26种农药对鱼类的急性毒性研究

26种农药对鱼类的急性毒性研究

黄勤清

（福建农业职业技术学院，福州 350007）

摘要：以金鱼（Carassius auratus）为实验材料，研究了26种常用农药（包括18种杀虫剂、4种杀菌剂和4种除草剂）在推荐使用浓度下对金鱼的急性毒性效应。结果表明，苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis, 简称Bt）、吡虫啉、甲胺磷和多菌灵这4种农药在正常使用浓度下对金鱼无毒，而其余的22种农药则在不同程度上对金鱼产生药害，不宜在金鱼养殖厂附近农田施用或用于鱼病防治。

关键词：农药；金鱼；急性毒性

Acute toxicity of 26 pesticides to Carassius auratus

HUANG Qin-qing

（Fujian Vocational College of Agriculture, Fuzhou, Fujian 350002, China）Abstract:The acute toxicity of recommended dosages of 26 kinds of pesticides, including 18 insecticides, 4 bactericides and 4 herbicides, on Carassius auratus was investigated. The results showed that Bacillus thuringiensis(Bt), imidacloprid, methamidophos and carbendazim were nontoxic while other kinds of pesticides showed toxicity to C. auratus, which indicated that they should not be applied in farmlands near fish ponds or for fish disease control.

Key words: pesticide；Carassius auratus；acute toxicity

我国是农业大国，农药的生产和施用量均位于世界前列，但由于施用技术相对落后，农药的有效利用率极低[1]。施用于农田中的农药通过雨水淋溶或其他途径进入水环境中，经食物链逐级浓缩后对水生生态系统构成了严重威胁，甚至最终危害到人类健康[2-3]。农药对水生生物的急性毒性和生物富集性与农药的合理施用密切相关，是农药环境安全评价的重要参数[4]。而鱼类急性毒性资料是评价有毒化学物质和工业废水对水生生物的危害最常用的依据之一。金鱼（Carassius auratus）是我国重要的观赏性鱼类，被誉为“水中皇后”，与热带鱼并称为世界两大著名观赏鱼。随着生活水平的提高，其需求量呈日益提升的趋势[5]。鉴于以上原因，本文研究了26种常用的农药在正常使用浓度下对金鱼的急性毒性，对农药在农业上使用的安全性提出建议，并为我国渔业水质标准的制定提供参考依据[16]。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验用鱼

试验所用金鱼购自市场，体长3.5～4.5 cm，体重1～2 g，体色光亮，行动活泼，逆水性好，试验前每桶20只金鱼在水中稳定性试养7 d，每桶水8公斤，每天更换一半的新鲜的水，选择健康鱼备用。

1.1.2 实验用水[6]

实验用水为天然山泉水，水温23±2 ℃，溶解氧5～6 mg/L，pH 6.9～7.2。

1.1.3 供试药剂

供试药剂为我省常用的26种农药，包括18种杀虫剂、4种杀菌剂和4种除草剂（表1）。

1.2 急性毒性试验方法

按推荐田间使用浓度为基点配制各农药，每个处理浓度重复3次并设空白对照组，各放金鱼20尾，前8 h连续观察，每天更换一半的相同浓度的药液，每24 h记录试验鱼的死亡数量，计算较正死亡率。试验鱼在中毒后鳃盖停止活动，用玻璃棒或小镊子轻轻刺激尾柄部位，仍无反应即可确定为个体死亡[7]。

2 结果和分析

2.1 中毒症状

中毒初期，金鱼出现浮头、乱窜、冲撞缸壁,急躁不安，并有狂游跃出水面的现象。随着时间的延长，鱼游动减慢，渐渐安静下来，静卧缸底。中毒初期，体色不变，体表黏液很少，且黏液分泌随着时间的延长而增多。而对照组中的鱼处于正常状态。

2.2 急性毒性试验结果

26种农药对金鱼的急性毒性测定结果见表1。从该表可见，供试的26种农药对金鱼的毒性各不相同。试验鱼在24 h的校正死亡率表明，苏云金芽胞杆菌（Bt）、吡虫啉、甲胺磷和多菌灵这4种农药在正常使用浓度下对金鱼完全无毒。而其余的22种农药则在不同程度上对金鱼产生药害，其中灭多威、杀灭菊酯、阿维菌素、叶蝉散、敌敌畏、毒死蜱、高效氯氟氰菊酯、百草枯、草甘膦、高效氯吡甲禾灵和草甘膦异丙胺盐对金鱼的毒性最大，在试验条件下能完全致死所有的参试金鱼。

表1 26种农药对金鱼的急性毒性

Table 1 The acute toxicity of 26 pesticides to Carassius auratus

农药种类生产厂家推荐使用浓度

（mg L-1）24 h校正死亡率（%）

杀虫剂：

高效Bt可湿性粉剂8000单

位

10% 吡虫啉可湿性粉剂50 0 50%甲胺磷杭州农药总厂250 0 20%扑虱灵江苏灶星农化有限公司200 10 18%杀虫双江苏丰登农药有限公司180 26.7 3%敌克颗粒剂杭州长河农化有限公司30 81.7 15%灭多威西安美邦有限公司32.5 100 20%杀灭菊酯50 100 2%阿维菌素 2.5 100 20%叶蝉散乳油湖南海利化工股份有限公司100 80%敌敌畏乳油连云港市东金化工有限公司200 100 毒死蜱山东华阳科技股份有限公司100 15%哒螨灵江苏省盐城利民农化有限公

司

75 68.9

3%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐海南博士威农用化学有限公

司

20 53.3

高效氯氟氰菊酯先正达南通作物保护有限公

司

25 100

卫士Bt 福建浦城绿安生物农药有限

公司

硕丹江苏龙灯化学有限公司350 48.9 90%杀虫单江西省宜春信友化工有限公

司

300 50

杀菌剂：

多菌灵0 25%甲霜灵可湿性粉剂浙江禾本农药化学有限公司250 41.7 70%安泰生可湿性粉剂. 上海农安生物科技发展有限

公司

20 77.8

70%代森锰锌天津市农药业有限责任公司350 68.9 除草剂：

20%百草枯水剂先正达南通作物保护有限公

司

200 100

10%草甘膦福鼎绿丰化工有限公司500 100 5.4%高效氯吡甲禾灵上海泰禾（集团）有限公司108 100 41%草甘膦异丙胺盐美国孟山都公司150 100

3 讨论

3.1 杀虫剂对金鱼的毒性

本研究涉及了有机磷类（甲胺磷、敌敌畏和毒死蜱）[15]、氨基甲酸酯类（灭多威和叶蝉散）、硝基亚甲基类（吡虫灵）、菊脂类（甲胺磷）[17-18]等化学农药以及Bt等生物农药，各种不同杀虫剂对供试金鱼的毒性各不相同（表1）。有机磷农药因具毒效大、易分解、残留周期短等特点而被广泛应用于我国农业生产中，相应地在其对水生生物的安全性方面也开展了较多的研究[8,9]。黄周英等[10]的研究表明敌敌畏对金鱼是高毒的，与本研究的结果一致。而对于甲胺磷，本研究结果表明其对金鱼安全无毒，对鮸状黄姑鱼的毒性试验则表明其对该农药更为敏感[11]。

