核固红染色液配制及使用方法

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核固红染色液(0.1%)

核固红染色液是组织切片染色中常用的复染液，染色后细胞核呈红色。本产品为工作液，可直接使用。染色液可重复使用多次，但染色效果会逐渐降低。

使用方法：

1、切片脱蜡至水，可进行其他染色，染色后蒸馏水洗2-5min。

2、将组织切片浸入核固红染色液，也可以直接滴加到样本上染色5-10分钟(浅染细胞核)，染色时间可根据染色深度做相应调整。

3、自来水中冲洗去除多余的染色液。

4、常规脱水透明，中性树胶封固。

注意事项：

1、切片脱蜡应尽量干净。

2、第一次使用本试剂时建议先取1-2个样品做预实验。

3、染色过程推荐浅染，通常能够分辨细胞核即可，颜色过深有可能影响细胞颜色。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

产地：国产

提示：本品仅用于科研实验，不能用作医疗及临床诊断。

保存：室温避光保存，有效期至少一年。

关键词：核固红染色液(0.1%)

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苏木素-伊红染色液 (混合型)

苏木素-伊红染色液(H-E)说明书 【产品名称】 苏木素-伊红染色液(H-E） 【型号】 混合型 【包装规格】 货号：DH0003 单瓶包装规格分别为：50ml、100ml、250ml、500ml、5000ml。 【预期用途】 主要用于对细胞组织进行染色。 【检验原理】 苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合主要用于对细胞组织进行染色，简称HE染色，是病理学常规制片中最基本的染色方法，应用极其广泛，苏木素-伊红染色是生物学、组织学、病理学及细胞学等学科必不可少的最基本的染色方法，在病理诊断、教学与科研中广泛应用，具有重要价值，细胞中的细胞核是由酸性物质组成，它与碱性染料(苏木素)的亲和力较强；细胞浆则相反，它所含的碱性物质与酸性染料(伊红)的亲和力较大。因此细胞或组织切片经苏木素-伊红染色液染色后，细胞核被苏木素染成鲜明的蓝紫色，细胞浆、肌纤维、胶元纤维等呈不同程度的红色，红细胞则呈橙红色，本染色液系将苏木素和伊红混合成一种溶液，染色后可不分化即可达到常规HE染色效果。 【主要组成成分】 试剂组成主要成分 苏木素-伊红染色液(H-E）混合型苏木色精伊红 【储存条件及有效期】 5℃～35℃保存，原包装未开封染色液的有效期为18个月，在有效期内的已开封染色建议在开封后6个月内使用完，每次用后及时拧紧瓶盖，以免挥发或变质。 【样本要求】 涂片和切片必须充分固定，石蜡切片要充分脱蜡。 【检验方法】 l、石蜡切片于二甲苯I、II中各脱蜡若干分钟； 2、经无水乙醇和95%乙醇各约若干分钟，经80%乙醇若干分钟，自来水冲洗若干分钟； 3、苏木素-伊红染色液(H-E）(混合型)染色若干分钟； 4、自来水冲洗返蓝若干分钟；亦可用碳酸锂水溶液返蓝若干分钟，自来水洗若干分钟； 5、95%乙醇I、II中各调色约若干分钟，时间不宜过长； 6、无水乙醇I、II中各脱水若干分钟，二甲苯I、II中各透明I、II中各透明若干分钟； 7、封片胶封片，镜检。 【检验结果的解释】 细胞核呈蓝紫色，细胞质、间质、各种纤维呈不同程度的红色。 【检验方法的局限性】 仅供细胞和组织形态学观察染色使用。 【产品性能指标】 pH值(25℃±1℃)应为2.4±0.5。 【注意事项】 1、温度较低时染色液不易着色，可适当延长染色时间。

1.3消毒液配制和使用制度

消毒液配制和使用制度 1、目的 规范消毒剂的配置及消毒剂的储存、保管和使用，防止对食品造成污染，确保使用安全，特订立此制度。 2、适用范围 本标准适用于公司消毒剂及消毒剂储存、保管、发放、使用。 3、职责 3.1品控部负责文件的制定及推行和实施，并对实施的过程和结果进行检查和跟踪。 3.2生产相关的部门按照本程序的要求进行操作。 4、程序 4.1更衣室应依据各种消毒剂的特性设立专柜管理，应存放于阴凉、干燥处，严禁接触热源、火源，放置时应开口向上，以免洒漏或挥发失效。保证安全存量不少于一个月的使用量，不得出现中断现象。 4.2消毒剂配制注意事项： 4.2.1配制时应使用专用器具、量具，并加以标识区别。 4.2.2因含氯消毒剂对人体呼吸道膜和皮肤有明显刺激，配制时须戴口罩（防毒面具）和橡胶手套，或在通风区域配制。 4.2.3配制消毒剂时应产看消毒剂的生产日期和有效期，及消毒剂是否变质现象。 4.3消毒剂的配制方法： 4.3.175%酒精，将211ml蒸馏水（室温）放置于量筒中，加入95%的酒精至

1000ml，或直接购买75%酒精使用。 4.3.2ClO2消毒液，取ClO2A剂3包及B剂3包，加入盛有3.9kg（根据采购市售ClO2有效氯浓度即使调整加水量）水的塑料容器中充分溶解成为母液。配置好的母液必须在24小时内用完，若用不完须放入避光干净容器中密闭待用。 4.3.3消毒剂配制及使用控制表 4.4消毒频率及消毒液浓度 4.4.1消毒频率：看横松架每隔5分钟消毒一次；装箱、封箱人员每隔30分钟对手消毒一次；入库人员每隔1小时对手消毒一次，其他人员每隔10分钟对手消毒一次。每次浸泡不低于30秒。 4.4.2消毒液更换频率：3小时更换一次，若消毒液有效氯低于标准值应随时补充。 4.4.3消毒液控制浓度值

