生物化学实验技术复习重点汇编详细

前言

1.本课程主要讲述了哪些实验技术，其中被称为生化实验室中三大实验技术的是？

答：层析技术、电泳技术、离心技术、分光光度技术、免疫化学技术。其中层析技术、电泳技术、离心技术是生物学的三大实验技术。

第一章生物化学基本操作与要求

1.洗涤液的种类配置与应用

答：（1）铬酸洗液（称取5g重铬酸钾粉末置于250mL烧杯中，加水5mL，尽量使其溶解，慢慢加入浓硫酸100mL，边加边搅拌。冷却后贮存备用，若颜色变绿，表示洗液已失效。）用于洗涤玻璃器皿。（2）浓盐酸，洗去水垢或某些无机盐沉淀。（3）30%硝酸，洗涤CO2

测定仪器及微量滴管（4）45%尿素，洗涤蛋白制剂、血样（5）有机溶剂，洗涤油脂、脂溶性染料（6）去污粉，一般污染物

2.化学试剂的分级

答：

3.什么是准确度、精密度？

答：准确度表示实验分析测量值与真实值相接近的程度。误差。精密度是指在相同条件下多次测量结果互相吻合的程度，表现了测定结果的再现性。偏差。

4.如何提高实验的准确度、精密度？

答：准确度：减少系统误差1.仪器校正2.空白试验3.对照实验；精密度：减少偶然误差

1.平均取样

2.多次取样。

第二章层析技术

1.层析技术及其原理

答：层析技术是一种基于被分离物质的物理、化学、生物学特性的不同，使它们在某种机制中移动速度不同而进行分离和分析的方法。

2.名词：固定相、流动相、分配系数

答：固定相：固定相是层析的一个基质。它可以是固体物质（如吸附剂、凝胶、离子交换剂等）也可以是液体物质（如固定在硅胶或纤维素上的溶液），这些基质能与待分离的化合物进行可逆的吸附、溶解、交换等作用。

流动相：在层析过程中，推动固定相上待分离的物质朝着一个方向移动的液体、气体等。

分配系数：是指在一定的条件下，某种组分在固定相和流动相中含量的比值，

Kd=固定相中的总量/流动相中的总量。

3.层析法的分类

答：按流动相的形式分：气相色谱法1.气固色谱法2.气液色谱法，液相色谱法1.液固色谱法2.液液色谱法；按固定相的形式分：1.柱层析法2.纸层析法3.薄层层析法。

4.几种主要凝胶的中英文名称、型号、及型号数字代表的含义

答：葡萄糖凝胶（dextran型号Sephadex G-10~200数字代表凝胶的吸水率）

聚丙烯酰胺凝胶（polyacrylamide主要型号有Bio-Gel P-2~300,数字代表它们的排阻极限的10-3）琼脂糖凝胶（agarose Sepharose,Bio-Gel A）

5.凝胶层析及其基本原理、操作过程和主要应用

答：是利用凝胶把物质按分子大小不同进行分离的一种方法。原理：由于被分离物质的分子大小不同，洗脱时，大分子物质由于直径大于凝胶网孔不能进入凝胶内部，只能沿着凝胶颗粒间的孔隙，随溶剂向下移动，因此流程短，首先流出层析柱，而小分子物质，由于直径小于凝胶网孔，能自由进出胶粒网孔，使之洗脱流程增长，移动速度慢而后流出层析柱。应用：1）脱盐及去除小分子杂质2）蛋白质的分离、生物大分子的纯化3）分子量测定4）去热源物质5）溶液的浓缩

6.离子交换层析的原理、离子交换剂的类型

答：原理：依据各种带电离子或生物大分子与带相反电荷离子交换剂的结合力不同而进行分离纯化的。阴离子交换剂：吸附阴离子，如DEAE；

阳离子交换剂：吸附阳离子，如CM。

7.离子交换色谱的操作和应用

答：1.离子交换剂的选择2.离子交换剂的处理和保存3.层析柱的选择4.平衡缓冲液的选择5.洗脱、洗脱速度控制6.样品的浓缩、脱盐7.再生和保存。

应用：1.水处理2.分离纯化小分子物质3.分离纯化生物大分子物质。

8.何谓亲和层析

答：是利用生物分子间专一的亲和力而进行分离的一种层析技术。

9.各种层析原理和载体的综合比较（见ppt表）

答：

第三章电泳技术

1.电泳（技术）的概念

答：带电物质在电场中向相反电极移动的现象。

2.电泳的分类

答：按分离的原理：1.区带电泳2.自由界面电泳3.等速电泳4.等电聚焦电泳；

按支持介质的不同：1.纸电泳2.醋酸纤维薄膜电泳（1、2为区带电泳）3.琼脂凝胶电泳

4.聚丙烯酰胺凝胶凝胶电泳（PAGE）

5.SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)；

按支持介质形状不同：1.薄层电泳2.板电泳3.柱电泳；

按用途不同：1.分析电泳2.制备电泳3.定量免疫电泳4.连续制备电泳；

按所用电压不同：1.低压电泳2.高压电泳。

3.什么是迁移率？影响迁移率、电泳分离的主要因素

答：是指带电颗粒在单位电场强度下泳动的速度，m=v/E。

迁移率与带电分子所带净电荷成正比，与分子的大小和缓冲液的粘度成反比，与粒子的形状有关；

电泳分离的影响因素：1.带电颗粒的性质（所带净电荷的数量大小及形状）2.溶液的pH 值（离等电点远，快）3.溶液的离子强度（离子强度小泳动快）4.电场强度5.电渗作用（方向一致，快）6.支持介质的筛孔。

4.如何制备聚丙烯酰胺凝胶？

答：1.化学聚合：加速剂TEMED使催化剂过硫酸铵形成自由基，这些自由基的产生可引发丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺的聚合、交联反应形成;

2.光聚合：催化剂核黄素经光照形成无色基，再被痕量氧氧化成自由基，引发聚合反应。

TEMED存在可加速聚合。

5.聚丙烯酰胺凝胶电泳和不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳的区别、分离效应

答：区别：A：整个电泳体系中所用缓冲液，pH值和凝胶网孔都是相同的；B：在电泳系统中采用了两种或两种以上的缓冲液，pH值和孔径

。分离效应A：分子筛效应（某分子通过这种网孔的能力将取决于凝胶孔隙和分离物质颗粒的大小和形状）B：1.样品的浓缩效应2.电荷效应3.凝胶的分子筛效应。

6.简述等电聚焦及其优缺点

答：是根据两性物质等电点（pI）的不同而进行分离的。

优点：1.分辨率高，可达0.01pH单位2.能抵消扩散作用，使区带越走越窄3.可直接测出蛋白质的等电点，精确度可达0.01pH单位。缺点：1.该法要求用无盐溶液，而在无盐溶液中蛋白质可能发生沉淀2.不适用在等电点不溶或发生变性的蛋白质。

7.什么是双向电泳？

答：由第一向等电聚焦（IEF）电泳和第二向SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）结合组成。

第四章离心技术

1.离心技术的概念

答：是利用转头旋转产生的离心力，根据物质颗粒沉降系数、质量、密度的差异将其分离的方法。

2.名词：相对离心力、沉降速度、沉降系数、沉降常数

答：相对离心力：F=mω2r,F常用重力加速度表示，称为相对离心力。

沉降速度：在离心力作用下，单位时间内物质颗粒运动的距离。

沉降系数：单位离心力下的沉降速度。

沉降常数：颗粒在20℃水中的沉降系数。

3.离心机和离心转头（转子）的种类

答：离心机的种类：低速、高速、超速离心机，冷冻离心机，台式、地式离心机，制备性、分析性离心机；

离心转头的种类：1.角度转头FA2.甩平式转头SW3.垂直转头V4.区带转头Z5.连续流动转头CF。

4.简述离心分离的方法（3种） p99~101

答：1.差速沉降离心：不断改变离心速度，使沉降速度不同的颗粒在不同的速度和时间下分批分离的方法，一般用于沉降系数相差较大的颗粒，用角度转头。

2.差速区带离心：在一定离心力的作用下存在沉降系数差的不同颗粒各自以一定速度沉

降，后在密度梯度不同的介质上形成区带，用于分离有一定沉降系数差的颗粒或密度相似大小不同的样品和核酸、蛋白质等成分。

3.等密度离心：离心管中预先放好梯度介质离心时，样品的不同颗粒一直移动到与他们

密度相等的特定梯度位置上，形成不同的区带，用于分离大小相近而密度不同的样品。

5. 如何进行离心区带的收集？

答：1.用注射器和滴管由离心管上部吸出

2.用针刺穿离心管底部滴出

3.用针刺穿离心管区带部分的管壁，把样品区带抽出

4.用一根细管插入离心管底，泵入超过梯度介质最大密度的取代液，将样品和梯度介质压出，用自动部分收集器收集。

第五章分光光度技术

1. 名词：朗伯-比尔定律、吸收光谱、吸收光谱曲线

答：朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，吸光度与溶液的浓度、液层厚度的乘积成正比A=KCL。

