沙门氏菌属诊断血清说明书

沙门氏菌属诊断血清学试验操作程序

1.目的

制定沙门氏菌属诊断血清使用程序，指导对沙门氏菌属进行血清学分型。2.原理

用沙门氏菌属的代表菌株制成灭活菌抗原分别或混合免疫家兔所得的血清，经吸收出去非特异性凝集素后制成，通过凝集试验原理供沙门氏菌属常见菌型定型。

3.试剂及实验设备

3.1沙门氏菌属诊断血清：宁波天润生物药业有限公司生产的规格为11种的沙

门氏菌属诊断血清

3.2试剂保存：2~8°C避光保存，防止冻结，在有效期内使用。

3.3实验设备：玻片、吸样枪、接种环、水浴箱、玻璃管、血平板、营养琼脂、

电热高温接种灭菌器。

4.程序步骤

4.1将诊断血清于冰箱取出后平衡至室温。

4.2选择经初步生化检测符合沙门菌生物特性的疑似菌落。

4.3菌群分析

将经18~24h血平板上纯培养的待检菌，先用O多价A~F群血清进行凝集试验，如阳性，提示待检菌可能属于A~F群范围内，因97%以上的沙门菌都包括在A~F6个O群之内，如果不凝再使用其他O抗血清进行凝集试验，如与其中一种抗血清凝集，待检菌即属于相应的菌群。若与多价O抗血清不凝集，有如下3种可能：①含有Vi抗原；②A~FO群之外的沙门菌；③沙门氏菌属以外的细菌。可按下述方法进一步检测，将纯菌落用无菌生理盐水洗下，制成浓菌液，再分成2份。1份不经处理，为活菌液，另1份放100°C水浴中30min，为加热菌液。取活菌与Vi抗血清，取加热菌与Vi抗血清凝集，加热菌与Vi抗血清、A~F多价O抗血清分别进行玻片凝集试验。根据结果作如下分析：①活菌与Vi 抗血清凝集，加热菌与Vi抗血清凝集者，可能属于C群或D群菌，用O7和O9抗血清定群；②活菌与Vi抗血清不凝，可能属于A~FO群之外的沙门菌或其他

菌属细菌，需进行生化试验定属，若符合沙门氏菌属细菌特征，可送CDC鉴定；

③加热菌与Vi抗血清凝集，而与A~F多价O抗血清不凝集者，可报告为阴性。

4.4血清型分析

菌群确定后，分析被检菌的鞭毛抗原成分。先分析第1相鞭毛抗原，再分析第2相鞭毛抗原。第1相鞭毛抗原分析：根据菌群分析结果，分别选用第1相鞭毛因子血清进行玻片凝集试验。第2相鞭毛抗原分析：所用抗血清，通常是复合因子（1、2、3、5、6、e、n、I、w）血清。单相菌，如第1相已确定，可结合菌群分析及生化反应结果判断血清型。如为双相菌，只分析出第1相鞭毛抗原，大多数也可结合菌群分析和生化结果判断血清型，必要时进一步探索第2相鞭毛抗原。若只分析出第2相鞭毛抗原，须进一步探索分析第1相抗原。探索另1相抗原可按下述方法和步骤进行。如“小内管”法，一支已融化半固体琼脂，插入一支无菌两端相通小玻璃管于培养基当中，长度稍高出半固体液面。待琼脂泠却凝固，用接种环取1~2环待抑制相H抗血清，放入小内管的琼脂表面，然后接种被诱导菌株于小内管含抗血清琼脂层面，35°C孵育4~6h或过夜，取小内管外半固体琼脂层生长培养物，接种于平板或直接做凝集反应，可获得待诱导相的菌株。有些种的确定是靠鞭毛抗原中的微小差异来分析的，因而获得丰富鞭毛抗原的培养物十分重要。

4.5将经18~24h血平板上纯培养的待检菌，用生理盐水制备2麦氏单位的菌悬

液，取诊断血清20μL于洁净玻片上，然后取20μL待检菌悬液与血清混匀，轻轻摇动玻片，1min内呈现明显凝集者为阳性，呈均匀浑浊者为阴性，每次凝集试验均应以生理盐水作为阴性对照试验。

4.6根据其生化反应和与O抗血清、Vi抗血清、H抗血清的凝集结果对照沙门

氏菌属国内常见菌型诊断抗原表，确定沙门菌的菌型。

4.7沙门氏菌属国内常见菌型诊断抗原，见附表

5.质量控制

O多价A~F群血清选择伤寒沙门菌ATCC14028为阳性对照；大肠埃希菌ATCC25922为阴性对照

附表：沙门氏菌属国内常见菌型诊断抗原表

沙门氏菌的检验

沙门氏菌得检验 食品学院14食品质量与安全１班 刘文敏柳基炜卫杰恒温紫君 2 2 2 ２ 摘要:本实验采用GB／T4７89。4-２０10得检测方法测定鸡场中得沙门氏菌、通过本实验学习沙门氏菌得检测方法与技术,了解沙门氏菌得一些生化特性;本实验先用显色培养基找出可疑菌落,再做生化试验找出可疑得典型性得沙门氏菌,再通过血清学试验最终确定就是否为沙门氏菌属。 关键词:沙门氏菌接种生化试验血清学鉴定 前言 沙门氏菌病就是公共卫生学中具有重要意义得人畜共患病种之一,其病原沙门氏菌属于肠道细菌科。沙门氏菌就是一个统称,泛指 20００多种有紧密连系得细菌,包括引起食物中毒,导致胃肠炎、伤寒与副伤寒得细菌。虽然只有少数人因沙门氏菌而患病,但就是,在世界范围内得细菌性食物中毒事件中,由沙门氏菌引起得占大多数。因此,采用科学、合理得方法检验食品中沙门氏菌,已经成为了人们最关心得问题之一［１]。国标法(GB4789。４-２0１０)就是目前中国规定得食品中沙门氏菌得标准检测方法,也就是基层实验室普遍采用得检测方法,它根据沙门氏菌得生长特点与生化特性,采取前增菌、增菌、分离、生化试验与血清学鉴定5个步骤进行[２]。 1材料与方法 1、1实验材料 1、１.1仪器设备 均质器、三角烧瓶、平皿、玻璃棒、接种棒 恒温培养箱:36℃±１℃,4２℃±1℃ 吸管:1 mＬ(具 0.０1 mL刻度)、10ｍL(具0、1mL刻度或微量移液器及吸头 电子天平ＰL６02－S,梅特勒—托利多仪器(上海)有限公司; 手提式不锈钢压力蒸汽灭菌锅SYＱ—DSＸ-2８0B,上海申安医疗器械厂 1。1。2试剂药品

