缺血修饰白蛋白的研究进展与应用前景
缺血修饰白蛋白的研究进展与应用前景
急性冠脉综合征(acute coronary syndrome，ACS)是由于冠状动脉内粥样斑块破裂、表面破损或出现裂纹，继而出血和血栓形成，引起冠状动脉完全性阻塞所致，其临床表现为不稳定性心绞痛、急性心肌梗死或心源性猝死。
心肌缺血是ACS最常见的机制。目前对急性胸痛是否是由心肌缺血引起的诊断还是一个难题，尤其是那些胸痛时心电图正常、无心肌梗死证据的病人。传统的临床检测指标，如12导联心电图、心肌坏死标志物以及影像学技术都不是心肌缺血早期诊断的“金标准"。超声心动图检查只有在心肌缺血造成室壁厚度的20%以上损伤时才能检测到，且受到非缺血性室壁运动异常的干扰而受到限制。
核素显像只有在损伤心肌>10g时才可检出，且费用较高，不利于推广。cTnI是敏感而特异的心肌梗死标志物，但只有在心肌坏死后4～6h后才能检测到且在可逆性心肌缺血时并不升高。Bar-Or等发现缺血修饰白蛋白(IMA)在急性心肌缺血后5～10min迅速升高，通过ACB实验可以快速简便测定。医务工作者迫切需要这样一种在心肌缺血早期出现而又比较敏感的心肌缺血标志物。
1．IMA形成机制
完整的白蛋白在肝脏中合成，由585个氨基酸残基组成，相对分子量为66.5KD，在血液中的浓度为0.63mmol/L，半衰期为19～20d。其氨基末端为人类特有的一段序列，正常生理情况下，能够与过渡金属，钴、铜、镍等结合。IMA 是人血清白蛋白在流经缺血组织时产生的，其形成机制可能与氨基末端的N-Asp-A1a-His-Lys(N-天冬氨酸-丙氨酸-组氨酸-赖氨酸)的氨基酸序列结构发生变化有关。目前对缺血引起的钴白蛋白结合能力改变的机制尚未十分明确。
当组织发生缺血和再灌注时，由于组织局部反应性氧产物增多、酸中毒、细胞膜上各种能量依赖性离子泵破坏等变化，导致白蛋白结构发生改变，与过渡金属的结合能力下降，形成缺血修饰白蛋白。白蛋白在此可能充当了一个抗氧化剂的角色，以减轻缺血再灌注引起的损伤，是机体的一种自我保护机制。
Droy等首次指出IMA形成与活性氧产物(reactive oxygen species，ROS)形成直接相关，并证实·OH在IMA形成中发挥重要作用。通过化学方法生成ROS并利用·OH清除剂巯丙酰甘氨酸(mercaptopropionylglycine，MPG)体外模拟IMA的形成过程，发现通过Fenton反应产生·OH的一组血清中的IMA迅速升高。在15min的反应过程中，IMA吸光值比基线水平最大增高43.6%，而另一组中加入·OH清除剂后，IMA产生的量与血清对照组(不加入任何试剂)无明显差别。说明ROS，尤其是·OH可能改变白蛋白的化学结构，导致IMA的产生。
2．IMA结构分析
Bhgavan在对6名ACB实验显示高吸光值(ABSU≥0.7)的患者和1名无缺血患者的血清白蛋白经纯化后，分析N-末端氨基酸序列，发现一个吸光值为0.8ABSU的患者白蛋白N-末端氨基酸序列为XXHKSEVAHRF，丢失2个氨基酸残基DA，其它均表现为野生型的N-末端序列(DAH2KSEVAHRF)，而该患者的临床诊断提示无缺血，表现为假阳性。正常人血清白蛋白N-末端缺失Asp(D)或Asp-A1a(DA)，DA残基的缺失可能与原白蛋白在肝细胞内处理缺陷有关，其发生机率尚不清楚。
3．IMA的检测原理和方法
目前IMA的检测方法主要是白蛋白钴结合试验(albumin-cobaltbinding，ACB)。Bar-Or于1990年在急性冠脉综合症患者血清中寻找生化标志物时，发现缺血个体的血清白蛋白与外源性的钴离子结合能力减弱，而正常个体的血清白蛋白以自然状态存在，其氨基末端与钴等过渡金属可以牢固结合。通过向血清中加入定量的氯化钴，充分反应后，加入等量二硫苏糖醇(DTT)可与游离钴离子发生显色反应，通过比色检测其吸光值可以定量测定游离的钴离子，从而间接反应IMA水平。
3．1 比色测定法
Bar-Or首次使用手工测定方法检测血清中IMA。将50μl 1g/L的氯化钴加入到200μl血清中，充分混匀，10min 后，再加入50μl 1.5g/L DTT，充分混匀后，孵育2min，加入1ml 0.9%的生理盐水终止反应，于470nm波长下比色，报告单位为吸光度单位(absorbanceunit，ABSU)。第二代ACB试验由美国Ischemia Technology公司创立，可在CobasMIRAPLUS、CobasFARA、KoneLab20、日立911等多种全自动生化分析仪上操作，结果可用U/ml或KU/L表示。3．2 其他检测方法
液相色谱法、质谱测定法以及核磁共振法等，但因检测成本较高，不适合临床常规检测。
4 IMA检测的临床意义
4．1 急性心肌缺血的早期诊断指标
缺血修饰白蛋白对心肌缺血有很高的灵敏度，且出现较早，结合心电图表现和肌钙蛋白可用于排除急性冠脉综合征，降低急诊胸痛病人的检查费用并减少其留院观察时间。
冠脉腔内成形术是一个良好的短暂心肌缺血模型，通过球囊扩张诱发短暂心肌缺血。Bar-Or等收集41例接受择期经皮冠脉腔内成形术(percutaneous transluminal coronary angioplasty，PTCA)的患者术前、术毕、术后6h和24h 的血浆样本及13例接受诊断性冠脉造影的患者术前、术后血浆样本，分别检测IMA、肌红蛋白(myoglobin，Myo)、肌酸激酶同工酶(creatinekinase-MB，CK-MB)及肌钙蛋白(cardiactroponinI，cTnI)。结果显示41例接受PTCA患者中有34例在PTCA术毕血浆中IMA升高，平均变异百分比[(术后IMA浓度一术前IMA浓度)/术前IMA浓度×100]为
