高中生物选修一-微生物培养

微生物培养技术[1][培养基技术]

成分

分类

条件：pH、氧气、特殊营养物质

常见培养基

消毒与杀菌

无菌技术的目的：

?防止实验室的培养基被其它外来微生物污染?防止实验操作人员被污染

培养基使用完后的处理：

?进行高压蒸汽灭菌，然后丢弃

目的：分离细菌，得到单菌落[平板划线法]

[稀释涂布平板法]

稀释涂布平板法

?用稀释涂布平板法进行接种

?选用一定的稀释范围，使菌落数在30-300之间

?稀释倍数通常为103-106

?两个或多个细胞有时会连在一起，只形成一个菌落。因此，统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。

?统计结果一般用菌落数而不用活菌数表示

显微镜直接计数法/血细胞计数板计数法

?显微镜直接计数/血细胞计数板计数法也是测定微生物数量的常用方法

?由于观测到的细胞包括死细胞，因此统计结果偏大

滤膜法

?将已知体积的水过滤

?将滤膜放在鉴别培养基上培养

?根据培养基上菌落的数目，计算出水样中目标细菌的数量

选择培养

?筛选出所需要的微生物

?增加所需要的微生物的浓度鉴别培养

观察菌落特征

?形状

?大小

?隆起程度

?颜色

临时保藏

接种→培养→冰箱保藏→转移→保藏

?将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在合适的温度下培养?菌落长成后，将试管放入4℃的冰箱中保藏

?每3-6个月，要重新将菌种从旧的培养基转移到新鲜的培养基上 保存时间不长，菌种容易被污染或产生变异

甘油管藏

装甘油→灭菌→加菌液→混匀→冷冻箱保存

?在3mL的甘油瓶中装入1mL甘油，灭菌

?将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀

?放在-20℃的冷冻箱中保存

供长期保存菌种

[7][实验原则]

检测是否有杂菌污染/检测培养皿灭菌是否合格

设置空白对照

?取一个空白的培养皿，滴加无菌水，置于相同条件下

?若没有菌落生成，说明没有杂菌的污染

判断选择培养基是否起到筛选作用

用全培养基作为对比

?若全培养基中的菌落数明显多于选择培养基的菌落数，说明选择培养基起到了筛选作用

进一步鉴定分离出来的菌种

部分微生物可以利用其它微生物的代谢分解产物，从而在不含某些必要营养物质的培养基上存活

运用生物化学的方法进行鉴定

微生物培养基种类大全

摘要：1、营养琼脂（普通琼脂）成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤）100毫升琼脂（视天气，琼脂质量而定）制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。用途：作普通琼脂平皿。2、血琼脂平板（BA）制法：取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养 1、营养琼脂（普通琼脂) 成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤) 100毫升 琼脂（视天气，琼脂质量而定) 制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。 用途：作普通琼脂平皿。 2、血琼脂平板（BA) 制法：取营养琼脂（PH7．6)，加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。 用途：1．一般棉拭子均接种此培养基。 2．尿液，脓液 3．分离细菌标本用。 3、基础培养基（肉膏汤BB) 成份：蛋白胨10克牛肉膏5克 氯化钠5克水1000毫升 制法：将以上各物称好，加水煮沸溶解，用1NNOH校正PH至7．6，过滤分瓶，121℃高压灭菌，20分钟备用。 用途：1 作耐药试验，增菌用分装小管。 2 作普通琼脂斜面。 4、血液培养基（大管肉汤培养基) 成份：1 新鲜牛肉浸液1000毫升 2 PABA（对氨基苯甲酸〔相当于10mg/毫升〕) 1g% 1毫升 3 MgSO 4 [相当于0．493/100毫升] 49．3% 1毫升 4 枸椽酸钠0．3g 制法：1 将1号，4号混合液，2号，3号液分装高压灭菌。

2 取灭菌1，4号混合液用无菌法加入PABA，MgSO4，再分管，行无菌试验三天方可使用。 用途：作血，骨髓培养用。 5、肠道杆菌培养基（伊红美兰琼脂) 成份：蛋白胨10克乳糖10克 氯化钠5克琼脂25（22)克 水1000毫升2%伊红溶液20毫升 0．5%美兰溶液20毫升 制法：将蛋白胨，氯化钠琼脂称好，加水1000毫升使溶解，校正PH7．4过滤，补足失水，加入2%伊红溶液20毫升，0．5%美兰溶液20毫升，（115℃高压20分钟)，冷却至50℃左右倾注平板，凝固后存冰箱备用。（高压以后方可再加乳糖) 用途：用作分离沙门氏，志贺氏菌属，也作菌群调查。 1 6、罗文斯坦培养基 成份：磷酸二氢钾2．4克硫酸镁0．24克 枸椽酸钠0．6克天门冬素3．6克 纯甘油（丙三醇) 12毫升水600毫升 马铃薯粉30克鸡蛋1000毫升（约3公斤) 2%孔雀绿水溶液20毫升 制法：1 除鸡蛋外（还有孔雀绿)。可将其它物品称好，放入大三角瓶包扎好，高压灭菌。 2 鸡蛋用75%酒精泡30分钟，灭菌法打蛋，倒入盛有玻璃珠的灭菌三角烧瓶内充分将鸡蛋摇散。 3 将各成份按比例配好，分装每管约5毫升。 4 间歇灭菌第一次90℃1小时，第二次80℃半小时，第三次80℃半小时（或放85℃烤箱内连续二次)。 质控标准： 1 灭菌试验合格。 2 接种结核杆菌要求两星期生长良好。 用途：作结核分枝杆菌培养用。

