薄层扫描法(教学材料)

薄层扫描法

一、定义

薄层扫描法(TLCS)又称原位定量薄层色谱扫描法（QTLC）系指用一定的波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱中有紫外或可见吸收的斑点或经照射能激发产生荧光斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分值用于药品定性定量的分析方法。

回顾薄层色谱法（TLC)

1、薄层板的制备（硅胶板,Al2O3板，聚酰胺薄膜等）

2、点样（选择合适的展开剂，在薄板底1cm处画基线，点样）

3、展开（浸入展开剂，展开到距薄板顶端1~2cm)

4、检视(在紫外光灯下观察斑点）

了解一下薄层扫描仪

薄层扫描仪的组成及主要功能

薄层色谱扫描仪有多个厂家生产，型号不同，仪器外形、光路系统及某些功能也有差异，但其基本结构及主要功能是基本相同的。每台仪器都包括主机、数据处理及信号输出等部分。

（1）分光器及测量范围

大多数薄层扫描仪的分光器为光栅，少数为棱镜，极个别的用滤光片，其测量范围光栅为200-800nm，棱镜为200-2500nm。

（2）光源及检测器

光源室具有可见光源钨灯，波长范围为400-800，紫外光源氘灯波长范围为200-400nm，荧光光源为氙灯或汞灯。操作时可通过光源选择杆来变换光源选择

镜的位置；检测器一般为光电倍增管。

表7-5-2 国外几种主要专用薄层色谱扫描仪

二、TLCS基本原理与方法

薄层扫描法可分为薄层吸收扫描及薄层荧光扫描两类方法。

1. 薄层吸收扫描法的基本原理

薄层吸收扫描法是用可见光或紫外线的单色光照射展开后的薄层色谱板，测定薄层色谱斑点(简称斑点)的吸光度(A)随展开压离(L)的变化，而获得A —L成A—Rf曲线，即薄层色谱扫描图(简称扫描图)。

曲线上的色谱峰峰面积可用于定量分析。由于薄层板存在着明显的散射现象，而使斑点中物质的浓度与吸光度的关系不服从Beer定律，所以需田Kubelka—Munk(古柏尔卡—曼克)理论来描述。该方程式是薄层扫描法的定量分析基础。定量校正方法可分为曲线校直法及非线性回归法等。

设薄板固定相的厚度为X,入射光的强度为I.,当透过厚度x的的固定相后，照射在微分薄层厚度dx上的入射光强与反射光强分别为i和j时，如左图。其入射光强的增量与反射光强的增量分别符合以下两个微分方程：

即光照射到厚度为x的薄层后，光被吸收及散射。在入射方向，光强度因为被吸收与散射而减弱；在入射的反方向，则光强度因散射而增强。解上述方程得：

在薄层扫描时，人们只是对进入薄层和由薄层出来的光有兴趣，也即上式的极端情况，x=0及x=X时

对比两图很易发现，由于薄层固定相的散射作用使在透射法中所测得的斑点的吸光度产生正偏差，而在反射法测定时产生负偏差。这是因为照射光被散射，降低了透射率，吸光度增加；散射光增加了反射光光强，增加了反射率，而降低了吸光度的缘故。其次，还可发现后图比前图的横座标大25倍，这说明了反

射法的灵敏度(响应值)比透过法小。

1·1 Kubelka-Munk曲线校直

Kubelka－Munk曲线说明了薄层色谱斑点的吸光度与其浓度间呈非线性关系，该曲线是薄层扫描法进行定量分析的理论依据。曲线处理采用两类方法：曲线校直法及计算机回归法(线性及非线性回归)。CS系列仪器采用前者，CAMAG仪器采用后者方法。

曲线校直法是根据薄层板的散射参数SX值，将Kubelka－Munk曲线校正为直线，简化A与KX间的关系，以利于定量分析。

用曲线校正法校直Kubelka—Munk曲线，必须巳知薄层板的SX值，Mrck预制硅胶板的SX＝3，Merck预制氧化铝板的SX＝7，Wako预制硅胶FM(硅胶GF254)板的SX＝7。国产预制薄层板及自制薄层板，可参考上述数据试调，而后检查校正是否适宜，修正SX值再校，直至A—KX曲线成直线为止。检查方法如下图所示。图中点样量显(横坐标)常用单位为ug/点。

应用时应注意：

曲线校直法是一种简便的薄层扫描定量校准方法，但比较粗糙，且有时难于准确知道薄层板的SX值。为了降低定量误差，应使标准品的色谱峰峰面积与待测品(供试品)的色谱峰面积尽量接近为好。

2. 薄层吸收扫描法的扫描方式及条件的选择

薄层吸收扫描法的扫描条件，包括扫描方式、波长及测光方式等。扫描方式分为直线式及锯齿式扫描。扫描波长的选择至关重要，不仅关系检测灵敏度，而且关系干扰的排除等。测光方式分为透射式及反射式

2.1 扫描方式选择

(1) 直线扫描

直线式扫描是用一光带先照射在薄层板的一端，而后作直线运动至另—端。在作直线式扫描时，实际上是光带固定，薄层板相对于光带作直线运动。

在作直线扫描时，光带的长度对扫描后所得的色诺峰峰面积影响很大，下图说明了光带越长，所得的色谱蜂面积越小，反之则峰面积越大。光带太长，检测灵敏度低，光带太短，光带只通过斑点的一部分，所得的蜂面积，不能真实反砍斑点的吸收情况。因此，正常扫描时，应使光带长度略大于斑点直径。在多斑点扫描的，光带长度略大于最大斑点直径。为了降低定量误差，应使标准品

斑点的直径与检品斑点的直径尽量接近。样品斑点为带状时，光带长度应约为样带的2/3。

不规则斑点，用直线式扫描定量，即使光带长度适宜，定量误差仍然较大，因为所得峰面积还与扫描方向有关。

综上所述，直线式扫描较适用于规则圆形薄层色谱斑点及条状薄层色谱斑点的定量分析。所能测定斑点的大小，以仪器的光带长度为上限。例CS—930薄层扫描仪，出射狭缝最大长度(高度)为6mm，只能测定小于6mm的斑点。在作直线式扫描叫，光带的步进距离ΔY也影响蜂面积。斑点小应选小步进距离，选择适宜，能降低定量误差。有关TLC及HPTLC板的光带长度及步进距离的具体选择见表。