10.1%(P<0.000001)，而接受诊断性冠脉造影患者的平均变异百分比为0.9，二者相比P<0.001。术后6h及24h的平均变异百分比分别为2.7和1.8(P=0.38和0.21)。而Myo、CK-MB和cTnI在PTCA术毕无明显升高，在术后6h及24h明显升高。表明IMA出现较早，可以为ACS病人的早期诊断节约时间，降低ACS对病人的死亡率和致残率。Cho最新报道，IMA在急性冠脉痉挛诱发的短暂性心肌缺血中明显升高，是一种灵敏度很高的心肌缺血标志物。研究对象为26名接受麦角新碱激发实验的患者、18名接受心脏介入手术的患者和10名冠脉造影术显示正常的病人，结果显示激发实验阳性的病人血清中IMA的中位数明显高于基线水平[128.5(114.8，171.8)U/ml>106.0(96.5，115.5)U/ml，P<0.001)]。而激发实验阴性的病人IMA与其基线水平相比较并不升高[n=10，109.5(103.3，115.0)<113.5(104.0，118.3)U/ml，P=0.108]。经皮冠脉介入手术后的病人血清中IMA亦较基线水平升高[151.0(129.3，231.0)U/ml>113.5(101.0，131.5)，P<0.0001]，而冠脉造影术后的病人IMA并不升高[108.5(99.3，114.0)<110.0(108.0，114.0)U/ml，P=0.085]。激发试验后IMA升高大于9U/ml时即可判断冠脉发生痉挛，ROC曲线下的面积为0.975，95%置信区间(0.921-1.000)，敏感性为94%，特异性99%。因而缺血修饰白蛋白可能作为冠脉痉挛诱发的一过性心肌缺血的标志物。
Bhagavan等将一健康中心的167名(男85人，女82人)患者的临床诊断与ACB试验相结合，采用双盲试验，在470nm 波长时测定非心肌缺血患者与心肌缺血患者吸光值分别为0.43±0.10ABSU和0.63±0.25ABSU，(P<010001)当临界值为0.5ABSU时，IMA诊断心肌缺血的灵敏度和特异性分别为88%和94%，阳性预测值(PPV)为92%，阴性预测值(NPV)为9l%，说明IMA可有效地将心肌缺血与非缺血病人区别开来。但在比较心肌缺血与心肌梗死时，ROC曲线下的面积仅为0.66，故ACB试验可作为评估心肌缺血的早期诊断指标，IMA值的高低与心肌缺血的程度相关，但对于心肌缺血的个体是否发生心肌梗死不敏感，证明IMA是心肌缺血的指标。Sbarouni等连续对40例接受射频消融术的病人(男、女各20例，平均年龄为47±16岁)研究发现，IMA在术前、术中、术后2h、术后1d无明显变化，而CK、CK-MB、cTnI较术前明显升高(P<0.0001)，证明IMA不同于心肌损伤标志物，在单纯心肌细胞坏死时无明显升高，也说明IMA是心肌缺血标志物，非心肌坏死标志物。
Christenson等进行了一项多中心的临床试验，首次报道了ACB实验较高的阴性预测值和灵敏度，可以用于早期预测6～24h后的肌钙蛋白结果。从4个医疗中心筛选了256例急性冠脉综合征病人，在患者入院即刻(3h以内)和6-24h 后抽血标本2次，测定肌钙蛋白和IMA。以就诊时的IMA值预测6-24h后的肌钙蛋白结果。并对109例健康者(男55名，女54名)测定其单侧95%百分位数为80.2U/ml。通过受试者工作特征曲线(ROC)来反映IMA对肌钙蛋白的预测能力。根据最佳敏感性和特异性原则选择ROC曲线截断点(cutoffpoint)，在最佳cutoff值75U/ml时，其灵敏性及特异性分别为83%和69%，阴性预测值(NPV)为96%，阳性预测值(PPV)为33%。
4．2 用于ACS早期诊断及危险程度分级
胸痛常提示不稳定性心绞痛或急性心肌梗死，每年约有数百万人因胸痛入院，不到20%的病人最终诊断为ACS引起的缺血性心脏病，近70%的低风险患者必需留院观察6～12h，并接受进一步检查，而通过前瞻性研究表明，近10%有明显心肌缺血病人提前出院。因而，早期准确地诊断那些低风险最终发展为AMI的胸痛病人及高风险随后发生AMI的病人，对于改善病人预后，降低死亡率，节约医疗资源有重要意义。
Collinson等对539例因胸痛入院的病人进行研究，其中538人有充分的临床证据确认或排除急性心肌梗死。最终诊断按照ESC/ACC标准，37人(619%)发生急性心肌梗死，501人诊断为非急性心肌梗死(93.1%)。37人中IMA单独升高的有2人，cTn单独升高的有19人，二者同时升高的有16人。CTn阳性、IMA阳性或两者均为阳性时灵敏度均为100%(90.5%～100.0%)，特异性仅为34.5%(30.4%～38.7%)。而阴性的IMA与阴性的cTn联合排除AMI的灵敏度为100%，表明在AMI的排除与诊断评估中，IMA检测更适合用于排除AMI。
Sinha等对208例3h内发生的急性胸痛患者进行研究。患者入院后即记录其12导联心电图，同时采血测其IMA及cTnI，比较三者单独及联合应用诊断ACS的价值，并与最终诊断非缺血性胸痛、不稳定性心绞痛、ST抬高性及非ST抬高性心肌梗死相联系。对整个胸痛人群，IMA对心肌缺血引起的胸痛诊断的灵敏度为82%、ECG为45%、cTnI为20%，IMA 与cTnI或ECG联合，其灵敏度分别为90%和92%。三项结合起来，灵敏度提高到95%，明显高于IMA和cTnI联合(P=0.02)，与IMA和ECG联合相当(P=0.13)。ECG与cTnI联合诊断胸痛的灵敏度为53%，加入IMA这一指标后，ROC曲线下的面积从0.74上升到0.83。以上数据表明，IMA可作为不稳定性心绞痛(unstable angina，UA)诊断的一项指标，IMA与ECG 及cTnI结合诊断对减少非心肌缺血性胸痛病人住院时间有重要意义。
IMA可用于急诊胸痛患者的危险分层。Pollack等将251例因胸痛症状就诊于急诊室的患者的心脏危险性评价(cardiac risk assessment，CRA)与就诊时检测的IMA水平比较，不考虑IMA水平时，66例患者被评为极低危险考虑IMA水平时，236例患者被评为极低危险。IMA阴性患者经诊断均无ACS，其阴性预测值为100%。IMA阴性患者进行第2次CRA时，55%的患者危险程度降低，39%的患者危险程度保持不变，仅有6%患者的危险程度升高而IMA阳性患者的对应值分别为5%、35%和60%。但亦有研究结果相反，Keating等[14]认为IMA不能作为一个急诊胸痛危险程度分级的指标，在研究的339例病人中，277例病人入院后即测IMA和cTnI，并于胸痛发作后至少8h测其cTnI，分析其阴性预测值为97%，敏感性为9716%，特异性为1316%。病人在IMA和肌钙蛋白双阴性的情况下仍有2%的风险发生心肌梗死。另有学者Sharma等[15]将IMA应用于终末期肾脏疾病(end stage renal disease，ESRD)患者心肌缺血的检测，以此预测患者存活率。通过对114例准备接受肾移植术的患者进行多巴酚丁胺负荷超声心动图实验