3.2 杀菌剂对金鱼的毒性

多菌灵为广谱性、高效低毒内吸性杀菌剂，对多种作物由真菌（如半知菌、多子囊菌）引起的病害有防治效果。本研究结果表明其正常使用时对金鱼安全无毒，可用于金鱼鱼病的防治及鱼塘消毒。目前对农药对鱼类的毒性研究多集中在杀虫剂上，杀菌剂的相关报道则较少。文祝友等[12]研究了两种新型杀菌剂菌毒杀星和锐劲特对金鱼的急性毒性试验，结果表明其中菌毒杀星对金鱼的安全浓度高，而锐劲特则反之。

3.3 除草剂对金鱼的毒性

除草剂的开发利用较其它的农药要晚，而我国对于其开发利用的时间比发达国家还要晚。但近年来无论是其它国家还是我国除草剂在农药中的比重越来越大，除草剂本身以及其降解物进入水体后，对鱼类的健康养殖构成了严重威胁。范立民等[13]以白鲢为材料，研究了除草剂丁草胺的毒性。结果表明其作用96 h的LC50仅为0.134mg/L，为高毒性农药，应对其加以管控，尽可能地降低对水生环境的风险性。而百草枯和草甘膦都是农业上用量极大的吨位级除草剂。本研究结果显示二者在正常使用浓度下均对金鱼具有很强的毒性，在鱼塘附近农田中应避免使用。

关于农药对鱼类和其他动物的毒性研究,国内外已有开展[8,14] ,但全面测定多种常用农药对金鱼的急性毒性影响尚未见报道。本试验的数据为金鱼的进一步研究提供参数,也对农药的使用安全性提供科学依据,避免因使用不当造成对人员或其他有益生物的危害。随着现代农业的发展,人类的农业经济越来越依赖化学药物的投入，而有机农药的广泛使用，污染了生态环境。因此，我国在发展农业的同时必须与环境保护保持密切的联系。

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工业废水的鱼类急性毒性效应研究

工业废水的鱼类急性毒性效应研究 李丽君1，刘振乾*1，徐国栋2，舒阳1，曹玉珍2，齐卫华 2 (1暨南大学水生生物研究所，广州 510632；2广州市环境监测中心站，广州 510030) 【摘要】利用斑马鱼对某市六家有代表性的企业所排放的处理前和处理后的工业废水进行了急性毒性试验，以对斑马鱼的半致死浓度为评价指标，得到了六种工业废水毒性强度的初步排序，并结合理化指标分析了斑马鱼的致死原因。 实验表明，六家企业处理前工业废水的毒性大小顺序为：电子类>食品类>电镀类>电池类>玻璃类>橡胶类,96hLC50分别为：0.98%、4.73%、11.35%、13.60%、47.60% , 其中橡胶类毒性最小，100%的工业废水对斑马鱼无致死效应。处理后的工业废水毒性基本消除，但部分行业的工业废水处理后仍存在毒性。 关键词：工业废水；斑马鱼；急性毒性 中图分类号：X 503.225 文献标识码：A 文章编号：1008-8873(2006)01-043-05 Study on acute-toxicity of six kind industrial wastewaters to zebrafish LI Li-jun1, LIU Zhen-qian*1, XU Guo-dong2，SHU Yang1, CAO Yu-zhen2,QI Wei-hua2(1.Institute of Hydrobiology, Jinan University, Guangzhou 510632, China;2.Guangzhou Environmental Monitoring Centre,Guangzhou 510030,China) Abstract In this paper, acute-toxicity test using zebrafish was applied to monitoring the wastewater form six industries. Based on 96h LC50 values, the toxicity sequence of the six industrial effluents was in order of electron effluent> grocery effluents> electroplate effluent >battery effulent >glass effluent > rubber effluent. The six 96hLC50 are as follows: 0.98%、4.73%、11.35%、 13.60%、47.60%.The toxicity of the rubber effluent was the least, the 100% industrial wastewater can not be deadly to Brachydanio rerio fish. The toxicity was eliminated after management, but the toxicity of some industries were not eliminated. Key word: Industrial wastewater; Zebrafish (Brachydanio , rerio); Acute-toxicity 随着近代工业的发展，工业废水对水生生态系统及人类安全的影响日益严重，已引起世界各国的普遍关注，为了有效地控制水环境污染和保护水资源，近几十年来，世界各国都广泛地开展了工业废水及其组分的毒性评价和生物监测工作。目前我国工业废水排放的监督和管理主要以理化监测为主，这虽然能快速地定量测定某些废水中的污染物含量，但对于组分复杂的工业废水来说，就难以用理化分析方法阐明其组分和对环境的影响，而且是在没有考虑时间因素和环境因素对毒性的影响，没有考虑各毒性物质之间可能相互作用的情况下进行的，而实际情况比较复杂，理化分析并不能反映出废水的综合毒性强度。因此通过水生生物毒性试验[1、2]来反映废水的综合毒性，以此说明水质的污染状况将是一行之有效的方法。 目前被用来监测工业废水的生物主要有：鱼[3~9]、藻类[10]、大型溞类[11]、发光细菌[13，14]、虾[12]等，本研究选择国际标准化组织（ISO）推荐的五大试验鱼种之一——斑马鱼为试验生物，对某市六家有代表性的企业处理前和处理后的工业废水进行急性毒性试验，并把毒性测试结合理化测试进行比较分析，综合评价了污染源的污染程度，确定了工业废水的安全排放浓度。这对加强生物监测与评价手段，强化工业污染源的科学管理有着重要的意义。 1 材料与方法 1.1 试验材料 1.1.1 试验生物试验所用鱼种为斑马鱼（Brachydanio rerio），又名蓝条鱼、花条鱼，真骨鱼总目，鲤科。原产地：印度和孟加拉国。购于当地鸟鱼虫市场，平均体长 2.56 cm，平均体重为0.29 g。在连续曝气的循环水中驯养14 d以上，驯养期间无一尾鱼死亡。 1.1.2 试验器材化学惰性材料制成的水族箱（规格一致，体积适宜），采用高27 cm、直径20 cm的5000 mL 的圆形玻璃烧杯，同一试验采用相同规格和质量的容器。实验容器使用前彻底洗净。 pH计（HI-8424）等。 1.2 试验条件 试验用水为曝气24 h的驯养循环水；光照每天12 h 生态科学 2006年2月第25卷第1期 ECOLOGIC SCIENCE Feb., 2006, 25(1):43～47

