标准曲线法与标准加入法的区别

1 标准曲线法

1.1标准曲线法的计算公式

在一定条件下，标准曲线是一条直线，直线的斜率和截距可以用最小二乘法求得。现在好多仪器软件都能自动生成标准曲线，所以一小部分版友不清楚标准曲线的具体计算方法。本人查找了一些资料，找到标准曲线的斜率和截距的计算方法，和大家分享。

工作曲线可以用一元线性方程表示：

y=a+bx （1）

式中，x为标准溶液的浓度，y为相应的吸光度。

使用最小二乘法确定的直线称为回归线，a,b称为回归系数。

b 为直线的斜率，可由下式求得：

1.2 灵敏度

灵敏度是指该方法对单位浓度或单位量的待测物质的变化所引起的响应量变化的过程。一般用标准曲线的斜率b为方法的灵敏度，b越大，灵敏度越高。

不要小看灵敏度，用处可大了。灵敏度由于仪器的不同，实验条件等的不同，在不断的变化。但在一定的实验条件下，灵敏度相对还是比较稳定的。所以，建议对灵敏度也做个质量控制图，具体做法见我另一个帖子。

每次标准曲线做好以后，观察灵敏度是否在一定的范围内维持稳定。如果发现灵敏度突然降低，就需要考虑，是否是仪器出问题了。火焰首先考虑雾化器是否堵塞，石墨炉首先考虑石墨管是否是烧坏。解决方法是用通丝清理雾化器，更换石墨管后继续测定标准曲线，带灵敏度稳定后进行样品测定。还有，在打开一瓶新的标准溶液的时候，在仪器进行维修以后，一定要注意灵敏度的变化。

1.3线性范围

线性范围这个大家都比较清楚，主要从相关系数r看，一般要求r大于等于三个九。我在这里和大家分享的是，我想了好久才想开的一个问题。之前看好多书上

后来专门做了好多次实验，还是一直是直线在，只是有时候浓度高时，线性不好，高浓度点不在标准曲线上，而是在标准曲线的下面，而且离拟合的标准曲线比较远。遇到这种情况，标准曲线的线性相关系数就很差，有时候才一个九，如图2所示。最后我终于想明白了，如果自己用手动拟合的话，用平滑的曲线去连接所有点的话，你就会发现，如果在线性范围内，连接起来就是直线，如果超出了线性范围，连接起来就是一条弯曲的曲线。从弯曲的拐点开始，就已经超出了线性范围，如图3所示。

所以，判断是否超出线性范围，个人觉得不是看是否弯曲，软件用最小二乘法拟合的一次曲线，永远是直线。要看你的高浓度点是否在拟合的标准曲线上或离得比较近，相关系数是否在三个九以内。如果不在，从拐点开始的那个点，就超出了线性范围，应该删除，从新拟合。

1.4检出限

检出限是指对某一特定的分析方法在给定的置信水平内可以从样品中检测待测物质的最小浓度或最小量。

1975年IUPAC，好像叫啥国际化学联合会（不知道有没有记错），建议光谱分析的检出限取K=3，即检出限L

1.5检测上限

检测上限是指与校准曲线直线部分的最高界限点相应的浓度值。当样品中待测物质的浓度值超过检测上限时，相应的响应值将不在校准曲线直线部分的延长线上。校准曲线直线部分的最高界限点成为弯曲点。图4中所指即为界限点。

1.6测定限

测定限可分为测定上限和测定下限

1.6.1测定下限

定义：在限定误差能满足预定要求的前提下，用指定方法能够准确的定量测定待测物质的最小浓度或最小量，成为该方法的测定下限。

测定下限反映出定量分析方法能够准确测定低浓度水平待测物质的极限可能性。在消除了系统误差的前提下，它受精密度的限制，精密度越高，测定下限高于检出限越多。

这里要强调的是，测定下限和检出限的区别，之前和一些版友交流这个问题，有一小部分人存在混淆这两个概念的情况。检出限只需检出该待测物质就行，而检测下限则需要的是准确的定量。俺经常说的一句话，在测定下限以下讨论相对标准偏差没有意义，在检出限一下讨论更没有意义。因为之前就遇到这样的事情，有一个样品，含量特别地，平行测定两个，一个测定值0.005，一个测定值0.003，平均值为0.004，相对标准偏差高达50%，而国家标准规定相对标准偏差为10%，所以就觉得测定有问题，而此方法的检出限为0.008，所以两个测定结果都在检出限一下，就没有必要讨论其相对标准偏差了。

1.6.2测定上限

定义：在限定误差能满足预定要求的前提下，用特定方法能够准确的定量测定待测物质的最大浓度或最大量，成为该方法的测定上限。

在消除了系统误差的前提下，精密度要求不同，测定上限有可能不同，要求越高，则测定上限低于检出上限越多。

1.7最佳测定范围

最佳测定范围是指在限定误差能满足预定要求的前提下，特定方法的测定下限至测定上限之间的浓度范围。在此测定范围内能够准确的定量测定待测物质的浓度或量。

书上经常会说，要求样品的测定值在标准曲线的中间，这样测定结果最准确。以我个人的经验，只要在最佳测定范围之内均可以。俺做过类似的实验，一个样品的测定值在标准曲线的上端，就需要稀释才能保证在标准曲线的中间。这个稀释过程就可能由于移液管，容量瓶的问题啊，以及个人操作等问题带来新的不确定因素，带来新的误差；反之，如果在标准曲线的下端，那就要增加称样量或减少定容体积，那你之前的样品前处理就全费了，好几天时间白做了，重新称量，重新前处理，更麻烦了。要不你就去浓缩，你试过没有，误差可能更大，还会带来污染和目标化合物的损失。

综上所述，之间的关系可用图5表示：

图画的比较难看，大家见谅，不过也有好处，很难被抄袭，如果下次大家看见有这么难看的图，没有署我的名，没准就是抄我的，嘿嘿嘿！

1.8标准曲线的优缺点

和其他仪器分析方法一样，标准工作曲线法是一种最常用的分析方法，它要求标准溶液和样品溶液有相同的基体。但这一点往往是很难做到的。理想的标准工作曲线应是一条过原点的直线，但实际上，常会出现在不同情况下不同的弯曲，一般俺的经验是低浓度点由于噪声等的影响向上弯曲，高浓度点会向下弯曲。下面就具体分析一下影响工作曲线的因素。

1.8.1 影响工作曲线的因素

1.8.1.1干扰谱线的影响

由于分析线周围的干扰线也进入了检测器，结果使测得的吸光度降低，且浓度越大，干扰谱线的影响越严重，曲线向浓度轴弯曲。

近谱线干扰的时候，选择小的光谱带宽。还有就是选择次灵敏线，避开容易干扰的谱线，但这样会经常以牺牲灵敏度为代价。

1.8.1.2电离效应

某些电离电位较低的元素，如：Li、K、Na、Cs等在火焰中易电离，且低浓度时的电离度比高浓度时大，故出现校正曲线向上弯曲。

俺做的乳品中的K、Na，一般俺的做法是在做Na的时候加入K盐作为消电离剂，在做K的适合加入CS 做为消电离剂，不过想请教大家的是，做CS的时候加什么做消电离剂呢？

为这么这么选择呢，因为CS盐相对价格偏高，在做Na的时候选择钾盐也是可以胜任的，从成本低角度来讲这么设计实验。

1.8.1.3碰撞变宽的影响

当被测元素的浓度较大时，基态原子数目增大，相互间碰撞加剧，因碰撞变宽引起吸线中心频率的位移，使曲线向浓度轴弯曲。

这个是从书上看的，实话实说啊，不过可以添加一点自己的理解啊。当浓度大时，离子数目增加，可能导致原子化效率偏低，好不容易原子化的原子又互相碰撞结合成分子，导致原子话效率偏低，测定结果偏低，标准曲线往下偏，这也是高浓度点超过线性范围测定不准确的原因。

1.8.2 提高标准曲线法准确度的途径

1.8.

