实验四 沙门氏菌属(Salmonella)的检验

实验四沙门氏菌属（Salmonella）的检验

1 目的

1.1 理解沙门氏菌属生化反应及其原理

1.2 掌握沙门氏菌属血清因子使用方法

1.3 掌握沙门氏菌属的系统检验方法

2 原理

沙门菌属是一大群寄生于人类和动物肠道，其生化反应和抗原构造相似的革兰氏阴性杆菌。种类繁多，少数只对人致病。其他对动物致病，偶尔可传染给人。主要引起人类伤寒，副伤寒以及食物中毒或败血症。在世界各地的食物中毒中，沙门氏菌食物中毒常占首位或第二位。

食品中沙门氏菌的检验方法有五个基本步骤：1 前增菌；2 选择性增菌；3 选择性平板分离沙门氏菌；4 生化试验，鉴定到属；5 血清学分型鉴定。目前检验食品中的沙门氏菌是按统计学取样方案为基础，25g食品为标准分析单位。本实验以蛋品为检测样品，以已知的沙门氏菌和大肠埃希氏菌为对照。

3 材料

3.1 菌种

沙门氏菌（Salmonella sp.）

大肠埃希氏菌（E.col.）

3.2 检样

冻肉、蛋品、乳品等。

3.3 培养基

缓冲蛋白胨水（BP）、氯化镁孔雀绿（MM）增菌液、四硫酸钠煌绿（TTB）增菌液、亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液、SS琼脂、EMB琼脂、亚硫酸铋琼脂（B S）、三糖铁琼脂（TSI）、蛋白胨水、尿素培养基、赖氨酸脱羧酶试验培养基、鸟氨酸脱羧酶试验培养基、丙二酸钠培养基、氰化钾（KCN）培养基、ONPG培养基、缓冲葡萄糖蛋白胨水、DHL琼脂、HE琼脂。

3.4 试剂

吲哚试剂、V-P试剂、甲基红试剂、氧化酶试剂，沙门菌A—F多价诊断血清，革兰氏染色液等。

3.5 器具

天平（称取检样用）、均质器或乳钵、显微镜、广口瓶、三角烧瓶、吸管、平皿、

金属匙或玻璃棒、接种棒、试管架。

4 流程

5 步骤

5.1 前增菌和增菌

沙门氏菌在食品加工过程中，常常受到损伤而处于濒死状态，因此经过加工的食品检验沙门氏菌时应进行前增菌，即用不加任何抑菌剂的培养基缓冲蛋白胨水（BP），进行增菌，使濒死状态的沙门氏菌恢复活力。一般增菌时间为4h，增菌时间不宜过长，由于BP培养基中没有抑菌剂，时间太长了，杂菌也会相应增多。干蛋品特殊，蛋品中的主要病原菌为沙门氏菌，其在加工过程中受到的损伤又较严重，因此应适当延长前增菌时间，一般为18～24h。

无菌操作称冻蛋取25g样品，加入盛有225mL灭菌缓冲蛋白胨水的500mL广口瓶内（瓶内预放玻璃珠若干粒），塞紧瓶口，充分摇匀。在36±1℃培养4h（干蛋品需培养13～24h），移10ml氯化镁孔雀绿增菌液或四硫酸钠煌绿增菌液，在42℃培养18～24h。同时另取10ml，加入100ml亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液内，在36±1℃培养18～24h。

鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品不必经过前增菌。各取25g（25ml）加入灭菌生理盐水25mL，按前法做成检样匀液，取半量，接种于100mLMM（或TTB）增菌液内，于42 oC培养24h；另半量接种于100mLSC增菌液内，于36±1 oC培养18～24h。

5.2 分离

取增菌液和混合液各1环，分别划线接种于一个BS平板和一个DHL琼脂平板（或HE琼脂平板、WS或SS琼脂平板）。于36±1 oC培养18～24h（DHL、H E、WS、SS）或40～48h（BS），观察各个平板上生长的菌落。先观察混合菌种平板，再检查样品平板上有无可疑菌落，挑取菌种平板和样品平板上的可疑菌落进行革兰氏染色与镜检。

5.3 三糖铁高层琼脂初步鉴别

将上述革兰氏阴性杆菌的可疑菌落，挑取数个接种一支三糖铁高层琼脂斜面，于36±1 oC培养18～24h，并根据表4-1初步判断是否可疑沙门氏菌。

表4-1肠杆菌科各属在三糖铁琼脂内的反应结果

斜面底层产气硫化氢可能的菌属和种

－＋ ±＋沙门氏菌属、弗劳地氏柠檬酸杆菌、变形杆菌属、缓慢爱德华氏菌

＋＋ ±＋沙门氏菌Ⅱ、弗劳地氏柠檬酸杆菌、普通变形杆菌

－＋＋－沙门氏菌属、大肠艾希氏菌、蜂窝哈夫尼亚菌、摩根氏菌、普罗菲登斯菌属

－＋－－伤寒沙门氏菌、鸡沙门氏菌、志贺氏菌属、大肠艾希氏菌、蜂窝哈夫尼亚菌、摩根氏菌属、普罗菲登斯菌属

＋＋ ±－大肠艾希氏菌、肠杆菌属、克雷伯氏菌属、沙雷氏菌属、弗劳地氏柠檬酸杆菌

注：+阳；－阴性；＋／－多数阳性，少数阴性。

5.4 生化试验

在接种三糖铁琼脂的同时，接种蛋白胨水（供做靛基质试验）、尿素琼脂（pH7. 2）、氰化钾（KCN）培养基和赖氨酸脱羧酶试验培养基及对照培养基各1管，于36±1 oC培养18～24h，必要时可延长至48h，按表4-2判定结果。按反应序号分类，沙门氏菌属的结果应属于A1、A2和B1，其它5种反应结果均可以排除。

表4－2 肠杆菌科各属生化反应初步鉴别表

反应序号 H2S 吲哚 PH7.2尿素 KCN 赖氨酸脱羧酶判定菌属

A1 ＋－－－＋沙门氏菌属

A2 ＋＋－－＋沙门氏菌属(少见)爱德华氏菌

A3 ＋－＋＋－柠檬酸杆菌

奇异变形杆菌

A4 ＋＋＋＋－普通变形杆菌

B1 －

－－

－－

－－

－＋

－沙门氏菌属、埃希氏菌

甲型副伤寒沙门氏菌、埃希氏菌、志贺氏菌属

B2 －－＋＋－－－－＋－埃希氏菌

埃希氏菌、志贺氏菌属

B3 －－－－ ±＋＋＋＋－克雷伯氏菌族各属

阴沟肠杆菌、柠檬酸杆菌属

B4 －＋ ±＋－摩根氏摩根氏菌、普罗菲登斯菌属

注：①三糖铁琼脂底层均产酸；不产酸者可排除；斜面产酸与产气与否均不限。

②KCN和赖氨酸可选用其中一项，但不能判定结果时，仍需补做另一项。

③＋表示阳性；－表示阴性；±表示多数阳性，少数阴性。

5.4.1 反应序号A1

典型反应判定为沙门氏菌属。如尿素、KCN和赖氨酸3项中有1项异常，按表4-3可判定为沙门氏菌。如有2项异常，则按A3判定为弗劳地氏柠檬酸杆菌。表4－3 沙门氏菌属生化鉴别表

