乙肝病毒DNA(血清)提取操作程序

乙型肝炎病毒DNA（血清）提取操作程序一、双手戴上手套，从冰箱取出血清标本，将化验单和试管依次编号

后，弃去手套。

二、双手换上新手套，用镊子(夹取灭菌物品专用)取出0.5ml离心管，

对应标本编号，置于离心管架上。

三、将移液器调到40μl，先混匀DNA提取液，再吸取40μl加入到已

编号的离心管中。然后吸取40μl血清，加入离心管中混匀，注意每吸取一份血清标本应更换一次枪头。

四、同上处理全部标本，然后将离心管插到干浴锅内，干浴10分钟。

五、干浴完成后用镊子将标本取出，然后10000rpm离心5分钟，取

上清液2μl加样上机。

六、收拾台面至准备状态。

丙型肝炎病毒IgG抗体定量测定

一、目的：规范丙型肝炎病毒IgG抗体测定的标准操作程序，确保丙型肝炎病毒IgG 抗体测定的结果准确有效。 二、适用范围：在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的丙型肝炎病毒 IgG抗体。 三、临床意义 丙型肝炎是一种广泛流行的病毒性疾病，据 WHO调查，全世界估计有1.7 亿人感染丙型肝炎病毒 (HCV)，在不同的国家慢性丙型肝炎病毒感染的流行病学统计是在 0.5％～20％，我国一般人群抗 HCV阳性率为3.2％。而急性丙型肝炎绝大多数都会形成有慢性感染的过程，慢性丙型肝炎病毒感染是肝硬化和肝癌的主要原因之一[1,2]。 丙型肝炎的诊断有赖于 HCV抗体的血清学检定及病毒学检测。HCV抗体阳性代表机体对病毒感染的应答，一般在感染 1～2月后出现抗体，急性和慢性丙型肝炎的区别在于 HCV核心 IgG量的差异，慢性病人的 IgG抗体水平比急性的要高些，并且通常有更长的免疫活性。通过自然恢复或经治疗清除病毒的急性丙型肝炎患者，IgG会在几年之后消失或低于检测下限而无法检出[3]。临床上也应注意到一些血液透析、免疫功能缺陷和自身免疫性疾病患者可出现抗-HCV假阳性，可以采用抗-HCV RIBA或HCV RNA检测确认，有助于确诊这些患者是否合并感染HCV。 四、方法原理 本试剂盒采用间接法原理进行检测。以HCV抗原包被磁微粒，辣根过氧化物酶标记的抗人IgG制备酶结合物，通过免疫反应形成抗原－抗体－酶标记抗体复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与HCV IgG抗体的含量成正比。 五、标本的采集与处理 5. 1. 采用正确医用技术收集血清样本（详见标准血液标本前处理流程）。

乙肝病毒血清标志物的临床意义

乙肝病毒血清标志物的临床意义（即常说的乙肝五项或称两对半） 序号HBsA g 表 面抗 原 抗 -HBs HBsA b 表 面抗 体 HBeA g E 抗原 抗 -HB e HBe Ab E 抗 体 抗 -HBc HBcA g 核 心抗 体 临床意义出现率 9种常见模式 1 - - - - - 过去和现在未感染过HBV。1-30% 2 - - - - + (1)既往感染未能测出抗-HBs；(2)恢复期HBsAg已 消，抗-HBs尚未出现；(3)无症状HBsAg携带着。 5-10% 3 - - - + + (1)既往感染过HBV；(2)急性HBV感染恢复期； (3) 少数标本仍有传染性。①HBV感染已过；②抗HBs 出现前的窗口期 2-10% 4 - + - - - (1)注射过乙肝苗有免疫；(2)既往感染；③假阳性1-6% 5 - + - + + 急性HBV感后康复。0.5-5% 6 + - - - + (1)急性HBV感染；(2)慢性HBsAg携带者；(3)传染 性弱。 10-15% 7 - + - - + 既往感染，仍有免疫力。HBV感染，恢复期。5-15% 8 + - - + + (1)急性HBV感染趋向恢复；(2)慢性HBsAg携带者； (3)传染性弱。即俗称的“小三阳”。 5-10% 9 + - + - + 急性或慢性乙型肝炎感染。提示HBV复制，传染强。 即俗称的“大三阳”。 30-40% 16种少见模式 1+ - - - - (1)急性HBV感染早期,急性HBV感染潜伏期； (2)

0 慢性HBV携带者，传染性弱。1 1 + - - + - (1)慢性HBsAg携带者易转阴；(2)急性HBV感染趋向 恢复。 1 2 + - + - - 急性HBV感染早期或慢性携带者，传染性强。1 3 + - + + + (1)急性HBV感染趋向恢复；(2)慢性携带者。1 4 + + - - - (1)亚临床型HBV感染早期；(2)不同亚型HBV二次感 染。 1 5 + + - - + (1)亚临床型HBV感染早期；(2)不同亚型HBV二次感 染。 1 6 + + - + - 亚临床型或非典型性感染。1 7 + + - + + 亚临床型或非典型性感染。1 8 + + + - + 亚临床型或非典型性感染早期。 HBsAg免疫复合物， 新的不同亚型感染。 1 9 - - + - - (1)非典型性急性感染；(2)见于抗-HBc出现之前的 感染早期，HBsAg滴度低而呈阴性，或呈假阳性。 2 - - + - + 非典型性急性感染。 2 1 - - + + + 急性HBV感染中期。 2 2 - + - + - HBV感染后已恢复。 2 3 - + + - - 非典型性或亚临床型HBV感染。2 4 - + + - + 非典型性或亚临床型HBV感染。