吸收光谱：通常分子处于基态，当他吸收一定能量跃迁到激发态，则产生吸收光谱。

吸收光谱曲线：若逐渐改变照射某物质的入射光的波长，并测定物质对各种波长光的吸收程度或透射程度，以波长λ作横坐标，，“A（吸光度）”或“T（透光度）”为纵坐标，画出连续的“A-λ”或“T-λ”曲线。

5.图示说明分光光度计的基本结构

答：

6.分光光度计的光源及适用范围

答：光源要求：1.能提供连续的辐射；2.光强度足够大；3.在整个光谱区内光谱强度不随波长有明显变化；4.光谱范围宽；5.使用寿命长、价格低。

热辐射光源用于可见光和近红外光区的光源如钨灯和卤钨灯，使用波长范围是320~1100nm，气体放电光源用于紫外光区的如氢灯和氘灯，使用波长范围是195~400nm。

7.分光光度计分析条件的选择（见讲义）

答1.仪器测量条件的选择；2.显色反应条件的选择3.参比溶液的选择。

8.为什么要进行显色反应？显色反应需要满足哪些要求？影响显色反应的因素有哪些？答：

响显色反应的因素有：显色剂用量,溶液酸度,显色时间,温度,溶剂

9.分光光度法在核酸与蛋白质的纯度分析中的应用原理

答：可用A260/A280的比值鉴定其纯度

纯DNA比值为1.8，纯RNA比值为1.0。

第六章免疫化学技术

1.双向免疫扩散法

答：是以琼脂为介质的Ag-Ab沉淀反应。

2.阐述2种免疫电泳的原理（对流免疫电泳、火箭免疫电泳）

答：

3.对流免疫电泳与双向免疫扩散法的异同

答：对流免疫电泳：是在凝胶介质中将电泳法和扩散法相结合的一种免疫化学方法。

双向免疫扩散法：是以琼脂为介质的Ag-Ab沉淀反应。

异：对流免疫电泳是抗原、抗体分子在电场作用下定向运动，双向免疫扩散法是自由扩散。同：都基于琼脂凝胶为介质的一种沉淀反应的特性，根据沉淀出现与否及沉淀量的多寡，可定性定量地检测出样品中抗原或抗体的存在及含量。

4.ELISA及其基本原理

答：酶联免疫吸附法是指将可溶性的抗原或抗体吸附到聚苯乙烯等固相载体上，进行免疫反应的定性和定量方法。

第七章固定化技术

1.固定化酶、固定化细胞的概念

答：固定化酶：将水溶性酶用物理化学方法处理，固定于不溶性载体上，称为不溶于水，但仍有酶活性的一种酶制剂形式。

固定化细胞：就是被限制自由移动的细胞，即细胞受到物理化学等因素约束或限制在一定的空间界限内，但细胞仍保留催化活性并能反复或连续使用。

2.固定化酶的优点，

答：优点：1.纯化简单2.酶的稳定性有所改进；

3.酶的使用效率提高，可以反复利用；

4.反应条件容易控制。

3.固定化酶的制备方法

答：1）吸附法：利用离子键、物理吸附等方法，将酶固定在纤维素、琼脂糖、多孔玻璃等载体上；2）包埋法：用物理方法把酶包埋在凝胶细小的格子中，或包围在半透膜或聚合物中，酶本身不参与反应；3）共价结合法：酶与不溶于水的载体以共价键形式结合制备固定话酶的方法；4）交联法：双功能试剂或多功能试剂与酶分子中的氨基酸残基作用，使酶与酶之间交联成网。

4.固定化细胞比固定化酶有何优点？

答：

第八章生物大分子制备技术

1.生物大分子的制备的一般步骤是哪些？

答：

2.生物大分子制备物均一性要满足什么鉴定要求？

答：

3.细胞破碎的方法

答：

反复冻融法；自溶法；溶胀法；有机溶剂处理法；表面活性剂处理法。

5.蛋白质的分离纯化方法及简述（分四大类，p142）

答：1.以分子大小和形态的差异为依据的方法：差速离心、区带离心、超滤、透析和凝胶过滤等；

2.以溶解度的差异为依据的方法：盐析、萃取、分配层析、选择性沉淀和结晶等；

3.以电荷差异为依据的方法：电泳、电渗析、等电点沉淀、吸附层析和离子交换层析等；

4.以生物学功能专一性为依据的方法：亲和层析等。

2. 如何检测、判断、提高提取DNA的质量

通过测定它的浓度和OD值。DNA溶液稀释20-30倍后，测定OD260/OD280比值，明确DNA含量和质量。

通过分光光度计判断。

5.什么是膜分离、透析、超滤、盐析法

膜分离：用具有选择透过膜性能的薄膜（分离膜），在外力推动下对多组分溶质和溶剂进行分离、提纯、浓缩的方法。

透析：是通过小分子经过半透膜扩散到水（或缓冲液）的原理，将小分子与生物大分子分开的一种分离纯化技术。

超滤：是一种加压膜分离技术，即在一定的压力下，使小分子溶质和溶剂穿过一定孔径的特制的薄膜，而使大分子溶质不能透过，留在膜的一边，从而使大分子物质得到了部分的纯化。盐析：溶液中加入无机盐类而使某种物质溶解度降低而析出的过程

6.DNA、RNA的定量

答：

7.生物大分子浓缩、干燥的方法

答：浓缩的方法：1.减压加温蒸发浓缩2.空气流动蒸发浓缩3.冰冻法4.吸收法5.超滤法。

干燥的方法：1.真空干燥2.真空冷冻干燥

第九章放射性同位素技术

1.什么是同位素示踪法，有什么特点？

答：是利用放射性核素作为示踪剂对研究对象进行标记的微量分析方法。

特点：1.灵敏度高2.测量方法简便易行3.能准确地定量定位4.符合研究对象的生理条件。

2. 放射性防护的三原则

答：放射实践的正当化、放射防护的最优化、个人剂量限制

第十章PCR

1.什么是PCR，PCR的主要步骤是什么？

答：聚合酶链反应技术是在模板DNA、引物和4种脱氧核糖核苷三磷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶进行的酶促合成反应。主要步骤：1.双链DNA模板加热变性成单链(变性)；

2.在低温下引物与单链DNA互补配对（退火）；在适宜温度下TaqDNA聚合酶催化引物沿着模板DNA延伸（延伸）。

2.什么是PCR-SSCP，简述它的基本原理、主要应用。

答：

实验部分

1.蛋白质（酶）分离纯化的一般步骤、鉴定方法、注意事项

1.分光光度计使用时，在波长360nm～1000nm内，用热辐射光源作光源，在波长200nm～350nm范围内，用气体放电光源作光源；其测定值A在 0.2~0.8 范围内误差较小。

2.Bio－gel P 中文名是聚丙烯酰胺凝胶，其型别P－300表示排阻极限为4*105。

3.离心转头是离心机的主要部件之一，主要可分为角度转头、垂直转头、

甩平式转头、区带转头、连续流动转头等。

相当于50μg/ml 双链DNA 。

4. DNA常用紫外分光光度法进行定量，通常1 OD

260

1.带电颗粒在电场中的电泳分离取决于下列哪项因素：（ABCDE ）

A.电场强度

B.颗粒所带净电荷数及其大小形状

C. 支持物的电渗作用

D.溶液的pH值

E.溶液的离子强度

2. 偶然误差是由于某些难以预料的偶然因素或是测定过程中某些不易控制的因素引起的误差。请问下列哪些方法可以减少偶然误差？（ CE ）

A.仪器校正

B. 对照实验

C. 平均取样

D. 空白实验

E. 多次取样

3.下列哪些方法可用于细菌细胞的破碎？（ABCDE ）

A.超声波处理

B. 高压挤压匀浆

C. 纤维素酶处理

D. 溶菌酶处理

E.捣碎机

1.吸收光谱：

处于基态和低激发态的原子或分子吸收具有连续分布的某些波长的光而跃迁到各激发态，形成了按波长排列的暗线或暗带组成的光谱。

2.对流免疫电泳：

是在凝胶介质中将电泳法和扩散法相结合的一种免疫化学方法。

3.相对离心力：

在离心力场的作用下，颗粒所受离心力相当于地球重力的倍数，单位是重力加速度

4.精密度：

精密度是指在相同条件下多次测量结果互相吻合的程度，

表现了测定结果的再现性。

5.超滤：

是一种加压膜分离技术，即在一定的压力下，使小分子溶质和溶剂穿过一定孔径的特制的薄膜，而使大分子溶质不能透过，留在膜的一边，从而使大分子物质得到了部分的纯化。

1. PCR的主要步骤是什么?

答：主要步骤：1.双链DNA模板加热变性成单链(变性)；2.在低温下引物与单链DNA互补配对（退火）；在适宜温度下TaqDNA聚合酶催化引物沿着模板DNA延伸（延伸）。