农药毒性分级标准

农药毒性分级标准 如何测定农药药剂的药效好坏？中国农药网相关专家总结有：通过室内毒力测定和林间药效试验。 室内毒力测定室内毒力测定主要是测定一种药剂的毒性、毒力或比较几种药剂毒力的大小。室内试验的结果，除可作为药剂的初步筛选的根据外，还可为林间试验提供参考。有时在林间发现的问题必须拿回室内作比较精细的试验研究。 进行室内试验要注意：①供试生物应该是由同一环境下培养得来的，或采自林间同一环境的，在生理、发育上愈一致愈好。②供试药剂必须纯净（原油或原粉），至少要有确切的有效成分含量。③在控制的条件下进行试验，施药要均匀一致。④试验一般要求每种处理有3－5个重复，每个处理要有50－100头昆虫（菌类孢子一般为在显微镜10×10视野内有100个左右，每次计算必须移动玻片检查3次）。⑤各种试验必须设立对照。所设对照有：完全不处理的（在自然状况下的），即所谓“空白”对照；不含有效成分的制剂或清水对照，用标准药剂处理的对照。 在测定药剂毒力时，一般常用一系列的剂量（或浓度）对多组生物分别测定死亡百分率，再以不同剂量与相应的死亡率画成“剂量－死亡率毒力曲线”。在纵坐标从死亡率50%处引出一平行于横坐标的线与曲线相交。该处的剂量（或浓度）即为LD50（或为LC50）。但是由于这一曲线是S形的，不易精确地求得LD50或LC50的数值，同时用S形曲线也不易与其他曲线进行比较。因此，必须把这一呈S形曲线改成一条直线，常用统计方法是将剂量用对数值表示，将死亡率用机率值表示，就可以将S形曲线改为一根直线，这一根直线常称“剂量对数-机率值直线”。死亡率查机率（见附表2机率与死亡百分率换算表）。从这一直线的坡度，还可得知供试生物对该种药剂敏感性差异的程度，即坡度越大，表示供试生物个体间差异越小；坡度越小，表示差异越大。室内毒力测定时，在不施药的对照组中，出常出现少数自然死亡的个体，如果自然死亡率在5%以下，一般仅把处理组的死亡率减去自然死亡率即可得到校正死亡率。当自然死亡率达到5%~20~时，就不能用直接相减的方法，应按照下列公式计算处理组的校正死亡率，如果自然死亡率超过20%时，则该批供试生物不宜作试验或试验应重做。 林间药效试验林间试验主要测定或比较药剂在林间条件下的药效，其结果比较接近实际情况，为1973年世界卫生组织（WHO）执行委员会制订了一个区分农药危害性的分类法，并于1975年在第二十八届世界卫生会议上通过（表1）。农药毒性分类主要是根据对大鼠的急性经口和经皮毒性进行的，这在毒理学上已成为决定毒性分类的标准方法。 表1世界卫生组织推荐的农药危害分级标准 级别（class) LD50大鼠（毫克/公斤体重） 经口经皮

毒性分级

有毒有害物质分类参考 一、化学药品、试剂毒性分类参考举例 （一）剧毒物质（＊为致癌） ＊六氯苯；羟基铁；氰化钠；氢氟酸；氢氰酸；氯化氰；氯化汞；砷酸汞；汞蒸气；砷化氢；光气；氟光气；磷化氢；＊三氧化二砷；有机磷化物；有机砷化物；有机氟化物；有机硼化物；＊铍及其化合物；蛇毒；＊羰基镍；砷酸盐；＊四甲基联苯胺（TMB）；四氯化饿；二甲砷酸盐；＊异硫氰酸苯脂；丙烯酰胺；马钱子碱；毒毛旋花素—G；＊二氨基联苯胺（DAB）；二甲亚砜；二甲砷酸钠；甲酚。 （二）致癌物质 黄曲霉素B13—4苯并芘；芘及苯并芘；苯及葸类；2—乙酰胺基芴；1—（或2—）萘胺；4—联苯胺类及其硫酸盐；4—氨基联苯；2，3—二甲基—4—氨基偶氮苯；磷甲苯胺；2，4—二氨基甲苯；乙酰胺N一芴基取代物；乙酰苯胺取代物；环磷酰胺；3，3—二氯联苯胺；4—二甲基胺基偶氮苯；4—硝基联苯；4—甲叉（双）—2氯苯胺；乙撑亚胺；间苯二酚；亚硝胺；二硝基萘；N—亚硝基二甲胺；甲基亚硝基脲；二甲（或乙、丙）基亚硝胺；N一甲基一N一亚硝基氨基甲酸乙酯；N—甲基一N—亚硝基丙烯胺；N—甲基—N一亚硝基—N’一硝基胍；N—甲基一4—亚硝基苯胺；B一丙内脂；甲烷磺酸甲酯（或乙酯）；丙磺内脂；重氮甲烷；1，4—二恶烷；二氯二甲硅烷；硫酸二甲脂；双氯甲基醚；氯甲甲醚；氯乙烯；溴乙烯；氟乙烯；砷；三氧化砷；砷酸钙（或铅、钾）；铍及其盐类；镉及其盐类；镍及其盐类；羰基镍；铬；氧化铬；铬盐类；石棉；氘代试剂。 （三）高毒物质 四氯化碳；三氯甲烷；溴甲烷；三氯乙烷；二溴氯丙烷；二氯乙烷；六氯乙烷；溴苯；氯苯；对二氯苯；氟乙酸；氯乙酸；氯乙酸乙酯；溴乙酸乙脂；氟乙酰胺；乙腈；丙烯腈；甲基丙烯腈；偶氮二异丁腈；丙酮氰醇；甲苯二异氰酸脂；二苯基甲烷二异氰酸脂；肼；甲基肼；苯肼；二苯肼；甲（或乙、丁）硫醇；二氯硅烷；三氯甲硅烷；硼烷；四乙基铅；四乙基锡；丙烯醛；乙烯酮；二乙烯酮；对苯二酚；苯胺及甲苯胺；三氯甲硅烷；碘乙酸乙脂；硫酸二甲脂；芳香胺；叠氮钠；三氯氧磷；五氯化磷；三氯化磷；五氧化二磷；黄磷；氧化亚氮；铊及其盐类；三氯化锑；二氧化锰；五氧化二钒；砷化钠；氟化钠；氯化氢；氯气；溴水；硫化氢；秋水仙碱。

国内外化学品急性毒性分级标准

国内外有关化学品急性毒性分级标准 以下为收集到的国内外有关化学品急性毒性分级的一些标准。从这些分级标准可以看出，各标准之间无论是分级还是界限值都有较大差别，这给化学品的国际贸易和化学品危险信息的传递带来了障碍和困难。为消除分级标准之间的差别，建立协调、统一的化学品分级标准，由国际劳工组织（ILO）、经济合作与发展组织（OECD）以及联合国危险货物运输专家委员会（TDG）三个国际组织共同提出框架草案，建立了全球化学品统一分类与标签制度（GHS）。2002年9月在约翰内斯堡召开的“联合国可持续发展世界首脑会议”提出：各国应在2008年全面实施GHS。为适应国际化学品分类统一的这种必然趋势，结合国内化学品管理的实际需要，《剧毒目录》在剧毒化学品判定标准上参照了GHS的急性毒性分级标准。 表1 GHS关于化学品急性毒性分级标准

注：1） 1h 数值气体和蒸气除2，粉尘和雾除4；2）某些受试化学品在试验染毒时呈气液相混合状态（有气溶胶），而有些则接近气相，如为后者按气体分级界限分级（ppm ） 表2 TDG 第14修订版关于危险货物急性毒性判定标准 * LC 50（4h ）×4＝LC 50（1h ） 表3 世界卫生组织关于化学品急性毒性分级标准

注：上述标准出处是WHO/IPCS. The User’s Manual for the IPCS Health and Safety Guides, 1996. 表4 世界卫生组织关于农药危险性分级标准

注：上述标准出处是The WHO Recommended Classification of Pesticides by Hazard and Guidelines to Classification 1990-1991. 表5 欧盟化学品急性毒性分级标准 注：上述标准出处是欧盟理事会《关于统一危险物质分类、包装与标志法律法规指令（2000/33/EEC）》.

