病理切片的特殊染色方法

1.Van Gieson苦味酸和酸性品红法

【染色方法】

（1）中性甲醛固定组织，石蜡切片；

（2）组织切片脱蜡至水；

（3）用Van Gieson液染1～5分钟；

（4）倾去染液，直接用95％乙醇分化和脱水；

（5）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

【结果】胶原纤维呈红色，肌纤维、胞质及红细胞呈黄色。

2.Masson氏结缔组织三合染色法

【染色方法】

（1）石蜡切片厚6μm，脱蜡至水；

（2）0.2％冰醋酸水溶液浸泡片刻；

（3）Masson氏染色液中5分钟或更长时间；

（4）0.2％冰醋酸水溶液浸泡片刻；

（5）5％磷钨酸水溶液2～3分钟，再入0.2％冰醋酸水溶液浸洗（6）投入淡绿、冰醋酸水溶液浸染5分钟或更长时间；

（7）再入0.2％冰醋酸水溶液浸洗片刻；

（8）脱水、透明和封固。

【结果】胞浆和神经胶质纤维染红色，胶原纤维染绿色。

二、常用网状纤维染色方法

【染色方法】

（1）石蜡切片、脱蜡至水；

（2）0.25％高锰酸钾液3分钟；

（3）蒸馏水洗2次；

（4）1％草酸漂白即可；

（5）蒸馏水洗2次；

（6）2.5％铁明矾水溶液媒染5～10分钟，蒸馏水洗多次；

（7）二氨氢氧化银浸染1分钟，蒸馏水洗3次；

（8）10％甲醛液还原2分钟，蒸馏水洗3次；

（9）0.2％氯化金液调色1～2分钟，蒸馏水洗3次；

（10）5％硫代硫酸钠固定5分钟；

（11）蒸馏水洗，需要时复染；

（12）水洗、脱水、透明和封固。

【结果】网状维呈黑色，其他组织呈复染的颜色。

显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法

【染色方法】

（1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水；

（2）切片入70％乙醇中洗2分钟；

（3）将切片浸入盛有维多利亚蓝液中染0.5～2小时；

（4）直接入95％乙醇中分色数秒钟；

（5）浸入蒸馏水洗2分钟；

（6）用丽春红S液滴染切片5分钟；

（7）直接用无水乙醇冲洗多余染色液2次；

（8）将切片在空气中或冷风干燥；

（9）二甲苯透明，中性树胶封固。

【结果】弹性纤维呈蓝绿色，胶原纤维呈红色，背景呈淡黄色。

四、脂肪染色

【染色方法】

（1）冰冻切片厚度8～15μm；

（2）Harris苏木素，染约1分钟；

（3）自来水洗后，用0.5％盐酸乙醇分化，再水洗直至胞核返蓝为止；

（4）蒸馏水洗后移入70％乙醇内浸洗一下；

（5）浸入苏丹III染液中约30分钟或更长时间（如果置于56℃温箱中可适当缩短时间）；

（6）在70％乙醇分化数秒钟；

（7）待切片在空气中稍凉干或用冷风机吹干；

（8）及时用明胶甘油封片。

【结果】脂肪呈橘红色，脂肪酸不着色，胞核淡蓝色。

五、糖原染色

高碘酸－Schiff（Periodic acid Schiff，PAS）染色法

【染色方法】

（1）切片脱蜡至蒸馏水；

（2）浸入高碘酸氧化液中10～20分钟；

（3）蒸馏水洗2次；

（4）Schiff液染色10～30分钟；

（5）流水冲洗5分钟；

（6）用苏木素染细胞核3～5分钟；

（7）在盐酸酒精中分化，自来水洗至细胞核变蓝为止；

（8）脱水、透明和封固。

【结果】糖原和粘蛋白呈紫红色，细胞核染蓝色，霉菌也呈紫红色等。

六、粘液物质（粘多糖）染色法

【染色方法】

（1）切片入二甲苯，后递次向下直到入水；

（2）3％冰醋酸溶液3分钟；

（3）在奥辛兰溶液中染5分钟；

（4）入3％冰醋酸3分钟，蒸馏水洗（3次）；

（5）用1％过碘酸处理10分钟，蒸馏水洗；

（6）入Schiff液10～30分钟；

（7）流动自来水洗10分钟；

（8）逐级酒精脱水，二甲苯透明；

（9）中性树胶封固。

【结果】酸性粘多糖染兰色；中性粘蛋白染品红色；中性和酸性粘蛋白混合物染紫色。

七、横纹肌染色

Mallory磷钨酸－苏木素染色法PTAH

【染色方法】

（1）切片脱蜡至水；

（2）在酸性高锰酸钾液中氧化5～10分钟；

（3）自来水充分洗，蒸馏水洗2次；

（4）用1％草酸液漂白2分钟；

（5）自来水洗，蒸馏水洗2次；

（6）浸入MalloryPTAH液中12～48小时；

（7）直接用95％乙醇分化；

（8）无水乙醇急速脱水，二甲苯透明和树胶封固。

【结果】胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维素、横纹肌等均呈蓝色；胶质纤维、网状纤维、软骨基质及骨呈黄色或玫瑰红色；粗弹力纤维有时被染成微紫色；有缺血缺氧早期病变的心肌呈紫蓝色或棕黄色。