PH7.2尿素氰化钾（KCN）赖氨酸判定结果

－－－甲型副伤寒沙门氏菌

（要求血清学鉴定结果）

－＋＋沙门氏菌Ⅳ或Ⅴ

（要求符合本群生化特性）

＋－＋沙门氏菌个别变体

（要求血清学鉴定结果）

注：＋表示阳性；－表示阴性。

5.4.2 反应序号A2

可先作血清学鉴定，如A～F多价O血清不凝聚时，补做甘露醇和山梨醇试验，按表4-4判定结果。

表4-4

甘露醇山梨醇判定结果

＋＋沙门氏菌靛基质阳性变种

（要求血清学鉴定结果）

－－爱德华氏菌

5.4.3 反应序号B1

三糖高层斜面产酸的菌株可予以排除，不产酸的应该先作血清学鉴定。如A～F 多价O血清不凝聚时，补做鸟氨酸、ONPG，水杨苷、棉子糖和半动力试验。按表4-5 判断结果。必要时按表4-6进行沙门氏菌生化群的鉴别

表4－5 沙门氏菌属各生化群的鉴别

赖氨酸鸟氨酸 ONPG 水杨苷棉子糖动力判定结果

＋＋－－－＋沙门氏菌

－－－－－－志贺氏菌属

－＋＋－－－宋内氏志贺氏菌属

d d d d d d 埃希氏菌属

注：＋表示阳性；－表示阴性。

表4－6 沙门氏菌属各生化群的鉴别

项目ⅠⅡⅢⅣⅤⅥ

卫矛醇＋＋－－＋－

山梨醇＋＋＋＋＋－

水杨苷－－－＋－－

ONPG －－＋－＋－

丙二酸盐－＋＋－－－

KCN －－－＋＋－

注：＋表示阳性；－表示阴性。

5.5 血清学分型鉴定

5.5.1 抗原的准备

一般采用1.5%琼脂斜面培养物作为玻片凝集试验用的抗原。O血清不凝集时，将菌株接种在琼脂量较高的（如 2.5%～3%）培养基上检查，O抗原在干燥环境中发育较好；如果是由于Vi抗原的存在而阻止了O凝集反应时，可挑取菌苔于1mL生理盐水中做成浓菌液，于酒精灯火焰上煮沸后再检查。H抗原发育不良时，将菌株接种在0.7%～0.8%半固体琼脂平板的中央，待菌落蔓延生长时，在其边缘部分取菌检查；或将菌株通过装有0.3～0.4%半固体琼脂的小玻管1～2次，自远端取菌培养后再检查。

5.5.2 O抗原的鉴定

用A～F多价O血清做玻片凝集试验，同时用生理盐水做对照。在生理盐水中自凝者为粗糙形菌株，不能分型。

被A～F多价O血清凝集者，一次用O4、O3.10、O7、O8、O9、O2和O11因

子血清做凝集试验。根据试验结果，判定O群。被O3.10血清凝集的菌株，再用O10、O15、O34、O19单因子血清做凝集试验，判定E1、E2、E3、E4各亚群，每一个O抗原成分的最后确定均应根据O单因子血清的检查结果，没有O 单因子血清的要用两个O复合因子血清进行核对。

不被A～F多价O血清凝集者，先用57种或163种沙门氏菌因子血清中的9种多价O血清检查，如有其中一种血清凝集，则用这种血清所包括的O群血清逐一检查，以确定O群。每种多价O血清所包括的O因子如下：

O多价1 A，B，C，D，E，F群（并包括6，14群）

O多价2 13，16，17，18，21群

O多价3 28，30，35，38，39群

O多价4 40，41，42，43群

O多价5 44，45，47，48群

O多价6 50，51，52，53群

O多价7 55，56，57，58群

O多价8 59，60，61，62群

O多价9 63，65，66，67群

5.5.3 H抗原的鉴定

属于A～F各O群的常见菌型，依次用表7所述H因子血清检查第1相和第2相的H抗原。

表4-7 A～F群常见菌型H抗原表

O群第1相第2相

A a 无

B g，f，s 无

B i，b，d 2

C1 k，v，r，c 5，Z15

C2 b，d，r 2，5

D（不产气的） d 无

D（产气的） g，m，p，q 无

E1 h，v 6，w，x

E4 g，s，t 无

E4 i

不常见的菌型，先用163种沙门氏菌因子血清中的8种多价H血清检查，如有

其中一种或两种血清凝集，则再用这一种或两种血清所包括的各种H因子血清逐一检查，以确定第1相和第2相的H抗原。8种多价H血清所包括的H因子如下：

H多价1 a，b，c，d，i

H多价2 eh，enx，enz15，fg，gms，gpu，gq，mt，gz51

H多价3 k，r，y，z，z10，lv，lw，lz13，lz28，lz40

H多价4 1，2；1，5；1，6；1，7；z6

H多价5 z4z23，z4z24，z4z32，z29，z35，z36，z38

H多价6 z39，z41，z42，z44

H多价7 z52，z53，z54，z55

H多价8 z56，z57，z60，z61，z62

每一个H抗原成分的最后确定均应根据H单因子血清的检查结果，没有H单因子血清的要用两个H复合因子血清进行核对。

检出第1相H抗原而未检出第2相H抗原的或检出第2相H抗原而未检出第1相H抗原的，可在琼脂斜面上移种1～2代后再检查。如仍只检出一个相的H抗原，要用位相变异的方法检查其另一个相。单相菌不必作位相变异检查。

5.5.4 Vi抗原的鉴定

用Vi因子血清检查。已知具有Vi抗原的菌型有：伤寒沙门氏菌，丙型副伤寒沙门氏菌，都柏林伤寒沙门氏菌。

6 结果

综合以上生化试验和血清学分型鉴定的结果，按照表或有关沙门氏菌属抗原表判定菌型，并报告结果。

7 思考题

7.1 如何提高沙门氏菌得检出率？

7.2 沙门氏在三糖铁培养基上的反应结果如何？为什么？

7.3 沙门氏菌检验有哪五个基本步骤？

7.4 食品中能否允许有个别沙门氏菌存在？为什么？

沙门氏菌基本知识及检测方法

沙门氏菌基本知识及检测方法 沙门氏菌（Salmonella）是一种常见的致病菌，属于革兰氏阴性杆菌。它可以引起人体和动物的沙门氏菌食物中毒，病症包括腹泻、发热、呕吐等。沙门氏菌广泛分布于自然环境和动物体内，可以通过感染食物、水源、环境污染等多种途径传播。为了保障食品安全，及早发现和控制沙门氏菌 污染，需要采用一系列有效的检测方法。 1. 分类：沙门氏菌属于肠杆菌科（Enterobacteriaceae）中的一种 细菌。根据沙门氏菌的表面抗原和酵素特性，可以将其分为超过2500种 不同的血清型。 2.形态特征：沙门氏菌是革兰氏阴性杆菌，菌体呈杆状，大小约为 0.7-1.5微米。在染色过程中，菌体呈现出粗糙的外表。沙门氏菌有时可 以长出长鞭毛，使其具有活跃的运动能力。 3.生长特性：沙门氏菌是嗜好性厌氧菌，但也可以在氧气存在的条件 下生长。最适生长温度为37℃，但也可以在20-45℃范围内生长。沙门氏 菌可以在多种细菌培养基上繁殖。它主要利用碳源进行代谢，产生酸和气体。 5.病症：沙门氏菌感染引起的病症包括腹泻、发热、恶心、呕吐等。 在部分情况下，沙门氏菌可以引发严重的感染，包括败血症、心内膜炎和 肾脏感染等。 沙门氏菌的检测方法： 1.传统培养法：传统培养法是检测沙门氏菌的常用方法。该方法需要 将样品接种到富含营养成分的培养基上，进行孵育。菌落形成后，可以通

