胞和血管内皮细胞等细胞均能分泌ECM，而肌成纤维细胞是肾间质中产生ECM的主要的细胞，在肾间质纤维化中起重要的作用。Manotham[2]等发现肾小管上皮细胞和间质成纤维细胞可向肌成纤维细胞表型转化参与肾间质纤维化的发展。肌成纤维细胞同时具有成纤维细胞和肌细胞的特性，不同病理情况下,不同组织中的肌成纤维细胞细胞骨架表型不同，其中波形蛋白（Vimentin）和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）[3、4]是两种主要的标志蛋白。α－SMA、Vimentin是两种细胞骨架蛋白。α－SMA是平滑肌细胞的标志，目前被认为是肌成纤维细胞的标志。而Vimentin 则被认为是肾小管上皮细胞在向肌成纤维细胞转化过程中的中间产物。 2 肾间质纤维化与vimentin和α－SMA的表达 在正常情况下，成熟的小管上皮细胞的主要标志是角蛋白，间质细胞主要表达vimentin，而vimentin是细胞源于间充质的标志。当肾脏受损时，异常蛋白负荷主要是白蛋白和IgG，它们可引起近端肾小管上皮细胞（PTEC）产生多种细胞因子，从而诱导一系列炎性反应。基础研究发现粘附分子CD54和细胞骨架蛋白的中间丝vimentin的5“端基因序列中含有NF－ΚB的结合位点，因此NF－κB 的激活可导致CD54和vinentin表达的增加[5]。.vimentin作为细胞骨架之一，在间质细胞中有阳性表达，可作为细胞增殖的一个特征，正常情况下PTEC几乎不表达vimentin而在肾损害中却表达明显增加，尤其在肾纤维化初期vimentin免疫反应强且量多，反应间质细胞增生与阻止细胞外基质沉积活性的并存。 免疫组化发现UUO模型的小鼠肾表达肌成纤维母细胞的相关标志和一些小管细胞和间质细胞的标志－vimentin，一些间质细胞（不包括小管细胞）还表达α－SMA，而在正常的对侧肾不表达vimentin或者α－SMA[6]。慢性肾衰竭模型中，小管萎缩的主要原因是与基底膜增厚有关，其主要病理特征为vimentin和α

肾小管上皮细胞线粒体氧化损伤在肾间质纤维化中的作用及机制

龙源期刊网 https://www.wendangku.net/doc/8f4188811.html, 肾小管上皮细胞线粒体氧化损伤在肾间质纤维化中的作用及机制 作者：黄继义钟鸿斌逯富华等 来源：《中国现代医生》2016年第20期 [摘要] 目的探讨肾小管上皮细胞线粒体氧化损伤在肾间质纤维化中的作用机制。方法2015年6～12月期间，于本地动物实验中心选取60只健康雄性大鼠，根据处理方法的不同将其分为实验组和对照组，其中实验组行左侧输尿管结扎术，对照组则仅接受左侧输尿管游离，14 d后对两组大鼠的左侧肾脏中线粒体相关基因的表达情况、肾脏功能等参数进行检测分析。结果实验组大鼠术后14 d mtDNA（1.49±0.12）、NRF1（1.87±0.17）、PGC1a （1.76±0.21）、Drp1（2.49±0.24）、Mfn2（2.45±0.27）的表达水平均明显高于对照组 （1.07±0.23、1.11±0.29、1.05±0.32、1.14±0.35、1.17±0.14），差异具有统计学意义（P [关键词] 肾间质纤维化；肾小管上皮细胞；线粒体氧化损伤；肾小管功能 [中图分类号] R692 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2016）20-0032-03 [Abstract] Objective To discuss the effect and mechanism of mitochondria oxidative damage in renal tubular epithelial cells on renal interstitial fibrosis. Methods A total of 60 health male rats were selected from a local animal experimental center from June to December 2015 and divided into study group and control group. Rats in the study group were given left ureteral obstruction， while those in the control group were only given left ureteral mobilization. Parameters including the expression of genes in mitochondria and renal function of the left kidney were detected and analyzed after 14 days. Results At 14 d after surgery， the expression levels of mtDNA （1.49±0.12）， regenerating gene （1.87±0.17）， interrupted gene（1.76±0.21）， and fusion gene（2.49±0.24， 2.45±0.27） in the study group were all significantly higher than those（1.07±0.23， 1.11±0.29， 1.05±0.32， 1.14±0.35， and 1.17±0.14） in the control group（P [Key words] Renal interstitial fibrosis； Renal tubular epithelial cell； Mitochondria oxidative damage； Renal tubular function 绝大部分慢性肾脏疾病均存在肾间质纤维化表现，如间质细胞外基质和小管基底膜成分出现定量及定性改变、肌纤维母细胞聚集、肾小管萎缩等[1]。目前大量研究均指出，在肾小管 基膜破坏过程中，患者多存在肾小管上皮细胞转化为肌纤维母细胞样细胞现象，继而引起间质区出现大量细胞外基质（engine control module，ECM）沉积，引发肾小管萎缩，最终造成间 质纤维化病损[2，3]。本次研究在2015年6～12月期间通过建立大鼠模型，旨在探讨肾小管上皮细胞线粒体氧化损伤在肾间质纤维化中的作用机制。现报道如下。 1 资料与方法