(dobutamine stress echocardiography，DSE)，并检测其实验前(基线)与实验后1hIMA水平，结果显示35例病人(31%)DSE实验阳性，DSE实验阳性与阴性的患者基线IMA水平没有明显差别，而实验后1hDSE阳性与阴性患者IMA水平相比明显升高(26.5+/-19.1KU/L>8.2+/-9.6KU/L，P=0.007)，通过ROC曲线分析，预测心肌缺血发生的IMA最佳升高值为20KU/L，其灵敏度81%，特异性为72%。在随访2.25±0.71年的时间里有18人死亡，10人死于心脏疾病，因而DSE 实验中IMA升高大于20KU/L的患者其存活率会明显下降(P=0.02)。
5．IMA检测的局限性
IMA的心脏特异性较低。马拉松运动员赛后24～48hIMA水平升高，推测与迟发性胃肠缺血或骨骼肌缺血有关。系统性硬化症患者IMA水平也略有升高，这可能反映了机体的过氧化状态而与心肌缺血无关。IMA升高也见于休克、终末期肾病和某些肿瘤患者，但不见于外伤、组织缺氧、骨骼肌缺血或外周血管疾病患者。因而在用于排除急性冠脉综合征时，需结合病人临床资料、心电图、肌钙蛋白及其它生化标志物。
6．结语
IMA是美国食品药品管理局(FDA)认可的第一个检测心肌缺血的生化标志物。IMA作为一种新的心肌缺血标志物，具有高灵敏度、高阴性预测值的特点，有助于对急性胸痛病人早期评估及危险程度分级，在心肌梗死之前干预治疗，改善了患者预后和减少死亡率，同时有助于非缺血性胸痛病人早期出院，减少留院观察时间，节约医疗资源。但其阳性预测值较低，需结合心肌缺血标志物、心电图及临床资料综合评价。IMA检测尚缺乏统一参考值范围及临界值，其在ACS的排除及诊断评估中的意义仍有待进一步探讨。
缺血修饰白蛋白测定试剂盒(白蛋白-钴结合法)产品技术要求meigaoyi
缺血修饰白蛋白测定试剂盒（白蛋白-钴结合法） 适用范围：用于体外定量检测血清中缺血修饰白蛋白的浓度。 1.1 包装规格 a) 试剂1：2×45ml，试剂2：2×15ml； b) 试剂1：1×60ml，试剂2：1×20ml； c) 试剂1：2×150ml，试剂2：2×50ml； d) 试剂1：1×45ml，试剂2：1×15ml； e) 试剂1：1×15ml，试剂2：1×5ml； 1.2试剂主要组成成分 试剂1主要组成成分： 氯化钴(CoCl2) 5mmol/L 表面活性剂 0.5ml/L Proclin300 0.5ml/L 试剂2主要组成成分： 二硫苏糖醇（DTT） 0.1g/L Proclin300 0.5ml/L 2.1 外观和性状 2.1.1 试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏；外包装完好、无破损，标签完好、字迹清晰。 2.1.2 试剂1应为无色或浅粉色液体，无沉淀、无悬浮物、无絮状物。 2.1.3 试剂2应为无色或淡黄色液体，无沉淀、无悬浮物、无絮状物。 2.2 净含量
液体试剂的净含量应不少于标示值。 2.3 试剂空白吸光度 试剂空白吸光度，应≤0.3； 2.4 分析灵敏度 测试70U/mL的被测物时，吸光度变化（ΔA）应不低于0.15. 2.5 准确性 与比对试剂盒同时测试40例线性范围内的不同浓度的血清样本，样本浓度在[1,152]U/mL范围内，其相关系数（r）≥0.975；测定浓度在[1,50)U/mL范围内绝对偏差不超过±7.5U/mL；测定浓度[50,152]U/mL范围内相对偏差不超过±15%。 2.6 重复性 变异系数（CV）应不超过10%。 2.7 线性 2.7.1在[1,152]U/mL范围内，线性相关系数r应不低于0.990； 2.7.2 在[1,50)U/mL范围内绝对偏差不超过±5U/mL；[50,152]U/mL范围内相对偏差不超过±10%。 2.8 批间差 批间相对极差≤10%。 2.9 稳定性 该产品在2℃～8℃条件下贮存有效期为18个月，取效期末的产品进行检测，应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7之规定。
新项目缺血修饰蛋白
缺血修饰白蛋白(IMA)的临床意义 胸痛是急诊室第二大常见症状。约1/5的胸痛病人最终被诊断急性冠脉综合征（ACS）。绝大多数临床指南有如何处理ACS的建议。但在急诊室如何迅速准确排除ACS，特别对ECG、肌钙蛋白均阴性的胸痛病人如何正确处理是更大的挑战。常规AMI检测项目多为心肌坏死后产物，往往出现比较晚，阳性时病人往往失去第一救助时间。缺血修饰白蛋白(IMA)是一种新的较为理想的缺血标志物,它是第一个被美国食品药品管理局(FDA)批准销售的心肌缺血标志物。利用白蛋白-钴结合试验检测缺血修饰白蛋白含量,作为检测早期心肌缺血的指标。多方面研究证明,IMA可敏感的反映心肌缺血状况,在急性冠状动脉综合征的早期诊断、危险分层、指导治疗等方面有重要意义,是目前较为理想的检测心肌缺血的生化标志物. IMA检测的临床意义: 1．IMA是检测早期心肌缺血的敏感指标，故能更早发现急性心肌缺血，更早预测心脏事件的相对危险。 IMA是急性冠脉综合征(ACS)诊断的生物标志。ACS具有发病急、变化快、临床表现与危险性不均一等特征，早期诊断困难。传统的生物标志物如肌钙蛋白(cTn)、肌红蛋白(Myo)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)只有在心肌发生坏死时才升高，但这时已给患者带来了不可逆的病理损害。因此，急需一种可以反映心肌缺血的早期敏感的生化指标用于早期诊断，而IMA 是近年来的研究热点，为ACS早期诊断的研究开辟了新的道路。IMA对ACS患者心肌缺血检出的灵敏度是ECG的2倍、cTn的4倍。 2．IMA是检测冠脉痉挛导致缺血的生化标志物。 IMA是一个缺血标志物，而不是一个坏死诊断标志物。 3．IMA不仅可以用于ACS患者的早期诊断，还可以用于冠脉事件即PCI术后判断指标。无侧支循环患者的IMA值明显高于有侧支循环者，IMA值升高与病变严重程度相关。 4．