八、淀粉染色

【染色方法】

（1）石蜡切片，脱蜡至水；

（2）在1％刚果红水溶液中1小时或更长时间；

（3）投入饱和碳酸锂水溶液中15秒钟；

（4）用80％酒精分化，直至无多余燃料溜下为止；

（5）水洗后用苏木素进行核染色；

（6）等干后进行二甲苯透明和树胶封固。

【结果】淀粉样物质呈红色，细胞核呈兰色。

九、幽门螺杆菌染色

【染色方法】

（1）中性甲醛固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水；

（2）0.2mol／L醋酸缓冲液洗2次；

（3）将切片置入1％硝酸银液内1小时左右（温箱56℃）；

（4）直接把切片取出，立即浸入显影液内2～3分钟；

（5）将切片浸入56℃蒸馏水中洗1～2分钟；

（6）蒸馏水洗1次；

（7）无水乙醇脱水，二甲苯透明和中性树胶封固。

【结果】胃幽门弯曲菌呈棕黑色或黑色，背景呈淡黄色。

十、尼氏小体

【染色方法】

（1）石蜡切片厚6μm，脱蜡至水；

（2）用1％甲苯胺蓝水溶液置于50～60℃温箱内浸染20～40分钟；

（3）蒸馏水稍洗；

（4）95％乙醇迅速分化；

（5）无水乙醇脱水，二甲笨透明，中性树胶封固。

【结果】尼氏小体紫蓝色，胞核棕红色。

十一、含铁血黄素染色法

【染色方法】

（1）石蜡切片厚6μm，脱蜡至水；

（2）投入新鲜配置的20％盐酸和10％亚铁氰化钾等量混合液（用前过滤）中30分钟，必要时可延长时间；

（3）蒸馏水洗；

（4）在0.5％的碱性品红（溶剂为50％酒精）进行1分钟对比染色；

（5）在95％酒精中分化后晾干，透明，封固。

【结果】含铁血黄素呈蓝色，血棕色素呈红色。

十二、黑色素染色法

【染色方法】

（1）石蜡切片，脱蜡至水；

（2）投入硝酸银染色液中，并置于暗处12～18小时；（3）蒸馏水洗2分钟；

（4）以0.2％氯化金水溶液增色5－10分钟；

（5）蒸馏水洗；

（6）投入5％硫代硫酸钠水溶液2分钟；

（7）自来水洗；

（8）如需复染，可用苏木素－伊红染色法；

（9）酒精脱水，二甲苯透明，树胶封固。

【结果】黑色素呈黑色。

大鼠肝脏组织病理切片的制作和 HE 染色

大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE 染色 步骤如下： （一）固定与修块 取组织块放入Bouin氏液中，组织块的直径应小于7mm。6小时左右后用双面 刀片将组织块修剪成3-5mm3大小。 （二）脱水与透明 1．75%乙醇50分钟 2．85%乙醇50分钟 3．95%乙醇（I）30分钟 4．95%乙醇（II）30分钟 5．100%乙醇（I）30分钟 6．100%乙醇（II）30分钟 7 1/2 二甲苯（乙醇与二甲苯等体积）20分钟 8．二甲苯（I）20分钟 9．二甲苯（II）10分钟（可依据透明效果而定） 若脱水不好，二甲苯溶液颜色会变混浊。在每一步骤之后，要充分滤干组织 块，一般用筒纸吸干组织块上的液体，以免影响其他液体的浓度，但也要防止组织块干燥。全过程约需要5h。 （三）浸蜡、包埋与修蜡块 1．浸蜡：将60℃恒温箱打开，使石蜡充分溶解，待脱水与透明结束后，将 组织块转入石蜡里，放置于60℃恒温箱120分钟。 2．包埋：将60℃的石蜡倒入纸盒内，然后用小镊子将各组织块按一定的顺 序排列好，使切面朝下。不同组别的同一组织包埋于一个蜡块中，以保证切片和染色条件相同。为防止倒入纸盒内的石蜡底部立刻凝固，可将纸盒置于一玻璃板上（或大培养皿内），然后将玻璃板置于80-90℃左右热水上，包埋时蜡盒底部 要放平，做蜡块的蜡要反复冻融较好。 3．修蜡块：待纸盒内蜡凝固后，用刀片将其修成梯形，组织块与蜡块边缘 之间的距离不得小于2mm。 （四）切片 在载玻片上擦少量甘油蛋白。可滴半滴甘油蛋白于载玻片上，用手指充分抹 匀，呈半干状为佳。切片厚约4-8μm，将切片在55℃左右水浴中展开，展开程度以带黄颜色的组织完全摊平为准。用涂有甘油蛋白的载玻片从水浴中捞取切片，放入37℃烘箱中过夜。每个组织块捞片2张。过夜后，将载玻片置于玻片架上，进行下面的实验。 （五）脱蜡、染色与脱水 倾斜玻片架，将玻片架和载玻片下缘的试剂用筒纸吸干，减轻对其他试剂浓 度的影响。全过程约需要60分钟。 1．脱蜡 （1）二甲苯（I）15分钟 （2）二甲苯（II）15分钟 （3）100%乙醇2分钟 （4）95%乙醇（I）1分钟 （5）95%乙醇（II）1分钟 （6）蒸馏水浸洗1分钟

组织病理切片以及HE染色

组织病理切片以及HE染色 （一）实验原理：苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosin staining ，HE染色）能较好地显示组织结构和细胞形态，可 用于观察、描述正常和病变组织的形态学，而且HE切片可较长时间保存，被称为常规染色方法。 （二）实验步骤： 一、制作切片 1、取材、固定：取小鼠肾脏组织适当大小，并且放入盛有固定液的小瓶中保存。 2、组织的脱水、透明、浸蜡与包埋 组织固定后还需经过脱水、透明、浸蜡等过程才能制成蜡块，进行石蜡切片。脱水是指用某些溶媒置换组织内水分的过程。组织脱水后，必须经过一种既能与酒精相混合又能溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用，使石蜡浸入组织块。在此过程中，因组织块中的水分被溶剂所取代，组织块变得透亮，因此称之为透明。组织染色后也要进行透明。最常用的透明剂为二甲苯，处理时间为30min左右。 组织经透明后在溶化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡。用其他浸