病毒DNA提取

小鼠血浆中HSV-1 DNA的提取 [目的] 掌握血浆中病毒DNA 提取的原理，熟悉其提取方法。 [原理] E.Z.N.A.?Viral DNA Kit 该试剂盒提供了从小于250ul血浆、血清、无细胞培养液等样品中快速简单地提取病毒DNA的方法，液体样品经Buffer BL和蛋白酶（OB）消化后，经乙醇调节结合条件，过柱吸附DNA，再经过两步快速洗涤后，最后用Elution Buffer (10mM Tris,pH8.5)溶解基因组DNA。纯化的DNA可直接用于PCR，Southern杂交，酶切等实验。 [试剂及仪器]旋涡混合振荡仪；微量DNA定量仪；台式离心机；65℃水浴锅。 1.5ml无菌EP管（2个/人）；EP抗凝管(含100ul抗凝剂)（K）；1000ul枪及枪头；。Hibind DNA 结合柱(1个/人)；2ml收集管（3个/人）；OB蛋白酶（OB）；Buffer B L（含线性丙烯酰胺）(BL)；乙醇(乙)；Buffer HB(HB)；DNA Wash Buffer（W）；Elution Buffer(EB)。 [实验步骤] 一、血浆样品的制备： 1.用微量加样器取100ul抗凝剂加入1.5mlEP管中。 2.右手抓起小鼠尾巴，用左手固定动物，压迫眼球，尽量使眼球突出，右手用镊子迅速摘除 眼球，将流出的血液滴入含有抗凝剂的1.5ml EP管中，迅速混匀后，10000rpm，离心3min。 上层黄色透明的即为血浆。 二、DNA的提取 1.取血浆250ul（如不足250ul，用Elution Buffer补足250ul）于1.5ml无菌EP管中。 2.加入10ul OB蛋白酶和250ul BL Buffer（含4ul线性丙烯酰胺用于填补病毒DNA在吸附 柱上的本底吸附），于旋涡混合振荡仪上最大速度振荡15sec。 3.65℃孵育10min。孵育过程中，用旋涡混合振荡仪混匀一次。 4.加入260ul乙醇，旋涡混合振荡仪最大速度振荡20sec。12000×g离心10sec，使盖子上的 液体沉于管中。 5.将Hibind DNA结合柱装在2ml收集管中，将第4步离心的上清中所有液体（约760ul） 加入Hibind DNA结合柱装上，8000×g离心1min。卸下收集管，将收集管及其中的液体弃去。 6.将Hibind DNA结合柱装在另一个新的收集管中，向柱中加入500ul HB Buffer，8000×g 离心1min，卸下收集管，倒掉其中的液体后，将收集管重新装在柱子上。、 7.向柱中加入700ul DNA Wash Buffer，8000×g离心1min，卸下收集管，将收集管及其中 的液体弃去。 8.将Hibind DNA结合柱装在另一个新的收集管中，向柱中加入700ul DNA Wash Buffer， 8000×g离心1min，卸下收集管，倒掉其中的液体后，将收集管重新装在柱子上。 9.将空的Hibind DNA结合柱15000×g离心2min，以去掉其中残余的液体。卸下收集管， 将收集管及其中的液体弃去。----这一步非常重要 10.将Hibind DNA结合柱装在另一个新的无菌1.5ml EP管上（事先做好标记），加入50-100ul 65℃预热的Elution Buffer，室温静置5min后，8000×g离心1min，洗脱液中即含有病毒DNA。 三、DNA定量： 微量DNA定量仪。取1.5ul用于DNA定量。

丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒(胶体金法)

丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒（胶体金法） 【临床意义】 定性测定人血清（浆）中的HCV抗体，用于无偿献血及临床术前的初筛查检测。 【实验原理】 丙型肝炎病毒抗体诊断试剂（胶体金法）采用胶体金免疫层析技术，在玻璃纤维素膜上预包被金标鼠抗人lgG抗体（anti-lgG Ab），在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被丙肝混合抗原（Core、NS3、NS4、NS5）和人lgG抗体。检测阳性样本时，血清样本中HCV-Ab 与胶体金标记鼠抗人lgG抗体结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的抗原结合形成“Au-anti-lgG Ab-HCV Ab-HCV Ag”夹心物而凝聚显色，游离金标鼠抗人lgG抗体则在对照线处与人lgG抗体结合而富集显色。阴性标本则仅在对照线处显色，15分钟内观察结果即可。 【主要组成成分】 1、HCV胶体金试纸条/试卡 2、说明书 3、样本稀释液 4、塑料滴管 【样本要求】 1、采集静脉血样本必须在无菌条件下操作，并避免样品溶血。 2、如果血清和血浆样品收集后7天内检测,样品须放在0-4℃保存；大于7天必须-20℃一下 冷冻保存。 3、常规抗凝剂不影响实验结果。 4、溶血、粘稠及高指标本不适于本试剂。含特殊物质的标本可能会导致检测结果不稳定， 在检测前须清除。 5、在标本中加0.1%NaN3不影响实验结果。 【试验方法】 测试条： 1、将待测标本从储存条件下取出，平衡至室温并编号。 2、将胶体金试纸条从包装盒中取出，打开铝箔包装袋，平置于台面上。 3、用塑料滴管加1滴（10μl）样本血清或血浆，加到试纸条指示箭头下端的加样处。 4、随即滴加2滴样本稀释液（约100μl）。 5、加样后，阳性标本可在1~15分钟内检出，建议15分钟后在最终观察并记录实验结果。测试卡： 1、将待测标本从储存条件下取出，平衡至室温并编号。 2、将胶体金测试卡从包装盒中取出，打开铝箔包装袋，平置于台面上。 3、用塑料滴管加1滴样本血清或血浆，加到测试卡上的S孔。 4、随即滴加2滴（约100μl）样本稀释液到测试卡上的D孔。 5、加样后，阳性标本可在1~15分钟内检出，建议15分钟后在最终观察并记录实验结果。【结果判断】 阳性：试纸条/试卡在检测区和对照区位置出现两条紫红色条带。 阴性：试纸条/试卡只在对照线位置出现一条紫红色条带。 失效：对照区（C）未出现紫红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已变质损坏。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试纸条/试卡重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。