伊红染色液使用说明及注意事项

伊红染色液使用说明及注意事项 货号：G1100 规格：100ml/500ml 保存：本试剂常温保存，复检期为1年。 产品说明： 伊红是一种酸性生物染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。 伊红染色液操作简单，不使用汞、甲醇等有毒试剂，可以用于组织切片或培养细胞的染色，染色后细胞浆呈粉红色或红色。本染色液可以和免疫荧光染色或免疫组化染色配合使用。染色过程需要优化，着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。本产品为工作液，可直接使用。 操作说明： 1、样品处理 a)对于石蜡切片：二甲苯中脱蜡5-10分钟，换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5-10分钟，无水乙醇5分钟，90%乙醇2分钟，70%乙醇2分钟，蒸馏水2分钟。 b)对于冰冻切片：经固定的切片置蒸馏水2分钟。 c)对于培养细胞：用4%多聚甲醛固定10分钟以上，蒸馏水洗涤2分钟，换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2分钟。 2、伊红染色 伊红染色液染色染色2分钟(可以根据染色结果和要求调整时间)。 用蒸馏水洗去多余染料，此时，如果需要直接观察，可以用70%乙醇洗涤2次。如需脱水、透明后封片按后续步骤进行，70%乙醇洗涤后仍可按照后续步骤进行脱水、透明和封片处理。注：如果用于免疫组化等染色后的复染，可以参考上述步骤在其它染色完成后直接进行伊红染色。 3、进行其它染色

如果进行免疫荧光染色，伊红染色液染色后，蒸馏水洗去多余染料，70％乙醇洗涤2次，每次2分钟,再用PBS或生理盐水、TBS、TBST等用于免疫染色或荧光染料染色的溶液浸泡5分钟，然后就可以进行免疫荧光染色或其它的染色。 注意事项： 1、染色液可以重复使用多次，认为效果不佳时再更换新的染色液。样品数量很多时，可使用染色架和染色缸，以便于操作。 2、第一次使用本试剂时建议先取1-2个样品做预实验。 3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

伊红染色液溶液的配制方法

伊红染色液配制方法 溶液的配制方法如下： 华越洋伊红染色液：100ml 伊红染料配方较多在常规配方中，有的染色效果好，但操作较繁琐，且消耗较多试剂。有的操作简单，但染色时间长，染液有效期短，常需加入冰醋酸，但加入剂量不易掌握，量少达不到促染作用，加入过多染液易沉淀，且引起色调不正，特别是容易褪色，染色结果不能长期保存。为此，对伊红Y染色液配制进行了改进。改进后的方法具有操作简便、经济、染色性质稳定、着色力强且持久颜色鲜艳等优点； 制备方法：伊红Y1G，蒸馏水90ML，苦味酸饱和水溶液10ML。将蒸馏水加入伊红，待其全部溶解后，加入苦味酸饱和水溶液。 染色结果观察：染色时间0.5-1分钟。伊红所着的颜色鲜艳，层次分明，与蓝色的细胞核对比突出。 伊红Y（四嗅荧光素二钠盐，分子式：C20-H6O5Br4NO2）是一种酸性红色胞浆性染料，室温下，在水中的溶解度度远大于在酒精中的溶解度。它在溶液反应中，由于钠离子的存在而呈碱性状态。苦味酸[分子式：（NO2）3C6HOH]是一种较强的酸性染料，它的颜色是由硝基发色团所致，染色性能是由羟基助色团产生的。苦味酸具有三种作用：1本身是一种胞浆染料，具有染色作用。2又是一种酸，加入伊红Y染色液中，使染色造成比胞浆等电点略为酸性的环境，抑制了部分氨基酸中羟基官能团，从而使氨基酸中氨基官能团和酸性染料结合，增加了染液与组织间的亲和力，起到促染作用。3苦味酸又是一种氧化剂，在染色体中经过氧化物作用后，使染色剂与组织成份结合的更牢固。组织着色鲜艳，染色后不易褪色，因而切片可长期保存。 华越洋伊红染色液操作简单，不使用汞、甲醇等有毒试剂，可以用于组织切片或培养细胞的染色。 本伊红染色液染色后细胞浆呈粉红色或红色。 本染色液可以和免疫荧光染色或免疫组化染色配合使用。一方面可以在本伊红染色液染色后进行免疫荧光染色或其它染料的染色，另一方面也可以在免疫组化染色后再进行伊红复染。 本染色液可以重复使用，直至认为效果不佳时再换用新的染色液。一个包装的本染色液至少可以染色200个样品。

伊红染色液(水溶)

