实验室常用培养基
实验用培养基配制>
1 ．牛肉膏蛋白胨培养基（用于细菌培养）
牛肉膏 3g ，蛋白胨 10g ， NaCl 5g ，水 1000mL ，～
2. 高氏 1 号培养基 ( 用于放线菌培养 )
可溶性淀粉 20g ， KNO 3 1g ， NaCl ， K 2 HPO 4- · 3H 2 O ，MgSO 4 · 7H
2 O , ，FeSO4 · 7H 2 O ，水 1000mL ，～。
配制时注意，可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。
3 ．马丁氏（ Martin ）培养基（用于从土壤中分离真菌）
K 2 HPO 4 1g ，MgSO 4 · 7H 2 O ，蛋白胨 5g ，葡萄糖 10g ， 1/3000 孟
加拉红水溶液 100mL, 水 900mL ，自然 pH ，121 ℃ 湿热灭菌 30min 。
待培养基融化后冷却 55 ～60 ℃ 时加入链霉素 ( 链霉素含量为30 μ
g/mL).
4. 马铃薯培养基 (PDA)( 用于霉菌或酵母菌培养 )
马铃薯 ( 去皮 )200g, 蔗糖 ( 或葡萄糖 ) 20g, 水 1000mL
配制方法如下 : 将马铃署去皮 , 切成约 2cm 2 的小块 , 放入 1500mL 的烧
杯中煮沸 30min, 注意用玻棒搅拌以防糊底 , 然后用双层纱布过滤 , 取其滤
液加糖 , 再补足至 1000mL, 自然 pH. 霉菌用蔗糖 , 酵母菌用葡萄糖 .
5. 察氏培养基 ( 蔗糖硝酸钠培养基 )( 用于霉菌培养 )
蔗糖30g, NaNO 3 2g, K 2 HPO 4 1g, MgSO 4 · 7H 2 O, KCl , FeSO4 · 7H
2 O , 水 1000mL, ～
6. Hayflik 培养基 ( 用于支原体培养 )
牛心消化液 ( 或浸出液 )1000mL, 蛋白胨 10g, NaCl 5g, 琼脂 15g, ～ ,
分装每瓶70mL, 121 ℃ 湿热灭菌 15min, 待冷却至80 ℃ 左右 , 每 70mL 中
加入马血清 20mL,25% 鲜酵母浸出液 10mL, 15 醋酸铊水溶液 , 青霉素 G 钾
盐水溶液 (20 万单位以上 ), 以上混合后倾注平板 . 注意 : 醋酸铊是极毒的
药品 , 需特别注意安全操作 .
7 ．麦氏 (McCLary) 培养基 ( 醋酸钠培养基 )
葡萄糖 , KCl ，酵母膏，醋酸钠 , 琼脂，蒸馏水 l00mL 。溶解后分装试管，1l5 ℃ 湿热灭菌 15min 。
8 ．葡萄糖蛋白胨水培养基 ( 用于．反应和甲基红试验 )
蛋白胨，葡萄糖， K 2 HPO 4 ，水100mL, , 1l5 ℃ 湿热灭菌 20min 。
9 ．蛋白胨水培养基 ( 用于吲哚试验 )
蛋白胨 10g, NaCl 5g, 水 1000mL ，～, 121 ℃ 湿热灭菌 20min 。
10 ．糖发酵培养基 ( 用于细菌糖发酵试验 )
蛋白胨 , NaCl , K 2 HPO 4 ，水 100mL ，溴麝香草酚蓝 ( 质量分数 1% 水溶液 ) ，糖类 lg 。分别称取蛋白胨和 NaCl 溶于热水中，调 pH 至，再加入溴麝香草酚蓝 ( 先用少量质量分数 95% 乙醇溶解后，再加水配成质量分数1% 水溶液 ) ，加入糖类，分装试管，装量 4 ～ 5cm 高，并倒放入一杜氏小管( 管口向下，管内充满培养液 ) 。115 ℃ 湿热灭菌 20min 。灭菌时注意适当延长煮沸时间，尽量把冷空气排尽以使杜氏小管内不残存气泡。常用的糖类，如葡萄糖、蔗糖、甘露糖、麦芽糖、乳糖、半乳糖等 ( 后两种糖的用量常加大为质量分数 %) 。
11. RCM 培养基 ( 强化梭菌培养基 ) ( 用于厌氧菌培养 )
酵母膏 3g ，牛肉膏 l0g ，蛋白胨 10g ，可溶性淀粉 lg ，葡萄糖 5g, 半胱氨酸盐酸盐， NaCl 3g ， NaAc 3g, 水 l000mL, ，刃天青3mg/L, l2l ℃ 湿热灭菌 30min 。
12. TYA 培养基 ( 用于厌氧菌培养 )
葡萄糖 40g ，牛肉膏 2g ，酵母膏 2g ，胰蛋白胨 (bacto-typetone)6g ，醋酸铵 3g, KH 2 PO 4 ，MgSO 4 · 7H 2 O ，FeSO 4 · 7H 2 O ，水 1000mL, , 121 ℃湿热灭菌 30min 。
13 ．玉米醪培养基 ( 用于厌氧菌培养 )
玉米粉 65g ，自来水 1000mL ，混匀，煮 10min 成糊状，自然pH, 121 ℃湿
热灭菌 30min 。
14 ．中性红培养基 ( 用于厌氧菌培养 )
葡萄糖 40g ，胰蛋白胨 6g ，酵母膏 2g ，牛肉膏 2g ，醋酸铵 3g ， KH 2 PO 4 5g ，中性红, MgSO 4 · 7H 2 O ，FeSO 4 · 7H 2 O , 水1000ml, , 121 ℃湿热灭菌 30min 。
15 ． CaCO3 明胶麦芽汁培养基 ( 用于厌氧菌培养 )
麦芽汁 (6 波美 )1000mL ，水 1000mL ， CaCO 3 10g, 明胶 10g ，, 121 ℃湿热灭菌 30min 。
16 ． BCG 牛乳培养基 ( 用于乳酸发酵 )
(B) 溶液：酵母膏 10g ，水 500mL ，琼脂20g , , 121 ℃ 湿热灭菌 20min 。
以无菌操作趁热将 (A) 、 (B) 溶液混合均匀后倒平板。
17 ．乳酸菌培养基 ( 用于乳酸发酵 )
牛肉膏 5g ，酵母膏 5g ，蛋白胨 10g ，葡萄糖 10g ，乳糖 5g, NaCl 5g ，水1000mL, , 121 ℃湿热灭菌 20min 。
18 ．酒精发酵培养基 ( 用于酒精发酵 )
蔗糖10g, MgSO 4 · 7H 2 O , NH 4 NO 3 , 质量分数 20% 豆芽汁 2mL, KH 2 PO 4 ，水 100mL ，自然 pH 。
19. 柯索夫培养基 ( 用于钩端螺旋体培养 )
优质蛋白胨 , NaCl , KCl , Na HCO 3 ， CaCl , KH 2 PO 4 , NaH 2 PO 4 , 蒸馏水 500 mL ，无菌兔血清 40mL 。
制法：除兔血清外的其余各成分混合，加热溶解，调 pH 至, 121 ℃湿热灭菌20min ，待冷却后，加入无菌兔血清，制成 8% 血清溶液，然后分装试管（ 5 ～10mL/ 管）, 56 ℃水浴灭活 lh 后备用。
20 ．豆芽汁培养基
黄豆芽 500g ，加水 1000mL ，煮沸 lh ，过滤后补足水分，121 ℃湿热灭菌