透剂（如火棉胶、碳蜡和明胶等）渗入组织内部的过程 称为浸透或透入。为使石蜡充分渗入组织块中，常需经过3小时的浸渍，期间需更换3次石蜡。一般用于浸蜡的石蜡熔点为52- 56Co 组织块经过浸蜡或浸透，用包埋剂（石蜡、火棉胶、碳蜡和树脂等）包起的过程称包埋，包埋后便制成含组织的块。这种包埋块可使组织达到一定的硬度和韧度，有利于切成薄片。石蜡包埋是病理日常工作中最常用的包埋方法。用于包埋的石蜡熔点一般为60C左右。但在有些情况下，如某些酶染色时，则需采用低温石蜡包埋，以保存组织内酶的活性。 3、切片、制片 石蜡切片常用的切片机有轮转式切片机和平推式切片 机，以前者为多用。切片厚度一般为3-5卩m切片时先将组 织片平摊于一块玻璃上，迅速滴加30%的酒精水溶液使组织片完全展开，再移入40C恒温热水器中。也可直接将组织切片移入40C的恒温热水器中，待组织片完全展开后将其贴附于载玻片上，经56-60C烤片30-60min后即可进行染色。 二、HE染色 1. 二甲苯脱蜡2X 10 min ;

病理切片的特殊染色方法

1.Van Gieson苦味酸和酸性品红法 【染色方法】 （1）中性甲醛固定组织，石蜡切片； （2）组织切片脱蜡至水； （3）用Van Gieson液染1～5分钟； （4）倾去染液，直接用95％乙醇分化和脱水； （5）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 【结果】胶原纤维呈红色，肌纤维、胞质及红细胞呈黄色。 2.Masson氏结缔组织三合染色法 【染色方法】 （1）石蜡切片厚6μm，脱蜡至水； （2）0.2％冰醋酸水溶液浸泡片刻； （3）Masson氏染色液中5分钟或更长时间； （4）0.2％冰醋酸水溶液浸泡片刻； （5）5％磷钨酸水溶液2～3分钟，再入0.2％冰醋酸水溶液浸洗（6）投入淡绿、冰醋酸水溶液浸染5分钟或更长时间； （7）再入0.2％冰醋酸水溶液浸洗片刻； （8）脱水、透明和封固。 【结果】胞浆和神经胶质纤维染红色，胶原纤维染绿色。 二、常用网状纤维染色方法 【染色方法】 （1）石蜡切片、脱蜡至水； （2）0.25％高锰酸钾液3分钟； （3）蒸馏水洗2次； （4）1％草酸漂白即可； （5）蒸馏水洗2次； （6）2.5％铁明矾水溶液媒染5～10分钟，蒸馏水洗多次； （7）二氨氢氧化银浸染1分钟，蒸馏水洗3次； （8）10％甲醛液还原2分钟，蒸馏水洗3次； （9）0.2％氯化金液调色1～2分钟，蒸馏水洗3次； （10）5％硫代硫酸钠固定5分钟； （11）蒸馏水洗，需要时复染； （12）水洗、脱水、透明和封固。 【结果】网状维呈黑色，其他组织呈复染的颜色。

显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法 【染色方法】 （1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水； （2）切片入70％乙醇中洗2分钟； （3）将切片浸入盛有维多利亚蓝液中染0.5～2小时； （4）直接入95％乙醇中分色数秒钟； （5）浸入蒸馏水洗2分钟； （6）用丽春红S液滴染切片5分钟； （7）直接用无水乙醇冲洗多余染色液2次； （8）将切片在空气中或冷风干燥； （9）二甲苯透明，中性树胶封固。 【结果】弹性纤维呈蓝绿色，胶原纤维呈红色，背景呈淡黄色。 四、脂肪染色 【染色方法】 （1）冰冻切片厚度8～15μm； （2）Harris苏木素，染约1分钟； （3）自来水洗后，用0.5％盐酸乙醇分化，再水洗直至胞核返蓝为止； （4）蒸馏水洗后移入70％乙醇内浸洗一下； （5）浸入苏丹III染液中约30分钟或更长时间（如果置于56℃温箱中可适当缩短时间）； （6）在70％乙醇分化数秒钟； （7）待切片在空气中稍凉干或用冷风机吹干； （8）及时用明胶甘油封片。 【结果】脂肪呈橘红色，脂肪酸不着色，胞核淡蓝色。 五、糖原染色 高碘酸－Schiff（Periodic acid Schiff，PAS）染色法 【染色方法】 （1）切片脱蜡至蒸馏水； （2）浸入高碘酸氧化液中10～20分钟； （3）蒸馏水洗2次； （4）Schiff液染色10～30分钟； （5）流水冲洗5分钟； （6）用苏木素染细胞核3～5分钟； （7）在盐酸酒精中分化，自来水洗至细胞核变蓝为止；