IMA值可作为早期辨别急性脑卒中生化标志物——脑出血发作初期，其中位数水平增加。 IMA 与心肌缺血: （1）IMA 在心肌缺血后5~10 min 即可升高,缺血持续进行时则持续上升. （2）血管造影术或球囊扩张术所致的缺血现象时IMA 会快速上升，且上升程度和扩张的数目、压力、时间有关，数小时后回复正常。 IMA 与急性冠脉综合征: （1）IMA 对预测近期发生急性心肌损伤的阳性率达94.4%. （2）对于诊断ACS，IMA 有相当高的灵敏度（>80%），但是特异性较差；联合ECG 与cTNs 能提高对ACS早期诊断的敏感度；IMA 高的阴性率可以作为ACS 排除诊断的指标. （3）IMA 检测有助于ACS 患者不良预后的判断 IMA与心肌钙蛋白(cTn)的关系: 1．心肌坏死后6 hrs cTn释放入血，而IMA在心肌缺血数分钟后即可释放入血。因此，单纯靠cTn等心脏标志物作出ACS诊断将迟于ACS的实际病程，早期可能漏诊。
缺血修饰白蛋白(IMA)测定试剂盒(游离钴比色法)产品技术要求北京利德曼
缺血修饰白蛋白（IMA）测定试剂盒（游离钴比色法） 适用范围：本产品用于体外定量测定人血清中缺血修饰白蛋白（IMA）的含量。 1.1包装规格 试剂1（R1）:1×45mL、试剂2（R2）:1×15mL； 试剂1（R1）:4×60mL、试剂2（R2）:4×20mL； 试剂1（R1）:5×60mL、试剂2（R2）:5×20mL； 试剂1（R1）:3×45mL、试剂2（R2）:3×15mL； 试剂1（R1）:2×60mL、试剂2（R2）:2×20mL。 校准品（选配）：两个水平2×0.5mL；2×1mL。 质控品（选配）：两个水平2×0.5mL；2×1mL。 1.2 主要组成成分
注：校准品和质控品浓度具有批特异性，具体数值见瓶标签。 2.1外观 试剂1：无色澄清液体，试剂2：无色澄清液体。 校准品：无色或淡黄色澄清液体。 质控品：无色或淡黄色澄清液体。 2.2净含量 液体试剂和校准品、质控品的净含量不得低于标示体积。 2.3试剂空白吸光度 试剂空白吸光度应不小于0.6 。 2.4分析灵敏度 浓度为78U/mL时，吸光度差值（△A）应不小于0.15 。 2.5线性 在[40，120]U/mL线性范围内，线性相关系数r应不小于0.995。在[40，120]U/mL 区间内，线性相对偏差应不超过±10%。 2.6重复性 2.6.1 试剂重复性 测试（78.0±5.0）U/mL区间样本时，所得结果的变异系数CV应不大于5%。2.6.2校准品和质控品重复性 校准品和质控品的变异系数CV应小于10%，零值校准品的绝对偏差应不超过±0.2U/mL。 2.7批间差 测试（78.0±5.0）U/mL区间样本时，所得结果的相对极差R应不大于10%。
缺血修饰白蛋白测定试剂盒(ACB法)产品技术要求beijian
缺血修饰白蛋白测定试剂盒（ACB法） 适用范围：本产品用于体外定量测定人血清中缺血修饰白蛋白的含量。 1.1 规格 具体产品规格见下表:
1.2 组成成分 1.2.1 试剂的组成 试剂1：Tris缓冲液 30mmol/L CoSO 1mmol/L 4 试剂2：DTT 1mmol/L 1.2.2 校准品的组成（选配） 水平1：缺血修饰白蛋白 0.0 U/ml 该校准品为水基质液体校准品 水平2：缺血修饰白蛋白（40.0～85.0）U/ml 该校准品为血清基质液体校准品 1.2.3质控品的组成（选配） 水平1：缺血修饰白蛋白（20.0～75.0）U/ml 该质控品为血清基质质控品 水平2：缺血修饰白蛋白（75.1～100.0）U/ml
该质控品为血清基质质控品 校准品、质控品有批特异性，具体靶值见靶值表。 2.1 外观 2.1.1 外包装完整无破损； 2.1.2 试剂1：无色澄清透明液体； 2.1.3 试剂2：无色澄清透明液体； 2.1.4 校准品：无色或浅黄色透明液体； 2.1.5 质控品：无色或浅黄色透明液体。 2.2 净含量 净含量不低于标示值。 2.3 试剂空白吸光度 在主波长505nm、副波长700nm、37℃条件下，试剂空白吸光度不小于0.6。 2.4 线性 2.4.1 线性范围 [20.0，100.0]U/ml，相关系数r＞0.990。 2.4.2 线性偏差 (50.0，100.0]U/ml线性范围内，相对偏差不超过±10%； [20.0，50.0]U/ml线性范围内，绝对偏差不超过±5.0U/ml。 2.5 分析灵敏度 检测浓度为78.0U/ml的样本时，吸光度变化不小于0.002。 2.6 重复性 2.6.1 试剂重复性
延边地区健康人群缺血修饰白蛋白参考区间的建立
延边地区健康人群缺血修饰白蛋白参考区间的建立 发表时间：2015-07-21T09:53:38.633Z 来源：《医药前沿》2015年第9期供稿作者：李晓庆1 邵薇1 贾碧野1 姜春善1 魏清2 尤昕[导读] 急性冠状动脉综合征(acute coronary syndromes, ACS)是冠心病最常见的表现形式。ACS是临床常见的造成急性心肌缺血性死亡的主要原因。 李晓庆1 邵薇1 贾碧野1 姜春善1 魏清2 尤昕1（通迅作者）（1延边大学附属医院检验科吉林延边 133000）（2吉林大学口腔医院检验科吉林长春 130021）【摘要】目的：建立延边地区健康人群血清缺血修饰白蛋白(IMA)的参考区间。方法：采用白蛋白钴结合(ACB)方法检测386例健康人群血清IMA含量，按民族、性别和年龄分组进行比较，建立本地区的IMA参考区间。结果：不同民族、不同性别和年龄分组之间IMA含量均无明显差异(P>0.05)，延边地区IMA的参考区间为≥61.47U/mL。结论：建立了延边地区血清缺血修饰白蛋白(IMA)的参考区间，为临床结果 分析提供依据。 