农药常识之农药的毒性 毒力 药效

农药的毒性、毒力、药效在使用农药时，必然要遇到毒性、毒力、药效三个问题。三者的含义不同，但又是经常容易被混淆的问题。 (一)毒性是指药剂对人、畜等的毒害程度。我国现行对农药毒性测定是用纯药原药或制剂在大白鼠、小白鼠、兔、狗等试验动物身上测定，分急性毒性和慢性毒性两种。 1.急性毒性是指药剂经皮肤或经口、经呼吸道一次性进入动物体内较大剂量，在短时间内引起急性中毒。 农药毒性分级标准是以农药对大白鼠“致死量”表示，目前国内外通常用“致死中量”或叫半数致死量(LD50)表示。致死中量是指毒死半数受试动物剂量的对数平均数，即每千克(公斤)体重的动物所需药物的毫克数，记作“mg/kg(毫克/千克)”。LD50愈小，药物毒性愈大。根据我国《农药安全使用规定》，依致死中量分高毒、中等毒、低毒3种。高毒农药的使用范围有一定限制，国家有规定，使用时要遵守。 最小致死量(MLD)：即受试动物开始出现中毒症状而死亡的剂量； 全致死量(LD100)：指受试动物全部死亡所使用的最低剂量； 无作用剂量(NoEL)； 致死中浓度(LC50)：即在一定时间内受试动物死亡50%吸入剂量(毫克/立方米)； 耐药中量(TLM)：表示农药对鱼的毒性，一般用48小时内引起鱼半数死亡的浓度。标记为TLM48小时LC50(毫克/升)或用ppm(百分之一)； 致死中时间(LT50)：在一定条件下能杀死被试生物群体中一半数量所需的时间； 击倒中时间(KT50)：一定量药剂能击倒50%被试昆虫所需要的时间； 每日允许摄取量(ADI)：每天按人的体重(公斤)计算所能摄取的农药重量，在人的一生中不会造成对人体有害，单位mg/kg体重/天；

国内外有关化学品急性毒性分级标准

国内外有关化学品急性毒 性分级标准 Prepared on 24 November 2020

国内外有关化学品急性毒性分级标准以下为收集到的国内外有关化学品急性毒性分级的一些标准。从这些分级标准可以看出，各标准之间无论是分级还是界限值都有较大差别，这给化学品的国际贸易和化学品危险信息的传递带来了障碍和困难。为消除分级标准之间的差别，建立协调、统一的化学品分级标准，由国际劳工组织（ILO）、经济合作与发展组织（OECD）以及联合国危险货物运输专家委员会（TDG）三个国际组织共同提出框架草案，建立了全球化学品统一分类与标签制度（GHS）。2002年9月在约翰内斯堡召开的“联合国可持续发展世界首脑会议”提出：各国应在2008年全面实施GHS。为适应国际化学品分类统一的这种必然趋势，结合国内化学品管理的实际需要，《剧毒目录》在剧毒化学品判定标准上参照了GHS的急性毒性分级标准。 表1 GHS关于化学品急性毒性分级标准

注：1） 1h 数值气体和蒸气除2，粉尘和雾除4；2）某些受试化学品在试验染毒时呈气液相混合状态（有气溶胶），而有些则接近气相，如为后者按气体分级界限分级（ppm ） 表2 TDG 第14修订版关于危险货物急性毒性判定标准 * LC 50（4h ）×4＝LC 50（1h ） 表 3 世界卫生组织关于化学品急性毒性分级标准 注：上述标准出处是WHO/IPCS. The User ’s Manual for the IPCS Health and Safety Guides, 1996. 表4 世界卫生组织关于农药危险性分级标准

注：上述标准出处是The WHO Recommended Classification of Pesticides by Hazard and Guidelines to Classification 1990-1991. 表5 欧盟化学品急性毒性分级标准

鱼的急性毒性试验

鱼的急性毒性试验 一、实验目的和要求： 通过本试验，熟悉和掌握鱼类急性毒性试验的设计、条件、操作步骤，以及试验结果的计算、分析和报告等全过程。 二、实验原理： 鱼类对水环境的变化反应十分灵敏，当水体中的污染物达到一定程度时，就会引起一系列中毒反应，例如行为异常、生理功能紊乱、组织细胞病变直至死亡。在规定的条件下，使鱼接触含不同浓度受试物的水溶液，实验至少进行24h，最好以96h为一个实验周期，在24h、48h、72h、96h时记录实验鱼的死亡率，确定鱼类死亡50%时的受试物浓度。鱼类毒性试验在研究水污染及水环境质量中占重要地位。通过鱼类急性毒性试验可以评价受试物仅用于测定化学物质毒性强度、测定水体污染程度、检查废水处理的有效成都，也为制定水质标准、评价环境质量和管理废水排放提供环境依据。 三、实验材料： 1.实验鱼的选择和驯养 12×6 小锦鲤鱼体长7-12cm 体宽3-5cm 体重 7-12g 不同浓度的苯酚（mg/L）0、24、48、96、192、384 2、实验仪器设备 （1）实验容器 实验容器一般用玻璃或其他化学惰性材质制成的水槽。容器体积可以根据试验鱼的体重确定，通常以每升水中鱼的负荷不得超过2g（最好为1g）。一些小型鱼类幼鱼可选择500ml 或1000ml烧杯为实验容器。容器的深度必须超过16cm，水体表面积越大越好。同一实验应采用相同规格和质量的容器。为防止鱼类跳出容器，可在容器上加上网罩。实验容器使用后，必须彻底洗净，以除去所有毒性残留物。 （2）其他 吸光光度计 3、实验用水：曝气水 四、操作步骤： 1、设置5个浓度组，1个空白对照组，选择不同浓度的苯酚（mg/L）0、24、48、96、 192、384。每个浓度放入12条小锦鲤鱼。采用直接投毒方式，将配制的苯酚溶液直接倒入水槽中，搅拌均匀。分别分为1、2、3、4、5、6组。染毒后观察其活动状况，并

农药环境毒性等级

鱼毒性 指农药对鱼类造成的不良影响及危害，包括急性毒性、慢性毒性、胚胎毒性及致畸性。在安全评价中，通常只做急性毒性，一般以耐药中浓度（TLm）或致死中浓度（LC50）作为衡量指标。 目前，把农药对鱼的毒性以48小时的LC50值的大小分为三级： 低毒级LC50 >10mg/l（毫克/升） 中毒级LC50 1.0-10.0mg/l 高毒级LC50 0.1<1.0mg/l 剧毒级LC50 0.1< mg/l * 水蚤毒性 水蚤是水生动物中重要的类群，是鱼类的食料，也是水生食物链的重要环节。由于它对农药十分敏感，故常常把农药对其毒性作为评价农药环境安全性的一个指标。 农药对水蚤毒性的分级标准同鱼毒性。 * 藻类毒性 即表明农药对藻类细胞造成损害的能力，表现为对藻类的灭杀和生长抑制作用。其以半数生物受影响的EC50表示。对此，也常常作为评价农药对环境安全性评价的一个重要指标。 其分级参考标准为在96小时中EC50的大小。 低毒性EC50>3.0mg/l 中毒性EC503.0-0.3mg/l 高毒性EC50<0.3mg/l * 鸟毒性 即指农药对鸟类生长、繁殖及生理生化功能的影响及危害。包括急性毒性和慢性毒性两类，急性毒性多以LD50表示。下表即为我国国家环保局在《农药环境安全评价试验准则》中所定对鸟类急性毒性和蓄积毒性的评价标准。 农药对鸟类毒性的分级与评价 LD50 mg/kg 急性毒性蓄积系数蓄积毒性 <15 高毒<1 高度蓄积 15-50 中毒1-3 明显蓄积 3-5 中等蓄积 >150 低毒>5 轻度蓄积 * 对蜜蜂毒性 指农药对蜜蜂机体造成损害的能力，其以LD50或LC50表示。通常把对蜜蜂毒性分为高毒、中毒和低毒三级：