(2)锯齿式扫描

用截面积为正方形的光束照射薄层板，光束的运动轨迹为矩齿形。CS 系列的摆动距阂最大为30mm，因此锯齿式扫描适用于直径小于30mm的斑点。

直线式扫在做锯齿形扫描时，由于光束来回通过斑点，吸光度积分值比描大，重复性较好。

锯齿扫描还适用于不规则斑点的定量。虽然扫描方向不同时，所得的色谱峰形状有差别，但积分值差别较小。

机械锯齿式描仪器扫描速度慢是其缺点，飞点扫描型仪器(如CS－9000型薄层

扫描仪)则克服了此缺点。

(3) 双校长法的优点

a.可以排除分离度不佳的两个斑点间的相互干扰，能用于分离度不佳以至于完全重叠斑点的定量分析。

b.可以排除背景污染的干扰，使基线平直。

c.可以提高灵敏度。

d.可以改变色谱峰的倒正。

这些优点的实现，主要取决于波长对的选择。

3·定量分析方法

TLCS最常用的定量方法是外标法，包括外标一点法和外标二点法。

1 外标一点法

标准曲线通过原点（截距为零）时可用外标一点法定量。即只需一种浓度的对照品溶液，与供试液同板展开，分别测定其峰面积A,即C待=A标C标/A待

2 外标二点法

该法是TLCS法中主要的定量分析方法。标准曲线不通过或一种浓度原点时只能用该法定量，至少需点两种不同浓度两种点样量的对照品溶液，与供试液同板展开，分别测定其峰面积A，用对照品求直线方程：A=Km+B,代入即得

例1 山楂化滞丸中熊果酸的含量测定

测定法：取重量差异项的本品3g，剪碎，精密称定，加水10ml，放置使溶散，滤过，药渣再用水10ml洗涤，在室温干燥至松软的粉末状，在100℃烘干，连同滤纸一并至索氏提取器内，加乙醚适量，加热回流提取4h，提取液回收乙醚至干，残渣用石油醚（30~60℃）

浸泡2次，每次5ml（浸泡2min），倾去石油醚，残渣加适量无水乙醇-三氯甲烷（3：2）混合溶液，微热使溶解，定量转移至5ml容量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，作为供试液。另取熊果酸对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml 含0.5mg的溶液。作为对照溶液，精密吸取供试液6ul及对照品溶液4ul与8ul，分别交叉点于同一硅胶G板上，以环己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（20:5:8:0.1）展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃加热5~7min，至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，进行薄层扫描，波长λs=535nm,λR=650nm,分别测量供试品与对照品A，计算即得.本品每丸含山楂以熊果酸（C30H48O3）计

熊果酸高含量为有光泽的棱柱状(无水乙醇)或细毛样针状结晶(稀乙醇)，低含量为棕黄色或黄绿色粉末，具特殊的气味，是存在于天然植物中的一种五环三萜类化合物。熔点283～288℃. 比旋光度[α]D25 +67.5°（C=1，1mol/L氢氧化钾醇溶液中）。在15℃时，乙醇（99%）1毫升可溶解10毫克，沸腾1毫升可溶解45毫克。尚易溶于甲醇，丙酮，吡啶，不溶于水和石油醚

例2香连丸中盐酸小檗碱的含量测定

测定法：取本品适量，研细，取约0.2g，精密称定，置索氏提取器中，加盐酸-

甲醇（1：100）的混合液适量，加热回流提取至提取液无色，将提取液移至100ml 量瓶中，用少量上述混合液洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加上述混合液至刻度，摇匀，精密量取10ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试液。另取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含20ug的溶液，作为对照品溶液。精密吸取供试液4ul、对照液2ul与6ul，分别交叉点于同一硅胶G板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-水（4：2：1：1：0.2）为展开剂，在另一槽中加等体积的浓氨试液，预饱和15min后，展开，展距约10cm，取出，晾干，进行荧光扫描，激发波长：λ=366nm，测供试品荧光强度与对照品荧光强度的积分值，计算即得。本品每1含黄连以盐酸小檗碱（C20H18ClNO4）计。

盐酸小檗碱是一种异喹啉生物碱。分子式[C20H18NO4]+。又称黄连素。存在于小檗科等4科10属的许多植物中。小檗碱从乙醚中可析出黄色针状晶体。熔点145℃。溶于水，难溶于苯、乙醚和氯仿。

薄层色谱法详解

薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使在流动相(溶剂)流过固定相(吸附剂)的过程中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而达到各成分的互相分离的目的。 薄层层析可根据作为固定相的支持物不同，分为薄层吸附层析(吸附剂)、薄层分配层析(纤维素)、薄层离子交换层析(离子交换剂)、薄层凝胶层析(分子筛凝胶)等。一般实验中应用较多的是以吸附剂为固定相的薄层吸附层析。 吸附是表面的一个重要性质。任何两个相都可以形成表面，吸附就是其中一个相的物质或溶解于其中的溶质在此表面上的密集现象。在固体与气体之间、固体与液体之间、吸附液体与气体之间的表面上，都可能发生吸附现象。 物质分子之所以能在固体表面停留，这是因为固体表面的分子(离子或原子)和固体内部分子所受的吸引力不相等。在固体内部，分子之间相互作用的力是对称的，其力场互相抵消。而处于固体表面的分子所受的力是不对称的，向内的一面受到固体内部分子的作用力大，而表面层所受的作用力小，因而气体或溶质分子在运动中遇到固体表面时受到这种剩余力的影响，就会被吸引而停留下来。吸附过程是可逆的，被吸附物在一定条件下可以解吸出来。在单位时间内被吸附于吸附剂的某一表面积上的分子和同一单位时间内离开此表面的分子之间可以建立动态平衡，称为吸附平衡。吸附层析过程就是不断地产生平衡与不平衡、吸附与解吸的动态平衡过程。 例如用硅胶和氧化铝作支持剂，其主要原理是吸附力与分配系数的不同，使混合物得以分离。当溶剂沿着吸附剂移动时，带着样品中的各组分一起移动，同时发生连续吸附与解吸作用以及反复分配作用。由于各组分在溶剂中的溶解度不同，以及吸附剂对它们的吸附能力的差异，最终将混合物分离成一系列斑点。如作为标准的化合物在层析薄板上一起展开，则可以根据这些已知化合物的Rf值(后面介绍Rf值)对各斑点的组分进行鉴定，同时也可以进一步采用某些方法加以定量。 仪器与材料 编辑 ⑴载板 变色硅胶 用以涂布薄层用的载板有玻璃板、铝箔及塑料板，对薄层板的要求是：需要有一定的机械强度及化学惰性，且厚度均匀、表面平整，因此玻璃板是最常用的。载板可以有不同规格，但最大不得超过20×20，玻璃板在使用前必须洗净、干燥备用。玻板除另有规定外，用5cm ×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的规格，要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。 ⑵固定相(吸附剂)或载体 薄层层析硅胶薄层层析硅胶最常用的有硅胶G、硅胶GF〈[254]〉、硅胶H、硅胶HF〈[254]〉，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F〈[254]〉等。其颗粒大小，一般要求直径为10～40μm。薄层涂布，一般可分无粘合剂和含粘合剂两种；前者系将固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用