肾脏纤维化的发生机制与高血压相互关系(一)

肾脏纤维化的发生机制与高血压相互关系(一) 【关键词】肾脏疾病 肾脏疾病与高血压关系十分密切。肾脏疾病会引起高血压，高血压也会引起肾脏疾病。第6届国际高血压及相关疾病学术研讨会议显示：全国各大城市高血压患病率为15%。我国约有1.6亿高血压患者。临床上90%的肾衰患者合并有高血压。过去10年中，美国终末期肾病（ESRD）发病率以大约每年9%的速度增长，其中高血压引起的ESRD新患者占28%〔1〕。肾脏纤维化是慢性肾脏疾病发展的最终结果，是导致ESRD的主要原因之一。肾脏纤维化与高血压互为因果，如果不加以控制则会恶性循环。因此减轻肾脏纤维化，控制高血压，打破此恶性循环是治疗终末期肾脏疾病与高血压的重要环节。本文将阐述肾脏纤维化的发病机理及其与高血压的相互关系。 1肾脏纤维化形成机制 1．1肾脏纤维化的发生过程目前认为肾脏纤维化的发展过程主要分为四阶段〔2〕。第一阶段是细胞的活化和损伤，炎症损伤引起肾小管上皮细胞的活化及肾间质单核-巨噬细胞的浸润；第二阶段是促纤维化因子的释放，包括细胞因子、生长因子、血管活化因子和趋化黏附因子；第三阶段是纤维化的形成，表现为基质蛋白合成增多，降解减少，导致基质蛋白在肾间质沉积；第四阶段是肾脏结构和功能的损伤，主要是细胞外基质（extracellularmatrix，ECM）在肾脏的沉积所致。此阶段肾小管周围毛细血管堵塞，有效肾单位进行性减少，肾小球滤过率持续下降。 1．2肾脏纤维化发生的主要机制肾脏纤维化的形成是一个缓慢的动态过程，主要由肾脏细胞、纤维化因子、ECM等相互作用而产生。 1．2．1肾脏纤维化形成过程的参与细胞 1．2．1．1成纤维细胞成纤维细胞是肾间质的固有细胞之一，肾间质积聚的基质蛋白主要是Ⅰ型和Ⅲ型胶原以及纤维连接蛋白（fibronection，FN），主要由成纤维细胞合成〔3〕。正常情况下大多数成纤维细胞处于静止状态，只有小部分细胞参与基底蛋白的合成和沉积。研究发现在一些致病因子的作用下，通过细胞因子的释放，细胞间相互作用，ECM影响及环境因素的刺激，成纤维细胞可转化为肌成纤维细胞（myofibroblast，MF）。成纤维细胞的激活是肾纤维化的重要环节。 1．2．1．2肾小管上皮细胞肾小管上皮细胞已被证实可产生多种生长因子和细胞因子。作用于成纤维细胞如：转化因子β（transforminggrowthfactor，TGF-β），内皮素-1（endothelin-1，ET-1），血小板源性生长因子（platelet-derivedgrowthfactor，PDGF）。同时，肾小管上皮细胞还可以转化为MF〔4〕。Eeisberg等认为肾小管上皮细胞在肾脏纤维化中起主要作用，是趋化因子和细胞因子的主要来源。在起始刺激后肾小管上皮细胞增生，肥大，继而发生凋亡或是分化为成纤维细胞，导致肾脏纤维化。 1．2．1．3肌成纤维细胞（MF）MF是一种界于平滑肌细胞和成纤维细胞之间的特殊细胞。它既保留了成纤维细胞和成胶原的能力，又和平滑肌细胞一样能表达α平滑肌肌动蛋白（α-smoothmuscleartin，α-SMA）〔5〕。正常肾脏没有MF，病理情况下，由成纤维细胞和肾小管上皮细胞转化而成，MF通过TGF-β分泌大量的Ⅰ、Ⅱ型胶原和层粘蛋白，同时也分泌金属蛋白酶抑制物体（tissuseinhibitorofmetalloproteinaseMF）使ECM增加而降解减少，促进肾脏纤维化。 1．2．1．4巨噬细胞巨噬细胞可分化PDGF、TGF-β等各种致纤维化生长因子，促进ECM的增多，参与肾脏纤维化的发生。目前认为肾脏纤维化中浸润的巨噬细胞少量来源于局部固有间质巨噬细胞的增生，而大多数是受化学趋化因子作用从循环血液中迁移而来。巨噬细胞浸润的数量与肾脏纤维化的严重程度有关。 1．2．1．5淋巴细胞淋巴细胞培养液中存在促进成纤维细胞增殖和胶原合成的因子。T淋巴