2.1标准液浓度应在线性范围内，A = 0.10—0.50为宜。

一般认为低于0.10吸光度时，由于仪器的噪声造成的干扰，导致测定结果不稳定，误差很大。（顺便提一下，在用空白校正零点的时候也存在这个问题，所以建议空白溶液应该多次测定取平均值。）当吸光度超过0.50的时候，就会出现1.8.1.3碰撞变宽的影响，导致结果偏低。

1.8.

2.2标样、样品的测定条件如：灯电流，喷雾效率，助燃比应严格一致。

对于灯电流等参数，俺也做过相应的优化，改天专门写个帖子介绍，这里就不赘述了。优化了半天，和仪器给出的参考条件差不多，哎，毕竟人家仪器公司的专家们经过了长时间的摸索了，比我这只小菜鸟强多了。所以，一般火焰采用默认的仪器公司提供的条件，就挺好。至于石墨炉，还针要优化灰化曲线和原子化曲线，这个可不是闹着玩的，开玩笑的。至于怎么优化，下回分解。

1.8.

2.3所采用的标准溶液与被测液的组成应尽量一致，以消除基体效因的影响。

有时有些样品的标准试样是很难配制的，用标准工作曲线法会引入基体误差，故用标准加入法。这也是我之前一直认为标准加入法优于标准曲线法的原因。但看完那位版友提供的帖子后，我真的重新思考这个问题。其实任何一个方法，有优点也有缺点，犹如一个硬币有两面是一样的，我们要从一分为二的观点去看待大，好像跑题了，高中政治了，大家别拍我板砖啊。标准曲线法是经常使用的方法，在平时测定样品的

因为标准曲线确实不能消除基体的干扰，所以此时就需要用标准加入法进行验证。

2．标准加入法

原子吸收光谱分析法的标准加入法有效地校正了基体，溶液中其它组分，表面张力和粘度对测定的干扰。

一直以为标准加入法是消除基体干扰的王牌，每次能力验证的时候都会采用这种方法，具体的操作方法是先用标准曲线法测定出未知样品的一个值，然后根据这个测定值去设定标准加入法。

2.1标准加入法曲线的设计

标准加入法中第一次加入标准溶液为“0”，废话，就是什么都不加，哈哈哈；第二次加入的量约与被测液中被测离子的含量大致相等；第三个以此类推，但是请注意，最后一个点一定要在标准曲线的线性范围之内，超出了线性就不好了，影响测定。具体曲线见图6.

图6 标准加入法的校正曲线

在校正了背景的情况下，如果试样中不含待测元素，校正曲线理应通过原点。现在校正曲线不通过原点，说明试样中含有待测元素，其含量的多少与截距大小的吸光度值相对应。将校正曲线外延与横坐标相交，原点至交点的距离，即为试样中待测元素的含量Cx。

2.2标准加入法的局限

但这么做是有个前提的，也就是那个资料里面提到的。在原子吸收分析时，用标准加入法一般须满足三个条件：第一，待测元素浓度从零至最大加入标准浓度范围，必须与吸光度值具有线性关系，并且标准曲线通过坐标原点。第二，在测定溶液中的干扰物质浓度必须恒定。第三，加入标准物质产生的响应值与原样品中待测元素产生的响应值相同。

我也在别的资料上查到了一些，做为补充吧

第四，不能存在相对系统误差，（书上说的，废话，不可能没有系统误差，只能想办法消除）即试样的基体效应不得随被测元素含量对干扰组分含量比值改变而改变。

第五，必须扣除背景和空白值.(这个不用你说大家也都知道)

以上说的是标准加入法的局限，以前还真没太关注，犹如朗伯-比尔定律一样，都有局限性的。对我们来说，了解了方法的局限性，才能更好的使用该方法，正所谓：知己知彼，百战百胜。要是不了解，就会出现误用或错用的情况。

其实标准加入法的局限性的资料（以下简称资料）中关于标准加入法的一些看法，也有些不是很确切，大家一起讨论下。

以上我是基本认同的，关于资料中2.1内容，不是很认同，在一般的实验过程中，很少采用标准加入法的，一般都采用标准曲线法，除非在能力验证或非常特殊的样品在检测过程中，才会采用标准加入法，而且这种样品的数量一般不是很多，而且样品的含量一般采用标准曲线法提前进行预测定了，不会像资料上说的那么玄乎，从0.005-0.08这么大的范围内波动。

2.3关于干扰的消除

2.3.1加和性干扰

如果测得的吸光度A中，除了待测元素的吸收B外，还有一个附加的吸收C，且C不随待测元素的浓度而变化（C值可以是正的，也可以是负的），则这种干扰为加和性干扰。加和性干扰的特点是不改变曲线的斜率和形状，只改变曲线的在吸收轴上的截距。

光谱线干扰、背景吸收和污染等一般可归于加和性干扰。加和性干扰采用标准加入法是消除不了的。测得的吸光度A=B+C，无论如何加入已知浓度的待测元素，C值是始终消除不了的。校正光谱线干扰和背景吸收的方法是配制尽可能与样品相同基体的标准系列，同时进行背景校正。校正污染需使用完全与样品一样，经过相同前处理的空白作参比。

以上是原话，其实我觉得污染不要归到干扰里面去，污染属于偶然性误差，是可以消除的。

大致我看明白了，消除加和性干扰的就是进行背景校正，配制雷同基体本来就是标准加入法的优势。我今天也做了一组标准加入法的实验，仪器条件如下：

点灯条件

灯电流; 10 mA/0 mA

波长 ; 279.5 nm

狭缝宽; 0.2 nm

点灯方式 ; BGC-D2

石墨炉温度程序(高灵敏度方式0. 0H),热解石墨管

阶段# 温度(oC) 时间(秒) 气体 (升/分) 升温采样提前

1 120 20 #1 1.0 斜坡 OFF

2 250 10 #1 1.0 斜坡 OFF

3 600 10 #1 1.0 阶梯 OFF

4 600 3 #1 0.0H 阶梯 OFF

5 2300 3 #1 0.0H 阶梯ON 2

，没有感觉到加和性干扰C的存在，我不知道是通过背景校正消除了呢，还是别的什么原因？我用的是标准物质中心的奶粉GSB-8，Mn的值为0.51±0.17mg/kg，我测出来都是0.51，满足测定要求。

2.3.2特效性干扰

在标准加入法中，加入元素和待测元素从表面上看是同一元素，两者又同处于相同的环境，似乎应该具有完全相同的分析行为。但是，问题并非如此简单，在一定的条件下，即使不同的物种、不同的化合物也可能有不同的分析行为，常常表现为不同浓度的分析元素受到的干扰程度不同，这称为特效性干扰。

在火焰原子吸收中，全部的电离干扰和部分的化学干扰都属于特效性干扰，不能通过标准加入法来消除。电离干扰可加入消电离剂（电离电位低元素）等方法来抑制，而特效性的化学干扰可加入稀放剂、保护剂等方法来抑制。

一般测定碱金属存在电离干扰，之前也做过很对Na的测定，确实用标准加入法很难消除电离干扰，我倍倍稀释做的曲线，没有一次线性能到三个九的，后来加入了消电离剂，这种情况才改善了，正好也印证了上面的说法。