薄层色谱法测定标准操作规程

薄层色谱法测定标准操作规程 目的：建立薄层色谱法测定标准操作规程。（《中华人民共和国药典》2010版附录） 范围：适用于薄层色谱法的测定。 职责：检验员，QC主管。 内容： 1 简述： 薄层色谱法，是将适宜的固定相涂布于玻璃板上，成一均匀薄层。等点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别，杂质检查或含量测定的方法。 2 仪器与材料： 2.1 薄层板： 2.1.1市售薄层板市售薄层板分普通薄层板和高效薄层板，按固定相种类又可分为硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、微晶纤维素、硅藻土、氧化铝、聚酰胺薄膜等薄层板。 2.1.2 自制薄层板在保证色谱质量的前提下，如需对薄层板进行特别处理和化学改性，以适应供试品分离的要求时，也可用实验室自制的薄层板，自制薄层板系指手工（或借助涂布器）将固定相涂布于玻璃板或其他适宜载板上使成为有一定厚度的均匀薄层。常用的固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅胶 H、微晶纤维素等，其粒径一般为10~40um。 2.2 点样器：采用手动、半自动或全自动点样器材，手动点样时一般采用微量毛细管。 2.3 展开容器：应使用适合薄层板大小的平底或双槽薄层色谱专用展开缸，并配有严密的盖子。水平展时使用专用水平展开缸。 2.4 显色与显色装置按各品种项下规定。可采用喷雾显色、浸渍显色或蒸气熏蒸显色，喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸渍显色可用玻璃容器或适宜的展开缸代替；蒸气熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。 2.5 检视装置为装有可见光或紫外光（254nm及365nm）光源及相应的滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄色谱图用，暗箱内光源应有足够的光照度。 3 操作方法： 3.1 薄层板制备： 3.1.1 市售薄层板临用前一般应在110℃活化30min，聚酰胺薄膜不需活化。铝基片薄层板或聚酰胺薄膜均可根据需要剪裁，但须注意剪裁后的薄层板底边的涂层不得有破损，如在储放期间被空气中杂质污染，使用前可用甲醇、二氯甲烷与甲醇的混合溶剂在展开容器中上行展开预洗，取出，晾干，活化后使用。 3.1.2自制薄层板除另有规定外，将1份固定相和3份水或0.2%~0.5%羧甲基纤维素钠水溶液（取羧甲基纤维素钠适量，加水适量，放置使溶胀，加热煮沸至完全溶解，放置，取上清液，即得），在研钵中沿同一方向研磨混匀，去除表面的气泡后，置玻璃板上使涂布均匀，或倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（涂层厚度为0.25、0.3或0.5mm）。取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上

薄层扫描操作规程

Standard Operating Procedure 1、目的：建立薄层扫描操作规程，规范薄层扫描法的操作。 2、范围：本公司产品、原料、辅料、中间体的检验。 3、责任人：QC检验员。 4、正文： 简述：薄层扫描法系指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱有吸收紫外光或可见光的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于药品的鉴别，杂质检查或含量测定。 仪器与用具 4.2.1玻板。除另有规定外，用10cm×10cm，10cm×15cm，20cm×10cm或20cm×20cm的规格，要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。 4.2.2吸附剂或载体。最常用的有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。其颗粒大小一般要求直径为10～40μm。薄层涂布,除另有规定外，一般可分无粘合剂和含粘合剂两种；前者系将吸附剂或载体直接涂布于玻璃板上，后者系在吸附剂或载体中加入一定量的粘合剂，一般常用10％～15％煅石膏(CaSO4·2H2O在140℃烘4小时),混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液％～％)适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。也有含一定改性剂如荧光剂或缓冲液等的薄层。

4.2.3涂布器。应能使吸附剂或载体在玻璃板上手工或自动涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。 4.2.4点样器。一般采用微升毛细管或与之相应的点样器材。 子须密闭。 4.2.6薄层扫描仪。 试药与试液：蒸馏水、羧甲基纤维素钠水溶液％～％)。 操作方法。 4.4.1薄层板制备。除另有规定外,将吸附剂1份和水3份在研钵中向一方向研磨混合,去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为～0.5mm）,取下涂好薄层的玻板，于室温下，置水平台上晾干，在反射光及透射光下检视，表面应均匀，平整，无麻点、无气泡、无破损及污染，于110℃烘30分钟,冷却后立即使用或置干燥箱中备用。或用商品预制板于110℃烘30分钟,冷却后立即使用或置干燥箱中备用。 4.4.2点样。除另有规定外,用点样器点样于薄层板上,一般为圆点，点样基线距底边～1.5cm，样点直径一般不大于3mm,点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。 4.4.3展开。将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜，密封，待展开至规定距离，除另有规定外，一般为8～15cm，取出薄层板，晾干，按质量标准项下的规定检测。 注意事项。 4.5.1展开缸如需预先用展开剂预平衡，可在缸中加入适量的展开剂，必要时并在壁上贴二条与缸一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，盖严，使展开缸平衡或按质量标准规定操作。 4.5.2除另有规定外，薄层扫描方法可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合具体情况，选择反射方式，采用吸收法，或荧光法，用双波长或单波长扫描。测定方法有内标法及外标法，由于影响薄层扫描结果的因素很多，故薄层扫描定量测定应在保证供试品斑点的量在校正曲线的线性范围内的情况下，与对照品同板点样，展开，扫描，积分和计算。

双波长薄层色谱扫描法测定蒲公英总黄酮含量(精)

【摘要】目的：建立蒲公英中总黄酮的含量测定方法。方法：应用双波长薄层色谱扫描法，以芦丁为对照品，测定波长λs=278nm，参比波长 λR=356nm，测定蒲公英中总黄酮的含量。结果：回归方程为 Y=873851X+80.593，r=0.999，RSD=2.6％，蒲公英总黄酮含量为4.236%。结论：用该方法测定蒲公英中总黄酮的含量，操作简便，结果可靠，重复性好。【关键词】双波长薄层色谱扫描法总黄酮芦丁 蒲公英属菊科类为植物蒲公英，是常用的中药类抗菌、抗真菌的药物，具有清热解毒、利胆保肝、医治乳痈疔疮等药理作用。主要成分含有蒲公英甾醇、绿原酸、总黄酮等成份，现已制成注射剂、片剂、糖浆等不同剂型，广泛应用于人与畜各科多种感染性炎症，均有良好疗效。这种中草药价廉物美，药源丰富，应当进一步开发，做到物尽其用。针对其总黄酮的含量，我们采用双波长薄层色谱扫描法对其进行测定，现报道如下。 1 仪器与试剂 1.1 仪器 CS930型双波长飞点式薄层扫描仪（日本岛津）；高硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂生产）；旋转蒸发仪RE52A型（上海亚荣生化仪器厂）；5ul微量进样器（上海医用激光仪器厂）。 1.2 试剂 芦丁对照品（中国药品生物制品检定所）；蒲公英（产地为内蒙，由内蒙古成大方圆有限公司饮片分装）；其它试剂均为分析纯。 2 薄层分析与鉴定 2.1 对照品溶液的配置［1］ 精密称取芦丁对照品25mg，置50ml容量瓶中，以85%乙醇溶解并加至刻度，精密吸取10ml置20ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，备用。 2.2 供试品溶液的制备 精密称取内蒙蒲公英（提前粉碎研磨成细粉）10g，用13倍量药材的85%乙醇加热回流2次，每次1小时［2］，回收蒸发乙醇至干（旋转蒸发仪），残渣加入50ml热水溶解，先用石油醚（50，50，30ml）萃取3次，要下层液（除去叶绿素、胡萝卜素等脂溶性色素），再用正丁醇（50，50，30ml）萃取3次，要上层液（除去蛋白质、多糖类等水溶性杂质），合并正丁醇提取液用85%乙醇30ml溶解，过滤至50ml容量瓶中，再用85%乙醇洗涤滤纸至刻度，摇匀。精密量取10ml置20ml容量瓶中，加60%乙醇至刻度，摇匀，备用。 2.3 分离与鉴定 分别取供试品溶液和对照品溶液各6ul，点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯甲酸水（体积比8：1：1）为展开剂展开［3］，取出，晾干。 3 含量测定 3.1 扫描条件［4］ 反射锯齿扫描，测定波长为λs=278nm，参比波长λR=356nm，背景校正ON，灵敏度中，狭缝1.2mmⅹ1.2mm，SX=3。 3.2 标准曲线制备 取芦丁对照品溶液，以不同点样量（2.0，4.0，6.0，8.0，10.0ul）点于同一硅胶G板上，相同展开剂展开，取出，晾干后进行扫描，以峰面积积分