后存放备用，此即质量分数为 50% 的豆芽汁，
用于细菌培养：质量分数 10% 豆芽汁 200mL ，葡萄糖 ( 或蔗糖 )50g ，水800mL, ～。
用于霉菌或酵母菌培养：质量分数 10% 豆芽汁 200mL ，糖 50g ，水 800mL ，自然 pH 。霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。
21 ． LB(Luria—Bertani) 培养基 ( 细菌培养，常在分子生物学中应用 )
双蒸馏水 950mL ，胰蛋白胨 l0g, NaCl l0g ，酵母提取物 (bacto- yeast extract)5g ，用 lmol/L NaOH ( 约 l mL) 调节 pH 值至，加双蒸馏水至总体积为 1L ，121 ℃湿热灭菌 30min 。
含氨苄青霉素 LB 培养基 : 待 LB 培养基灭菌后冷至50 ℃左右加入抗生素，至终浓度为 80 ～ 100mg/L 。
22 ．复红亚硫酸钠培养基 ( 远藤氏培养基 ) ( 用于水体中大肠菌群测定 )
蛋白胨 10g ，牛肉浸膏 5g ，酵母浸膏 5g ，琼脂 20g ，乳糖 10g, K 2 HPO 4 ，无水亚硫酸钠 5g, 5% 碱性复红乙醇溶液 20mL ，蒸馏水 1000mL 。
制作过程：先将蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏和琼脂加入到 900mL 水中，加热溶解，再加入 K 2 PO 4 ，溶解后补充水至 l000mL ，调 pH 至～。随后加入乳糖，混匀溶解后，于115 ℃ 湿热灭菌 20min 。再称取亚硫酸钠至一无菌空试管中，用少许无菌水使其溶解，在水浴中煮沸 10min 后，立即滴加于 20mL 质量分数 5% 碱性复红乙醇溶液中，直至深红色转变为淡粉红色为止。将此混合液全部加入到上述已灭菌的并仍保持融化状态的培养基中，混匀后立即倒平板，待凝固后存放冰箱备用，若颜色由淡红变为深红，则不能再用。
23 ．乳糖蛋白胨半固体培养基 ( 用于水体中大肠菌群测定 )
蛋白胨 10g ，牛肉浸膏 5g ，酵母膏 5g ，乳糖 10g ，琼脂 5g ，蒸馏水1000mL ，～，分装试管 (l0mL/ 管), 115 ℃湿热灭菌 20min 。
24 ．乳糖蛋白胨培养液 ( 用于多管发酵法检测水体中大肠菌群 )
蛋白胨 10g ，牛肉膏 3g ，乳糖 5g ， NaCl 5g ，蒸馏水 l000mL ，质量分数 % 溴甲酚紫乙醇溶液 lmL 。调 pH 至，分装试管 (l0mL/ 管 ) ，并放入倒置杜氏小管，l15 ℃ 湿热灭菌 20min 。
25 ．三倍浓乳糖蛋白胨培养液 ( 用于水体中大肠菌群测定 )
将乳糖蛋白胨培养液中各营养成分以扩大 3 倍加入到 l000mL 水中，制法同上，分装于放有倒置杜氏小管的试管中，每管 5mL ，1l5 ℃ 湿热灭菌 20min 。
26 ．伊红美蓝培养基 (EMB 培养基 )( 用于水体中大肠菌群测定和细菌转导 )
蛋白胨 l0g, 乳糖 10g, K 2 HPO 4 2g ，琼脂 25g, 质量分数 2%/ 伊红 Y( 曙红 ) 水溶液 20mL, 质量分数 % 美蓝 ( 亚甲蓝 ) 水溶液 l3mL ，。
制作过程：先将蛋白胨、乳糖、 K 2 HPO 4 和琼脂混匀，加热溶解后，调 pH 至 , 1l5 ℃ 湿热灭菌 20min ，然后加入已分别灭菌的伊红液和美蓝液，充分混匀，防止产生气泡。待培养基冷却到50 ℃ 左右倒平皿。如培养基太热会产生过多的凝集水，可在平板凝固后倒置存于冰箱备用。在细菌转导实验中用半乳糖代替乳糖，其余成分不变。
27 ．加倍肉汤培养基 ( 用于细菌转导 )
牛肉膏 6g ，蛋白胨 20g, NaCL 10g ，水 1000mL, ～。
28 ．半固体素琼脂 ( 用于细菌转导 )
琼脂 1g ，水100mL, 121 ℃ 湿热灭菌 30min 。
29 ．豆饼斜面培养基 ( 用于产蛋白酶霉菌菌株筛选 )
豆饼 100g 加水 5 ～ 6 倍，煮出滤汁 100mL ，汁内加入 KH 2 PO 4 质量分数为 %, MgSO 4 质量分数为 %, (NH 4 ) 2 SO 4 质量分数为 % ，可溶性淀粉质量分数为 2%, pH6 ，琼脂质量分数为 2% ～ % 。
30 ．酪素培养基 ( 用于蛋白酶菌株筛选 ) 分别配制 A 液和 B 液。
A 液：称取Na 2 HPO 4 · 7H 2 O 。干酪素 4g ，加适量蒸馏水，并加热溶解。
B 液：称取 KH 2 PO 4 ，加水溶解。
A 、
B 液混合后，加入酪素水解液 mL, 加琼脂 20g ，最后用蒸馏水定容至1000mL 。
酪素水解液的配制： 1g 酪蛋白溶于碱性缓冲液中，加入质量分数 1% 的枯草芽孢杆菌蛋白酶 25mL 加水至100mL, 30 ℃ 水解 lh 。用于配制培养基时，其用
量为 1000mL 培养基中加入 100mL 以上水解液。
31 ．细菌基本培养基 ( 用于筛选营养缺陷型 )
Na 2 HPO 4 · 7H 2 O 1g ，MgSO 4 · 7H 2 O , 葡萄糖 5g , NaCl 5g , K 2 HPO 4 lg ，水l000mL, , 1l 5 ℃ 湿热灭菌 30min 。
32. YEPD 培养基 ( 用于酵母原生质体融合 )
酵母粉 10g, 蛋白胨 20g ，葡萄糖 20g ，蒸馏水 1000mL, ，115 ℃ 湿热灭菌 20min 。
33. YEPD 高渗培养基 ( 用于酵母原生质体融合 )
在 YEPD 培养基中加入 L 的 NaCL ，质量分数 3% 琼脂。
34. YNB 基本培养基 ( 用于酵母原生质体融合 )
质量分数 % 酵母氮碱基 (YNB, 不含氨基酸， Difco), 质量分数 2% 葡萄糖，质量分数 3% 琼脂，。另一配方为：葡萄糖 10g (NH 4 ) 2 SO 4 1g ， K 2 HPO 4 ， KHPO 4 , KI ，MgSO 4 · 7H 2 O , CaCl 2 · 2H 2 O , ，维量元素母液 lmL, 维生素母液 lmL( 母液均按常规配制 ) ，水 1000mL, ～。
35. YNB 高渗基本培养基 ( 用于原生质体融合 )
在 YNB 基本培养基中加入 LNaCl 。
36 ．酚红半固体柱状培养基 ( 用于检查氧与菌生长的关系 )