病理切片详细描述

老师归纳的 1. 肾小管水样变 肾小球周围肾小管体积大，染色淡红 近曲小管上皮细胞肿胀，向管突出，官腔不规则变小，胞浆有粉红色小颗粒，分布均匀，大小一致，细胞核结构清晰 2. 肝脂肪变性 小叶周围肝细胞胞浆出现大小不等的圆形空泡 有的空泡较大，将核挤到一边 3. 肾小管玻璃样变 近曲小管上皮出现大小不一的红色球形颗粒 4. 脾动脉硬化(玻璃样变) 低倍镜：脾动脉增厚，脾小梁增粗，脾小体中央动脉及其小梁的小动脉壁增厚，红染 高倍镜：脾小体中央动脉壁增厚，管腔变小，膜下可见均匀红染无结构物质 5. 脾梗死 低倍镜：红染区即为坏死区，其中散落着一些深蓝色碎屑，为坏死的细胞核 高倍镜：核固缩，碎裂，溶解，脾小体和小梁结构模糊，尚可辨认 6. 肉芽组织 低倍镜：表面有一层炎性渗出物，其下可见大量的新生的毛细血管垂直表面生长，其间有成纤维细胞。深部血管减少，成纤维细胞逐步变为纤维细胞，并有胶原纤维生成 高倍镜：新生毛细血管由单层皮细胞构成，成纤维细胞大，胞浆丰富淡红色，成梭型或分支状，可见各种炎细胞 7. 慢性肺淤血 低倍镜：肺泡壁增厚，肺泡壁毛细血管扩充血。 高倍镜：肺泡腔含淡红色水肿液及心衰细胞、 8. 慢性肝淤血 中央静脉及周围肝窦扩充血，近中央静脉的肝细胞萎缩甚至消失 9. 混合血栓 低倍镜：粉红色不规则小梁与浅红色区域交织存在 高倍镜：粉红色小梁为已经崩解而凝聚成颗粒的血小板，小梁边缘附近有较多的中性粒细胞，血小板小梁间的浅红色区域为丝网状的纤维素及自溶的红细胞 10. 肾贫血性梗死 低倍镜：正常肾组织与梗死组织交错分布，梗死灶可见轮廓模糊的肾小管和肾小球，梗死灶周边部有较多的中性粒细胞浸润 高倍镜：坏死的肾小球及周围肾小管结构模糊，胞质红染，肾小管数目明显减少，残留的细胞核呈固缩状态

病理切片的特殊染色方法

1. Van Gieson苦味酸和酸性品红法 【染色方法】 (1)中性甲醛固定组织，石蜡切片； (2)组织切片脱蜡至水； (3)用Van Gieson液染1?5分钟； (4 )倾去染液，直接用95 %乙醇分化和脱水； (5) 无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 【结果】胶原纤维呈红色，肌纤维、胞质及红细胞呈黄色。2. Masson氏结缔组织三合染色法 【染色方法】 (1)石蜡切片厚6ym,脱蜡至水； (2)0.2 %冰醋酸水溶液浸泡片刻； (3)Masson氏染色液中5分钟或更长时间； (4)0.2 %冰醋酸水溶液浸泡片刻； (5) 5 %磷钨酸水溶液2?3分钟，再入0.2 %冰醋酸水溶液浸洗 (6 )投入淡绿、冰醋酸水溶液浸染5分钟或更长时间； (7)再入0.2 %冰醋酸水溶液浸洗片刻； (8)脱水、透明和封固。 【结果】胞浆和神经胶质纤维染红色，胶原纤维染绿色。 【染色方法】 (1 )石蜡切片、脱蜡至水； (2)0.25 %高锰酸钾液3分钟； (3 )蒸馏水洗2次； (4) 1 %草酸漂白即可； (5 )蒸馏水洗2次； (6) 2.5 %铁明矶水溶液媒染5?10分钟，蒸馏水洗多次; (7)二氨氢氧化银浸染1分钟，蒸馏水洗3次； (8)10 %甲醛液还原2分钟，蒸馏水洗3次； (9)0.2 %氯化金液调色1?2分钟，蒸馏水洗3次； (10)5%硫代硫酸钠固定5分钟； (11 )蒸馏水洗，需要时复染； (12)水洗、脱水、透明和封固。

【结果】网状维呈黑色，其他组织呈复染的颜色。 显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法 【染色方法】 (1)中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水； (2)切片入70%乙醇中洗2分钟； (3)将切片浸入盛有维多利亚蓝液中染0.5?2小时； (4)直接入95%乙醇中分色数秒钟； (5)浸入蒸馏水洗2分钟； (6)用丽春红S液滴染切片5分钟； (7)直接用无水乙醇冲洗多余染色液2次； (8 )将切片在空气中或冷风干燥； (9)二甲苯透明，中性树胶封固。 【结果】弹性纤维呈蓝绿色，胶原纤维呈红色，背景呈淡黄色 【染色方法】 (1)冰冻切片厚度8?15ym; (2)Harris苏木素，染约1分钟； (3)自来水洗后，用0.5%盐酸乙醇分化，再水洗直至胞核返蓝为止； (4)蒸馏水洗后移入70%乙醇内浸洗一下； (5)浸入苏丹III染液中约30分钟或更长时间(如果置于56 °C温箱中可适当缩短时间)； (6)在70 %乙醇分化数秒钟； (7)待切片在空气中稍凉干或用冷风机吹干； (8 )及时用明胶甘油封片。 【结果】脂肪呈橘红色，脂肪酸不着色，胞核淡蓝色。 高碘酸一Schiff ( Periodic acid Schiff ，PAS)染色法 【染色方法】 (1) 切片脱蜡至蒸馏水； (2) 浸入高碘酸氧化液中10?20分钟； (3 )蒸馏水洗2次； (4) Schiff液染色10?30分钟；

病理切片的制作过程

1.7.1 修整组织 将手术切取的乳腺肿瘤切成一个平整面，各组织块不宜太大，以便固定剂穿透和组织脱水等操作，通常以10 mm×10 mm×3mm或5mm×5mm×3mm为宜。找到不同的部位切取2块，以备后用。 1.7.2 组织洗涤 组织经修整后，组织中的福尔马林等必须冲洗干净，尤其是含有重金属的物质存在。因为残留在组织中的福尔马林，有的不利于染色，有的产生沉淀或结晶影响观察，所以组织修整后应冲洗12h左右。 1.7.3 组织脱水 组织经洗涤后，组织中含有大量水分，由于水与石蜡不能互溶，所以必须将组织中的水分除去。 80%乙醇溶液：2h 95%乙醇溶液:1h 95%乙醇溶液:1h 100%乙醇溶液:30min 100%乙醇溶液:30min 1.7.4 组织透明 由于乙醇与石蜡不相溶，而二甲苯既能溶于乙醇又能溶于石蜡，所以脱水后还要经过二甲苯以过渡。当组织中全部被二甲苯占有时，光线可以透过，组织呈现出不同程度的透明状态。 二甲苯Ⅰ：30min 二甲苯Ⅱ：10min 1.7.5 组织浸蜡 浸蜡的目的是除去组织中的透明剂（如二甲苯等），使石蜡渗透到组织内部达到饱和程度以便组织包埋。浸蜡时间根据组织的透蜡时间较长，需3h左右。浸蜡应在恒温箱内进行，并保持箱内温度在55℃左右，注意温度不要过高，以免组织发脆。 石蜡Ⅰ：1h