薄层色谱扫描仪标准操作规程

XXXXXXXXXX仪器设备标准操作规程 1 目的：建立KH-2100型薄层色谱扫描仪仪使用标准操作规程。 2 范围：KH-2100型薄层色谱扫描仪操作程序。 3 责任：化验室操作员。 4 使用说明： 4.1 开机 4.1.1 将KH-2100 型薄层色谱扫描仪电源接通，插好连接KH-2100型薄层色谱扫描仪和计算机USB连接线。 4.1.2 打开KH-2100型薄层色谱扫描系统（点击计算机桌面上“KH-2100 型薄层色谱扫描系统”图标）。 4.1.3 打开KH-2100型薄层色谱扫描仪的电源开关。 4.1.4 仪器自检，KH-2100 型薄层色谱扫描系统的工作站软件已打开，将显示仪器自检结果（X、Y复位检测、单色仪检测、氘灯光源检测、卤钨灯光源检测）。 4.1.5 进行光源寿命检查，检测光源的光强是否符合检测标准。 注：以上操作在薄层板扫描前30min左右完成，目的是预热仪器。 4.2 薄层板扫描 4.2.1 填写用户管理数据：点击“样品扫描”窗口工具栏中的【用户管理】

按钮，输入报告人、测试时间、测试地点、设备名称、设备编号、薄层板类型、样品、标准品、湿度、温度、展开剂、显色剂、备注，点击【确定】按钮; 4.2.2 数据测量将已显色的薄层板上的斑点位置进行测量（测量斑点距起点边缘的距离）； 4.2.3 放置薄层板将薄层板放入扫描仪的载物台，薄层板边缘尽量靠近载物台内侧（薄层板前沿接近舱门方向）； 4.2.4 设置扫描参数：在【参数设定】菜单中根据测试类型选择样品，样品数目（薄层板上斑点数目），起点位置（第一个斑点距薄层板最近边缘的距离），纵向扫描范围（根据斑点的位置确定范围），再根据斑点之间的距离确定等间距扫描或不等间距扫描（如果是等间距扫描，只需单击【等间距扫描】，填写等间距距离和起点位置即可，如果是不等间距扫描，单击【不等间距扫描】，依次填写斑点距离数值）。 4.3 开始扫描：点击样品扫描窗口工具栏中的【开始测试】按钮，等待测试完毕。 4.4 处理扫描数据：如果扫描出的样品峰形为倒峰，点击【荧光处理】；察看自动分峰的结果，对分峰有误的地方采用手动修改方式：添加峰、删除峰、修改峰、分开峰、合并峰和设定基线。 4.5 保存扫描结果：点击样品扫描窗口工具栏中的【保存】按钮。 4.6 计算含量：选中主窗口工具栏中的【含量计算】按钮，进入含量计算窗口，输入标准品浓度，然后依次点击峰图，填写样品量，点击【样品】（标准品）按钮，再接着重复上一操作选择下一个样本，所有的标准品（样品）选择完毕后，点击【计算含量】。 4.7 点击含量计算窗口的【保存】按钮，保存所有数据。

薄层色谱扫描仪

KH-2100A法定型双波长薄层色谱扫描仪 文章类别：法定型薄层色谱扫描仪发表日期：2007-5-16 21:16:44 KH-2100A法定型双波长薄层色谱扫描仪 ----中药GMP控制专用机型 上海科哲生化科技有限公司是国内最大最专业的薄层色谱仪器公司，受到上海科委的重点扶持，是国内唯一的法定型薄层色谱扫描仪生产商。针对基层用户方法相对固定，分析任务较为繁重，对易用性、稳定性要求较高，我公司将原来的KH-2000升级为KH-2100，性能更为优越，将2000版、2005、2010版药典所有薄层定量品种、方法预置在机器内，形成药厂专用薄层色谱扫描仪，使用者只需动手，不需动脑即可完成操作；产品与日本岛津CS-9301PC薄层色谱扫描仪处于同一档次，是中药企业质控的最优选择。 友情提示： 所谓法定薄层色谱扫描仪是指符合2005版药典一部薄层色谱扫描法、《中国药品检验标准操作规范》中的《薄层色谱扫描法》、《药品检验仪器检定规程》中的《薄层色谱扫描仪检定规程》的详细规定，由氘灯-钨灯组合光源、单色仪、X-Y移动平台组成，波长准确度：≤±5nm；背景漂移：≤±0.5Abs；基线噪声：≤±0.02Abs；重复性误差：RSD≤2.0%；扫描方向为沿展开方向自下而上扫描的非成像型薄层色谱扫描仪。 主要优点： 1、拥有国家计量认证，完全符合有关要求，使用无风险； 2、符合国家《薄层色谱扫描仪检定规程》所有要求，方法合法； 3、拥有ISO9001：2000质量保证体系，性能稳定，故障少； 4、药典所有薄层定量品种、方法预置在机器内，随时调用，非常方便； 5、定量准确，价格合理，性价比高； 6、自动化程度高，操作简单，适合成批分析； 仪器组成：

