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食品中转基因成分检测(大豆)

食品中转基因成分检测

第12章

ELISA方法定量检测抗农达? (Roundup

Ready?) 转基因大豆

F．Eyquem

食品中转基因成分检测第12章

ELISA 方法定量检测抗农达? (Roundup Ready?) 转基因大豆目录

第12章

ELISA 方法定量检测抗农达? (Roundup Ready?) 转基因大

豆

引言 3

酶联免疫吸附分析 (ELISA) 技术 7 实验部分 10

参考文献 20

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ELISA 方法定量检测抗农达? (Roundup Ready?) 转基因大豆引言

本章介绍一种用免疫学技术检测转基因植物的方法，这种方法是基于对转化事件中转入基因产生的新蛋白的检测。但是，值得注意的是，基因修饰并不总是直接特异地对应于产生新蛋白，蛋白表达量水平也并不总是足够用于检测的目的。另外，某些蛋白可能仅在植物的特定部位表达 (如：组织特异性启动子)，或者在不同部位或不同生理时期其表达量水平也不一样。

有报道称植物中转基因产物表达量水平占总可溶性蛋白的0~2%，甚至在一些强启动子植物中也是如此 (Longstaff ，1995)。然而，在许多情况下，文献资料报道的转入基因蛋白表达量水平 (如：批准的GM 作物) 一般低于2%的表达上限 (henner ，1997)。

免疫学分析是一种用抗体作为检测试剂的分析测定系统。抗体是一种从动物血清中分离得到的特异性蛋白，它可特异性地结合于诱导它们产物的底物，即抗原。抗体的制备是通过将待检测的底物 (如：CP4 EPSPS ，是一种产生农达除草剂抗性的蛋白) 注射到动物如兔子或者老鼠体内，然后动物体内的细胞会将此底物识别为外来物质并产生抗体与之对抗。抗体经过纯化，并用可检测的标记与之连接，然后可作为检测目标底物的试剂。

免疫学检测方法发展和应用的先决条件是：得到可直接和待检测新蛋白作用的高特异性抗体。另外，目标样品或蛋白不能有明显的降解。

在对复杂基质中的抗原进行定量的检测中，抗体是一个很有用的生物学工具。所有的免疫学分析都是基于抗原和抗体之间的特异性结合。

抗体-抗原相互作用

当免疫学家将抗体的本质确定为蛋白质时，对于抗体的大多数描述都包括：这些分子具有将抗原从溶液中沉淀出来的能力，尽管现在抗体沉淀性质已经很少用于实验性分离和检测抗原，除了在一些自身免疫疾病中抗体也很少在体内沉淀抗原。抗体沉淀反应的作用，如图1所示，地说明了抗体分子基本和普遍的特性。这个实验同时说明了其他的一些问题：

·血清抗体 (IgG) 在与抗原反应时是二价的，它与抗原可以发生交联 (cross-link)； ·抗原与抗体反应时一般是多价的；

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ELISA 方法定量检测抗农达? (Roundup Ready?) 转基因大豆 ·血清抗体在自然情况下都以多克隆形式存在；

·抗体可以高度特异性地识别抗原分子的结构。

图1. 单抗原及其抗体系统的沉淀曲线

以抗体沉淀量和逐渐增加的抗原浓度 (抗体总量恒定) 作沉淀曲线，可分为3个区域 (图1) ：

“抗体过量区”，在这个区域，抗体沉淀被抑制，可在上清液中检测到过量的抗体。 “等价区”，在这个区域，沉淀量达到最大，抗原抗体形成大的不溶性抗原抗体复合物 (蓝色显示)，上清液中检测不到抗原和抗体的存在。

抗原抗体沉淀反应能很好地描述多克隆抗体和多价抗原之间的相互作用，但一般地，它不适合于描述抗原和单克隆抗体之间的相互作用，除非抗原表现出多种一致的抗原决定簇 (如，在多糖中发现的重复碳架结构)，只有在这时，特异性的单克隆抗体才能交联并沉淀抗原。尽管如此，单克隆抗体有更简练的方法来描述其生物学特征，这些方法提供了关于抗体抗原相互作用的一些详细信息，如平衡常数和动力学开关速率。

抗体能非常有效的用来检测和分离抗原。化学修饰可以改变抗体的结构但是不破坏它们与抗原结合的能力，使得抗体的相对稳定性增强，从而使抗体的应用也大大加强。抗体

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ELISA 方法定量检测抗农达? (Roundup Ready?) 转基因大豆可以通过化学方法，用荧光、磁性、放射性或其它化合物进行标记，使其在不同的实验条件下实现对抗原的检测和分离。

如何制备单克隆抗体

抗原对于人体来说是外源物质，如致病性细菌和病毒，以及其它侵染性物质，它们可被人体的免疫系统作为入侵者而被识别。抗体是我们体内抵御这些侵染性物质的天然防线，可以识别抗原并有助于破坏抗原蛋白。

抗体非常有用的两个性质是，首先，它们是高度特异的；即每个抗体只能特异地结合和攻击一个特定的抗原。其次，有些抗体一旦被一种疾病激活，它将持续对这种疾病产生抗性。

利用抗体的第二个特点就可以发展疫苗。疫苗是一种弱化或者灭活的细菌或病毒，当它们被接种到人体中时，可以激活人体产生抗体抵御它所携带的抗原。

抗体的特异性使单克隆抗体技术变得价值非凡。抗体不仅仅可以用于医疗，抵御疾病；它们也可以帮助诊断一系列的疾病，检测药物、病毒和细菌产物、以及血液中其它不常见或不正常的物质。

由于这种抗病物质 (即抗体) 的多样化使用，抗体的纯化质量一直以来都是科学研究所关注的焦点。抗体制备传统的方法是向实验动物注射抗原，等抗体形成后，从动物的血清中回收抗体 (含有血清的抗体称为抗血清)。这种制备方法存在两个问题：它产生的抗血清中包含有其它一些不需要的物质，而且这种方法所产生的抗体的量是非常少的。

通过使用一种能在自然条件下产生抗体的细胞，和一类在培养条件下可以持续生长的细胞，单克隆抗体技术可以产生大量的高纯度的抗体。如果我们能将这种“不死”的特性，和这种可以产生我们需要的抗体物质的特性结合起来，实际上，我们就得到了一个连续工作的生产抗体的工厂。

在单克隆抗体技术中，有连续繁殖能力的肿瘤细胞，和产生抗体的哺乳动物细胞融合。这种融合细胞称为“杂交瘤细胞”，它可持续产生抗体。因为它们都是来源于同一类型的细胞-杂交瘤细胞，这些抗体就被称为单克隆抗体；另一方面，由传统方法产生的抗

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ELISA 方法定量检测抗农达? (Roundup Ready?) 转基因大豆体是来源于多种类型的细胞，因此它们称为多克隆抗体。下边介绍一个单克隆抗体制备的例子。

单克隆抗体的制备

骨髓瘤细胞是一种骨髓中的肿瘤细胞，它可以在细胞培养中不停的生长。当骨髓瘤细胞和产生抗体的哺乳动物脾细胞融合，其结果产生杂交的细胞，称为杂交瘤细胞，它可以产生大量的单克隆抗体。这种细胞融合的产物集合了两个不同类型细胞的特性：持续生长的能力和产生大量高纯度抗体的能力。

因为选择性的杂交细胞只产生一种特异性抗体，其纯度比传统方法产生的多克隆抗体高很多。在对抗疾病方面，它们与传统的药物相比具有更高效的潜力，因为药物不仅攻击外来物质，同时也会攻击人体自身的细胞，有时也产生一些不期望的副作用如过敏反应。单克隆抗体仅仅攻击目标分子，它不会产生副作用，或使副作用大大减少

。

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ELISA 方法定量检测抗农达? (Roundup Ready?) 转基因大豆酶联免疫吸附分析 (ELISA) 技术

定义

酶联免疫吸附分析 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay, ELISA) 是指：应用一个酶标记的免疫反应物 (抗原或抗体) 和一个免疫吸附剂 (结合在固体支持物上抗原或抗体) 的酶免疫分析，通过不同的方法 (如：在标记的反应物和未标记的未知样品之间的竞争结合)，可用于测定未知样品的浓度。

ELISA (Clark and Adams ，1977) 依赖于抗原抗体之间的特异性反应。ELISA 中的关键试剂是抗体，它是免疫系统应答于外来物质 (抗原) 侵染而产生的一种可溶性蛋白。对于转基因的检测，抗原则是新产生的蛋白。

在转基因植物中，插入的基因会产生新蛋白。可以用ELISA 的方法来评估此蛋白在转基因植物中表达量的水平。关于特异性抗体的生产和应用的信息，在许多报道转基因植物发展的文章中可以找到 (Mohapatra et al.，1999)。

至今，商业化的能够直接应用于批准的转基因作物插入基因蛋白产物的特异性抗体还很少：有一些抗体是针对于nptII 基因产物NPTII 或APH (3') II ，和针对gus 基因的产物。