石蜡Ⅱ：1h。 石蜡Ⅲ：1h 1.7.6 组织包埋 将经过透蜡的组织连同熔化的石蜡，一起倒入容器内，然后立即投入冷水中，使其立刻凝固成蜡块的过程。包埋时，将纸盒放在温箱旁边，用镊子夹取组织平放于纸盒底部，，再用温镊子轻轻拨动组织，从温箱中取出盛放纯石蜡的蜡杯，沿壁倒入包埋用的纸盒中，速度要慢。待石蜡凝固（约30min）后放入冰箱保鲜层内以备后用。包埋时应根据组织材料、切片厚度、气候条件等因素，选择不同熔点的石蜡，新的石蜡一般要熬顿几次，以免石蜡固定后有气泡，影响切片。用于包埋的石蜡的熔点在50~60℃之间。 1.7.7 组织切片 （1）从冰箱里拿出蜡块，进行修快 （2）将已固定和修好的石蜡块台木装在切片机的夹物台上。 （3）将切片刀固定在刀夹上，刀口向上。 （4）摇动推动螺旋，使石蜡块与刀口贴近，但不可超过刀口。 （5）调整石蜡块与刀口之间的角度与位置，刀片与石蜡切片约成15度左右。 （6）调整厚度调节器到所需的切片厚度，先调约为25um，待切平后改为5um。 （7）一切调整好后方可以开始切片。此时右手摇动转轮，让蜡块切成蜡带，左手持毛笔将蜡带提起，摇转速度不可太急，通常以40-60r/min。 （8）切成的蜡带到10-20cm长时，右手用另一支毛笔轻轻地将蜡带挑起，以免卷曲，并牵引成带，平放在蜡带盒上，靠刀面的一面较光滑，朝下，较皱的一面朝上。 （9）感觉效果较好的蜡片一小段，用单面刀片切取，再放入约43℃的水浴锅中展片，观察切片是否良好。 （10）切片工作结束后，应将切片刀取下用氯仿擦去刀上沾着的石蜡，把切片机擦拭干净妥为保存。 1.7.8 贴片

病理切片的结果分析方法

病理切片的结果分析方法 HE染色：又称苏木素-伊红染色法，其中苏木素是Hematoxylin，简称H，伊红是Eosin，简称E，这是是普通光学显微镜观察与鉴别细胞凋亡与细胞坏死的一种染色方法。这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。经过HE染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。 检验原理： *苏木素是碱性染料，蓝紫色，可以使细胞核等着色。被苏木素着色的结构本身为酸性，具有嗜碱性(Basophilic)。 *伊红是酸性染料，粉红色。可以将大多数细胞的细胞质染成红色。被伊红着色的结构本身为碱性，具有嗜酸性(Acidophilic)。 *不易被苏木素和伊红着色的结构具有嗜中性(Neutrophilic)。 结果：细胞核呈蓝色，细胞质，肌纤维，胶原纤维和红细胞呈不同程度的红色。钙盐和细菌可呈蓝色或紫蓝色。 Masson三色染色：主要用于胶原纤维和肌纤维的鉴别染色。Masson染色是最为常用的结缔组织染色法，此法多用于观察病变组织中纤维结缔组织的增生和分布，纤维性肿瘤与肌源性肿瘤的鉴别。对酒精性肝硬化/坏死后性肝硬化及各型肝炎导致的小叶汇管区纤维组织增生程度的差别具有重要价值。 Masson染色在肾穿刺活检中可以用于判别在肾小球毛细血管网的系膜氏和上皮下是否存在嗜复红蛋白的沉积，对于肾脏疾病的病理诊断有重要意义。 检验原理： 利用两种或三种阴离子染料混合一起或先后作用完成染色，与阴离子染料分子大小和组织的渗透性有关。根据组织不同的渗透性能，选择分子大小不同的阴离子的染料进行染色，便可把不同组织成份显示出来 结果：细胞核呈黑色，肌纤维呈红色，胶原纤维呈亮绿色。 抗酸染色法:acid－fast?staining?method??1882年由埃利希（F．Ehrlich）首创并经F．齐尔（ Ziehl）改进而创造出的细菌染色法。其中最具代表性的为对结核菌的齐尔-尼尔森（Ziehl－ Neelsen）染色法和齐尔-加贝特（Ziehl－Gabbet）染色法。用石炭酸复红染色后，用盐酸乙醇分色，再用美蓝进行对比染色，即不再脱色而呈现石炭酸复红的红色。 检验原理： 分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。 齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背景中的物质为蓝色。 结果:抗酸杆菌鲜红色，背景蓝色

病理片HE染色步骤

病理片 HE染色步骤： 烤片80度半小时 (1)二甲苯（Ⅰ）5min (2)二甲苯（Ⅱ）5 min (3)二甲苯（III）5min (4)100%乙醇（Ⅰ）2min (5)90%乙醇（Ⅱ） 2 min (6)80%乙醇（III）2min (7)70%乙醇（IV）2 min (8) 流水冲洗5min (9) 苏木精液染色5 min (10) 流水稍洗去苏木精液1-3 s (11) 1%盐酸乙醇1-3 s (12)流水过洗至返蓝 (13) 0.5%伊红液染色1-3 min (14) 蒸馏水稍洗1-2 s (15) 80%乙醇稍洗1-2 s (16) 95%乙醇（Ⅰ）2-3 s (17) 100%乙醇（Ⅱ）3-5 s (18) 二甲苯（Ⅰ）2 min (19) 二甲苯（Ⅱ）2 min (20) 二甲苯（Ⅲ）2 min (21) 中性树胶封固