乙肝血清标志物与HBV—DNA定量检测对诊治乙肝的临床价值研究

乙肝血清标志物与HBV—DNA定量检测对诊治乙肝的临床价值研 究 目的：探讨乙肝血清标志物与HBV-DNA定量检测对诊治乙肝的临床价值。方法：选取2014年1月至2014年12月期间我院收治的乙肝患者50例，根据乙肝血清标志物将其分为A、B、C三组，其中A组为抗-HBc阳性、HBeAg、HBsAg，共14例；B组为抗-HBc阳性、抗-HBe、HBsAg，共29例；C组为抗-Hbe阳性、HBsAg，共9例。分别对三组患者进行HBV-DNA定量检测，并对检测结果进行分析。结果：A、B、C三组患者的阳性检出率分别为100%、74.1%与55.5%。HBV-DNA定量检测结果分别为（60.6±15.2）×107copies/mL、（37.8±13.4）×107copies/mL与（22.3±8.2）×107copies/mL。结论：乙肝血清标志物检测无法对乙肝病毒在机体内的复制情况作出明确的判断，易出现漏诊与误诊。而HBV-DNA定量检测可有效避免上述弊端，可对病毒在机体内的复制情况作出明确的诊断，降低漏诊与误诊几率。因此HBV-DNA定量检测对诊治乙肝病毒具有更高的临床价值。 标签：乙肝血清标志物；HBV-DNA定量检测；乙肝；价值 乙型肝炎是指由乙肝病毒（HVB）感染所引发的一类传染性疾病，该病主要临床诊断方法包括乙肝血清标志物诊断与HBV-DNA定量检测[1]。临床上对于该两种诊断方法的选择存在一定的争议。在本次调查中，笔者即对该两种诊断方法对于乙肝的诊断价值进行分析，详情如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料 选取2014年1月至2014年12月期间我院收治的乙型肝炎患者50例作为本次调查对象，其中男30例、女20例，患者年龄为25～65岁，平均（44.8±3.4）岁。根据乙肝血清标志物对患者进行划分，其中A组为抗-HBc阳性、HBeAg、HBsAg，共14例；B组为抗-HBc阳性、抗-HBe、HBsAg，共29例；C组为抗-Hbe阳性、HBsAg，共9例。 1.2 方法 1.2.1 乙肝血清标志物检测以酶联免疫法检测抗-HBe、抗-HBc、抗-HBs、HBsAg、HBeAg等五项。 1.2.2 HBV-DNA定量检测诊断仪器与试剂为Option DNA Engine型PCR增仪口荧光定量HBV-DNA试剂盒，选择荧光定量检测法PCR。所有步骤严格按照相关说明进行。

乙型肝炎感染血清标志物检测结果及临床意义

乙型肝炎感染血清标志物检测结果及临床意义 HBsAg HBsAb HBeAg HBeAb HBcAb 临床意义 -- -- -- -- -- 过去和现在未感染过HBV + -- -- -- -- (1)急性HBV感染早期,急性HBV感染潜伏期；(2)慢 性HBV携带者，传染性弱。 + -- + -- + 急性或慢性乙型肝炎感染。提示HBV复制，传染强。 即俗称的“大三阳”。 + -- -- + + (1)急性HBV感染趋向恢复；(2)慢性HBsAg携带者； (3)传染性弱。即俗称的“小三 阳”。 + + -- -- + (1)亚临床型HBV感染早期；(2)不同亚型HBV二次 感染。 （3）免疫复合物的存在。 + -- -- -- + (1)急性HBV感染；(2)慢性HBsAg携带者；(3)传染 性弱。 -- + -- + + 急性HBV感后康复。 -- -- -- -- + (1)既往感染未能测出抗-HBs(2)恢复期HBsAg已消，抗 -HBs尚未出现；(3)无症 状HBsAg携带者。 -- + -- -- -- (1)注射过乙肝苗有免疫；(2)既往感染；③假阳性。 -- + -- -- + 既往感染过乙肝病毒，现病毒已基本清除，身体在康 复。 -- -- -- + + (1)既往感染过HBV； (2)急性HBV感染恢复期；(3) 少数标本仍有传染性。+ -- + + + (1)急性HBV感染趋向恢复；(2)慢性携带者。 + + -- + -- 亚临床型或非典型性感染。 + + -- -- -- (1)亚临床型HBV感染早期；(2)不同亚型HBV二次感 染。 + -- -- + -- (1)慢性HBsAg携带者易转阴；(2)急性HBV感染趋向 恢复。 -- + + -- -- 非典型性或亚临床型HBV感染。 -- -- + -- + 非典型性急性感染。注意爆发性乙肝 -- -- + + + 急性HBV感染中期。 -- -- + -- -- (1)非典型性急性感染；(2)见于抗-HBc出现之前的感 染早期，HBsAg滴度低而呈 阴性，或呈假阳性。 -- + + -- + 非典型性或亚临床型HBV感染。 + + + -- + 亚临床型或非典型性感染早期。HBsAg免疫复合物， 新的不同亚型感染。 -- + -- + -- HBV感染后已恢复