下图是进行ELISA 检测的3种不同方法：

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ELISA 方法定量检测抗农达? (Roundup Ready?) 转基因大豆基于ELISA 的抗农达? (Roundup Ready?) 转基因大豆特异性检测的方法由Lipp 等 (2000) 建立、测试和验证。

此方法的建立是基于CP4-EPSPS (5-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶，此酶来源于Agrobacterium sp .strain CP4) (Padgette et al.,1995) 蛋白特异性抗体的使用。CP4-EPSPS 蛋白赋予Roundup Ready?大豆抗农达?除草剂的特性。初步结果表明，此方法 (操作中使用商业化的ELISA 试剂盒) 可以检测大豆原料中的转基因成分含量范围在0.3%到5%之间。原理

下图表示的是用于检测CP4-EPSPS 蛋白的三明治式ELISA 示意图：

微量滴定板的表面包裹着特异性单克隆捕获抗体。

当加入含有待检测蛋白的样品时，捕获抗体与抗原结合。

样品中没有结合的成分可被洗脱除去。

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ELISA 方法定量检测抗农达? (Roundup Ready?) 转基因大豆洗脱之后，加入一种与辣根过氧化物酶 (HRP) 共价偶联的多克隆抗体，该抗体可与CP4 EPSPS 蛋白的另一个抗原位点特异结合

洗脱后，加入辣根过氧化物酶的显色底物四甲基联苯胺 (TMB)。辣根过氧化物酶可催化底物产生颜色反应，颜色信号与抗原浓度在线性范围内呈一定的比例。显色一定时间后，加入终止液终止反应。在450 nm 波长处测量每一孔的光密度。

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ELISA 方法定量检测抗农达? (Roundup Ready?) 转基因大豆试验部分

(转基因食品成分检测，大豆试剂盒使用说明 (1999)。Srategic Diagnostics, Inc., Rev. 052099, Vers.1.8.) 1

引言

下面的程序详细描述了基于ELISA 法检测农产品原材料及其加工产品中抗农达?大豆表达的CP4 EPSPS 蛋白，如大豆粉和大豆蛋白分离物。

此方法应用于只经少许处理或未经处理的CP4 EPSPS 蛋白未变性的样品。例如，食品成分经高温处理可能会影响到蛋白检测结果。数据显示食品成分在温度不高于65℃下处理少于60分钟时，其检测结果是可信的。

此方法已经验证可作为CP4 EPSPS 蛋白的检测方法，若应用特异的参考物质，其样品中CP4 EPSPS 蛋白的检测浓度范围可从0.3%到5% (w/w)。使用一个修改的程序，试剂盒也可以检测低至0.05%到0.3%浓度范围的样品。

仪器设备

·15 ml 锥形聚丙烯离心管

·12×75 mm 玻璃试管

·塑料薄膜或铝膜

·塑料胶带或盘清洗机

·洗液瓶，如：500 ml 的

·可分装20 μl 到500 μl 的精确微量移液器

·漩涡混合器

·称量纸

1本章中描述的试剂盒是在组织培训课程和编写手册时唯一验证可用的商业化程序，JRC 和WHO 并不推荐任何特定品牌的商业化试剂盒。

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ELISA 方法定量检测抗农达? (Roundup Ready?) 转基因大豆 ·刮刀

·精确到0.01 g 的天平

·转速达到5000到10000 rpm 离心机

·可以读取450 nm 吸光值的酶标仪

·37℃的恒温箱

·孔径450 μm 的滤膜

·孔径150 μm 的滤膜

·多通道移液器。如50 μl 到300 μl (可选)

·可多通道分装的试剂容器 (可选)

·自动清洗机 (可选)

·15 ml 离心管架 (可选)

试剂

概述

在分析中，除另有规定外，应使用达到分析级别的试剂和去离子水或蒸馏水。

对规定中操作标准的任何偏离都可能会影响到试剂的稳定性。应该丢弃基质成分由澄清变成蓝色的试剂。不能使用已经变混浊的缓冲液。

试剂盒中所有试剂都应该保存在2~8℃条件下。试剂盒成分的货架期与其成分的有效期相同。基于稳定性测试，试剂盒在2~8℃条件下其有效期为9个月。偶联抗体储藏液和偶联抗体工作液应该在其试剂盒有效期内保存在2~8℃条件下。稀释的工作洗脱液应该储藏于大约2~8℃条件下，不能使用超过有效期的试剂盒。

检测试剂盒通常提供的试剂

·大豆抽提缓冲液，硼酸钠缓冲液，pH 7.5

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ELISA 方法定量检测抗农达? (Roundup Ready?) 转基因大豆 ·大豆分析缓冲液，磷酸盐缓冲液 (PBS)，Tween 20，牛血清蛋白 (BSA)，pH 7.4 ·包被有单克隆捕获抗体的酶标板

·大豆偶联抗体，冻干的兔抗CP4 EPSPS 蛋白

·大豆偶联抗体稀释液，10％热灭活的小鼠血清

·显色底物，K-Blue TM ，四甲基联苯胺 (tetramethylbenzidine ，TMB)，过氧化氢，5%二甲基甲酰胺 (dimethylformamide) 作为溶剂。

·终止液，0.5%硫酸

·10倍浓缩的洗脱缓冲液，PBS ，Tween 20，pH 7.1。

·阴性和阳性参照标准

程序

程序的使用范围

ELISA-GM 检测体系只限于检测CP4 EPSPS 蛋白表达与参照标准中GM 材料含量相关的样品。

ELISA 检测试剂盒最适操作环境温度在15~30℃之间。参照标准的最高吸光值应当高于0.8，吸光值不能落在分光光度计的线性范围以外 (不同的分光光度计有不同的线性上限)。应该考虑到吸光值 (OD) 在30℃以上会很快上升，因此，如果温度较高，就应该降低底物温育时间。而在温度较低时 (低于15℃)，应该加长底物温育时间。

样品制备过程中避免污染的方法

概述. ELISA GMO 检测体系具有很高的灵敏度，非常少量的GM 污染都会影响检测的结果。因此不同批次样品处理操作中必须对过程中使用的所有仪器进行彻底的清洗。以下程序包括：第一步尽量去除颗粒物质，第二步乙醇清洗，可使样品变性，这样可使留在仪器上的任何可检测的GM 蛋白失去活性。混合器或搅拌机清洗. 使用柔软的毛刷清洗。定期地清洗毛刷并在酒精中浸泡。使用之前将毛刷晾干。用柔软的衣物或实验室毛巾拭擦。

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ELISA 方法定量检测抗农达? (Roundup Ready?) 转基因大豆用酒精冲洗，可用喷壶冲，建议冲洗两次。然后再用清水冲洗。在空气中干燥，如果急用的话，可以用吹风机吹干。

滤网清洗. 滤网容易被大豆粉堵塞，在硬的表面轻轻拍打滤网以去除堵塞物质。

使用柔软的毛刷清洗。定期的清洗毛刷并在酒精中浸泡至少一分钟。使用之前将毛刷晾干。用柔软的衣服拭擦。用酒精冲洗至少 5 min ，然后再用清水冲洗。在空气中干燥，如果急用的话，可以用吹风机吹干。

也可用超声波清洗，然后空气中干燥。

工作区域的清洁. 对于工作区域的清洁也是非常重要的。因为此分析方法灵敏度高，少量的转基因阳性粉末污染都可能造成假阳性的结果出现。应避免大豆粉末污染工作区域。不允许大豆粉末的处理污染后面过程中用到的仪器。为了得到最好的结果，样品混合和制备的区域和设施应该和实验分析的地方分开来，以避免可能存在的粉末污染。样品制备

均质的子样品应取之于实验室样品。

如果实验室样品是大豆原材料，取500 g 以上大豆，放在合适的搅拌机上粉碎大约三分钟，直至可通过微孔滤网过滤。定量检测的样品颗粒大小应小于150 μm ，定性检测的样品颗粒大小应小于450 μm 。过滤过程中应小心污染，并避免局部过热。搅拌机的作用是混合和粉碎样品。

从研磨的的材料中取大约100 g 左右可通过450 μm 微孔滤网 (40目) 的子样品，保证子样品的90％以上可通过450 μm 微孔滤网。定性检测分析可直接使用筛选的样品，定量检测分析应进一步经孔径为150 μm 的微孔滤网过滤筛选的样品。通过450 μm 微孔滤网的材料大小可认为是均一的，因此筛选通过150 μm 微孔滤网的最终样品只要够量就可以。

对于其它类型的材料，甚至颗粒更小的样品应采用类似的方法处理。

分析程序

所有的试剂在使用前都要先回复至室温。

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ELISA 方法定量检测抗农达? (Roundup Ready?) 转基因大豆从铝箔包装袋中取出包被的酶标条和酶标条固定架，每次取出适量的酶标条后重新密封包装袋。检测条上的十个孔是用来做参照标准和空白对照的。每快板都应有一个标准和对照。如果使用手动清洗，将酶标条的边缘用胶带粘到固定架上以防止在清洗时检测条会突然掉下来。