* 冷冻切片HE染色步骤： （1）冰冻切片固定10～30 s （2）水洗1～2 s （3）苏木精液染色（60℃）30～60 s （4）流水洗去苏木精液5～10 s （5）1%盐酸乙醇1～3 s （6）稍水洗1～2 s （7）促蓝液返蓝 （8）流水冲洗15～30 s （9）0.5%曙红液染色30～60 s （10）蒸馏水洗1～2 s （11）80%乙醇1～2 s （12）95%乙醇1～2 s （13）无水乙醇1～2 s （14）石炭酸二甲苯2～3 s （15）二甲苯（Ⅰ）2～3 s （16）二甲苯（Ⅱ）2～3 s （17）中性树胶封固。 H-E染色评定标准： （1）切片完整，厚度4-6微米，厚薄均匀，无皱褶无刀痕；（2）染色核浆分明，红蓝适度，透明洁净，封裱美观。

大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色

大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色 步骤如下： （一）固定与修块 取组织块放入Bouin氏液中，组织块的直径应小于7mm。6小时左右后用双面 刀片将组织块修剪成3-5mm3大小。 （二）脱水与透明 1. 75%乙醇50分钟 2. 85%乙醇50分钟 3. 95%乙醇(I) 30分钟 4. 95%乙醇(II) 30分钟 5. 100%乙醇(I) 30分钟 6. 100%乙醇(II) 30分钟 7 1/2二甲苯（乙醇与二甲苯等体积）20分钟 &二甲苯（I）20分钟 9 .二甲苯（II）10分钟（可依据透明效果而定） 若脱水不好，二甲苯溶液颜色会变混浊。在每一步骤之后，要充分滤干组织块，一般用筒纸吸干组织块上的液体，以免影响其他液体的浓度，但也要防止组织块干燥。全过程约需要5h。（三）浸蜡、包埋与修蜡块 1.浸蜡：将60C恒温箱打开，使石蜡充分溶解，待脱水与透明结束后，将组织块转入石蜡里，放置于60 C恒温箱120分钟。 2 .包埋：将60 C的石蜡倒入纸盒内，然后用小镊子将各组织块按一定的顺序排列好，使切面朝下。不同组别的同一组织包埋于一个蜡块中，以保证切片和染色条件相同。为防止倒入纸盒内的石蜡底部立刻凝固，可将纸盒置于一玻璃板 上（或大培养皿内），然后将玻璃板置于80-90 C左右热水上，包埋时蜡盒底部要放平，做蜡块的蜡要反复冻融较好。 3 .修蜡块：待纸盒内蜡凝固后，用刀片将其修成梯形，组织块与蜡块边缘之间的距离不得小于2mm。 （四）切片 在载玻片上擦少量甘油蛋白。可滴半滴甘油蛋白于载玻片上，用手指充分抹 匀，呈半干状为佳。切片厚约4-8卩m，将切片在55C左右水浴中展开，展开程度 以带黄颜色的组织完全摊平为准。用涂有甘油蛋白的载玻片从水浴中捞取切片，放入37C烘箱中过夜。每个组织块捞片2张。过夜后，将载玻片置于玻片架上， 进行下面的实验。 （五）脱蜡、染色与脱水 倾斜玻片架，将玻片架和载玻片下缘的试剂用筒纸吸干，减轻对其他试剂浓 度的影响。全过程约需要60分钟。 1.脱蜡 （1）二甲苯（I）15分钟 （2）二甲苯（II）15分钟 （3）100%乙醇2分钟 （4）95%乙醇（I）1分钟 （5）95%乙醇（II）1分钟 （6）蒸馏水浸洗1分钟 2 .染色

病理组织切片制作过程详解

病理组织切片制作过程详解 -森贝伽生物实验代做中心 公司中心实验室建设有病理学，分子生物学，细胞生物学，免疫学，蛋白质组学，实验动物模型构建，生物芯片，生物信息学等实验技术服务平台。此外，还提供技术咨询培训，课题合作设计与申报，论文翻译润色等实验技术服务。 1．取材 取材的好坏，直接影响切片的质量。取材时，首先要有一把锋利的取材刀，在切割组织时要避免取材刀来回拖拉，切取的组织块厚薄要均匀，一般厚度以0.2 ～0.3cm 为适，较容易发脆的组织如甲状腺、肝脏、血块、淋巴结、大块癌组织等可适当厚一点，而脂肪组织、肺组织、纤维性肿瘤、平滑肌瘤等致密的或试剂不易渗入的组织应取薄一些；淋巴结应修掉两侧球冠，并尽量剔除周围的脂肪组织。在取材中还应十分注意组织内是否有缝线或骨组织，如碰到不可避免的钙化组织，一定要非常小心。在切取纤维组织、肌肉组织、胃肠道时，应注意纤维及肌肉的走向，取材时尽可能按与纤维平行走向切取为佳。 (1）材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。 (2）组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm ×2.0cm ×0.2cm ，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm 即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm ，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。 （3）勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。 （4）规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。 （5）选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。 南京森贝伽生物科技有限公司 实验技术服务，代做实验