在测定钙的时候，一般加入硝酸镧来消除测定过程中对钙的干扰，测定镁时一般加入三乙醇胺来消除干扰。

这两种盐在测定钙和镁的时候效果是很明显的。

石墨炉中的特效基体效应我也没看懂，希望我这篇小文能抛砖引玉，别砸到我就行，还请高手出来解答，谢谢！

3 总结

废话就不多说了，大家也看累了。最后总结一下，在能力验证的盲样测定过程中，还是以标准曲线法为主，缺失由于样品中某些组分对测定的干扰大，再参考标准曲线的测定结果，设计标准加入法的曲线，进行测定，最后别忘记带指控样哦。

内标法的计算.doc

内标法给人的印象总是让人头疼，何时选用内标法，如何选择内标物质，结果怎么计算，公式该如何理解，都是问题。 被问到过内标法的定量依据是什么，也就是在内标法里内标和待测物之间是什么关系。当时有点晕，说待测物和内标的比是一定的。到底是什么的比一定呢？你清楚吗？ 在此，撇开大家谈论过很多的内标法如何应用的问题，来谈谈内标法的计算。 先来分清两个概念，绝对校正因子和相对校正因子。以色谱分析为例，绝对校正因子是单位峰面积所相当的物质量，fi’=mi/Ai。而相对校正因子是某一组分与标准物质的绝对校正因子之比，f= fi′/ fs′=As?mi/Ai?ms。在内标法中，绝对校正因子主要由仪器的灵敏度决定，并且不易准确测量，也无法将内标物和待测物联系起来；而相对校正因子才是定量的基础，也是前文中提及的问题的答案，相对校正因子是那个一定的量，所谓待测物与内标的比一定也就是说待测物的质量与峰面积之比（即绝对校正因子fi’）和内标物的质量和峰面积之比(fs’)的比值一定（话比较绕，结合公式就一目了然啦）。文献上，标准上看到的校正因子也都是相对校正因子。相对校正因子也可以通过已知量的标准和内标混合后经实验测定获得。 对相对校正因子的公式进行简单变形，就能够得到待测物质量mi=Aifi’/Asfs’*ms=，进而通过C=mi/m得到待测物的浓度。 因此，再见到各类内标计算公式，我们就能够分辨其中的f到底是相对校正因子还是绝对校正因子了。比如 里，fi、fs就是指绝对校正因子。 而为了避免测定校正因子，常采用内标标准曲线法。它以mi= ms*fi*Ai /(fsAs) 为基础，但有一个前提是加入恒定量的内标物，且进样量相同（ms同），这样待测组分的含量就与Ai/As成正比了。mi=Ai/As*常数。 绘制内标标准曲线，先将待测组分的纯物质配成不同浓度的标准溶液，分别取一定量的标准溶液，加入相同量的内标物，混合后进样分析，测出Ai和As，以Ai/As为纵坐标，以标准溶液的浓度为横坐标作图。分析待测试样，取与标准溶液相同量的待测试样和内标物，测出峰面积比，由标准曲线即可查出待测组分的含量。 利用内标标准曲线法定量，可以免去测定校正因子的麻烦，也可以减少与查阅到的校正因子仪器条件等不同造成的差异，适用于液体试样的常规分析。 总结起来有2点。一是在内标法中只有相对校正因子，也就是待测物与内标物的绝对校正因子的比值是一定的。二是内标标准曲线法能够避免测定校正因子，但使用上有一些限制。

气相色谱法—内标法

什么叫内标法?怎样选择内标物?
     内标法是一种间接或相对的校准方法。在分析测定样品中某组分含量时，加入一种内标物质以校谁和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响，以提高分析结果的准确度。
     内标法在气相色谱定量分析中是一种重要的技术。使用内标法时，在样品中加入一定量的标准物质，它可被色谱拄所分离，又不受试样中其它组分峰的干扰，只要测定内标物和待测组分的峰面积与相对响应值，即可求出待测组分在样品中的百分含量。采用内标法定量时，内标物的选择是一项十分重要的工作。理想地说，内标物应当是一个能得到纯样的己知化合物，这样它能以准确、已知的量加到样品中去，它应当和被分析的样品组分有基本相同或尽可能一致的物理化学性质(如化学结构、极性、挥发度及在溶剂中的溶解度等)、色谱行为和响应特征，最好是被分析物质的一个同系物。当然，在色谱分析条什下，内标物必须能与样品中各组分充分分离。需要指出的是，在少数情况下，分析人员可能比较关心化台物在一个复杂过程中所得到的回收率，此时，他可以使用一种在这种过程中很容易被完全回收的化台物作内标，来测定感兴趣化合物的百分回收率，而不必遵循以上所说的选择原则。
    
     在使用内标法定量时，有哪些因素会影响内标和被测组分的峰高或峰面积的比值?
    
     影响内标和被测组分峰高或峰面积比值的因素主要有化学方面的、色谱方面的和仪器方面的三类。
     由化学方面的原因产生的面积比的变化常常在分析重复样品时出现。
     化学方面的因素包括：
     1、内标物在样品里混合不好；
     2、内标物和样品组分之间发生反应，
     3、内标物纯度可变等。
     对于一个比较成熟的方法来说，色谱方面的问题发生的可能性更大一些，色谱上常见的一些问题(如渗漏)对绝对面积的影响比较大，对面积比的影响则要小一些，但如果绝对面积的变化已大到足以使面积比发生显著变化的程度，那么一定有某个重要的色谱问题存在，比如进样量改变太大，样品组分浓度和内标浓度之间有很大的差别，检测器非线性等。进样量应足够小并保持不变，这样才不致于造成检测器和积分装置饱和。如果认为方法比较可靠，而色谱固看来也是正常的话，应着重检查积分装置和设置、斜率和峰宽定位。对积分装置发生怀疑的最有力的证据是：面积比可变，而峰高比保持相对恒定，
    
     在制作内标标准曲线时应注意什么?
    
     在用内标法做色话定量分析时，先配制一定重量比的被测组分和内标样品的混合物做色谱分析，测量峰面积，做重量比和面积比的关系曲线，此曲线即为标准曲线。在实际样品分析时所采用的色谱条件应尽可能与制作标准曲线时所用的条件一致，因此，在制作标准曲线时，不仅要注明色谱条件(如固定相、柱温、载气流速等)，还应注明进样体积和内标物浓度。在制作内标标准曲线时，各点并不完全落在直线上，此时应求出面积比和重量比的比值与其平均位的标准偏差，在使用过程中应定期进行单点校正，若所得值与平均值的偏差小于2，

软件的建立定量分析方法工作曲线的操作说明

建立定量分析方法工作曲线的操作说明 软件版本：SpectraEDX V2.1 2007年11月28日

1、双击Spectra EDX Launcher。 2、如果没有登录过，会弹出如图的窗口。 3、点击OK。

1、输入用户名和密码： 不同的用户级别有不同的用户名和密码。 最高级别的用户是“管理员Administrators”。 用户名：admin 密码：pass 2、点击Tools中的S2Browser可以搜索仪器，建立计算机与仪器的连接。

1、点击Browse搜索仪器。 2、选中仪器，将仪器内部的硬盘映射为外部计算机的盘，如Y盘。映射时要求输入： 用户名：s2 密码：s2 3、点击Connect连接。

点击Launcher上的Application，建立工作曲线。 1、屏幕的左边是建立工作曲线的向 导；右边是具体的要求。 2、建立工作曲线，主要有4个步骤： A、定义分析方法；包括分析方法的名 称，要分析的成分，已有的标准样 品的名称及含量。 B、定义制样方法 C、测量；包括三个部分： 定义测量方法（定义测量的 Regions，及每个Region的测量条 件和测量时间。）； 根据已定义的测量条件和测量时间 测量每个标准样品，将信号强度采 集下来。 选择每条谱线的条件（信号范围）； D、绘制工作曲线

