植物病原线虫的分离方法及形态观察实验

植物病原线虫的分离

一、目的要求

了解从土壤和植物组织中分离线虫的基本原理，掌握从土壤和植物组织中分离线虫的常用方法。学习在解剖镜或扩大镜下用镊子、竹针、毛针、毛笔等工具从水中和滤纸上挑取线虫的方法。

二、基本原理

植物寄生线虫主要存在于土壤和植物组织中，分离线虫的方法有许多，要根据线虫的种类、研究目的等来选择适宜的方法。植物寄生线虫的个体很小，除极少数可从植物组织中直接挑出以外，绝大多数需借助特定的工具和方法才能完成。线虫的分离主要是利用它的趋水性、大小、比重以及与其他杂质的差异，采用过筛、离心、漂浮等措施，将线虫从植物组织、土壤中分离出来。

三、材料、试剂与仪器

1．实验材料感染根结线虫病的植物病根、病土、感染大豆孢囊线虫或其它孢囊线虫的病土、感染甘薯茎线虫的病薯块等。

2．仪器或实验用具解剖镜、漏斗分离装置、漂浮分离装置、浅盘分离装置、纱布或铜纱、记数皿或平皿、小烧杯、小玻管、旋盖玻璃瓶、40目和325目网筛、线虫滤纸、餐巾纸、挑针、竹针、毛针、毛笔等。

3．试剂线虫固定液。

四、实验操作

1．直接观察分离

对于个体较大的线虫如根结线虫、孢囊线虫、粒线虫的雌虫等，可直接用挑针从植物组织中挑取，也可在解剖镜或扩大镜观察下直接挑取，对于虫体稍小的线虫如茎线虫、粒线虫的雄虫和幼虫等，需在解剖镜下，用竹针或毛针直接挑取。

取感染根结线虫的植物病根材料（若是干材料需用水浸泡过夜），剥开皮层，观察里面是否有针头大小、乳白色发亮的颗粒状物。用挑针挑取，置凹玻片上水滴中，在解剖镜或显微镜下观察是否为根结线虫雌虫。

2．漏斗分离法

该方法操作简单，是目前从植物材料中分离线虫较好的方法。其装置是将直径10~ 15cm 的玻璃漏斗架在铁架上，下面接一段约10 cm 的橡皮管，橡皮管上装一个弹簧夹。

（1）将植物材料切碎用双层纱布包好，浸在盛满清水的漏斗中，或在漏斗内衬放一个用细铜纱制成的漏斗状网筛，将植物材料直接放在网筛中，分离土壤线虫时需在网筛上放一层纱布或多孔疏松的纸，上面加一层土样。

（2）加水，静止24h。

提示由于趋水性和自身的重量，线虫就离开植物组织或土壤，沉降到漏斗底部的橡皮管中。

（3）打开弹簧夹，慢慢放出底部约5 ml水样于平皿内。

（4）在解剖镜下观察分离到的线虫。若线虫数量太少，可将水样倒入离心管中，在1500rpm 离心机中离心3 min，倒掉上层清水，将下层沉淀物悬浮后倒入平皿或记数皿中，在解剖镜下观察记数，然后将线虫用毛针或毛笔挑入盛有固定液的小玻璃管中备用。

提示该方法也可用于分离土壤中的线虫，尤其是分离较为活跃的线虫。

3．培育分离法

对于用漏斗分离法不易分离到的线虫，如根结线虫和孢囊线虫的雄性成虫等，可采用培育分离法。

将病根采回后洗去表面土粒，放在培养皿中湿润的滤纸上培育3d，用少量清水冲洗组织和皿底，检查水中线虫。或将组织放在有螺旋盖的玻瓶中，加入几毫升清水，盖不要旋紧，在室温（20~ 25℃）下培育3d，然后加50 ml清水，盖紧盖子并轻轻振荡，后倒出悬浮液使其顺序通过40目和325目网筛，用小水流轻轻冲洗325目网筛背面，收集到记数皿或烧杯中，直接检查或离心后检查。