病理科优化制片及染色流程

1、切片前首先装好切片刀，把刀牢牢固定，否则，切片中就会发生许多人为现象。（最常见的人为现象是波纹，厚薄不均等）。 2、蜡块装到切片机的蜡块夹上，夹持要平稳牢固。调整好蜡块的方位，不能偏斜，刀刃与蜡块的上、下缘平行。切片刀与蜡块的平面之间应保持一定的角度（清除角），一般为3～8度，以免刀刃面将组织刮坏。 3、修蜡块时要循序渐进，力争修出最大面，又要防止小组织被修坏、修光。 4、切片时连续转动手轮，用力要平稳、均匀。常规切片厚3～5μm。 5、切下的蜡片相连成带状。待蜡带切至一定长度时，右手用镊子夹住蜡片末端，左手持毛笔轻轻将蜡带的另一端与切片刀拨离。 6、将蜡片较光滑的一面朝下臵于温水中（通常捞片水温在42℃左右），并用镊子帮助展开，去除皱纹后，选择完整、无划痕、厚薄均匀的蜡片，附贴到载玻片上。 7、附贴时，务使蜡片与玻片之间无气泡。玻片一端应留有1/3的位臵贴号码标签用。将蜡片附贴在另外2/3的中心位臵。 8、切片放入62℃烤箱中约30～60分钟烤片，以免发生脱片。为了防止脱片可以选用涂甘油蛋清片和挂胶片。比较常用的挂胶片有明胶片，APES 胶片和多聚赖氨酸胶片等，免疫组化染色尤需要使用胶片。

1、选取适当的新鲜组织块，放在冷冻托上，放入冷冻切片机中冻透。 2、修块、切片。冷冻切片通常厚6～8μm并把切片贴于载玻片上。 3、在酒精灯上轻烤片刻，放入固定液中2分钟。 4、然后快速HE染色（可在酒精灯上加热进行，以缩短时间）。 5、封片、贴标签后，送诊断室（15分钟之内完成）。

石蜡切片常见问题及优化解决方法

HE染色操作常规流程 切好的片子应在60~70℃左右的烤箱中烘烤30分钟以上才能进行染色。HE染色手工程序： 脱蜡 1、二甲苯Ⅰ（AR）5分钟 2、二甲苯Ⅱ（AR）5分钟 3、100%酒精Ⅰ（AR、无水乙醇）1分钟 4、100%酒精Ⅱ（AR、无水乙醇）1分钟 5、95%酒精（工业酒精或医用酒精）1分钟 6、80%酒精（工业酒精或医用酒精）1分钟 7、自来水浸洗1分钟 以上3~7称为进水过程。 染色 1、苏木素染液6分钟 2、水冼1分钟 3、0.5-1%盐酸酒精分化片刻（上下三次颜色由蓝变红） 4、自来水冲冼15分钟以上 （然后95%酒精片刻，主要是避免所带的水份稀释以下的伊红酒精，此步可免） 5、1%伊红酒精浸染1~2分钟 6、水冼1分钟 脱水、透明、封固

组织病理切片制作流程(完整版)

组织病理切片的制作流程 1．取材 组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下： (1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。 (2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。 (3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。 (4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。 (5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。 (6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。 (7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。为此可将组织展平，以尽可能维持原形。 2．固定 (1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。故取组织块的大小一般为2.0cm×2.0cm×0.3cm。

病理切片的特殊染色方法

1、Van Gieson苦味酸与酸性品红法 【染色方法】 (1)中性甲醛固定组织,石蜡切片; (2)组织切片脱蜡至水; (3)用Van Gieson液染1～5分钟; (4)倾去染液,直接用95％乙醇分化与脱水; (5)无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。 【结果】胶原纤维呈红色,肌纤维、胞质及红细胞呈黄色。 2、Masson氏结缔组织三合染色法 【染色方法】 (1)石蜡切片厚6μm,脱蜡至水; (2)0、2％冰醋酸水溶液浸泡片刻; (3)Masson氏染色液中5分钟或更长时间; (4)0、2％冰醋酸水溶液浸泡片刻; (5)5％磷钨酸水溶液2～3分钟,再入0、2％冰醋酸水溶液浸洗 (6)投入淡绿、冰醋酸水溶液浸染5分钟或更长时间; (7)再入0、2％冰醋酸水溶液浸洗片刻; (8)脱水、透明与封固。 【结果】胞浆与神经胶质纤维染红色,胶原纤维染绿色。 【染色方法】 (1)石蜡切片、脱蜡至水; (2)0、25％高锰酸钾液3分钟; (3)蒸馏水洗2次; (4)1％草酸漂白即可; (5)蒸馏水洗2次; (6)2、5％铁明矾水溶液媒染5～10分钟,蒸馏水洗多次; (7)二氨氢氧化银浸染1分钟,蒸馏水洗3次; (8)10％甲醛液还原2分钟,蒸馏水洗3次; (9)0、2％氯化金液调色1～2分钟,蒸馏水洗3次; (10)5％硫代硫酸钠固定5分钟; (11)蒸馏水洗,需要时复染; (12)水洗、脱水、透明与封固。 【结果】网状维呈黑色,其她组织呈复染得颜色。 显示弹性、胶原纤维得双重组合染色法