乙肝病毒血清标志物实验室检测的临床意义

乙肝病毒血清标志物实验室检测的临床意义 乙肝病毒（以下简称HBV）血清标志物实验室检测（即乙肝两对半检测）的临床意义对临床医生和被检对象至关重要。为了解HBV血清标志物的意义更好的为服务对象提供更高质量的解释和服务工作，现就HBV五项血清标志物常见模式的临床意义和少见模式（HBsAg、抗-HBs、HBeAg /抗-HBe同时阳性）的临床意义进行解释。 一HBV五项血清标志物常见模式的临床意义 现在国内大多数的医疗机构对HBV的检测通常采用五项血清学标志物联检，并且已经习惯了把五项结果作为一种模式全面分析了解HBV感染后的免疫状态，并以此作为诊断和疗效观察的依据。现就HBV常见的十种模式及其相应的临床意义总结见表1（摘自文献1）。 表1 HBV五项血清标志物常见模式及临床意义 模式HBsAg 抗-HB s HBeA g 抗-HBe 抗-HBc 临床意义 1 - - - - - ①过去和现在未感染过HBV；②窗 口期 2 - - - - + ①既往感染未能测出抗-HBs；②恢复期HBsAg已消失，抗-HBs尚未出现；③隐匿性HBV感染 3 - - - + + ①既往感染过HBV；②急性HBV感染恢复期；③抗-HBs出现前的窗 口期 4 - + - - - ①注射过乙肝疫苗，有免疫力 5 - + - + + ①急性HBV感染后康复；②既往感 染有免疫力 6 + - - - + ①急性HBV感染；②慢性HBsAg携 带者；③传染性弱 7 - + - - + ①既往感染，有免疫力；②急性H BV感染，恢复期 8 + - - + + ①急性HBV感染趋向恢复；②慢性 HBsAg携带者 9 + - + - + ①急性或慢性乙型肝炎感染，提示 HBV复制，传染性强。 1 0 + - - - - ①急性HBV感染早期或潜伏期；② 慢性HBV携带者，传染性弱。

病毒基因组DNA提取试剂盒使用说明书

病毒基因组DNA 提取试剂盒 Virus Genomic DNA Kit (目录号：HS0307) 产品包装 自备试剂 无水乙醇 储存条件 蛋白酶K 于-20℃，其他组分室温（15 ~ 25℃） 产品简介 本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的血浆、血清和无细胞体液中提取高质量的病毒DNA 。无需使用苯酚、氯仿等有机溶剂抽提，独特的缓冲液/蛋白酶K 体系能迅速裂解病毒，使病毒蛋白与DNA 分离，在蛋白酶K 的作用下降解病毒蛋白，在高盐状态下将病毒DNA 选择性吸附于硅基质膜上，再通过快速的漂洗、离心步骤，去除蛋白等杂质，最后低盐的洗脱缓冲液将高纯度的病毒DNA 从吸附柱膜上洗脱下来。 本试剂盒操作简单、快速，所得病毒DNA 不含蛋白、核酸酶和其他杂质，可直接用于PCR 、RT-PCR 、Real-Time PCR 、印迹等分子生物学实验。 产品特点 1.简便快速，1小时内可获得高纯度的病毒基因组DNA 。 2.无需有机溶剂抽提，使用安全。 3.重复性好，产量高。 北京厚生博泰科技有限公司 Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.

4.所得病毒DNA纯度高，无污染物和抑制剂，方便下游应用。 注意事项 1.血清或血浆避免反复冻融，否则会使蛋白变性或产生沉淀，导致提取的DNA片段小，提取量下降。 2.如缓冲液Buffer GB、Buffer GD结晶或产生沉淀，可在56℃水浴溶解。 3.所有离心步骤均为室温下操作。 操作步骤 1. 取1.5 ml离心管（自备），加入20 ul的Proteinase K溶液。 2. 向离心管中加入200 ul血清或血浆，然后再加入200 ul Buffer GB，涡旋震荡15 sec。（注意：1、样本体积不足200 ul可以加入0.9% NaCl（自备）补足。2、为确保样本有效裂解，加入Buffer GB后，需将样本与Buffer GB充分混匀。） 3．56℃孵育15 min，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底。 4. 加入250 ul无水乙醇，涡旋震荡15 sec，室温放置5 min，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底。 (注意：如果环境温度超过25℃，无水乙醇应在冰上预冷后使用。) 5．将一个Spin Columns CG*放入Collection Tubes(2 ml)中，将上一步所得溶液转移到离心吸附柱中，10 000 rpm离心30 sec，弃收集管中的废液。 6. 向吸附柱内加入500 ul的Buffer GD，室温10 000 rpm离心30 sec，弃收集管中废液。（注意：Buffer GD中含有乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发） 7. 向吸附柱内加入500 ul的Buffer PW，室温10 000 rpm离心30 sec，弃收集管中废液。（注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤7一次。Buffer PW中含有乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发） 8．向吸附柱中加入500 ul无水乙醇，10 000 rpm离心30 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 9．室温12 000 rpm离心3 min，甩干残留液体。 （注意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响质粒的后续使用） 10. 将离心吸附柱置于一个新的1.5 ml塑料离心管（自备）中，小心打开吸附柱的盖子，室温放置3 min，使吸附膜完全变干。加入30 ~ 100 ul的洗脱液，室温放置2 ~ 5 min。12 000 rpm

乙肝检查结果对照表

1、乙肝表面抗原（HBsAg）阳性：代表被乙肝病毒感染。（病毒数量） 2、乙型肝炎表面抗体（HBsAb或抗-HBs）阳性：代表机体对乙肝病毒有抵抗力，能够杀灭乙肝病毒。（对病毒的抗体） 3、乙肝e抗原（HBeAg）阳性：代表乙肝病毒复制活跃，传染性强。（病毒复制性强弱） 4、乙肝e抗体(HBeAb或抗HBe)阳性：代表病毒复制相对减少，传染性弱。（同上） 5、乙肝核心抗体（HBcAb或抗HBc）阳性：代表感染了乙肝病毒或曾经感染过乙肝病毒已经痊愈。乙肝病毒血清标志物的临床意义（乙肝两对半） HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc 意义 + - - - - 急性HBV感染潜伏期 + - + - - 急性肝炎早期，传染性强 + - + - + 急性或慢性感染传染性强 + - - + + 急性或慢性感染后期传染性低 + - - - + 急性或慢性乙型肝炎HBV携带者 + + + - + HBsAg免疫复合物，新的不同亚型感染 + + + + + ①一种亚型的HBsAg及异型的抗HBs（常见） ②血清从HBsAg转化为抗HBs的过程（少见） - + - - + HBV感染，恢复期 - - - + + ①HBV感染已过 ②抗HBs出现前的窗口期 - + - + + HBV感染恢复期 - + - - - ①注射疫苗后