过形态、生理和生化特性进行初步鉴定。然后，通过血清试验、生化特性 测试等进行进一步的确认和鉴定。 2.分子生物学方法：分子生物学方法在沙门氏菌检测中得到广泛应用。其中，PCR（聚合酶链式反应）技术是最常用的方法之一、PCR可以对沙 门氏菌的特异基因序列进行扩增，从而快速而准确地检测沙门氏菌。另外，核酸杂交和DNA序列分析等技术也可以用来进行沙门氏菌的检测和鉴定。 3.免疫学方法：免疫学方法是一种基于抗原-抗体反应的检测方法。 通过检测沙门氏菌的抗原或抗体，可以快速确定样品中是否存在沙门氏菌。免疫学方法包括酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫荧光法、凝集反应等， 这些方法具有快速、高灵敏度和高特异性的特点。 在日常生活中，为了预防沙门氏菌感染和食物中毒的发生，需要注意 以下几点： 1.食物安全：尽量选择新鲜食材，避免生食或未煮熟的食物，尤其是 家禽、海鲜和蛋类等。在食物加工和储存过程中，要注意卫生措施，防止 交叉污染。 2.个人卫生：保持良好的个人卫生习惯，勤洗手，特别是在接触家禽、家畜和宠物后。使用肥皂和流动的水进行洗手，并避免将污染物带入饮食 区域。 3.水源和环境清洁：饮用水要来自可靠的源头，避免饮用未消毒的水。定期清洁和消毒厨房设备和工具，并保持环境整洁，防止细菌滋生和传播。 总之，了解沙门氏菌的基本知识和采用适当的检测方法，有助于及早 发现和控制沙门氏菌感染，保障食品安全和个人健康。

沙门氏菌的检验过程

沙门氏菌的检验 因沙门氏菌是最常见的食源性细菌病原体，因此在本节中重点介绍沙门氏菌的检验。沙门氏菌是食物传播病原菌中研究最活跃的细菌。从食品中分离和鉴定沙门氏菌，当前通用的方法学分5个步骤： 1.前增菌-第一步使食物样品在含有营养的非选择性培养基中增菌，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。 2.选择性增菌-在含选择性抑制剂的促生长培养基中间，样品进一步增菌的一个步骤。此培养基允许沙门氏菌持续增殖，同时阻止大多数其他细菌的增殖。 3.选择性平板分离-这一步采用固体选择性培养基，抑制非沙门氏菌的生长，提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的识别。 4.生物化学筛选-排除大多数非沙门氏菌。也提供了沙门氏菌培养物菌属的初步鉴定。 5.血清学技术提供了培养物菌种的鉴定。 这五个步骤代表理想状况。不过一个有经验的检验员，可能在一个或几个步骤中看出特性和差别。 目前检验食品中的沙门氏菌是按统计学取样方案为基础，25g食品为标准分析单位。 三、从食品中分离沙门氏菌样品的制备 下面的方法是以25g样品为检测单位，样品：肉汤为1∶9的比例。除非另有说明，根据混合程度，加足够的肉汤保持1∶9的比例。对不需准确称量检测的样品，例如：田鸡腿，可参看特定方法说明。 1、干蛋黄、干蛋白、干全蛋、液奶（去脂牛奶，含2%脂肪牛奶，全脂奶，和脱脂奶）、粉状调制食品（蛋糕，甜饼，炸面圈，饼干和面包）、婴儿食品、口食或软管进食含蛋的食品：

检验前的冷冻样品最好不要解冻。如果冷冻样品必须软化以获取待检测部分，则尽可能迅速的解冻所需部分，使竞争菌数少增加或降低沙门氏菌的可能损伤。解冻需在45℃以下，有自动调温器自控的水浴锅内不断搅拌进行15min或在 2�5℃，18小时内解冻。无菌操作称取25g样品，放入灭菌带螺旋帽的广口瓶中（500mL）或其他合适的容器内。非粉状的样品，加入225mL灭菌乳糖肉汤。如果制品是粉状，加入约15mL灭菌乳糖肉汤，用灭菌玻璃棒，匙或灭菌压舌器搅拌，使成均匀悬液。再加3份乳糖肉汤10mL，10mL，190mL，使总量为 225mL。充分搅拌，直到样品完全悬浮没有团块为止。盖紧瓶盖在室温静置 60min。振摇使充分混匀，用试纸测定pH值。必要时用灭菌的1NNaOH或 1NHcl调节pH至6.8±0.2。在测定最终pH前要盖紧瓶盖并充分混匀。然后将瓶盖旋松约1/4圈，置35℃培养24±2小时。以下步骤按四，1-10进行。 2、蛋类： A、含壳蛋：用硬刷子在水流下刷洗蛋。把蛋在含0.1%十二烷酸磺酸钠（SDS）的200ppm氯离子溶液中浸泡30min。加8mL 5.25%次氯酸钠到含1g SDS的992mL蒸馏水中，制备200ppm cl-/0.1%SDS溶液。这种消毒剂需在使用前临时制备。无菌操作打开蛋，使用灭菌的蛋分离器，弃去蛋白。无菌操作称取25g蛋黄到灭菌的500mL锥型瓶或其他合适容器内。加225mL胰胳胨（胰化物）大豆肉汤（TSB），并振荡充分混匀。在室温下静置60分钟。振摇使其充分混匀，用试纸测定pH值。必要时调节pH值至6.8±0.2，置35℃培养24±2小时，以下步骤按四，1-10继续。 B、液全蛋（均状）：无菌操作称25g置于无菌的500mL锥形烧瓶或其它合适容器中。加225mLTSB并振荡充分混匀。按上面所述继续。 C、煮硬的蛋（鸡蛋，鸭蛋或其他蛋类）：目前，不知道蛋白中的沙门氏菌抑制因子是否具有热稳定性。因此，无菌操作分离蛋白和蛋黄。称取25g粉状蛋黄固体到无菌500mL锥型瓶或其他合适容器中。加225mLTSB并旋转充分混匀。按上面所述继续。 3、脱脂乳粉

沙门氏菌的检验方法

沙门氏菌的检验方法 沙门氏菌（Salmonella）是一类革兰氏阴性的杆状细菌，是引 起沙门氏菌属感染的病原菌。这种细菌可以引发食物中毒和伤寒症，其中食物中毒是最常见的感染途径。因此，对沙门氏菌的快速、准确的检测非常重要。 目前，沙门氏菌的检测方法主要包括传统培养分离法、免疫学方法和分子生物学方法。以下是关于沙门氏菌检验方法的相关参考内容。 1. 传统培养分离法 传统的沙门氏菌检验方法是利用富含寡糖的培养基，如XLD、SS等，以及一些选择性供氧培养基，如亚硫酸和肉汤琼脂培 养基等，将样品进行培养。通过培养，沙门氏菌会形成典型的红色或蓝绿色菌落。然后，从菌落中挑取纯培养物，并进行生理生化反应和田纳氏试验以确定是否为沙门氏菌。 2. 免疫学方法 免疫学方法是通过检测沙门氏菌特异性抗原或抗体来诊断沙门氏菌感染。常用的方法有： - 血清凝集试验：利用特异性沙门氏菌抗原和患者血清，在特 定条件下观察血清与抗原的凝集反应，可确定是否感染沙门氏菌。 - 酶联免疫吸附试验（ELISA）：利用特异性沙门氏菌抗原或