鸡肠、靛基质试剂、沙门氏菌Ｏ与H诊断血清、AＰI20E生化试剂盒或VIＴＥKGNI 生化鉴定卡 1.1。３培养基 蛋白胨水(BPW)、四硫磺酸钠煌绿(TTB)、亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液、亚硫酸铋(BS)琼脂、HE琼脂、三糖铁琼脂、蛋白胨水、尿素琼脂、氰化钾、氰化钾对照、赖氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶对照、甘露醇、山梨醇、β—D半乳糖苷(ONPＧ)培养基 1、2 实验方法 １.２。1培养基得制备 1、2。１.1培养基得配制步骤 蛋白胨水(ＢＰＷ):称取蛋白胨１０ｇ、氯化钠5g、磷酸氢二钠9g、磷酸二氢钠1.5g、蒸馏水10０0ｍｌ,将各成分加入蒸馏水中,搅混均匀,静置约 10 miｎ,煮沸溶解,调节pH,高压灭菌 12１℃,1５ｍin。分装10瓶,每瓶９0ml 四硫磺酸钠煌绿(TTB):高压灭菌 121 ℃,15 min灭菌冷却后至30℃,每100ml 基础培养液加碘液2ml,煌绿液１ｍｌ 1。2.1、2配制培养基得注意事项 (1)按照说明书上得用量进行换算,称取准确分量得合成培养基粉末; (2)加热煮沸溶解培养基时,留意锅内水位得变化,水位下降可再添加适量得水,以免水分蒸发过多,导致后面分装不够量; (３)往试管中放小导管时,注意处理气泡、 1。2。2 沙门氏菌群检测 1、2.2.1沙门氏菌检测程序

沙门氏菌检验

沙门氏菌的检验 1．目的 规范沙门氏菌检测方法，使产品检验有据可依。 2．消毒灭菌要求 微生物检测用的玻璃仪器、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方能使用。 注：本实验采用湿热灭菌法，吸管、培养皿、培养基等盖好塞子并包好瓶口在高压灭菌锅中按要求的温度和压力灭菌，一般是121℃（）下灭菌20min。 3．原理 沙门氏菌的检验分四个连续阶段： 4．操作步骤 准备工作 配制实验所需的缓冲蛋白胨水、亚硒酸盐胱氨酸培养基（无需灭菌）、HE培养基、三糖铁培养基等，并将准备好的均质杯、吸管、培养皿、大试管等一起灭菌。 前增菌 在无菌环境下，称取25g待检样品放入盛有225ml灭菌好的缓冲蛋白胨水中，然后放到36±1℃的恒温培养箱内进行前增菌4-6h; 增菌 在无菌环境下，用灭菌好的吸管吸取10ml前增菌液接种与100ml亚硒酸盐胱氨酸培养基中进行二次增菌，恒温培养箱36±1℃，培养18-24h; 分离培养 将增菌培养液摇匀，以无菌操作，用直径3mm的接种环挑取一环，划线于表面无凝结水的BS和SS琼脂平板各一个，于36±1℃培养18-24h。观察各个平板上有无典型或可疑沙门氏菌属的菌落。如无典型或可疑菌落，应再继续培养24±2h。然后观察培养的平板（黄色的菌落是大肠杆菌；蓝绿色或蓝色，产硫化氢，菌落中心黑色或几乎全黑色为可疑沙门氏菌）。 沙门氏菌属各亚属在其他选择性琼脂平板的菌落特征 生化实验 用灭菌好的接种针在培养平板上挑取可疑的沙门氏菌单菌落，接种到三糖铁培养基上，恒温培养箱36±1℃，培养18-24h; 典型沙门氏菌培养物斜面显红色（碱性），底端显黄色（酸性），有气体产生，形成硫化氢（琼脂变黑）。 三糖铁培养基变化表 肠杆菌科各属在三糖铁琼脂内的反应结果

血清ICA、IAA、GAD-AB检测在糖尿病分型中的临床意义

血清ICA、IAA、GAD-AB检测在糖尿病分型中的临床意义 目的评价联合检测胰岛细胞抗体（ICA）、胰岛素自身抗体（IAA）、谷氨酸脱羧酶抗体（GAD-Ab）对糖尿病分型的诊断价值。 方法采用酶联免疫吸附法（EL ISA）检测107例糖尿病患者血清中的GADA、ICA 和IAA抗体，其中1型糖尿病患者31例，2型糖尿病患者76例，正常人群33例； GADA、ICA和IAA抗体不同组合结果地诊断率运用矩阵决策法。 结果1型糖尿病患者的GADA、ICA和IAA阳性率分别为67.7％、41.8％和 38.7％，显著高于2型糖尿病患者和正常组（Ρ <1.01），其中GADA阳性率显著 高于ICA和IAA（Ρ<1.05 ）。3种自身抗体联合检测的敏感性、阳性预报率和符合率均显著高于单项或双项测定。 结论GADA、ICA和IAA三种抗体是1型糖尿病自然病程中β细胞功能损伤的一个预测指标，也是1型糖尿病与2型糖尿病相鉴别的重要免疫学标志，对糖尿病分型和指导治疗有一定意义，宜在糖尿病临床诊疗中推广应用。 2 2型糖尿病中糖尿病控制状况评价量表（CSSD70）的应用 目的了解和评估上海地区2型糖尿病患者的糖尿病控制状况、生活质量及其相关因素。 方法上海瑞金医院内分泌门诊中随机抽取136名2型糖尿病患者，男59例，女77 例，年龄（57.88±9.27）岁。采用自行设计的糖尿病控制状况评价量表 （CSSD70），共有70 道选择题，包括：糖尿病及并发症自觉症状（11题）、生活习惯（15题）、治疗情况（8题）、生存技能（15题）、治疗目标（7题）和糖尿病知识结构（14题）。按照5点量表设计原理，每一题给予5种不同程度的表述作为答案，由0分到2分，间隔为0.5分，分数越高意味着糖尿病患者综合控制状态越 佳。本研究比较了CSSD70得分与136例2型糖尿病年龄、性别、病程、文化程度、胰岛素使用、拥有的糖尿病工具、糖尿病家族史、首发症状、并发症、随机血糖、HbA1c等诸多因素的相关性研究，同时也分析了CSSD70与另一个国际糖尿病生活