仅供科研版本号：170602 伊红染色液(水溶) 【产品组成】 【保存条件】 室温,避光,12个月 【产品概述】 伊红(Eosin)又称曙红，属人工合成染料中的呫吨类染料，为桃红色或粉红色的粉末。分子式为 C20H6O5Br4Na2，分子量为691.86。伊红最适宜不苏木精配合染色以显示正常或病理组织的形态结构。水溶性伊红Y含有一个醌型苯环的发色团和两个形成钠盐的酸性助色团(R-COONa、R-ONa)。这种形成盐类的酸性染料在水中溶解时解离为带负电荷的色酸部分(R-COO-、R-O-)，即染料的有色部分和带正电荷的钠离子部分(Na+)。染色时伊红Y带负电荷的色酸部分不组织内带正电荷的物质以离子键的形式结合而显色。 伊红染色液(Eosin Y Stain)采用特有防腐剂，操作简单，丌使用汞、甲醇等有毒试剂，可以用于组织切片或培养细胞的染色。可以和免疫荧光染色或免疫组化染色配合使用。一方面可以在伊红染色后进行免疫荧光染色或其它染料的染色，另一方面也可以在免疫组化染色后再进行伊红复染。本染色液可以重复使用，直至认为效果丌佳时再换用新的染色液，染色后细胞浆呈粉红色或红色。 【使用方法】 1、样品处理 a)对于石蜡切片: 二甲苯中脱蜡5~10min。换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5~10min。无水乙醇5min。90%乙醇2min。70%乙醇2min。蒸馏水2min。 b)对于冰冻切片: 蒸馏水2min。 c)对于培养细胞: 用4%多聚甲醛固定10min以上。蒸馏水洗涤2分钟。换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2min。 2、伊红染色 对于上述处理好的样品，伊红染色液染色0.5~2min(根据染色结果和要求调整时间)。如果需要直接观察，可以用70%乙醇洗涤2次。如需脱水、透明后封片按后续步骤进行，70%乙醇洗涤后仍可按照后续步骤进行脱水、透明和封片处理。 注：如果用于免疫组化等染色后的复染，参考上述步骤在其它染色完成后进行伊红染色。 3、脱水、透明、封片或进行其它染色 a)脱水、透明、封片： 95%乙醇脱水2min。换用新鲜的95%乙醇再脱水2min。二甲苯透明5min。换用新鲜的二甲苯，再透明 5min。用中性树胶或其它封片剂封片。显微镜下观察，细胞浆呈粉红色或红色。 b)进行其它染色： 南京森贝伽生物科技有限公司网址：https://www.wendangku.net/doc/972217947.html,/ 第1页

液体配制及实验方法

（一）液体配制 1.完全培养基 DMEM+10%FBS+1%双抗+（1%HAPS液） 若放置时间长于2周加1%谷氨酰胺 2.PBS 1000ml去离子水中溶解8.0gNaCl、0.2gKCl、2.89gNa2HPO4、0.26gNaH2PO4 3.胰酶 用之前调节PH值至7.6 4.CaCl2 将0.165gCaCl2粉末溶于10ml去离子水中配制成50X的溶液 每5ml胶原酶中加入100μl CaCl2溶液（终浓度3μmol/L）用于激活胶原酶的活性 5.双抗 终浓度：青霉素100万U/100ml 链霉素100万U/100ml 青霉素0.6μg为1个单位链霉素 1.2195μg为一个单位 称取青、链霉素粉末各0.6、1.2195g溶于10mlPBS中再定容至100ml 6.两性霉素B 100mg两性霉素B粉末溶于40mlPBS中，制成浓度为2.5mg/ml(1000X)的浓缩液 每100ml完全培养基中加入100μl 浓缩液，稀释为终浓度2.5μg/ml 7.细胞冻存液 20%DMSO+80%FBS(1mlDMSO+4mlFBS) 8STZ溶液 STZ溶于柠檬酸和柠檬酸三钠的盐溶液中 称取柠檬酸0.105g溶于5mlPBS 称取柠檬酸三钠0.145g溶于5mlPBS中混合两者制成10毫升的溶解液. 再将100mgSTZ粉末溶于该溶解液中制成浓度1%的STZ溶液，调节PH值至4.5，4°避光保存，由于STZ水溶性不稳定，溶液最好在半小时内使用完毕. 9油红O 原液：油红O 0.6g溶于异丙醇（99% ）100ml 。 稀释液：油红O 原液20ml ，蒸馏水20ml ，过滤后使用。 10茜素红 称取0.1g茜素红粉溶于100mlPBS，调节PH值到7.2，过滤后使用.

革兰氏染色液配制

革兰氏染色液 保质期：2-8度一年. 革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，媒染剂碘液进入菌体后与结晶紫结合，革兰氏阳性菌对碘与结晶紫摄取量多且牢固，不易被酒精脱色。革兰氏阴性菌对碘与结晶紫摄取量少，不牢固，易被酒精脱色。为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。 操作步骤： 1、标本处理： （1）.有菌部位的标本，如痰液、粪便、各种拭子、创面等可直接涂片。（2）.无菌部位的标本，如脑脊液、胸水、腹水、胆汁、尿液、关节液等，应取适量标本（最高可达5-7ml）,经3000rpm 离心10min.，取沉渣涂片染色。 2、涂片制作：菌液涂片时，用接种环沾取菌液点在载玻片上，标本可直接在玻片上涂布；菌落涂片时，先取生理盐水一滴，置玻片上，用接种针挑取菌落在盐水中涂布。制作的涂片应自然干燥，并经火焰固定，固定的温度不宜过高，以玻片背面接触手背不烫为准，否则可能使细菌形态改变。将固定后的涂片进行染色。 3、染色方法： 革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都可能会呈阴性反应。 （1）.加上结晶紫后，染色1分钟，水洗。 （2）.加上碘液后染色1分钟，水洗。 （3）.加上95%酒精,摇动玻片,根据涂片厚度,脱色约30-60秒，水洗,吸去水分。

（4）.加上蕃红后，染色1分钟，水洗。 （5）.吸干或在空气中凉干后，油镜镜检。 4．结果观察：紫色为革兰氏阳性，红色为革兰氏阴性。 注意事项： 1．标本涂片不能太厚，严格按操作要求进行。 2．玻片通过火焰温度不能太高。 3．若涂片较厚，应延长脱色时间，直至不再出现紫色为止。 4．碘液变透明，则不能使用。 5.水洗时动作要轻柔,沿载玻片对角线方向用洗瓶冲洗,以免把菌体冲掉。 革兰氏染色液如果用量少，买现成的比较话算，如果用量大，自己配起来也溶液，就是试剂种类多了点。其配制方法如下： (1)结晶紫(crystal violet)液：结晶紫乙醇饱和液(结晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL，1%草酸铵水溶液80mL 将两液混匀置24h后过滤即成。 (2)卢戈(Lugol)氏碘液：碘0.33g，碘化钾0.66g，蒸馏水100mL。先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，然后加入碘使之完全溶解，再加蒸馏水至100mL即成。配成后贮于棕色瓶内备用，如变为黄色即不能使用。 (3)95%乙醇：用于脱色，脱色后可选用以下(4)或(5)的其中一项复染即可。 (4)番红溶液：番红O(safranine，又称沙黄O)2.5g, 95%乙醇100mL，溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中，用时取20mL与80mL蒸馏水混匀即可。