偶联抗体的制备偶联抗体储备液：从大豆偶联试剂瓶 (Soya Conjugate bottle) 中吸取1 ml 的大豆偶联稀释液 (Soya Conjugate Diluent) 到大豆偶联连接液 (Soya Conjugate vial) 中，旋转混合大约10 s 。偶联抗体工作液：吸取240 μl 重构大豆偶联液 (reconstitute Soya Conjugate) 到大豆偶联稀释液瓶 (Soya conjugate Diluent bottle) 中。标记日期，翻转混合20次。

洗脱缓冲液的制备

将10×的洗脱缓冲液回复到室温。

用去离子水稀释10×的洗脱缓冲液，制备成为洗脱缓冲工作液 (例如：50 ml 的10×洗脱缓冲液加入到450 ml 去离子中)。

将洗脱缓冲液工作液加入到自动清洗仪或洗瓶中。

样品和参考标准的抽提

实验样品、阴性及阳性参照标准品在相同条件下抽提，每个两次重复，可描述如下。样品称量时，按照浓度由低到高的顺序先称取参照标准，然后是实验样品。

每一种参考标准和样品称取0.5 g ±0.01 g ，分别放入15 ml 聚丙烯离心管中。为避免污染，每次称量前要擦净抹刀。

向每个离心管中加4.5 ml 大豆抽提缓冲液，旋涡混合10 s 。

5000 rpm 离心15 min 。

用移液器小心吸取上清液于另一干净的15 ml 聚丙烯离心管中，并做标记，不要吸到粒子物质。

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ELISA 方法定量检测抗农达? (Roundup Ready?) 转基因大豆开始检测前，用大豆检测缓冲液按照表1所列比例稀释样品和参考标准抽提物。蛋白抽提物于2~8℃贮存，时间不超过一个工作日。

表1. 不同基质的稀释范围

基质稀释

大豆 1:300

大豆粉

1:300 脱脂豆粉 1:300

蛋白抽提物 1:10

样品抽提物的稀释

对于抽提的阴性对照、阳性对照和样品的稀释需要用到两个12×75 mm 的实验管完成。

吸取280 μl 大豆检测缓冲液到其中的一个12×75 mm 实验管。

吸取380 μl 大豆检测缓冲液到另一个12×75 mm 实验管。将280 μl 的实验管标记为“1:15”，将380 μl 的实验管标记为“1:300”。

每个样品吸取20 μl 到标记为“1:15”的实验管，涡旋混匀。

从标记为“1:15”的检测板吸取20 μl 到标记为“1:300” 的检测板，涡旋混匀。同样的方法稀释阴性对照、阳性对照和样品抽提物。

ELISA 操作程序

概述

ELISA 检测试剂盒可以以不同的形式在8孔检测条上使用。建议使用随机加样方案。所有的反应孔都应重复两次，然后计算其吸光值的平均值。每个程序都要包括分析缓冲液空白、阴性对照和阳性参照标准。

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ELISA 方法定量检测抗农达? (Roundup Ready?) 转基因大豆当检测开始后，所有的步骤都应该连续进行而不能中断。

加样

加100 μl 稀释的提取液和检测空白到对应的孔内。

每次移液使用一次性枪头以避免交叉污染。

使用胶带或铝箔封住酶标板，以免污染和蒸发。

样品温育

37℃，微量滴定板温育1 h 。

洗脱

用300 μl 洗脱缓冲液洗脱酶标板3次。人工洗涤：将酶标板翻转，倒出微孔内液体。用装有洗涤工作液的500 ml 洗瓶，将每孔注满洗涤液，保持60 s ，然后翻转，倒掉洗涤液。如此重复操作3次。在多层纸巾上将酶标板倒拍数次，以去除残液和泡沫。

用胶带将酶标条固定以免滑落。自动洗涤：温育完毕，用微量清洗器将所有孔中的液体吸出，然后在每孔内加满洗脱缓冲液。如此重复3次。最后，用微量清洗器吸出所有孔中洗脱液，在多层纸巾上将酶标板反放拍干，以去除残液和泡沫。

在此过程中，不要让酶标孔全干，否则会影响分析结果；

不管是人工洗涤还是自动洗涤，应确保每一孔用相同体积的洗脱液洗涤，不充分地洗涤会导致出现错误的结果。

加入偶联抗体

向每个孔加入100 μl 偶联抗体工作液

盖上盖子防止污染和蒸发

温育

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ELISA 方法定量检测抗农达? (Roundup Ready?) 转基因大豆 37℃，微量滴定板温育1 h 。

洗涤

温育结束后，重复前面用到的洗涤步骤。

加入底物

每孔中加入100 μl 显色溶液。

轻轻摇动酶标板，室温温育10 min 。

加显色底物时应连续一次完成，不得中断。

在移液操作中保持相同次序和时间间隔。酶标板应注意避光，防止颜色的亮度因受到光的影响而发生变化。

加入终止缓冲液

温育结束后，按照加入显色底物同样的顺序向酶标孔中加入100 μl 终止液。

在加入终止液时应连续一次完成，不得中断，酶标板应注意避光，防止颜色的亮度因受到光的影响而发生变化。

测定吸光值

用酶标仪在450 nm 波长测量每孔的吸光值 (OD)。

在加入终止液30 min 之内读取吸光值。

记录所得结果，计算平均吸光值或用计算机处理。

评估

标准品用于制作标准曲线。实验样品及参照标准的数值需减去检测空白的数值，所测量的参照标准品的平均值用于生成标准曲线，实验样品的平均值根据标准曲线计算相应浓度。

结果可信度判断的原则

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ELISA 方法定量检测抗农达? (Roundup Ready?) 转基因大豆每一轮检测都必须符合结果可信度判断的原则。每一轮反应应当包括：空白、阴性标准品、阳性标准品和未知样品。所有蛋白抽提物、空白对照都必须设置一个重复。如果不符合分析结果可信度判断的条件，所有检测实验需重新操作。

样品

标准空白对照 A450 nm <0.30 阴性标准品

A450 nm <0.30 2.5％阳性标准品

A450 nm ≥0.8 所有阳性标准品

重复的CV ≤15％未知样品重复的CV ≤20％

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ELISA 方法定量检测抗农达? (Roundup Ready?) 转基因大豆流程图

实验样品和参照标准抽提流程

程序

体积/质量说明称量

0.5 g 称量试验样品、空白、参照标准加缓冲液

4.5 ml 加入抽提缓冲液混匀实验样品与抽提缓冲液充分混匀

离心 5000 rpm

以5000 rpm 将样品离心15 min ，吸取上清

到另一干净离心管中

稀释根据不同基质以1:300或1:10稀释

稀释实验样品和参照标准

ELISA 实验流程

程序

体积说明加样

100 μl 微量移液器吸取已稀释的实验样品、参考标准的抽提液和空白至相应酶标孔温育

37℃温育1 h 洗涤

用洗脱缓冲液洗涤3次加样

100 μl 向每个酶标孔中加入偶联抗体温育

37℃温育1 h 洗涤

用洗脱缓冲液洗涤3次加样

100 μl 向每个酶标孔中加入显色底物温育

室温温育10 min 加样

100 μl 向每个酶孔中加入终止液测量吸光

值用酶标仪测量每孔在450 nm 的吸光值

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ELISA 方法定量检测抗农达? (Roundup Ready?) 转基因大豆参考文献

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(完整版)中国市场上的转基因食品及鉴别方法

中国市场上的转基因食品及鉴别方法国内市场上的转基因食品清单一、我国转基因作物有哪些? 1、已批准安全证书的有棉花、水稻、玉米和番木瓜，只有棉花、番木瓜批准商业化种植 “截至目前，我国批准了转基因生产应用安全证书并在有效期内的作物有棉花、水稻、玉米和番木瓜。”中国农科院植保所副研究员谢家建介绍说。 “目前，转基因水稻和转基因玉米尚未完成种子法规定的审批，没有商业化种植。”谢家建表示，“我国已经进行商业化种植的转基因作物只有棉花和番木瓜。” 我国批准进口用作加工原料的转基因作物有大豆、玉米、油菜、棉花和甜菜。这些食品必须获得我国的安全证书。 2、目前市售圣女果、彩椒、小南瓜、小黄瓜都不是转基因食品网上流传一份转基因食品名单，包括“圣女果、大个儿彩椒、小南瓜、小黄瓜”。对此专家并不认同。中国农科院生物所研究员王志兴说，小番茄也叫圣女果、樱桃番茄，是自古就有的番茄品种，只是因为个头小、采摘不便、产量低，最早仅作为观赏用，后来发现食