抗体和酶标记的二抗，通过检测光学密度来判断是否存在沙门氏菌。 3. 分子生物学方法 分子生物学方法可以通过检测沙门氏菌的基因或DNA来快速、准确地诊断沙门氏菌感染。常用的方法有： - PCR（聚合酶链式反应）：通过特异性引物扩增沙门氏菌的DNA片段，然后进行凝胶电泳分析。PCR可以提供快速、高 效的沙门氏菌检测结果。 - 实时荧光PCR：使用带有荧光探针的PCR引物，通过检测 荧光信号的强度来定量沙门氏菌的存在量。 - 基因芯片技术：基因芯片上固定了沙门氏菌特异性的探针， 可以同时检测多个基因或DNA序列，提高检测效率。 除了上述方法，还可以利用质谱仪等仪器进行快速鉴定，甚至利用抗生素敏感试验、细菌溶解酶试验等进行进一步的鉴定和鉴别。 总结起来，沙门氏菌的检验方法主要包括传统培养分离法、免疫学方法和分子生物学方法。这些方法可以单独或联合使用，以提供准确、快速的沙门氏菌检测结果，对于预防和控制沙门氏菌感染具有重要意义。

沙门氏菌检验程序

沙门氏菌检验程序 沙门氏菌是一种常见的致病微生物，能引起人类和动物的感染疾病。 因此，在食品、水源、环境等方面对沙门氏菌的检测尤其重要。下面 我们将介绍一下沙门氏菌检验的步骤和方法。 1. 样品采集 对于食品、水源等样品的采集需要遵守严格的规定。例如，食品样品 需要在加工、贮存和分配之前采集，以确保沙门氏菌检验的准确性。 样品应当在采集之后尽快送到实验室进行检测。 2. 样品处理 根据不同的样品类型和特性，采用不同的处理方法。例如，对于牛奶、鸡蛋等液态食品，需要进行破坏性处理，以确保沙门氏菌的释放。对 于土壤、粪便等样品，需要进行外层细菌的去除处理。 3. 培养培养基 选择含有适当氧气和营养物质的培养基，如SS（Salmonella-Shigella）培养基、XLD（Xylose-Lysine-Desoxycholate）培养基等。将样品分

别接种到不同的培养基上。 4. 培养 将分别接种的培养基放入恒温箱中进行培养。将温度设定为37°C至42°C，进行18小时至24小时的培养。在培养过程中观察样品的生长和变化。 5. 分离 取出培养好的样品进行观察。将预处理样品浸泡在缓冲液中，将溶液 过滤。过滤的溶液留下来，转移到盘子上。用肉眼观察菌落的形态， 观察不同菌落的特点。根据菌落的特点进行分离。 6. 鉴定 在鉴定步骤中，需要进行各种化学试剂处理，如氧化氢酶测试、葡萄 糖测试等。同时需要使用专业仪器，如API试剂盒、ELISA试剂盒等。通过这些鉴定手段，确定检测出的菌落是否为沙门氏菌。 7. 结论 最后，根据检测结果得出客观和准确的结论，以便针对食品、水源或

沙门氏菌的检验方法与注意事项

沙门氏菌的检验方法与注意事项 在日常微生物检验中，沙门氏菌比较常见，是一种致病性细菌，国家规定在 每25g的食品样本中不能检测出沙门氏菌，所以在检验沙门氏菌时，对试剂与培 养基有很高的要求，下面本文针对沙门氏菌的检验方式和注意事项作出简单介绍！ 一、沙门氏菌检测的原因和意义 根据相关统计显示，我们国家因细菌性食物中毒的人中，有70%-80%左右的 人是通过沙门氏菌造成的。人体倘若含有过多的大量沙门氏菌的动物性食物，就 会造成细菌性感染，以此在毒素的影响下产生食物中毒，造成伤寒、胃肠炎及副 伤寒。而且沙门氏菌的传播途径较多，肉、蛋和其他食物，从加工至销售的整个 过程当中都极易引发感染情况，所以准确、有效检验沙门氏菌有重大意义。 二、沙门氏菌的检验 （一）前增菌(无选择性) BPW（缓冲蛋白胨水）属于一种比较常见的增菌培养基，不包括任何抑制物质，有助于修复受损的沙门氏菌。促使受损的沙门氏菌细胞复苏至相对平稳的生 理状态。 （二）选择性增菌 TTB（四硫磺酸钠煌绿增菌液）内含有硫代硫酸钠，结合四硫磺酸钠，能够 对肠道共生菌进行有效抑制，而包含四硫磺酸钠还原酶的细菌，可以在这一培养

基当中生长繁殖；煌绿及胆盐能够控制大肠群菌、革兰氏阳性菌的繁殖，而伤寒 沙门氏菌依旧可以生长。SC（亚硒酸盐胱氨酸增菌液）能够对其他和伤寒沙门氏 菌进行选择性增菌，其含有的亚硒酸结合蛋白胨内的含硫氨基酸，促使亚硒酸与 硫的复合物生产，对细菌硫的代谢产生干扰，进而减少肠球菌、变形杆菌、大肠 埃希氏菌的繁殖生长。 （三）分离培养基(选择性) ①BS（亚硫酸铋琼脂）内含亚硫酸铋指示剂，可对大肠菌群、革兰氏阳性菌 进行抑制，但不会对沙门氏菌的繁殖产生影响；其他沙门氏菌、伤寒杆菌可以借 助葡萄糖，还原亚硫酸铋，使其形成硫酸铋，使黑色菌落附近有黑棕色的环，对 光可看到金属光泽。BS的压力和温度不可过高，避免选择性下降，需在使用前配制，放置阴暗处储存，48小时后丧失选择性，储存不合理会造成色浅，表示效果 开始减弱，联合TTB、SC使用能够提高检出率。 ②HE琼脂内的溴麝香草酚兰、胆盐、去氧胆酸钠等，可对革兰氏阳性菌繁殖 进行抑制；将檬酸铁铵与硫代硫酸钠运来检验H2S的形成，导致菌落中心为黑色；酸性复红及溴麝香草酚兰属于pH指示剂，发酵糖产酸的菌落表现橙黄色，不发 酵糖菌落表现蓝绿色。HE不可以高压灭菌，开水煮应在1分钟之内，通过水浴方 式冷却，可以储存24小时。 ③通常在对沙门氏菌进行快速筛选、分离时，采用沙门氏菌显色培养基。其 原理主要是通过沙门氏菌显色基团和特异性酶的独特反应，游离出色原，进而将 沙门氏菌于培养基上表现出相应的颜色，而其他肠道杆菌颜色则不一样。 三、沙门氏菌检验的注意事项 （一）前增菌和二次增菌必不可少 食物内含有的沙门氏菌通常不多，且会同时存在很多菌种，前增菌能够恢复 受损菌，而增菌能够对部分杂菌的繁殖进行有效抑制，因此通过前增菌及增菌实 施筛选、培养操作，能够提高后续培养分离的检出率。 （二）注意典型或可疑沙门氏菌菌落