定义分析方法 1、定义材料组（Material groups）的名称，相当于定义一个目录。 2、定义材料（Materials）的名称，即分析方法的名称。 注意：新建的分析方法，不能建在下列材料组内：Addiitve，Contamination，Foils。

标准曲线

1、标准曲线的本质 分析检测中的标准曲线是指一系列已知含量（浓度/量）的物质与仪器响应/信号之间的关系，数学处理就是曲线方程，图形表示就是标准曲线（图1）。 标准曲线的目的是可以根据标准曲线查出待测物质的含量。当我们得到一系列已知含量的物质的响应后，就会去建立函数关系，数学上称曲线拟合，由于直线最为简单，所以常常用直线方程加以拟合，当然会用到多项式拟合等其他方式。 标准曲线的核心问题要解决： 1、能找到确切浓度的标准物质或标准品。 2、标准系列和待测物质一定要有相同和一致的基体，因为样品基体可能会干扰仪器的响应，从这个意义上讲，样品的前处理实际就是提供标准和样品同样的基体环境，尽量祛除干扰基体。 所以最好的标准系列应该是样品基体匹配的标准系列。而方法建立过程中首先要考虑的当然是基体干扰的问题，推荐用标准加入曲线和Youden曲线分别考察样品基体所带来的乘积性干扰和加和性干扰。 标准加入曲线就是在样品中加入一系列标准，然后考察该标准加入曲线和标准曲线斜率的统计学差异，若有差异需考虑用标准加入法定量；而Youden曲线就是对样品做一系列稀释，然后用稀释倍数如1/10,1/5,1/2,1对仪器响应做曲线，考察该Youden曲线的截距与0的差别，若有差别则提示有加和性干扰，此时测定值要减去该截距才是真实值。 只有解决了标准曲线与样品基体的匹配问题，我们的定量才可靠。 内标法和替代物的使用则是为了解决仪器和前处理的影响问题。

2、标准曲线的做法 按《基于标准样品的线性校准》推荐： 1、标准曲线的浓度范围应覆盖正常操作条件下的被测量范围； 2、标准样品的组分尽量与被测样品组分一致； 3、标准样品的浓度值应等距离的分布在被测量范围； 4、标准样品的个数至少应有3个浓度； 5、每个标准点至少重复2次，这个重复是指从稀释开始；如果国家标准有相应的浓度系列推荐，尽量按国家标准，如果你要偷懒，比如我要减少标准点，至少要有理论标准支撑，比如至少要3个浓度。 工作中我们经常采用线性校准，因为线性方程最为简洁。 3、标准曲线的检验 标准曲线的检验是实际操作中最大的难点，也是工作中误区和争议最多的话题，比如GB/T 就将标准曲线的检验分为：精密度检验，截距检验和斜率检验，但并未出示具体的检验方法。

标准曲线与工作曲线在不同分析方法中的使用

标准曲线与工作曲线在不同分析方法中的使用 金筱青 (苏州市环境监测中心站,江苏 苏州 215004)中图分类号:X830 5 文献标识码:C 文章编号:10062009(2005)04004501 校准曲线是描述待测物质浓度或量与相应测 量仪器响应值或其他指示量之间的定量关系曲线。 校准曲线包括工作曲线(绘制标准曲线的溶液需 与样品分析步骤完全相同)和标准曲线(标液的分 析步骤有所省略,如不经过前处理等)。至于何时 用标准曲线,何时用工作曲线,须经实验确定。若 标液的某些前处理步骤省略后,所绘制的曲线与工 作曲线经数理统计检验无显著性差异时,则可在测 试中使用标准曲线,否则应用工作曲线。 测定总磷时, 水和废水监测分析方法 (第四 版)要求,标液系列须与水样同时经过硫酸钾氧化并 消解,而对于挥发酚、总氰化物的测定,标液系列则 不要求蒸馏,可直接加显色剂显色,比色,绘制曲线。 现分别绘制总磷、挥发酚和总氰化物测定方法 的标准曲线和工作曲线,其多次测量(n=6)的斜 率均值见表1。 表1 总磷、挥发酚和总氰化物标准曲线和工作曲线的比较 项 目方 法标准曲线 斜率 工作曲线 斜率 总磷钼锑抗分光光度法0 1000 100挥发酚4氨基安替比林分光光度法0 4040 386总氰化物异烟酸比唑啉酮分光光度法0 1480 137 由表1可见,总磷标液经消解和不消解绘制成的曲线,即工作曲线与标准曲线相比,其斜率间无显著性差异。由此看来,总磷标液系列的高温高压消解操作步骤可以省去,即采用钼锑抗分光光度法测定总磷时,可以使用标准曲线代替工作曲线。 对于挥发酚和总氰化物的测定,由于绘制标准曲线简单方便,且标准曲线稳定、灵敏度高,相关性好,实际工作中多采用标准曲线,但实际样品在蒸馏过程中不可避免地有一定损失。由表1可见,测定挥发酚和总氰化物的工作曲线与标准曲线相比,斜率有所下降,使用标准曲线计算,结果偏低。使用工作曲线,则可以保证标液系列与样品处于完全相同的实验条件下,避免引入系统误差。 总之,在经数理统计检验后,若标准曲线与工作曲线之间无显著性差异,可以使用标准曲线,若两者之间存在差异,则应使用工作曲线。 收稿日期:20031111;修订日期:20050517 作者简介:金筱青(1974 ),女,江苏苏州人,工程师,硕士,从事环境监测和环境影响评价工作。 本栏目责任编辑 李延嗣 张启萍 (上接第9页) 件,2002年查处965件,2003年查处1161件;2000年 2003年查处案件数增长近5倍,但2004年查处案件数与2003年基本持平。违法施工行为得到有效遏制。 从环保12369投诉情况看,2000年全年共受理施工噪声污染投诉4900件(次),以后每年以20%~30%的速度递增,至2003年全年达到8940件(次)。但2004年全年受理施工噪声投诉7648件(次),比2003年减少1292件(次),下降了14.5%。南京市施工噪声投诉在近年持续大幅上升的情况下,2004年首次呈现下降态势。 4 结语 南京市通过实行夜间施工噪声总量控制,改变了建设施工单位盲目赶工期、不科学安排施工作业,随意到环保部门申请夜间施工作业的现象,探索出一条可行的缓解噪声扰民问题的新路子,把大量可能产生的环境噪声污染纠纷与矛盾解决在未发之时。这一举措,既维护了市民的环境权益,又保证了施工单位的合法施工权。 本栏目责任编辑 李文峻 45 第17卷 第4期环境监测管理与技术2005年8月

内标法-标准曲线

配置不同浓度配比的苯甲醇和苯甲醛标准样品，如表2-4， 表2-4 标准液的配制 Tab.2-4 Preparation of standard solution 标准液编号 1 2 3 4 5 6 苯甲醇(ul) 0 20 40 60 80 100 苯甲醛(ul) 98 78.5 58.88 39.25 19.63 0 十二烷(ul) 50 50 50 50 50 50 按照内标法原理，做出苯甲醇和苯甲醛的标准曲线，其原理如下： 设在V mL 样品中含有C i mol·mL-1待测样i，加入C S mol·mL-1内标物S，混合均匀后于色谱进样，得到组分i及内标物S的峰面积分别为A i及A S。由于峰面积正比于通过检测器的物质的量，所以有： C i = f i A i，C S =f S A S，式中fi、fs 分别为组分i和内标S的校正因子。 两式相除，得：C i /C S =f i A i / f S A S= f i / f S?A i /A S (1) 由于在实际工作中一般采用相对校正因子（某物i与所选定的基准物质S的绝对定量校正因子之比）即：f = f i / f S ， (1)式可简化为C i /C S = f ? A i /A S (2) 根据（2）式，在测量过程中，分别称取准确质量的样品，混合均匀后进样，记录其相应的峰面积，计算可得相对质量校正因子。由于内标法是一种相对测量方法，因此，对进样量要求不太严格，操作条件稍有变化或是仪器的误差对结果均不会产生较大的影响。在用内标法做色谱定量分析时，先配制一定配比的被测组分和内标样品的混合物做色谱分析，测量峰面积，做浓度比与面积比的关系曲线，此曲线即为标准曲线。 图2-3 反应物苯甲醇的标准曲线 Fig.2-3 The standard curve of the reactant benzene alcohol