蛋白胨 1g ，葡萄糖 10g, 玉米浆 10g ，琼脂 7g, 水 1000mL ，。在调好 pH 后，加入质量分数 % 酚红溶液数滴，至培养基变为深红色，分装于大试管中，装量约为试管高度的 1/2 ，1l5 ℃ 灭菌 20min 。细菌在此培养基中利用葡萄糖生长产酸，使酚红从红色变成黄色，在不同部位生长的细菌，可使培养基的相应部位颜色改变。但注意培养时间太长，酸可扩散以致不能正确判断结果。
以上各种培养基均可配制成固体或半固体状态，只需改变琼脂用量即可，前者质量分数为 % ～ % ，后者质量分数为 % ～ % 。
实验室常用培养基的配制方法
实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin (100 mg/ml) IPTG (24 mg/ml) X-Gal (20 mg/ml) LB培养基■组份浓度 100 mg/ml Ampicillin ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3. 用0.22 μm滤器过滤除菌。 4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。 ■组份浓度 24 mg/ml IPTG ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3. 用0.22 μm滤器过滤除菌。 4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。 ■组份浓度 20 mg/ml X-Gal ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量1 g X-Gal置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后， 定容至50 ml。 3. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃避光保存。 ■组份浓度 1%（W/V）Tryptone，0.5%（W/V）Yeast Extract， 1%（W/V）NaCl ■配制量 1 L ■配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。 Tryptone 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g 2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5 N NaOH（约0.2 ml），调节pH值至7.0。 4. 加去离子水将培养基定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，4℃保存。
几种常见培养基作用
1.中国蓝平板：含有牛肉粉、蛋白胨、乳糖、琼脂、氯化钠、中国蓝、玫瑰红等成份。是一种弱选择性（亦有学者称为无抑制性）选择培养基。成份中的中国蓝为指示剂，玫瑰红为弱抑制剂，仅能抑制革兰阳性菌生长，而对大肠杆菌没有抑制作用，发酵性革兰阴性杆菌因分解乳糖能力不同，在此平板上的菌落颜色不同，便于鉴别菌种。根据菌落形态，可做出相应的处理或报告。例如：大肠埃希菌菌落呈蓝色；痢疾志贺菌呈淡红色；鼠伤寒沙门菌呈淡红色。 2.巧克力平板：普通营养琼脂成份添加进氯化血红素，万古霉素，辅酶A。用途：除可以分离奈瑟菌，嗜血杆菌外，由于加入了万古霉素，可抑制绝大多数的革兰阳性菌的生长，在分离培养上具有重要意义，不能用血平板来替代。巧克力平板含有嗜血杆菌生长需要的营养因子X因子和V因子。其原理为：绵羊血中的V因子通常处于被抑制状态，加热到80～90℃12Min即可破坏红细胞膜上的不耐热抑制物，可使V因子释放，故嗜血杆菌在加热的血琼脂培养基即巧克力琼脂培养基上生长较佳。 3. TCBS：含酵母膏粉蛋白胨氯化钠柠檬酸钠硫代硫酸钠胆酸钠牛胆粉蔗糖柠檬酸铁溴麝香草酚兰麝香草酚兰琼脂；其中：氯化钠可刺激弧菌的生长；蔗糖是可发酵的糖类；胆酸钠、牛胆粉、硫代硫酸钠和柠檬酸钠及较高的pH（8.6）可抑制革兰氏阳性菌和大肠菌群；霍乱弧菌对酸性环境比较敏感，因此该pH值可增强其生长；硫代硫酸钠与柠檬酸铁反应作为检测硫化氢产生的指示剂；溴麝香草酚兰和麝香草酚兰是pH指示剂。利用指示剂来区分是否发酵蔗糖：副溶血性弧菌不发酵蔗糖，菌落呈蓝绿色。霍乱弧菌发酵蔗糖产酸，菌落呈黄色。TCBS常用于致病性弧菌的选择性分离，是GB2008、SN标准指定培养基。 4.MAC平板：即麦康凯琼脂培养基，用于大肠杆菌和大肠菌群的分离培养(05药典)，主要成分：蛋白胨脙胨猪胆盐(或牛、羊胆盐) 氯化钠琼脂乳糖1%结晶紫水溶液0.5%中性红水溶液。麦康凯平板的原理：利用胆盐来抑制革兰阳性细菌的生长，而对伤寒等沙门菌有促进生长的作用．利用乳糖发酵，中性红的颜色可把分解乳糖和不分解乳糖的细菌区别开．沙门菌及志贺菌呈无色菌落，大肠埃希菌呈桃红色菌落． SS培养基 2.原理 培养基中牛肉膏、蛋白胨等为营养物;煌绿、胆盐、硫代硫酸钠、枸橼酸钠等抑制非病原菌生长,而胆盐能促进某些病原菌生长。因大肠埃希菌等能迅速分解乳糖产酸并与胆盐结合成胆酸,故形成中心混浊的粉红色菌落;病原菌不能分解乳糖。菌落呈透明无色,枸橼酸铁能指示硫化氢的产生,使菌落中心呈黑色。硫代硫酸钠有缓和胆盐对志贺菌及沙门菌的有害作用并中和煌绿和中性红染料的毒性作用,且能使大肠埃希菌的红色菌落颜色鲜明。 3.用途 用于分离肠道致病菌。 SS琼脂培养基是分离沙门菌及志贺菌属的强选择性培养基,它对大肠埃希菌有较强的抑制 作用,而对肠道病原菌则无明显抑制作用。因此,可以增加粪便等标本的接种量,从而提高病原菌的检出率,是目前公认比较满意的培养基。 附注:大肠埃希菌属细菌在此培养基虽不易生长,但亦不被杀灭,故挑选病原菌菌落时,应仅挑取菌落的中心部分,否则易将其四周的杂菌一并挑入,影响结果。
细胞培养基种类