提示从土壤中得到病根后要马上冲洗和培育，因为24h后，有50%的线虫会从根里爬出，冲洗时便被冲掉了。

4．浅盘分离法

该方法原理与漏斗分离法一样，但分离效果更好，而且泥沙等杂物较少。用两个不锈钢浅盘套放在一起，上面一个是筛盘，它的底部是筛网，网目大小为10目/英寸，下面一个是稍大的盛水盘。也可在培养皿上放置一个稍小的做成浅盘状的金属网，网与培养皿底部保持一定距离。

分离时将线虫滤纸放在网上用水淋湿，上面再放一层餐巾纸，将要分离的土样或植物材料放在餐巾纸上，在两盘之间缝隙中加水，淹没土样或植物材料，在室温（20~ 25℃）下保持3d，去掉筛网后，将下面浅盘中的水样过筛（上层为25目，下层为400目），将下层筛上的线虫用小水流冲洗到记数皿中，观察记数。

5．漂浮器分离法

对于没有活动能力的孢囊线虫的孢囊可采用漂浮器分离法（Fenwick-Oostenbrink改良漂浮法），该法需要特制的分离装置。分离时先将漂浮筒内盛满清水，将100g 风干的土样放在上筛中，用强水流冲洗土样，使其全部洗到漂浮筒内，并从环颈水槽流到承接的细筛（100目）中，再用细水流冲洗一会，使漂浮物全部流入细筛。将细筛中的孢囊等漂浮物用水洗入烧杯或三角瓶中，再倒入铺有滤纸的漏斗中，用毛笔收集并观察滤纸上的孢囊。

提示漂浮分离的土样必须要风干，否则孢囊不能在水中漂浮，需用比重小于1的溶剂。

五、所需时间流程

1．漏斗分离样品浸泡放出水浸液、离心镜检

2．培育分离样品培育过筛、收集、镜检

3．浅盘分离样品浸泡样过筛、收入记数皿、镜检

4．漂浮分离10 min左右。

六、实验作业

比较各种线虫分离方法的优缺点。

一、目的和要求

识别主要植物线虫病的症状和病原线虫的形态特征。包括雌雄同型及异型线虫.

二、材料和用具

草莓芽干尖线虫（Aphelenchoides besseyi）或珠蓝线虫；小麦粒线虫（Anguina tritici），破坏性茎线虫（Ditylenchus destructor），寄主甘薯，南方根结线虫（Meleidogyne arenaria），寄主花生等；大豆胞囊线虫（Heterodera glycines）；长针线虫(Longidorus sp.）；毛刺线虫（Trichodorus sp.）。

寄生性线虫病的危害状标本或幻灯片。

线虫的固定液有多种，常用的有FA、FAA和TAF等三种：

（1）FA液：福尔马林（36％甲醛）10ml，蒸馏水90ml；

（2）FAA液：福尔马林10ml，冰醋酸1ml，蒸馏水89ml，

（3）TAF液：三羟基乙胺2mi，福尔马林7m1，蒸馏水91ml。

三、内容与方法

1 线虫形态的观察

（1）粒线虫属（Anguina）观察由小麦粒线虫危害小麦引起的症状，注意小麦受害部位，受害的茎叶有无扭曲或畸形？虫瘿的外形与麦粒有什么区别？

取虫瘿一个，用刀片切开或挑针挑破，挑取虫瘿内部的白色棉絮状物于载玻片上的水滴中盖上盖玻片，置于低倍镜下镜检，可见到成虫、卵和幼虫。雌虫、雄虫均为线形，雌虫体形较雄虫粗大，往往卷曲，体内的卵巢顶端弯曲。雄虫昆部有交合刺，交合伞几乎包到尾尖。（2）茎线虫属（Ditylenchus）