生物选修1-专题2-微生物的培养与应用导学案(高三复习)

高三生物选修1 专题2 微生物的培养与应用导学案 （一）微生物的实验室培养 1. 培养基 （1）概念：人们按照微生物对＿＿＿＿＿＿的不同需求，配制出供其＿＿＿＿＿＿的营养基质叫培养基。按物理性质可分为＿＿＿＿培养基和＿＿＿＿培养基。 （2）营养构成：各种培养基一般都含有＿＿＿＿、＿＿＿＿＿、＿＿＿和＿＿＿＿＿＿。从细胞的化学元素组成来看，培养基中都含有这些营养成分的原因是：＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿ （3）在上述主要营养物质的基础上，还要满足微生物生长对＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿＿以及＿＿＿＿的要求，例如：培养乳酸杆菌时需在培养基中添加＿＿＿＿＿、培养霉菌时需将培养基PH调至＿＿＿＿、培养细菌时需将PH调至＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿、培养厌氧微生物则需提供＿＿＿＿＿条件。 2. 无菌技术 （1）获得纯净培养物的关键是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿，具体操作如下： ①对实验操作的＿＿＿＿＿、操作者的＿＿＿＿和＿＿＿进行＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。 ②将用于微生物培养的＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿＿等器具进行＿＿＿＿。 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿附近进行。 ④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿相接触。 （2）消毒和灭菌 ①消毒是指＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿（不包括芽孢和孢子）。日常生活中常用的方法有＿＿＿＿＿＿＿＿；不耐高温的液体用＿＿＿＿＿＿；人们也常使用（如酒精、氯气、石炭酸、煤酚皂溶液等）消毒、＿＿＿＿消毒。 ②灭菌是指＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿（包括芽孢和孢子）。常用的方法有：＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿＿。 ③无菌技术除了防止培养物被污染外，还能＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。 ④利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，避免＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。 ⑤物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿；随后关闭排气阀继续加热，气压升至＿＿＿＿，温度为＿＿＿＿＿，并维持＿＿＿＿＿min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至＿＿＿时打开锅盖，其目的是防止＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿ 3.实验操作 （1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ①基本操作步骤：＿＿＿→＿＿＿＿→＿＿＿＿→调pH→＿＿＿＿→＿＿＿＿＿＿＿。 ②相关问题：a.在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中，动作要迅速，原因是防止＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿ b.溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿ c.牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供的营养物质有：＿＿＿、＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿。

人教版高中生物选修一专题二《微生物的培养与应用》知识点归纳

专题二微生物的培养与应用 课题一微生物的实验室培养 ·培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。 ·培养基按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基。在液体培养基中加入凝固剂琼脂（是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂）后，制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。液体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物的分离和鉴定，半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。 ·按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。合成培养基是用成分已知的化学物质配制而成，其中成分的种类比例明确，常用于微生物的分离鉴定。天然培养基是用化学成分不明的天然物质配制而成，常用于实际工业生产。 ·按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。 ·培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。 ·碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。 ·氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如N2、NH3、NO3-、NH4+（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。只有固氮微生物才能利用N2。 ·培养基还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性，培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性，培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件 ·无菌技术·获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面： ①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。 ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 ④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。

微生物培养基

培养基 培养基(medium或culturemedium)是一种人工配制的、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物用的混合养料。因此任何培养基都应具备微生物所需要的六大营养要素，且其间的比例是合适的。任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌，否则很快引起杂菌丛生，并破坏其固有成分和性质。 一、选用和设计培养基的原则和方法 在微生物学研究和生产实践中，配制合适的培养基是一项最基本的工作。但是，许多工作不但要求我们去选用一种现成的培养基，而且还经常要求亲自去设计一种更合适的培养基，这就要求人们除了熟悉微生物的营养知识和规律外，还要有一套科学的设计培养基所应遵循的基本原则和方法。不巧的是，在一般的书籍中，这方面的内容不易找到。为此，这里根据自己的体会，提出了四个原则和四种方法，以作为总结这类工作的一个尝试。 (一)四个原则 1．目的明确在设计新培养基前，首先要明确配制该培养基的目的，例如，要培养何菌？获何产物？用于实验室作科学研究还是用于大规模的发酵生产？作生产中的“种子”，还是用于发酵？等等。 如果某培养基将用于实验室研究，则一般不必过多地计较其成本。但必须明确对该培养基是作一般培养用，还是作精细的生理、代谢或遗传等研究用。如属前者，可尽量按天然培养基的要求来设计，如系后者，则主要应考虑设计一种组合培养基(即“合成培养基”，详后)。拟培养的微生物对象也十分重要。不同大类的微生物，对培养基中碳源与氮源间的比例、pH的高低、渗透压的大小、生长因子的有无以及特殊成分的添加等都要作相应的考虑。 如果某培养基将用于大规模的发酵生产上，则用作“种子”的培养基，一般其营养成分宜丰富些，尤其氮源的含量应较高(即C/N比低)；相反，如拟用作大量生产代谢产物的发酵培养基，则从总体来说，它的氮源含量宜比“种子”培养基稍低(即C/N比高)。除了对不同类型的微生物应考虑其特定条件外，在设计发酵培养基时，还应特别考虑到生产的代谢产物是主流代谢产物，或是次生代谢产物。如属主流代谢产物(一般指通过主要代谢途径产生的那些结构较简单、产量较高、价值较低的降解产物)，则生产不含氮的有机酸或醇类时，培养基中所含的碳源比例自然要比生产含氮的氨基酸类产物时高，反之，生产氨基酸类含氮量高的代谢产物时，氮源的比