食品微生物检验技术W4304沙门氏菌检验-检验操作程序及要点-传统鉴定-4-微教材

《农产品/食品微生物检验》课程-微教材 知识讲解 沙门氏菌操作程序及要点——传统鉴定 沙门氏菌操作程序及要点分为检验程序和操作步骤 一、检验程序 根据国标，沙门氏菌的检验程序为: 检样经无菌处理后，称取25 g(mL)样品加入到225 mL BPW中36±1℃培养8~18h；取培养物1mL 接种到10mL的TTB中同时取1mL 接种到10mL 的SC中，分别于42±1℃和36±1℃培养18~24h；取培养后的增菌液分别划线接种于BS琼脂平板和XLD琼脂平板（或HE琼脂平板、显色培养基平板）中，于36±1℃培养18~24h，BS 需延长至40~48h；培养后挑取可疑菌落做生化试验。 挑取2 个以上典型或可疑菌落——接种三糖铁琼脂，赖氨酸脱羧酶试验管和对照管、供做靛基质试验的色氨酸肉汤、尿素（pH7.2)，KCN试验管和对照管，同时划线营养琼脂平板——

如5项生化都符合——则直接判定为沙门氏菌——如五项中靛基质阳性——则补做甘露醇和山梨醇试验，如果两项均为阳性——为可疑沙门氏菌，但需结合血清学鉴定结果进行判定——如五项中H2S阴性——则需补做ONPG试验，ONPG阴性，同时赖氨酸脱羧酶阳性——为沙门氏菌——也可在三糖铁和赖氨酸脱羧酶试验初步判断结果后，使用商品化的生化鉴定系统进行生化鉴定——判定是否为沙门氏菌——如果5项反应中有2项以上不符合——则沙门氏菌阴性——最后报告结果 二、操作步骤 主要分为：1、样品处理与前增菌；2、增菌；3、分离；4、传统生化鉴定试验；5、系统生化鉴定试验；6、血清学鉴定。其中传统生化鉴定试验又分为三糖铁和赖氨酸脱羧酶试验，靛基质、尿素和氰化钾试验、甘露醇、山梨醇以及ONPG试验三个部分。 本片以鸡肉为样品，演示沙门氏菌检验的样品处理和前增菌的操作过程。 1、前增菌： 在无菌室内，以75%酒精擦拭样品外包装，尤其是包装的开口处，用无菌剪刀在样品封口处剪开包装袋，换用一个无菌剪刀将鸡肉样品剪碎至无菌罐内，用无菌镊子称取25 g样品至盛有225 mL BPW的样品瓶中，再转入注明样品信息、检测人员以及检测日期的均质袋中，密封，用拍击式均质器拍击2 min。注意：若样品为液态，不需均质，振荡混匀即可；如需测定pH 值，用1 mol/mL的无菌NaOH 或HCl（调pH至6.8±0.2；均质完成的检测样品通过传递窗出无菌室，清理无菌室，打开紫外灯，辐照灭菌30 min。 将上述均质完成的检测样品放于预先设置36 ℃±1 ℃的恒温恒湿培养箱中培养8 h～18 h。 2、增菌： 将前增菌培养物通过传递窗入BSL-2实验室，在生物安全柜内轻轻摇动培养过的样品混合物，移取 1 mL，转种于10 mL TTB增菌液内，同时，另取 1 mL，转种于10 mL SC增菌液内。选择性增菌的目的是最大可能的检出沙门氏菌，原则上必须使用两种选择性增菌液，一种是抑制除沙门氏菌以外其肠道菌的生长，一种是在不影响其他肠道菌生长的情况下促进沙门氏菌的生长。注意区分两种增菌培养温度不同。SC增菌液经过培养后，肉汤没有变红，仍然需要转接分离平板；接种完成的物品通过传递窗出BSL-2实验室，清理BSL-2实验室与生物安全柜，分别打开紫外灯，辐照灭菌60 min。 将接种后的TTB增菌液和SC增菌液分别置于42 ℃和36 ℃培养18 h～24 h。 注意：下述步骤均在BSL-2实验室里的生物安全柜内进行，相应的准备和工作要求同前所示。

沙门氏菌检验及分析

沙门氏菌检验及分析 沙门氏菌是一种常见的致病菌，能引起人体消化系统的疾病，如沙门氏菌食物中毒和 肠炎等。对食品和环境样品中的沙门氏菌进行检验和分析是非常重要的。 沙门氏菌的检验方法主要包括培养法和分子生物学法。 培养法是传统的沙门氏菌检验方法，该方法使用一系列专门的培养基，如XLD（Xylose Lysine Deoxycholate Agar）和SS（Salmonella Shigella Agar）等，以培养和鉴定沙门氏菌菌株。将样品加入适当的培养基，然后在适当的温度下进行培养。经过一段时间后， 观察培养基上的菌落形态特征，如形状、色素和粘度等，进一步进行鉴定。还可以使用生 化试剂和抗生素敏感性试验来确定菌株的身份。 分子生物学法是一种快速准确的沙门氏菌检验方法，其基于沙门氏菌特有的基因序列，如invA和fliC等。通过PCR（聚合酶链反应）技术，可以扩增出这些目标序列，并通过相应的检测方法，如凝胶电泳或实时荧光PCR等，进行检测。这种方法不仅能够快速鉴定沙 门氏菌，还可以检测沙门氏菌的数量和种类等重要信息。 沙门氏菌的分析主要涉及其在食品和环境样品中的存在和数量。对于食品样品，可以 通过抽样和分析的方法来确定沙门氏菌的存在情况和数量。一般来说，可以选择一些高风 险的食品，如家禽肉类、蛋制品和生鲜蔬菜等，进行检测。对于环境样品，主要包括水源、污水、土壤等，可以通过采样和培养法来确定沙门氏菌的存在。 沙门氏菌的分析结果可以提供重要的参考信息，用于评估食品和环境的安全性。通过 分析沙门氏菌的数量和种类等信息，可以判断食品和环境中是否存在潜在的健康风险，并 采取相应的措施进行预防和控制。

沙门氏菌的检验步骤

沙门氏菌的检验步骤 沙门氏菌是一种常见的食物中毒细菌，它可以引起沙门氏菌属感染。 所谓的沙门氏菌属包括两个物种：Salmonella enterica和Salmonella bongori。这两个物种又包含了超过2,500种不同的血清型。 为了检测食物或其他样本中是否存在沙门氏菌，通常需要进行以下步骤： 1.样本收集：收集来自可疑食物或其他可能被污染的样品，如肉、蛋、奶制品、水果、蔬菜或动物粪便。确保采集样品的方法是无菌的，以避免 污染。 2.前处理：对样本进行适当的前处理，以提高沙门氏菌的检测效果。 这可能包括样品的预处理、样品的培养基中添加抑菌剂等。 3. 培养：将样品接种于适宜的培养基上，如XLD（Xylose Lysine Deo某ycholate Agar）或SS（Salmonella Shigella Agar）等。这些培 养基可以选择性地识别并培养Salmonella属的细菌。 4.孵育：将培养皿放入恒温培养箱，通常是在37℃左右，孵育时间 一般为24至48小时。 5.形态特征观察：观察培养基上菌落的形态特征，如形状、颜色、大 小等。沙门氏菌通常形成呈灰白色、圆形、凹陷的菌落。 6.血清型鉴定：对沙门氏菌进行血清学鉴定以确定其血清型。这通常 涉及到使用抗体和相应的血清反应，以确定菌株的亚型。 7.生化测试：对阳性菌落进行生化测试，如甲烷糖发酵试验和硫化氢 产生试验，以进一步确认其鉴定。