薄层扫描、气相标准加入法

标准溶液加入法 精密称(量)取某个杂质或测成分的对照品适量,配成适当浓度的对照品溶液,取一定量,精密加入到供试品溶液中,根据外标法或内标法测定杂质或主成分量,再扣除加入对照品溶液含量,即得供试品溶液中某个杂质和主成分含量. 也可以按下述公式进行计算,加入对照品溶液前后校正因子应相同,即: Cx Cx Cx A ?+=Ax is 则待测组分的浓度Cx 可通过如下公式进行计算: 式中: 1)/(-?=Ax Ais Cx Cx Cx 为供试品中组分的浓度 Ax 为供试品中组分的色谱峰面积 △Cx 为所加入已知浓度的待测组分对照品的浓度 Ais 为加入对照品后组分的色谱峰面积 薄层色谱扫描法 系指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱中可吸收紫外光或可见光的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于鉴别、检查或含量测定。测定时可根据不同薄层扫描仪的结构特点，按照测定方式扫描测定，一般选用反射方式，采用吸收法或荧光法，除另有规定外，含量测定应使用市售薄层板。 扫描方法可采用单波长扫描或双波长扫描。如采用双波长扫描，应选用待测斑点无吸收或最小吸收的波长为参比波长，供试品色谱中待测斑点的比移值和光谱扫描得到的吸收光谱或测得的光谱最大吸收与最小吸收应与对照品相符，以保证测定结果的准确性。薄层扫描定量测定应保证供试品斑点的量在线性范围内，必要时可适当调整供试品溶液的点样量，供试品与对照品同板点样、展开、扫描、测定和计算。 薄层色谱扫描用于含量测定时，通常采用线性回归二点法计算，如线性范围很窄时，可用多点法校正多项式回归计算。供试品溶液和对照品溶液应交叉点于同一薄层板。供试品点样不得少于2个，对照品每一浓度不得少于2个.扫描时，应沿展开方向扫描，不可横向扫描。

药品薄层色谱扫描法

德信诚培训网 更多免费资料下载请进：https://www.wendangku.net/doc/d515642803.html, 好好学习社区 药品薄层色谱扫描法 一 目 的：制定薄层扫描检查法，规范薄层扫描测定的操作。 二 适用范围：适用于薄层扫描法的测定。 三 责 任 者：品控部。 四 正 文： 1.简述 薄层扫描法指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱有吸收紫外光或可见光的斑点或对经照射能激发产生荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于药品的鉴别、杂质检查或含量测定。 2.仪器 2.1 仪器构成 薄层扫描法所用的仪器薄层扫描仪。该仪器主要同光源、单色器、样品室、薄层板台架、检测器、记录仪及数据处理系统等部分组成。 光源：色括氘灯（200～370nm ）、钨灯（370～700nm ）或氙灯，有的还加有汞灯，光源的转换通过转动反射镜而完成。 单色器：包括光栅与夹缝。入口夹缝固定，出口夹缝可根据需要调整其高度与宽度。由光源发出的复合光，经光源反射镜反射后进入入口夹缝，经光栅色散后由准直镜反射到出口夹缝得到单色光，再经平面镜向下反射到薄层板上。 薄层板台架及驱动装置：仪器中的薄层板台架可完成薄层板的X 轴和Y 轴方向的移动。 检测器：包括监测用光电倍增管及反射测定用与透射测定用的光电倍增管。 反射测定时，光束照射到薄层板上斑点以前的光，一部分被石英窗板反射由监测光电倍增管接受，另一部分照射到斑点，除部分光被样品吸收后作为吸收度信号。透射测定时，由透射光电倍增管代替反射光电倍增管，它的输出信号与监测光电倍增管的输出信号之比，经对数转换后得到透射测定的吸收度信号。 数据处理：设定适当参数，采集检测器的吸收度信号进行积分计算，通常仪器上还具有对信号作不同处理的功能。如背景校正、提高信噪比、工作曲线直线化、平滑基线等，按要求进行数据的再处理，然后送至打印机，打印谱图及报告。 2.2 仪器性能检定 2.2.1 仪器波长准确度的检查 用低压汞灯在200～700nm 波长范围内以荧光方式对

药品薄层色谱扫描法

药品薄层色谱扫描法 一目的：制定薄层扫描检查法，规范薄层扫描测定的操作。 二适用范围：适用于薄层扫描法的测定。 三责任者：品控部。 四正文： 1.简述 薄层扫描法指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱有吸收紫外光或可见光的斑点或对经照射能激发产生荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于药品的鉴别、杂质检查或含量测定。 2.仪器 2.1 仪器构成薄层扫描法所用的仪器薄层扫描仪。该仪器主要同光源、单色器、样品室、薄层板台架、检测器、记录仪及数据处理系统等部分组成。 光源：色括氘灯（200～370nm）、钨灯（370～700nm）或氙灯，有的还加有汞灯，光源的转换通过转动反射镜而完成。 单色器：包括光栅与夹缝。入口夹缝固定，出口夹缝可根据需要调整其高度与宽度。由光源发出的复合光，经光源反射镜反射后进入入口夹缝，经光栅色散后由准直镜反射到出口夹缝得到单色光，再经平面镜向下反射到薄层板上。 薄层板台架及驱动装置：仪器中的薄层板台架可完成薄层板的X轴和Y轴方向的移动。 检测器：包括监测用光电倍增管及反射测定用与透射测定用的光电倍增管。 反射测定时，光束照射到薄层板上斑点以前的光，一部分被石英窗板反射由监测光电倍增管接受，另一部分照射到斑点，除部分光被样品吸收后作为吸收度信号。透射测定时，由透射光电倍增管代替反射光电倍增管，它的输出信号与监测光电倍增管的输出信号之比，经对数转换后得到透射测定的吸收度信号。 数据处理：设定适当参数，采集检测器的吸收度信号进行积分计算，通常仪器上还具有对信号作不同处理的功能。如背景校正、提高信噪比、工作曲线直线化、平滑基线等，按要求进行数据的再处理，然后送至打印机，打印谱图及报告。 2.2 仪器性能检定 2.2.1 仪器波长准确度的检查用低压汞灯在200～700nm波长范围内以荧光方式对空白的硅胶薄层板扫描零吸收图谱，图谱中峰位波长与相应已知波长的差值即为波长准确

双波长薄层扫描法测定齐墩果酸片的含量

双波长薄层扫描法测定齐墩果酸片的含 量 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 【摘要】目的：建立齐墩果酸片的含量测定方法。方法：采用双波长薄层扫描法，以环己烷-丙酮-醋酸乙酯-冰醋酸（65:25:10:1）为展开剂，扫描波长λS=220nm，λR=330nm。结果：齐墩果酸在1～5μg范围内线性关系良好（r=0.999），平均回收率99.11%，RSD为1.56%。结论：该法简便快速，结果稳定，重现性好。 【关键词】薄层扫描法齐墩果酸 现代研究表明齐墩果酸具有护肝降酶、抗炎、强心利尿、抗肿瘤等作用［1］，其片剂临床上除广泛应用于急、慢性肝炎的辅助治疗外，仍用于配合肿瘤病人的手术、放疗、化疗，促进免疫功能恢复以及再生障碍性贫血、红斑狼疮等免疫缺陷性疾病。本研究采用双波长薄层扫描法测定齐墩果酸片的含量。 1 仪器与试药