高中生物选修一微生物的实验室培养教案

课题1 微生物的实验室培养 【课标解读】 1、知道培养基的基础知识，进行无菌技术的操作 2、进行微生物的培养 【教学重难点】无菌技术的操作 【教学过程】 （一）引入新课 2007年7月1日，由国家标准委和卫生部联合发布的《生活饮用水卫生标准》（GB 5749-2006）强制性国家标准和13项生活饮用水卫生检验国家标准正式实施。新标准中的饮用水水质指标由原标准的35项增至106项，增加了71项。其中，微生物指标由2项增至6项，其中大肠杆菌要求每公升水中不得超过3个。你用什么办法将他们找到并准确计数？ 在传统发酵技术的应用中，都利用了微生物的发酵作用，其中的微生物来自于制作过程中的自然感染。而在工业化生产中，为了提高发酵的质量，需要获得优良菌种，并保持发酵菌种的纯度。这就要涉及到微生物的培养、分离、鉴别等基本技术。现在我们开始学习微生物的培养和应用专题。 （二）进行新课 一、基础知识 1、培养基（阅读教材） 1.1概念（略） 1.2培养基的种类 (1)形态——固体和液体培养基（琼脂） (2)成分——天然和合成培养基 (3)作用——选择和鉴别培养基 思考：1、固体培养基和液体培养基你认为哪个更适合工业生产？为什么？ 2、如何区分S型细菌和R型细菌？ 3、什么是菌落？ 【补充】培养基的类型及其应用：（创新设计） 思考：1、硝化细菌、蓝藻与酵母菌的C源和N源有不同吗？能源呢？ 2、结合细胞元素组成说明大多数培养基的组成为何有4类？一定都需要吗？ 1.4培养条件——营养物质（特殊营养物质—生长因子）、PH、氧气

思考：1、微生物的营养物质就是4类吗? 牛肉膏和蛋白胨能为微生物提供哪些营养？ 2、特殊营养物质是什么？试举一例。(介绍生长因子) 3、你能将土壤中酵母菌、硝化细菌、乳酸菌、固氮菌分离出来吗？说一说最佳方案。 4、分离菌种是否一定要选择培养基？ 培养乳酸杆菌时需要添加维生素，培养霉菌时需要将培养基pH调节为酸性，培养细菌时需要将pH调节为中性或微碱性。 2、无菌技术（阅读并思考回答下列问题） 2.1意义、对象 2.2消毒与灭菌的区别 2.3消毒与灭菌的方法、适用对象 思考：1、什么是巴氏消毒法？灼烧灭菌和高压蒸汽灭菌特别注意什么？ 2、以下各项分别适用哪项无菌技术？简单说明理由 试管口；培养基；接种操作间；葡萄酒；培养皿；接种针（环）；口罩； 手；空气；饮用水 3、无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有什么目的？ 二．实验操作（录像） 1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 程序： 计算—称量—溶化—调pH—灭菌—倒平板 思考：1、为何将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯溶化？ 2、制备过程中要调节适宜的PH值，要在哪一个环节操作？为什么？ 3、请阅读倒平板操作（P17）并回答讨论1—4 4、试管培养基常制成斜面的作用是什么？ 2、接种（4种方法） 2．1平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。其操作步骤是： 2.1.1目的 2.1.2平板划线操作（略） 思考：请回答P18讨论1—3 2．2稀释涂布平板法：将菌液进行一系列梯度稀释，并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。 2.2.1目的 2.2.2系列稀释操作： ①取盛有9mL水的无菌试管6支，编号101、102、103、104、105、106。

人教生物选修一专题2 课题1

专题二课题1 一、选择题 1．菌种鉴定的重要依据是(B) A．细菌的大小、形状和颜色B．菌落的大小、形状、颜色 C．有无鞭毛D．培养基的不同 [解析]不同种类的细菌所形成的菌落在大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面具有一定特征，所以，每种细菌在一定条件下所形成的菌落，可以作为菌种鉴定的重要依据。单个的细菌用肉眼是看不见的，故细菌的个体特征不能作菌种鉴定的依据。 2．下列生物与灭菌无关的是(C) A．接种前用火焰灼烧接种环B．接种前用酒精擦拭双手 C．将平板倒置，放入培养箱中培养D．接种在酒精灯的火焰旁完成 [解析]接种用具、器皿、空气中都充满了微生物，都有污染的可能，必须严格地消毒灭菌。A、B、D都是实验操作过程中灭菌或防止杂菌污染的措施。将平板倒置，放入培养箱中培养与灭菌无关。 3．下列关于平菇培养的操作程序，正确的是(D) A．配制牛肉膏蛋白胨培养基，接种，高压蒸汽灭菌，培养 B．配制牛肉膏蛋白胨培养基，高压蒸汽灭菌，接种，培养 C．配制棉子壳培养基，接种，高压蒸汽灭菌，培养 D．配制棉子壳培养基，高压蒸汽灭菌，接种，培养 [解析]平菇的代谢类型属于异养型，需要提供现成的有机物才能成长。在题目给出的选项中，B选项是实验中培养细菌等的方法，D选项则是人们常用的培养平菇的方法，为了避免杂菌污染，应在接种前先进行灭菌处理。 4．下图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为1,2,3,4,5。下列操作方法正确的是(D) A．操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌 B．划线操作必须在火焰上进行