鱼类的急性毒性实验

鱼类的急性毒性实验 鱼类急性毒性试验，是水生生态毒理学的重要内容之一，并广泛应用于水域环境污染监测工作中，对控制工业废水的排放、保护水域环境、发展渔业生产，制定渔业水质标准，具有重要意义。 一、实验原理 鱼类对水环境的变化反应十分灵敏，当水体中的污染物达到一定程度时，就会引起一系列中毒反应，例如行为异常、生理功能紊乱、组织细胞病变、直至死亡。在规定的条件下，使鱼接触含不同浓度受试物的水溶液，实验至少进行24h，最好以96h为一个实验周期，在24h、48h、72h、96h时记录实验鱼的死亡率，确定鱼类死亡50%时的受试物浓度。鱼类毒性试验在研究水污染及水环境质量中占重要地位。通过鱼类急性毒性试验可以评价受试物对水生生物可能产生的影响，以短期暴露效应表明受试物的毒害性。鱼类急性毒性试验不仅用于测定化学物质毒性强度、测定水体污染程度、检查废水处理的有效程度，也为制定水质标准、评价环境质量和管理废水排放提供环境依据。 二、实验材料 1、试验用鱼的选择与驯养 试验用的鱼必须对毒物敏感，应具有代表性，便于在实验条件下饲养，来源丰富，个体健康。我国可采用的试验鱼有四大养殖淡水鱼（青鱼、草鱼、鲢鱼和鳙鱼）、金鱼、鲫鱼等。 在同一实验中要求试验鱼必须同属、同种、同龄，最好是当年生。鱼的平均体长以7cm 以下为宜。金鱼体短、身宽，一般以3cm以下较为合适。同组鱼中最大的体长不应超过最小的体长的1.5倍。 选用的试验鱼在试验前必须在实验室内经过驯养，使之适应实验室条件的生活环境和进行健康选择。驯养鱼应该与试验相同水质水温的水体中至少驯养7天，使其适应试验环境，不应长期养殖（<2个月）。驯养期间，应每天换水，可每天喂食1～2次，但在试验前一天应停止喂食，以免试验时，剩余饵料及粪便影响水质。驯养期间试验鱼死亡率不得超过5%，否则，可以认为这批鱼不符合试验鱼的要求，应该继续驯养或者重新更换试验鱼进行驯养。 试验前必须挑选健康的鱼，即选择行动活泼、体色光泽、鱼鳍舒展完整、逆水性强、大小无太大悬殊、无任何疾病的鱼作为试验鱼。任何畸形鱼、外观上反常态的鱼都不得作试验鱼。 2、实验仪器设备 （1）实验容器 实验容器一般用玻璃或其他化学惰性材质制成的水族箱或水槽。容器体积可根据试验鱼的体重确定，通常以每升水中鱼的负荷不得超过2g（最好为1g），或者其盛水量以每条鱼2～3L为宜。一些小型鱼类幼鱼可选择500mL或1000mL烧杯为实验容器。容器的深度必须超过16cm，水体表面积越大越好。同一实验应采用相同规格和质量的容器。为防止鱼类跳出容器，可在容器上加上网罩。实验容器使用后，必须彻底洗净，以除去所有毒性残留物。 （2）其他 溶解氧测定仪、水硬度计、温度控制仪、pH计、分析天平。 3、实验用水（稀释水）及水质条件 用来驯养和配制实验液的水，必须是未受污染的清洁水。一般可采用天然河水、湖水或

农药常识之农药的毒性、毒力、药效

农药的毒性、毒力、药效 在使用农药时，必然要遇到毒性、毒力、药效三个问题。三者的含义不同，但又是经常容易被混淆的问题。4xin.n (一)毒性是指药剂对人、畜等的毒害程度。我国现行对农药毒性测定是用纯药原药或制剂在大白鼠、小白鼠、兔、狗等试验动物身上测定，分急性毒性和慢性毒性两种。https://www.wendangku.net/doc/f312306147.html,_ 1.急性毒性是指药剂经皮肤或经口、经呼吸道一次性进入动物体内较大剂量，在短时间内引起急性中毒。4xin. 农药毒性分级标准是以农药对大白鼠“致死量”表示，目前国内外通常用“致死中量”或叫半数致死量(LD50)表示。致死中量是指毒死半数受试动物剂量的对数平均数，即每千克(公斤)体重的动物所需药物的毫克数，记作“mg/kg(毫克/千克)”。LD50愈小，药物毒性愈大。根据我国《农药安全使用规定》，依致死中量分高毒、中等毒、低毒3种。高毒农药的使用范围有一定限制，国家有规定，使用时要遵守。4xin 最小致死量(MLD)：即受试动物开始出现中毒症状而死亡的剂量； 全致死量(LD100)：指受试动物全部死亡所使用的最低剂量； 无作用剂量(NoEL)；4xin. 致死中浓度(LC50)：即在一定时间内受试动物死亡50%吸入剂量(毫克/立方米)； 耐药中量(TLM)：表示农药对鱼的毒性，一般用48小时内引起鱼半数死亡的浓度。标记为TLM48小时LC50(毫克/升)或用ppm(百分之一)； 致死中时间(LT50)：在一定条件下能杀死被试生物群体中一半数量所需的时间； https://www.wendangku.net/doc/f312306147.html,_Cnj[zGOB:dDn 击倒中时间(KT50)：一定量药剂能击倒50%被试昆虫所需要的时间；

每日允许摄取量(ADI)：每天按人的体重(公斤)计算所能摄取的农药重量，在人的一生中不会造成对人体有害，单位mg/kg体重/天；https://www.wendangku.net/doc/f312306147.html,_Cnj[zGOB:dDn 农药的半衰期：是指农药在某种条件下分解或消失一半所需的时间； 农药量最大容许残留量：供人类食用的农副产品中允许的农药最高限度的残留浓度。 2.慢性毒性是指供试动物在长期反复多次小剂量口服或接触一种农药后，经过一段时间累积到一定量所表现出的毒性。https://www.wendangku.net/doc/f312306147.html,_Cnj[zGOB:dDn 无论急性或慢性中毒药剂均需要注意其是否有三致(致畸、致癌、致突变)作用。致畸：引起动物畸形；https://www.wendangku.net/doc/f312306147.html,_Cnj[zGOB:dDn 致癌：引起动物产生肿瘤；https://www.wendangku.net/doc/f312306147.html,_Cnj[zGOB:dDn 致突变：引发遗传上的突然变异。https://www.wendangku.net/doc/f312306147.html,_Cnj[zGOB:dDn 凡有三致作用的，均不能做农药使用。另外还有些农药对水生动物和鱼类、蜜蜂以及有益的天敌等有毒或二次中毒问题，使用时也要特别注意，或者忌用。 (二)毒力是指药剂本身对有害生物的毒害程度，多在室内人为控制条件下精密测定。https://www.wendangku.net/doc/f312306147.html,_Cnj[zGOB:dDn 毒力的选择性亦很重要。所谓选择性，一般是指农药对虫、鼠的毒力强而对人、畜弱。选择性越强，毒力间差别越大，对人、畜威胁就越小，使用也越安全。但选择性也不宜过强，如果仅对几种病虫或几种鼠类有毒，则使用范围就会受到很大限制。 (三)药效是指药剂对有害生物的作用效果，多在室外自然条件下测定。药效与毒务，在一般正常情况下是一致的，毒力大，药效高，其关系密切。但与药剂本身加工质量、测定时的自然条件(如温度、湿度、土壤质地)、植物生育状况、施药方法(如杀鼠药则还有适口性)等均有极其密切影响关系，测试时须要综合考虑。https://www.wendangku.net/doc/f312306147.html,_Cnj[zGOB:dDn