内标法与外标法

内标法与外标法 一、内标法 什么叫内标法?怎样选择内标物? 内标法是一种间接或相对的校准方法。在分析测定样品中某组分含量时，加入一种内标物质以校谁和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响，以提高分析结果的准确度。内标法在气相色谱定量分析中是一种重要的技术。使用内标法时，在样品中加入一定量的标准物质，它可被色谱拄所分离，又不受试样中其它组分峰的干扰，只要测定内标物和待测组分的峰面积与相对响应值，即可求出待测组分在样品中的百分含量。采用内标法定量时，内标物的选择是一项十分重要的工作。理想地说，内标物应当是一个能得到纯样的己知化合物，这样它能以准确、已知的量加到样品中去，它应当和被分析的样品组分有基本相同或尽可能一致的物理化学性质(如化学结构、极性、挥发度及在溶剂中的溶解度等)、色谱行为和响应特征，最好是被分析物质的一个同系物。当然，在色谱分析条什下，内标物必须能与样品中各组分充分分离。需要指出的是，在少数情况下，分析人员可能比较关心化台物在一个复杂过程中所得到的回收率，此时，他可以使用一种在这种过程中很容易被完全回收的化台物作内标，来测定感兴趣化合物的百分回收率，而不必遵循以上所说的选择原则。 在使用内标法定量时，有哪些因素会影响内标和被测组分的峰高或峰面积的比值? 影响内标和被测组分峰高或峰面积比值的因素主要有化学方面的、色谱方面的和仪器方面的三类。 由化学方面的原因产生的面积比的变化常常在分析重复样品时出现。 化学方面的因素包括： 1、内标物在样品里混合不好； 2、内标物和样品组分之间发生反应， 3、内标物纯度可变等。 对于一个比较成熟的方法来说，色谱方面的问题发生的可能性更大一些，色谱上常见的一些问题(如渗漏)对绝对面积的影响比较大，对面积比的影响则要小一些，但如果绝对面积的变化已大到足以使面积比发生显著变化的程度，那么一定有某个重要的色谱问题存在，比如进样量改变太大，样品组分浓度和内标浓度之间有很大的差别，检测器非线性等。进样量应足够小并保持不变，这样才不致于造成检测器和积分装置饱和。如果认为方法比较可靠，而色谱固看来也是正常的话，应着重检查积分装置和设置、斜率和峰宽定位。对积分装置发生怀疑的最有力的证据是：面积比可变，而峰高比保持相对恒定， 在制作内标标准曲线时应注意什么? 在用内标法做色话定量分析时，先配制一定重量比的被测组分和内标样品的混合物做色谱分析，测量峰面积，做重量比和面积比的关系曲线，此曲线即为标准曲线。在实际样品分析时所采用的色谱条件应尽可能与制作标准曲线时所用的条件一致，因此，在制作标准曲线时，不仅要注明色谱条件(如固定相、柱温、载气流速等)，还应注明进样体积和内标物浓度。在制作内标标准曲线时，各点并不完全落在直线上，此时应求出面积比和重量比的比值与其平均位的标准偏差，在使用过程中应定期进行单点校正，若所得值与平均值的偏差小于2，曲线仍可使用，若大于2，则应重作曲线，如果曲线在铰短时期内即产生变动，则不宜使用内标法定量。 二、外标法

气相色谱内标标准曲线法测定白酒中四种酯类

气相色谱内标标准曲线法测定白酒中四种酯类 白酒在生产过程中，酸与醇发酵生成各种酯，酯类在形成各类香型白酒的风味特征中起着极其重要作用，不同的酒，其含量要求也不一致。由于各种酯类的不同和含量的多少决定了白酒的香气和风格，它对白酒香型的确定起主导作用。而年代越长的酒，酯类的含量越高，酒就越香，品质就越好。所以对酒中酯类物质气相色谱的测定有助于酒的品质的鉴定。国产酒中酯类的成分和含量差异较大，故通过分析国产名酒的特征峰的分布和含量，也是可以达到鉴别假冒名酒的目的。本文以乙酸正戊酯作为内标物，建立了测定酒中多种酯类含量的气相色谱内标标准曲线分析方法。 1 材料与方法 1.1 仪器 Agilent 7890气相色谱仪；氢火焰离子化检测器(FID)；色谱柱：FFAP毛细管色谱柱（30m×0.25mm ×1.0μm）。 1.2 色谱条件 柱温：60℃(5min)→10℃/min→110℃→20℃/min→200℃；进样口温度：220℃，进样量：1μL，分流比：20 ：1；FID温度：220℃；载气为高纯氮气，流速：1mL/min。 1.3 试剂与材料 1.3.1 标准物 乙酸乙酯、己酸乙酯、乳酸乙酯、丁酸乙酯均为色谱纯；内标物：乙酸正戊酯（色谱纯）；60%（v/v）乙醇（色谱纯）水溶液。 1.3.2 内标标准曲线的配制 1.3. 2.1 内标溶液的配制 准确吸取2mL乙酸正戊酯（色谱纯）于100mL容量瓶中，用60%（v/v）乙醇溶液定容至刻度，使乙酸正戊酯浓度为17.6g/L。 1.3. 2.2 标准使用液的配制 分别准确吸取色谱纯乙酸乙酯、己酸乙酯、乳酸乙酯及丁酸乙酯2mL于100mL容量瓶中，用60%（v/v）乙醇溶液定容至刻度，，使其成为含乙酸乙酯、己酸乙酯、乳酸乙酯及丁酸乙酯分别为18.0g/L，17.6g/L，20.8g/L，17.6g/L的混合标准溶液。 1.3. 2.3 溶液标准曲线的配制 取6个100mL容量瓶依次加入标准使用液0.10、0.50、1.00、5.00、10.0、20.0mL，再在每个容量瓶中加入1mL内标溶液，用60%（v/v）乙醇溶液定容至刻度摇匀后进行气相色谱分析。 1.4 酒样的配制 取适量茅台酒样品于100mL容量瓶中，加入1mL内标溶液，用酒样定容至刻度，混匀后在相同色谱条件下进样分析。重复测定六次并记录结果。另取五粮液酒样进行相同条件的分析。 1.5 测定方法 在选定的相同分析条件下，标准曲线溶液和样品溶液进样分析，以保留时间定性，以待测物的峰面积与乙酸正戊酯峰面积之比为纵坐标Y，相应浓度为横坐标X，进行线性回归定量分析。 2 结果与讨论 2.1 色谱柱的选择 用同一份白酒样品分别使用不同极性的色谱柱(DB - 1、DB - 5、DB - 17、FFAP)测试后发现，各待测物在非极性至中极性的柱子上虽也能分离，但峰形较差，影响定量结果的准确性；而在强极性柱FFAP上，各峰峰形尖锐，可获得满意的分离较果。故选用FFAP毛细管柱 2.2 分流比的选择 1