用方便，口味经过改良后逐渐流行。个头小是天生的基因差异，不是转基因的结果。中国农科院油料所副研究员吴刚说，小南瓜和小黄瓜也不是转基因食品，仅仅是未充分成熟的南瓜和黄瓜。如果继续在田间种植，小南瓜和小黄瓜最终会生长成普通的大南瓜和老黄瓜。关于大个儿彩椒，吴刚表示，大个儿彩椒含有不同类型的花青素，表现为更丰富的颜色。花青素的变异在植物中很常见，像鲜花同一个品种就有不同颜色，萝卜也有红萝卜、绿萝卜、白萝卜等。“我国曾经批准过抗病毒甜椒的商业化种植，但与常规甜椒相比，转基因甜椒并没有明显优势，因此被市场自然淘汰。” 3、我国市场转基因食品主要是大豆油和木瓜中国农业大学食品工程与营养科学院院长罗云波介绍，目前中国市场上的转基因食品主要有两种，一种是转基因食用油，就是我们所说的大豆色拉油，来源主要是从美洲，尤其是从美国、阿根廷、巴西等国家进口的大豆所生产出来的食用油。还有一种就是转基因木瓜，因为木瓜容易得一种农药很难治的病，用基因的技术能够控制，转基因木瓜也是我们能够吃到的转基因食品。除此之外，我国很少能够见得转基因种类的食品。

转基因食品的安全性评价及检测

南京农业大学硕士研究生课程（论文）考试试卷课程名称：学号：姓名：所在学院：任课教师：南京农业大学研究生院培养处印制

转基因食品的安全性评价及检测方法摘要：自1996年以来，转基因作物的大规模商业化生产为人们带来了巨大的社会经济效益，但是转基因技术存在一定的风险性，因此加强转基因食品的安全性评价和检测变的尤为迫切和重要。本文从毒理性和致敏性等方面综述了转基因食品的食用安全性评价，并从重组DNA本身以及其产物等角度探讨了转基因食品的检测方法，以期使读者对转基因食品有更加系统、全面的了解。关键词：转基因食品；益处；安全性评价；检测方法 Progress in Safety Assessment of Genetically Modified Foods Abstract: Since the large-scale commercialized production of genetically modified (GM) crops started in 1996, it has brought great socioeconomic benefits to human beings. Yet transgenic technology may give rise to certain risks, so it is urgent and important to strengthen the safety assessment and detection of GM foods. In this paper, the safety evaluation contents of GM foods are summarized, including toxicity, allergenicity, etc. and discussed the measuring method of GM food from the perspective of recombinant DNA and its products. The target of this paper is to enable the readers to have a more comprehensive understanding of food safety of GM foods. Key words：genetically modified foods; benefit; safety evaluation; detection methods 前言转基因作物产业化已成为全球新的经济增长点，是增强农业国际竞争力的重要保障。然而，随着转基因作物的研发和产业化规模的不断扩大，由此引起的潜在生物安全问题已经成为争论的焦点。这些问题已经成为与政治、宗教等复杂的社会因素以及国际贸易相交织的综合性问题。科学地解决这些问题，将能够保障和促进我国生物技术研发及产业化的健康发展，跟上世界科技发展前沿和主流，在新世纪的国际竞争中占据主动。提高转基因生物及其产品的安全性，加强转基因生物的安全管理，不仅关系到我国人民的身体健康和环境安全，而且也关系到我国农业生物技术产业的可持续发展。本文旨在通过综述近几年的科学研究，科学、客观的分析转基因食品的安全性，并且列举出几种检测转基因食品的

各种豆子的营养成分

各种豆子的营养成分中医学认为：“五豆能补五脏”，即红豆补心脏，黄豆补脾脏，绿豆补肝脏，白豆补肺脏，黑豆补肾脏。可分别取适量的红豆、黄豆、绿豆、白豆和黑豆，将其浸泡后使之发芽，然后将这五色豆芽一起烹调（拌或炒）食用。这是一道很好的补钙、补锌、补铁、健脑、益智、护眼、排毒、美容、促进生长发育的保健菜肴。一、豆类的分类 1、根据豆类的营养成份和含量可分为两类。一是大豆类如黄豆、青豆、黑豆：二是其它类．如豌豆、扁豆、刀豆、绿豆、豇豆、赤小豆、蚕豆等。 2、根据豆类的性质分为凉(寒)性。湿(热)性和平性。 3、根据豆类在中医归经理论纳为：绿豆赤小豆归心经；扁豆、豌豆归脾经；淡豆豉归肺经：豇豆、蚕豆、黑豆归胃经；淡豆豉、扁豆、豌豆归肾经；刀豆归膀胱经；豆豉、黄豆、刀豆归大肠经；赤小豆归小肠经。二、大豆的营养价值 l、大豆含蛋白质35％一40％。蛋白质中含有多种必需氨基酸和非必需氨基酸。除蛋氨酸，胱氨酸等含硫氨酸不足外．其他氨基酸与动物氨基酸相似．总蛋白质含量高于肉类。 2、含脂肪15％一20％，其中85％为不饱和脂肪酸，西油酸高达50％以上，油酸26％以上。 3、含碳水化合物25％一35％。主要是淀粉和蔗糖及人体所不能吸收的棉仔糖和水苏糖。大豆中碳水化合物有一半是不能被人体吸收的糖。 4、大豆中含有丰富的铁和维生素B1、B2以及维生素A、维生素D．磷、铁、硒等微量元素。 5、大豆中含有皂甙和大豆异黄酮．具有抗氧化。降血脂、抗溶血、抗真菌、抗细菌、抑制肿瘤和雌激素样作用。三、大豆的抗营养因素 1、含有的蛋白酶抑制剂可抑制消化道中的胰蛋白酶．胃蛋白酶．糜蛋白酶．由于对消化系统有抑制作用。对人或动物生长产生负面影响。 2、含有的植物红细胞凝集素(PHA)具有凝集人和动物红细胞作用。 3、含有的寡聚糖，水苏糖与棉仔糖不能被肠道消化吸收．并被肠道微生物发酵产气，是引起肠胀气的原因之一．大豆中含有的一些抗营养因素．使其蛋白质的消化吸收率只有65％左右．怎样才能提高大豆的消化吸收率和利用率昵?研究实验表明：将大豆去纤维或加工使之软化制成豆制品如豆腐、豆浆、腐竹、豆芽、豆豉、腐乳后。其蛋白质的吸收率可达95％，是一种日常生活中价格低廉．营养丰富的食品。四、食用豆制品益处多多我们在起居饮食中．多食用一些豆制品对防病健身是有许多益处的，下面我们就来具体看一下加工成为豆制品的豆腐、腐竹、豆浆、豆芽对人体的保健营养作用：(1)豆浆中蛋白质和铁的含量高于牛奶：(2)豆芽是一种很好的新鲜蔬菜，除蛋白成份外．还有丰富的维生素c；(3)腐竹中的维生素B2含量在豆制品中最高。五、大豆其制品的保健作用

植物及其产品转基因成份检测抽样及制样方法征求意见稿

SN/T1194—×××× I ICS SN 植物及其产品转基因成份检测抽样及制样方法 Methods of sampling and preparation of samples for detection of genetically modified components in plants and their derived products （征求意见稿）中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

SN/T1194—×××× II 前言本标准由中华人民共和国国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国质量监督检验检疫总局批准发布。本标准代替SN/T1194-2003《植物及其产品转基因成份检测抽样和制样方法》。本标准起草单位：辽宁出入境检验检疫局、厦门出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：曹际娟、郑江、陈红运、黄新、陈颖、朱水芳。本标准系代替了SN/T1194-2003。

SN/T1194—×××× 植物及其产品转基因成份检测抽样和制样方法 1 范围本标准规定了植物及其产品转基因成份检测的抽样和制样方法。本标准适用于植物及其产品转基因成份检测的抽样和制样。 2 规范性引用文件下列文件对本文件的应用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T 0798 进出口粮油、饲料检验检验名词术语 SN/T 0799 进出口粮油、饲料检验检验一般规则 SN/T 0800.1 进出口粮油、饲料检验抽样和制样方法 SN/T 0952 进出口商品抽样检验程序孤立批计数抽样批不合格品率的估计及样本量的选（适用于批量较大的情形） GB/T 10111 随机数的产生及其在产品质量质量抽样检验中的应用程序 GB/T19495.1 转基因产品检测通用要求和定义 GB/T19495.7 转基因产品检测抽样和制样方法 3 定义及术语 3.1 定义转基因植物 Genetically Modified Plants 指用基因工程技术或者现代生物技术改变基因组构成的植物。 3.2 术语本标准采用SN/T 0798中的一般术语以及GB/T19495.1、GB/T19495.7中的术语。 4 总则 4.1 一般规定 4.1.1 抽取及制备的样品应具有代表性。 4.1.2 应确保抽样器具清洁、干燥、无异味，抽样、制样器具及样品容器所用材质不应对待抽取样品造成污染。 4.1.3 为避免交叉污染，尽可能使用不同的抽样和制样器具或设备抽取和制备不同交付批的样品，盛装样品的容器或包装应尽可能一次性使用。如果不能做到（例如使用机械取样设备时），则应在抽取和制备一个交付批的样品后使用适当方法清洁所有器具和设备。 4.1.4 在所有抽样过程中应避免样品散落，防止有活性的生物污染生态环境。 4.1.5 应在物理隔离的区域制备样品，防止对其他区域或实验室的污染，并应及时清洁制样区域。4.1.6 必要时使用DNA销毁剂处理抽样和制样器具和设备、样品容器及制样区域。 4.1.7 适用时，应参照GB/T 1949 5.1《转基因产品检测通用要求和定义》中的规定防止污染。 4.1.8 抽样时应注意保护样品，抽样器具和样品容器应存放于清洁的环境中，避免雨水和灰尘等外来物引起的污染。 1