2.什么是酶的固定化，固定化酶有何优点？

答：酶的固定化是将酶与水不溶性载体结合，制备固定化酶的过程。

优点：1.纯化简单2.酶的稳定性有所改进；

3.酶的使用效率提高，可以反复利用；

4.反应条件容易控制。

1. 如何去除核酸提取液中的杂蛋白？试举2种具体的方法。

2. 什么是凝胶色谱？它的基本原理是什么？简述凝胶色谱的操作过程。

答：是利用凝胶把物质按分子大小不同进行分离的一种方法。原理：由于被分离物质的分子大小不同，洗脱时，大分子物质由于直径大于凝胶网孔不能进入凝胶内部，只能沿着凝胶颗粒间的孔隙，随溶剂向下移动，因此流程短，首先流出层析柱，而小分子物质，由于直径小于凝胶网孔，能自由进出胶粒网孔，使之洗脱流程增长，移动速度慢而后流出层析柱。应用：1）脱盐及去除小分子杂质2）蛋白质的分离、生物大分子的纯化3）分子量测定4）去热源物质5）溶液的浓缩。

生物化学实验复习题 2

生物化学实验复习题： 1.试述旋光法测定淀粉含量的实验原理。 在加热及稀盐酸的作用下，淀粉水解并转入盐酸溶液中。在一定的水解条件下，不同谷物淀粉的比旋光度是不同的。其在171～195之间，因此可用旋光法测定粗淀粉的含量。 2.淀粉含量测定的方法有几种？比较各方法特点。 淀粉是由多个葡萄糖缩合而成的多糖，测定淀粉的方法主要有酸水解法、酶水解法和旋光法等。 1、酸水解法：面粉经乙醚除去脂肪，乙醇除去可溶性糖类后，用酸水解淀粉为葡萄糖， 按还原糖测定方法测定还原糖含量，再折算为淀粉含量。 2、酶水解法：面粉经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用淀粉酶水解成双糖，再用 盐酸将双糖水解成单糖，最后按还原糖测定，并折算成淀粉。 3、旋光法：在加热及稀盐酸的作用下，淀粉水解并转入盐酸溶液中。在一定的水解条 件下，不同面粉淀粉的比旋光度是不同的。其淀粉的比旋光度在171~195之间，因此可用旋光法测定淀粉的含量。 3.简述旋光法测定淀粉的关键步骤。 1.样品的处理 在电子天平上称取小麦粉2.5000g置于三角瓶中→加入50ml 1%HCl混成浆状（不能有结块）→沸水浴中准确加热15min→先加1ml 30% ZnSO4混匀→再加1ml 15%亚铁氰化钾混匀→移至100ml容量瓶中加水定容混匀后过滤→弃去最初15ml收集其余滤液。 2.旋光度测定 取滤液20ml置于旋光管中，先用1%HCl 调节旋光仪“0”点，然后将样品溶液放入旋光仪中测α 4.写出计算粗淀粉含量的公式并说明各符号的含义。

5.试述凯氏定氮法测定蛋白质含量的实验原理。 含氮的有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢二元素被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。 浓碱可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，借水蒸汽将产生的氨蒸馏到一定浓度的过量硼酸溶液中，硼酸吸收氨后使溶液中氢离子浓度降低，然后用标准无机酸滴定，直到恢复溶液中原来氢离子浓度为止，最后根据所用标准酸的摩尔数（相当于待测物中氨的摩尔数）计算出待测物中的总氮量。 6.蛋白质含量测定的方法有几种？比较各方法特点。 定氮法,双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法.考马斯亮蓝法（Bradford法）. 凯氏定氮灵敏度低,适用于0.1.0mg氮,误差为±2％费时 10小时将蛋白氮转化为氨,用酸吸收后滴定非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离）用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长 双缩脲法（Biuret法）灵敏度低 20mg 中速 20~30分钟多肽键＋碱性Cu2＋?紫色络合物硫酸铵；Tris缓冲液；某些氨基酸用于快速测定,但不太灵敏；不同蛋白质显色相似 紫外吸收法较为灵敏 50～100mg 快速 10分钟蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基

护理生物化学基础重点测试题及答案教学文案

生物化学第一章蛋白质化学测试题 一、单项选择题 1．测得某一蛋白质样品的氮含量为0．40g，此样品约含蛋白质多少？B(每克样品*6.25) A．2．00g B．2．50g C．6．40g D．3．0 0g E．6．25g 2．下列含有两个羧基的氨基酸是：E A．精氨酸B．赖氨酸C．甘氨酸 D．色氨酸E．谷氨酸 3．维持蛋白质二级结构的主要化学键是：D A．盐键 B．疏水键 C．肽键D．氢键 E．二硫键(三级结构) 4．关于蛋白质分子三级结构的描述，其中错误的是：B A．天然蛋白质分子均有的这种结构 B．具有三级结构的多肽链都具有生物学活性 C．三级结构的稳定性主要是次级键维系 D．亲水基团聚集在三级结构的表面 E．决定盘曲折叠的因素是氨基酸残基 5．具有四级结构的蛋白质特征是：E

A．分子中必定含有辅基 B．在两条或两条以上具有三级结构多肽链的基础上，肽链进一步折叠，盘曲形成 C．每条多肽链都具有独立的生物学活性 D．依赖肽键维系四级结构的稳定性 E．由两条或两条以上具在三级结构的多肽链组成6．蛋白质所形成的胶体颗粒，在下列哪种条件下不稳定：C A．溶液pH值大于pI B．溶液pH值小于pI C．溶液pH值等于pI D．溶液pH值等于7．4 E．在水溶液中 7．蛋白质变性是由于：D A．氨基酸排列顺序的改变B．氨基酸组成的改变C．肽键的断裂D．蛋白质空间构象的破坏E．蛋白质的水解 8．变性蛋白质的主要特点是：D A．粘度下降B．溶解度增加C．不易被蛋白酶水解

D．生物学活性丧失 E．容易被盐析出现沉淀9．若用重金属沉淀pI为8的蛋白质时，该溶液的pH 值应为：B A．8 B．＞8 C．＜8 D．≤8 E．≥8 10．蛋白质分子组成中不含有下列哪种氨基酸？E A．半胱氨酸 B．蛋氨酸 C．胱氨酸 D．丝氨酸E．瓜氨酸 二、多项选择题 1．含硫氨基酸包括：AD A．蛋氨酸 B．苏氨酸 C．组氨酸D．半胖氨酸 2．下列哪些是碱性氨基酸：ACD A．组氨酸B．蛋氨酸C．精氨酸D．赖氨酸 3．芳香族氨基酸是：ABD A．苯丙氨酸B．酪氨酸 C．色氨酸D．脯氨酸4．关于α-螺旋正确的是：ABD A．螺旋中每3．6个氨基酸残基为一周 B．为右手螺旋结构