观察甘薯茎线虫（D．destructor）危害甘薯的症状，剖开病薯可见到条点状褐色或白粉干腐症状，挑取少量组织于载玻片的水滴中，加盖玻片镜检，可见到卵、幼虫、成虫等各个虫态。甘薯茎线虫雌雄同型，都是线形，雌虫稍粗大，尾端尖细。注意口针、食道球形态，肠和卵巢平行，单卵巢，卵单行排列。雄虫较细小，尾部可见交合刺、交合伞，交合伞后端距虫体末端有一定间隔。因虫体很小，观察内部器官需用高倍镜。观察示范镜下的雄虫尾部形态。

（3）滑刃线虫属（Aphelenchoides）有各种危害状，例如水稻(Rice)干尖线虫（A．besseyi）引起水稻(Rice)干尖线虫病，以剑叶的干尖最明显，剑叶尖端2－6厘米一段变为白色。干枯卷缩，幼穗形成时线虫侵入颖壳内，引起秕粒或不很充实；菊叶线虫（A.ritzemabosi）为害菊的叶片，使叶片组织坏死。

镜检水稻(Rice)干尖线虫或珠蓝线虫，观察口针、食道球的形态特征、雄虫尾部的交合刺，有无交合伞？

（4）胞囊线虫属（Heterodera）观察大豆胞囊线虫（H．glycines）的危害症状。

挑取病根上的雌虫，肉眼可见到线虫头部已钻入寄主组织，虫体外露，多为柠檬形，黄褐色。

制片镜检，大豆胞囊线虫的卵大多不排出体外，整个雌虫体后期变成颜色深褐的卵囊，特称为胞囊（少数可排部分卵于体尾的胶质囊内）。

（5）根结线虫属（Meloidogyne）观察蔬菜根结线虫（M．spp．）或花生、茄科植物根结线虫危害症状，镜检观察雌虫虫体形态。根结线虫属分种的主要依据是：会阴花纹的形态特征，胞囊线虫分种是根据阴门椎周围的形态特征加以区别的。

（6）外寄生线虫这类线虫只有取食时才将口针穿刺到寄主植物的体内，虫体外露，平时生活于土壤中。由于取食与栖息不在一处，它们经常往返于土壤与植物根系之间，而且取食的植株不固定，一条线虫可以危害多株植物。在它们转移危害时，线虫往往成为其它病害的传播介体，例如烟草环斑病毒（TRSV）就是通过线虫传播的。

剑线虫属（Xiphinema）：齿针很长，基部球大为瘤状，导环位置低。

长针线虫属（Longidorus）：齿针很长，基部球不大，导环位置高。

毛刺线虫属（Trichodorus）：瘤针弯曲，基部渐粗，形似毛刺。

在示范镜下观察比较外寄生线虫头部及口针部的形态特征。

2 线虫的杀死、固定和线虫死活的鉴别线虫活体的形态特征是线虫工作者初步区分线虫种类的一个重要指标，但是要进一步区分和鉴别它们，必须经过杀死、固定以后才能作仔细的分辨，有的还要经过局部加工处理，使特征部位显示出来才能确定。因此，杀死并很好地固定线虫十分重要，否则就不能将线虫标本很好地保存下来。

2．1 线虫的杀死少量线虫的杀死是用毛针或竹针将线虫挑放在有水滴的载玻片上，水滴部分在酒精灯火焰上来回移动3-4次，使水滴温度升高，当弯曲的线虫突然伸直时立即停止加热，此时虫体已被杀。

大量线虫的杀死是将线虫放在表面皿或小玻皿中，加入等量的沸水；也可将盛有线虫液的玻管直接浸入60-65水浴中浸2－3分钟，不断振摇使加热均匀，当线虫僵直时停止加热。2．2线虫的固定与保存杀死后的线虫用毛针移放到FAA或TAF固定液中，操作要在解剖镜下完成。福尔马林液可使虫体硬化，不腐败；乙酸则使角质膜膨胀，但乙醇可使表皮皱缩变形。标本在FAA液中不宜保存太久，在TAF液中则可长期保存。