日本岛津CS-9301双波长飞点薄层扫描仪（日本岛津）；电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；点样用定量毛细管（Drummond Scientific Co. USA）；硅胶G预制板（上海信谊仪器厂）；齐墩果酸对照品（中国生物生物检定所）；齐墩果酸片（陕西白云制药有限公司）；所用试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 对照品溶液的制备 精密称取齐墩果酸对照品10.0mg，置10ml量瓶中，加乙醇适量，超声10min，使充分溶解，加乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。 2.2 供试品溶液的制备 取齐墩果酸片20片，精密称定，研细。精密称取细粉适量（约相当于齐墩果酸10mg），置10ml量瓶中，加乙醇适量，超声10min，使充分溶解，加乙醇稀释至刻度，摇匀，过滤，即得。 2.3 薄层色谱条件 硅胶G薄层板，展开剂环己烷-丙酮-醋酸乙酯-冰醋酸（65:25:10:1）。对齐墩果酸斑点在300～700nm范围内扫描，确定扫描条件为双波长反射锯齿扫描，测定波长为220nm，参比波长为330nm，狭缝0.4mm×0.4mm，SX=3。

薄层扫描法

薄层扫描法 一、定义 薄层扫描法(TLCS)又称原位定量薄层色谱扫描法（QTLC）系指用一定的波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱中有紫外或可见吸收的斑点或经照射能激发产生荧光斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分值用于药品定性定量的分析方法。 回顾薄层色谱法（TLC) 1、薄层板的制备（硅胶板,Al2O3板，聚酰胺薄膜等） 2、点样（选择合适的展开剂，在薄板底1cm处画基线，点样） 3、展开（浸入展开剂，展开到距薄板顶端1~2cm) 4、检视(在紫外光灯下观察斑点） 了解一下薄层扫描仪 薄层扫描仪的组成及主要功能 薄层色谱扫描仪有多个厂家生产，型号不同，仪器外形、光路系统及某些功能也有差异，但其基本结构及主要功能是基本相同的。每台仪器都包括主机、数据处理及信号输出等部分。 （1）分光器及测量范围 大多数薄层扫描仪的分光器为光栅，少数为棱镜，极个别的用滤光片，其测量范围光栅为200-800nm，棱镜为200-2500nm。 （2）光源及检测器 光源室具有可见光源钨灯，波长范围为400-800，紫外光源氘灯波长范围为200-400nm，荧光光源为氙灯或汞灯。操作时可通过光源选择杆来变换光源选择镜的位置；检测器一般为光电倍增管。

表7-5-2 国外几种主要专用薄层色谱扫描仪 二、TLCS基本原理与方法 薄层扫描法可分为薄层吸收扫描及薄层荧光扫描两类方法。

1. 薄层吸收扫描法的基本原理 薄层吸收扫描法是用可见光或紫外线的单色光照射展开后的薄层色谱板，测定薄层色谱斑点(简称斑点)的吸光度(A)随展开压离(L)的变化，而获得A —L成A—Rf曲线，即薄层色谱扫描图(简称扫描图)。 曲线上的色谱峰峰面积可用于定量分析。由于薄层板存在着明显的散射现象，而使斑点中物质的浓度与吸光度的关系不服从Beer定律，所以需田Kubelka—Munk(古柏尔卡—曼克)理论来描述。该方程式是薄层扫描法的定量分析基础。定量校正方法可分为曲线校直法及非线性回归法等。 设薄板固定相的厚度为X,入射光的强度为I.,当透过厚度x的的固定相后，照射在微分薄层厚度dx上的入射光强与反射光强分别为i和j时，如左图。其入射光强的增量与反射光强的增量分别符合以下两个微分方程： 即光照射到厚度为x的薄层后，光被吸收及散射。在入射方向，光强度因为被吸收与散射而减弱；在入射的反方向，则光强度因散射而增强。解上述方程得：

薄层色谱法实践技巧

薄层色谱法实践技巧 目的： 1. 药典：薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与事宜的对照物按同法所得的色谱图对比，并可用薄层扫描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。 2. 如果你是做鉴别的话，薄层的系统适用性主要是做检测限和分离度； 3. 如果你是做含量测定，比如说用薄层扫描法，薄层的系统适用性应该做线性范围、同板精密度、异板精密度、回收率； 4. 手工铺制的板子，只适宜于定性分析，不宜于分离定量； 5. 化学药一般是作有关物质，需要一定的载药量，所以要适当增加厚度； 6. 中药一般较难分离，需要薄板，以增加分离度； 7. 手工铺制的板子常用的有：硅胶G板和硅胶CMC-Na板。前者是煅石膏（石膏经140℃烘烤3—4小时）与硅胶按1—1.3：10混合均匀。每份硅胶G加水2—3份调成糊状，即可使用。后者的操作各位大虾已有论述。 8. 如果你铺板目的是做分析用的话，肯定得很仔细用心；如果仅是天然药化那种粗略检查过柱子得到的馏分纯度，那就没有必要这么复杂了，也就是说速度可以快点，板的要求也没有必要这么高； 9. 单纯的手铺板，技巧要求很高的，如果有铺板器（也是完全手动的那种），铺出的板子基本上可以保证均一的。 10. 要喷硫酸乙醇并定量的最好铺水板；铺水板是最考技术的，主要是碾磨技术，大家可以探讨一下； 11. 硫酸乙醇显色作定量分析的品种，但凡加了CMC-Na的板都易烘糊，尤其是温度高于100度时，后改用不加CMC辅的水板来作，就不会有烘糊现象，故也可推论CMC易于与硫酸起糊化反应。感觉辅水板关键是硅胶G与水的比例要达1：3.5左右，而且研磨后要尽快涂布，不能易于凝固而难于涂布。 展开： 12. 药典：展开容器应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密的盖子，底部应平整光滑，或有双槽。上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或双槽展开缸，展开时须能密闭。水平展开用专用的水平展开缸。 13. 药典：将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点5mm 为宜（切勿将样点侵入展开剂中），密封顶盖，待展开至规定距离，除另有规定外，一般为8～15 cm，溶剂前沿达到规定的展距，取出薄层板，晾干，按正文项下的规定检测。 14. 展开剂的选择（分离单体）： （1）粗分，也就是当你的样品极性范围比较大的时候，可以直接采用极性较小的流动相。然后将前沿、原点以及前沿及原点间的硅胶分别刮下，提取。这样，样品就被分为几个部分，而各个部分的极性相差也比较小了。然后再将这几部分分别进行下面的细分TLC。 （2）细分。经过粗分之后，我们一般对各个部分的极性都能够做到心中有数了。比如，被冲到前沿的样品，要采用更小极性强度的流动相，而死吸附部分，则需要较大强度的流动相。我们在初步确定了流动相的极性强度之后，可以自己设计几个溶剂系统。在选择流动相的组成的时候，可以参考snyder的溶剂分类，从质子受体，质子给体和偶极作用的溶剂中各选