细胞培养基的选择及常用数据库 日期：2012-04-13来源：未知作者：网友点击：次细胞实验技术 经典的培养基有很多种，Invitrogen(GIBCO)、Thermo Fisher(HyClone)、Sigma等公司都可以提供。其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12都是应用最广泛的培养基。其他如M199、IMDM、L15培养基等也用于某些细胞的培养。 ◆MEM是由Eagle’s基础培养基(BME)发展而来的，其中增加了组分的范围及 浓度。 ◆ Dulbecco改良的BEM(DMEM)培养基是为小鼠成纤维细胞设计的，现在常用于 贴壁细胞的培养。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍，维生素浓度是MEM的4倍，采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。最初的配方中葡萄糖含量为1000 mg/L，后来为了某些细胞的生长需要，将葡萄糖含量又调整为4500 mg/L，这就是大家常说的低糖和高糖了。 ◆ aMEM含有附加的氨基酸、维生素以及核苷和脂肪酸，它可广泛应用于各种细 胞类型，包括对营养成分要求苛刻的细胞。 ◆ Ham’s F12是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的，现在也广泛应用于 克隆形成率的分析及原代培养。F12还可以与DMEM等体积混合使用，得到一种高浓度与成分多样化相结合的产物，这种培养基已应用于许多原代培养及更难养的细胞系的培养。 ◆ RPMI 1640培养基是专为淋巴细胞培养而设计的，现在已广泛应用于悬浮细胞 的培养。 以前经常听到有人问，这种细胞该用哪一种培养基呢?其实这个问题的答案可以很简单，也可以好复杂。此话怎讲?如果这种细胞是购自ATCC或其他的细胞库，那很简单，问供应商就行了。或者找到相关的文献，作为参考。Invitrogen网站上有一个Cell Line Database的工具，也很好用。选择你感兴趣的细胞类型，它就会弹出推荐的培养基、血清和转染试剂等，有时还有优化好的转染步骤，很方便。Sigma网站上也有一个Media Expert，包括了培养基所有成分的功能描述、使用推介和参考文献等，它还
常用细菌培养基配方
常用抗生素 氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml） 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml） 溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 甲氧西林（methicillin）（100mg/ml） 溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。 卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml） 溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml） 溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 链霉素（streptomycin）（50mg/ml） 溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml） 溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 四环素（tetracyyline）（10mg/ml） 溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 常用培养基 LB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨10g 酵母提取物5g 氯化钠10g 如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。(实验室一般都不调PH) SOB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨20g 酵母提取物5g 氯化钠0.5g 1 mol/L 氯化钾2.5ml
选择性培养基
葡萄糖肉浸液肉汤Dextrose Meat Infusion Broth 用途：用于溶血性链球菌的增菌培养 配方：（g/L）牛肉粉3.0 氯化钠5.0 蛋白胨10.0 磷酸氢二钾2.0 葡萄糖10.0 pH 值7.5 ±0.1 25℃ 原理：蛋白胨、牛肉粉提供氮源、维生素和生长因子；氯化钠维持均衡的渗透压；磷酸氢二钾为缓冲剂；葡萄糖提供碳源。 用法：称取本品30.0g,煮沸溶解于1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌15 分钟,备用。质量控制：在36± 1℃培养24 小时。质控菌株溶血性链球菌单增李斯特氏菌大肠杆菌沙门氏菌27853 25922 14028 生长情况（10-8）+++ （10-8）+++ +/+/ 匹克氏肉汤基础A Pick’s Broth BaseA 用途：用于溶血性链球菌的增菌培养 配方：（g/L）胰蛋白胨10.0 牛心浸粉20.0 叠氮钠0.065 结晶紫0.002 pH 值7.3-7.5 原理：25℃胰蛋白胨、牛心浸粉提供碳氮源、维生素和生长因子；脱纤维兔血（或羊血）为溶血性链球菌提供大量生长因子；结晶紫和叠氮钠为选择性抑菌剂。 用法：称取本品30.0g,加热溶于1000ml 蒸馏水中,分装, 121℃高压灭菌15 分钟, 冷至50℃左右时,加入脱纤维羊血,混匀。 质量控制：在36± 1℃培养18-24 小时。 肉浸液肉汤培养基Meat Infusion Broth 用途：用于溶血性链球菌、蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的增菌培养（GB 标准） 配方：（g/L）牛肉粉3.0氯化钠5.0蛋白胨12.0 磷酸氢二钾2.0 pH 值7.5 ±0.1 原理：蛋白胨和牛肉粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；磷酸氢二钾为缓冲剂；氯化钠可维持均衡的渗透压。 用法：称取本品20.0g,溶解于1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌15 分钟,备用。 质量控制：在36± 1℃培养18-24 小时。25℃ 质控菌株溶血性链球菌金黄色葡萄球菌大肠埃希氏菌沙门氏菌 菌株编号ATCC32210 ATCC25923 ATCC25922 ATCC14028 生长情况+++ +++ +++ +++ 浑浊浑浊浑浊浑浊 叠氮钠葡萄糖肉汤Azide Dextrose Broth 用途：用于链球菌的增菌培养 配方：（g/L）胰蛋白胨15.0 牛肉浸粉4.5 氯化钠7.5 葡萄糖7.5叠氮钠0.2 pH 值7.0 - 7.4 原理：胰蛋白胨和牛肉浸粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；葡萄糖提供碳源；叠氮化