②遥远的过去感染 ③假阳性

乙肝“两对半”化验结果对照表 检查乙型肝炎病毒（HBV）感染最常用的血清学标志是乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗体(抗-HBs)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝e抗体(抗-HBe)及乙肝核心抗体(抗-HBc)共5项指标，故称“乙肝两对半”，其作用有三：1.判断有无HBV感染；2.判断HBV感染者传染性的大小；3.作为慢性乙肝患者抗病毒治疗及疗效判断的依据之一，以下是几种常见的结果及意义。 模式HBsAg 抗-HBs HBeAg 抗-HBe 抗-HBc 诊断结果临床意义 1 ＋- + －+ “大三阳” 表明有HBV感染且病毒复制活跃，传染性较强 2 ＋- - + + “小三阳” 表明有HBV感染但病毒复制相对静止，传染性相对较弱 3 ＋- - - + 恢复初期表明有HBV感染但病毒复制相对静止，传染性相对较弱 4 - + - - + 恢复后期表明曾感染过HBV，但已产生保护性抗体，不具有传染性，也不需注射乙肝疫苗 5 - - - - + 恢复后期表明曾经感染过HBV 6 - + - - - 完全恢复表明注射乙肝疫苗后产生的保护性抗体，若未注射乙肝疫苗，则表明曾经感染过HBV，现已产生保护性抗体，不具有传染性，也不需要再注射乙肝疫苗。 说明：“乙肝两对半”仅反映HBV感染及复制情况并不能完全反映病情轻重，如“大三阳”病情不一定重，而“小三阳”病情不一轻。若要判断乙肝病情的轻重，除要检查“乙肝两对半”外，还应结合肝功能试验、肝纤维化指标及B超、CT表现才能准确判断当前病情。另外，若要更准确地判断HBV的复制状态及病人的传染性，还应做乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBV DNA）的定量检查。 这个也可以看一下。

血清丙型肝炎病毒抗体检测作业指导书

血清丙型肝炎病毒抗体检测作业指导书（ELISA） 原理 在微孔条上预包被丙型肝炎病毒（HCV）重组嵌合抗原，采用ELISA法检测丙型肝炎病毒抗体。样品加入已有样品稀释液的包被抗原反应孔，在随后的温育过程中，若样品中含特异抗体，则该抗体与包被抗原形成抗原抗体复合物被吸附到固相，再加入酶标记的第二，最终形成抗原-抗体-酶标二抗复合物，洗涤除去未结合的游离酶，加入显色剂后显色。 标本采集 2.1 采集前病人准备：受检者应空腹 2.2 标本种类：血清或血浆 2.3 标本要求：采集病人静脉血2ml，室温放置不超过4小时，分离血清备用。 标本储存：2-8°C保存不应超过1周，-20°C不应超过3个月，-70°C长期保存，应避免反复冻融。

标本运输：密封，室温运输。 标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。 试剂 6.1 试剂名称：丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒 6.2 试剂生产厂家：河南华美生物工程有限公司。6.3 包装规格：96Test/Kit 6.4 试剂盒组成：包被反应板，样品稀释液，酶标记抗体，阳性对照血清，阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，密封袋。 6.5 试剂储存条件及有效期：2-8°C避光保存，有效期6个月。 仪器设备 7.1 仪器名称：自动酶标仪 7.2 仪器厂家：KHB 7.3 仪器型号：ST360 操作步骤

8.1 平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25°C），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。 8.2 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。 8.3 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。 8.4 加样品稀释液：用加样器在微孔反应条板孔中加入样品稀释液，每孔100μl，空下四孔准备加对照。 8.5 加标本和留空白：将每份待检标本各10μl分别加入已有样品稀释液的各孔中，留下一孔不加标本作空白对照，标好位置。 8.6 加对照：在预先空下的四孔中用加样器分别加入阴性对照一孔，阳性对照三孔，每孔100μl，标好位置。对照应在所有标本加完以后再加，以保证阈值准确性。 8.7 温育（一）：充分混匀，加上封板膜，置37℃温育30分钟。

病毒性肝炎血清标志物检查(一)

病毒性肝炎血清标志物检查(一) 【摘要】病毒性肝炎的病原体为肝炎病毒，目前已明确的肝炎病毒有，5种，即甲型肝炎病毒(HAV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、丁型肝炎病毒(HDV)、戊型肝炎病毒(HEV)。除HBV为双链DNA病毒外，其余均为单链RNA病毒。我国是病毒性肝炎的高发区，尤以HAV、HBV、HCV的感染更为突出。因此，准确、快速地检测肝炎病毒的标志物，对于病毒性肝炎的防治具有重要的意义。临床上根据各种肝炎病毒有特异性的血清标志物，能准确地进行病毒性肝炎的分型。 【关键词】病毒性肝炎血清标志物 (一)甲型肝炎病毒IgM、IgG抗体(抗-HAVIgM、抗-HAIgG) 目前主要通过ELISA检测抗-HAVIgM和抗-HAVIgG两种血清标志物对甲型肝炎进行病原学的检测。 在甲型肝炎感染的早期(发病后几天)血清中即可出现抗-HAVIgM，滴度很快升至峰值并持续2～4周，发病后1～2个月滴度和阳性率下降，于3～6个月消失。因此，抗-HAVIgM阳性，尤其是滴度较高时(>103)，常表明急性HAV感染或复发。抗-HAVIgG出现较抗-HAVIgM稍晚，几乎可终身存在，抗-HAVIgG抗体阳性，则表示过去曾受过HAV感染，但体内已无HAV，是一种保护性抗体，可用于甲型肝炎(简称甲肝)的流行病学调查。 (二)甲型肝炎抗原(HAV-Ag) 在粪便或肝组织中检测到HAV-Ag可作为急性甲肝的证据，但检测不到HAV-Ag也不能排除感染甲肝的可能性，因为HAV-Ag的排出期很短，而且通常只在潜伏晚期。 发病前1～2周内，感染者可通过常规粪便检测HAV-Ag而被发现。此时尚未出现ALT／AST 升高，也未出现抗甲肝抗体。早期发现对于预防治疗很重要(在接触者中给予免疫球蛋白预防)。 粪便中HAV-Ag排泄的持续时间与传染持续时间之间的相关性很好。如果粪便HAV-Ag阴性，那么特殊的卫生措施，例如粪便消毒或隔离患者，就势在必行。 (三)乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg) 1．HBsAg是检测HBV感染的主要标志，主要在感染HBV后1～2个月在血清中出现，可以维持数周、数月、数年，也可能长期存在。 2．血清HBsAg阳性提示HBV感染，可见以下几种情况：乙型肝炎潜伏期和急性期；②慢性迁延性肝炎、慢性活动肝炎、肝硬化、肝癌；③慢性HBsAg携带者。 3．HBsAg也可从许多患者的体液和分泌物中测出，如唾液、乳汁、精液、阴道分泌物等。4．HBsAg阴性的HBV感染也有报道，可能与S基因变异使其抗原性和免疫原性改变所致。HBsAg阴性、HBV-DNA阳性的患者中发现其124位的半胱氨基缺失，结果导致HBsAg的分泌障碍。目前，临床检测发现HBsAg和抗-HBs同时阳性的检出率有增高趋势，提示有免疫复合物的形成、HBV多种亚型的交叉感染，以及机体免疫功能紊乱等多种可能。 (四)乙型肝炎病毒表面抗体(抗-HBs) 1．抗-HBs是机体针对HBsAg产生的中和抗体，它是一种保护性抗体，能够清除病毒，防止HBV感染，在急性乙肝中出现最晚，表示机体开始恢复，其抗体可持续多年，滴度与特异性保护作用相平行。 2．抗-HBs阳性意义：既往曾经感染过HBV，但现已恢复，且对HBV有一定的免疫力；②乙肝疫苗接种后已产生抗体。 3．抗-HBs如果以与HBsAg形成免疫复合物的形式出现，提示可能与肝细胞的免疫病理损伤有关。 (五)乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg) 1．HBeAg位于Dane颗粒的核心部分，是一种可溶性抗原，其合成受HBV遗传基因调控，