沙门氏菌的检验

沙门氏菌的检验 食品学院 14食品质量与安全1班 刘文敏柳基炜卫杰恒温紫君 2 2 2 2 摘要：本实验采用GB/T4789.4-2010的检测方法测定鸡场中的沙门氏菌。通过本实验学习沙门氏菌的检测方法和技术，了解沙门氏菌的一些生化特性；本实验先用显色培养基找出可疑菌落，再做生化试验找出可疑的典型性的沙门氏菌，再通过血清学试验最终确定是否为沙门氏菌属。 关键词：沙门氏菌接种生化试验血清学鉴定 前言 沙门氏菌病是公共卫生学中具有重要意义的人畜共患病种之一，其病原沙门氏菌属于肠道细菌科。沙门氏菌是一个统称，泛指 2000 多种有紧密连系的细菌，包括引起食物中毒，导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。虽然只有少数人因沙门氏菌而患病，但是，在世界范围内的细菌性食物中毒事件中，由沙门氏菌引起的占大多数。因此，采用科学、合理的方法检验食品中沙门氏菌，已经成为了人们最关心的问题之一[1]。国标法(GB4789.4-2010)是目前中国规定的食品中沙门氏菌的标准检测方法,也是基层实验室普遍采用的检测方法,它根据沙门氏菌的生长特点和生化特性,采取前增菌、增菌、分离、生化试验和血清学鉴定5个步骤进行[2]。 1材料与方法 1.1实验材料 1.1.1仪器设备 均质器、三角烧瓶、平皿、玻璃棒、接种棒 恒温培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃ 吸管：1 mL（具 0.01 mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度或微量移液器及吸头

电子天平PL602-S，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司； 手提式不锈钢压力蒸汽灭菌锅SYQ-DSX-280B，上海申安医疗器械厂 1.1.2试剂药品 鸡肠、靛基质试剂、沙门氏菌O和H诊断血清、API20E生化试剂盒或VITEKGNI 生化鉴定卡 1.1.3培养基 蛋白胨水（BPW)、四硫磺酸钠煌绿（TTB）、亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液、亚硫酸铋（BS）琼脂、HE琼脂、三糖铁琼脂、蛋白胨水、尿素琼脂、氰化钾、氰化钾对照、赖氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶对照、甘露醇、山梨醇、β-D半乳糖苷（ONPG）培养基 1.2 实验方法 1.2.1培养基的制备 1.2.1.1培养基的配制步骤 蛋白胨水（BPW）：称取蛋白胨10g、氯化钠5g、磷酸氢二钠9g、磷酸二氢钠1.5g、蒸馏水1000ml，将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，静置约 10 min，煮沸溶解，调节 pH，高压灭菌 121 ℃，15 min。分装10瓶，每瓶90ml 四硫磺酸钠煌绿（TTB）：高压灭菌 121 ℃，15 min灭菌冷却后至30℃，每100ml基础培养液加碘液2ml，煌绿液1ml 1.2.1.2配制培养基的注意事项 （1)按照说明书上的用量进行换算，称取准确分量的合成培养基粉末； （2）加热煮沸溶解培养基时，留意锅内水位的变化，水位下降可再添加适量的水，以免水分蒸发过多，导致后面分装不够量； （3）往试管中放小导管时，注意处理气泡。 1.2.2 沙门氏菌群检测 1.2.2.1沙门氏菌检测程序

沙门氏菌的检验

沙门氏菌的检验 2.2 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，42 ℃±1 ℃。 2.3 均质器。 2.4 振荡器。 2.5天平：感量0.1 g。 2.6 无菌锥形瓶:容量500 mL，250 mL。 2.7 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。 2.8 无菌培养皿：直径90 mm。 2.9 无菌试管：3 mm×50 mm、10 mm×75 mm。 2.10 无菌毛细管。 2.11 pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。 3 培养基和试剂 3.1 缓冲蛋白胨水（BPW）：见附录A 中A.1。 3.2 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液：见附录A 中A.2。 3.3 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液：见附录A 中A.3。 3.4 亚硫酸铋（BS）琼脂：见附录A 中A.4。 3.5 HE 琼脂：见附录A 中A.5。 3.6 木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂：见附录A 中A.6。 3.8 三糖铁（TSI）琼脂：见附录A 中A.7。 3.9 蛋白胨水、靛基质试剂：见附录A 中A.8。 3.10 尿素琼脂（pH 7.2）：见附录A 中A.9。 3.11 氰化钾（KCN）培养基：见附录A 中A.10。 3.12 赖氨酸脱羧酶试验培养基：见附录A 中A.11。 3.13 糖发酵管：见附录A 中A.12。 3.14 邻硝基酚β-D 半乳糖苷（ONPG）培养基：见附录A 中A.13。 3.15 半固体琼脂：见附录A 中A.14。 3.16 丙二酸钠培养基：见附录A 中A.15。 1 前增菌 称取25 g（mL）样品放入盛有225 mL BPW 的无菌均质杯中，以8 000 r/min～10 000 r/min 均质 1 min～ 2 min，或置于盛有225 mL BPW 的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。 2 增菌 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1 mL，转种于10 mL TTB 内，于42 ℃±1 ℃培养18 h～24h。同时，另取1 mL，转种于10 mL SC 内，于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。 3 分离 分别用接种环取增菌液1 环，划线接种于一个BS 琼脂平板和一个XLD 琼脂平板（或HE 琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板）。于36 ℃±1 ℃分别培养18 h～24 h （XLD 琼脂平板、