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生物化学实验知识点整理 实验一 还原糖的测定、实验二 粮食中总糖含量的测定 1.还原糖测定的原理 3,5-二硝基水杨酸与还原糖溶液共热后被还原成棕色的氨基化合物,在550nm 处测定光的吸收增加量，得出该溶液的浓度，从而计算得到还原糖的含量 2.总糖测定原理 多糖为非还原糖，可用酸将多糖和寡糖水解成具有还原性的单糖，在利用还原糖的性质进行测定，这样就可以分别求出总糖和还原糖的含量 3.电子天平使用 4.冷凝回流的作用： 使HCl 冷凝回流至锥形瓶中，防止HCl 挥发，从而降低HCl 的浓度。 5.多糖水解方法： 加酸进行水解 6.怎样检验淀粉都已经水解： 加入1-2滴碘液，如果立即变蓝则说明没有完全水解，反之，则说明已经完全水解。 7.各支试管中溶液的浓度计算 8.NaOH 用量：HCl NaOH n n = 9.不能中途换分光光度计,因为不同的分光光度计的光源发光强度不同 10.分光光度计的原理：在通常情况下，原子处于基态，当通过基态原子的某辐射线所具有的能量（或频率）恰好符合该原子从基态跃迁到激发态所需的能量（或频率）时，该基态原子就会从入射辐射中吸收能量，产生原子吸收光谱。原子的能级是量子化的，所以原子对不同频率辐射的吸收也是有选择的。这种选择吸收的定量关系服从式/E h hc νλ?==。 实验证明，在一定浓度范围内，物质的吸光度A 与吸光样品的浓度c 及厚度L 的乘积成正比，这就是光的吸收定律，也称为郎伯-比尔定律 分光光度计就是以郎伯比尔定律为原理，来测定浓度 11.为什么要水解多糖才能用DNS 因为DNS 只能与还原糖溶液在加热的条件下反应生成棕红色的氨基化合物，不能与没有还原性的多糖反应。 12.为什么要乘以0.9 以0.9才能得到多糖的含量。 13.为什么要中和后再测？ 因为DNS 要在中性或微碱性的环境下与葡萄糖反应 实验三 蛋白质的水解和纸色谱法分离氨基酸、实验四 考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度 1.纸色谱分离氨基酸分离原理 由于各氨基酸在固定相（水）和流动相（有机溶剂）中的分配系数不同，从而移动速度不同，经过一段时间后，不同的氨基酸将存在于不同的部位，达到分离的目的。 2.天然氨基酸为L 型 3.酸式水解的优点是：是保持氨基酸的旋光性不变，原来是L 型，水解后还是L 型，由于甘氨酸所有的R 基团是氢原子，所以它不是L 型

基础生物化学实验.

生物化学实验 实验基本原理 1 有效数字计算（结合电子天平的应用等） 加减法： 进行数字加减时，最后结果所保留的小数点后的位数应与参与运算的各数中小数点后位数最少者相同，其尾数“四舍五入”。如：0.124+1.2345+12.34=13.6979，应取13.70。 乘除法： 进行数字乘除时，最后结果的有效数字应与参与运算的各数中有效数字位数最少者为准，而与小数点的位数无关，其尾数“四舍五入”。如：1.23×0.12=0.1476,应取0.15。 2 误差分析 误差为实验分析的测定值与真实值之间的差值。误差越小，测定值越准确，即准确度越高。误差可用绝对误差和相对误差表示。 绝对误差= 测定值- 真实值 相对误差= 绝对误差÷真实值×100% 一般用相对误差表示结果的准确度，但因真实值是并不知道的，因此实际工作中无法求出分析的准确度，只得用精确度来评价分析的结果。 3 偏差分析（结合“可溶性蛋白或赖氨酸实验”要求掌握） 精确度表示在相同条件下，进行多次实验的测定值相近的程度。一般用偏差来衡量分析结果的精确度。偏差也有绝对偏差和相对偏差两种表示方法。 绝对偏差= 单次测定值- 算术平均值（不计正负号） 相对偏差= 绝对偏差÷算术平均值×100%

例如：分析某一材料糖含量，共重复测定5次，其结果分别为：16.1%，15.8%，16.3%，16.2%，15.6%，用来表示精确度的偏差可计算如下： 分析结果算术平均值个别测定的绝对偏差（不计正负） 16.1% 0.1% 15.8% 0.2% 16.3% 16.0% 0.3% 16.2% 0.2% 15.6% 0.4% 平均绝对偏差=（0.1%+0.2%+0.3%+0.2%+0.4%）÷5 = 0.2% 平均相对偏差= 0.2÷16.0×100% = 1.25% 在实验中，有时只做两次平行测定，这时就应用下式表达结果的精确度： 两次分析结果的差值÷平均值×100% 4 实验结果的表述：实验结果可用列表法（“影响酶作用的因素”常用）和作图法（综合实验用）表示。 第1章分光光度技术 分光光度技术是光学（光谱）分析技术的一种，它是利用物质的特征吸收光谱来对不同物质进行定性和定量分析的一项技术。我们将重点介绍紫外光-可见光分光光度法。 一、紫外光-可见光分光光度法的基本原理 1、讨论的波长范围：200～400nm的紫外光区和400～760nm的可见光区。 人肉眼可见的光线称可见光，波长范围在400～760nm；

生物化学实验复习题库

生物化学实验复习题库 生物化学实验复习题库 1、卵磷脂提取原理: 卵磷脂在大脑、神经组织、肝脏、肾上腺和红细胞中含量丰富，尤其是在蛋黄中。卵磷脂易溶于脂肪溶剂，如乙醇和乙醚，可以用这些脂肪溶剂提取。本实验用95%乙醇提取卵磷脂，用蒸汽浴分离乙醇和卵磷脂。 2.卵磷脂的提取原理:新提取的卵磷脂被鉴定为白蜡，与空气接触后，由于不饱和脂肪酸的氧化而变成棕色。卵磷脂中的胆碱基团在碱性条件下分解成三甲胺。三甲胺有一种特殊的鱼腥味，可以被识别。 3、糖莫尔斯试验的颜色反应: 糖用无机酸(浓硫酸、浓盐酸)脱水，生成糠醛或糠醛衍生物，在浓无机酸的作用下，与а-萘酚形成紫色缩合物。因为糠醛或糠醛衍生物对此都是肯定的，所以它不是糖的特定反应，而是可以用来鉴别糖的存在。 4、糖色反应塞的测试: 酮糖在浓酸的作用下脱水生成5-羟甲基糠醛，后者与红色的间苯二酚反应。有时，它也产生棕红色沉淀，溶解在乙醇中形成亮红色溶液。这个反应是酮糖的特定反应，在同样条件下醛糖显色反应缓慢，只有当糖浓度高或沸腾时间长时，才是弱阳性反应。在实验条的条件下，蔗糖可能水解并呈现阳性反应。赛波特试验可以识别酮糖的存在。5.什么是纸色谱？

纸色谱是最简单的液-液相分配色谱。滤纸是纸色谱的支撑。当载体被水饱和时，大多数水分子被滤纸的纤维素牢固地吸附，因此，纸及其饱和水是色谱的固定相，与固定相不混溶的有机溶剂是色谱的流动相。 因为不同的氨基酸在相同的溶剂中有不同的溶解度，所以氨基酸在滤纸上的迁移率不同。 6.什么是Rf值？影响Rf值的主要因素是什么 Rf是氨基酸的特定位移值。Rf=从原点到色谱点中心的距离/从原点到溶液前端的距离 影响纸色谱迁移率Rf值的主要因素有:1 .样本本身的性质和结构；2、溶剂的性质；3.酸碱度；4.温度；5.滤纸的性质。 7.如何准备延长剂？ 8.平衡溶剂在色谱柱中的作用是什么？9.牛奶制备酪蛋白的原理和方法。 牛奶含有半乳糖、蛋白质和脂肪。蛋白质中的酪蛋白通过等电点沉淀，然后通过离心获得。小的碳水化合物分子被分离，因为它们在清澈的液体中。通过有机溶剂萃取除去沉淀物中的脂肪，最终得到纯净的白色结晶酪蛋白。 方法:在鲜奶中加入PH4.7的醋酸缓冲液，在40℃下沉淀酪蛋白，洗涤，将醇醚吸附于水中，干燥成粉末，计算提取率。步骤:保温、调节酸碱度、沉淀、离心、洗涤、干燥和称重 10.蛋白质的等电点是多少？实际意义是什么？