薄层扫描法测定药物的含量

薄层扫描法测定药物的含量 一、实验目的 1.掌握处理样品的方法和思路。 2.掌握薄层扫描法测定药物含量的原理和实验操作。 二、仪器与试剂 1.仪器 Mettler AL204电子天平双波长扫描仪 HHS型电热恒温水浴锅分液漏斗规格：125mL、250mL 容量瓶规格：10mL、25mL、50mL 、100mL 刻度移液管规格：1mL、2mL、5mL、10mL 圆底烧瓶规格：50mL、100mL、250mL 硅胶G（薄层层析用）玻璃板铺板器 锥形瓶规格：250mL 滤纸研钵球形冷凝管 2.试剂 甲醇乙醇二氯甲烷醋酸等均为分析纯 三、实验原理 薄层扫描法是以一定波长的光照射展开后的薄层色谱板，测定其对光的吸收或所发出的荧光，进行定量分析的方法。其原理与双波长分光光度计相似，从光源发出的光，通过两个单色器分光后，成为不同波长的λ1和λ2，斩光器使它们交替地照射到薄层上，经透射或反射后分别由光电倍增管接收，再输出电讯号，由对数放大器变换成吸光度，记录下的讯号是λ1和λ2两波长吸光度之差。选择斑点中化合物的吸收峰波长作为测定波长、选择化合物吸收光谱的基线部分，即化合物无吸收的波长作为参比波长。用一定波长的光束对薄层板进行扫描，记录其吸光值随展开距离的变化，得到薄层色谱扫描曲线，曲线上的每一个色谱峰相当于薄层上的一个斑点，色谱峰高或峰面积与组分的量之间有一定的关系，比较对照品与样品的峰高或峰面积，可得出样品中待测组分的含量。 四、实验内容 实验题目：益新颗粒（人参皂苷Rg1）保肝灵颗粒（黄芪甲苷） 脑复清胶囊（阿魏酸）胃舒胶囊（盐酸小檗碱） 扑感片（马来酸氯苯那敏）颈复康冲剂（芍药苷） 1.处理样品方法的设计 要求：选择任意一项实验题目，查阅文献资料，设计合理的提取分离纯化样品的实验方法（至少两种方法）。 2.薄层扫描法测定主成分含量 要求：从设计的多种处理样品方法中选择最优方案，此方案所处理的样品，选择适宜展开系统展开后，采用薄层扫描法测定时，杂质对主成分无干扰，得到满意的含量测定结果。 五、讨论 1.比较不同方法处理样品的优缺点。 2.薄层扫描法测定样品主成分含量时，遇到哪些困难？并如何解决？ 3.薄层扫描法的定量方法。

薄层色谱法标准操作规程

薄层色谱法标准操作规程 1 简述：薄层色谱法，是将适宜的固定相涂布于玻璃板上，成一均匀薄层。等点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别，杂质检查或含量测定的方法。 2 仪器与材料： 2.1 玻板：除另有规定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的规格，要求光滑，平整、洗净后的不附水珠，晾干。 2.2 固定相或载体：最常用的有硅胶G、硅胶GF、硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。其颗粒大小，一般要求直径为10—40μm。薄层涂布，一般可分无粘合剂和含粘合剂两种；前者系将固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用10—15%煅石膏（CaSO4·2H2O在140℃烘4小时），混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液（0.5—0.7%）适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。也有含一定展开液或缓冲液的薄层。 2.3 涂布器：应能使固定相或载体在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。 2.4 点样器：常用具支架的微量注射器或定时毛细管，应能使点样位置正确集中。 2.5 展开室：应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密盖子，除另有规定外，底部应平整光滑，应便于观察。 3 操作方法： 3.1 薄层板制备：除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2—0.3mm），取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟。即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。 3.2 点样：除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，点样直径为2——4mm，点间距离约为1.5—2.0cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。 3.3 展开：展开室如需预先用展开剂饱和，可在室中加入足够量的展开剂，并在壁上贴二条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖，使系统平衡或按正文规定操作。将点好样品的薄层板放入展开室的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5—1.0cm（切勿将样点浸入展开剂中），密封室盖，等展开至规定距离（一般为10—15cm），取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测，如需用薄层扫描仪对色谱斑点作扫描检出，或直接在薄层上对色谱斑点作扫描定量，则可用薄层扫描法。薄层扫描的方法，除另有规定外，可根据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合具体情况，选择吸收法或荧光法，用双波长或单波长扫描。由于影响薄层扫描结果的因素很多，故应在保证供试品的斑点在一定浓度范围内呈线性的情况下，将供试品与对照品在同一块薄层上展开后扫描，进行比较并计算定量，以减少误差。各种供试品，只有得到分离度和重现性好的薄层色谱，才能获得满意的结果。 4 注意事项： 4.1 所用玻璃板应洗净不挂水珠，光滑平整。

薄层色谱法标准操作规程

标 准 操 作 规 程 STANDARD OPERATION PROCEDURE 编 号 SOP -02-QC -014 题 目 薄层色谱法标准操作规程 版本号 0.0 生效日期 2015年12月1日 编制部门 QC 签名/日期 审核部门 QC 经理 签名/日期 审核部门 QA 经理 签名/日期 批 准 质量副总经理 签名/日期 颁发部门 质量保证部 分发部门 QC 1目的：规范薄层色谱法的标准操作程序，使其操作过程规范化，避免人为错误。 2适用范围：适用于薄层色谱法的标准操作。 3责任：QC 人员对本SOP 实施负责。 4内容 薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图和适宜的标准物质按同法所得的色谱图对比，亦可用薄层色谱扫描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。 4.1.仪器和材料 4.1.1.薄层板 按支持物的材质分为玻璃板、塑料板或铝板；按固定相种类分为硅胶薄层板、键合硅胶板、微晶纤维素薄层板、聚酰胺薄层板、氧化铝薄层板等。固定相中可加入黏合剂、荧光剂。硅胶薄层板常用的有硅胶G 、硅胶254GF 、硅胶H 、硅胶254HF 、G 、H 表示含或不含石膏黏合剂。254F 为在紫外光254nm 波长下显绿色背景的荧光剂。按固定相粒径大小分为普通薄层板（10?40μm)和髙效薄层板(5?10μm)。 在保证色谱质量的前提下，可对薄层板进行特别处理和化学改性以适应分离的要求，可用实验室自制的薄层板。固定相颗粒大小一般要求粒径为10?40μm 。玻璃板应光滑、平整，洗净后不附水珠。