转基因安全性评价

转基因安全性评价对转基因植物食品未知物质风险的主要担忧有：①致病性物质的出现，即转基因生物产品食用后是否会致病；②营养成分的变化及抗营养因子的出现，如蛋白酶抑制剂、脂肪氧化酶的产生或含量的变化；③新的过敏原的出现，如大豆中的致敏性蛋白和巴西坚果中的2s清蛋白¨u；④天然有毒物的产生，如茄碱、葫芦素、Ot一番茄素等u2棚1。其中，最令人关注的是有可能会产生毒素、抗营养物质、过敏原以及致癌物质或联合致癌物质。转基因奶牛生产的激素(rbGH)在美国投入商业化使用后，使用者很快发现这类药物导致了奶牛乳房炎发病率加繁殖率低。由于药物的作用，奶牛新陈代谢加快，导致能耗增加而引起死亡，牛奶的营养价值也降低了。对获准在西班牙和美国商业化种植的转基因玉米和棉花进行针对性研究后认为，转基因作物可能引起脑膜炎和其它新病种。也有资料证实，转基因食品可能诱发癌症并传递给下一代以及导致失调，可能需要30年或更长的时间。转基因治疗性药物、人体组织器官等是否对人体健康造成影响，尚无法检测证实¨转基因的管理我国对转基因产品的管理主要是针对农业转基因生物的管理。全国农业转基因生物安全的监督管理工作由农业部负责；卫生部依照《食品卫生法》的有关规定，负责转基因食品卫生安全的监督管理工作；此外，国务院还建立了由多个有关部门组成的农业转基因生物安全管理际联席会议制度，负责研究和协调农业转基因生物安全管理工作中的

重大问题。为了促进我国生物技术的发展，对作为其核心技术的重组DNA技术的研究和开发，必须加强安全性管理。早在1990年，中国政府就制定了《基因工程产品质量控制标准》，成为我国第一个有关生物安全的标准和办法。1993年，原国家科学技术委员会发布了《基因工程安全管理办法》，对基因工程的定义、安全等级及安全性评价的划定、申报及审批程序等作了规定。在这一技术在国际上开始进入商品化的1996年，农业部又相应制定《农业生物基因工程安全管理实施办法》，具体规定农业生物基因工程安全等级的划分标准，明确各阶段的审批权限，以及相应的安全性控制措施；对农业生物技术的全过程，从实验研究，到中间试验，遗传工程体及其产品的环境释放，到遗传工程体及其产品的商品化生产实施管理，其适用范围涵盖我国自己研发的工作，也包括国外研制的相应产品在我国境内的各个阶段的试验、研究、应用。在联合国环境规划署(UNEP)和全球环境基金(GEF)的支持和资助下，2000年国家环保总局牵头编制了《中国国家生物安全框架》ⅢJ，提出了我国生物安全管理体制、法规建设和能力建设方案。2000年通过的《种子法》，要求转基因植物品种的选育、试验、审定和推广必须进行安全性评价，并采取严格的安全控制措施。销售转基因植物品种种子的，必须用明显的文字标注，并提示使用时的安全控制措施。这是我国第一次要求对转基因产品进行标识。2001年国务院颁布实施《农业转基因生物安全管理条例》。2002年，农业部发布施行《农业转基因生物安全评价管理办法》、

食品理化检验技术试题及参考答案

《食品理化检验技术》试题及参考答案填空题（每小题2分，共计20分） 1．液态食品的相对密度可反应液态食品的和。 2．样品的制备是指对采集的样品进行、。混匀等处理工作。 3．食品中水的有在形式有和两种。 4．膳食纤维是指有在于食物不能被人体消化的和的总和。 5．碘是人类必需的营养素之一：它是的重要组成成分。 6．食品中甜味剂的测定方法主要有、、薄层色谱法等。 7．合成色素是用人工方法合成得到的，主要来源于及副产品。 8．食品中农药残留分析的样品前处理一般包括三个步聚：即、和浓缩。9．赭曲霉毒素的基本化学结构是由连接到β-苯基丙氨酸上的衍生物。 10．镉是一种蓄积性毒物，主要蓄积部位是肾和。 11．丙稀酰胺由于分子中含和，具有两个活性中心，所以是一种化学性质相当活泼的化合物。 12．雷因许氏试验是常用于和快速检验的定性实验。多项选择题（每小题2分，共计10分） 1．关于保健食品的叙述正确的是（） A．具有特定保健功能 B、可以补充维生素、矿物质 C、适宜特定人群食用 D、具有调节机体功能，不以治疗疾病为目的 2．标准分析法的研制程序包括（） A．立项 B、起草 C、征求意见 D、审查 3．食品样品制备的一般步骤分为（） A．去除非食品部分 B、除去机械杂质 C、均匀化处理 D、无机化处理 4．在常压下于（）0C（）h干燥食品样品，使其中水分蒸发逸出，食品样品质量达到恒重。 A．950C-1050C B、900C-1000C C、2-4h D、4-6h 5．通常食品中转基因成分定性，PCR检测可分为以下几个步骤（） A．确定待测目标序列 B、引物设计和PCR扩增 C、PCR反应体系的构建 D、电泳及结果分系判断题（每小题2分，共计20分） 1．海豚毒素是一种小分子非蛋白类神经毒素，其毒性比剧毒药物青化钾还要大1000倍，与人的致死量为0.5mg（） 2．塑料种类繁多，按受热后的性能变化可分为热固性和热塑性。（） 3．将真核细胞中主要的已知基因mRNA通过逆转录PCR扩增合成不同基因的c DNA探针，并制成基因芯片。（） 4．现场样品的采集必须遵照统计学意义上的随机原则，从而使所采集的样品具有代表性，并能最终保证检测结果的可靠性和准确性。（） 5．食品中丙烯酰胺的主要来源是热力加工食品，其形成的机制目前基本的到确认。（）6．PCBs不是公认的持久性有机污染物。（） 7．分光光度法是测定挥发性亚硝胺类化合物的方法。（）银白色软金属，原子量112.41，密度8.6，熔点320.90C，沸点7670C。（） 8．C d 9．氨基甲酸酯是继有机磷农药后的一类重要的防腐剂。（） 10．皂苷对人体的新陈代谢起着重要生理作用，它可以抵制血清中指类氧化，抵制过氧化酯质生成。（）

大豆营养成分

大豆营养成分众所周知多吃豆制食品有助于身体健康，适当的补充大豆营养素有助于保持健康的身体，这是因为其中含有十分丰富的蛋白质、钙、钾、镁等各种无机盐、微量元素。总之常吃大豆对身体健康，保持年轻态等各个方面均有一定好处，那么你知道大豆中都含有哪些营养成分吗？食材简介黄豆又叫青仁乌豆、大豆、泥豆、马料豆、秣食豆，品种有，冬豆，秋豆，四季豆，我国主产于东北地区。中国古称菽，是一种其种子含有丰富蛋白质的作物。豆科植大豆呈椭圆形、球形，颜色有黄色、淡绿色、黑色等。大豆最常用来做各种豆制品、榨取豆油、酿造酱油和提取蛋白质。豆渣或磨成粗粉的大豆也常用于禽畜饲料。营养价值大豆营养全面，含量丰富，其中蛋白质的含量比猪肉高2倍，是鸡蛋含量的2.5倍。蛋白质的含量不仅高，而且质量好。大豆蛋白质的氨基酸组成和动物蛋白质近似，其中氨基酸比较接近人体需要的比值，所以容易被消化吸收。如果把大豆和肉类食品、蛋类食品搭配着来吃，其营养可以和蛋、奶的营养相比，甚至还超过蛋和奶的营养。大豆脂肪也具有很高的营养价值，这种脂肪里含有很多不饱和脂肪酸，容易被人体消化吸收。而且大豆脂肪可以阻止胆固醇