华中农业大学《生物化学实验》试卷

华中农业大学本科生课程考试试卷 考试课程与试卷类型：植物生理学实验原理与技术（A）姓名： 学年学期：2008－2009－1 学号： 考试时间：2009－－班级： 一、名词解释 ( 每题 4 分 , 共 12分 ) 1. 聚丙烯酰胺凝胶 2. 离心技术 3．可见光分光光度法/反相纸层析 二、填空题 ( 每空 2 分 , 共 42分 ) 1. 反相纸层析法分离油菜不饱和脂肪酸的实验中 ,分离后的不饱和脂肪酸经红氨酸溶液显色后 , 其最终产物颜色是（1）,从点样端起层析谱带所对应的脂肪酸依次是 (2) 、（3）、（4）、（5）、（6）。 2. 圆盘聚丙烯酰胺凝胶电泳分离过氧化物酶同工酶的实验中 , 电泳时上槽接电源（7）极 ,下槽接电源 (8) 极 , 电泳开始电流应调节至每管（9）mA, 十分钟后电流调节至每管 (10) mA; 在上槽或样品中加入溴酚蓝是起（11）的作用。 3. 核酸提取过程中 , 将含有 DNA 的溶液置72℃处理 3 分钟，其目的是（12）；在淀粉酶活性测定过程中将淀粉酶液置于 70℃下处理 15 分钟的目的是（13）。 4．在微量凯氏定氮法测定植物组织中的总氮和蛋白氮，有三个主要的实验阶段，它们分别是（14）、（15）和（16）。在第二阶段，若收集三角瓶中的溶液颜色由_（17）变为（18），表明反应完全。第三阶段所用的标准浓度的滴定溶液名称是（19）。 5. DNA 提取研磨时加入的研磨缓冲液的NaCl浓度是（20），研磨时加入SDS的作用是（21）

三、是非判断题 (判断对错，对的标T，错的标F，每题 2 分，共 10 分 ) 1．萌发的小麦种子中含有很高活性的淀粉酶，其中α－淀粉酶不耐热，在70℃迅速钝化。（） 2．本学期测定还原性糖和可溶性蛋白含量时都用到了斐林试剂，这两个实验中所用的斐林试剂的配方是相同的。（） 3．DNA提取中，加入冷乙醇是为了使DNA分子复性变粗。（） 4．离心机使用中，要求同一台离心机所用的离心管都有相同的重量。（）5．油菜种子硫甙葡萄糖苷的快速分析法中，反应的实质是测定水解硫苷产生的葡萄糖的数量。（） 四、问答题（共36分） 1．试述维生素C测定的基本原理及其实验过程中的注意事项（12分） 2．简述凯氏定氮法测定蛋白质含量的基本原理。为什么一些不法商人要在蛋白质制品中加入三聚氰胺？（12分） 3．凝胶电泳法测定同工酶的原理是什么？为什么本学期所作的胶条染色后显示的谱带就是过氧化物同工酶带？（12分）

生化实验操作考核要点(新)

【实验操作考核要点】 一、目的要求 1．掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。 2．了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。 3．正确操作使用刻度吸管和可调微量移液器。 4．熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。 5．正确掌握溶液转移的操作。 6．正确操作使用分光光度计。 二、操作考核内容 按百分制计。 1．吸量管操作（20分）； 2．可调式微量移液器操作（20分）； 3．溶液混匀操作（视具体情况，采用合适的混匀方法）（15分）； 4．溶液转移操作（10分）； 5．分光光度计比色操作（25分）。 6．整体表现（10分）。 三、操作考核标准 （一）吸量管操作（20分，每项操作5分） 1．执管 要求右手拿吸量管，左手拿橡皮球，只能用食指而不能用拇指按压吸量管上口来调节吸取液量的刻度；吸液、排液整个操作过程吸量管应始终保持垂直。 2．坐姿 要求腰、背保持竖直，看刻度时眼睛保持平视。 3．吸取溶液 吸量管插入液面深度约0.5cm，不能一插到底，也不能插入过浅而吸进空气致使溶液进入橡皮球内；调控吸量管吸取液量的刻度时，吸量管尖应离开液面靠在容器内壁上。 4．排出液体

吸量管尖应靠上受纳容器内壁，让管内溶液自然流出。不能用橡皮球吹压，而且在流净后吸量管尖停靠受纳容器内壁至少3秒。 （二）可调式微量移液器操作（20分，每项操作5分） 1．设定容量值 转动加样器的调节旋钮，反时针方向转动旋钮，可提高设定取液量。顺时针方向转动旋钮，可降低设定取液量。在调整设定移液量的旋钮时，不要用力过猛，并应注意使取液器显示的数值不超过其可调范围。 2．吸液 （1）选择合适的吸头安放在取液套筒上，稍加扭转压紧吸嘴使之与套筒之间无空气间隙； （2）把按钮压至第一停点，垂直握持加样器,使吸头浸入液面下2~3毫米处,然后缓慢平稳地松开按钮，吸入液体，等一秒钟，然后将吸头提离液面，贴壁停留2-3秒，使管尖外侧的液滴滑落。 3．放液 （1）将吸头口贴到容器内壁底部并保持100°~40°倾斜； （2）平稳地把按钮压到第一停点，等一秒钟后再把按钮压到第二停点以排出剩余液体； （3）压住按钮，同时提起加样器，使吸头贴容器壁擦过，再松开按钮。按吸头弹射器除去吸头。 4．压放按钮时保持平稳；加样器不得倒转；吸头中有液体时不可将加样器平放。取液器吸嘴为一次性使用。实验完毕，将取液器读数调至最大量程值，竖立放于支架上。 （三）溶液的混匀（操作流程中下划实线的三处，每项操作5分，共15分）1．肝糖原的提取与鉴定操作中，肝匀浆上清液中加5ml 95%乙醇后的混匀最好用倾倒混匀，也可用滴管或吸量管吸、吹混匀，或用玻璃棒搅拌混匀。 2．肝糖原定量测定中，肝组织消化液沸水浴后全部转入100 ml容量瓶，加水至刻线后的混匀应采用倒转混匀。 3．肝糖原定量测定中，加蒽酮溶液后的混匀，可将试管倾斜约45o再作旋转混匀。因蒽酮溶液（浓硫酸配制）比重大于样品水溶液很多，一加入便沉于管

基础生化实验-蛋白质纯化

蛋白质纯化

一、目的: 利用金属亲和性管柱(metal affinity column)来大量纯化带有affinity tag的基因重组蛋白。 二、原理: 由于六个Histidine 所组成的His Tag (metal affinity tag)可与Ni2+ bind，所以利用基因重组技术在表现的蛋白质加上His Tag，再以金属亲和性管柱 (Ni-NTA) (此His- tag序列可与带二价正电的阳离子相螯和)及liquid chromatography来大量纯化蛋白质。 三、试剂与器材: 1.loading(binding) buffer (10mM imidazole,0.3M NaCl,50Mm Tris-HCl Ph7) ?细菌回溶成为蛋白质的载体以保持活性 2.wash buffer (20mM imidazole,0.3M NaCl,50Mm Tris-HCl,Ph7) 3.elution buffer (20mM EDTA,0.3M NaCl,50Mm Tris-HCl,Ph7) 上课补充: ?蛋白质很脆弱，需要在特殊的buffer里。

四、仪器与设备: FPLC(速液相色谱仪) 五、步骤: 1.将管柱架在铁架上，把亲和性胶体悬浮装填于管柱内。 2.以2~3倍CV loading buffer清洗管柱后，注入蛋白质样本。 3.以wash buffer梳洗，2到3倍column体积。 4.用wash buffer和elution buffer进行线性梳洗，并收集流出液体，以 FPLC UV monitor上的OD280数据读取样品流出与否，并观察冲离液之 曲 线图。 上课补充: ?胞内型分泌需要用超音波破菌，因为会放热所以要放在冰中使用。 ?线性梳洗为加入elution buffer会有颜色变化会把镍离子跟imidazole冲 洗掉，剩下胶体溶液。 ?其中imidazole和Histidine类似也会和镍离子结合所以会竞争，可拿来 洗涤蛋白质。(可详见问题一及补充资料2) 六、问题:

食品生物化学实验复习过程

食品生物化学实验

食品生物化学实验要求 1.学生做实验前必须写好实验预习报告，做好实验预习，无实验预习报告者 不许进入实验室。每大组实验人数28人，4人一小组。 2.实验试剂的配制，现场由教师指导，学生操作完成。学生在试剂配制过程 中，掌握试剂配置的基本步骤，基本方法和注意事项。 3.实验室所有设备都必须按说明书使用，器皿要小心使用，按规范要求操 作，如有损坏，照价赔偿。 4.卫生要求：每次试验完毕小组成员务必将本试验台及地面收拾整洁，器皿 摆放整齐有序，如哪组成员发现没有搞好自己组的环境卫生，这次试验的所有组员的实验报告都会扣分。 一、10食品科学食品生物化学实验项目表 1. 淀粉的显色、水解和老化（4学时） 2. 蛋白质的功能性质（4学时） 3. 牛奶中酪蛋白等电点测定和氨基酸的分离鉴定（4学时） 4. 或果胶的提取（4学时） 5. 酶的性质实验（4学时） 实验总课时：16学时