实验室常用培养基的配制方法
五、实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin(氨卡青霉素)(100 mg/ml) 组份浓度100 mg/ml Ampicillin 配制量50 ml 配制方法 1.称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。 2.加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3.用0.22 μm过滤膜过滤除菌。 4.小份分装(1 ml/份)后，-20℃保存。 IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)(24 mg/ml) 组份浓度24 mg/mL IPTG 配制量50 mL 配制方法 1.称1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。 2.加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3.用0 22 μm过滤膜过滤除菌。 4小份分装(1 ml，份)后，-20℃保存。 X-Gal (20 mg/ml) 组份浓度20 mg/ml X-Gal 配制量50 ml 配制方法 1.称量l g X-Gal置于50 ml离心管中。 2.加入40 ml DMF(二甲基甲酰胺)，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3.小份分装(1 ml/份)后，-20℃避光保存。 LB培养基 组份浓度1%(W/V)Tryptone(胰蛋白胨)，0.5%(W/V)Yeast Extract(酵母提取物)，1%(W/V)NaCl 配制量 1 L 配制方法 1.称取下列试剂，置于l L烧杯中。 Tryptone 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g 2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.滴加5 N NaOH(约0.2 m1)，调节pH值至7.0。 4.加去离子水将培养基定容至1 L。 5高温高压灭菌后，4。C保存。 LB/Amp培养基 组份浓度 1%(W/V) Tryptone 0.5%(W/V) Yeast Extract 1%(W/V) NaCl 0.1 mg/ml Ampicillin
常用10种培养基的配置和质控标准
小结：常用10种培养基的配置和质控标准 （1）基础肉汤 成分和配制方法： 蛋白胨10g NaCl5g 牛肉膏5g 酵母膏3g DW1L pH7.4～7.6 15磅30min高压灭菌，倾注无菌试管备用。 每次新配制时做质控 阳性质控：ATCC 25923金黄色葡萄球菌接种基础肉汤中，35℃温箱24h肉汤混浊。 无菌试验：<100管抽检5%,>100管随机抽取10管未接种的基础肉汤35℃温箱 24h培养，无细菌生长。 平行试验：质控时，要求新旧批号的培养基同时做 用途：供培养对营养要求不高的细菌增菌用；作其他选择培养基的基础液。 储存 干粉：室温保存，由于容易受潮，所以开瓶后务必将盖拧紧。 培养基：2-8℃保存一个月 （2）普通营养琼脂 成分和配制方法： 基础肉汤100ml 琼脂2g 15磅30min高压灭菌，倾注平板备用。
注：可购买国内生产的瓶装营养琼脂粉，按上面的说明配制。 质量控制： 质控频度每次新配制时做质控 质控方法 阳性质控：ATCC 25923金黄色葡萄球菌或ATCC25922大肠埃希菌接种营养琼脂上，35℃温箱24h细菌生长良好。 无菌试验：<100块抽检5%,>100块随机抽取10管未接种的营养琼脂35℃温箱 24h培养，无细菌生长。 平行试验：质控时，要求新旧批号的培养基同时做 用途： 供培养对营养要求不高的细菌。 作无糖基础培养基。 加血成血平板。 加血加热75℃以上，再加上生长添加剂就成巧克力平板。 储存 干粉：室温保存，由于容易受潮，所以开瓶后务必将盖拧紧。 培养基：2-8℃保存半个月 （3）葡萄糖肉汤 成分和配制方法： 蛋白胨10g 朊胨10g NaCl5g 牛肉膏5g 酵母粉3g 葡萄糖4g 枸橼酸钠3g 硫酸镁3g DW1L
培养基配方及配制方法
培养基配方 1 斜面菌种保存培养基 1.1PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基） 称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸0.5h，纱布过滤，滤液补足1000ml，再加15g葡萄糖和15-20g琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管约5-10ml（视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。 1.2麦芽汁琼脂培养基 麦芽汁的制备：干麦芽首先进行粉碎（不能太粗，也不必太细。太粗影响糖化效率，过细影响过滤速度），按麦芽重量的3~4倍加水，搅拌均匀后，37℃左右浸泡1小时，然后缓缓加温至55~63℃（在升温过程中应不断搅拌使温度均匀），保温4~6小时（用0.02摩尔/升碘液测定为黄色至无色时），糖化结束。在糖化过程中，应每小时搅拌一次。取过滤后的清液，加1.8%琼脂，分装试管，每试管约5-10ml （视试管大小而定），121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。 2 基菌落总数检测 2.1平板计数琼脂培养基 将胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g 加入蒸馏水1000ml中，煮沸溶解后，调pH，然后在121℃下灭菌15min，取出，稍微冷却后，带热倒入培养皿中。 3志贺氏菌检测