色谱定量分析,外标法和内标法如何进行选择

色谱定量分析，外标法和内标法如何进行选择 色谱定量分析，外标法和内标法如何进行选择色谱分析的重要作用之一是对样品定量。而色谱法定量的依据是：组分的重量或在载气中的浓度与检测器的响应信号成正比。常见定量分析方法分为面积归一化法、内标法、外标法、标准曲线法等。大家常常容易傻傻分不清楚的莫过于内标法、外标法了。 以内标法为例，选一与欲测组分相近但能完全分离的组分做内标物（当然是样品中没有的组分），然后配制欲测组分和内标物的混合标准溶液，进样得相对校正因子。再将内标物加入欲测组分的样品中，进样后测得欲测组分和内标物的定量参数，用内标法公式计算即可。 其实，从定义上来区分的话，外标法就是用标准品的峰面积或峰高与其对应的浓度做一条标准曲线，测出样品的峰面积或峰高，在标准曲线上查出其对应的浓度，这是最常用的一种定量方法； 内标法是对应外标法说的，内标法是将一定量的纯物质作内标物，加入到准确称量的试样中，根据被测试样和内标物的质量比及其相应的色谱峰面积之比，来计算被测组分的含量。 外标法需要用样品和标准品对比，但是有时我们很难保证样品和标准品进的体积是一样的，毕竟要有误差，这时候就用内标法，就是在外标法的基础上,在样品和标准品里在加入一种物质，通过加入物质的峰面积或峰高的变化,就可以看出我们标准品和样品进样体积的差别，但同时会引进加入物质的秤量误差。所以一般用外标法来定量，如果进样体积很难掌握，就用内标法，可以消除进样体积的误差。 外标法 外标法（标准曲线法、直接比较法）首先用欲测组分的标准样品绘制标准工作曲线。 具体作法是：用标准样品配制成不同浓度的标准系列，在与欲测组分相同的色谱条件下，等体积准确量进样，测量各峰的峰面积或峰高，用峰面积或峰高对样品浓度绘制标准工作曲线，此标准工作曲线应是通过原点的直线。若标准工作曲线不通过原点，说明测定方法存在系统误差。标准工作曲线的斜率即为绝对校正因子。 当欲测组分含量变化不大，并已知这一组分的大概含量时，也可以不必绘制标准工作曲线，而用单点校正法，即直接比较法定量。单点校正法实际上是利用原点作为标准工作曲线上的另一个点。因此，当方法存在系统误差时（即标准工作曲线不通过原点），单点校正法的误差较大。因此规定，y=ax+b（b的绝对值应不大于100%响应值是y的2%）。 标准曲线法的优点：绘制好标准工作曲线后测定工作就很简单了，计算时可直接从标准工作曲线上读出含量，这对大量样品分析十分合适。特别是标准工作曲线绘制后可以使用一段时间，在此段时间内可经常用一个标准样品对标准工作曲线进行单点校正，以确定该标准工作曲线是否还可使用。

曲线图的规范表达

曲线图的规范表达 函数曲线图的构成 在科技论文中，函数曲线图应用得最多。精确的函数曲线图用于计算，图中给出了密集的纵横向坐标标值线。但是在科技论文中，发表时常常被简化成简易函数曲线图。这种图的图面简洁。篇幅小，绘制容易，说明性也强。函数曲线图的构成要素。 函数曲线图要素设计 1.图序与图题 （1）图序按照论文中出现的先后顺序编号，如“图1”，“图2”……仅有一个图的论文，也要标注“图1” （2）图题是插图的名称。图题的拟定与题名相似，有同样的要求：准确得体，简短精练。（3）图题应该避免泛指性的词语，如“函数曲线图”、“框图”等缺乏具体对象的名称，应该根据图的内容加上特指定语，如“曲柄-连杆的动力学模型示意图”。 （4）特殊情况下也可以无图题。如果作者考虑实在给不出合适的名称，那么全篇统一，都不给图题。 （5）图题一般应该排在图的下方，居中排，如果长度超过图幅，则应转行排。 （6）必要时可以分图。 2.标目、标值线和标值 标目简介：目录款目上指引目录排检线索的项目。通常是文献内容或形式的某一主要特征，如题名、责任者(著者)、主题词、分类号等，一般著录于款目之首。标目确定款目在目录中的排列次序，并决定款目的性质。 标目由单位符号、名称和量纲组成，之间一般用“/”线隔开。 标目应当与坐轴平行，一般情况下居中排。 标值线即坐标轴上的刻度线，与标值线对应的数字为标值。 应该避免标值线过密。 3.坐标轴 坐标轴coordinate axis 用来定义一个坐标系的一组直线或一组线；位于坐标轴上的点的置由一个坐标值所唯一确定，而其他的坐标轴上的点的位置由一个坐标值所唯一确定，而其他的坐标在此轴上的值是零。 如果坐标轴给出的是定量的标值线，标值，可以画出箭头，也可以不画出箭头；如果坐标轴表达的是定性的变量，则在坐标轴尾端按变量增大的方向画出箭头。 对于要求精确反映试验结果的曲线图，要正确合理地选择坐标轴比例尺。 不管选择什么样的比例尺，当在图中确定试验点后，需要考虑其误差范围。

归一化法外标法内标法的区别

色谱定量方法 一、归一化法 由于组分得量与其峰面积成正比,如果样品中所有组分都能产生信号,得到相应得色谱峰,那么可以用如下归一化公式计算各组分得含量、 (7。 34)?若样品中各组分得校正因子相近,可将校正因子消去,直接用峰面积归一化进行计算。中国药典用不加校正因子得面积归一化法测定药物中各杂质及杂质得总量限度。 (7、3５) ?归一化法得优点就是:简便、准确、定量结果与进样量重复性无关(在色谱柱不超载得范围内)、操作条件略有变化时对结果影响较小。 缺点就是:必须所有组分在一个分析周期内都流出色谱柱,而且检测器对它们都产生信号。不适于微量杂质得含量测定。 二、外标法 用待测组分得纯品作对照物质,以对照物质与样品中待测组分得响应信号相比较进行定量得方法称为外标法。此法可分为工作曲线法及外标一点法等、工作曲线法就是用对照物质配制一系列浓度得对照品溶液确定工作曲线,求出斜率、截距。在完全相同得条件下,准确进样与对照品溶液相同体积得样品溶液,根据待测组分得信号,从标准曲线上查出其浓度,

或用回归方程计算,工作曲线法也可以用外标二点法代替。通常截距应为零,若不等于零说明存在系统误差。工作曲线得截距为零时,可用外标一点法(直接比较法)定量。 外标一点法就是用一种浓度得对照品溶液对比测定样品溶液中ｉ组分得含量。将对照品溶液与样品溶液在相同条件下多次进样,测得峰面积得平均值,用下式计算样品中i组分得量:?W=A(Ｗ)/(A)(７。36) 式中W与A分别代表在样品溶液进样体积中所含i 组分得重量及相应得峰面积。(W)及(A)分别代表在对照品溶液进样体积中含纯品i组分得重量及相应峰面积、外标法方法简便,不需用校正因子,不论样品中其她组分就是否出峰,均可对待测组分定量。但此法得准确性受进样重复性与实验条件稳定性得影响、此外,为了降低外标一点法得实验误差,应尽量使配制得对照品溶液得浓度与样品中组分得浓度相近。 三、内标法 选择样品中不含有得纯物质作为对照物质加入待测样品溶液中,以待测组分与对照物质得响应信号对比,测定待测组分含量得方法称为内标法。“内标”得由来就是因为标准(对照)物质加入到样品中,有别于外标法。该对照物质称为内标物。 在一个分析周期内不就是所有组分都能流出色谱柱(如有