常用染色液配方

实验室常用染色液配方 1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液 A液：美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精毫升 B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。 2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液 A液：碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精10.O 毫升 B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升 将碱性复红溶于95%酒精中，配成A液。将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。将两者混合即成。 3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液：结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精25.0 毫升 B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升 将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。两液混合即成。 4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘1.0克碘化钾2.0克蒸馏水300毫升 先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。 5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升 6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细，加少许95%酒精溶解，再加蒸馏水。 7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。 8、刚果红染色液刚果红(Congo red) 2.0克蒸馏水100毫升 9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水95.0 10、乳酸石碳酸棉蓝染色液（真菌制片，短期保存）石炭酸10.0克甘油20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏水10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，溶解即成。 11动物组织石蜡切片染色方法 苏木精-伊红(HE)染色：二甲苯Ⅰ, Ⅱ各10 min，依次进入无水乙醇、950 mL/L, 900 mL/L, 800 mL/L及700 mL/L的酒精各5 min，蒸馏水洗；入苏木精染液10 min，盐酸酒精分色4 s，自来水洗10 min；依次入700 mL/L, 800 mL/L及900 mL/L酒精各5 min，入伊红染液染色 10 min；入950 mL/L及无水乙醇Ⅰ, Ⅱ各5 min, 以二甲苯透明，中性树脂封片. 一、常用染色液的配制 ⒈碘-碘化钾（I2-KI）溶液能将淀粉染成蓝紫色，蛋白质染成黄色，也是植物组织化学测定的重要试剂。 配方：碘化钾2g ；蒸馏水300ml ；碘1g 先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，待全溶解后再加碘，振荡溶解后稀释至300mL，保存在棕色玻璃瓶内。用时可将其稀释2-10倍，这样染色不致过深，效果更佳。 ⒉苏丹Ⅲ（sudanⅢ或Ⅳ）能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色，是著名的脂肪染色剂。 配方：（1）苏丹III或苏丹Ⅳ干粉0.1g ；95％酒精10ml ；过滤后再加入10ml甘油（2）先将0.1g苏丹III或IV溶解在50ml丙酮中，再加入70%酒精50ml。 （3）苏丹III 70%乙醇的饱和溶液。 ⒊1％醋酸洋红（aceto carmine）酸性染料，适用于压碎涂抹制片，能使染色体染成深红色，细胞质成浅红色。

HE(苏木素-伊红)染色试剂盒使用说明书

HE（苏木素-伊红）染色试剂盒使用说明书 货号：L9406 规格：10ml/100ml 保存：本试剂盒常温保存，复检期至少1年。 注意：环境温度低时，分化液可能会结晶析出，将分化液37℃水浴融化后即可，不影响使用。 产品说明： 苏木精-伊红染色法( Hematoxylin-Eosin staining )，简称HE染色法，切片技术里常用的染色法之一。苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。 染色过程需要优化，着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。例如，很多 细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在 老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。 本产品所包含试剂均为工作液，可直接使用。 操作说明： 石蜡组织切片的HE染色（以下步骤仅供参考）。 1．取材组织块，经固定后，常规石蜡包埋，切片。 2．切片用二甲苯脱蜡，经各级乙醇至水洗：二甲苯（I）5min→二甲苯（Ⅱ）5min→100％乙醇2min→95％乙 醇1min→80％乙醇1min→75％乙醇1min→蒸馏水洗2min。 3．苏木素染液染色5-20min(可以根据染色结果和要求调整时间)，自来水冲洗。 4．分化液分化30s。 5．自来水浸泡15min或温水（约50℃）5min。 6．置伊红染液2min。 7．自来水冲洗。 8．常规脱水，透明，封片：95％乙醇（I）1min→95％乙醇（Ⅱ）1min→100％乙醇（I）1min→100％乙醇（Ⅱ）1min→二甲苯石碳酸（3：1）1min→二甲苯（I）1min→二甲苯（Ⅱ）1min →中性树脂封固，镜下观察。 冰冻切片不用脱蜡，可固定后直接染色，其方法与石蜡切片相同。

标准革兰氏染色液

标准革兰氏染色液 简介： 革兰氏染色法是丹麦医生Christain Gram 于1884年所发明，是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，亦是一种复染法。未经染色的细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察。染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，用以分类鉴定。通过此法染色可将细菌鉴别为革兰阳性菌(G +)和革兰阴性菌(G -)两大类。细菌的不同显色反应是由于细胞壁对乙醇的通透性和抗脱色能力的差异，主要是肽聚糖层厚度和结构决定的。经结晶紫染色的细胞用碘液处理后形成不溶性复合物，乙醇能使它脱色。在革兰阴性细胞染色中，乙醇或丙酮破坏了胞壁外膜、损伤肽聚糖层和细胞质膜，结晶紫和碘复合物从细胞中渗漏出来，当再用其他染色液复染时，显现红色。红色染料虽然也能进入已染成紫色的G+细胞，但被紫色盖没，所以红色显示不出来。在革兰阳性细胞染色中，乙醇还能使厚的肽聚糖层脱水，导致孔隙变小，由于结晶紫和碘复合物分子太大，不能通过细胞壁，不易脱色，所以保持着紫色。 Leagene Standard Gram ˊs Stain 采用最经典的革兰染色配方, 临床标本直接涂片，背景干净，胞核胞质对比强烈，胞内吞噬体清晰易辨认，细菌染色特征典型。 组成： 自备材料： 1、 接种环或挑取细菌的其他工具 2、 酒精灯 3、 载玻片 4、 光学显微镜 操作步骤(仅供参考)： 1、 涂片：取待检细菌，于载玻片中央涂成薄层或者或在载玻片上滴加少许无菌水，取菌与 的水混合均匀，涂成一薄层。 编号 名称 DM0015 4×10ml DM0015 4×100ml DM0015 4×250ml DM0015 4×500ml Storage 试剂(A): 结晶紫染色液 10ml 100ml 250ml 500ml RT 避光 试剂(B): Gram 碘液 10ml 100ml 250ml 500ml RT 避光 试剂(C): 脱色液 10ml 100ml 250ml 500ml RT 试剂(D): 沙黄染色液 10ml 100ml 250ml 500ml RT 避光 使用说明书 1份