【关键词】缺血修饰白蛋白；白蛋白钴结合试验；参考区间【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）09-0026-02 Yanbian area the establishment of a healthy crowd ischemia modified albumin reference range Li Xiaoqing, Shao Wei, Jia Biye, Jiang Chunshan, You Xin. The Affiliated Hospital of Yanbian University, Jilin Province, Yanbian 133000, China; Wei Qing. Stomatological Hospital of Jilin University, Jilin Province, Changchun 130021, China 【Abstract】Objective: To establish the yanbian region health crowd serum ischemia modified albumin (IMA) reference range. Methods: Using albumin cobalt binding (ACB) method, IMA content detected 386 cases of healthy human serum. According to the comparison, nationality, gender and age group IMA reference interval in the region is established. Results: Between different nationalities, different gender and age group IMA content had no obvious difference (P > 0.05), the yanbian area IMA reference range for acuity 61.47 U/mL. Conclusion: The established the yanbian area serum ischemia modified albumin (IMA) reference range, provide the basis for the clinical results. 【Key words】 Ischemia modified albumin; Albumin cobalt test; Reference range 缺血修饰白蛋白(ischemia-modified albumin, IMA)，又称钴结合蛋白(albumin cobalt binding, ACB)，是血清白蛋白在流经组织缺血处时N末端氨基酸改变形成的。Bar-Or等[1]首先报告急性冠脉综合征(acute coronary syndromes, ACS)患者血清白蛋白结合外源性钴的能力降低，并应用ACB比色分析法测定IMA，用于检测心肌缺血。Chek等[2]通过实验证明了虽然IMA不能评估心肌梗死患者心肌缺血的程度，但能排除心肌缺血的诊断。不同地区、不同民族、不同性别和不同年龄人群的参考区间可能存在差异。我们应用日立7600全自动生化分析仪，采用浙江伊利康生物技术有限公司提供的检测试剂在延边地区建立本实验室的参考区间。 1.对象与方法 1.1检测对象 血清标本来自延边州延边大学附属医院体检中心386例健康体检者，健康者为经体检医生筛选出肝肾功能正常，心肺脑功能正常，血压正常，近期无过量饮酒、吸烟，无服药、手术及住院治疗，无肥胖症，无遗传病史的成年男女。朝鲜族192例，男101 例，女91例，年龄20～76岁；汉族194例，男104 例，女90例，年龄20～84岁。空腹安静状态下采集静脉血，3000 r/min离心10分钟，2小时内完成检测。 1.2仪器与方法 日立7600全自动生化分析仪，按照浙江伊利康生物技术有限公司提供的检测试剂说明书设置参数：样品20?l；R1：150?l；R2：50? l；主波长505nm。检测原理是血清中白蛋白与钴离子结合后，加入显色剂与剩余的游离钴离子反应，生成的产物通过与同样处理的IMA校准品进行比较，即可计算出样品中IMA的含量。 1.3统计学处理 数据采用SPSS11.5统计学软件处理，IMA数据为近似正态分布，两独立样本比较采用t检验统计，多组间样本均数比较应用One-Way ANOVA检验，P<0.05为有统计学差异。 2.结果 2.1不同民族、不同性别以及年龄分组IMA(U/mL)含量分析朝鲜族与汉族比较血清IMA含量无明显差异(t=1.158,P=0.248,P>0.05)；男性与女性比较血清IMA含量无明显差异(t=1.43,P=0.153,P>0.05)；各年龄组男性与女性比较亦均无明显差异(P>0.05)。不同民族、不同性别的各年龄组之间IMA含量均无统计学差异(P>0.05)，见表。 表不同民族、不同性别各年龄段IMA(U/mL)含量分析
白蛋白钴结合试验测定缺血修饰白蛋白方法学评价
白蛋白钴结合试验测定缺血修饰白蛋白方法学评价 论著 李美忠 姜庆波(常州市第一人民医院检验科 江苏 常州 223200) 【摘要】 目的 白蛋白钴结合(A C B )试验测定缺血修饰白蛋白(I M A ),并确定参考正常范围。方法 应用日立7600-120E 型全自动生化分析仪,采用A C B 法测定I M A 。结果 A C B 法批内变异系数(C V )为1.43%,批间C V 为1.70%。不同浓度的I M A 结果线性相关,回归方程为Y=-13.752X +83.835,r =0.9586。脂血(T G ≤20.5m m o l /L )、黄疸(T B I L ≤259.6),对测定无影响,溶血对I M A 测定影响较大。健康人群的参考范围为≥62.84U /m l ,心肌缺血患者为54.49U/m l 。结论 I M A 是诊断心肌缺血的有效工具,应用全自动生化分析仪检测I M A 快速、准确、简便。 【关键词】 心肌缺血 缺血修饰白蛋白 白蛋白钴结合试验 D e t e c t i o no f I s c h e mi a -m o d i f i e d a l b u m i nb y C o b a l t b i n d i n g t e s t .L I M e i -z h o n g ,J I A N GQ i n g -b o .D e p a r t m e n t o f C l i n i c a l L a b o r a t o r y ,C h a n -g z h o uF i r s t P e o p l e H o s p i t a l ,C h a n g z h o uJ i a n g s u 223200,C h i n a . 