C．最可能得到所需菌落的区域是1 D．在1,2,3,4,5区域中划线前后都要对接种环灭菌 [解析]操作前要将接种环放在火焰上灼烧灭菌；划线操作必须在火焰旁进行，而不是火焰上；最可能得到所需菌落的区域是5。 5．制备各种牛肉膏蛋白胨固体培养基，关于倒平板的具体描述正确的是(C) ①待培养基冷却至40℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板 ②将灭过菌的培养皿放在桌面上，左手拔出棉塞 ③右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰 ④用左手的拇指和食指完全打开皿盖 ⑤右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖 ⑥等待平板冷却5～10s，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上 A．①③④⑤B．④⑤⑥ C．③⑤D．①②④⑥ [解析]琼脂是一种多糖，在98℃以上可溶解于水，在45℃以下凝固，倒平板时高于50℃则会烫手，低于50℃时若不能及时操作，琼脂会凝固。无菌操作应贯穿于操作的全过程，皿盖全打开则空气中的微生物会进入培养基。 6．(2017·西宁四中高二月考)下列有关细菌培养的叙述，正确的是(D) A．在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种细菌 B．在培养基中加入青霉素可抑制真菌而促进细菌生长 C．向液体培养基中通入氧气能促进破伤风杆菌的生长 D．在半固体培养基中接种细菌培养后可以观察其运动 [解析]菌落是指单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，形成的一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，所以单个菌落中通常只有一种细菌，A错误；青霉素能够干扰细菌细胞壁的合成，所以青霉素培养基抑制细菌生长而促进真菌生长，B错误；破伤风杆菌的代谢类型属于异养厌氧型，向其培养基中通入氧气会抑制其生长，C错误；在半固体培养基中接种细菌培养后可以观察其运动，D正确。 7．平板冷凝后要将平板倒置，其意义是(D) A．利于大肠杆菌的接种B．防止杂菌污染 C．利于培养基的冷却D．防止皿盖冷却水倒流入培养基 [解析]平板倒置可避免凝集在皿盖上的水流入培养基。

生物选修一专题二练习教材

专题二练习 一、选择题 1．微生物培养过程中，肉眼鉴别金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的重要依据是（）A．细菌的大小、形状、颜色 B．菌落的大小、形状、颜色 C．有无鞭毛 D．培养基的不同 2．下列4种生物中，哪一种生物的细胞结构与其他3种生物的细胞有明显的区别（）A．酵母菌B．乳酸菌C．青霉菌D．蘑菇 3．下列有关平板划线接种法的操作错误的是（） A．将接种环放在火焰上灼烧 B．将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环液 C．蘸取菌液和划线要在火焰旁进行 D．划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连 4．细菌培养基通常在121℃压力锅中灭菌。如果只有在100℃的温度下将细菌培养基灭菌，以下哪一种生物仍会存活（） A．大肠杆菌B．一种青霉菌 C．枯草芽孢杆菌D．鼠伤寒沙门氏菌 5．细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌（） A.接种针、手、培养基 B.高压锅、手、接种针 C.培养基、手、接种针 D.接种针、手、高压锅 6．关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，叙述错误的是（） Ａ．操作顺序为计算、称量、熔化、倒平板、灭菌 Ｂ．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯 Ｃ．待培养基冷却至50℃左右时进行倒平板 Ｄ．待平板冷却凝固约5~10min后将平板倒过来放置 7.某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是（） A.培养基分装到培养皿后进行灭菌 B.转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线 C.接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养 D.培养过程中每隔一周观察一次 8．获得纯净培养物的关键是（） A.将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌 B.接种纯种细菌 C.适宜环境条件下培养 D.防止外来杂菌的入侵

培养基的几大分类

按照培养基的成分来分 培养基按其所含成分，可分为合成培养基、天然培养基和半合成培养基三类。 (1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，但价格较贵，而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。 (2)天然培养基。由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，所以常被采用。 (3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。 养基三类。 (1)固体培养基。是在培养基中加入凝固剂，有琼脂、明胶、硅胶等。固体培养基常用于微生物分离、鉴定、计数和菌种保存等方面。 (2)液体培养基。液体培养基中不加任何凝固剂。这种培养基的成分均匀，微生物能充分接触和利用培养基中的养料，适于作生理等研究，由于发酵率高，操作方便，也常用于发酵工业。 (3)半固体培养基。是在液体培养基中加入少量凝固剂而呈半固体状态。可用于观察细菌的运动、鉴定菌种和测定噬菌体的效价等方面。

培养基和霉菌培养基等四类。 常用的细菌培养基有营养肉汤和营养琼脂培养基；常用的放线菌培养基为高氏1号培养基；常用的酵母菌培养基有马铃薯蔗糖培养基和麦芽汁培养基；常用的霉菌培养基有马铃薯蔗糖培养基、豆芽汁葡萄糖(或蔗糖)琼脂培养基和察氏培养基等。 养基。 (1)加富培养基。是在培养基中加入血、血清、动植物组织提取液，用以培养要求比较苛刻的某些微生物。 (2)选择性培养基。是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基。利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。 (3)鉴别培养基。是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使培养后会发生某种变化，从而区别不同类型的微生物。