常用染色液配制

常用染色液配制 The Standardization Office was revised on the afternoon of December 13, 2020

1．草酸铵结晶紫染色液 A液：结晶紫，95%乙醇25mL。 B液：草酸铵，蒸馏水1000mL。 制备时，将结晶紫研细，加入95%乙醇溶解，配成A液。将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。两液混合静止48h后，过滤后使用。 2．鲁格尔氏（路戈氏）碘液 碘，，蒸馏水300mL。先用3~5mL蒸馏水溶解KI，再加入碘片，稍加热溶解，加足水过滤后使用。 3．脱色液：95%乙醇；或丙酮乙醇溶液：95％乙醇70mL，丙酮30mL 4．沙黄（番红）染色液 ％沙黄（番红）乙醇溶液：沙黄（番红），95%乙醇100mL。 此母液存放于不透气的棕色瓶中，使用时取20mL母液加80mL蒸馏水使用。 5．％美兰染色液 溶解于100mL蒸馏水中。 6．吕氏碱性美蓝色染色液 A液：美蓝，95%乙醇30mL。 B液：，蒸馏水100mL，分别配制A液和B液，混合即可。 7．瑞氏染色液 瑞氏染料粉未,甘油3mL，甲醇97mL。将染料放乳钵内研磨，先加甘油，后加甲醇，过夜后过滤即可。 8．5％孔雀绿水溶液（芽孢染色用） 孔雀绿,蒸馏水100mL。先将孔雀绿放乳钵内研磨，加少许95％乙醇溶解，再加蒸馏水。 9．黑色素水溶液（荚膜负染色用） 黑色素10g，蒸馏水100mL，40％甲醛（福尔马林）。将黑色素溶于蒸馏水中，煮沸5min，再加福尔马林作防腐剂，用玻璃棉过滤。 10．硝酸银鞭毛染色液 A液：单宁酸，，福尔马林(15%)，1%，蒸馏水100mL。 B液：,蒸馏水100mL。 将AgNO3溶解后，取出10mL备用，向其它的90mL硝酸银液中加浓氢氧化铵，则形成很厚的沉淀，再继续滴加氢氧化铵到刚刚溶解沉淀成为澄清溶液为之。再将备用的硝酸银慢慢滴入，则出现薄雾，但轻轻摇动后，薄雾状的沉淀又消失，再滴入硝酸银，直到摇动后，仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为之。如雾重，则银盐沉淀出，不宜使用。 11．改良利夫森（Leifson’s）鞭毛染色液 A：20％单宁（鞣酸）；B：饱和钾明矾液(20%)；C：5％石炭酸；D：碱性复红酒精（95％）饱和液。 将以上各液于染色前1~3d，按B加到A中，C加到A、B混合液中，D加到A、B、C混合液中的顺序，混合均匀，马上过滤15~20次，2~3d内使用效果较好。 12．石炭酸复红染色液 A液:碱性复红，95%乙醇10mL；B液：石炭酸（苯酚）5g，蒸馏水95mL。 先将染料溶解于乙醇，将苯酚溶于水，AB两液混合即可。

苏木素伊红染色液说明书

苏木素-伊红染色液（H-E）说明书 【产品名称】苏木素-伊红染色液（H-E）H&E Staining System 【产品编号】HE-500ml,HE-1000ml,HE-2500ml 【包装规格】苏木素染色液500ml、1000ml2500ml；伊红染色液500ml、1000ml 2500ml；返蓝染色液500ml、1000ml2500ml。 【预期用途】主要用于对细胞组织进行染色。 【检验原理】苏木素-伊红染色液（H-E）由3部分组成：苏木素染色液、伊红染色液和返蓝染色液。 苏木素氧化后与金属媒染剂作用，可形成不可替代的细胞核颜料。带有正电荷的苏木素-金属媒染剂复合体，易与细胞核内DNA上带负电荷的磷酸基团结合，因而使细胞核染色形成特定的蓝色。 伊红染色液是一种广泛用于组织学染色中与苏木素染色形成对比的染料（HE染色法）。此染色法可观察到清晰的细胞结构。样本中细胞核可经苏木素染色呈蓝色，细胞质经伊红染色呈粉红色。伊红是一种阴离子染料，可将红细胞染成亮红色，同样也可对其他基本的细胞组分（细胞质，胶原及肌纤维）进行染色。 返蓝染色液为组织学染色试剂，可替代水洗，快速使核染色质和核膜显现蓝色。由于其坚硬度和碱性，水冲洗后改变苏木素染核后的颜色。使用BioGnost 返蓝染色液，粘附在玻片上的样本不会发生像使用其他返蓝染色液时发生降解。【主要组成成分】苏木素：乙二醇、苏木素、碘酸钠、硫酸铝；伊红：伊红、乙醇；返蓝染色液：碳酸锂。 【储存条件及有效期】保证产品包装完整的情况下，储存温度在+15°C和+25°C 之间。保持储存环境干燥，不要放置于寒冷的环境中，不要冷冻产品，避免直接阳光直射。产品使用效期为2年，具体效期见标签。 【适用仪器】不适用 【样本要求】使用合适的设备仪器收集组织样本，并标记清楚，根据操作说明进行实验。 为避免发生错误，染色及诊断过程最好由具相关专业知识的技术人员操作。 根据标准医疗诊断实验室标准镜检诊断。 【检验方法】