4.1.2.点样器一般采用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器材。 4.1.3.展开容器上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或双槽展开缸，展开时需能密闭。水平展开用专用的水平展开槽。 4.1.4.显色装置喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸渍显色可用专用玻璃器械或者适宜的展开缸代用；蒸汽熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。 4.1.5检视装置为装有可见光、254nm、365nm紫外光光源及相应的滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄图像用。暗箱内光源应有足够的光照度。 4.1.6.薄层色谱扫描仪系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点，进行扫描，将扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定量的分析仪器。 4.2.操作方法 4.2.1.薄层板制备 市售薄层板临用一般应在110°C活化30分钟。聚酰胺薄膜不需活化。铝基片薄层板、塑料薄层板可根据需要剪裁，但须注意裁后的薄层板底边的固定相层不得有破损。如在存放期间空气中杂质污染，用三氯甲烷、甲醇或二者的混合溶剂在展开缸中上行展开预洗，晾干，110℃活化，置干燥器中备用。 自制薄层板除另有规定外，将1份固定相和3份水(或加有黏合剂的水溶液，如0.2%?0.5%羟甲基纤维素钠水溶液，或规定度的改性剂溶液）在研钵中按同一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布进行涂布（厚度为0.2?0.3mm)，取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干后，在110℃烘30分钟，随即置于有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度，在反射光及透视光下检视，表面应均匀、平整、光滑，并且无麻点、无气泡、无破损及污染。 4.2.2.点样 除另有规定外，在洁净干燥的环境中，用专用的毛细管点样于薄层板上，一般为圆点，位置应正确、集中。点样：基线距底边10～15mm,高效薄层板一般基线离底边为8～10mm,圆

CS-9301薄层色谱扫描仪操作规程

1 仪器组成及开机 1.1 仪器组成CS—9301薄层扫描仪由主机、工作站及打印机组成，它适合于薄层色谱、纸色谱或具有相同可扫描性质的色谱进行定性、定量，它可采用飞点式实现高速扫描。 1.2 开机 1.2.1 接通电源，把主机电源―Power‖ 钮拨到开―On‖位置。 1.2.2 打开计算机及打印机开关，计算机进入Windows界面(Windows 3.X或Win95) 1.2.3 标，仪器通过自检进入主菜单界面。 2 扫描条件的选择 2.1 按实验所要求的波长范围选择光源，移动主机上的光源转换杆到合适的位置上（370nm 以下选择氘灯，370nm以上选择钨灯，若进行荧光扫描，应开启汞灯或氙灯）。 2.2 扫描方式(Photo mode)的选择 2.2.1 单击主菜单上的Scanner，从下拉菜单中选择Parameters。 2.2.2 从出现的对话框中单击Change，从下拉菜单中选择Control parameters。 2.2.3 从出现的对话框中的Photo mode栏中选出适当的扫描方式。 2.3 光谱扫描在要确定的波长时，可进行光谱扫描。 2.3.1 打开主机上盖，放入薄层板，并用固定夹夹好。 2.3.2 通过主机面板上的方向键将光斑移至待测斑点中心。 2.3.3 单击主菜单上的Scanner，从下拉菜单中选择Spectrum Scan。 2.3.4 从出现的对话框中选择CH1，得样品斑点光谱图。 2.3.5 通过主机面板上的方向键将光斑移至待测斑点上方的空白处。 2.3.6 单击主菜单上的Scanner，从下拉菜单中选择Spectrum Scan。 2.3.7 从出现的对话框中选择CH2，得背景光谱图。 2.3.8 单击主菜单上的Process，从下拉菜单中选择Calculation。 2.3.9 从出现的对话框中进行选择：―A‖栏中选―CH1‖ ―Operation‖栏中选―—「Minus」‖ ―B‖栏中选―CH2‖ ―C‖栏中选―CH3‖ 2.3.10 直接从通道3（CH3）中所显示的谱图选择最佳测定波长（Sample wave）及参比长（reference wave）的位置，将鼠标移至该处单击右键，横坐标上即可显示该处的吸收波长。

薄层色谱扫描法标准操作规程

薄层色谱法标准操作规程 共2页第1页 1目的：建立薄层色谱法标准操作规程，使操作 规范、准确。 2范围：适用于薄层色谱的检验。 3职责：质检员按此规程进行操作。。 4规定： 4.1 引用标准：《中国药典》2010年版。 5.仪器与材料相关要求 5.1薄层板 5.1.1市售薄层板：市售薄层板分普通薄层板和高效薄层板，如硅胶薄 层板、硅胶GF254薄层板、聚酰胺薄膜等。

5.1.2自制薄层板：在保证色谱质量的前提下，如需对薄层板进行特别处理和化学改性，以适应供试品分离的要求时，也可用实验室自制的薄层板。最常用的固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF2 54、微晶纤维素等，其颗粒大小一般要求直径为10～40μm，加水或用梭甲基纤维素钠水溶液（0.2%~0.5%）适量调成糊状，均匀涂布于玻板上。使用涂布应能使固定相在玻板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。玻板应光滑、平整，洗净后不附水珠。 5.2点样器：一般采用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器材。 5.3 展开容器：上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或有双槽展开缸，展开时须能密闭，水平展开用专用的水平展开缸。 5.4显色装置：喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出，浸渍显色可用专用玻璃器械或用适宜的展开缸代用；蒸气熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。 5.5检视装置：为装有可见光、254nm及365nm紫外光光源及相应的滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄图像用，暗箱内光源应有足够的光照度。 5.6薄层色谱扫描仪：系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点，进行扫描，将扫描得到的谱图和积分 6.操作方法 6.1 薄层板制备 6.1.1除另有规定外，将1份固定相和3份水（或加有黏合剂的 水溶液）在研钵中按同一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2~ 0.3mm），取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干后， 在110℃烘30分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度，在反射光及透视光下检视，表面应均匀、平整、光滑，

薄层色谱检查法标准操作规程

目的：规范薄层色谱法检验操作规程，保证检验的质量。 范围：适用于本厂用薄层色谱法检查的物料及产品。 责任：质量控制室人员。 内容： 1薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的对照物按同法所得的色谱图对比，并可用薄层扫描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。 2仪器与材料 2.1薄层板：按支持物的材质分为玻璃板、塑料板或铝板等；按固定相种类分为硅胶薄层板、键合硅胶板、微晶纤维素薄层板、聚酰胺薄层板、氧化铝薄层板等。固定相中可加入黏合剂、荧光剂。硅胶薄层板常用的有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254、G、H表示含或不含石膏黏合剂。F254为在紫外光254nm波长下显绿色背景的荧光剂。按固定相粒径大小分为普通薄层板10～40μm和髙效薄层板 5-10μm 保证色谱质量的前提下，可对薄层板进行特别处理和化学改性以适应分离的要求，可用实验室自制的薄层板。固定相颗粒大小一般要求粒径为10? 40pm。玻板应光滑、平整，洗净后不附水珠。 2.2点样器：一般采用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器材。 2.3展开容器：上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或双槽展开缸，展开时须能密闭。水平展开用专用的水平展开缸。 2.4显色装置：喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸溃显色可用专用玻璃器械或用适宜的展开缸代用；蒸气熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。 2.5检视装置：为装有可见光、254nm及365nm紫外光光源及相应的滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄图像用，暗箱内光源应有足够的光照度。 2.6薄层色谱扫描仪：系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点，进行扫描，将扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定量的分析仪器。 3操作方法