实验二 鱼类急性毒性实验

实验二鱼类急性毒性实验 一、实验目的 （1）掌握鱼类急性毒性实验的原理和操作 （2）掌握半致死浓度的计算方法 二、实验原理 鱼类对水环境的变化十分灵敏，运用毒理实验方法，观察鱼类在含有化学污染物的水环境中的反应，可以比较不同化学物质的毒性高低。鱼类毒性实验方法可分为静态方法和动态方法两大类。静态实验方法操作简单，不需要特殊设备，适宜于受试化学物在水中相对稳定，在实验过程中耗氧量较低的短期实验。动态实验方法要求具备一定的设备，对于在水中不稳定、耗氧量较高的化学物需要进行较长时间的实验观察时，可采用动态实验方法。本实验介绍静态实验方法。三、实验器材 玻璃缸或搪瓷桶、重金属盐、金鱼 四、实验步骤 （1）预备实验：预备实验的方法，可参考有关资料初步估计3～4个浓度，每个浓度用3～4尾鱼，观察24～48h。进行预备实验的目的是确定实验浓度的范围（找出引起实验鱼全部死亡和不引起实验鱼死亡的浓度）；观察鱼中毒的表现和出现中毒的时间，为正式实验选择观察指标提供依据。同时还要做一些化学测定，以了解实验液的稳定性、pH值、溶解氧的变化情况，以便在正式实验时采取措施。 （2）正式实验： 1、根据在预备实验中得到的浓度范围，其间距按等比级数插入3～5个中间浓度 实验中至少选择5个不同浓度，一般以7个浓度较常用，但所选择的浓度应包括有使实验鱼在24h内死亡的浓度，以及96h内不发生中毒的浓度。表中第1纵行包括的浓度最常用。 实验中无论采用何种分组方法，都必须同时设对照组。 配制实验液时应先配制少量高浓度的储备液，实验时临时稀释所需浓度的实验液。先把药液与水均匀混合后，再放入实验鱼，禁止先放入实验鱼后往实验缸中加受试药液，以免实验鱼接触到不均匀的高浓度的药液而提前死亡。

金鱼毒性试验

环境毒理学实验报告 指导老师：XXXX 姓名：XXXX 班级：XXXX 学号：XXXX

实验一金鱼毒性试验 一、实验目的： 通过本实验，熟悉和掌握鱼类急性毒性试验的设计、条件、操作步骤，以及试验结果的计算、分析和报告等全过程。 二、实验原理： 鱼类对水环境的变化反应十分灵敏，当水体中的污染物达到一定程度时，就会引起一系列中毒反应，例如行为异常、生理功能紊乱、组织细胞病变、直至死亡。在规定的条件下，使鱼接触含不同浓度受试物的水溶液，实验至少进行24h，最好以96 h为一个实验周期，在24h、48h、72h、96h时记录实验鱼的死亡率，确定鱼类死亡50％时的受试物浓度。鱼类毒性试验在研究水污染及水环境质量中占重要地位。通过鱼类急性毒性试验可以评价受试物对水生生物可能产生的影响，以短期暴露效应表明受试物的毒害性。鱼类急性毒性试验不仅用于测定化学物质毒性强度、测定水体污染程度、检查废水处理的有效程度，也为制定水质标准、评价环境质量和管理废水排放提供环境依据。 三、实验材料： 1、实验鱼：小型金鱼幼苗100尾 2、实验试剂：CdCl溶液 四、实验步骤：

1．饲养管理 本实验采用2000mL大烧杯对受试鱼进行饲养。水源为进过曝气后的自来水，PH值6.2-6.7，溶解氧6-10mg/L。水温12摄氏度。空气压缩机24小时增氧，实验期间受试鱼不喂食。 2．急性实验 按照急性毒性实验方法，在包括使鱼全部死亡的最低浓度和96 h 鱼类全部存活的最好浓度之间设置4个浓度组，分别是1mg/L、4mg/L、12mg/L、16mg/L。 每个试验浓度组设2个平行，每一系列设一个空白对照。试验溶液调节至相应温度后，从驯养鱼群中随即取出鱼并随机迅速放入各试验容器中，每个容器投放受试鱼10尾。同一试验，所有试验用鱼应30min内分组完毕。 在24h、48h、72h、96h后检查受试鱼的状况。观察并记录死鱼数目后，将死鱼从容器中取出。应在试验开始后3h观察各处理组鱼的状况，并记录试验鱼的异常行为（如鱼体侧翻、失去平衡，游泳能力和呼吸能力减弱，色素沉积等）。 以暴露浓度为横坐标，死亡率为纵坐标，在计算机或对数概率纸上，绘制暴露浓度对死亡率的曲线。用直线内插法或常用统计程序计算出24h、48h、72h、96h的半致死浓度（LC50）值，并计算95％的置信限。 2．化学物质急性毒性分级 依据LC50值的大小，可以将化学物质的急性毒性分为剧毒、高

水生生物急性毒性试验一般程序

水生生物急性毒性试验一般程序 1、试验准备 1）实验容器准备、清洁和消毒处理 ——容器：大小合适、材料无毒、不易吸附、对生物不造成损伤 2）受试生物的采集与驯化 3）稀释水（试验关键） ——来源：无污染自然水、去氯自来水、配置标准水（OECD ASTM推荐配方） ——质量控制：pH、温度、溶解氧、盐度、硬度、无其它污染物，有参比 4）环境条件：控制系统 2、实验设计 1）测试方式选择 ——可选用静止、更新式和直流式。 ——挥发性高、降解速率大化合物不能用静止式，选用更新式，最好用直流式 ——BOD高的废水不能用静止式，选用更新式，最好用直流式 ——生长速率快、代谢快的生物不能用静止式，选用更新式，最好用直流式 2）试验生物选择 3）被测毒物的配置 ——配成高浓度储备液 ——不溶或溶解度小用助溶试剂，如丙酮等，并设置溶剂对照，助溶试剂的毒性要小、溶解度高、实验系统用量要少，关键是要了解被测毒物的溶解度 4）生物指标确定及试验重点 5）试验浓度的设置（获得毒性数据的关键） ——文献资料 ——预备试验 ——浓度确定方式：等对数浓度 3、正式试验 1）实验浓度的配置 2）试验动物的数量 ——数量分配：5~10 ——生物量：＜0.8g/L；个体小的热带种＜0.1g/L 3）实验组数 ——5个浓度+对照（稀释水） ——5个浓度+对照（稀释水）+溶剂对照 ——对照组死亡率＜10% ——3~5个平行（不少于30个受试生物） 4）实验周期（暴露时间） ——根据试验目的和生物不同而不同 ——标准方法：藻类生长抑制试验，72h 枝角类急性毒性试验，48h 鱼类急性毒性试验，96h

5）试验终点观察：不同生物不同，同一实验相同 6）理化指标测定：温度、溶解氧、pH、硬度等 7）受试毒物浓度确定（计算得的数值VS实测） 8）实验记录 P.S.急性毒性试验期间不喂食物 4、LC50的求法 1）直线内插法——图解计算LC50、EC50的一种简便方法。在半对数纸上作图，即可求解。 2）概率单位法 依据：浓度对数与概率单位呈直线关系 方法一：查死亡率——概率单位换算表，然后作图（浓度对数——概率单位图） 方法二：直接用对数——概率纸作图 ——求直线回归方程 ——求LC50的置信区间（范围） 推荐软件：Trimmed Spearman-Karber Software/Excel/SPSS