Luxol Fast Blue髓鞘染色液(伊红法)使用说明书

Luxol Fast Blue髓鞘染色液（伊红法）使用说明书 货号：G3240 有效期：12个月有效。 产品内容： 产品名称规格Storage 试剂(A):Luxol Fast Blue染色液50ml RT避光 试剂(B):Luxol分化液50ml RT 试剂(C):伊红染色液50ml RT避光 产品简介： 髓鞘（myelin sheath）是包裹在神经细胞轴突外面的一层膜，即髓鞘由髓鞘细胞和细胞膜组成，是神经细胞的质膜沿着轴索的轴心螺旋缠绕形成的多层脂双层结构，髓鞘上有郎飞氏结，可使神经冲动跳跃传递。髓鞘染色在病理诊断中有一定意义，髓鞘的病理变化分为早期、中期和晚期。在早期着色较深；病变中期阶段的髓鞘变性形成脂滴，可用脂质染色加以显示，后期彻底溃变并被吞噬细胞清除，故不再有髓鞘的阳性结果。 很多疾病都可以引起髓鞘的变化，Luxol Fast Blue髓鞘染色可以显示病理情况下髓鞘是否完整、变性、坏死程度及修复情况，对神经组织的病理诊断和研究均有意义，例如神经纤维受损时，髓鞘可出现膨胀、曲折成球形、断裂或脱鞘完全消失等改变。 操作步骤（仅供参考）： 1.石蜡切片5～8μm，脱蜡至水； 2.95%乙醇稍洗； 3.入Luxol Fast Blue染色液，室温过夜（冰冻切片染色时间不超过16h）； 4.入95%乙醇洗去多余染色液；

5.蒸馏水冲洗； 6.入Luxol分化液分色15s； 7.入70%乙醇分色30s至灰白质清晰； 8.蒸馏水冲洗。（如果分色不足，可重复6～7步骤）； 9.入伊红染色液，复染30s～2min，水洗； 10.用95%、100%乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。 染色结果： 髓鞘呈蓝色，背景呈红色。 注意事项： 1.分化这一步很关键，应严格控制分化时间，可在镜下观察分化程度。 2.固定液以10%的福尔马林为佳。 3.切片不宜太厚，应控制在8～9μm以内，否则易出现脱片或过染等现象。 4、如室温染色效果不佳或者缩短染色时间，可在56℃下染色。 5、复染液染色水洗后不能用70%乙醇脱水，否则会脱去luxol fast blue的蓝色。

7细菌的革兰氏染色 (1)

微生物实验报告 细菌的革兰氏染色及形态观察 一、目的要求： 1、熟悉光学显微镜的使用方法。 2、掌握革兰氏染色法。 3、掌握大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的染色结果和形态特征 二、器材和器皿： 1、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌 2、革兰氏染色液、香柏油、二甲苯 3、显微镜、擦镜纸、酒精灯、载玻片、盖玻片、接种环等 三、实验原理： 革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram 创立。未经染色的细菌，由于其与周围环境折光率差别很小，在显微镜下极难观察。染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。革兰氏染色属复染法。 该染色法所以能将细菌分为G+菌和G-菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。 G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。 G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色，呈现蓝紫色。 四、实验步骤： 1、取载玻片用纱布擦干，涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。 2、涂片： 液体培养基：左手持菌液试管，在酒精灯火焰附近5cm左右打开管盖；右手持接种环在火焰中烧灼灭菌，等冷却后从试管中沾取菌液一环，在洁净无脂的载玻片上涂直径2mm左右的涂膜，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。 固体培养基：先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使其薄而均匀。 3、晾干：让涂片在空气中自然干燥。 4、固定：让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。 5、染色：在菌膜上滴加草酸铵结晶紫液，染1min。 6、水洗：用蒸馏水轻轻冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。简单染色结束可观察细胞形态。 7、媒染：滴加1滴碘液，染1min，水洗。 8、脱色：吸去残留水，连续滴加95%乙醇脱色20-30s至流出液无紫色，立即水洗。 9、复染：滴加蕃红复染约2min，水洗。至此，革兰氏染色结束。

常用染色液的配制

常用染色液的配制 1.吕氏（Loefflev）美蓝染色液 A液：2%美蓝（Methylene blue）95%酒精溶液 B液：10%KOH溶液 取A液30ml、B液0.1ml与100ml蒸馏水混合。 2.石炭酸复红染色液 A液：4%碱性复红（basic fuchsin）95%酒精溶液 将碱性复红在研钵中研磨后，逐渐加入95%酒精，继续研磨使其溶解、 配成A液。 B液：5%石炭酸溶液 取A液10ml、B液90ml混合即可。一般可将此溶液稀释5-10倍使用。 但稀释液易变质失效，一次不宜多配。 3.革兰氏（gram）染色液 （1）草酸铵结晶紫染液： A液：1%结晶紫（Crystal violet）95%酒精溶液 B液：1%草酸铵（Ammonium oxalate）溶液 取A液20mlB液80ml，静置48/小时后使用。 （2）路哥氏（Lugol）碘液： 碘片1.0g、碘化钾2.0g、蒸馏水300ml 先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液另，待碘全部 溶解后，加够水即成。 （3）95%酒精溶液 （4）蕃红（沙黄）复染液： 2.5%蕃红（Safranlne O）95%酒精溶液。 取此液10ml与90ml蒸馏水混匀即成。 4.芽孢染色液 （1）5%孔雀绿(Malachite green)溶液。 （2）0.5%蕃红溶液。 （3）苯酚品红溶液 称取11g碱性品红溶于100ml无水酒精中。 再取上述溶液10ml与100ml 5%的苯酚溶液混合，过滤备用。 （4）黑色素(nigrosin)溶液 10%黑色素溶液，置沸水浴中30min后，滤纸过滤二次，补加水到100ml，