8.PCR检测：PCR是目前常用的沙门氏菌检测方法之一、它利用聚合酶链反应（PCR）技术，检测样品中的沙门氏菌DNA。 9.分子的子类型分析：通过分子生物学技术，如基因测序、脉冲场凝胶电泳（PFGE）或肽核酸类似程序分析（AFLP），确定沙门氏菌的亚型。 总之，沙门氏菌的检验步骤包括：样本收集、前处理、培养、孵育、形态特征观察、血清型鉴定、生化测试、PCR检测和分子的子类型分析。这些步骤的目的是确认样品中是否存在沙门氏菌，并确定其类型和亚型，以便采取相应的预防和控制措施。

实验四 沙门氏菌属(Salmonella)的检验

实验四沙门氏菌属（Salmonella）的检验 1 目的 1.1 理解沙门氏菌属生化反应及其原理 1.2 掌握沙门氏菌属血清因子使用方法 1.3 掌握沙门氏菌属的系统检验方法 2 原理 沙门菌属是一大群寄生于人类和动物肠道，其生化反应和抗原构造相似的革兰氏阴性杆菌。种类繁多，少数只对人致病。其他对动物致病，偶尔可传染给人。主要引起人类伤寒，副伤寒以及食物中毒或败血症。在世界各地的食物中毒中，沙门氏菌食物中毒常占首位或第二位。 食品中沙门氏菌的检验方法有五个基本步骤：1 前增菌；2 选择性增菌；3 选择性平板分离沙门氏菌；4 生化试验，鉴定到属；5 血清学分型鉴定。目前检验食品中的沙门氏菌是按统计学取样方案为基础，25g食品为标准分析单位。本实验以蛋品为检测样品，以已知的沙门氏菌和大肠埃希氏菌为对照。 3 材料 3.1 菌种 沙门氏菌（Salmonella sp.） 大肠埃希氏菌（E.col.） 3.2 检样 冻肉、蛋品、乳品等。 3.3 培养基 缓冲蛋白胨水（BP）、氯化镁孔雀绿（MM）增菌液、四硫酸钠煌绿（TTB）增菌液、亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液、SS琼脂、EMB琼脂、亚硫酸铋琼脂（B S）、三糖铁琼脂（TSI）、蛋白胨水、尿素培养基、赖氨酸脱羧酶试验培养基、鸟氨酸脱羧酶试验培养基、丙二酸钠培养基、氰化钾（KCN）培养基、ONPG培养基、缓冲葡萄糖蛋白胨水、DHL琼脂、HE琼脂。 3.4 试剂 吲哚试剂、V-P试剂、甲基红试剂、氧化酶试剂，沙门菌A—F多价诊断血清，革兰氏染色液等。 3.5 器具 天平（称取检样用）、均质器或乳钵、显微镜、广口瓶、三角烧瓶、吸管、平皿、

沙门氏菌基本知识及检测方法

沙门氏菌基本知识及检测方法 沙门氏菌属Salmonella是肠杆菌科的一个大属,有2000多个血清型,我国发现的约有100个;沙门氏菌广泛存在于猪、牛、羊、家禽、鸟类、鼠类等多种动物的肠道和内脏中;1880年Eberth首先发现伤寒杆菌,1885年Salmon分离到猪霍乱杆菌,由于Salmon发现本属细菌的时间较早,在研究中的贡献较大,遂定名为沙门氏菌属Salmonella ;本属细菌绝大多数成员对人和动物有致病性,能引起人和动物的败血症与胃肠炎,甚至流产,并能引起人类食物中毒,是人类细菌性食物中毒的最主要病原菌之一; 根据沙门氏菌的致病范围,可将其分为三大类群;第一类群：专门对人致病;如伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌甲型、乙型、丙型;第二类群：能引起人类食物中毒——食物中毒沙门氏菌群,如鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、纽波特沙门氏菌等;第三类群：专门对动物致病,很少感染人,如马流产沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌;致病性最强的是猪霍乱沙门氏菌Salmonella cholerae,其次是鼠伤寒沙门氏菌Salmonella typhimurium和肠炎沙门氏菌Salmonella enteritidis; 一、沙门氏菌属的生物学特征： 1.形态染色特性：G-无芽孢杆菌;大小通常为～μm ×～μm,菌端钝圆,散在,偶有短丝状,无荚膜,除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外均有周身鞭毛,能运动,绝大多数菌株有菌毛;需氧或兼性厌氧菌,生长温度范围为10～42℃,最适生长 温度为37℃,适宜pH为～,对营养要求不高,在普通培养基中生长旺盛,胆盐可促进其生长; 2.培养特性：需氧或兼性厌氧菌；生长温度范围为10～42℃,最适生长温度为37℃；适宜pH为～；对营养要求不高,在普通培养基中生长旺盛；胆盐可促进其生长; §普通琼脂：圆形、光滑、无色半透明、边缘整齐或不太整齐的中等大小2 ～ 4mm 菌落;鸡白痢、鸡伤寒、猪副伤寒、甲型副伤寒沙门氏菌等只能长成细小菌落; §麦康凯琼脂和伊红美兰琼脂EMB：菌落无色半透明 §SS琼脂和DHL琼脂：无色半透明、中心黑色或几乎全部黑色多数菌株的菌落

沙门氏菌检验

沙门氏菌的检验 1. 目的 规范沙门氏菌检测方法，使产品检验有据可依。 2. 消毒灭菌要求 微生物检测用的玻璃仪器、金属用具及培养基、被污染与接种的培养物等必须经灭菌后方能使用。 注：本实验采用湿热灭菌法，吸管、培养皿、培养基等盖好塞子并包好瓶口在高压灭菌锅中按要求的温度与压力灭菌,一般就是121C （1、5MPa下灭菌20min。 3. 原理 沙门氏菌的检验分四个连续阶段： 4. 操作步骤 4、1准备工作 配制实验所需的缓冲蛋白胨水、亚硒酸盐胱氨酸培养基（无需灭菌）、HE培养基、三糖铁培养基等，并将准备好的均质杯、吸管、培养皿、大试管等一起灭菌。 4、2前增菌 在无菌环境下,称取25g待检样品放入盛有225ml灭菌好的缓冲蛋白胨水中, 然后放到36±「C的恒温培养箱内进行前增菌4-6h;

4、3增菌 在无菌环境下，用灭菌好的吸管吸取10ml 前增菌液接种与100ml 亚硒酸盐胱 氨酸培养基中进行二次增菌,恒温培养箱36± 1C ,培养18-24h; 4、4分离培养 将增菌培养液摇匀，以无菌操作，用直径3mm 的接种环挑取一环，划线于表面 无凝结水的BS 与SS 琼脂平板各一个，于36± 1C 培养18-24h 。观察各个平板上 有无典型或可疑沙门氏菌属的菌落。如无典型或可疑菌落 ，应再继续培养24 ± 2h 。然后观察培养的平板（黄色的菌落就是大肠杆菌；蓝绿色或蓝色，产硫化氢, 菌落中心黑色或几乎全黑色为可疑沙门氏菌）。 沙门氏菌属各亚属在其她选择性琼脂平板的菌落特征 4、5生化实验 用灭菌好的接种针在培养平板上挑取可疑的沙门氏菌单菌落，接种到三糖铁 培养基上,恒温培养箱36 ± 1C ,培养18-24h;典型沙门氏菌培养物斜面显红色 （碱性）,底端显黄色（酸性），有气体产生，形成硫化氢（琼脂变黑） 三糖铁培养 基变化表 肠杆菌科各属在三糖铁琼脂内的反应结果