3.1 GN增菌液 成分：胰蛋白胨：20g，葡萄糖：1g，甘露醇：2g，柠檬酸钠：5g，去氧胆酸钠0.5g，磷酸二氢钾4g，磷酸氢二钾1.5g，氯化钠5g，蒸馏水1000ml。pH7.0 制法：将上述物品加入蒸馏水中，加热溶解煮沸，调pH为7.0，分装，在115℃高压灭菌15min。 3.2 HE琼脂 成分：胨：12g，牛肉膏3g，乳糖12g，蔗糖12g，水杨素2g，胆碱20g，氯化钠5g，琼脂18~20g，蒸馏水1000ml0，0.4%溴麝香草酚蓝溶液16ml，Andrade指示剂20ml.，甲液20ml，乙液20ml。pH7.5 制法：将上述前七种成分加入400ml蒸馏水中作为基础液，将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解，加入甲液乙液到基础液中，调pH，再加入指示剂，并与琼脂液合并，待冷却至50~55℃，倾注浇平板。注1：此培养基不能高温灭菌。 注2：甲液的配置： 硫代硫酸钠：34g，柠檬酸铁钠：4g，蒸馏水：100ml。 注3：乙液的配置： 去氧胆酸钠：10g，蒸馏水：100ml。 注4：Andrade指示剂的配置： 酸性复红：0.5g，1mol/l的氢氧化钠溶液：16ml，蒸馏水：100ml。将酸性复红溶解于蒸馏水中，加入氢氧化钠溶液，数小时后如复红褪色不全，再加氢氧化钠溶液1~2ml。
第五章 微生物的营养和培养基习题整理
第五章微生物的营养和培养基 一、选择题 1. 大多数微生物的营养类型属于：（） A. 光能自养 B. 光能异养 C. 化能自养 D. 化能异养 2. 蓝细菌的营养类型属于：（） A．光能自养 B. 光能异养C．化能自养 D. 化能异养 3. 碳素营养物质的主要功能是：（） A. 构成细胞物质 B. 提供能量 C. A，B 两者 4. 占微生物细胞总重量70%-90% 以上的细胞组分是：（） A. 碳素物质 B. 氮素物质 C. 水 5. 能用分子氮作氮源的微生物有：（） A. 酵母菌 B. 蓝细菌 C. 苏云金杆菌 6. 大肠杆菌属于（）型的微生物。 A. 光能无机自养 B. 光能有机异养 C. 化能无机自养 D. 化能有机异养 7. 自养型微生物和异养型微生物的主要差别是：（） A. 所需能源物质不同 B. 所需碳源不同 C. 所需氮源不同 8. 基团转位和主动运输的主要差别是：（） A. 运输中需要各种载体参与 B. 需要消耗能量 C. 改变了被运输物质的化学结构 9. 单纯扩散和促进扩散的主要区别是：（） A. 物质运输的浓度梯度不同 B. 前者不需能量，后者需要能量 C. 前者不需要载体，后者需要载体 10. 微生物生长所需要的生长因子（生长因素）是：（） A. 微量元素 B. 氨基酸和碱基 C. 维生素 D. B，C二者 11. 培养基中使用酵母膏主要为微生物提供：（） A. 生长因素 B. C 源 C. N 源 12. 细菌中存在的一种主要运输方式为：（） A. 单纯扩散 B. 促进扩散 C. 主动运输 D. 基团转位 13. 微生物细胞中的C素含量大约占细胞干重的：（） A. 10% B. 30% C. 50% D.70%
实验常用培养基和基本特性
常用培养基及基本特性 1、RPMI-1640 Medium RPMI-1640广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞，杂交瘤细胞的培养，是目前应用十分广泛的培养基。主要用于悬浮细胞培养。其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴细胞、T细胞淋巴瘤细胞以及HCT-15上皮细胞等均可参考使用。 2、Minimum Essential Medium（MEM） 也称最低必需培养基，它仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素。成分简单，可广泛适应各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养。MEM-Alpha一般用于培养一些难培养细胞类型，而其它没有特殊之处的细胞株则几乎均可采用MEM来培养。 3、DMEM-高糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养,更适合高密度悬浮细胞培养。适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。 4、DMEM-低糖（标准型）是一种应用十分广泛的培养基，可用于许多哺乳动物细胞培养。低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。 5、DMEM/F12 DMEM/F12培养基适于克隆密度的培养。F12培养基成分复杂，含有多种微量元素，和DMEM以1：1结合，称为DMEM/F12培养基（DME/F12medium），作为开发无血清配方的基础，以利用F12含有较丰富的成分和DMEM含有较高浓度的营养成分为优点。该培养基适用于血清含量较低条件下哺乳动物细胞培养。为了增强该培养基的缓冲能力，改良之一是在DMEM/F12（1：1）中加入15mMHEPES缓冲液。 6、McCoy’s 5A McCoy’s 5A Medium 主要为肉瘤细胞的培养所设计，可支持多种（如骨髓、皮肤、肺和脾脏等）的原代移植物的生长，除适于一般的原代细胞培养外，主要用于作组织活检培养、一些淋巴细胞培养以及一些难培养细胞的生长支持。例如Jensen大鼠肉瘤成纤维细胞、人淋巴细胞、HT-29、BHL-100等上皮细胞。
实验室常用培养基大全
表皮葡萄球菌 产气肠杆菌 鼠伤寒沙门氏菌 单核增生李斯特氏菌 大肠埃希氏菌 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 表面接触碟/表面接触皿 https://www.wendangku.net/doc/e73935369.html, 金黄色葡萄球菌 酿酒酵母菌 脑心浸出液肉汤(BHI) 品红亚硫酸钠液体培养基 MFC肉汤 CFU培养基基础 4-甲基伞形酮葡糖苷酸(MUG)培养基蛋白胨 胰蛋白胨 胰酪蛋白胨 酵母浸粉 大豆蛋白胨 酸水解酪蛋白 明胶蛋白胨 马铃薯浸粉 琼脂粉 琼脂粉 动物组织胃蛋白酶消化物 肉胃酶消化物 牛肉浸粉 牛肝浸粉 牛肝浸粉 牛心浸粉 多价蛋白胨(多聚蛋白胨) 月示蛋白胨 玉米浸出粉 一次性培养皿 表面接触碟 一次性培养皿（密理博浮游菌采样）表面接触碟/表面接触皿 https://www.wendangku.net/doc/e73935369.html, 金属玻璃培养皿（可重复使用） 金属玻璃表面接触碟