常用消毒液配制习题

1、碱能水解蛋白质和核酸，对微生物结构和酶起破坏性作用，造成微生物死亡。（√） 2、醇类消毒剂对细菌繁殖体、病毒及真菌孢子具有杀灭作用，对细胞芽孢无效。（√） 3、季铵盐类消毒液是一种阳离子表面消毒剂，为人工合成的消毒剂，能吸附于细菌表面，使细菌通透性改变，细胞内的酶溢出，细菌因代谢障碍而死亡。（√） 4、碘类消毒作用原理：是游离状态的碘原子的超强氧化作用，破坏病原体的细胞膜结构及蛋白分子而杀死病原体。（√） 5、醛类消毒液作用原理：通过烷基基化反应是菌体蛋白变性，酶和核酸等功能改变，杀菌力强。（√） 6、消毒液稀释浓度计算公式浓溶液容量=（稀溶液浓度/浓溶液浓度）*稀溶液容量（√）。 7、消毒液稀溶液容量=（浓溶液浓度/稀溶液浓度）*浓溶液容量消毒液 8、消毒液稀释倍数计算公式稀释倍数=（原药浓度/使用浓度）-1（若稀释100倍以上时公式不必减1）消毒液 9、消毒液增加药液计算公式需增加浓溶液容量=（稀溶液浓度/稀溶液容量）/(浓溶液浓度-使用浓度）（√） 10、酸类消毒液能水解蛋白质和核酸，对微生物结构和酶起破坏性作用，造成微生物死亡。（× ） 、 11、季铵盐类消毒剂对细菌繁殖体、病毒及真菌孢子具有杀灭作用，对细胞芽孢无效。（× ） 12、醇类消毒液是一种阳离子表面消毒剂，为人工合成的消毒剂，能吸附于细菌表面，使细菌通透性改变，细胞内的酶溢出，细菌因代谢障碍而死亡。（×） 13、醛类消毒作用原理：是游离状态的碘原子的超强氧化作用，破坏病原体的细胞膜结构及蛋白分子而杀死病原体。（× ） 14、碘类消毒液作用原理：通过烷基基化反应是菌体蛋白变性，酶和核酸等功能改变，杀菌力强。（× ） 15、消毒液稀释浓度计算公式浓溶液容量=（稀溶液浓度/浓溶液浓度）*浓溶液容量（× ）。 16、消毒液稀溶液容量=（浓溶液浓度/稀溶液浓度）*稀溶液容量消毒液（× ） 17、消毒液稀释倍数计算公式稀释倍数=（原药浓度/使用浓度）-2（若稀释100倍以上时公式不必减1）消毒液（×） 18、消毒液增加药液计算公式需增加浓溶液容量=（稀溶液浓度/稀溶液容量）/(浓溶液浓度-稀溶液使用浓度）（× ）

增强革兰氏染色液

增强革兰氏染色液 简介： 在革兰阴性细胞染色中，乙醇或丙酮破坏了胞壁外膜、损伤肽聚糖层和细胞质膜，结晶紫和碘复合物从细胞中渗漏出来，当再用其他染色液复染时，显现红色。红色染料虽然也能进入已染成紫色的G+细胞，但被紫色盖没，所以红色显示不出来。在革兰阳性细胞染色中，乙醇还能使厚的肽聚糖层脱水，导致孔隙变小，由于结晶紫和碘复合物分子太大，不能通过细胞壁，不易脱色，所以保持着紫色。 Leagene Enhanced Gram ˊs stain 采用最经典的革兰染色配方进一步改进，使用复红复染液替代沙黄染色液，增强了染色效率，用于极难染色的细菌。临床标本直接涂片，背景干净，胞核胞质对比强烈，胞内吞噬体清晰易辨认，细菌染色特征典型。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、 涂片：取待检细菌，于载玻片中央涂成薄层或者或在载玻片上滴加少许无菌水，取菌与 的水混合均匀，涂成一薄层。 2、 干燥：涂片后在室温下自然干燥，也可在酒精灯上略加温，使之迅速干燥。 3、 固定：手持载玻片一端，标本面朝上，在酒精灯的火焰外侧快速来回移动3~5次，每 次1s ，温度不宜过高，防止菌体蛋白变性，放置待凉后染色。也可以用甲醇或乙醇固定。 4、 初染：滴加结晶紫染色液染色，清水冲洗去染色液。 5、 媒染：滴加Gram 碘液，并覆盖载玻片，室温放置，水洗。 6、 脱色：滴加脱色液，摇动，直至流下的脱色液不出现紫色时为止，立即用水冲去脱色液， 终止反应。 7、 复染：滴加复红复染液染色，水洗。 8、 干燥。镜检：置油镜观察。 编号 名称 DM0016 4×10ml DM0016 4×100ml DM0016 4×250ml Storage 试剂(A): 结晶紫染色液 10ml 100ml 250ml RT 避光 试剂(B): Gram 碘液 10ml 100ml 250ml RT 避光 试剂(C): 脱色液 10ml 100ml 250ml RT 试剂(D): 复红复染液 10ml 100ml 250ml RT 避光 使用说明书 1份

HE(苏木素-伊红)染色试剂盒操作说明及注意事项

HE（苏木素-伊红）染色试剂盒操作说明及注意事项 货号：G1120 规格：3×10ml/3×100ml 保存：常温保存，复检期至少1年。 产品内容G1120-10G1120-100 苏木素染液10ml100ml 分化液10ml100ml 伊红染液10ml100ml 注意：环境温度时，分化液可能会结晶析出，将分化液37℃水浴融化后即可，不影响使用。产品说明： 苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-Eosin staining)，简称HE染色法，是病理学常规制片中最基本的染色方法。苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。 染色过程需要优化，着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。例如，很多细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。 本产品所包含试剂均为工作液，可直接使用。 操作说明（以下步骤仅供参考）： （一）石蜡组织切片染色。 1．取材组织块，经固定后，常规石蜡包埋，切片。 2．石蜡切片脱蜡水化： ①二甲苯（I）中脱蜡5min。