沙门氏菌的检验

沙门氏菌的检验 食品学院14食品质量与安全1班 刘文敏柳基炜卫杰恒温紫君 摘要：本实验采用GB/的检测方法测定鸡场中的沙门氏菌。通过本实验学习沙门氏菌的检测方法和技术，了解沙门氏菌的一些生化特性；本实验先用显色培养基找出可疑菌落，再做生化试验找出可疑的典型性的沙门氏菌，再通过血清学试验最终确定是否为沙门氏菌属。 关键词：沙门氏菌接种生化试验血清学鉴定 前言 沙门氏菌病是公共卫生学中具有重要意义的人畜共患病种之一，其病原沙门氏菌属于肠道细菌科。沙门氏菌是一个统称，泛指 2000 多种有紧密连系的细菌，包括引起食物中毒，导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。虽然只有少数人因沙门氏菌而患病，但是，在世界范围内的细菌性食物中毒事件中，由沙门氏菌引起的占大多数。因此，采用科学、合理的方法检验食品中沙门氏菌，已经成为了人们最关心的问题之一[1]。国标法是目前中国规定的食品中沙门氏菌的标准检测方法,也是基层实验室普遍采用的检测方法,它根据沙门氏菌的生长特点和生化特性,采取前增菌、增菌、分离、生化试验和血清学鉴定5个步骤进行[2]。 1材料与方法 实验材料 均质器、三角烧瓶、平皿、玻璃棒、接种棒 恒温培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃ 吸管：1 mL（具 mL刻度）、10mL（具刻度或微量移液器及吸头 电子天平PL602-S，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司； 手提式不锈钢压力蒸汽灭菌锅SYQ-DSX-280B，上海申安医疗器械厂 试剂药品 鸡肠、靛基质试剂、沙门氏菌O和H诊断血清、API20E生化试剂盒或VITEKGNI生化鉴定卡

培养基 蛋白胨水（BPW)、四硫磺酸钠煌绿（TTB）、亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液、亚硫酸铋（BS）琼脂、HE琼脂、三糖铁琼脂、蛋白胨水、尿素琼脂、氰化钾、氰化钾对照、赖氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶对照、甘露醇、山梨醇、β-D半乳糖苷（ONPG）培养基 实验方法 培养基的制备 培养基的配制步骤 蛋白胨水（BPW）：称取蛋白胨10g、氯化钠5g、磷酸氢二钠9g、磷酸二氢钠、蒸馏水1000ml，将各成分加入蒸馏水中，搅混均匀，静置约 10 min，煮沸溶解，调节 pH，高压灭菌 121 ℃，15 min。分装10瓶，每瓶90ml 四硫磺酸钠煌绿（TTB）：高压灭菌 121 ℃，15 min灭菌冷却后至30℃，每100ml基础培养液加碘液2ml，煌绿液1ml 配制培养基的注意事项 （1)按照说明书上的用量进行换算，称取准确分量的合成培养基粉末； （2）加热煮沸溶解培养基时，留意锅内水位的变化，水位下降可再添加适量的水，以免水分蒸发过多，导致后面分装不够量； （3）往试管中放小导管时，注意处理气泡。 沙门氏菌群检测 2沙门氏菌检测操作步骤 前增菌 称取 10 g（mL）样品放入盛有 90 mL BPW的无菌均质杯中，以 8 000 r/min～10 000 r/min 均质1 min～2 min，或置于盛有90 mL BPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min。使用均质袋，可直接进行培养，于 36 ℃±1 ℃培养8 h～18h。 増菌 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取 1 mL，转种于10mL TTB 内，于42℃±1℃培养18h～24h。同时，另取1mL，转种于10mL SC内，于36℃±1℃培养18 h～24h。 分离

沙门氏菌属诊断血清说明书

沙门氏菌属诊断血清学试验操作程序 1.目的 制定沙门氏菌属诊断血清使用程序，指导对沙门氏菌属进行血清学分型。2.原理 用沙门氏菌属的代表菌株制成灭活菌抗原分别或混合免疫家兔所得的血清，经吸收出去非特异性凝集素后制成，通过凝集试验原理供沙门氏菌属常见菌型定型。 3.试剂及实验设备 3.1沙门氏菌属诊断血清：宁波天润生物药业有限公司生产的规格为11种的沙 门氏菌属诊断血清 3.2试剂保存：2~8°C避光保存，防止冻结，在有效期内使用。 3.3实验设备：玻片、吸样枪、接种环、水浴箱、玻璃管、血平板、营养琼脂、 电热高温接种灭菌器。 4.程序步骤 4.1将诊断血清于冰箱取出后平衡至室温。 4.2选择经初步生化检测符合沙门菌生物特性的疑似菌落。 4.3菌群分析 将经18~24h血平板上纯培养的待检菌，先用O多价A~F群血清进行凝集试验，如阳性，提示待检菌可能属于A~F群范围内，因97%以上的沙门菌都包括在A~F6个O群之内，如果不凝再使用其他O抗血清进行凝集试验，如与其中一种抗血清凝集，待检菌即属于相应的菌群。若与多价O抗血清不凝集，有如下3种可能：①含有Vi抗原；②A~FO群之外的沙门菌；③沙门氏菌属以外的细菌。可按下述方法进一步检测，将纯菌落用无菌生理盐水洗下，制成浓菌液，再分成2份。1份不经处理，为活菌液，另1份放100°C水浴中30min，为加热菌液。取活菌与Vi抗血清，取加热菌与Vi抗血清凝集，加热菌与Vi抗血清、A~F多价O抗血清分别进行玻片凝集试验。根据结果作如下分析：①活菌与Vi 抗血清凝集，加热菌与Vi抗血清凝集者，可能属于C群或D群菌，用O7和O9抗血清定群；②活菌与Vi抗血清不凝，可能属于A~FO群之外的沙门菌或其他