【A b s t r a c t 】 O b j e c t i v e I n t h e p r e s e n t s t u d y ,t h e i s c h e m i a -m o d i f i e d a l b u m i n(I M A )i n s e r u ms a m p l e s w a s d e t e c t e d b y t h e A C Bm e t h o d ,a n d i t s r e f e r e n c e r a n g e w a s a l s o d e t e r m i n e d .Me t h o d s I M Aw a s d e t e r m i n e db y t h e a l b u m i n c o b a l t b i n d i n g (A C B )t e s t u s i n g t h e H i t a c h i 7600-120Ea u t o m a t i c b i o c h e m i c a l a n a l y z e r .R e s u l t s C o e f f i c i e n t o f v a r i a t i o n (C V )f o r w i t h i n -r u n a s s a y s w a s 1.43%;C Vf o r b e t w e e n -r u n a s s a y s w a s 1.70%.M e a s u r e m e n t o f A C Bu s i n gd i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n s o f I M Aw a s l i n e a r ,r e g r e s s i o ne q u a t i o nw a s Y=-13.752X+83.835,r =0.9586,P >0.05.T h e r e w a s n o s i g n i f i c a n t i n t e r f e r e n c e o b s e r v e d f o r t r i g l y c e r i d e s (T G≤20.5m m o l /L)o r b i l i r u b i n (T B I L≤259.6μm o l /L ).H a e m o -g l o b i nh a d i n t e r f e r e n c e o nt h e A C Bt e s t .H e a l t h y i n d i v i d u a l 's r e f e r e n c e v a l u e w a s ≥62.45U/m l .C o n c l u s i o n I M Am a y b e a n e f f e c t i v e b i o m a r k -e r f o r t h e d i a g n o s i s o f m y o c a r d i a l i s c h e m i a .A u t o m a t i c b i o c h e m i c a l a n a l y z e r p r o v i d e s ar a p i d ,c o n v e n i e n t a n de a s y w a y f o r t h e d e t e c t i o no f I M A . 【K e yw o r d s 】 M y o c a r d i a l i s c h e m i a ;I s c h e m i a -m o d i f i e da l b u m i n ;C o b a l t b i n d i n g t e s t 缺血修饰白蛋白(i s c h e m i a -m o d i f i e da l b u m i n , I M A )是一种对心肌缺血敏感的新型标记物。I M A 是急性冠状动脉综合征(A C S )中心肌缺血发生数分钟后,导致白蛋白受损,其N 末端2～4个氨基酸发生改变而形成,其与过渡金属结合能力较正常白蛋白为低。其表现为I M A 在心肌缺血发生6h 内能检测到钴结合力明显低于非缺血者。因此,I M A 是早期反映心肌缺血的一个 新灵敏指标。2000年B a r -O r 等[1] 用手工法进行I M A 的白蛋白钴结合(a l b u m i n c o b a l t b i n d i n g ,A C B )试验,手工法操作较繁琐,不适合工作量较大时使用,且血清用量较大(200μl )。鉴于全自动生化分析仪具有加样量少(10～30μl ),且快速、准确、简便的特点,现通过全自动生化分析仪来对A C B 法进行方法学验证,并建立一个适合本试验室的I M A 的参考范围。1 材料与方法 1.1 一般资料 实验组:常州市第一人民医院2008年4月份内科住院患者,均系急性胸痛入院,临床体征和心电图检查有心肌缺血的证据,就诊时距胸痛发生均<12h ,且最后出院确诊为A C S ,共75例,其中男性48例,年龄31～85岁;女性27例,年龄33～87岁。均在就诊当时采集血标本,在室温下充分凝集,离心分离血清,确保血清中无纤维蛋白、红细胞和其它微粒,在 2.5h 内完成测定或血清标本快速冷冻至-20℃,冷冻于采血后1h 内完成冻存。另从中收集17份乙二胺四乙酸二钾(E D T A K 2) 抗凝全血,分离血浆后冰冻保存。对照组:同一批次体检人员50例,其中男性30例,年龄28～79岁,女性20例,年龄26～65岁。另选150例作为健康人群,以确立本试验室的参考范围。均除外 心脏疾病、胃肠、免疫系统疾病及其他缺血性疾病。均 抽血后在室温下充分凝集,离心分离血清,确保血清中无纤维蛋白、红细胞和其它微粒,于-20℃冰冻保存。1.2 仪器 日本日立7600-120E 型全自动生化分析仪。