线虫在固定过程中要逐步更换固定液，通常是每隔3－4小时即吸去表层液，约1／2的容积，并加进新的固定液，连续换液3-4次后即可长期保存。

2．3线虫死活的鉴别方法从土壤或种苗材料中分离得到的线虫，有时都不活动，对于它们是否存活需作鉴定，这在药剂处理试验中最为重要。

（1）高锰酸钾染色法：在凹玻片上加一滴0．5-1%的KMnO4液，然后挑放数条线虫在溶液中，经1—2分钟后在显微镜下观察，死线虫已染成棕红色，活虫不易染色。

（2）盐水实验：试蕴：将线虫挑放到凹玻片上的2－5％NaC1液中，经3－5分钟后在显微镜下观察，死虫无反应，活虫则卷曲或活动剧烈。

四、作业与思考题

绘小麦粒线虫雌虫、雄虫体形图，注意交合刺、交合伞。绘滑刃线虫雄虫尾部图，注意有无交合伞？

（1）植物寄生线虫的致病特点是什么？

（2）根结线虫和胞囊线虫为害根部时，症状有何不同？

（3）哪一种方法鉴别线虫死活简便？

植物病原线虫及其所致病害症状观察

一、目的

线虫是一种低等无脊椎动物，在自然界中分布广泛、种类繁多、形态各异；寄生在植物上的线虫，从某些种类和造成的经济损失上看，仅次于真菌、细菌和病毒，而且常与其它病原物一起造成复合侵染。植物受线虫危害后表现的症状与一般的病害症状相似，因此称为线虫病。近年来，线虫病害发生日趋严重，所以线虫的研究愈来愈受到人们的重视。

本实验的目的是熟悉植物病原线虫的基本形态及其所致病害的症状特点，以及学习分离和鉴定主要植物病原线虫的方法。

二、内容、材料和方法

(一)植物线虫病害症状类型观察

植物受线虫为害后，除和真菌、细菌、病毒等病原物引起的相似症状，也有其特有症状与之相区别，线虫多在地下活动，根部受害比较多见，根部受害的症状，有的根生长点受破坏而停止生长或卷曲，有的根上形成瘤肿或过度分枝而形成发根或须根团；植物根部受害后，地上部生长受到影响而表现植株矮缩，色泽失常和早衰，严重时整株枯死；植株地上部的症状，有顶芽和花芽坏死，茎叶卷曲或组织坏死，形成叶瘿或种瘿等。

植物病原线虫不同属所致症状也有一定的区别，根结线虫属(Meloidogyne)和胞囊线虫属(异皮线虫属Heterodera)所致病害地上部一般无特异症状，仅表现生长不良、植株萎黄，地下部须根明显增多，往往形成须根团；根结线虫刺激根部肿胀形成根结，而胞囊线虫则不形成根结，但可直接看见附着根侧的雌虫体；粒线虫属(Anguina)为害地上部分，使茎叶扭曲，穗部变形，籽粒变为虫瘿；茎线虫属(Ditylenchus)主要为害地下部分，使块根、块茎、鳞茎呈干腐状或湿腐状，地上只略见茎叶呈波状卷曲、发育迟缓等；而滑刃线虫属(Aphelenchoides)为害叶片和芽而引起局部干枯坏死等。

观察下列线虫标本，注意症状特点：

1小麦粒线虫病(Anguina tritici)；

2甘薯茎线虫病(Ditylenchus dipsaci)；

3水稻干尖线虫病

(Aphelenchoides besseyi)；

4花生根结线虫病

(Meloidogyne incognita)；

5大豆胞囊线虫病

(Heterodera glycines)；

6甘薯根结线虫病

(M.schachtii)