高中生物选修一专题二：课题微生物的实验室培养学案

选修一：专题二：课题1微生物的实验室培养学案 【课程目标】:了解培养基的基础知识，进行微生物培养和无菌技术的操作。 【课题重点】:无菌技术的操作 【课题难点】：无菌技术的操作 基础知识 一、培养基 1．概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出供其的营养基质叫培养基。可分为培养基和培养基。 2．营养构成：各种培养基一般都含有、、和，此外还要满足微生物生长对、以及的要求。 3．培养乳酸杆菌时需在培养基中添加、培养霉菌时需将培养基PH调 至、培养细菌时需将PH调至、培养厌氧微生物则需提供条件。 〖思考1〗从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？ 【补充1】碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。 氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、O、N的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。 二、无菌技术：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题： (一)获得纯净培养物的关键是，具体操作如下： 1．对实验操作的、操作者的和进行。 2．将用于微生物培养的、和等器具进行。 3．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在附近进行。 4．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与相接触。 (二)消毒和灭菌 1．消毒是指。常用的方法有、、消毒法。 2．灭菌是指。常用的方法有：、、灭菌。分别适用于那些用具？ 〖思考2〗无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是什么？ 〖思考3〗利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？

〖思考4〗物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并排除锅内冷空气，其目的是；随后关闭排气阀继续加热，气压升至，温度为，并维持 min；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至时打开锅盖，其目的是防止。 实验操作----大肠杆菌的纯化培养： 本实验所用的培养基是，本实验可分成和两个阶段进行。 一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是、、、、。 〖思考5〗在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中，动作要迅速，原因是什么？ 溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么？ 〖思考6〗牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供什么等营养物质？ 2．倒平板：待培养基冷却至℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。 其过程是： ①在火焰旁右手拿，左手； ②使锥形瓶的瓶口； ③左手将培养皿，右手，立刻盖上皿盖。 ④待平板冷却凝固后，将平板。 〖思考7〗锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？ 〖思考8〗倒平板的目的是什么？ 〖思考9〗若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？ 〖思考10〗配制斜面培养基作用是什么？，试管为什么要加塞棉塞？ 二、纯化大肠杆菌 微生物接种：最常用的是法和法。另外还有穿刺接种和斜面接种等。 1．平板划线法是的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 其操作步骤是：①将在酒精灯火焰上灼烧直至。②在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。③将菌种试管口通过火焰达到 的目的。④将冷却的接种环伸入到。⑤将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。⑥将皿盖打开一条缝隙，把接种环，盖上皿盖，不要划破培养基。⑦灼烧接种环，冷却后从划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将相连。

高中生物选修一微生物的实验室培养教案(2)

普通高中课程标准实验教科书——生物选修1[ 人教版] 课题 1 微生物的实验室培养 ★课题目标 （一）知识与技能 了解有关培养基的基础知识；掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术 （二）过程与方法 分析实验思路的确定和形成的原因，分析实验流程，对比前面的实验设计，归纳共性，分析差异，增加印象 （三）情感、态度与价值观 形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神 ★课题重点 无菌技术的操作 ★课题难点 无菌技术的操作 ★教学方法 启发式教学 ★教学工具 多媒体课件 ★教学过程 （一）引入新课 在传统发酵技术的应用中，都利用了微生物的发酵作用，其中的微生物来自于制作过程中的自然感染。而在工业化生产中，为了提高发酵的质量，需要获得优良菌种，并保持发酵菌种的纯度。这就要涉及到微生物的培养、分离、鉴别等基本技术。现在我们开始学习微生物的培养和应用专题。 （二）进行新课 1.基础知识 1.1培养基的种类包括固体培养基和液体培养基等。 〖思考1〗琼脂是从红藻中提取的多糖，在配制培养基中用作为凝固剂

【补充】培养基的类型及其应用： 1.2培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源四类营养成分。 〖思考2〗从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？ C、H、0、N、P、S是构成细胞原生质的基本元素，约占原生质总量的97%以上。 【补充】碳源：如C02、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。 氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、0、N 的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。 1.3培养基除满足微生物生长的_p^、特殊营养物质和氧气等要求。 【补充】生长因子：某些微生物正常生长代谢过程中必须从培养基中吸收的微量有机小分子，如某些氨基酸、碱基、维生素等。 〖思考3〗牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供糖、维生素和有机氮等营养物质。 〖思考4〗培养乳酸杆菌时需要添加维生素,培养霉菌时需要将培养基pH调节为酸 性，培养细菌时需要将pH调节为中性或微碱性。 活动2:阅读"无菌技术”，讨论回答下列问题： 1.4获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵—。 1.5无菌技术包括： (1)对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒;

高中生物选修一专题1、2重点知识点总结

专题一课题1果酒和果醋的制作 (二）果醋制作的原理 ⑴当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成。 ⑵当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为，再变为。 反应式为：。 （三）、果酒和果醋的制作过程 挑选葡萄冲洗 果酒果醋 （二）、果酒和果醋的发酵装置 1、装置中的充气口、排气口和出料口分别有哪些作用？ 2、为什么排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身连接？ 3、发酵瓶为什么要留有1/3的空间？ 4、装置的使用：在进行酒精发酵时应关闭口，在进行果醋发酵时，充气口应连续充气，输入 专题一课题 2 腐乳的制作 (一)制作腐乳的实验流程: (二)毛霉的生长: 1.腐乳制作时,温度应控制在 ,并保持一定的湿度。自然条件下毛霉的菌种来自 中的。