大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案

大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案 实验原理： 1、大肠杆菌的性质： 大肠杆菌是G--无芽孢直杆菌，在大多数培养基上表现出不同的特性。在麦康凯琼脂平板上是凸起光滑湿润的粉红菌落，革兰氏染色镜检为红色短杆菌。三糖铁琼脂上的反应为斜面和底部都变黄，产气，不产生硫化氢。生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖，不发酵蔗糖。MR试验，吲哚试验为阳性，VP试验为阴性，不产生H2S，不能利用枸椽酸盐。半固体中沿穿刺线向四周生长。 2、沙门氏杆菌的性质： 沙门氏杆菌是G-直杆菌。在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落，三糖铁斜面下层变黄色，上层仍为红色，穿刺处为变黑产生H2S。能发酵葡萄糖产酸产气，能利用枸椽酸盐，不发酵乳糖不利用蔗糖肌醇，MR阳性，VP阴性，不产吲哚，不分解尿素。 实验材料： 含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基（琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜面培养基、麦康凯琼脂、生化培养基、SC）、器械（剪刀、记号笔、接种环、酒精灯、显微镜、试管、玻片、培养皿）、药品（消毒酒精、结晶紫、碘液、酸酒精、品红、松柏油） 实验内容及操作程序： 一、培养基制备： 制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌培养基、生化培养基，制备方法见附1.二、标本制备： （1）取新鲜猪肝脏一小块，火焰表面消毒。 （2）用浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。 （3）用接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液，分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中，37°C恒温培养24小时。 三、细菌分离培养： （1）取出培养了24小时的麦康凯平板。挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色镜检，看是否为红色短杆菌，若是，即疑似为大肠杆菌，则取其接种于另一麦康凯平板，37°C 恒温培养24小时。 （2）取出培养了24小时的SC增菌培养基，染色镜检，看是否有疑似沙门氏菌，有则取其中细菌画线接种于麦康凯平板上，37°C恒温培养24小时。 四、细菌的鉴定纯化： （1）检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落，染色镜检。并取其分别接种于生化培养基上（葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、肌醇、枸椽酸盐、尿素、MR、VP、H2S），并做穿刺实验于三糖铁上。37°C恒温培养24小时后观察结果。若实验结果满足预期效果，则可判定为大肠杆菌，则将其接种于普通琼脂培养基上传代培养。 （2）检查疑似沙门氏菌的平板上是否长满细菌，染色镜检，看是否满足于沙门氏菌的染色特性。并取其接种于生化培养基上，并作穿刺实验于三糖铁上，37°C恒温培养24小时后观察结果，若结果满足于沙门氏菌的生化特性，则可判定为沙门氏菌，则将其接种于普通琼脂培养基上传代培养。

常见沙门氏菌抗原凝集表格各符号含义

表格中各符号的意思 1）"_" Underlined O factors are determined by phage conversion. 翻译过来就是只是存在于位相变异后； 2）{} = O-factors indicated in curly brackets are exclusive，In a given serovar, factors in curly brackets cannot coexist with other factors in curly brackets. 翻译过来是梅花括号里面的具有唯一性。 比如O :3,{10},{15},{15,34}.，有了O{10}，就不会有{15}.和{15.34}；有了{15}，就没有{10}和{15,34）。 3）[ ],O (not underlined) or H factor that may be present or absent without relation to phage conversion. 翻译过来就是如果是0，[]里的可能存在或者不存在，与位相变异后无关；如果是H，[]里在罕见菌株中会存在。 4）（）O or H factor weakly agglutinable . 翻译后的意思就是微弱凝集。 表格中各符号的意思 1）"_" Underlined O factors are determined by phage conversion. 翻译过来就是只是存在于位相变异后； 2）{} = O-factors indicated in curly brackets are exclusive，In a given serovar, factors in curly brackets cannot coexist with other factors in curly brackets. 翻译过来是梅花括号里面的具有唯一性。 比如O :3,{10},{15},{15,34}.，有了O{10}，就不会有{15}.和{15.34}；有了{15}，就没有{10}和{15,34）。3）[ ],O (not underlined) or H factor that may be present or absent without relation to phage conversion. 翻译过来就是如果是0，[]里的可能存在或者不存在，与位相变异后无关；如果是H，[]里在罕见菌株中会存在。 4）（）O or H factor weakly agglutinable . 翻译后的意思就是微弱凝集。

群霍乱弧菌的鉴定和分型

群霍乱弧菌的鉴定和分型 l 血清分型 用普通琼脂或碱性琼脂培养基上的菌苔进行血清分型。分型使用小川型及稻叶型的单价血清作玻片凝集反应。 l.1 在小川型单价血清凝集，在稻叶型单价血清不凝集者为小川型。 l.2 在小川型单价血清不凝集，在稻叶型单价血清凝集者为稻叶型。 1.3 在小川型、稻叶型单价血清均呈明显凝集者为彦岛型。 2 试管凝集试验 用生理盐水自1:20开始对倍连续稀释01群霍乱多价血清，每管含稀释血清O 历mL。将被检菌在营养琼脂的16～18h培养物用0.2%福尔马林生理盐水制成每毫升约含18亿菌体(相当于细菌标准比浊管浓度)的悬液，每稀释血清管加入0.5mL;另将菌悬液0.5mL加入0.5mL生理盐水中作对照。摇匀，置37℃3h观察初步结果。再放4℃或室温过夜，观察最后结果。生理盐水对照不出现自然凝集，能便试验菌出现十十凝集的血清最高稀释倍数为凝集滴度，凝集滴度达到或超过血清原效价一半的即可确定为01群霍乱弧菌。 对一次流行的首批病例菌株和玻片凝集反应不典型的菌株应做本试验。 3 古典型和埃尔托型的鉴别 3.1 按表l所列的试验鉴别01群霍乱弧菌的两个生物型。 注:括弧内为少数菌株结果。 3.2 试验方法: a. 第N组霍乱噬菌体裂解试验: 本项试验与噬菌体分型在同一平皿上进行，方法见C4.1.2。 b. 多粘菌素B敏感试验:将1.5%普通琼脂加热溶化，待冷却至5O℃z左右，按每毫升培养基加入50单位多粘菌素B，摇匀后倾注平皿，凝固后备用。在平皿背面用玻璃笔划出若干方格。将被检菌2～ 3h肉汤培养物一接种环点在培养基表面，