归一化法,内标法,外标法

归一化法normalization method 一种常用的色谱定量方法。归一化法是把样品中各个组分的峰面积乘以各自的相对校正因子并求和，此和值相当于所有组分的总质量，即所谓“归一”，样品中某组分i的百分含量可用下式计算： pt%= Aifi/(A1f1+A2f2 + ....Anfn )*100 式中f1、f2、fn…为各组分的相对校正因子，A1、A2、…An为各组分的峰面积。如果操作条件稳定，也可以用峰高归一化法定量，此时组分i的百分含量可按下式计算：pt%= hifi/(h1f1+h2f2 + ....hnfn )*100 式中f1、f2、fn、…为各组分在该操作条件下特定的峰高相对校正因子，h1、h2、…hn为各组分的峰高。用归一化法定量时，必须保证样品中所有组分都能流出色谱柱，并在色谱图上显示色谱峰。 定量方法 色谱中常用的定量方法有： a.校正归一化法 当试样中各组分都能流出色谱柱且在检测器上均有响应，各组分的相对校正因子已知时，可用此法定量。组分i在混合物中的百分含量可由下式计算： 其中fi可为质量校正因子，也可为摩尔校正因子。 若各组分的定量校正因子相近或相同（如同系物中沸点接近的组分），则上式可 简化为： 该法简称为归一化法。 校正归一化法的优点是：简便、准确，当操作条件如进样量、流速变化时，对定量结果影响很小。缺点是：对该法的苛刻要求限制了该法的使用。该法适合于常量物质的定量。 b.内标法 所谓内标法是将一定量的纯物质作为内标物，加入到准确称量的试样中，根据被测物和内标物的质量及在色谱图上相应的峰面积比，求出某组分的百分含量。

当只需测定试样中某几各组分时，而且试样中所有组分不能全部出峰时，可用此法。此法适合于微量物质的分析。该法的计算公式如下： 其中，f 是被测组分相对于内标物的相对校正因子。 si 该法的优点是：受操作条件的影响较小，定量结果较为准确，使用上不象归一化法那样受到限制。该法的缺点是：每次分析必须准确称量被测物和内标物，不适合于快速分析。 内标物的选择十分重要。它应该是试样中不存在的物质；加入的量应接近于被测组分色谱；同时要求内标物的色谱峰位于被测组分色谱附近或几个被测组分色谱峰的中间，并与这些组分完全分离；内标物必须不与样品发生反应等。 c.外标法（定量进样－标准曲线法） 所谓外标法就是应用被测组分的纯物质来绘制浓度c对响应值A（h）的标准曲线，然后测试被测样品中被测组分的响应信号（峰面积或峰高），由标准曲线即可查出或通过线型回归计算出其百分含量。 该法必须定量进样，即测定标准曲线和测定未知物时，进入色谱中的样品量必须一致。 该法的优点是：操作简单，计算方便，缺点是：结果的准确度取决于进样量的重现性和操作条件的稳定性。 当被测试样中各组分的浓度变化范围不大时（如工厂的中间控制分析）可不必绘制标准曲线，而用单点校正法。即配制一个与被测组分含量十分接近的浓度为的标准溶液，定量进样，由下式计算被测物的含量。 C S 关于归一化法的一些问题？？ 归一化法中的校正因子如何得到？？？ 如果不做，采用面积归一化法的误差大吗？？ 一般那么多的校正因子不可能一一测出呀？？

气相色谱法―内标法(精)

气相色谱法—内标法 一、什么叫内标法? 怎样选择内标物? 内标法是一种间接或相对的校准方法。在分析测定样品中某组分含量时，加入一种内标物质以校谁和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响，以提高分析结果的准确度。 内标法在气相色谱定量分析中是一种重要的技术。使用内标法时，在样品中加入一定量的标准物质，它可被色谱拄所分离，又不受试样中其它组分峰的干扰，只要测定内标物和待测组分的峰面积与相对响应值，即可求出待测组分在样品中的百分含量。采用内标法定量时，内标物的选择是一项十分重要的工作。理想地说，内标物应当是一个能得到纯样的己知化合物，这样它能以准确、已知的量加到样品中去，它应当和被分析的样品组分有基本相同或尽可能一致的物理化学性质(如化学结构、极性、挥发度及在溶剂中的溶解度等、色谱行为和响应特征，最好是被分析物质的一个同系物。当然，在色谱分析条什下，内标物必须能与样品中各组分充分分离。需要指出的是，在少数情况下，分析人员可能比较关心化台物在一个复杂过程中所得到的回收率，此时，他可以使用一种在这种过程中很容易被完全回收的化台物作内标，来测定感兴趣化合物的百分回收率，而不必遵循以上所说的选择原则。 二、在使用内标法定量时，有哪些因素会影响内标和被测组分的峰高或峰面积的比值? 影响内标和被测组分峰高或峰面积比值的因素主要有化学方面的、色谱方面的和仪器方面的三类。 由化学方面的原因产生的面积比的变化常常在分析重复样品时出现。 化学方面的因素包括： 1、内标物在样品里混合不好；

2、内标物和样品组分之间发生反应， 3、内标物纯度可变等。 对于一个比较成熟的方法来说，色谱方面的问题发生的可能性更大一些，色谱上常见的一些问题(如渗漏对绝对面积的影响比较大，对面积比的影响则要小一些，但如果绝对面积的变化已大到足以使面积比发生显著变化的程度，那么一定有某个重要的色谱问题存在，比如进样量改变太大，样品组分浓度和内标浓度之间有很大的差别，检测器非线性等。进样量应足够小并保持不变，这样才不致于造成检测器和积分装置饱和。如果认为方法比较可靠，而色谱固看来也是正常的话，应着重检查积分装置和设置、斜率和峰宽定位。对积分装置发生怀疑的最有力的证据是：面积比可变，而峰高比保持相对恒定， 三、在制作内标标准曲线时应注意什么? 在用内标法做色话定量分析时，先配制一定重量比的被测组分和内标样品的混合物做色谱分析，测量峰面积，做重量比和面积比的关系曲线，此曲线即为标准曲线。在实际样品分析时所采用的色谱条件应尽可能与制作标准曲线时所用的条件一致，因此，在制作标准曲线时，不仅要注明色谱条件(如固定相、柱温、载气流速等，还应注明进样体积和内标物浓度。在制作内标标准曲线时，各点并不完全落在直线上，此时应求出面积比和重量比的比值与其平均位的标准偏差，在使用过程中应定期进行单点校正，若所得值与平均值的偏差小于2，曲线仍可使用，若大于2，则应重作曲线，如果曲线在铰短时期内即产生变动，则不宜使用内标法定量。

标准曲线法与标准加入法的区别

1 标准曲线法 1.1标准曲线法的计算公式 在一定条件下，标准曲线是一条直线，直线的斜率和截距可以用最小二乘法求得。现在好多仪器软件都能自动生成标准曲线，所以一小部分版友不清楚标准曲线的具体计算方法。本人查找了一些资料，找到标准曲线的斜率和截距的计算方法，和大家分享。 工作曲线可以用一元线性方程表示： y=a+bx （1） 式中，x为标准溶液的浓度，y为相应的吸光度。 使用最小二乘法确定的直线称为回归线，a,b称为回归系数。 b 为直线的斜率，可由下式求得：

1.2 灵敏度 灵敏度是指该方法对单位浓度或单位量的待测物质的变化所引起的响应量变化的过程。一般用标准曲线的斜率b为方法的灵敏度，b越大，灵敏度越高。 不要小看灵敏度，用处可大了。灵敏度由于仪器的不同，实验条件等的不同，在不断的变化。但在一定的实验条件下，灵敏度相对还是比较稳定的。所以，建议对灵敏度也做个质量控制图，具体做法见我另一个帖子。 每次标准曲线做好以后，观察灵敏度是否在一定的范围内维持稳定。如果发现灵敏度突然降低，就需要考虑，是否是仪器出问题了。火焰首先考虑雾化器是否堵塞，石墨炉首先考虑石墨管是否是烧坏。解决方法是用通丝清理雾化器，更换石墨管后继续测定标准曲线，带灵敏度稳定后进行样品测定。还有，在打开一瓶新的标准溶液的时候，在仪器进行维修以后，一定要注意灵敏度的变化。 1.3线性范围 线性范围这个大家都比较清楚，主要从相关系数r看，一般要求r大于等于三个九。我在这里和大家分享的是，我想了好久才想开的一个问题。之前看好多书上