1.3 试剂 长沙颐康科技开发有限公司生产的I M A 测定试剂盒[湘食药监械生产许(2005)第0101号,产品 注册号:湘食药监械(准)字2006年第2400022号,注册 产品标准号:Y Z B /湘0010-2006]批号S J 1102;I M A 标准品(标准值为:70U /m l ,批号:20071009),I M 质控品(标准值:51±470U /m l ,批号:20071009),试剂盒检测线形范围可达180U /m l 。1.4 方法1.4.1 A C B 试验检测I M A 在待测样品中加入适当浓度的氯化钴溶液,正常对照的血清中白蛋白以活性形式 存在,加入的钴离子可以较牢固地与这种白蛋白结合,溶液中游离的钴离子浓度较低;而心肌缺血患者血清中的白蛋白N 末端结构发生变化,形成I M A ,钴离子与I M A 的结合能力较弱,此时溶液中游离的钴离子浓度就会增高。加入二硫苏糖醇(D T T )试剂可以与游离钴离子结合产生红褐色反应,I M A 含量与颜色深浅呈正比,在510n m 处检测吸光度变化,即可间接对I M A 进行定量测定。单位(U /m l )定义每毫升血清中的白蛋白,在510n m 波长下吸附1μg 的钴离子为一个单位。1.4.2 标准品的定值 先测试剂1(R 1)钴离子浓度,加入标准品血清和试剂2(R 2)后,再测钴离子浓度改变量,推算每毫升血清中的白蛋白吸附钴离子的量,即为标准品的浓度。 · 492·J o u r n a l o f C l i n i c a l a n dE x p e r i m e n t a l M e d i c i n e V o l .9,N o .7 A p r .2010
小鼠缺血修饰白蛋白(IMA)检测试剂盒说明书
小鼠缺血修饰白蛋白(IMA)检测试剂盒说明书 该试剂盒以 HRP 标记的链霉亲和素复合物（HRP Streptavidin Conjugate，HRP-SA）为基础，可用于检测血液,细胞、组织内的特异性 CD40 抗原。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的CD40 一抗与相应靶抗原结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，最后加入HRP-SA，形成抗原—特异一抗—生物素化二抗—HRP-SA 复合物，显微镜下观察成像。 小鼠缺血修饰白蛋白(IMA)检测试剂盒所含试剂： 试剂 A 通透液：0.1% Triton-X 100 10 mL（选用） 试剂 B 封闭缓冲液（封闭用） 20 mL 试剂 C （原装进口分装）已稀释的即用型 CD40 一抗（2.5ml） 试剂 D （原装进口分装）生物素化羊抗兔 IgG 1 支 （浓度 1.5 mg/mL，稀释比为 1:300~1:500）50 μL+抗体稀释液 20ml 试剂 E HRP-SA 复合物 1 支（浓度 1 μM，稀释比 1:50~1:200）100 μL 试剂 F DAB 显色液 5ml 用户自备试剂： 1．10mM TBS（pH7.2~7.4）三羟基氨基甲烷 1.21g氯化钠 7.6g加蒸馏水 800mL，浓盐酸调 pH 值至 7.2~7.4，最后定容至 1000mL TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%体积比） 2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液）10mM pH6.0 柠檬酸缓冲液檬酸 0.38g 柠檬酸三钠 2.45g加蒸馏水 900mL，浓盐酸调 pH 值至 6.0，最后定容至 1000mL或：0.5M EDTA 修复液（pH8.0） EDTA·2H2O 186.1g加蒸馏水 700mL，用 10mM NaOH 调 pH 值至 8.0，最后定容至 1000Ml 3.缓冲甘油封固剂 10 mL 4.Tween 20 5 mL 石蜡包埋组织切片免疫染色实验步骤（建议方案）： 石蜡包埋组织切片 3~4μm 厚度 1.烤片：将待做切片置于切片架上，于 60℃恒温烤箱中至少烤 1 hr； 2.脱蜡：切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡 3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10 min； 3.水化：切片经下行酒精水化，无水乙醇 5min，95%乙醇 2 次（每次 2min），85%乙醇 2 min；75%乙醇 2min，自来水冲洗，ddH2O 洗 2×2min； 4.抗原修复：根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温度达到 98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O 洗 2× 2min，TBS 洗涤（2×2min）（具体修复方法见附 1）* 注：有些抗原勿需修复，直接进入第 5 步封闭。 5.封闭：滴加试剂 B，37℃湿盒孵育 30 min； 6.加一抗：滴加用试剂 C（即用型一抗），37℃湿盒孵育 2 hr 或 4℃过夜； 7.洗涤：TBS-T 洗涤（3×5 min）； 8.封闭：滴加试剂 B，37℃湿盒孵育 10 min； 9.加二抗：滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂 D），37℃湿盒中孵育30 min；
缺血修饰白蛋白测定试剂盒(DTE比色法)产品技术要求艾威德
缺血修饰白蛋白测定试剂盒（DTE比色法） 适用范围：用于体外定量测定人血清中缺血修饰白蛋白的含量。 1.1 包装规格 a) 试剂1：1×15mL 试剂2：1×5mL b) 试剂1：2×45mL 试剂2：2×15mL c) 试剂1：4×60mL 试剂2：4×20mL d) 试剂1：2×60mL 试剂2：2×20mL 1.2 主要组成成分 1.2.1试剂1主要组分 三羟甲基氨基甲烷缓冲液30 mmol/L ） 1 mmol/L 硫酸钴（CoSO 4 表面活性剂及稳定剂适量 1.2.2试剂2主要组分 三羟甲基氨基甲烷缓冲液30 mmol/L 1,4-二硫代赤藓糖醇（DTE） 1 mmol/L 表面活性剂及稳定剂适量 2.1 外观 试剂1应为无色至浅红色液体；试剂2应为无色至浅红色液体。 2.2 试剂装量 应不低于试剂瓶标示装量。 2.3 试剂空白吸光度 在505nm波长处测定试剂空白吸光度，应≤0.1。