待干后放37℃培养过夜，观察结果。被检菌不生长或生长不足10个菌落为敏感，记录为十号。 c. 鸡血球凝集试验:在清洁平皿内划出方格，用直径4mm的接种环取一滴生理盐水滴在每个方格内，取被检菌18h琼脂培养物少许。在生理盐水中制成浓厚菌悬液。再用接种环各加一滴经洗涤三次的2.5%鸡血球生理盐水悬液，充分摇匀，肉眼观察结果。1min内出现血球凝集者为阳性，血球呈均匀分散状态者为阴性。埃尔托型为阳性。古典型一般为阴性。 d. V-P试验:将被检菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白胰水，37℃培养2～3天。然后取出lmL培养物加5%0a-奈酚乙醇溶液0.6mL，振荡5s，加入40%氢氧化钾液0.2mL,再振荡5s，去掉棉塞置室温。在lh内出现红色反应者为阳性。阴性者在试剂加入后逐渐出现浅褐色。古典型为阴性，而埃尔托型多为阳性。 e. 溶血试验:取被检菌24h普通肉汤(中试管装8～1OmL)培养物lmL，l%绵羊红血球(生理盐水洗3次，最后l次离心速度为20OOr/min，离心lOmin)lmL。混匀后放37℃ ,2h观察初步结果，再放4℃冰箱过夜观察最后结果。试验应有已知溶血椭、不溶血株和肉汤管做对照。达半数血球溶解者为溶血阳性。为证明为不耐热溶血素。可将被检菌的培养物加热56℃ 3Omin而后再做溶血试验。古典型不产生可溶性溶血素。埃尔托型有些产生，有些不产生不耐热的可溶性溶血素。 4 噬菌体-生物分型 4.1噬菌体分型 4.1.1 利用五株国内分离的弧菌噬菌体(VPl～Vp5)将埃尔托型霍乱弧菌分成32个噬菌体型(表2)。 4.1.2 噬菌体分型方法:在1.5%普通琼脂平皿的背面，用玻璃笔划出9个方格，再将被检菌2～3h肉汤培养物0.2mL加至已融化并冷至5O℃的0.7%4mL半固体琼脂中，混匀后倾注于琼脂平皿上。待干后，于第1～5格分别滴加VPl～VP5分型噬菌体的原液(l08～109/mL);第6、7格分别滴加第IV组霍乱噬菌体原液(109/mL)及常规稀释液(106/mL);第8、9格滴埃尔托型霍乱弧菌的溶原噬菌体两个代表株(溶原性菌株的18～20h肉汤培养物，经56C3Omin水浴杀菌后使用)，作为对溶原噬菌体敏感性的测定。待干后放37℃培养过夜，观察结果。依据被检菌对VP～lVP5噬菌体的敏感性，按表2判定其噬菌体型别。 4.2 埃尔托型霍乱弧菌的生物分型 4.2.1根据菌株的溶原性、对溶原噬菌体的敏感性、山梨醇发酵试验和溶血试验等四个生物学性状，将埃尔托型霍乱弧菌分成12个生物型(表3)。 4.2.2 溶原性测定:从埃尔托型霍乱弧菌复愈型抗链霉素株SM6的普通琼脂平皿培养物上挑取光滑圆整的典型菌落接种普通肉汤，37℃培养8～12h，作为指示菌。在直径9cm平皿中倾注一薄层1.5%普通琼脂培养基，待凝固后，于平皿底的背面用

沙门氏菌

前言 本标准代替 GB/T 4789.4-2008《食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验》。 本标准与 GB/T 4789.4-2008 相比，主要变化如下 ——修改了标准的中英文名称； ——修改了标准的范围； ——修改了培养基和试剂； ——修改了设备和材料； ——修改了附录 A。 本标准的附录 A、附录 B 为规范性附录。 本标准所代替的历次版本发布情况为： ——GB 4789.4-84、GB 4789.4-1994、GB/T 4789.4-2003、GB/T 4789.4-2008。 食品安全国家标准 食品微生物学检验沙门氏菌检验 1 范围 本标准规定了食品中沙门氏菌（Salmonella）的检验方法。 本标准适用于食品中沙门氏菌的检验。 2 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 2.1 冰箱：2 ℃～5 ℃。 2.2 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，42 ℃±1 ℃。 2.3 均质器。 2.4 振荡器。 2.5 电子天平：感量 0.1 g。 2.6 无菌锥形瓶:容量 500 mL，250 mL。 2.7 无菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。 2.8 无菌培养皿：直径 90 mm。 2.9 无菌试管：3 mm×50 mm、10 mm×75 mm。 2.10 无菌毛细管 2.11 pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸。 2.12 全自动微生物生化鉴定系统。 3 培养基和试剂 3.1 缓冲蛋白胨水（BPW）：见附录 A 中 A.1。 3.2 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液：见附录 A 中 A.2。 3.3 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液：见附录 A 中 A.3。 3.4 亚硫酸铋（BS）琼脂：见附录 A 中 A.4。 3.5 HE 琼脂：见附录 A 中 A.5。 3.6 木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂：见附录 A 中 A.6 3.7 沙门氏菌属显色培养基。 3.8 三糖铁（TSI）琼脂：见附录 A 中 A.7。 3.9 蛋白胨水、靛基质试剂：见附录 A 中 A.8。 3.10 尿素琼脂（pH 7.2）：见附录 A 中 A.9。 3.11 氰化钾（KCN）培养基：见附录 A 中 A.10。 3.12 赖氨酸脱羧酶试验培养基：见附录 A 中 A.11。 3.13 糖发酵管：见附录 A 中 A.12。 3.14 邻硝基酚-D 半乳糖苷（ONPG）培养基：见附录 A 中 A.13。 3.15 半固体琼脂：见附录 A 中 A.14。 3.16 丙二酸钠培养基：见附录 A 中 A.15。 3.17 沙门氏菌 O 和 H 诊断血清。 3.18 生化鉴定试剂盒。