乙肝病毒血清标志物与HBV

乙肝病毒血清标志物与HBV 【摘要】目的：分析不同乙肝血清原标志物不同模式组与 hbv-dna定量检测结果的关系。方法：采用elisa方法检测乙肝病毒血清标志物5项，用荧光定量聚合酶链反应（fq-pcr）方法检测hbv-dna定量，比较两者之间的关系。结果：经fq-pcr检测，580份标本有hbsag标志物组成模式组4组，检出hbv-dna总阳性率占60.52%，其中hbsag、hbeag、hbcag、hbcab阳性模式组（大三阳）hbv-dna阳性占95.13%，hbsag、hbsab、hbcab、阳性模式组（小三阳）dna阳性占27.08%。hbsag、hbeag阳性模式组dna阳性占91.67%，“hbsag、hbcag”模式组hbv-dna阳性率为48.21%。全阴模式组和“hbsab、hbeab”阳性模式组hbv-dna检出阳性率为0。结论：血清中有hbsag标志物组成模式组均存在hbv-dna阳性检出率，大三阳模式组其hbv-dna阳性检出率高，将乙肝血清标志物和hbv-dna定量结合检测有利于病毒性肝炎乙型的诊断，判断传染性强弱以及治疗效果的评估。 【关键词】乙肝病毒；血清标志物； hbv-dna； elisa； fq-pcr 中图分类号 r512.6 文献标识码 b 文章编号 1674-6805（2013）19-0081-02 乙型肝炎病毒（hbv）感染是世界上最普遍的病毒感染之一。我国是hbv感染高流行区域，一般人群的感染率为9.09%[1]。急性乙肝有20%会转化为慢性乙肝，进而可能发展为肝硬化和肝癌。传统用elisa方法检查发现乙肝病毒血清标志物（即hbsag、hbsab、

乙肝抗原抗体检查是什么

乙肝抗原抗体检查是什么 我们要想知道自己是否感染乙肝，就要去医院进行乙肝抗原抗体检查，那么到底乙肝抗原抗体检查是什么呢？对此，云南新华肝病医院青光枝主任作出了详细解答。 云南新华肝病医院青主任指出，临床上运用最广泛的乙肝抗原抗体检查，就是我们常听说的乙肝两对半检查，是我国最常用的乙肝血清标志物检查。具体乙肝抗原抗体检查有五项：乙肝表面抗原、乙肝表面抗体、乙肝e抗原、乙肝e抗体和乙肝核心抗体，以下对其检查意义进行分别介绍： 一、乙肝表面抗原：是乙肝病毒的外壳蛋白，本身不具有传染性，但它常伴随乙肝病毒而存在，因此是感染乙肝的标志。 二、乙肝表面抗体：它可以和表面抗原特异地结合，在体内与人体的其他免疫功能共同作用下，可把病毒清除掉，保护人体不再受乙肝病毒感染。通常乙肝表面抗体作为中和性抗体标志，判断是否康复或是否有抵抗力。 三、乙肝e抗原：是可溶性蛋白，核心抗原的亚成分，当核心抗原裂解时，乙肝e抗原就溶于血清中，存在于血液循环中，临床检查意义为病毒复制标志，持续阳性3个月以上则有慢性化倾向。 四、乙肝e抗体：由e抗原刺激人体免疫系统产生出来的特异性抗体是，是病毒复制停止标志，病毒复制减少，传染性较弱，但需注意e抗体不是保护性抗体，不代表患者有了免疫力。 五、乙肝核心抗体：检测乙肝核心抗体可以了解人体是否有过核

心抗原的刺激，也就是说是否有过乙肝病毒的感染，因此作为病毒感染的标志之一。 以上就是肝病专家青主任对“乙肝抗原抗体检查”的详细解答，最后青主任提醒，在进行乙肝抗原抗体检查的时候，一定要到正规的肝病医院，才能保证检查结果的准确性，云南新华肝病医院位于昆明市北市区金实小区南门小庄立交桥旁，是云南省重点三甲肝病医院，已有20多年的专业治肝历史，医院拥有先进的诊疗设备和专业的专家团队，能保证每一位到诊的患者，都得到有效的治疗，是检查和治疗的首选！