二、食品生物化学实验指导书 实验一淀粉的显色、水解和老化 一、实验目的和要求 1、了解淀粉的性质及淀粉水解的原理和方法。 2、掌握淀粉水解的条件和产物的实验方法。 3、淀粉的老化原理和方法 二、实验原理 1、淀粉与碘的反应直链淀粉遇碘呈蓝色，支链淀粉遇碘呈紫红色，糊精遇碘呈蓝紫、紫、橙等颜色。这些显色反应的灵敏度很高，可以用作鉴别淀粉的定量和定性的方法，也可以用它来分析碘的含量。纺织工业上用它来衡量布匹退浆的完全度，它还可以用来测定水果果实（如苹果等）的淀粉含量。 近年来用先进的分析技术（如X射线、红外光谱等）研究碘跟淀粉生成的蓝色物，证明碘和淀粉的显色除吸附原因外，主要是由于生成包合物的缘故。直链淀粉是由α-葡萄糖分子缩合而成螺旋状的长长的螺旋体，每个葡萄糖单元都仍有羟基暴露在螺旋外。碘分子跟这些羟基作用，使碘分子嵌入淀粉螺旋体的轴心部位。碘跟淀粉的这种作用叫做包合作用，生成物叫做包合物。 在淀粉跟碘生成的包合物中，每个碘分子跟6个葡萄糖单元配合，淀粉链以直径0.13 pm绕成螺旋状，碘分子处在螺旋的轴心部位。 淀粉跟碘生成的包合物的颜色，跟淀粉的聚合度或相对分子质量有关。在一定的聚合度或相对分子质量范围内，随聚合度或相对分子质量的增加，包合物的颜色的变化由

2015高级生物化学及实验技术试题答案

高级动物生化试题 问答题： 1. 简述非编码RNA（non-coding RNA）的种类、结构特点及其主要功能。 非编码RNA的种类结构和功能 1tRNA转运RNA（transfer RNA，tRNA） 结构特征之一是含有较多的修饰成分，核酸中大部分修饰成分是在tRNA中发现的。修饰成分在tRNA分子中的分布是有规律的，但其功能不清楚。5’末端具有G（大部分）或C。3’末端都以ACC的顺序终结。有一个富有鸟嘌呤的环。有一个反密码子环，在这一环的顶端有三个暴露的碱基，称为反密码子（anticodon）.反密码子可以与mRNA链上互补的密码子配对。有一个胸腺嘧啶环。tRNA具有三叶草型二级结构以及“L”型三级结构，tRNA 的不同种类及数量可对蛋白质合成效率进行调节。tRNA负责特异性读取mRNA中包含的遗传信息，并将信息转化成相应氨基酸后连接到多肽链中。 tRNA为每个密码子翻译成氨基酸提供了结合体，同时还准确地将所需氨基酸运送到核糖体上。鉴于tRNA在蛋白质合成中的关键作用，又把tRNA称作第二遗传密码。tRNA还具有其他一些特异功能，例如，在没有核糖体或其他核酸分子参与下，携带氨基酸转移至专一的受体分子，以合成细胞膜或细胞壁组分；作为反转录酶引物参与DNA合成；作为某些酶的抑制剂等。有的氨酰-tRNA还能调节氨基酸的生物合成。 2rRNA核糖体RNA（ribosomal RNA, rRNA） 核糖体RNA是细胞中最为丰富的RNA，在活跃分裂的细菌细胞中占80%以上。

他们是核糖体的组分，并直接参与核糖体中蛋白质的合成。核糖体是rRNA 提供了一个核糖体内部的“脚手架”，蛋白质可附着在上面。这种解释很直接很形象，但是低估了rRNA在蛋白质合成中的主动作用。较后续的研究表明，rRNA并非仅仅起到物理支架作用，多种多样的rRNA可起到识别、选择tRNA以及催化肽键形成等多种主动作用。例如：核糖体的功能就是,按照mRNA的指令将氨基酸合成多肽链。而这主要依靠核糖体识别tRNA 并催化肽键形成而实现。可以说核糖体是一个大的核酶( ribozyme)。而核糖体的催化功能主要是由rRNA来完成的,蛋白质并没有直接参与。 3 tmRNA tmRNA主要包括12个螺旋结构和4个“假结”结构，同时还包括一 个可译框架序列的单链RNA结构。tmRNA中H1由5’端和3’端两个末端形成，与tRNA的氨基酸受体臂相似。H1和H2的5’部分之间有一个由10-13nt 形成的环，类似tRNA中的二氢尿嘧啶环，称为“D”环。H3和H4，H6和H7，H8和H9，H10和H11之间分别形成Pk1，pK2，pK3，pK4。H4和H5之间则由一段包含编码标记肽ORF的单链RNA连接。H12由5个碱基对和7nt 形成的环组成，类似tRNA中的TΨC臂和TΨC环，称为“T”环。tmRNA 结构按照功能进行划分可分为tRNA类似域（TLD）和mRNA类似域（MLD），TLD主要包括H1,H2,H12,“D”环和“T”环，MDL则包括ORF和H5，这两部分分别具有类似tRNA和mRNA的功能。tmRNA是一类普遍存在于各种细菌及细胞器（如叶绿体，线粒体）中的稳定小分子RNA。它具有mRNA分子和tRNA分子的双重功能，它在一种特殊的翻译模式——反式翻译模式中发挥重要作用。同时，它与基因的表达调控以及细胞周期的调控等生命过程密切相关，是细菌体内蛋白质合成中起“质量控制”的重要分子之一。识别翻译或读码有误的核糖体，也识别那些延迟停转的核糖体，介导这些有问

生物化学实验复习题

生物化学实验复习题 生物化学实验复习题 一、生物化学的基本操作 1、判断玻璃仪器洗涤干净的标准时什么？ 2、若容器内附有油污，应该怎样洗涤？ 3、玻璃仪器的一般洗涤方法 4、玻璃仪器干燥时，若不急用应怎样干燥，若急用应怎么办？容量玻璃仪器（如容量瓶、吸量管、滴定管）以及烧结、结构复杂的玻璃仪器，能否烧烤？若不能，该怎么干燥？ 5、请准确量取一定量液体从一个器皿转移至另一器皿中（操作） a刻度吸管b奥氏吸管c微量加样器 6、使用奥氏吸管的原则是什么? 7、电动离心机的使用方法（配平、离心机使用的检查、调试） 8、分光光度计的使用方法及注意事项（比色皿选择、洗涤、保护） 二、血清r-球蛋白的提纯 1、盐析、分段盐析法德基本原理 2、凝胶过滤法德基本原理 3、沉淀r-球蛋白所需硫酸铵的最小浓度时多少？ 4、不同型号交联葡聚糖凝胶“G”表示，请问G后面的数字表示什

么含义？ 5、影响凝胶层析分离效果的因素有哪些？ 6、如何检测蛋白质或铵根离子是否流出？ 7、透析法脱盐的原理 三、酚试剂发测定蛋白质 1、酚试剂测定的原理 2、为什么设计空白对照管？ 3、在本实验条件下对蛋白溶液进行比色，选择的波长是多少？ 4、本实验蛋白质浓度在什么浓度范围内呈正相关线形关系？ 5、比色反应最好在什么时间内比色？ 6、制作标准曲线时，有哪些基本要求？ 四、血浆脂蛋白蛋白琼脂糖凝胶电泳 1、血脂的组成 2、脂蛋白的组成及分类 3、电泳的一般原理 4、影响带电颗粒泳动速度的因素主要有哪些？ 5、电泳图谱出现形状不规则的原因是什么？ 6、超速离心法和电泳法分离血浆脂蛋白的主要原理是什么？ 7、有A.B.C.D四种不同的蛋白质，pI分别为4.0、5.0、6.0、7.0.，请设计3中实验方法将它们彼此分开。（电泳、凝胶过滤。盐析） 8、采用不损伤蛋白质结构和功能的物理方法分离纯化蛋白质时，常用技术有哪些？（有:非变性电泳、层析、超速离心、盐析）