沙门氏菌的检验过程及操作时的注意事项

沙门氏菌的检验过程及操作时的注意事项 在我们平时的微生物检测工作中，沙门氏菌是非常常见的检测项目之一，沙门氏菌属于致病性细菌，要求在食品中每25g样品中不得检出沙门氏菌，因此对于沙门氏菌检测过程中的培养基和试剂的要求比较高，在这里跟大家讨论一下沙门氏菌的检验过程及操作时的注意事项。 01预增菌 样品加入缓冲蛋白胨水（BPW）中进行预增菌，任何样品均需进行预增菌。有盆友问啦，为什么要用BPW呢？那是因为啊，食品在加工过程中采用加热、干燥等加工工艺使得细胞存在不同程度的受损，而缓冲蛋白胨水（BPW）呢，作为非选择性的增菌培养基，较高pH的缓冲体系可以帮助受损的细胞恢复到稳定、活力满满的生理状态，此处也可使用即用型的BPW，因为它操作方便，节省时间。 02选择性增菌 这里要注意啦，增菌接种前一定要把预增菌后的BPW样品溶液轻轻摇动混匀，这样做的原因是有些沙门君是懒得动的（因为有些沙门氏菌没鞭毛），它们会潜伏在溶液底层，所以我们要把增菌液“摇摆、摇摆”，让不动的沙门君们在增菌液中都漂浮起来，吸出，分别接入TTB和SC培养基中。

此步骤防止漏检的方式是采用两种不同的选择性增菌液（TTB和SC）进行增菌，是因为沙门君的家族太庞大了，血清型都有2000多种，所以得加强引诱措施，采用不同的培养温度和不同抑制性的培养基来给不同的沙门君提供安逸的环境来繁衍后代，同时尽量阻拦革兰氏阳性菌和其他大多数的肠道菌来捣乱，有些细菌还是会趁虚而入的。 咱们来说一下TTB和SC使用过程中的注意事项： TTB培养基：待基础培养基冷却至50℃以下时，加入煌绿和碘液，因为培养基中含有不溶解的CaCO3（用来中和吸收有毒性的代谢物质），会有大量的白色沉淀，在分装时应边摇匀边分装，接种后培养条件为：42℃±1℃培养18h-24h； SC培养基：千万不可高压灭菌，不可过度加热，最好是现用现配。发现干粉或溶液变红就不要使用了。培养基开封后建议用封口膜密封后冷藏保存，可延缓培养基变质，接种后培养条件为：36℃±1℃培养18h-24h； 03分离 TTB与SC增菌液在接种选择性分离培养基前，均应轻轻摇动混匀，原因同选择性增菌一样，也是为了防止不运动的沙门氏菌漏检；混匀后，用直径为3mm的接种环（也就是实验室用的10μL接种环）将TTB与SC增菌液“分别”划线接种于两种选择性平板，一种是BS琼脂，为必选的选择性分离培养基，另外一种选择性分离培养基是从XLD琼脂、HE琼脂、沙门显色培养基中选择一个即可；沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征参考下图：

沙门氏菌h抗原鉴定操作

沙门氏菌（Salmonella）是一类可以引起食物中毒和肠道感染的细菌，其表面存在不同的抗原类型，其中包括H抗原（鞭毛抗原）。H抗原的鉴定对于沙门氏菌的分型和分类非常重要。以下是沙门氏菌H抗原鉴定的一般操作步骤： 1. 培养沙门氏菌 首先，需要培养沙门氏菌的细胞。这可以通过将样品（通常是食物样品或患者的临床样本）接种到适当的培养基上，如肉汤培养基、亮绿胆汁琼脂或XLD琼脂等。 2. 制备悬浮液 从培养基上收获培养的细菌，然后将其悬浮在生理盐水或其他适当的缓冲液中，形成适当浓度的悬浮液。 3. 热灭活 为了防止沙门氏菌继续生长，通常需要对悬浮液进行热灭活处理，即将悬浮液加热至80-85摄氏度，持续10-15分钟。 4. 制备抗原悬浮液 将热灭活的细菌悬浮液离心，取得上清液。这将成为包含H抗原的抗原悬浮液。 5. 准备玻片 在实验操作过程中，需要准备用于鉴定的玻片。这些玻片通常会被用作滑片，供显微镜观察。 6. 进行滑片凝集试验 滑片凝集试验是沙门氏菌H抗原鉴定的一种常见方法。操作步骤如下： ▪在玻片上滴加沙门氏菌H抗原悬浮液。 ▪在抗原滴加处滴加患有相应抗H抗原抗体的抗体血清。 ▪轻轻摇动玻片，观察是否发生凝集反应。凝集反应通常表现为细菌在抗体作用下形成聚集。 7. 显微镜观察 在进行滑片凝集试验后，使用显微镜对滑片进行观察。观察凝集的形态和特征，确定沙门氏菌的H抗原类型。

8. 结果解读 根据滑片凝集试验的结果，可以将沙门氏菌分型为不同的H抗原类型。这有助于进行疫情追踪、分析食源和进行流行病学调查。 需要注意的是，以上步骤是一种常见的方法，实际的鉴定方法可能会因实验室使用的具体试剂和设备而有所不同。确保在进行任何实验室操作前，熟悉并遵守相应的实验室安全规范和操作规程。

沙门氏菌h抗原鉴定操作 -回复

沙门氏菌h抗原鉴定操作-回复 沙门氏菌（Salmonella）是一种革兰氏阴性杆菌，可以引起人和动物的沙门氏菌感染。沙门氏菌h抗原鉴定是一种常用的实验方法，可以帮助确定沙门氏菌的存在。在本文中，我将逐步介绍沙门氏菌h抗原鉴定的操作步骤。 第一步：制备试剂和培养基 在进行沙门氏菌h抗原鉴定之前，我们需要制备一些试剂和培养基。首先是沙门氏菌h抗原。可通过从沙门氏菌菌株中提取出细胞的柔软成分来制备抗原。此外，还需要制备一定浓度的溴酚橙磷酸缓冲液、氯化钠溶液以及其他常用的培养基，如萨尔蒙培养基。 第二步：培养沙门氏菌 在开始抗原鉴定之前，我们需要先培养沙门氏菌。可从实验室中的沙门氏菌菌株库中选择一株已知的沙门氏菌菌株进行培养。将菌株在萨尔蒙培养基上进行孵育，通常在37下孵育约18-24小时，直到菌落形成。 第三步：制备细胞悬液 用灭菌的生理盐水将菌落刮下，放入试管中，并用试管摇床震荡培养液以完全溶解。制备透明均匀的悬浮液，以便后续的抗原提取步骤。 第四步：提取抗原

将培养出的沙门氏菌细菌悬液进行抗原提取。添加适量的溴酚橙磷酸缓冲液，破坏细胞壁，使细胞内容物溢出。通过离心来分离细胞残渣，收集上清液，即为抗原。 第五步：沉淀抗原 将上一步得到的抗原制备成50%饱和溶液。然后用氯化钠溶液将抗原稀释到适当的浓度。接下来，将试管倒置浸入沉淀槽中（一般为40），在适当时间内静置，让抗原在适当的条件下沉淀。 第六步：清洗沉淀抗原 将沉淀的抗原与生理盐水混合，并进行适当的离心。此步骤的目的是去除杂质和残留的沉淀槽中的废液，得到更纯净的抗原。 第七步：检测抗原 采取适量的清洗后的抗原，我们可以使用常见的免疫学方法进行抗原检测，如酶联免疫吸附试验（ELISA）或荧光抗体试验（FAT）。这些检测方法可以检测沙门氏菌特定的抗原，并确定其存在与否。 总结： 沙门氏菌h抗原鉴定是一项常用的实验方法，用于检测沙门氏菌的存在。其操作步骤包括制备试剂和培养基、培养沙门氏菌、制备细胞悬液、提取