的吸收，所以大豆对于动脉硬化患者来说，是一种理想的营养品。大豆中含有丰富的钙、磷、镁、钾等无机盐，还含有铜、铁、锌、碘、钼等微量元素。大豆中的钙、磷与蛋白质相结合，容易被人体消化吸收；铁和碘对人体很重要，缺铁的人会得贫血病，缺碘的人会得甲状腺肿大症；微量元素钼可以抑制产生癌症的致癌物质。食用功效 1、增强机体免疫功能：大豆含有丰富的蛋白质，含有多种人体必需的氨基酸，可以提高人体免疫力。 2、防止血管硬化：黄豆中的卵磷脂可除掉附在血管壁上的胆固醇，防止血管硬化，预防心血管疾病，保护心脏。大豆中的卵磷脂还具有防止肝脏内积存过多脂肪的作用，从而有效地防治因肥胖而引起的脂肪肝。 3、通导大便：大豆中含有的可溶性纤维，既可通便，又能降低胆固醇含量。 4、降糖、降脂：大豆中含有一种抑制胰酶的物质，对糖尿病有治疗作用。大豆所含的皂甙有明显的降血脂作用，同时，可抑制体重增加。 5、大豆异黄酮是一种结构与雌激素相似，具有雌激素活性的植物性雌激素，能够减轻女性更年期综合征症状、延迟女性细胞衰老、使皮肤保持弹性、养颜、减少骨丢失，促进骨生成、降血脂等。适用人群一般人群均可食用。

诸多检测、实验让你自己判断转基因大豆油是否安全无害!

诸多检测、实验让你自己判断转基因大豆油是否安全无害！作者：半解一知半解时间：2013年6月17日闲话少说，我们看看以下国内一流的研究、检测部门多年来的检测记录吧，自己判断转基因大豆油到底是不是安全无害： 1。《中国油脂》2002年2期广州出入境检验检疫局食品实验室《PCR法定性检测食用油脂中转基因成分》：【摘要】：食用油脂(尤其是精炼油)被认为几乎不含DNA和蛋白质等生物大分子。针对食用油脂中DNA含量极低、破坏严重的特点，成功地建立了食用油脂中DNA提取方法，并从中检测出玉米、大豆内源基因(IVR, Lectin)以及外源抗虫基因[CryIA(b)]和抗除草剂基因(EPSPS)，为油脂进行核酸类生物性检测提供了一种简捷有效的方法。 2。《华北农学报》2004年1期天津农业科学院中心实验室、辽宁省出入境检验检疫局《大豆色拉油中转基因成份检测技术研究》：【摘要】：针对大豆色拉油中DNA较难提取的问题提出了充分乳化、延长醇沉淀时间和反复富集小片段DNA等措施,有效地从大豆色拉油中提取到DNA,并通过大豆特异内源基因扩增得以证明。从两个不同品种商品大豆色拉油中检测出35S启动子和NOS 终止子外源调控序列,并通过增加所用DNA模板用量检测出目的基因EPSPS序列,建立了大豆色拉油中转基因成分检测方法。3。《生物化学与分子生物学》2007年安徽大学《食用油DNA 提取方法及转基因成分检测技术的研究》：该论文明确说明：“通过优化实验对普通PCR法检测外源基因进行分析，得出以下最佳反应条件”、“可提供一种比普通PCR更可靠灵敏的转基因成分定性检测方法”。

4。《东北农业大学学报》2007年6月东北农业大学生命科学学院《转基因大豆及其深加工产品的PCR检测》：【摘要】：以PCR技术为基础,建立了从大豆及其深加工产品中检测转基因成分的方法.大豆及其深加工产品采用改良的CTAB法进行DNA提取纯化,大豆色拉油DNA则用试剂盒方法进行了提取纯化.对提取的DNA用PCR方法对大豆特异性内源基因lectin进行扩增,设计CaMV35启动子和NOS终止子特异性引物对其是否含有转基因成份进行初步的定性PCR筛选,并用抗除草剂基因CP4EPSPS对阳性结果进行确证.实验结果表明,改良的CTAB法对大豆深加工产品的DNA有很好的提取效果,而试剂盒方法对色拉油的DNA有良好的提取效果;PCR检测转基因的方法快速高效,检测结果与标准相符. 5。《中国油脂》2007年8期广州市产品质量监督检验所食品中心《食用大豆油中转基因成分的检测》：【摘要】：食用油脂中转基因成分的检测是当前食品检验工作的一个主要方面。针对食用油脂中DNA含量极低、DNA序列片段短、破坏严重的特点，建立了食用油脂中DNA提取方法，通过实时荧光PCR可检测出大豆内源基因（Lectin）以及外源抗除草剂基因EPSPS，为食用油脂进行核酸类生物性检测提供了一种简捷有效的方法。 6。《河北农业大学学报》2007年河北农业大学《五重PCR 检测转基因大豆及其食用油脂的研究》【摘要】：随着转基因产品商品化，转基因植物、动物、微生物加工而成的转基因食品在传统食品市场中的份额在不断加大，转基因食品已经不知不觉的走进了人们的餐桌，进入了食物链。然而，转基因食品中含有新的遗传物质，即外源DNA以及由外源基因编码的新蛋白，而传统食品是不存在这些情况的，并且传统食品是经过人类几千年的食用证明是安全的，因此转基因食品的安全性是摆在人类面前的重大难题；由于转基因食品的安全性在较短的时间内无法确定，因此，目前各国对转基因食品都采用

转基因大豆进口对我国生物安全的影响及对策研究

转基因大豆进口对我国生物安全的影响及对策研究一、目前已经商业化或正在研发阶段的转基因大豆（一）耐除草剂基因的大豆孟山都公司的耐草苷膦大豆是在1994年5月19日得到商品批准的。这是最早获准推广的转基因大豆品种（Roundup Ready Soybean，简称 RR大豆）。RR大豆对非选择性除草剂农达（Roundup）有高度耐受性。目前世界上种植最多的是RR大豆。Aventis公司耐膦丝菌素大豆是在 1996年7月31日得到商品批准的。种植抗草苷膦大豆可节约劳力、降低成本，在杀灭杂草后可使大豆增产，因此，在劳力昂贵的美国对RR大豆进行了大面积推广。（二）豆油脂肪酸改变的大豆杜邦公司的豆油脂肪酸改变大豆是1998年4月30日获美国食品药物管理局批准，目前杜邦公司利用基因工程方法用反义的油酸脱饱和酶基因转入大豆，已培育出了油酸含量达70%以上的大豆品种。此外，在美国低亚麻酸大豆、低棕榈酸大豆、高硬脂酸大豆、高棕榈酸大豆等转基因品种也已培育成功。在大豆油脂中，单不饱和脂肪酸是对人体最为有益的营养成份。利用基因工程方法培养出了高油酸含量，提高了对人体最佳的营养成份，同时也降低了多不饱和脂肪酸含量，而且也不存在反式双键的脂肪酸，因此是一种理想的植物油。（三）转抗虫基因大豆由于大豆食心虫的危害，抗虫转基因大豆的研究在国内外广泛开展，研究者多采用苏云金芽孢干菌(Bt)伴孢晶体蛋白基因提高大豆抗虫性。目前，在国际上还未见有抗虫转基因大豆被批准商品化的报道。抗虫大豆可以有效地控制大豆食心虫的发生，从而提高大豆产量，显著提高豆粒品质。二、转基因大豆的发展及其在全球转基因作物中的地位（一）转基因大豆在全球转基因作物种植面积中占据主要地位目前世界上种植最多的转基因作物是玉米、大豆、棉花和油菜籽。转基因作物种植面积由1996年的170万公顷猛增到2001年的5260万公顷，其中转基因大豆由50万公顷猛增到3330万公顷，在全球转基因作物种植面积中占63%，比2000年增加750万公顷，增长29%（见表1）。

转基因食品的检测方法材料

生命科学前沿讲座论文转基因食品的检测方法姓名：陈继款系别：生命科学学院专业：生物信息学年级：2008级学号：080567011 指导老师：薛李春总成绩： 2010年07月02日