农药毒性分级

农药毒性分级 1.世界卫生组织的农药危害分级 世界卫生组织推荐的农药危害分级标准，于1975年的世界卫生立法会议通过，主要根据农药的急性经口和经皮LD50值（大鼠，下同），分固体和液体两种存在形态对农药产品的危害进行分级。 表1 世界卫生组织的农药危害分级标准 2 2.美国农药毒性分级 世界各国的农药毒性分级通常是以世界卫生组织推荐的农药危害分级标准为模板，结合本国实际情况制定。因此，各国对农药产品的毒性分级及标识的管理不完全相同。如美国的农药毒性分级，是在世界卫生组织（WHO）推荐的农药危害分级标准基础上，增加了依据农药产品对眼刺激、皮肤刺激试验结果，将剧毒和高毒两级合并为一级，并明确提出了微毒级农药（表2）。 表2 美国农药毒性分级标准

3 欧盟农药毒性分级 欧洲的农药毒性分级标准也是参照WHO推荐的分级标准制定的，并考虑产品存在的形态，但仅分为3个级别(表3)。 表3 欧盟农药毒性分级标准 注：1）本表的液体栏中包括固体的饵剂或片状农药。2）气体及液化气体栏中包括微粒直径不超过50微米的粉剂农药。 4 我国农药毒性分级标准 参考国际上的做法，我国的农药毒性分级也是以世界卫生组织（WHO）推荐的农药危害分级标准为模板，并考虑以往毒性分级的有关规定，结合我国农药生产、使用和管理的实际情况制定（表4）。 表4 农药毒性分级标准 对卫生杀虫剂的要求除了具有农林用杀虫剂的要求外，尚有更高的要求： 1、毒性要求标准高。制剂对大鼠急性经口LD50〉5000mg/kg体重，经皮LD50〉2000mg/kg体重，吸 入LC50〉10000mg/立方米（1h）；对皮肤、眼睛无明显刺激作用，无致敏作用；无遗传毒性或致突变作用，无迟发神经毒性；所以，目前卫生杀虫剂大多数为低毒级，少数为中等毒性，不用高毒，禁用剧毒； 2、在环境中经一定时间能降解，不污染环境；

鱼的急性毒性实验设计

鱼类急性毒性实验设计 一实验目的及意义本实验通过观察在不同受试物浓度处理下，鱼的急性中毒表现和经过，了解和基本掌握测定毒物的半数致死剂量/ 浓度（LD50/LC50）的方法，了解受试物剂量和生物反应的关系及计算表示方法。 通过鱼类急性毒性试验可以评价受试物对水生生物可能产生的影响，以短期暴露效应表 明受试物的毒害性。鱼类急性毒性试验不仅用于测定化学物质毒性强度、测定水体污染程度、检查废水处理的有效程度，也为制定水质标准、评价环境质量和管理废水排放提供环境依据。 二实验原理鱼类对水环境的变化反应十分灵敏，鱼类毒性试验在研究水污染及水环境质量中占重要地位。当水体中的污染物达到一定程度时，就会引起一系列中毒反应，例如行为异常、生理功能紊乱、组织细胞病变、直至死亡。在规定的条件下，使鱼接触含不同浓度受试物的水溶液，实验至少进行24h，最好以96h 为一个实验周期，在24 h、48 h ．72h、96 h 时记录实验鱼的死亡率，确定鱼类死亡50％时的受试物浓度，半数致死浓度用24h LC50、48h LC50、72h LC50和96h LC50表示，并记录无死亡的最大浓度和导致鱼类全部死亡的最小实验浓度。 本实验将经过曝气驯化的鱼（保证其初始状态一致），放入不同浓度的重铬酸钾溶液中进行96hr 的观察，记录不同浓度组6、24、48、72和96hr 的鱼的死亡率，得出剂量- 死亡率曲线，求出不同时间的LC50。 三实验材料 1）待测化学物：使用实验室剂--- 重铬酸钾溶液K2Cr2O7（Cr6+, 2000mg/L）溶液、曝气自来水）以及助溶剂（丙酮）。 2）实验动物：斑马鱼（从鱼市购买）：用曝气后的自来水驯养 3 天，补充氧气以保证溶解氧的浓度。 3）实验常用仪器设备：温度控制仪分光光度计玻璃水槽抄网（尼龙制，对照和实验容 器分用）气相色谱- 质谱联用pH 计（PHS-3B）溶解氧测定仪（JYD-1A）水硬度计温度计电子分析天平烧杯（25，50ml）移液管（1，10ml）量筒等。 四实验步骤 1、实验动物的选择。 鱼是水生生态系统的重要组成部分, 是人类主要的食物来源, 所以, 鱼类的急性毒理资料是常用的评价有毒化学物质和工业废水对水生生物危害的资料. 实验鱼类一般选择对污染物敏感，在生态类群中具有代表性，经济价值比较高，来源丰富、取材方便、遗传稳定，生物学背景资料丰富，大小适中，在室内条件下易于饲养和繁殖

鱼的急性毒性实验设计

鱼类急性毒性实验设计 一实验目的及意义 本实验通过观察在不同受试物浓度处理下，鱼的急性中毒表现和经过，了解和基本掌握 测定毒物的半数致死剂量/浓度（LD 50/LC 50 ）的方法，了解受试物剂量和生物反应的关系及计 算表示方法。 通过鱼类急性毒性试验可以评价受试物对水生生物可能产生的影响，以短期暴露效应表明受试物的毒害性。鱼类急性毒性试验不仅用于测定化学物质毒性强度、测定水体污染程度、检查废水处理的有效程度，也为制定水质标准、评价环境质量和管理废水排放提供环境依据。 二实验原理 鱼类对水环境的变化反应十分灵敏，鱼类毒性试验在研究水污染及水环境质量中占重要地位。当水体中的污染物达到一定程度时，就会引起一系列中毒反应，例如行为异常、生理功能紊乱、组织细胞病变、直至死亡。在规定的条件下，使鱼接触含不同浓度受试物的水溶液，实验至少进行24h，最好以96h为一个实验周期，在24 h、48 h．72h、96 h时记录实验鱼的死亡率，确定鱼类死亡50％时的受试物浓度，半数致死浓度用24h LC50、48h LC50、72h LC50和96h LC50表示，并记录无死亡的最大浓度和导致鱼类全部死亡的最小实验浓度。 本实验将经过曝气驯化的鱼（保证其初始状态一致），放入不同浓度的重铬酸钾溶液中进行96hr的观察，记录不同浓度组6、24、48、72和96hr的鱼的死亡率，得出剂量-死亡率曲线，求出不同时间的LC 50 。 三实验材料 1）待测化学物：使用实验室剂---重铬酸钾溶液K 2Cr 2 O 7 （Cr6+, 2000mg/L）溶液、曝气自来 水）以及助溶剂（丙酮）。 2) 实验动物：斑马鱼（从鱼市购买）：用曝气后的自来水驯养3天，补充氧气以保证溶解氧的浓度。 3）实验常用仪器设备：温度控制仪分光光度计玻璃水槽抄网（尼龙制，对照和实验容器分用）气相色谱-质谱联用 pH计(PHS-3B) 溶解氧测定仪(JYD-1A) 水硬度计温度计电子分析天平烧杯（25，50ml）移液管（1，10ml）量筒等。 四实验步骤 1、实验动物的选择。 鱼是水生生态系统的重要组成部分,是人类主要的食物来源,所以,鱼类的急性毒理资料是常用的评价有毒化学物质和工业废水对水生生物危害的资料. 实验鱼类一般选择对污染物敏感，在生态类群中具有代表性，经济价值比较高，来源丰富、取材方便、遗传稳定，生物学背景资料丰富，大小适中，在室内条件下易于饲养和繁殖的种类。 而斑马鱼是国际标准化组织(ISO)推荐的实验鱼种，其个体较小，性成熟期短，繁殖能力强，价格便宜。被广泛的应用于生命科学的研究，也是实验室标准毒理学检验最常用的实验