血清蛋白的分类与特征

血清蛋白的分类与特征（以区带电泳为主要技术分类） 一、白蛋白（albumin,Alb）由肝实质细胞合成，分子量6.64万，等电4～5.8，半寿期（15～19天，占血浆总蛋白的40%～60。血浆白蛋白浓度可以受饮食中蛋白质摄入的影响，在一定程度上可以作为个体营养状态的评价指标，有较广泛的载体功能。正常参考值：35～50g/L。血浆白蛋白增高较少见，在严重失水时，对监测血浓缩有诊断意义。低白蛋白血症，可见于以下几种原因：（1）白蛋白合成减低：常见于急性或慢性肝病。（2）由于营养不良或吸收不良。（3）遗传性缺陷：无白蛋白血症。（4）组织损伤（外科手术或创伤）或炎症（感染性疾病）引起的白蛋白分解增加。（5）白蛋白异常丢失：如肾病综合征、慢性肾小球肾炎、糖尿病、系统性红斑狼疮、溃疡性结肠炎、肿瘤、烧伤所致渗出性皮炎。（6）白蛋白分布异常：如门脉高压时，大量蛋白质从血管内渗入腹腔。 目前已发现20种以上白蛋白的遗传性变异，这些个体可以不表现病症，在电泳分析时其白蛋白区带可以出现1条或2条宽带，有人称之为双白蛋白血症。当某些药物大量应用（如青霉素大量注射使血浓度增高时）而与白蛋白结合时，也可使白蛋白出现异常区带。 二、α1区带球蛋白 1、α1-抗胰蛋白酶（α1-antitrypsin,α1AT或AAT）是具有蛋白酶抑制作用的一种急性时相反应蛋白，分子量为5.5万，等电点4.8，半寿期4天，电泳中位与α1区带，是这一区带的主要组分。正常参考值：成人780～2000mg/L、新生儿1450～2700mg/L。低血浆AAT可以发现于胎儿呼吸窘迫综合症，AAT先天缺陷易导致肺气肿和肝硬化。 2、α1-酸性糖蛋白（α1-acid glycoprotein,AAG）早期称之为乳清类粘蛋白，分子量4万，等电点2.7～3.5，半寿期5天，电泳位于α1区带，成人正常参考值：500～1500mg/L。AAG是主要的急性时相反应蛋白，在急性炎症时增高，在风湿病、恶性肿瘤及心肌梗死患者亦常增高，在营养不良、严重肝损害等情况下降低。 3、α1-脂蛋白分子量20万，成人参考值1700～3250mg/L。在严重肝病如肝硬化时明显降低，妊娠及高雌激素血症时可轻度增加。 4、甲胎蛋白（α-fetoprotein,αFP或AFP）主要在胎儿肝脏中合成，分子量6.9万，电泳位于α1区带，成人参考值：0.03mg/L(<30)。在成人AFP可以在大约80%的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现AFP阳性率为50%，在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患者亦可出现不同程度的升高。 三、α2区带球蛋白 1、结合珠蛋白（haptoglobin,HP）在血浆中与游离的血红蛋白结合，，是一种急性时相反应蛋白，分子量8.5～40万，等电点4.1，半寿期2天，电泳位于α2区带。正常参考值范围较宽为300～2150mg/L。急性时相反应中血浆HP增加，当烧伤和肾病综合症引起大量白蛋白丢失的情况下亦可见增加。血管内溶血和溶血性贫血、输血反应、谑疾时HP含量明显下降。此外，严重肝病患者HP的合成降低。 2、 2-巨球蛋白（α2-macroglobulin,α2MG或AMG）是血浆中分子量最大的 蛋白质，是由肝细胞与单核吞噬细胞系统中合成，分子量为62.5～80万，等电点5.4，半寿期5天，但当与蛋白水解酶结合为复合物后其清除率加速。成人参考值：1250～4100mg/L。在低蛋白血症时α2MG含量可增高，可能系一种代偿机制以保持血浆胶体渗透压。妊娠气及口服避孕药时血浓度增高，机制不明。 3、铜蓝蛋白（ceruloplasmin,CER）是一种含铜的α2糖蛋白，分子量12～16万，等电点4.4，半寿期4.5天，成人参考值：200～500mg/L。CER也属于一种急性时相反应蛋白。在感染、创伤和肿瘤时血浆CER增加，在营养不良、严重肝病及肾病综合症时（CER往往下降。妊娠期、口服避孕药时其含量有明显增加。该蛋白最特殊作用在于协助Wilson病的诊断，既患者血浆CER 含量明显下降，而拌有血浆可透析的铜含量增加。

沙门氏菌基本知识及检测方法

沙门氏菌基本知识及检测方法 沙门氏菌属(Salmonella)是肠杆菌科的一个大属，有2000多个血清型，我国发现的约有100个。沙门氏菌广泛存在于猪、牛、羊、家禽、鸟类、鼠类等多种动物的肠道和内脏中。1880年Eberth首先发现伤寒杆菌，1885年Salmon分离到猪霍乱杆菌，由于Salmon发现本属细菌的时间较早，在研究中的贡献较大，遂定名为沙门氏菌属Salmonella 。本属细菌绝大多数成员对人和动物有致病性，能引起人和动物的败血症与胃肠炎，甚至流产，并能引起人类食物中毒，是人类细菌性食物中毒的最主要病原菌之一。 根据沙门氏菌的致病范围，可将其分为三大类群。第一类群：专门对人致病。如伤寒沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌(甲型、乙型、丙型)。第二类群：能引起人类食物中毒——食物中毒沙门氏菌群，如鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、纽波特沙门氏菌等。第三类群：专门对动物致病，很少感染人，如马流产沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌。致病性最强的是猪霍乱沙门氏菌(Salmonella cholerae)，其次是鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)和肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)。 一、沙门氏菌属的生物学特征： 1.形态染色特性：G-无芽孢杆菌。大小通常为 0.7～1.5μm × 2.0～5.0μm，菌端钝圆，散在，偶有短丝状，无荚膜，除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外均有周身鞭毛，能运动，绝大多数菌株有菌毛。需氧或兼性厌氧菌，生长温度范围为10～42℃，最适生长温度为37℃，适宜pH为6.8～7.8，对营养要求不高，在普通培养基中生长旺盛，胆盐可促进其生长。 2.培养特性：需氧或兼性厌氧菌；生长温度范围为10～42℃，最适生长温度为37℃；适宜pH为6.8～7.8；对营养要求不高，在普通培养基中生长旺盛；胆盐可促进其生长。 §普通琼脂：圆形、光滑、无色半透明、边缘整齐或不太整齐的中等大小(2 ～ 4mm)菌落。鸡白痢、鸡伤寒、猪副伤寒、甲型副伤寒沙门氏菌等只能长成细小菌落。§麦康凯琼脂和伊红美兰琼脂(EMB)：菌落无色半透明