转基因食品的检测方法自1983年世界第一例转基因作物问世以来，目前全球转基因农作物种植面积已达到5 000万hm2以上，大量的转基因农产品被直接或间接的制成人类的食品，呈迅猛发展的趋势。但是转基因作物作为一种新物种，其对人体健康、生态平衡是否具有危害还未确定。许多国家以立法或其他形式要求对转基因产品进行标记。我国于2001年5月23日颁布《农业转基因生物安全管理条例》，2002年3月20日开始实行的《农业转基因生物标识管理办法》规定，国家对农业转基因生物实行检验检疫和标识制度。世界各国均对转基因食品及其加工产品出具是否为转基因产品的认定报告。因此转基因产品的检测就显得尤为重要。转基因食品的检测主要从两个方面人手，一是核酸水平，即检测遗传物质中是否含有插入的外源基因；二是蛋白质水平，即通过插入外源基因表达的蛋白质产物或其功能进行检测，或者是检测插入外源基因对载体基因表达的影响，主要检测外源基因对插入位点附近基因影响及对其代谢产物的影响，由于该类型检测成本高，所需时间长，且被认为重要性较低，目前该类检测实际工作中较少涉及。本文分别对核酸和蛋白质两种水平上的检测方法进行综述。 1核酸水平主要检测报告基因、启动子和终止子，是当前转基因产品检测的重要手段。椰菜花叶病毒(CaMV)35s启动子、胭脂碱合酶NOS终止子等10多种基因和基因片段广泛存在于转基因植物中，这就为检测转基因食品提供了便利。核酸水平的检测可以分为定性和定量两种。 1．1定性检测 1．1．1聚合酶链式反应(PCR) 1996年德国伯恩斯坦大学的Meyer Rolf等论证了PCR检测转基因食品的可能性。利用该方法在鉴定转基因抗除草剂大豆RoundUp ReadyTM Soybean(RRS)和转基因抗虫玉米系列标准品Btl76 Maxi maizer的实验中，可以检测到仅为0．5％转基因成分。Matsuoka等通过对7种转基因玉米转入的外源基因的序列分析，设计了14对检测该7种转基因玉米启动子、终止子和结构基因的引物，分别对转基因玉米、非转基因玉米、转基因大豆、非转基因大豆进行了PCR扩增检测，同时为检测所设计引物的特异性，还对其他作物如水稻、大麦、小麦等进行了PCR扩增，检验结果表明该方法能够快速有效地检测转基因玉米品种。每一次实验均需要设有阴性及阳性对照以确保实验结果可靠性。在样品采集及处理过程中也需要注意防止污染。 1．1．2多重PCR 多重PCR是常规PCR方法的改进，它是在同一个反应中同时扩增两个或多个目标基因序列。这种方法具有更大的可靠性和适应性，并且能降低检测成本。多重PCR可以同时针对几个靶位点进行PCR技术检测。V．T．Forte等利用其设计的多重PCR方法对转基因大豆和Bt玉米样品进行实际检测，结果表明该方法能够准确的检测食品中是否含有转基因成分，其检测结果可以精确到2％～0．1％的范围。Permingeat等仅用两

大豆的营养价值及功效

大豆的营养价值及功效大豆的营养价值及功效大豆营养分析 1. 增强机体免疫功能：大豆含有丰富的蛋白质，含有多种人体必需的氨基酸，可以提高人体免疫力; 2. 防止血管硬化：黄豆中的卵磷脂可除掉附在血管壁上的胆固醇，防止血管硬化，预防心血管疾病，保护心脏。大豆中的卵磷脂还具有防止肝脏内积存过多脂肪的作用，从而有效地防治因肥胖而引起的脂肪肝; 3. 通导大便：大豆中含有的可溶性纤维，既可通便，又能降低胆固醇含量; 4. 降糖、降脂：大豆中含有一种抑制胰酶的物质，对糖尿病有治疗作用。大豆所含的皂甙有明显的降血脂作用，同时，可抑制体重增加; 5. 大豆异黄酮是一种结构与雌激素相似，具有雌激素活性的植物性雌激素，能够减轻女性更年期综合征症状、延迟女性细胞衰老、使皮肤保持弹性、养颜、减少骨丢失，促进骨生成、降血脂等。大豆补充信息 1. 应用于手足抽筋疼痛：黄豆100克，细米糠60克，加水煎至黄豆熟烂，一天分2次吃; 2. 应用于烧烫伤：治疗期间每天用黄豆适量煮汁服，可加快

治愈，愈后无疤痕。 3. 美国从事转基因农产品与人体健康研究的人士发现，吃豆奶长大的孩子，成年后引发甲状腺和生殖系统疾病的风险系数增大。据美国专门机构研究，这与婴儿对大豆中的植物雌激素的反应与成人完全不同有关，所以不要让婴儿多喝豆奶。大豆适合人群：一般人群均可食用 1. 大豆是更年期妇女、糖尿病和心血管病患者的理想食品;脑力工作者和减肥的朋友也很适合; 2. 大豆在消化吸收过程中会产生过多的气体造成胀肚，故消化功能不良、有慢性消化道疾病的人应尽量少食; 3. 患有严重肝病、肾病、痛风、消化性溃疡、低碘者应禁食;患疮痘期间不宜吃黄豆及其制品。大豆食疗作用大豆味甘、性平，入脾、大肠经; 具有健脾宽中，润燥消水、清热解毒、益气的功效; 主治疳积泻痢、腹胀羸瘦、妊娠中毒、疮痈肿毒、外伤出血等。黄豆还能抗菌消炎，对咽炎、结膜炎、口腔炎、菌痢、肠炎有效。大豆的营养价值，大豆的做法，大豆的作用与功效，大豆的吃法，菜谱之家为您提供大豆的各种菜肴的制作方法。大豆的吃法素鸡素鸡是一种汉族豆制食品，广泛分布中国中部和南方。以素仿荤，口感与味道与原肉难以分辨，风味独特，以豆腐皮(千张，非油皮)作主料，卷成圆棍形，捆紧煮熟，切片过油，加调料炒制

转基因植物的检测与鉴定

收稿日期:2006-09-28转基因植物的检测与鉴定宫雪超,于丽杰,高金秋 (哈尔滨师范大学环境与生命科学院,黑龙江哈尔滨150025) 摘要:对植物转基因过程中报告基因的种类和应用范围、转基因植物的检测和鉴定方法、转基因植物检测和鉴定方法的评价进行了综述. 关键词:转基因植物;检测;鉴定;评价 [中图分类法]Q943[文献标识码]A[文章编号]1003-6180(2007)01-0015-03 植物转基因实验因受体系统的限制,外源基因的转化频率较低,为了达到转化目的,必然要获得大量的转化材料,如何在数以千万计的转化植株或细胞中,快速、有效地检测出转基因阳性植株或细胞,外源基因是否整合到植物染色体上,整合的方式如何,整合到染色体上的外源基因是否正确表达等问题,就成为重要的研究课题.根据外源基因表达的不同水平,对外源基因的检测和鉴定可以分为三个水平进行:整合水平、转录水平和翻译水平.本文从外源基因表达的不同水平,阐述转基因植物的检测与鉴定. 1外源基因整合水平的鉴定检测外源基因是否转化成功,首先是对报告基因进行检测,必要时再进行目的基因的检测,检测目的基因需要采用分子杂交方法. 1.1报告基因报告基因必须具有两大特点:一是表达产物和产物的类似功能在未转化的植物细胞内并不存在;二是便于检测.目前植物基因工程中使用的报告基因一般是编码酶的基因.大致分为两类:抗性基因和编码催化人工底物产生颜色变化的酶基因.现在常用的报告基因主要有:gus基因、cat基因、冠瘿碱合成酶基因、np tò基因、gf p基因、bar 基因[1]、荧光素酶基因、二氢叶酸还原酶基因等.近年来,绿色荧光蛋白基因作为一种新型的报告基因在植物基因转化及基因表达调控中得到应用,并显示出较其他几个报告基因更大的优越性. gf p基因的检测gf p基因具有以下优点:1适用于各种生物的基因转化;o检测方法简便,无需底物、酶、辅因子等物质,只要有紫外光或蓝光照射,其表达产物就可以发出绿色荧光,这对转化细胞的检测极为有利;?便于活体检测,十分有利于活体内基因表达调控的研究;?检测时可获得直观信息,有利于转基因植物安全性问题的研究及防范.若此报告基因通过自然杂交扩散到其他栽培植物或杂草中时,很容易通过光照获得直观信息. gus基因的检测g us基因也是广泛用作转基因植物、细菌和真菌的报告基因,尤其是在研究外源基因瞬时表达的转化试验中,gus基因应用的最多.gus基因3-端与其他结构形成的融合基因能正常表达,所产生的融合蛋白仍具有gus活性,这为研究外源基因表达的具体细胞部位及组织部位提供了条件,这是它的一大优点.但是需要注意的是,有一些植物在胚胎状态时能产生内源gus活性,Sory u[2]在转基因R0和R1代的子叶、花粉和胚珠中检测到g us活性,随着组织的成熟衰老,g us表达逐渐停止.在实验过程中要设定严格的阴性对照.g us活性的检测方法有很多,包括组织化学法、色谱法、荧光法等,其中植物切片gus 组织化学定位分析是分辨组织中不同细胞个体和不同的细胞类型基因表达差异的一种有效方法. 1.2转基因植株的PCR检测 PCR(聚合酶链式反应poly merase chain re-actio n)是首选的转基因产品检测方法.PCR技术能够有效地扩增低拷贝的靶片段DNA,可以检测到每克样品含有20pg~10ng的转化基因成分,对转基因产品大分子量DNA检测的灵敏度可以达到样品含量的0.0001%[3].因为PCR的高度特异性及检测所需的模板量仅为10ng以内,所以为外源基因整合的检测提供了便利条件,尤其是在转化材料少又需及早检测的时候.现在已经利用该技术对欧美杨[4]、番茄[5]、辣椒、葡萄、豆瓣菜、小麦[6]等转基因植物进行鉴定,是转基因植物鉴定中最简单、最常用的方法[7].PCR检测具有DNA用量少,操作简单,成本低,耗时少,不需要同位素等优点,但PCR检测也存在缺点,由于PCR扩增十分灵敏,有时会出现假阳性扩增,因此检测只能作为初步结果. 1.3Southern杂交证明外源基因在植物染色体上整合情况的最可靠方法是DNA So uther n杂交,只有经过分子杂交鉴定为阳性的植株才可以称为转基因植物. # 15 #