生物化学实验理论考试题答案

生物化学实验理论考试题答案 1.醋酸纤维薄膜电泳时点样端应靠近电极的哪一端，为什么？ 答；电泳时点样端应靠近负极，因为血清中各种蛋白质在PH为8.6的环境中均带负电，根据同性相吸，异性相斥原理，点样端在负极时蛋白质向正极泳动从而实现蛋白质分离。 2.用分光光度计测定物质含量时，设置空白对照管的作用,为什么？ 答；空白对照是为了排除溶剂对吸光度的影响。溶液的吸光度表示物质对光的吸收程度，但是作为溶剂也能吸收，反射和透射一部分的光，因此必须以相同的溶剂设置对照，排除溶剂对吸光度的影响。 3.简述血清蛋白的醋酸纤维薄膜的电泳原理？ 答；血清蛋白中各种蛋白质离子在电场力的作用下向着与自身电荷相反的方向涌动，而各种蛋白质等电点不同，且在PH为8.6时所带电荷不同，分子大小不等，形状各有差异，所以在同一电泳下永动速度不同从而实现分离。 4.何谓Rf值？影响Rf值的因素？ 答;Rf是原点到层析中心的距离与原点到溶剂前沿的距离之比。Rf的大小与物质的结构，性质，溶剂系统，层析滤纸的质量和层析温度有关，对同一种物质来讲Rf是一个常量。 5.什么是盐析？盐析会引起蛋白质的变性吗？一般用什么试剂? 答;盐析是指当溶液中的中性盐持续增加时，蛋白质的溶解度下降，当中性盐的浓度达到一定程度的时候，蛋白质从溶液中析出的现象。盐析不会引起蛋白质的变性，因为蛋白质的结构并未发生改变，去掉引起盐析的因素蛋白质仍能溶解；一般用饱和硫酸铵溶液进行盐析 6.简述DNS法测定还原糖浓度的实验原理？ 答;还原糖与DNS在碱性条件下加热被氧化成糖酸，而DNS被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内还原糖的量与3-氨基-5硝基水杨酸颜色的深浅成正比，用分光光度计测出溶液的吸光度，通过查对标准曲线可计算出3-氨基-5硝基水杨酸的浓度，从而得出还原糖的浓度。 7.影响蛋白质沉淀的因素是什么？沉淀和变性有什么联系？ 答;水溶液中的蛋白质分子由于表面形成水化层和双电层从而形成稳定的亲水胶

生物化学实验练习题及参考答案[1]

生物化学实验 一、名词解释： 分配层析法电泳同工酶酶活性分光光度法层析技术比活力 二、填空题： 1. 测定蛋白质含量的方法有，，和。 2. CAT能把H2O2分解为H2O和O2，其活性大小以来表示，当CAT与H2O2反应结束，再用测定未分解的H2O2。 3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以作为载体的一种区带电泳，这种凝胶是由和交联剂在催化剂作用下聚合而成。化学聚合法一般用来制备_____________胶，其自由基的引发剂是，催化剂是______________；光聚合法适于制备大孔径的_________________胶，催化剂是______________。 4.层析技术按分离过程所主要依据的物理化学性质进行分类，可分成以下几种：_______________，_______________，_______________，_______________和________________。 5. 使用离心机离心样品前，必须使离心管__________且对称放入离心机。 6. 米氏常数可近似表示酶和底物亲合力，Km愈小，表示E对S的亲合力愈，Km愈大，表示E对S 的亲合力愈。 7. 分光光度计在使用之前必须预热，注意预热及样品槽空时必须_________（打开、合上）样品池翻盖。 8. CAT是植物体内重要的酶促防御系统之一，其活性高低与植物的密切相关。 9. 纸层析实验中，____________形成固定相，____________流动相。 10. 聚丙烯酰胺凝胶是是由和交联剂在催化剂作用下聚合而成的，在具有自由基团体系时，两者就聚合。引发产生自由基的方法有两种：和。11. 层析技术按按固定相的使用形式进行分类，可分成以下几种：_______________，_______________，_______________和________________。 三、问答题： 1、简述4种测定蛋白质含量的方法及其原理。 2、简述不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳中的三个不连续及三种物理效应。 3、试分析影响电泳的主要因素有哪些？ 参考答案： 生物化学实验 一、名词解释： 1、电泳：指带电粒子在电场中向与其自身所带电荷相反的电极方向移动的现象。 2、同工酶：指催化同一种化学反应，但其酶蛋白本身的分子结构组成却有所不同的一组酶。 3、分配层析法：用物质在两种或两种以上不同的混合溶剂中的分配系数不同，而达到分离目的的一种实验方法。

生物化学实验题目

实验一胆固醇的提取2012-11-15 16:20:00 生物师范班题目 1.比色法测定样品的理论基础是什么？ 被测样品必须要有颜色。 2. 胆固醇含量在多少范围时，与值呈良好的线性关系？ 在400mg/ml范围内。 3.在提取胆固醇的过程中，为什么要加无水乙醇？ 促使蛋白质沉淀。 4.在试管中加入1ml磷硫铁试剂，会产生什么现象？（至少写2点） 产生紫红色化合物。产生热量。 5.在无水乙醇中加磷硫铁试剂时，正确的加法是什么？将产生什么现象？请准确描述 该现象。 沿管壁慢慢加入。溶液分层。上层是无水乙醇，下层是磷硫铁试剂。 1. 胆固醇提取过程中，无水乙醇为什么要分两次加入？ 目的是使蛋白质以分散很细的沉淀颗粒析出。 2.我们用比色法测定胆固醇含量的仪器名称是什么？ 分光光度计 3. P-S-Fe试剂配置时，能用稀硫酸吗？为什么？ 不能。因为FeCl3本身是亲水性物质，稀硫酸中含有水，会降低P-S-Fe试剂的浓度，从而导致反应不能发生。 4.请简述移液枪的使用步骤。 根据所要吸取的溶液的体积选定合适量程的移液枪。 调好量程。 插枪头。 吸取液体。 将移液枪的量程调至最大。 5. 请简述0.08mg/ml胆固醇标准溶液的配置方法。 准确称取胆固醇80mg，溶于无水乙醇，定容至100ml 将贮液用无水乙醇准确稀释10倍既得。

实验二总糖和还原糖测定2012-11-15 16:20:00 生物师范班 1. 请写出还愿糖与非还原糖结构的不同之处 拥有自由的醛基和酮基 2. 对没有还原性的糖，用什么方法进行糖含量的测定？ 酸水解的方法将非还原性的糖降解呈还原糖。 3. DNS之所以能和还原糖反应，是因为其结构中含有__________? 硝基 4. 如果将DNS和其与还原糖反应的产物同时进行比色，谁的A值更大？为什么？ 产物的更大，因为产物生成棕红色，颜色越深，吸光度越高。 5. 还原糖提取过程中，为什么要离心两次？ 因为这样可以更好地将还原糖全部提取出来。第二次洗涤沉淀。 海洋技术班 1.单糖都是还原糖吗？为什么？ 是的，因为有自由醛基和酮基 2.为什么能用比色法测定还原糖的量？ 因为还原糖的量与光吸收值呈线性关系。 3.DNS的全称是？ 3,5-二硝基水杨酸 4.总糖提取过程中，碘液的作用是什么？ 确认淀粉水解完全。 5.请简述标准曲线的作用。 通过标准曲线来算出未知样品的浓度。

生物化学实验内容

《生物化学实验》内容 课程类型：制药工程专业必修 实验总学时：32课时 开设实验项目数：8个 适用对象：2017制药工程1、2班 实验教师：段志芳 一、实验目标及基本要求 生物化学实验是一门独立的实验课程，培养学生生物化学实验基本操作技能、实验数据处理能力、分析问题解决问题的能力和实事求是的科学态度。 二、实验内容

三、成绩 包括实验时的表现（实验出勤、安全卫生、操作对错、损坏器皿情况等，占50%）及实验报告的完成情况和完成质量（占50%），每个实验按总分为100分为满分进行打分，共8个实验，总评取平均值。 四、要求 （1）实验过程中同组人可以配合进行； （2）实验报告独立完成，同组人数据相同，不得抄袭他组数据；（3）实验过程若出现失误应向老师汇报后再进行重做； （4）对实验结果进行简单的分析. 实验一植物组织中可溶性总糖的提取 一、实验目的 1. 掌握可溶性总糖的概念和性质。 2. 掌握可溶性总糖提取的基本原理。