嗜热脂肪肝菌芽孢菌片（ATCC7953 枯草杆菌黑色变种芽孢菌片（ATCC9372）121度高压灭菌化学指示卡 132℃压力蒸汽灭菌指示卡 葡萄糖 氯化钠 L-半胱氨酸盐酸盐 氧化酶试剂 三磷酸腺苷二钠盐（ATP） 费尔休林（无吡啶） SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 SDS-PAGE电泳液 SDS-PAGE上样缓冲液5倍 考马斯亮蓝R-250染色套装 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 大肠埃希氏菌 大肠埃希氏菌 产气肠杆菌 乙型副伤寒沙门氏菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 表面接触碟/表面接触皿 https://www.wendangku.net/doc/e73935369.html, 黑曲霉 生孢梭菌 大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉汤) 大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉汤) 无菌大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉? 大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉汤) 大豆酪蛋白消化液培养基 大豆酪蛋白琼脂培养基 大豆酪蛋白琼脂培养基 无菌大豆酪蛋白琼脂培养基 卵磷脂-吐温80营养琼脂培养基基础 胰化大豆坚固绿琼脂(TSFA) 营养肉汤(NB) 营养琼脂(NA) 0.5%葡萄糖肉汤培养基 pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 三糖铁琼脂培养基(TSI) 三糖铁琼脂培养基 R2A琼脂
常用培养基的配制
常用培养基的配制 （一）营养琼脂培养基 【用途】供细菌总数测定、保存菌种、细菌纯化、一般细菌培养、血琼脂培养基基础之用。 【成分】牛肉膏 3g NaCl 5g 蛋白胨 10g 琼脂 20g 【pH值】7.2±0.2 【制法】上述成分称取38g加蒸馏水1000ml，经121.3℃ 30min高压灭菌备用。 （二）蛋白胨水培养基 【用途】供细菌培养、吲哚试验之用。 【成分】蛋白胨 10g 氯化钠 5g 【pH值】7.6 【制法】将上述成分溶于1000ml蒸馏水中，过滤，分装于试管，每管2～3ml，经121.3℃20min高压灭菌备用。 （三）半固体培养基 【用途】供观察细菌动力、菌种保存、H抗原位相变异试验等。 【成分】蛋白胨 10g 氯化钠 5g 琼脂 2.5～3g 【pH值】7.6 【制法】上述成分加入1000ml蒸馏水中，加热溶解，分装于试管，每管3～4ml，经121.3℃ 20min高压灭菌备用。 （四）营养肉汤培养基 【用途】供一般细菌培养、转种、复苏、增菌等，也可用于消毒效果的测定。 【成分】蛋白胨 10g 氯化钠 5g 牛肉粉（牛肉浸汁） 3g 【pH值】7.2±0.2 【制法】将上述成分溶于1000ml蒸馏水中，分装小试管，每管2～3ml，经121.3℃ 20min 高压灭菌备用。 （五）葡萄糖蛋白胨水培养基 【用途】供甲基红试验及V-P试验之用。 【成分】蛋白胨5g 葡萄糖5g K2HPO4 (K2HPO4·3H2O) 5g (0.65g) 【pH值】7.0～7.2 【制法】将上述成分溶于1000ml蒸馏水中，过滤，分装试管，每管2～3ml，经112.6 ℃ 20min高压灭菌备用。 （六）伊红美蓝培养基（EMB培养基）
细胞培养基及其配制方法
D M E M(A)细胞培养基（粉末型）成分
DMEM(H) 细胞培养基（粉末型）成分 DMEM(L) 细胞培养基（粉末型）成分
双蒸水。（2）在室温（20℃到30℃）的水中加入干粉培养基，轻轻搅拌，不要加热。 （3）水洗包装袋的内部，转移全部的痕量干粉到容器内。 （4）加NaHCO3到培养基中。 （5）用双蒸水稀释到想要的体积，搅拌溶解。注意不要过分搅拌。 （6）通过缓慢搅拌加入1N NaOH 或1N HCL调节pH值，由于pH值在过滤时会上升到，因而调节pH值使它比最终想要的pH值低到。培养基在过滤前要保持密封。 配制培养基要注意以下问题： ●认真阅读说明书。说明书都注明干粉不包含的成分，常见的有NaHCO3、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等。这些成分有些是必须添加的，如NaHCO3、谷氨酰胺，有些根据实验需要决定。 ●配制是要保证充分溶解，NaHCO3、谷氨酰胺等物质都要等培养基完全溶解之后才能添加。 ●配制所用的水应是三蒸水，离子浓度很低。 ●所用器皿应严格消毒。 ●配制好的培养基应马上过滤，无菌保存于4度。
●液体培养基主要是为了科研工作的方便而设计的培养基，它是一种灭菌后保证无菌的溶液，必要时可制成无内毒素等的溶液，可节省科研人员的工作量。 DMEM各种成分都有什么作用 一般的基础培养基包括四大类物质：无机盐、氨基酸、维生素、碳水化合物。 （1）无机盐：对调节细胞渗透压、某些酶的活性及溶液的酸碱度都是必须的。 （2）氨基酸：缬氨酸、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精氨酸、胱氨酸(L型)都是细胞用以合成蛋白质的必需氨基酸，不能由其他氨基酸或糖类转化合成。除此之外，还需要谷氨酰胺(glutamine)。谷氨酰胺具有特殊的作用，对细胞的培养特别重要，能促进各种氨基酸进入细胞膜；它所含的氮是核酸中嘌呤和嘧啶的来源，还是合成—磷酸腺苷、二磷酸腺甘和三磷酸腺苷的原料。细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，谷氨酰胺缺乏可导致细胞生长不良甚至死亡。在配制各种培养液中都应补加一定量的谷氨酰胺。值得注意的是：谷氨酰胺在溶液中很不稳定，故4℃下放置1周可分解50%，使用中最好单独配制，置-20℃冰箱中保存，用前加入培养液中。 （3）维生素：是维持细胞生长的一种生物活性物质，在细胞中大多形成
实验一常用器皿包扎与培养基的配制和灭菌