肾脏纤维化发生机制及其治疗学新进展(一)

肾脏纤维化发生机制及其治疗学新进展(一) 关键词：肾脏纤维化病理机制治疗学各种原因引起的慢性肾脏疾病进展为终末期肾衰（endstagerenalfailure，ESRF）的实质是肾脏纤维化和硬化，从而导致有效肾单位丧失和肾功能的进行性下降。近年研究揭示，炎症细胞浸润，肾脏固有细胞在致纤维化性生长因子（growthfactors，GF）、细胞因子等作用下发生表型改变等是肾脏纤维化形成的重要机制。此外，细胞外基质成分（ECM）的产生与降解过程的失调而致其过度积聚，进一步促进了肾脏的硬化和肾功能的丧失。现就肾脏纤维化形成过程中所涉及的主要机制及与此有关的治疗学进展作一简述。 1肾小球硬化（glomerulosclerosis，GS） 无论肾病原发病因如何，终末期肾脏均表现为GS，并进而导致肾小球滤过功能的丧失。近年来GS机制研究取得不少进展，主要表现在以下几个方面。 1．1肾小球毛细血管内皮细胞损害是GS的重要始动因素 正常情况下内皮细胞不仅是维持毛细血管结构完整的屏障，而且还可以通过自分泌或（和）旁分泌方式产生一系列的体液因子（如内皮素、NO、PGI2等）而调节局部血流动力学及凝血过程。此外，这些局部体液因子尚可通过对系膜细胞（mesangialcell，MC）的作用而调节肾小球的滤过功能。内皮细胞受损后，其抗凝活性下降，促进血小板的粘附与聚集，毛细血管微血栓形成。内皮细胞表型的改变包括细胞表面表达细胞粘附分子（celladhesionmolecule，CAM），后者促进白细胞粘附于肾小球毛细血管并继而向血管襻浸润。损伤或（和）激活的内皮细胞通过释放细胞因子如IL－1（白介素－1）、TNFα（肿瘤坏死因子α）、化学趋化因子（chemokine，如IL－8）、单核细胞趋化肽－1（MCP－1）、巨噬细胞炎症蛋白－2（MIP－2），进一步吸引炎症细胞至肾小球并导致它们的激活。IL－1，TNFα还可促进血栓的形成。因此，肾小球内皮细胞通过与循环白细胞及血小板的相互作用而启动肾小球硬化的过程。 1．2mC在肾小球硬化中的作用 MC是肾小球内平滑肌样细胞，它可以合成和释放致炎性细胞因子和趋化细胞因子（MCP－1，RANTES）以及致纤维化性GF，如血小板生长因子（PDGF）。MC对损伤的反应是增生、发生表型改变并产生ECM。激活的血小板、核细胞及损伤的内皮细胞均可通过释放一系列因子而介导这种反应。MC增生往往是系膜硬化及GS的前奏。在所有细胞因子中，PDGF及TGFβ（转移生长因子β）已被公认在系膜增生及硬化中起最为重要的作用。大鼠体内直接注射PDGF可刺激肾脏MC增生。将人PDGF基因转移给大鼠亦导致MC增生。与PDGF不同的是，TGFβ对MC的增生具有双相性调节作用，即低浓度时起促进作用，而高浓度时起抑制作用。TGFβ还能强力促进系膜及上皮细胞合成ECM成分。最近人们发现TGFβ尚可引起MC表型改变，使其成为成肌纤维细胞（myofibro-blast，MFB）。MC的这种表型改变是其激活及增生的象征，并在临床及动物实验中证实具有较好的判断预后价值。研究证实当MC表达MFB 标记性蛋白－α平滑肌肌动蛋白（，α－SMA）增加时，GS程度加重，这是由于转型的MC能够合成Ⅰ、Ⅲ型胶原，而由肾小球MC释放的基质金属蛋白酶（MMPS）仅能降解Ⅳ型胶原，并不能降解Ⅰ、Ⅲ型胶原所致。有趣的是，肾小球基质成分的改变反过来又可能影响MC，进一步促进其增生和转化。 2肾小管、间质纤维化 小管间质纤维化（tubulo－interstitialfibrosis，TIF）是肾脏硬化的一个重要特征。无论肾脏原发病变在肾小球、肾小管还是血管，大多数进展性肾病均可见到TIF，而TIF的出现又往往预示着肾脏病变预后不好。动物实验发现，如果没有同时伴有小管、间质炎症性浸润及纤维化，肾小球硬化乃至肾功能不全就很少发生。 TIF的发生机制与前述GS的机制有许多相似之处。不过肾小管细胞在其中起了十分重要的作用。因为当其受损时，它可以表达细胞粘附分子，释放趋化因子、细胞因子及GF，还有MCP