植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法编制说明

附件7：出入境检验检疫行业标准草案编制说明（参考格式）标准草案名称中文植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法英文Protocol of the real-time PCR for detecting genetically modified plants and their derived products 与国际标准和国外先进标准一致程度情况□等同 □修改 ?非等效标准号英文名称 Protocol of the real-time PCR for detecting genetically modified plants and their derived products 中文名称植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法任务来源批准立项的文件名称和文件号植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法计划编号2011B477r 制（修）订情况□制定?修订替代的标准编号SN/T 1204-2003 起止时间2012年12 月--- 2013 年12 月项目承担单位中国检科院起草团队中国检科院，山东出入境检验检疫局，上海出入境检验检疫局专业类别□食品（化妆品）检验；□卫生检疫；□动物检疫；?植物检疫； □纺织产品检验；□轻工产品检验；□机电产品检验；□化工、矿产品和金属材料检验；□管理；□鉴定；□包装及危险化学品

标准体系表代码调整情况无调整2 背景情况

目的、意义原标准是10年前制定的，2003年，全球转基因作物种植面积只有8亿公顷，至2012年，种植面积达亿公顷，全球59个国家或地区批准了2497项申请，涉及25种作物319个转化体。转基因产品呈现出生物技术产品品种多、性状全、成分复杂等新特点，原有标准所涉及的检测方法远远无法满足日常转基因检测的需求。具体存在的问题有，1、转基因筛查用通用元件有很大的发展，急需补充完善相应的检测方法；2、原有标准中的一些检测方法有更新，可采用更先进更灵敏的检测方法；3、品系检测是目前转基因鉴定的重点，原标准中尚未涉及，需制定系统覆盖我国主要进出口作物的品系检测方法；4、现有的标准检测方法较分散，在实际的检测操作中带来很大的不便。基于上述背景，本标准拟制定一项内容全，适用面广，可操作性强、灵敏度高的转基因植物及其产品检测方法。与国内外相关标准、文献的关系引用国际国内已发布的权威标准方法，属于标准等同采用。

转基因大豆安全性研究

转基因大豆安全性研究【摘要】转基因大豆是世界上最早商品化、推广应用速度最快的转基因作物,但其遗传转化仍然是基因工程领域的难点之一,如何建立高效稳定的遗传转化体系是转基因大豆的研究重点,同时随着转基因大豆走上人们的餐桌,关于其安全性也引起了人们的质疑。本文将从目前研究的各个方向来阐述转基因大豆的发展现状、转基因大豆的优势、转化技术、安全性评价以及对未来转基因生物的展望。【关键字】转基因大豆、环境安全、生物多样性、基因漂移

【正文】一、转基因大豆生产的现状近年来,美国的转基因大豆商业化速度进展很快,1994年美国Monsanto公司研制的抗草甘膦转基因大豆被批准进行商业化生产,1997年DuPont公司研制的高十八烯酸(油酸)大豆被批准进行商业化生产,1998年AgrEvo公司研制的抗草丁膦大豆被批准进行商业化生产。2001年,世界种植大豆总面积7 200万公顷,而转基因大豆有3330万公顷占据全球转基因作物的63%,且均为抗除草剂大豆。目前种植转基因大豆的国家主要是美国(转基因大豆约占97%)、阿根廷(转基因大豆约占90%)和巴西(转基因大豆约占25%)等,我国还没有转基因大豆生产。二、转基因大豆的优势 1、转基因大豆的主要特性大豆是植物蛋白、油脂、食品、饲料及工业原料的重要来源作物。仅排在水稻，小麦和玉米之后，是世界四大粮食作物之一。当前，转基因大豆商业化种植的主要品种美国抗除草剂草甘膦转基因大豆是通过农杆菌介导方法，将矮牵牛Ti质粒（GaMy）中35s启动子控制EPSPE基因导入到大豆植株，进而培育成的新品种[1]。其含有的4个来源于土壤细菌的5-烯醇丙酮酸莽草酸-3-膦酸合成酶（epsps）基因，是草甘膦抗性的主要来源[2]。此基因与大豆酚类、生物碱和芳香族氨基酸等代谢相关。抗草甘膦转基因大豆的特性主要表现为：较好控制草害、大豆产量高、抗虫性较强、护土壤、降低污染、改善环境、防止土壤养分及水土的流失、减少除草剂活性成分及能有效地控制杂草的生长与繁育，转基因大豆食品使大豆油的产量与品质得到改良、延长食品贮藏时间。 2、转基因大豆的营养价值金红等对非转基因大豆W28544与美国转基因大豆GTS40-3-2种子中的部分营养指标进行差异检测,结果表明,转基因大豆中的粗脂肪、粗蛋白、脂肪酸、黄酮和酚酸的含量都明显高于非转基因大豆。并且，这些物质均具有提高植物对物理环境的适应性，增强植物抵御天敌侵袭及抵抗病害的能力，monsanto公司对培育转基因大豆品种GTS40-3-2进行食品安全评价的结果表明：转基因大豆中所有氨基酸的含量与非转基因大品种之间不存在显著性差异，内源蛋白过敏源及含量与非转基因大豆之间也不存在差异性，相同品质改良的转基因大豆也取得重

转基因大豆油和非转基因大豆油有什么区别

转基因大豆油和非转基因大豆油有什么区别？转基因大豆的研制是为了配合草甘膦除草剂的使用。除草剂有选择性的和非选择性的，草甘膦是一种非选择性的除草剂，可以杀灭多种植物，包括作物，这样，虽然这种除草剂的效果很好，但是却难以投入使用。草甘膦杀死植物的原理在于破坏植物叶绿体或者质体中的EPSPS合成酶。通过转基因的方法，让植物产生更多的EPSPS酶，就能抵抗甘草膦，从而让作物不被草甘膦除草剂杀死。有了这样的转基因大豆，农民就不必像过去那样使用多种除草剂，而可以只需要草甘膦一种除草剂就能杀死各种杂草。目前除了大豆之外，还有很多其他抗甘草膦的转基因作物，包括油菜、棉花、玉米等。除了抗草甘膦作物之外，还有抗草丁膦除草剂的作物，不过草丁膦而草甘膦杀灭植物的原理并不相同，而培养这两类作物所转的基因也不同。而目前转基因大豆主要用来提炼大豆油。对于转基因大豆，人们有两大类忧虑，一类是出于健康角度，一类是出于生态角度，生态角度又包括产生超级杂草和影响我国的本土大豆品种两方面。而绿色和平目前的战役则是让南顺油脂有限公司提供非转基因大豆油。我们可以根据一些基本知识和常识来分析这些忧虑有多大程度上是现实的。

从健康角度来说，就是转基因的大豆油是否含有对人类有害的成分。对于食用油，我们知道其主要成分是甘油三脂，而转基因大豆所转移的基因的作用就是让植物产生更多EPSPS酶，和植物油脂的成分没有关系，所以大豆油的主题成分和是否是转基因植物生产出来的无关，关键是是否有些微量成为混杂在其中从而影响人的安全。这些有害的成分被猜想可能来自以下几个方面。第一是所转的基因片断进入人体，影响人类的基因。第二是过多的EPSPS合成酶进入人体，从而以影响人类的健康。第三是所转基因可能会有人类所不知的功能，是植物能合成一些对人类健康有害的物质，并随大豆油进入人体造成影响。第四是作物可能会被施以过多的草甘膦除草剂，这些除草剂可能随大豆油进入人体，影响人体的健康。对于影响人类的基因，这点可以说是完全不存在的。道理不难理解，如果所转的基因片断能影响人类的基因，那么食物的常规基因也就同样能影响，而对于人类来说，二者都是来自人体之外的外来基因，没有区别的。从人的生理角度来说，人只能吸收小分子，基因是位于DNA上的，DNA是大分子，在消化道中会被分解成小分子的核苷酸。而DNA上所记载的遗传信息的不同只是核苷酸的排列顺序不同，如果被消化成了独立的核苷酸，也就不存在排列顺序了，不存在任何遗传信息，也就不再是基因了。EPSPS酶是一种蛋白质，蛋白质也是大分子，经过消化会变成氨基酸，酶也就不存在了。对于这个转过的基因是不是有别的人