丙型肝炎病毒抗体检测说明书

丙型肝炎病毒抗体检测试剂（胶体金法） 说明书 【产品名称】 通用名称：丙型肝炎病毒抗体检测试剂（胶体金法） 【包装规格】 条型单人份：50人份/盒；板型单人份:40人份/盒。 【预期用途】 本产品用于定性检测人血清.血浆样本中的丙型肝炎病毒（HCV）抗体。 丙型肝炎病毒是一种很小的.具有包膜的单股正链RNA病毒，是主要引起非肠道传播的非甲非乙型肝炎病毒，据文献报道，90%以上非肠道传播的非甲非乙型肝炎（NANBH）和25%以上急性散发性肝炎均为HCV感染所致，且35-50%的非甲非乙型肝炎发展为慢性肝炎，与肝癌的发生相关。HCV主要传播通过血源传播，此外还可以其他方式如通过母婴垂直传播，家庭日常接触和性传播等。 【检验原理】 本试剂采用高度特异性的抗体抗原反应原理及胶体金标记免疫层析分析技术，试剂含有被预先固定于膜上检测区（T）的包被用HCV重组抗原。 检测时，样本滴入试剂加样处于预包被的胶体金颗粒结合的标记用HCV重组抗原反应。然后，混合物再毛细效应下向上层析。如是阳性，标记用HCV重组抗原金标粒子在层析过程中先于样本中的HCV重组抗体结合，随后结合物会被固定在膜上的包被用HCV重组抗原结合，在检测区内（T）会出现一条紫红色条带。这条带是包被用HCV重组抗原-HCV抗体-标记用HCV重组抗原金标粒子的复合物在膜上结合形成的。如是阴性，则检测区内（T）将没有紫红色条带。无论HCV抗体是否存在于样本血样中，一条紫红色条带都会出现在质控区内（C）.质控区内（C）所显现的紫红色条带是判定是否有足够样本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂内控标准。 【主要组成成分】 丙型肝炎病毒抗体检测试剂：包被用HCV重组抗原，标记用HCV重组抗原。羊抗鼠IgG，硝酸纤维素膜，玻璃纤维； 缓冲液：成份为氯化钠，磷酸氢二钠，磷酸二氢钠； 25ul吸管 检测记录表 各组份的包装数量如下： 说明：不同批号试剂中各组份不能够互换使用，以免产生错误结果。

(完整word版)乙肝血清标志物检测的临床意义

乙型肝炎病毒血清五项标志物（“两对半”）的 临床意义 1. 乙型肝炎表面抗原(HBsAg) HBsAg是机体感染HBV的标志，也是在机体血清中首先出现的病毒标志物。HBsAg出现的时间，与机体感染HBV的途径和感染的剂量有关。如果系输用HBsAg 阳性血，2周后即可检测到HBsAg，如用RIA法检测，于接种后6天，血清中即可出现HBsAg阳性；如感染剂量少，HBsAg出现阳性的时间可达3～4个月，甚至6个月；一般在感染HBV后4～6周可出现HBsAg阳性。HBsAg出现阳性后1～7周(平均约4周)才出现肝炎症状和肝功能异常。经血感染者，其潜伏期约为2个月；经口感染者，其潜伏期大约为3个月。 急性乙肝病程一般持续１－３个月，80%～90%的患者可以临床治愈［1］。H BsAg阳性在血中一般持续１－６周，长者可达２０周（14－148天）；在肝炎症状出现后1～4周或血清转氨酶达高峰后1～12周消失，如果HBsAg阳性持续超过6个月仍不转阴则称为持续阳性或慢性携带状态; 如系急性乙肝，HBsAg 持续阳性超过6个月则提示慢性化。我国HBV感染(急性和慢性)的人群中每年大约有4%～10%的HBsAg阳性者转阴，同时每年又有约4%～10%的人群由易感人群成为受感染者，因而，人群HBV感染状态在不断变化［2］。HBsAg阳性持续的时间和急性乙肝慢性化的比例与感染者的年龄有关，年龄愈小，形成持续感染或病情慢性化的概率愈大；围产期感染的婴儿80%将成为HBsAg的携带者；幼儿期感染者约30%将成为持续HBsAg携带者，正常成年人感染HBV后形成持续性感染的比例可能在5%以下；社会普通人群中约35%～50%的HBsAg阳性 携带者是在母婴围产期感染的［3］。 临床上，HBsAg阳性可见于急性乙肝患者的潜伏期、急性期；慢性乙肝，无症状携带者；部分肝硬化和肝癌患者的血清中和受HBV感染的肝细胞浆中。 HBsAg阳性一般来说表明机体内存在HBV感染，但阴性也不能完全排除H BV感染。原因是：①可能由于HBV和HBsAg含量极少，检测方法不够灵敏而漏检，或因试剂质量和操作问题而出现假阴性；②S基因变异引起HBsAg的表达和分泌发生障碍，体内虽存在HBV，但血清中测不到HBsAg或很少[5,6]；③S

乙肝病毒核心抗体IgM011

乙型肝炎病毒核心IgM抗体 五环医院检验科 操作规程文件号：WHMY-011 版本：第1版共： 3页 2009年3月1日起实施 本规程每2年复审一次 复审日期：2009年2月27日 复审人：雷凤珠 规程编写者：王莉红 审批者：王金成 批准日期：2009年2月28日 检验科主任：雷凤珠 1、检验目的：乙肝核心IgM抗体测定 2、检测原理：本试剂在微孔条上预包羊抗人－IgM（μ链）配以乙肝核心抗原（HbcAg）和酶标抗体（抗HBcAb-HRP）及TMB显色剂等其他试剂，采用捕获法原理检测人血清(或血浆)中的乙肝核心抗体IgM（HbcAb-IgM）. 3.1试剂：上海科华生物技术有限公司 3.2 3.3试剂稳定性：原装试剂在2－8℃避光保存，有效期6个月。 3.4仪器： 3.4.1 TE-B型定时微量振荡器 3.4.2 37℃水浴箱(上海山连) 4、标本： 4.1静脉抽取空腹患者标本3.0ml(真空采血管)，将血液放置在37℃水浴箱中30分钟后，分离血清。 4.2样品收到后不要急于分离血清，以免血块收缩不良造成结果假阳性。 4.3溶血标本不能用于检测，因溶血可造成假阳性结果出现。