2.4 分析灵敏度 测定IMA含量为80 U/mL样本时，其△A应≥0.005。 2.5 线性范围 2.5.1在（5，150）U/mL范围内，线性回归的确定系数应不低于0.990； 2.5.2测试浓度在（5，15] U/mL范围内，线性绝对偏差应不超过±1.5 U/mL；测试浓度在（15，150）U/mL范围内，线性相对偏差应不超过±10%。 2.6 测量精密度 2.6.1重复性：用两个水平质控血清重复测试其变异系数（CV）应不超过5％。 2.6.2批间差：抽取3个不同批号试剂，对同一份样本进行重复测定，相对极差≤10％。 2.7 准确度 在样本中加入一定量的纯品，计算回收率，应在85%～115%范围内。 2.8 稳定性 取在2℃～8℃条件下贮存达到12个月的试剂进行检测，应符合2.1、2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7的要求。
缺血修饰白蛋白测定试剂盒(白蛋白-钴结合法)产品技术要求baiding
缺血修饰白蛋白测定试剂盒（白蛋白-钴结合法）适用范围：用于体外定量测定人血清中缺血修饰白蛋白的含量。 1.1规格 校准品(选配)：水平1：1×1mL，水平2：1×1mL； 质控品(选配)：水平1：1×1mL，水平2：1×1mL。 1.2组成
注：校准品靶值、质控品质控范围详见包装标签。 2.1 外观
2.1.1试剂1：无色至淡粉色液体，无浑浊，无不溶物。 2.1.2试剂2：无色至淡黄色液体。 2.1.3校准品：无色至淡黄色液体。 2.1.4质控品：无色至淡黄色液体。 2.1.5包装外观应整洁，标签字迹清晰，不易脱落。 2.2 净含量 液体试剂的净含量不低于标示体积。 2.3 试剂空白吸光度 试剂空白吸光度≥0.3。 2.4 分析灵敏度 样本浓度为60 U/ml时，△A≥0.05。 2.5 线性区间 在[20，100] U/mL范围内，线性相关系数r≥0.990；测试浓度在[20，50] U/mL时，绝对偏差不超过±5 U/mL，测试浓度在（50，100] U/mL时，相对偏差不超过±10%。 2.6 精密度 2.6.1 批內精密度 用高、低2个浓度的样本测试试剂盒，各重复测试10次，其变异系数（CV）应不大于8%。 2.6.2 批间差 用样本分别测试3个不同批次的试剂盒，每个批次测试3次，其相对极差（R）应不大于10%。
2.7 准确度 回收率在85%-115%范围内。 2.8 质控品赋值有效性 测试结果在质控范围内。 2.9 瓶内均匀性 校准品水平2和质控品瓶内均匀性（CV）应不大于8%。 2.10 量值溯源 校准品量值溯源至公司内部工作校准品，并与北京九强生物技术股份有限公司生产的缺血修饰白蛋白测定试剂盒（白蛋白-钴结合法）比对验证。 2.11 稳定性 2.11.1校准品开瓶稳定性 校准品开瓶后2℃～8℃避光保存可稳定3天。稳定期过后4小时内进行测试，测试结果与靶值的相对偏差不超过±10%。 2.11.2质控品开瓶稳定性 质控品开瓶后2℃～8℃避光保存可稳定3天。稳定期过后4小时内进行测试，应满足2.8的要求。 2.11.3效期稳定性 原包装试剂盒在2℃～8℃避光保存条件下有效期为12个月。有效期满后3个月内测试，应满足2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7和2.8的要求。
心肌缺血,缺血修饰蛋白蹿升
龙源期刊网 https://www.wendangku.net/doc/ef8891154.html, 心肌缺血,缺血修饰蛋白蹿升 作者：袁红霞 来源：《大众健康》2011年第07期 前不久，美国食品药品管理局批准缺血修饰蛋白作为第一个心肌缺血的生化标志物，用于对低危患者辅助急性冠脉综合征的诊断。 调查数据显示，我国急性冠脉综合征的发病率和死亡率均呈快速增长趋势，每年新发心肌梗死患者50万，现患心肌梗死患者200万，占所有心脏病死亡的47％。近些年，世界卫生组织进行的MONICA研究对全世界范围内的急性冠脉事件进行了监测，结果发现女性的事件发生率和死亡率分别为37/10万人年和26/10万人年；男性事件平均发生率为445/10万人年，死亡率为45/10万人年。因此，如何早期快速诊断急性冠脉综合征对及早治疗和良好的预后至关重要。 最近研究发现，在急性冠脉综合征患者发病早期，当现有的生化标志物如肌钙蛋白、肌酸激酶同工酶、肌红蛋白等均为阴性时，缺血修饰白蛋白却表现出极高的敏感性。这是由于缺血修饰白蛋白在心肌缺血损伤发生后5~10分钟即迅速升高，6~12小时达到高峰。这些特点为早期诊断急性冠脉综合征提供了可靠的客观指标。 缺血修饰蛋白是人血清白蛋白流经缺血组织时产生的。当组织缺血和再灌注时，组织局部的血液供应和供氧减少, 细胞进行无氧代谢消耗能量，同时代谢产物如乳酸堆积，导致组织局部反应性氧产物增多、酸中毒、细胞膜上各种离子泵破坏等变化，引起白蛋白结构发生改变，与过渡金属钴的结合能力下降，这种因结构改变而与过渡金属离子结合能力下降的白蛋白转变为缺血修饰白蛋白，所有这些反应在急性缺血数分钟内就可发生，使得缺血修饰蛋白迅速升高。 美国学者Sinha对208名疑似急性冠脉综合征患者进行临床研究，为评价缺血修饰蛋白检测的临床意义，同时比较了缺血修饰蛋白、心电图、肌钙蛋白对急性冠脉综合征的诊断效能。结果表明，在整个患者群体中，缺血修饰蛋白的敏感性为82%，心电图为45%，肌钙蛋白为20%；证实了缺血修饰蛋白单独用于急性冠脉综合征诊断具有敏感性高的特点。也正因为此，前不久，美国食品药品管理局批准缺血修饰蛋白作为第一个心肌缺血的生化标志物，用于对低危患者辅助急性冠脉综合征的诊断。 此外，缺血修饰蛋白还可用于急诊室胸痛患者的危险分层评价。美国科学家将251 例因胸痛症状就诊于急诊室的患者的心脏危险性评价与就诊时检测的缺血修饰蛋白水平比较，不考虑缺血修饰蛋白水平时，66例患者被评为极低危险；考虑缺血修饰蛋白水平时，236例患者被评