3．掌握溶解、过滤、洗涤、定容等基本操作技术。 二、实验原理 可溶性糖是指易溶于水的糖，包括绝大部分的单糖、寡糖，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖等。它们在植物体内可以充当能量的储存、转移的介质、结构物质和功能分子如糖蛋白的配基。总糖主要指具有还原性的葡萄糖、果糖、戊糖、乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖、麦芽糖以及可能部分水解的淀粉。可溶性总糖提取方法包括：热水提取法、酶提取法、超声波提取法等。其溶于热水，不溶于60%以上乙醇，所以用热水提取、乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质。本实验利用可溶性糖溶于水的特性，将植物磨碎，用热水将组织中的可溶性糖提取出来，结合实验二得到总糖浓度，已知溶液体积和原料重量，可以求出总糖含量。 三、实验用品 1.仪器设备：电子天平（精确到0.0g，配称量纸若干）；可控温电 加热板或电炉或电热套或水浴锅均可。可共用。 2.玻璃器皿：研钵1套；100mL锥形瓶1个；25mL量筒1个；玻 璃棒1根；100mL烧杯2个；胶头滴管1支；过滤装置1套（铁架台1台+铁圈1个+玻璃漏斗1个+100mL容量瓶1个+洗瓶1个）； 不锈钢刮勺1个；剪刀1把。此部分为每组所用，集中到小框里，放置各实验台上。 3.药品试剂：新鲜植物叶片；蒸馏水。 4.其他：9cm滤纸若干（与玻璃漏斗配套）；纸巾若干；标签纸若

生物化学实验习题及参考答案完整版

生物化学实验习题及参 考答案 HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】

生物化学实验习题及解答 一、名词解释 1、pI； 2、层析； 3、透析； 4、SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳； 5、蛋白质变性； 6、复性； 7、Tm 值； 8、同工酶； 9、Km值； 10、DNA变性；11、退火；12、增色效应 二、基础理论单项选择题 1、用下列方法测定蛋白质含量，哪一种方法需要完整的肽键（ ） A、双缩脲反应 B、凯氏定氮 C、紫外吸收 D、羧肽酶法 2、下列哪组反应是错误的（） A、葡萄糖——Molish反应 B、胆固醇——Libermann-Burchard反应 C、色氨酸——坂口（Sakaguchi）反应 D、氨基酸——茚三酮反应 3、Sanger试剂是（） A、苯异硫氰酸 B、2，4-二硝基氟苯 C、丹磺酰氯 D、-巯基乙醇 4、肽键在下列哪个波长具有最大光吸收（） A、215nm B、260nm C、280nm D、340nm 5、下列蛋白质组分中，哪一种在280nm具有最大的光吸收（） A、色氨酸的吲哚基 B、酪氨酸的酚环 C、苯丙氨酸的苯环 D、半胱氨酸的硫原子 6、SDS凝胶电泳测定蛋白质的相对分子量是根据各种蛋白质（） A、在一定pH值条件下所带的净电荷的不同 B、分子大小不同 C、分子极性不同 D、溶解度不同 7、蛋白质用硫酸铵沉淀后，可选用透析法除去硫酸铵。硫酸铵是否从透析袋中除净，你选用下列哪一种试剂检查（） A、茚三酮试剂 B、奈氏试剂 C、双缩脲试剂 D、Folin-酚试剂 8、蛋白质变性是由于（） A、一级结构改变 B、亚基解聚 C、空间构象破坏 D、辅基脱落 9、用生牛奶或生蛋清解救重金属盐中毒是依据蛋白质具有（） A、胶体性 B、粘性 C、变性作用 D、沉淀作用 10、有关变性的错误描述为（）

生物化学实验重点试题

一、解词 1、总氮量水中各种形态无机和有机氮的总量 2、酶的抑制作用是指在某个酶促反应系统中，某种低相对分子质量的物质加入后，导致酶活力降低的过程。 3、酶的最适温度酶催化活性最高时的温度 4、蛋白质的等电点每个蛋白都存在一个pH使它的表面净电荷为零即等电点 5、盐析增加中性盐浓度使蛋白质、气体、未带电分子溶解度降低的现象 6、蛋白质变性蛋白质在某些物理和化学因素作用下其特定的空间构象被改变，从而导致其理化性质的改变和生物活性的丧失6、酶的专一性酶对底物及其催化反应的严格选择性通常酶只能催化一种化学反应或一类相似的反应 7、激活剂能提高酶活性的物质大部分是离子或简单的有机化合物 8、抑制剂凡能使酶催化活性下降而不引起酶蛋白变性的物质 9、酶催化特定化学反应的蛋白质、RNA或其复合体 二、填空 1、球蛋白可在半饱和中性硫酸铵溶液中析出，清蛋白可在高盐浓度溶液中析出。 2、在PH3.0、和9.5时的电场中，卵清蛋白（PI4.6）移动方向分别为负移 动，正移动。 3、唾液淀粉酶的最适温度是37 4、还原糖与本乃狄试剂共热现象生成生成砖红色沉淀。 5、维生素C也称抗坏血酸，它具有很强还原性 6、用苔黑酚浓盐酸溶液可以鉴定核糖核酸 7、当溶液的PH低于蛋白质等电点时，蛋白质分子带正电荷；当溶液的 PH大于蛋白质等电点时，蛋白质分子带负电荷； 10．凯氏定氮法测定蛋白质含量消化终点颜色为清澈的蓝紫色色。 11．蛋白质变性的实质是空间结构被破坏。 12．常用的RNA提取方法有苯酚法、、高盐法等。 13、维持蛋白质亲水胶体稳定的因素是蛋白质颗粒表面的电荷层 和水化膜、 14、蛋白质在等电点时，主要以两性离子离子形式存在；当溶液的P H＞PI 时，蛋白质分子以负离子形式存在；当溶液的P H＜PI时，蛋白质分子带正离子形式存在。 15、蛋白质分子中氮的平均含量为 5.16% ，样品中的蛋白质含量常以测 氮量乘以 6.25 、即 6 。 三、选择 1、盐析法沉淀蛋白质的原理( ) A 与蛋白质结合成不溶性蛋白盐 B 次级键断裂蛋白质的构象改变 C 中和电荷，破坏水化膜 D 调节蛋白质溶液的等电点 2、以下哪项不是酶的特性（） A 酶是生物催化剂，催化效率极高 B 易受Ph，温度等外界因素的影响 C 能加速化学反应但不改变反应平衡点 D 有高度特异性 3、RNA和DNA的最大紫外吸收值是在（） A 280nm B 260nm C 510nm D 620nm 4、．凯氏定氮法使用的混合催化剂硫酸钾-硫酸铜配比为（） A 1:3 B 5:1 C 3:1 D 1:1

12级生物化学实验2期末复习题-考试

12级生物化学实验2期末复习题-考试

生物化学实验（2）理论习题 一、名词解释题 1、聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）：在样品介质和聚丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂后，蛋白质亚基的点泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小，而电荷因素可以被忽略。当蛋白质的分子量在15KD到200KD之间时，电泳迁移率与分子量的对数呈线性关系，可以用来测定蛋白质亚基的分子量。 2、电泳：带电颗粒在电场作用下，向着与其电性相反的电极移动，称为电泳 3、层析分离技术：是一种物理的分离方法，利用多组分混合物中各组分物理化学性质的差别，使各组分以不同的程度分布在两个相中。 4、吸附色谱法：利用同一吸附剂对混合物中不同成分吸附能力的差异，从而使各成分达到分离目的的色谱法。 5、离子交换层析：以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。 6、分配层析：根据一种或多种化合物，在两种不相

融合的溶剂间的分配来分离物质的方法。 7、亲和层析：是利用生物活性物质之间的专一亲和吸附作用而进行的层析方法。是近年来发展的纯化酶和其他高分子的一种特殊的层析技术。 8、凝胶层析（凝胶色谱）：混合物随流动相经过凝胶层析柱时，由于各组分流经体积的差异，使不同分子量的组分得以分离的层析方法。 9、电渗作用：指在电场作用下液体(通常是水)相对于和它接触的固定的固体相作相对运动的现象。 10、担体：担体是一种化学惰性的，多孔性的固体微粒，能提供较大的惰性表面，使固定液以液膜状态均匀地分布在其表面。 11、死时间：从进样到惰性气体峰出现极大值的时间称为死时间.。 12、保留时间：被分离样品组分从进样开始到柱后出现该组分浓度极大值时的时间，也即从进样开始到出现某组分色谱峰的顶点时为止所经历的时间，称为此组分的保留时间。 13、高效液相色谱法：，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，