沙门氏菌的检验

沙门氏菌的检验 食品学院14食品质量与安全1班 文敏柳基炜卫杰恒温紫君 5 6 1 2 摘要：本实验采用GB/T4789.4-2010的检测方法测定鸡场中的沙门氏菌。通过本实验学习沙门氏菌的检测方法和技术，了解沙门氏菌的一些生化特性；本实验先用显色培养基找出可疑菌落，再做生化试验找出可疑的典型性的沙门氏菌，再通过血清学试验最终确定是否为沙门氏菌属。 关键词：沙门氏菌接种生化试验血清学鉴定 前言 沙门氏菌病是公共卫生学中具有重要意义的人畜共患病种之一，其病原沙门氏菌属于肠道细菌科。沙门氏菌是一个统称，泛指 2000 多种有紧密连系的细菌，包括引起食物中毒，导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。虽然只有少数人因沙门氏菌而患病，但是，在世界围的细菌性食物中毒事件中，由沙门氏菌引起的占大多数。因此，采用科学、合理的方法检验食品中沙门氏菌，已经成为了人们最关心的问题之一[1]。国标法(GB4789.4-2010)是目前中国规定的食品中沙门氏菌的标准检测方法,也是基层实验室普遍采用的检测方法,它根据沙门氏菌的生长特点和生化特性,采取前增菌、增菌、分离、生化试验和血清学鉴定5个步骤进行[2]。 1材料与方法

1.1实验材料 1.1.1仪器设备 均质器、三角烧瓶、平皿、玻璃棒、接种棒 恒温培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃ 吸管：1 mL（具 0.01 mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度或微量移液器及吸头 电子天平PL602-S，梅特勒-托利多仪器（）； 手提式不锈钢压力蒸汽灭菌锅SYQ-DSX-280B，申安医疗器械厂 1.1.2试剂药品 鸡肠、靛基质试剂、沙门氏菌O和H诊断血清、API20E生化试剂盒或VITEKGNI 生化鉴定卡 1.1.3培养基 蛋白胨水（BPW)、四硫磺酸钠煌绿（TTB）、亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液、亚硫酸铋（BS）琼脂、HE琼脂、三糖铁琼脂、蛋白胨水、尿素琼脂、氰化钾、氰化钾对照、赖氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶对照、甘露醇、山梨醇、β-D半乳糖苷（ONPG）培养基 1.2 实验方法 1.2.1培养基的制备 1.2.1.1培养基的配制步骤 蛋白胨水（BPW）：称取蛋白胨10g、氯化钠5g、磷酸氢二钠9g、磷酸二氢钠1.5g、蒸馏水1000ml，将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，静置约 10 min，煮沸溶解，调节 pH，高压灭菌 121 ℃，15 min。分装10瓶，每瓶90ml 四硫磺酸钠煌绿（TTB）：高压灭菌 121 ℃，15 min灭菌冷却后至30℃，每100ml

从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序

从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序 一、目的 本程序用于对从业人员健康体检进行沙门氏菌、志贺氏菌检测等致病菌检测的方法，以规范操作程序，保证检测数据的有效性。 二、适用范围： 本方法适用于从人体粪便中沙沙门氏菌、志贺氏菌的分离、鉴定及保存的梯相关操作。 三、生物安全要求 标本及相应的致病菌操作必须在BSL-2生物安全实验室的生物安全柜中进行。 四、试剂及仪器设备 4.1试剂 采便盒、Cary-Blair运送培养基、亚硒酸增菌液（SF）、改良亚硒酸盐磺绿增菌肉汤（SBG）、沙门志贺培养液、木糖-赖氨酸-脱氧胆酸琼脂（XLD）、麦康凯琼脂、沙门显色培养基、结晶紫沙门培养基（YS）、三糖铁（TSI）、动力-吲哚-尿素培养基（MIU）、沙门氏菌属诊断血清、志贺氏菌属诊断血清、API20E生化试剂条、磁珠菌种保存管 4.2 仪器设备 恒温培养箱、微生物鉴定仪 五、采样方法 5.1 标本应为新鲜的或转移至Cary-Blair运送培养基的粪便或肛拭子，最优标本是转移到Cary-Blair运送培养基的粪便拭子。肛拭子不

是最佳标本，仅在病人无粪便标本时采用。 5.2 粪便标本：应采集自然排出的新鲜粪便，取稀水样、粘血样、脓血样，黏液样部分。盛于清洁、干燥、无吸水性的无菌容器，避免混入尿液、水和其他物质。 5.3肛拭标本：若无法获得粪便（如排便困难或婴幼儿），也可以采用肛拭子，即无菌棉拭子用生理盐水湿润后，插入肛门内4-5cm处〈儿童约2-3cm），同一方向轻轻旋转2-3周。以目测能见到粪便为准。插入Cary-Blair运送培养基。 5.4 标本采集后立即送至实验室进行检测，若室温保存，不能超过1h；如不能立即送检，应放入Cary-Blair运送培养基中冷藏条件下24小时内送检。 六、检验程序 七、操作步骤

沙门氏菌基本知识及检测方法

沙门氏菌根本知识及检测方法 沙门氏菌属(Salmonella)是肠杆菌科的一个大属,有2000多个血清型,我国发现的约有100个.沙门氏菌广泛存在于猪、牛、羊、家禽、鸟类、鼠类等多种动物的肠道和内脏中.1880年Eberth首先发现伤寒杆菌,1885年Salmon分离到猪霍乱杆菌,由于Salmon发现本属细菌的时间较早,在研究中的奉献较大, 遂定名为沙门氏菌属Salmonella .本属细菌绝大多数成员对人和动物有致病性,能引起人和动物的败血症与胃肠炎,甚至流产,并能引起人类食物中毒,是人类细菌性食物中毒的最主要病原菌之一. 根据沙门氏菌的致病范围,可将其分为三大类群.第一类群：专门对人致病. 如伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌(甲型、乙型、丙型).第二类群：能引起人类食物中毒一一食物中毒沙门氏菌群,如鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠 炎沙门氏菌、纽波特沙门氏菌等.第三类群：专门对动物致病,很少感染人,如马流产 沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌.致病性最强的是猪霍乱沙门氏菌(Salmonella cholerae),其次 是鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium) 和肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis) . 一、沙门氏菌属的生物学特征： 1.形态染色特性：G无芽抱杆菌.大小通常为0.7〜1.5 pm X 2.0〜5.0仙由菌端钝圆, 散在,偶有短丝状,无荚膜,除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外均有周身鞭毛,能运动,绝大多数菌株有菌毛.需氧或兼性厌氧菌,生长温度范围为10〜42 C,最适生长温度 为37 C,适宜pH为6.8〜7.8 ,对营养要求不高, 在普通培养基中生长旺盛,胆盐可促进其 生长. 2.培养特性：需氧或兼性厌氧菌；生长温度范围为10〜42C,最适生长温度为37C；适宜pH为6.8〜7.8;对营养要求不高,在普通培养基中生长旺盛；胆盐可促进其生长. §普通琼脂：圆形、光滑、无色半透明、边缘整洁或不太整洁的中等大小(2〜4mm) 菌落.鸡白痢、鸡伤寒、猪副伤寒、甲型副伤寒沙门氏菌等只能长成细小菌落. §麦康凯琼脂和伊红美兰琼脂(EMB):菌落无色半透明