海洋鱼类水生态毒性试验方法与设计方案

本技术公开了一种海洋鱼类水生态毒性试验方法，包括：选择虾虎鱼作为试验的鱼类生物，在与测试水样水质条件相同的标准水中进行驯养，准备待测水样储备液，先通过虾虎鱼的急性毒性和慢性毒性预试验分别筛选浓度梯度范围，设置差距小的浓度梯度，以海水作为对照组，待测水样作为试验组，同时进行虾虎鱼的急性毒性和慢性毒性试验，记录虾虎鱼和环境的变化，对数据进行方差分析，绘制虾虎鱼死亡率曲线，结合虾虎鱼的体征情况和水体指标变化判断水质毒性；克服目前国内对于鱼类毒性试验研究较为单一，没有适用于含盐条件下的水生生态毒性测试方法的问题。 权利要求书 1.一种海洋鱼类水生态毒性试验方法，其特征在于：包括以下步骤： (1)在与待测水样水质条件相同的标准水中驯养海鱼； (2)以海水作为对照组、待测水样作为试验组，在不同毒物浓度梯度条件下进行急性毒性试验和慢性毒性试验，试验过程中海鱼禁止喂食，并保持对照组和试验组水质条件不变、鱼体大小相同，光照充足；其中： 所述急性毒性试验包括：将驯养后的海鱼装入1.5升海水的容器中，每组海鱼数量为10尾，每个毒物浓度梯度设置两组平行，采用流水式，水流流速为20mL/min，试验时间为96小时，保持温度为22-25℃、pH为7.6-8.0、溶解氧大于60％，并分别在0、24、48、72和96小时观察

并记录急性毒性试验过程中水质指标和海鱼生长指标的变化； 所述慢性毒性试验包括：将驯养后的海鱼装入800毫升海水的容器中，每组海鱼数量为10尾，每个毒物浓度梯度设置四组平行，采用半静态式，试验时间为7天，每间隔24小时分别从每个容器中取出150毫升溶液，再加入150毫升与试验开始设置浓度梯度相同浓度的溶液，分别在0、1、2、3、4、5、6和7天观察并记录所述慢性毒性试验过程中水质指标和海鱼生长指标的变化； (3)对步骤(2)中所得数据进行分析，判断水质毒性； 其中，所述海鱼包括虾虎鱼； 所述水质指标包括pH、溶解氧和温度； 所述海鱼生长指标包括存活数量、体重和体长； 所述毒物包括硫酸钠和萘。 2.如权利要求1所述的海洋鱼类水生态毒性试验方法，其特征在于，步骤(1)中，所述标准水是盐度在25‰-30‰浓度的海水。 3.如权利要求1所述的海洋鱼类水生态毒性试验方法，其特征在于，步骤(1)中，所述驯养的周期为七天，期间喂食，定期清理水中杂物，每1-2天换一次水，每次换水量控制在容器容量的1/3，试验开始前一天禁食。 4.如权利要求1所述的海洋鱼类水生态毒性试验方法，其特征在于，步骤(2)中，所述急性毒性试验中，萘的浓度梯度为0μg/L、20μg/L、3 5.6μg/L、63.37μg/L、112.8μg/L、200μg/L，硫酸钠的浓度梯度为0g/L、3g/L、4.23g/L、5.96g/L、8.41g/L、12g/L。 5.如权利要求1所述的海洋鱼类水生态毒性试验方法，其特征在于，步骤(2)中，所述慢性毒性试验中，萘的浓度梯度为0μg/L、20μg/L、40μg/L、60μg/L、80μg/L、100μg/L，硫酸钠的浓

毒理学实验一 鱼的急性毒性试验

08100049 毒理学实验一、鱼的急性毒性实验 背景知识 急性毒性实验的主要目的是确定化学物质的毒性程度、剂量―反应关系，根据待测化学物质与其它已知毒性化学物质的相对毒性,推定具体的理化性质，测定其急性毒作用,以及提供毒作用模型方面的资料。此外,这种研究也能指出化学物质可能的靶器官及其特异性毒作用,并对亚慢性毒性试验研究中所用剂量提供指南。外源化合物的毒作用往往通过某一染毒 持续时间的半致死量/浓度 (LD 50/LC 50 ), 或化学物质在空气中某一染毒浓度的半致死时间 (LT 50)，或用半数效应量 (ED 50 或 (EC 50 ) 来估计表示（注：化学物质在水中浓度对水生生 物如无脊椎动物、鱼虾的死亡不易鉴别时使用）。水生生物的急性毒性试验广泛应用于水域环境污染监测工作中, 对控制工业废水的排放，保护水域环境，制定水质标准，发展水产品的生产，具有重大意义。 受试生物的急性实验有下列四种方式进行暴露试验即静态、循环、更新、动态, 但最常用的方法是静态与动态方法。可提供下列的观测指标：①估计产生毒性作用的上限浓度，②估计不同种的水生生物对受试物的相对敏感性，③估计大量受试物的相对毒性，④估计水质对受试物毒性的影响(pH、溶解氧、盐度、硬度、悬浮物)。⑤得出浓度―反应关系曲线及暴露时间的意义,动态实验可提高保持令人满意的实验条件的能力, 而且没有时间的限制。因此它能给出暴露时间―反应关系比较完美的估计。水生生物的急性毒性的实验应当设计成为能得到计数标准的反应(有或无,生与死)，受试污染物浓度与暴露生物中受影响生物的百分比之间的关系，可画出浓度―死亡率曲线。急性实验结果可表示每一实验浓度中死亡或不 动生物的百分比; 从观察内插法或计算中得出 LC 50，或 EC 50 及相应的 95% 的置信区间。 实验目的 本实验通过观察在不同受试物浓度处理下，鱼的急性中毒表现和经过，了解和基本掌握 测定毒物的半数致死剂量/浓度（LD 50/LC 50 ）的方法，了解受试物剂量和生物反应的关系及 计算表示方法。 实验原理 鱼类对水环境的变化反应十分灵敏，鱼类毒性试验在研究水污染及水环境质量中占重要地位。当水体中的污染物达到一定程度时，就会引起一系列中毒反应，例如行为异常、生理功能紊乱、组织细胞病变、直至死亡。在规定的条件下，使鱼接触含不同浓度受试物的水溶液，实验至少进行24h，最好以96h为一个实验周期，在24 h、48 h．72h、96 h时记录实验鱼的死亡率，确定鱼类死亡50％时的受试物浓度。本实验将经过曝气驯化的鱼（保证其初始状态一致），放入不同浓度的重铬酸钾溶液中进行96hr的观察，记录不同浓度组6、24、48、72和96hr的鱼的死亡率，得出剂量-死亡率曲线，求出不同时间的LC 50 。 通过鱼类急性毒性试验可以评价受试物对水生生物可能产生的影响，以短期暴露效应表明受试物的毒害性。鱼类急性毒性试验不仅用于测定化学物质毒性强度、测定水体污染程度、检查废水处理的有效程度，也为制定水质标准、评价环境质量和管理废水排放提供环境依据。 实验材料与方法 1. 实验材料： 1）待测化学物：使用实验室剂---重铬酸钾溶液K 2Cr 2 O 7 （Cr6+, 2000mg/L）溶液。配制一