(二)分类及主要属形态

观察

关于线虫分类地位，以

前放在线形动物门(Nematelminthes)的线虫纲(Nematoda)中，但多数学者主张单设线虫门(Nemata)，这种观点已被接纳。根据线虫尾部侧面感觉孔——侧尾腺口的有无，线虫纲分为侧尾腺口纲(Secernentea)和无侧尾腺口纲(Adenophorea)两个纲，植物寄生线虫绝大多数在侧尾腺口纲中，其中主要是垫刃目(Tylenchida)的线虫对植物有致病性，特别是该目中垫刃总科(Tylenchoidea)和滑刃总科(Aphelenchoidea)中的一些线虫，以下学习五个重要属。

1粒线虫属(Anguina)(粒科Anguinidae)

切取浸泡的小麦粒线虫病虫瘿制片镜检，注意观察虫体形态，雌成虫虫体呈肥胖卷曲状。颈部缢缩，肛门孔退化，雄成虫虫体细长，略弯，交合伞包至尾尖。

2 茎线虫属(Ditylenchus)( 粒科Anguinidae)

挑取甘薯茎线虫病病组织制片镜检雌雄虫体形态，注意雌虫阴门位置，雄虫交合伞不包至尾尖，交合

刺基部变宽，并有突起等特点。

3胞囊线虫属(Heterodera)(异皮科Heteroderidae)

取漂浮器分离到大豆胞囊线虫的胞囊在解剖镜下观察形状，颜色，区分头尾部，然后在低倍显微镜下压破胞囊(或取制备片)镜检卵或二龄幼虫的形态。

4根结线虫属(Meloidogyne)(异皮科Heteroderidae)

镜检花生根结线虫制备片，注意雌雄成虫的形态和胞囊线虫属有何不同? 虫卵产于何处?

5滑刃线虫属(Aphelenchoides)(滑刃科Aphelenchoidae)

镜检水稻干尖线虫制备片，注意观察雄虫尾端弯曲成镰刀形尾尖有4个突起，雌虫尾端不弯曲等特点。

(三)线虫分离技术示范

1 贝曼漏斗分离法——植物材料和土壤中能游动的活线虫。

材料：甘薯茎线虫病组织。

2 淘洗过筛分离法——土壤中胞囊线虫分离

材料：发生在大豆胞囊线虫病的大豆田土壤。

3 离心漂浮分离法——土壤中的小型线虫和异皮科线虫的幼虫

材料：植物根际土壤。

方法：见刘维志(2000)编《植物线虫学研究技术》。

三、作业

绘小麦粒线虫和大豆胞囊线虫形态图。

四、思考题

1植物寄生线虫为害植物可引起些什么特殊的症状? 为什么将植物寄生线虫当作重要的病原生物看

待?

2植物病原线虫包括那些重要类群? 这些类群是怎样划分的?