后来专门做了好多次实验，还是一直是直线在，只是有时候浓度高时，线性不好，高浓度点不在标准曲线上，而是在标准曲线的下面，而且离拟合的标准曲线比较远。遇到这种情况，标准曲线的线性相关系数就很差，有时候才一个九，如图2所示。最后我终于想明白了，如果自己用手动拟合的话，用平滑的曲线去连接所有点的话，你就会发现，如果在线性范围内，连接起来就是直线，如果超出了线性范围，连接起来就是一条弯曲的曲线。从弯曲的拐点开始，就已经超出了线性范围，如图3所示。 所以，判断是否超出线性范围，个人觉得不是看是否弯曲，软件用最小二乘法拟合的一次曲线，永远是直线。要看你的高浓度点是否在拟合的标准曲线上或离得比较近，相关系数是否在三个九以内。如果不在，从拐点开始的那个点，就超出了线性范围，应该删除，从新拟合。 1.4检出限 检出限是指对某一特定的分析方法在给定的置信水平内可以从样品中检测待测物质的最小浓度或最小量。

受试者工作特征曲线

一、ROC曲线的概念 受试者工作特征曲线（receiver operator characteristic curve, ROC曲线），最初用于评价雷达性能，又称为接收者操作特性曲线。ROC曲线是根据一系列不同的二分类方式（分界值或决定阈），以真阳性率（灵敏度）为纵坐标，假阳性率（1-特异度）为横坐标绘制的曲线。 传统的诊断试验评价方法有一个共同的特点，必须将试验结果分为两类，再进行统计分析。ROC曲线的评价方法与传统的评价方法不同，无须此限制，而是根据实际情况，允许有中间状态，可以把试验结果划分为多个有序分类，如正常、大致正常、可疑、大致异常和异常五个等级再进行统计分析。因此，ROC曲线评价方法适用的范围更为广泛。 二、ROC曲线的主要作用 1.ROC曲线能很容易地查出任意界限值时的对疾病的识别能力。 2.选择最佳的诊断界限值。ROC曲线越靠近左上角,试验的准确性就越高。最靠近左上角的ROC曲线的点是错误最少的最好阈值，其假阳性和假阴性的总数最少。 3.两种或两种以上不同诊断试验对疾病识别能力的比较。在对同一种疾病的两种或两种以上诊断方法进行比较时，可将各试验的ROC曲线绘制到同一坐标中，以直观地鉴别优劣，靠近左上角的ROC曲线所代表的受试者工作最准确。亦可通过分别计算各个试验的ROC曲线下的面积(AUC)进行比较，哪一种试验的AUC最大，则哪一种试验的诊断价值最佳。 三、ROC曲线分析的主要步骤 1.ROC曲线绘制。依据专业知识，对疾病组和参照组测定结果进行分析，确定测定值的上下限、组距以及截断点（cut-off point），按选择的组距间隔列出累积频数分布表，分别计算出所有截断点的敏感性、特异性和假阳性率（1-特异性）。以敏感性为纵坐标代表真阳性率，（1-特异性）为横坐标代表假阳性率，作图绘成ROC曲线。 2.ROC曲线评价统计量计算。ROC曲线下的面积值在1.0和0.5之间。在AUC＞0.5的情况下，AUC越接近于1，说明诊断效果越好。AUC在0.5～0.7时有较低准确性，AUC在0.7～0.9时有一定准确性，AUC在0.9以上时有较高准确性。AUC＝0.5时，说明诊断方法完全不起作用，无诊断价值。AUC＜0.5不符合真实情况，在实际中极少出现。 3.两种诊断方法的统计学比较。两种诊断方法的比较时，根据不同的试验设计可采用以下两种方法：①当两种诊断方法分别在不同受试者身上进行时，采用成组比较法。②如果两种诊断方法在同一受试者身上进行时，采用配对比较法。 四、ROC曲线的优点 该方法简单、直观，通过图示可观察分析方法的临床准确性，并可用肉眼作出判断。ROC 曲线将灵敏度与特异性以图示方法结合在一起，可准确反映某分析方法特异性和敏感性的关系，是试验准确性的综合代表。ROC曲线不固定分类界值，允许中间状态存在，利于使用者

实验9 气相色谱、内标法测定蘑菇醇的含量

内标法测定蘑菇醇的含量 【摘要】 气相色谱法（GC）分离效率、选择性、灵敏度都很高，适用于热稳定性好、易挥发的物质。外标法通过配置标准溶液来制作工作曲线，但使用溶液体积很少时误差较大，可以通过加入内标物减小误差。本实验通过内标法和气相色谱法来测定未知物中的蘑菇醇含量。 【关键字】气相色谱内标法蘑菇醇 【实验目的】 1、了解气相色谱法的基本原理及仪器结构。 2、了解气相色谱基本仪器操作。 3、掌握内标法的配样与计算方法。 【基本原理】 原理概述：气质联用仪（GC-MS）近年来在有机化学领域起到越来越重要的作用，其原理是利用气相色谱的分离能力，将样品各组分分离开，然后对各组分进行质谱分析，得出组分信息。再利用 内标法制作工作曲线来计算未知物浓度。 ?气相色谱法（GC）：是利用气体作流动相的色层分离分析方法。 优点：分离效率、选择性、灵敏度都很高。 缺点：只适用于热稳定性好、易挥发的物质。 ?内标法：在分析测定样品中某组分含量时，加入一种内标物质以校准和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响，以提高分析结果的准确度。 内标物的选择要求： 1、是能得到纯样的己知化合物；

2、和被分析的样品组分有基本相同的物理化学性质（化学结构、极性、挥发度及在溶剂中的溶解度等）、色谱行为和响应特征，最好是被分析物质的一个同系物； 3、不与样品中各组分充分分离发生反应； 4、既可被色谱柱所分离，又不受试样中其它组分峰的干扰， 原理：只要测定内标物和待测组分的峰面积与相对响应值，即可求出待测组分在样品中的百分含量： m ：样品的质量； ms ：待测样品中加入内标物的量； As ：待测样品中内标物的峰面积； f s,i ：组分 i 与内标物的校正因子之比，称为相对校正因子。 ? 蘑菇醇：即1-辛烯-3-醇 分子式：C 8H 16O ； 分子量：128.21 应用：用于日化和食用香精；作为化学合成原料， 应用於制药领域；作为蚊虫引诱剂，应用于杀蚊制品。 【仪器与试剂】 1、 仪器：Agilent7890N 气相色谱仪，10μl 进样针，1000μl 移液枪。 2、 试剂：蘑菇醇储备样（10.107mg/ml ），内标物（10.140mg/ml ），蘑菇醇未知样，乙腈溶液。 【实验步骤】 1、配制标准溶液：以移液枪分别移取200、400、600、800、1000μl 蘑菇醇储备液和400、400、400、400、 400μl 氯苯储备液与5ml 容量瓶中，用乙腈定容到刻度。 2、配制未知溶液：以移液枪量取200μl 蘑菇醇未知液和400μl 氯苯储备液与5ml 容量瓶中，用乙腈定容到 刻度。 3、设定气相色谱参数：进样口：气化温度：250℃，分流比：10:1； 色谱柱：流速：2.0ml/min ； 柱温箱：120℃（保持1min ），10℃/min 升到200℃； 图1 蘑菇醇结构式 % 100m f m x s i s,i s i ????=A A