一、腐乳的制作过程 1、前期发酵——让豆腐上长出毛霉 （1）前期发酵的作用是什么？ （2）前期发酵的温度为什么为15～18 ℃？ 2、后期发酵——加盐腌制、加卤汤装瓶、密封腌制 专题一课题3 制作泡菜并检测亚硝酸盐含量 （二）亚硝酸盐含量的测定 1.原理（1）在条件下，亚硝酸盐与 发生反应后，与结 合形成 色染料。 （2）将显色反应后的样品与已知浓度的进行目测比较，可以大致估算出泡菜中亚硝 酸盐的含量2.测定方法：比色法3.测定步骤配制溶液→ →制备样品处理液→ 3、制备样品处理液 称取泡菜榨汁 →加入蒸馏水、提取液、氢氧化钠过滤→加入氢氧化铝乳液 问题2：提取剂、氢氧化钠、氢氧化铝乳液的作用？ 5、测定结果：泡菜腌制过程中亚硝酸盐含量的变化 、 发酵时间 亚硝酸盐含量 10d

专题2课题1微生物的实验室培养 （2）消毒：是指使用的物理或化学方法杀死物体表面或内部的微生物，（不包括和）常用的方法有：、、 灭菌：是指使用的理化因素杀死物体内外的微生物。包括芽孢和孢子 常用的方法有、、， 此外，实验室里还用或进行消毒。 三、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 （1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤： →→→→倒平板 四、纯化大肠杆菌 （1）微生物接种的方法中最常用的是和。 五、菌种的保存 为了保持菌种的纯净，需对菌种进行保藏。对于频繁使用的菌种，我们可以采用法；对于需要长期保存的菌种，可以采用法。 课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1．尿素只有被分解成之后，才能被植物吸收利用。土壤中的微生物之所以能分解尿素，是因为它们体内能合成。 2．设置对照：主要目的是排除实验组中因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 如：空白对照组可用来观察是否有杂菌污染。设置完全培养基，用来观察选择 培养基是否具有作用。 1．常用来统计样品中活菌数目的方法是。 土壤中分解尿素的细菌合成的将尿素分解成，使培养基的增强，PH ,在以尿素为唯一氮源的培养基中加入指示剂，培养细菌后，若PH升高，指示剂将，这样就可以初步鉴定该细菌能够分解尿素。

培养基的类型及应用

培养基的类型及应用 培养基种类繁多,根据其成份、物理状态和用途可将培养基分成多种类型。 1．按成份不同划分 (1)天然培养基(complexmedium) 这类培养基主要以化学成分还不清楚或化学成分不恒定的天然有机物组成,牛肉膏蛋白胨培养基和麦芽汁培养基就属于此类。基因克隆技术中常用的LB(Luria-Bertani)培养基也是一种复合培养基,其组成见表4-10。 常用的天然有机营养物质包括牛肉浸膏、蛋白胨、酵母浸膏(表4-11)、豆芽汁、玉米粉、土壤浸液、麸皮、牛奶、血清、稻草浸汁、羽毛浸汁、胡罗卜汁、椰子汁等,嗜粪微生物(coprophilousmicroorganisms)可以利用粪水作为营养物质。复合培养基成本较低,除在实验室经常使用外,也适于用来进行工业上大规模的微生物发酵生产。 (2)合成培养基(syntheticmedium) 合成培养基是由化学成份完全了解的物质配制而成的培养基，也称化学限定培养基(chemicallydefinedmedium),高氏1号培养基和查氏培养基就属于此种类型。配制合成培养基时重复性强,但与天然培养基相比其成本较高,微生物在其中生长速度较慢,一般适于在实验室用来进行有关微生物营养需求、代谢、分类鉴定、生物量测定、菌种选育及遗传分析等方面的研究工作。 2．根据物理状态划分 根据培养基中凝固剂的有无及含量的多少,可将培养基划分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基三种类型。 (1)固体培养基(solidmedium) 在液体培养基中加入一定量凝固剂即为固体培养基。理想的凝固剂应具备以下条件:1.不被所培养的微生物分解利用;2.在微生物生长的温度范围内保持固体状态。在培养嗜热细菌时,由于高温容易引起培养基液化,通常在培养基中适当增加凝固剂来解决这一问题;3.凝固剂凝固点温度不能太低,否则将不利于微生物的生长;4.凝固剂对所培养的微生物无毒害作用;5.凝固剂在灭菌过程中不会被破坏;6.透明度好,粘着力强;7.配制方便且价格低廉。常用的凝固剂有琼脂(agar)、明胶(gelatin)和硅胶(silicagel)。表4-12列出琼脂和明胶的一些主要特征。 对绝大多数微生物而言,琼脂是最理想的凝固剂,琼脂是由藻类(海产石花菜)中提取的一种高度分支的复杂多糖；明胶是由胶原蛋白制备得到的产物,是最早用来作为凝固剂的物质,但由于其凝固点太低,而且某些细菌和许多真菌产生的非特异性胞外蛋白酶以及梭菌产生的特异性胶原酶都能液化明胶,目前已较少作为凝固剂；硅胶是由无机的硅酸钠(Na2SiO3)及硅酸钾(K2SiO3)被盐酸及硫酸中和时凝聚而成的胶体,它不含有机物,适合配制分离与培养自养型微生物的培养基。 除在液体培养基中加入凝固剂制备的固体培养基外,一些由天然固体基质制成的培养基也属于固体培养基。例如,由马铃薯块、胡罗卜条、小米、麸皮及米糠等制成固体状态的培养基就属于此类。如生产酒的酒曲，生产食用菌的棉子壳培养基。 在实验室中,固体培养基一般是加入平皿或试管中，制成培养微生物的平板或斜面。固体培养基为微生物提供一个营养表面,单个微生物细胞在这个营养表面进行生长繁殖,可以形成单个菌落。固体培养基常用来进行微生物的分离、鉴定、活菌计数及菌种保藏等。