大肠杆菌与沙门氏菌鉴定

大 肠 杆 菌 与 沙 门 氏 菌 的 鉴 定 08动检1班：魏静翟阿官李盼盼 尚延丽田方方崔亚婷

一、实验目的与要求 1、通过本实验了解大肠杆菌及沙门氏菌的主要生化特性与培养特性 2、掌握大肠杆菌与沙门氏菌的鉴别方法 二、实验器材及试剂 温箱、显微镜、载玻片、营养琼脂、接种环、灭菌平皿、麦康凯培养基、无菌试管、伊红美兰培养基、三糖铁培养基、革兰氏染色剂、棉签、火柴等 三、实验内容 1、直接镜检法： 1）操作步骤： a）用棉签沾取适量样液直接涂在载玻片上 b）用革兰氏染色剂染色 c）显微镜下观察 2）预期实验结果： a）大肠杆菌：大肠杆菌为革兰氏阴性菌，中等大小，两端略圆的短粗杆菌，成单个存在，也有成双排列；周身鞭毛，能运动，有时两端着色较浓，要注意与巴氏杆菌区分开来。 b）沙门氏菌：沙门氏菌也为革兰氏阴性菌，无芽孢，大小通常为0.7~1.5um*2.0~5.0um，菌端钝圆，散在，偶有短丝状，无荚膜，除鸡白痢沙门 氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外均有周身鞭毛，能运动，绝大多数菌株有菌毛。 2、分离培养法： 将样液分别划线接种在麦康凯培养基、伊红美兰培养基上，温箱培养24h后观察生长情况，根据菌落的形态、颜色、大小等方面的差异来鉴别大肠杆菌和

沙门氏菌。 1）麦康凯培养基（预期实验结果）： a）大肠杆菌：鲜桃红色或微红色，菌落中心呈深桃红色，圆形，扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润； b）沙门氏菌：无色至浅橙色，透明或半透明，菌落中心有时为暗色。 2）伊红美兰培养基（预期实验结果）： a）大肠杆菌：紫黑色菌落，有的有金属光泽 b）沙门氏菌：形态特征与在麦康凯培养基上的相似 2、三糖铁培养基穿刺试验 1）操作方法： 将待检样液穿刺接种于三糖铁培养基中，培养18~24h后，取出观察2）预期实验结果： a）大肠杆菌：穿刺后不变黑，表面呈黄色 b）沙门氏菌：穿刺底部有气体，穿刺后变黑，中间为黄色表面为红色 3、乳糖发酵试验 1）操作方法： 将待检样液接种于乳糖发酵管内放于温箱内培养18h后，观察结果 2) 预期实验结果： a）大肠杆菌：产酸产气 b）沙门氏菌：不产酸产气

沙门氏菌生化鉴定修订稿

沙门氏菌生化鉴定 WEIHUA system office room 【WEIHUA 16H-WEIHUA WEIHUA8Q8-

沙门氏菌生化试验判定步骤 表1 三糖铁琼脂 赖氨酸脱羧酶初步判断斜面底层产气硫化氢 产碱红产酸黄＋（－）＋（－）黑＋紫可疑沙门氏菌产碱红产酸黄＋（－）＋（－）黑－黄可疑沙门氏菌产酸黄产酸黄＋（－）＋（－）黑＋紫可疑沙门氏菌 三糖铁琼脂原理分析：本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。而发酵乳糖的细菌，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。 底层产酸：是因为细菌分解糖类物质使酚红退色变黄。 斜面产碱，低层产酸：是细菌分解葡萄糖(不能分解乳糖和蔗糖),由于量较少进而分解蛋白胨而产碱变红。因为底层是厌氧环境，葡萄糖分解慢，２４小时培养后还没分解蛋白胨产碱；而斜面是需氧环境分解较快，一般８小时左右就把葡萄糖分解完（此时斜面也是酸性），但继而分解蛋白胨产碱，斜面又转为碱性。 2－志贺氏菌：都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳 糖，不产生H2S。 4－大肠杆菌：能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不 产生H2S。 3－沙门氏菌：能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生H2S， 多数产气。 赖氨酸脱羧酶试验 1、试验管及对照管均要加一层约10mm厚的灭菌石蜡或矿物油以覆盖表面，此可使培养基中的溶解氧通过细菌消耗掉，并控制培养基的pH。 2、阳性试验管培养初期（10—12h）因发酵葡萄糖产酸变黄，继续培养由于氨基酸脱羧产生胺类而使培养基由酸变碱，故又由黄变为紫色。阴性试验管则始终呈黄色。 氨基酸脱羧酶试验 ?(1)原理：某些细菌可产生氨基酸脱羧酶使氨基酸脱羧生成胺和二氧化碳。由于胺的生成使培养基变为碱性，可用指示剂指示出来。?(2)方法：将待检菌分别接种于1支氨基酸（赖氨酸，鸟氨酸或精氨酸）脱羧酶试验管和1支氨基酸脱羧酶对照管（无氨基酸），各覆盖至少高度的无菌

食品中沙门氏菌检验操作规范(已完)

食品中沙门氏菌检验操作规范 1 检验依据 本方法参照GB4789.4-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》。 2 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 2.1 冰箱：2 ℃～5 ℃。 2.2 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，42 ℃±1 ℃。 2.3 均质器。 2.4 振荡器。 2.5 电子天平：感量0.1 g。 2.6 无菌锥形瓶:容量500 mL，250 mL。 2.7 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。 2.8 无菌培养皿：直径90 mm。 2.9 无菌试管：3 mm×50 mm、10 mm×75 mm。 2.10 无菌毛细管。 2.11 pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。 2.12 全自动微生物生化鉴定系统。 3 培养基和试剂（按说明书配置或灭菌） 3.1 缓冲蛋白胨水（BPW）； 3.2 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液； 3.3 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液； 3.4 亚硫酸铋（BS）琼脂； 3.5 HE 琼脂； 3.6 木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂； 3.7 沙门氏菌属显色培养基； 3.8 三糖铁（TSI）琼脂； 3.9 蛋白胨水、靛基质试剂； 3.10 尿素琼脂（pH 7.2）； 3.11 氰化钾（KCN）培养基； 3.12 赖氨酸脱羧酶试验培养基； 3.13 糖发酵管； 3.14 邻硝基酚β-D 半乳糖苷（ONPG）培养基；

3.15 半固体琼脂； 3.16 丙二酸钠培养基； 3.17 沙门氏菌O 和H 诊断血清； 3.18 生化鉴定试剂盒。 4 检验程序 沙门氏菌检验程序见图1。 图1 沙门氏菌检验程序 5 操作步骤 5.1 前增菌 称取25 g（mL）样品放入盛有225 mL BPW 的无菌均质杯中，以8 000 r/min～10 000 r/min 均质1 min～2 min，或置于盛有225 mL BPW 的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。如需测定pH 值，用1 mol/mL 无菌NaOH 或HCl 调pH 至6.8±0.2。无菌操作将样品转至500 mL 锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36 ℃±1 ℃培养8 h～18h。