4.4用完的标本，应在样品管上注明日期，放置在2－8℃冰箱中保存一周。 4.5样品放置一周后，逐管加入1：50的84消毒液，并放置4小时后，装入医疗垃圾袋由专人按医疗垃圾处理。 5、操作 5.1操作步骤： 5.1.1配液：将20ml浓缩洗涤液（20×）用蒸馏水或去离子水稀释400ml.备用 5.1.2编号：将样品对应微孔按序号编号，.每板应设阴，阳性对照各2孔和空白对照孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步相同）。 5.1.3稀释：将待检血清样品1：1000稀释（阴阳性对照不稀释）. 5.1.4加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照100ul。 5.1.5温育：用封板模封板后置37℃温育30分钟。 5.1.6洗涤：将孔内液体用吸引器吸干，用洗涤液洗涤5遍，用吸引器吸干 5.1.7加酶：每孔加入酶标试剂2滴（100ul）,轻轻振荡混。 5.1.8温育：用封板模封板后置37℃温育30分钟 5.1.9洗涤：将孔内液体用吸引器吸干，用洗涤液洗涤5遍，用吸引器吸干。 5.1.10显色：每孔加入显色剂A、B液各1滴（50ul）, 轻轻振荡混匀, 37℃避光显色10分钟。 6、结果判定： 6.1目测：在白色背景下观察各孔显色情况，有明显蓝色者为HBcAb-IgM阳性；无色者为HbcAb-IgM阴性。 6.2酶标仪检测：每孔加入终止液1滴，轻拍混匀,用酶标仪(450nm波长)测定各孔OD值。 6.3临界值：（CUTOFF）计算：临界值＝阴性对照孔OD值×2.1 6.4阳性判定：样品OD值≥临界值（CUTOFF）者判为阳性。 阴性判定：样品OD值∠临界值（CUTOFF）者判为阴性。 7、注意事项： 7.1试剂盒从冷藏环境中取出时应室温平衡15－30分钟后方可使用，未用完的微孔条用自封袋密封保存， 7.2酶标板洗涤时各孔需加满洗液，防止孔口内有游离酶不能洗干净。应设定30－60秒的洗液浸泡时间。 7.3滴加试剂前应将滴瓶翻转数次，使液体混匀，并弃去1－2滴。滴加时瓶身应保持垂直，以保持滴量准确（注意：勿将试剂滴在孔壁上）。 7.4所有样品和废弃物都应按传染源处理。终止液为2M硫酸，使用时应注意安全。 7.5操作应按说明书严格进行，不同批次试剂不得混用。 8、临床意义：抗HBc是HbcAg的相应抗体，也是HBV感染后血清中最早出现的HBV的标志性抗体。持续时间长，甚至终生存在。几乎所有个体在感染HBV后都能产生抗HBc,故它是乙肝流行病学调查的良好指标。

乙肝病毒HBV血清学标志物检测的临床意义

乙肝病毒HBV 血清学标志物检测的临床意义 HBV 是一种小的有包膜病毒它被分类为嗜肝 DNA 病毒科中的一员。虽然HBV 在动物病 毒中有若干近亲，但人类病毒中没有与 HBV 相似者,HBV 的DNA 基因组只含四个编码病毒蛋 白的基因：编码三种形式的表面抗原的表面基因 S ,编码HBeAg 和HBcAg 的前核心/核心基 因C ,编码x 抗原的基因X 和编码HBVDNA 聚合酶的聚合酶基因 P 。 HBV 的复制 000*4^ A(n) cccDNA 转录 mRNA | 细胞核 HBV 利用一种与逆转录病毒如人类免疫缺陷病毒 Human 1mmunodeficiency Virus,HIV 复 制方式相关的新复制策略?在这一过程中，将 RNA 逆转录为DNA 是复制周期中极其重要的一 步。然而 与逆转录病毒不同的是 HBVDNA 在复制时并不整合到宿主细胞的 DNA 中去。当一 个有感染性的 HBV 颗粒结合并进入肝细胞时， HBVDNA 进入肝细胞并变为共价闭合环状 DNA,cccDNA,CoValent Closed C yc1ic DNA 。这种 cccDNA 是高度稳定的， 而且是 HBV 复 制过珵中重要的中间产物，其作用是作为 RNA 拷贝的模板。这些 RNA 拷贝中最大者被称为 HBV 前基因组mRNA ，它被转运到细胞浆中，它有双重功能，一方面作为合成新的 HBVDNA 的 模板;另方面又携带遗传信息指导病毒某些蛋白质合成 ，较小的HBVmRNA 则参与其他病毒蛋 白质的合成。病毒蛋白质合成开始之后，前基因组 mRNA 、HBV 核心蛋白和HBVDNA 聚合 酶装配在起形成新的病毒颗粒。 每个颗粒中的前基因组 mRNA 被HBVDNA 聚合酶转录为DNA 负链,minus sense,同时此RNA 模板被降解。而负链 DNA 再作为模板合成正链 DNA 。当 HBVDNA 的合成正在进行时，病毒颗粒在内质网中获得包膜并从细胞中输出到细胞外 ?少量新 的HBV 颗粒仍在细胞内，并以其DNA 补充细胞核内cccDNA 的储备。 有融染性的 HBVM 粒 肝细胞 (-)-DNA 畑胞浆 细胞核 DNA 有感染性的 卜一 HBVW 粒 、逆转录/ 内质网 、有包膜的 前基因 组