高中生物 微生物的培养与应用 课题1 微生物的实验室培养练习

课题1 微生物的实验室培养 1．培养基 物质。 的营养生长繁殖的不同需求，配制出的供其营养物质概念：人们按照微生物对(1) 1.培养基中含有水、无机盐、碳源、氮源和生长因子等 营养物质。 2．实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高 压蒸汽灭菌等。 3．固体培养基的配制过程为：计算―→称量―→溶 化―→灭菌―→倒平板。 4．平板划线法和稀释涂布平板法是微生物接种的常用 方法。 5．消毒的目的是杀死物体表面或内部一部分对人体有 害的微生物；灭菌则是杀死物体内外所有的微生物，包括孢 子和芽孢。

碳源 营养成分：水、无机盐、 (3) 、 氮源 、特殊营养物质 pH ，此外还要满足微生物生长对 氧气 及 的要求。 2．无菌技术 (1) 目的：获得 纯净培养物 。 (2) 关键：防止 的入侵。 外来杂菌 (3)不同对象的无菌操作方法[连线]： 1．下面是查氏培养基(培养霉菌所用)的主要成分，请根据下述培养基，回答下列问题： 蔗糖15 g

(1) 提示：固体培养基。因为该培养基加入了凝固剂琼脂。 (2)该培养基包含微生物生长和繁殖所需要的几类营养物质？分别是什么？ 提示：4类物质。分别是碳源、氮源、无机盐和水。 (3)蔗糖提供的是哪类营养物质？NaNO3提供的是哪类营养物质？ 提示：蔗糖提供的是碳源。NaNO3提供的是氮源和无机盐。 (4)在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物所需要的哪些条件？ 提示：满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的需要。 2．探讨培养基、培养皿、接种环、实验者的双手、空气和牛奶所采用的灭菌或消毒方法。 提示：分别为高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌、化学消毒、紫外线灭菌、巴氏消毒法。 3．消毒与灭菌的相同点与区别分别是什么？ 提示：消毒是杀灭病原微生物和有害微生物，并不要求杀灭一切活的微生物；而灭菌则是杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。 [跟随名师·解疑难] 1．培养基的成分

常用微生物培养基手册大全

1、营养琼脂（普通琼脂） 成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤） 100毫升 琼脂（视天气，琼脂质量而定） 制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。 用途：作普通琼脂平皿。 2、血琼脂平板（BA） 制法：取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。 用途：1． 一般棉拭子均接种此培养基。 2．尿液，脓液 3．分离细菌标本用。 3、基础培养基 （肉膏汤BB） 成份：蛋白胨 10克 牛肉膏 5克 氯化钠 5克 水 1000毫升 制法：将以上各物称好，加水煮沸溶解，用1NNOH校正PH至7．6，过滤分瓶， 1

121℃高压灭菌，20分钟备用。 用途：1 作耐药试验，增菌用分装小管。 2 作普通琼脂斜面。 4、血液培养基（大管肉汤培养基） 成份：1 新鲜牛肉浸液 1000毫升 2 PABA（对氨基苯甲酸〔相当于10mg/毫升〕） 1g% 1毫升 3 MgSO 4 [相当于0．493/100毫升] 49．3% 1毫升 4 枸椽酸钠 0．3g 制法：1 将1号，4号混合液，2号，3号液分装高压灭菌。 2 取灭菌1，4号混合液用无菌法加入PABA，MgSO4，再分管，行无菌试验三天方可使用。 用途：作血，骨髓培养用。 5、肠道杆菌培养基（伊红美兰琼脂） 成份： 蛋白胨 10克 乳糖 10克 氯化钠 5克 琼脂 25（22）克 水 1000毫升 2%伊红溶液20毫升 0．5%美兰溶液 20毫升 2

高中生物选修一教案：课题1 微生物的实验室培养

课题1 微生物的实验室培养 ★课题目标 （一）知识与技能 了解有关培养基的基础知识；掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术 （二）过程与方法 分析实验思路的确定和形成的原因，分析实验流程，对比前面的实验设计，归纳共性，分析差异，增加印象 （三）情感、态度与价值观 形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神 ★课题重点 无菌技术的操作 ★课题难点 无菌技术的操作 ★教学方法 启发式教学 ★教学工具 多媒体课件 ★教学过程 （一）引入新课 在传统发酵技术的应用中，都利用了微生物的发酵作用，其中的微生物来自于制作过程中的自然感染。而在工业化生产中，为了提高发酵的质量，需要获得优良菌种，并保持发酵菌种的纯度。这就要涉及到微生物的培养、分离、鉴别等基本技术。现在我们开始学习微生物的培养和应用专题。 （二）进行新课 1．基础知识 1．1 培养基的种类包括固体培养基和液体培养基等。 〖思考1〗琼脂是从红藻中提取的多糖，在配制培养基中用作为凝固剂。 【补充】培养基的类型及其应用：

1．2 培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源四类营养成分。 〖思考2〗从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？ C、H、O、N、P、S是构成细胞原生质的基本元素，约占原生质总量的97％以上。 【补充】碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。 氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、O、N的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。 1．3 培养基除满足微生物生长的pH 、特殊营养物质和氧气等要求。 【补充】生长因子：某些微生物正常生长代谢过程中必须从培养基中吸收的微量有机小分子，如某些氨基酸、碱基、维生素等。 〖思考3〗牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供糖、维生素和有机氮等营养物质。 〖思考4〗培养乳酸杆菌时需要添加维生素，培养霉菌时需要将培养基pH调节为酸性，培养细菌时需要将pH调节为中性或微碱性。 活动2：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题： 1．4 获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。 1．5 无菌技术包括： （1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒； （2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌； （3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行；