实验一常用器皿包扎与培养基的配制和灭菌 一、实验目的 1学会常用器皿包扎方法 2学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤 3学会实验室灭菌锅的使用方法 二、常用器具和仪器 试管(testtube)，德汉氏小管(Durhamtube)，玻璃吸管 (glasspipette)，吸器，微量加样器(micropipette)，吸嘴(tip)，培养皿(petri dish)，三角瓶(erlenmeyer flask)，接种铲(inoculatingshovel),玻璃涂布器(glassspreade)，接种环(inoculatingloop)，接种钩(inoculating hook)，接种针(inoculating needle)，小塑料离心管(Eppendorf tube)，滴瓶(dropper bottle )，双层瓶(double bottle)，酒精灯⑻ cohol burner)，煤气喷头(coal gas sprinklerhead，试剂瓶，量筒，烧杯，温度计，石棉网，漏斗，烘箱，卧式灭菌锅，手提式灭菌锅，无菌操作台/ 室，过滤除菌设备，厌氧操作设备，小型发酵罐，离心机，培养箱/摇床，冷冻干燥机，蒸馏水器，超声波清洗仪，磁力搅拌器。 三、玻璃器皿的包装 1、培养皿的包装方法一：用旧报纸密密包紧，一般以5-8 套培养皿作一包。包好后用干热或湿热灭菌(见无菌操作技术)。 方法二：将培养皿放入金属(不锈钢)筒内，干热灭菌。金属筒配有盖子，内部还有一个可以放培养皿的带底框架。框架可以从筒内提出，以便装取培养皿。 包好的培养皿 金属筒和内部的框架 塑料培养皿架 2、吸管的包装
培养基配制的基本过程
培养基配制的基本过程 1.配制溶液 向容器内加入所需水量的一部分，按照培养基的配方，称取各种原料，依次加入使其溶解，最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质，需加热溶解，加热过程所蒸发的水分，应在全部原料溶解后加水补足。 配制固体培养基时，先将上述已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至完全融化。并不断搅拌，以免琼脂糊底烧焦。 2.调节pH值 用pH试纸（或pH电位计、氢离子浓度比色计）测试培养基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH进行调节，直到调节到配方要求的pH值为止。 3.过滤 用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时，最好折叠成六层，用滤纸过滤时，可将滤纸折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤。 4.分装 已过滤的培养基应进行分装。如果要制作斜面培养基，须将培养基分装于试管中。如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基，则须将培养基分装于锥形瓶内。 分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一只手握住几支试管或锥形瓶，依次接取培养基。分装时，注意不要使培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。 装入试管的培养基量，视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时，每只15×150毫米的试管，约装3～4毫升（1/4～1/3试管高度），如制作深层培养基，每只20×220毫米的试管约装12～15毫升。每只锥形瓶装入的培养基，一般以其容积的一半为宜。 5.加棉塞 分装完毕后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气，避免污染。棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。制作棉塞时，要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度，揪取手掌心大小一块，铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中，用右手食指插入棉花中部，同时左手食指与姆指稍稍紧握，就会形成1个长棒形的棉塞。棉塞作成后，应迅速塞入管口或瓶口中，棉塞应紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞的2/3应在管内或瓶内，上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。 6.制作斜面培养基和平板培养基 培养基灭菌后，如制作斜面培养基和平板培养基，须趁培养基未凝固时进行。 (1)制作斜面培养基。在实验台上放1支长0.5～1米左右的木条，厚度为1厘米左右。将试管头部枕在木条上，使管内培养基自然倾斜，凝固后即成斜面培养基。 (2)制作平板培养基。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入10毫升，以铺满皿底为度。铺放培养基后放置15分钟左右，待培养基凝固后，再5个培养皿一叠，倒置过来，平放在恒温箱里，24小时后检查，如培养基末长杂菌，即可用来培养微生物。
实验室常用培养基配方
031*-2./4,+ 5 86779\_V_[_PUY\RQTXYWYS^QO\OWYS YXWUXR:bkkiNIIlllHk_d_j_H`hfH`g Ofic`ceecg EKJJ faIfeF rqq 74p 76z 7:5256658vq 76 ro Jf v 4z 7:5256658-}vq 76eyU .A so ]q uq 76icuEKRZXoaYEQp ,vq 76A to |qoss 17hkWhLcA uo xSR /C r 76p SDYE nsq BGMA UZ\S ELM faIfeF su 74p 76*./}vq 76 ro Jf ros 4*./}-}vq 76eyU .A so ]q uq 76icuEKRZXoaYEQp ,vq 76A to |qoss 17hkWhLcA uo xSR /C r 76p SDYE nsq BGMA ]GS_e ELJ faIfeF nsq BIVGMA r + ro Jlwgt\E -} r +rH .A so ]q~yqq 76Nme 0uEKR_FoaA to O]v ,,1-~C~qos 76@EP`:~+,xoq A uo ]me 0u^j{[Qp ,r +A vo TvTzicYEdn ,svA wo ]q r 76z 7:5256658C rqq 74p 76DYb *ZXA xo u BGMA
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大肠杆菌培养基配制及培养方法
芽孢杆菌常用培养基配方
实验室常用培养基