【染色方法】 (1)中性甲醛液固定组织,石蜡切片,常规脱蜡至水; (2)切片入70％乙醇中洗2分钟; (3)将切片浸入盛有维多利亚蓝液中染0、5～2小时; (4)直接入95％乙醇中分色数秒钟; (5)浸入蒸馏水洗2分钟; (6)用丽春红S液滴染切片5分钟; (7)直接用无水乙醇冲洗多余染色液2次; (8)将切片在空气中或冷风干燥; (9)二甲苯透明,中性树胶封固。 【结果】弹性纤维呈蓝绿色,胶原纤维呈红色,背景呈淡黄色。 【染色方法】 (1)冰冻切片厚度8～15μm; (2)Harris苏木素,染约1分钟; (3)自来水洗后,用0、5％盐酸乙醇分化,再水洗直至胞核返蓝为止; (4)蒸馏水洗后移入70％乙醇内浸洗一下; (5)浸入苏丹III染液中约30分钟或更长时间(如果置于56℃温箱中可适当缩短时间); (6)在70％乙醇分化数秒钟; (7)待切片在空气中稍凉干或用冷风机吹干; (8)及时用明胶甘油封片。 【结果】脂肪呈橘红色,脂肪酸不着色,胞核淡蓝色。 高碘酸－Schiff(Periodic acid Schiff,PAS)染色法 【染色方法】 (1)切片脱蜡至蒸馏水; (2)浸入高碘酸氧化液中10～20分钟; (3)蒸馏水洗2次; (4)Schiff液染色10～30分钟; (5)流水冲洗5分钟; (6)用苏木素染细胞核3～5分钟; (7)在盐酸酒精中分化,自来水洗至细胞核变蓝为止; (8)脱水、透明与封固。 【结果】糖原与粘蛋白呈紫红色,细胞核染蓝色,霉菌也呈紫红色等。 【染色方法】

病理切片详细描述

老师归纳的 1?肾小管水样变 肾小球周围肾小管体积大，染色淡红 近曲小管上皮细胞肿胀，向管内突出，官腔不规则变小，胞浆内有粉红色小颗粒，分布均匀，大小一致，细胞核结构清晰 2.肝脂肪变性 小叶周围肝细胞胞浆出现大小不等的圆形空泡 有的空泡较大，将核挤到一边 3?肾小管玻璃样变 近曲小管上皮内出现大小不一的红色球形颗粒 4. 脾动脉硬化（玻璃样变） 低倍镜：脾动脉增厚，脾小梁增粗，脾小体中央动脉及其小梁内的小动脉壁增厚，红染 高倍镜：脾小体中央动脉壁增厚，管腔变小，内膜下可见均匀红染无结构物质 5. 脾梗死 低倍镜：红染区即为坏死区，其中散落着一些深蓝色碎屑，为坏死的细胞核 高倍镜：核固缩，碎裂，溶解，脾小体和小梁结构模糊，尚可辨认 6. 肉芽组织 低倍镜：表面有一层炎性渗出物，其下可见大量的新生的毛细血管垂直表面生长，其间有成纤维细胞。深部血管减少，成纤维细胞逐步变为纤维细胞，并有胶原纤维生成 高倍镜：新生毛细血管由单层内皮细胞构成，成纤维细胞大，胞浆丰富淡红色，成梭型或分 支状，可见各种炎细胞 7. 慢性肺淤血 低倍镜：肺泡壁增厚，肺泡壁内毛细血管扩张充血。 高倍镜：肺泡腔内含淡红色水肿液及心衰细胞、 8. 慢性肝淤血 中央静脉及周围肝窦扩张充血，近中央静脉的肝细胞萎缩甚至消失 9. 混合血栓 低倍镜：粉红色不规则小梁与浅红色区域交织存在 高倍镜：粉红色小梁为已经崩解而凝聚成颗粒的血小板，小梁边缘附近有较多的中性粒细胞， 血小板小梁间的浅红色区域为丝网状的纤维素及自溶的红细胞 10. 肾贫血性梗死 低倍镜：正常肾组织与梗死组织交错分布，梗死灶内可见轮廓模糊的肾小管和肾小球，梗死灶周边部有较多的中性粒细胞浸润

组织病理切片以及HE染色

（一）实验原理：苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosin staining，HE染色）能较好地显示组织结构和细胞形态，可用于观察、描述正常和病变组织的形态学，而且HE切片可较长时间保存，被称为常规染色方法。 （二）实验步骤： 一、制作切片 1、取材、固定：取小鼠肾脏组织适当大小，并且放入盛有固定液的小瓶中保存。 2、组织的脱水、透明、浸蜡与包埋 组织固定后还需经过脱水、透明、浸蜡等过程才能制成蜡块，进行石蜡切片。脱水是指用某些溶媒置换组织内水分的过程。组织脱水后，必须经过一种既能与酒精相混合又能溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用，使石蜡浸入组织块。在此过程中，因组织块中的水分被溶剂所取代，组织块变得透亮，因此称之为透明。组织染色后也要进行透明。最常用的透明剂为二甲苯，处理时间为30min左右。 组织经透明后在溶化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡。用其他浸透剂（如火棉胶、碳蜡和明胶等）渗入组织内部的过程称为浸透或透入。为使石蜡充分渗入组织块中，常需经过3

小时的浸渍，期间需更换3次石蜡。一般用于浸蜡的石蜡熔点为52-56℃。 组织块经过浸蜡或浸透，用包埋剂（石蜡、火棉胶、碳蜡和树脂等）包起的过程称包埋，包埋后便制成含组织的块。这种包埋块可使组织达到一定的硬度和韧度，有利于切成薄片。石蜡包埋是病理日常工作中最常用的包埋方法。用于包埋的石蜡熔点一般为60℃左右。但在有些情况下，如某些酶染色时，则需采用低温石蜡包埋，以保存组织内酶的活性。 3、切片、制片 石蜡切片常用的切片机有轮转式切片机和平推式切片机，以前者为多用。切片厚度一般为3-5μm。切片时先将组织片平摊于一块玻璃上，迅速滴加30％的酒精水溶液使组织片完全展开，再移入40℃恒温热水器中。也可直接将组织切片移入40℃的恒温热水器中，待组织片完全展开后将其贴附于载玻片上，经56-60℃烤片30-60min后即可进行染色。 二、HE染色 1. 二甲苯脱蜡2×10 min； 2. 无水乙醇洗去二甲苯2×5min； 3. 95％、80％乙醇各l0 min，自来水洗l min（不要让急水直接冲至载玻片上的组织），蒸馏水洗1min；