种常用微生物培养基配制汇总

36种微生物常用培养基配制 1.牛肉膏蛋白胨培养基（用于细菌培养） 牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，水1000mL，～。 2.高氏1号培养基(用于放线菌培养) 可溶性淀粉20g，KNO3 1g，NaCl ，K2HPO4?3H2O ，MgSO4?，FeSO4?，水1000mL，～。配制时注意：可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。 3.马丁氏（Martin）培养基（用于从土壤中分离真菌） K2HPO41g，MgSO4?，蛋白胨5g，葡萄糖10g，1/3000孟加拉红水溶液100mL，水900mL，自然pH，121℃湿热灭菌30min。待培养基融化后冷却55～60℃时加入链霉素(链霉素含量为30μg/mL)。 4.马铃薯培养基(PDA)(用于霉菌或酵母菌培养) 马铃薯(去皮)200g，蔗糖(或葡萄糖)20g，水1000mL，配制方法如下： 将马铃署去皮，切成约2cm2的小块，放入1500mL的烧杯中煮沸30min，注意用玻棒搅拌以防糊底，然后用双层纱布过滤，取其滤液加糖，再补足至1000mL，自然pH，霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。 5.察氏培养基(蔗糖硝酸钠培养基)(用于霉菌培养) 蔗糖30g，NaNO3 2g，K2HPO4 1g，MgSO4?，KCl ，FeSO4?，水1000mL，～。 培养基(用于支原体培养) 牛心消化液(或浸出液)1000mL，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂15g，～，分装每瓶70mL，121℃湿热灭菌15min，待冷却至80℃左右，每70mL中加入马血清20mL，25%鲜酵母浸出液10mL，15醋酸铊水溶液，青霉素G钾盐水溶液(20万单位以上)，以上混合后倾注平板。 *注意：醋酸铊是极毒的药品，需特别注意安全操作。 7.麦氏(McCLary)培养基(醋酸钠培养基) 葡萄糖, KCl ，酵母膏，醋酸钠，琼脂，蒸馏水l00mL。溶解后分装试管，1l5℃湿热灭菌15min。 8.葡萄糖蛋白胨水培养基(用于.反应和甲基红试验) 蛋白胨，葡萄糖，K2HPO4 ，水100mL，，1l5℃湿热灭菌20min。 9.蛋白胨水培养基(用于吲哚试验) 蛋白胨10g，NaCl 5g，水1000mL，～，121℃湿热灭菌20min。 10.糖发酵培养基(用于细菌糖发酵试验) 蛋白胨，NaCl ，K2HPO4 ，水100mL，溴麝香草酚蓝(1%水溶液)，糖类lg。分别称取蛋白胨和NaCl溶于热水中，调pH至，再加入溴麝香草酚蓝(先用少量95%乙醇溶解后，再加水配成1%水溶液)，加入糖类，分装试管，装量4～5cm高，并倒放入一杜氏小管(管口向下，管内充满培养液)。115℃湿热灭菌20min。灭菌时注意适当延长煮沸时间，尽量把冷空气排尽以使杜氏小管内不残存气泡。常用的糖类，如葡萄糖、蔗糖、甘露糖、麦芽糖、乳糖、半乳糖等(后两种糖的用量常加大为%)。

常见微生物培养基

常见微生物培养基 培养基 Medium 是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料 一般都含有碳水化合物、含氮 物质、无机盐 包括微量元素 以及维生素和水等。有的培养基还含有抗菌素和色素。 按所用原料不同 可分为两类 应用肉汤、马铃薯汁等天然成分配制的 称为天然培养基 应用化学药品配成并标 明成分的 称为合成培养基或综合培养基。化学试剂中的培养基 大多为合成培养基。由于液体培养基不易长期保 管 现在均改制成粉末。培养基由于配制的原料不同 使用要求不同 而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在 受热、吸潮后 易被细菌污染或分解变质 因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培 养基 如组织培养基 较长时间的贮存 必须放在2~6。C的冰箱内。 常见培养基有 1、细菌培养基 配方一牛肉膏琼脂培养基 牛肉膏0.3克 蛋白胨1.0克 氯化钠0.5克 琼脂 1.5克 水100毫升 在烧杯内加水100毫升 放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠 用蜡笔在烧杯外作上记号后 放在火上加热。待烧杯内各 组分溶解后 加入琼脂 不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水 用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH 值到7.2 7.6,分装在各个试管里 加棉花塞 用高压蒸汽灭菌30分钟。 配方二马铃薯培养基 取新鲜牛心 除去脂肪和血管 250克 用刀细细剁成肉末后 加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。在烧杯上做好 记号 煮沸 转用文火炖2小时。过滤 滤出的肉末干燥处理 滤液pH值调到7.5左右。每支试管内加入10毫升 肉汤和少量碎末状的干牛心 灭菌 备用。 配方三根瘤菌培养基 葡萄糖10克磷酸氢二钾0.5克 碳酸钙3克硫酸镁0.2克 酵母粉0.4克琼脂20克 水1000毫升1%结晶紫溶液1毫升 先把琼脂加水煮沸溶解 然后分别加入其他组分 搅拌使溶解后 分装 灭菌 备用。