肾脏纤维化检查正常值

标本采集： 空腹安静状态采血 单独一管（促凝管）4ml-5ml 参考值： 1.血清β2-MG（β2微球蛋白）0-3mg/L（0.8- 2.0）是反映肾小球滤过功能的较好指标 肾小球滤过率（GFR）及肾血流量降低，则血清β2-MG升高。 尿液β2-MG（β2微球蛋白）↑1、是反映近端小管受损的非常灵敏和特异性的指标；2、鉴别上下尿路感染：上尿路感染时，β2-MG明显增高，而下尿路感染则正常。 2.血清hsCRP（C反应蛋白(CRP)）0-3mg/L是反应炎症的敏感指标 3.血清Cys C （半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白C）肾移植术后肾功能的检测、监测化疗药物对肾功能的损害、诊断肾脏纤维化判断纤维化程度的一个重要指标 1-14岁0.51-0.95mg/L 14-50岁男0.63-1.25mg/L 女0.54-1.15mg/L 50岁以上0.60-1.55mg/L 4.血清HA （血清透明质酸）0-110ng/ml血清HA浓度的变化,对鉴别急、慢性肾病及对肾病综合征与单部位损害的部位和程度,反映肾脏的病情变化有重要意义,对肾脏疾病诊断具有重要意义 5.血清LN（层粘连蛋白）0-95ng/ml肝纤维化、肿瘤转移的最新指标 6.血清PCⅢ（血清Ⅲ型前胶原）0-90ng/ml联合检测血清Ⅲ型前胶元（ＰＣⅢ）、透明质酸（ＨＡ）、层粘连蛋白（ＬＮ）三项指标升高与肝纤维组织增生呈同步性，显示出良好的正相关（Ｐ＜０．０１）结论三项指标的联合检测可极大增加临床诊断 7.血清C-Ⅳ（血清Ⅳ型胶原）0-85 ng/ml 8.血清TIMP-1（血清组织金属蛋白酶抑制物-1）53-153pg/ml血清TIMP-1水平反映了慢性肝病肝内炎症和纤维化的一些重要特征，在目前情况下是一种较好的肝脏纤维化无创诊断和随访指标。 肾小管三项，包括尿β2-MG、尿NAG、尿GGT/尿Cr 肾纤维化标记物至少包括ECM成分及其裂解物、ECM代谢相关的酶、纤维化相关细胞因子和其他相关检测等四大类。但实际上，目前尚无真正含义上的血清肾脏纤维化标记物，国内外研究较多的有以下几种，可用作肾脏纤维化的辅助诊断。 ? 1.血清β2-MG ? 2.血清hsCRP ? 3.血清Cys C ? 4.血清HA ? 5.血清LN ? 6.血清PCⅢ ?7.血清C-lV ?8.血清TIMP-1 另外，在阻断肾纤维化的过程中，TGF-β，PDGF两项化验指标也是精确了解肾脏纤维化受损程度的重要指标。正常表达时能抑制炎症和细胞增生、调节细胞的生长、分化和免疫功能而起正面作用；PDGF能诱导系膜细胞增生(系膜细胞既可产生PDGF，又可被PDGF作用)和肾小管间质纤维化。 血清组织金属蛋白酶抑制物-1（tissueinhibitors of metalloproteinases-I,TIMP-1) 1.血清β2-MG ， 2.血清hsCRP， 3.血清Cys C ， 4.血清HA， 5.血清LN， 6.血清PCⅢ， 7.血清C-lV ， 8.血清TIMP-1 及TGF-β（转化生长因子）、PDGF（血小板原性生长因子）、补体等相关检查。该几项检查是针对对肾脏纤维化进展程度的特异性检查项目，一般医疗机构尚未开展。显示患者仍有保守治疗的意义。 血清：层粘连蛋白（LN）Ⅳ型胶原（Ⅳ．C）甘胆酸（CG）透明质酸（HA）脯氨酸肽酶（PLD） 血清Ⅲ型前胶元（ＰＣⅢ）、透明质酸（ＨＡ）、层粘连蛋白（ＬＮ） 人血清层粘蛋白（LN）ELISA定量检测 1.试剂：（包被板和标准品需-20℃保存）；其余4℃保存。 ① LN包被板(内有保护液，使用前洗涤2次，剩余-20℃保存！！！) 8孔×12 ② LN标准品：LN standard (2000ng/ml) 1管 ③标准品稀释液：Standard diluents 1瓶 ④ LN酶结合物：LN Enzyme tracer (1.1 ml) 1管