②换用新鲜的二甲苯（Ⅱ），再脱蜡5min。 ③无水乙醇5min。 ④95%乙醇2min。 ⑤80％乙醇2min ⑥70%乙醇2min。 ⑦蒸馏水2min。 3．苏木素染液染色5-20min(具体时间根据染色结果和实验要求调整)，自来水冲洗。4．分化液分化30s。 5．自来水浸泡15min或温水（约50℃）5min。 6．置伊红染液几秒-2min(具体时间根据染色结果和实验要求调整)，自来水冲洗。7．自来水浸泡5min。 8．脱水，透明，封片： ①95％乙醇（I）1min ②95％乙醇（Ⅱ）1min ③100％乙醇（I）1min ④100％乙醇（Ⅱ）1min ⑤二甲苯石炭酸（3：1）1min ⑥二甲苯（I）1min ⑦二甲苯（Ⅱ）1min ⑧中性树胶封固，镜下观察。 （二）冰冻切片 冰冻切片不用脱蜡，可固定后直接染色，其方法与石蜡切片相同。 注意事项：

细菌的简单染色和革兰氏染色

实验细菌的简单染色和革兰氏染色一、目的要求 1、学习制染色片技术，学习简单染色的原理和方法。 2、初步掌握细菌涂片方法及革兰氏染色法步骤。 二、实验原理 细菌的菌体很小，活细胞的含水量在80％～90％，因此对光的吸收和反射与水溶液相差不大，所有观察其细胞结构必须染色。根据实验目的不同，可分为简单染色法、鉴别染色法和特殊染色法等。本实验只学习前两种。 简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。此法操作简便，适用于菌体一般形态的观察。 革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的，是细菌学上最常用的 鉴别染色法。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类。该染色法所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G—菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。 三、实验器材 菌种：培养24小时的大肠杆菌 染色剂和试剂：石炭酸复红染色液，革兰氏染色液(草酸铵结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、石炭酸复红液等)，香柏油、二甲苯 器材和器皿：显微镜，酒精灯，载玻片，盖玻片，接种环，擦镜纸，吸水纸，火柴，小烧杯，玻片架、试管、小滴管等 四、操作方法 1、简单染色： （1）涂片：取干净的载玻片一块，滴一小滴生理盐水于载玻片中央，严格按无菌操作程序，挑取大肠杆菌于载玻片的水滴中，调匀并涂成薄膜。注意滴生理盐水时不宜过多；涂片必须均匀；涂布面积直径约1.5cm为宜；挑取菌种时切勿将培养基挑破。 （2）晾干：让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方文火烘干。 （3）固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）（4）染色：将固定过的涂片放在搁架上，加复红染色1-2min。 （5）水洗：染色时间到后，用自来水冲洗，直至冲下之水无色时为止。注意冲洗水流不宜过急，过大，水由玻片上端流下，避免直接冲在涂片处。 （6）干燥：将洗过的涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干。 （7）镜检：先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏油一滴，将油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌的形态。 2、革兰氏染色： （1）涂片：涂片方法与简单染色涂片相同。

GUS染色液配制

G U S染色液配制 Prepared on 24 November 2020

一染色液配制 1）X－Gluc母液：X-Gluc，用N-N-二甲基酰胺(DMF)配成20mM的贮存液，分装成每管100μL，保存于-20℃。 2）X－Gluc基液（50mM PBS，）。配制方法： 50mM NaH2PO4·100ml； 50mM Na2HPO4 100ml共同溶解； Na2EDTA （10mM，372mg）， Triton-100（％，100μl）, K3 [Fe(CN) 6] （铁氰化钾）（，） K4 [Fe(CN) 6] （亚铁氰化钾）（，） 染色液：50μl X-Gluc母液＋450μl基液 需要试剂：5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（X－Gluc）； N-N-二甲基甲酰胺(DMF) ； NaH2PO4； Na2HPO4 ； Na2EDTA ；Triton-100； K3 [Fe(CN) 6] （铁氰化钾）； K4 [Fe(CN) 6] （亚铁氰化钾） 二染色方法： 1.将准备好的试材浸泡在染液，于25—37℃保温1小时至过夜。 2.叶片等绿色材料转入70%乙醇中脱色2—3次，至阴性对照材料呈白色。 3.肉眼或显微镜下观察，白色背景上的蓝色小点即为Gus表达位点。

三实验原理 适宜的反应条件下，β- 葡萄糖苷酸酶（GUS）可将X－Gluc水解成蓝色物质，因此具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到。 gus基因是目前常用的一种报告基因，是β－D－葡萄糖苷酸酶(gus)基因，其表达产物β-葡萄糖苷酸酶 (GUS)能催化裂解一系列的β－葡萄糖苷酸，它可以将5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（X－Gluc）分解为蓝色的物质,也可以将4-甲基-伞形花酮-β-D-葡萄糖苷酯(4-MUG)分解为蓝色物质。其检测方法简单、快速、灵敏、稳定，且背景活性低。 gus基因的最大优点是它能测定外源基因表达的具体细胞和组织部位，这是其它报告基因所不能及的。 四注意事项 用于染色的植物材料的制备方法要因涉及的特定组织和器官的不同而异。例如，拟南芥的根、花和叶片以及烟草幼苗的根就可以不作任何预处理而直接染色。但是像烟草和马铃薯这些植物的茎和叶就必须在染色前切成薄片（1- 3mm）。当操作大的组织和样品时，可以选用真空渗入法来帮助底物和酶渗入细胞。