参考书目

1 方中达，1979，植物研究方法，农业出版社

2 方中达编著，1998，植病研究法（第三版），北京：中国农业出版社

3 傅俊范，段玉玺，宋佐衡，沈阳农业大学植保系植物病理教研室,1997, 普通植物病理学实验指导

4 刘维志主编，1995，植物线虫学研究技术，辽宁：辽宁科学技术出版社

5 刘维志主编，2000，植物病原线虫学，北京：中国农业出版社

6 陆家云主编，1997，植物病害诊断（第二版），北京：中国农业出版社。

7 陆家云主编，2001，植物病原真菌学，北京：中国农业出版社

8 沈阳农学院植保系植病教研室，普通植物病理学实验指导书，全国中专师训班用

9 沈阳农学院植物病理教研室，1980，普通植物病理学实验指导

10 王金生主编，2000，植物病原细菌学，北京：中国农业出版社

11 魏景超，1979，真菌鉴定手册，上海：上海科学技术出版社

12 许志刚主编，1997，普通植物病理学（第二版），北京：中国农业出版社

植物线虫病害及防治

植物线虫病害及防治 1、什么是植物寄生线虫？它是什么样子？ 线虫又称蠕虫，是一类较低等的动物，它们在自然界分布很广，种类繁多。在淡水、海水、池沼、沙漠和各种土壤中都有存在，而其中最大量是存活于土壤及水中；也有不少类群寄生在动物上，如常见的蛔虫、钩虫等，对人畜的健康带来很大的危害；还有一些类群寄生在植物上，引起植物发生病害，这些寄生在植物上的线虫、就称为植物寄生线虫。植物寄生线虫是植物侵染性的病原之一，它们广泛寄生在各种植物的根、茎、叶、花、芽和种实上，使植物发生各种线虫病。 植物寄生线虫绝大多数为雌雄同形，即雌雄虫均呈线状，细长透明，虫体很小。一般体长仅1毫米，体宽0.05毫米左右，要借助解剖显微镜才能看清。这类线虫的种类和数量都很多，分布又广泛，凡是有土壤和水的地方都有可能存在。还有少数植物线虫是雌雄不同形状的，雌虫呈梨形、球形或囊状，而雄虫仍呈线状。最常见的如根结线虫、胞囊线虫、肾状线虫等，它们都是最重要的病原线虫。 由于线虫是一种低等动物，虽然个体细小，但肝胆俱全。所以，线虫虫体内部构造既简单又全面，它有发达的消化系统和生殖系统，这样才能从植物体内吸取它所需要的营养，以使自己顺利生长发育和繁衍大量后代，才能生存于自然界中。但神经系统和排泄系统就很简单了，一般要在高倍显微镜下才能看清楚这些内部结构。 2、植物线虫怎样为害植物？有什么危害性？ 植物线虫和其它植物的病原不同之处在于它有主动侵袭寄主和自行移动为害的特点，它们对植物为害，除吸取寄主的营养和对植物组织造成机械损伤外，主要在于植物线虫的食道腺可分泌有毒物质，这些物质是多种消化酶，诱发寄主组织发生各种病理变化，可使植物组织细胞发育过度，形成巨型细胞，或使细胞中胶层溶解引起细胞分解，细胞壁被破坏，造成根部和皮层形成空洞及细胞死亡。 最常见的是植物细胞体积膨大，最典型的就是根结线虫为害植物后所形成的巨型细胞，结果在根上可形成大小不等的瘤叫“根结”；又如穿孔线虫为害柑桔后，使细胞壁分解，结果被害根部的皮层形成典型的空洞，最后导致根腐烂；也有的线虫分泌物则表现强烈的抑制作用，使根停止生长，植物生长受到抑制而表现矮化。以上表现，说明植物线虫分泌物的化学作用能对植物细胞及组织产生的影响，最终使植物生长衰弱，产量降低，品质变劣，甚至死亡。 此外，有的线虫可以传播病毒，而使植物发生某种病毒病，这样，增加和扩大了病毒病的发生，这种危害性也是相当大的。同时，线虫还与其他病原如真菌、细菌互相作用，共同致病，造成复合病害，加重病害的发生。所以，线虫与农业生产关系密切，应引起人们的注意和重视。

植物病原线虫学思考题

植物病原线虫学复习题 一. 填空 1线虫的胚胎发育过程大致可分为、、、四个阶段。 2植物线虫生长发育的过程可分为、和。 3影响线虫孵化的环境因素主要有、和。 4一般线虫的食道可分为4部分，包括、、和。 5线虫分类中纲的划分是以为判别依据。 6雄虫的肛门与共同开口于。 7植物线虫分类鉴定的依据主要包括、、、 和五方面。 8目前植物寄生线虫主要归属于、、和这四大类中。 9线虫的体壁具有性、性和性。 10在线虫背索、腹索内有，侧索内有。 11目前根结线虫（Meloidogyne spp.）共已描述90多种，其中、、、是最常见的根结线虫。 12在引起植物侵染性病害的五大病原中，植物寄生线虫的危害超过和，仅次于真菌病害。 13植物线虫引起的根部症状主要有、、、、五类。 14 1743年，英国T. Needham发现的是最早被发现的植物病原线虫。 15 1943年，美国W. Carter发明杀线虫剂，该项研究奠定了植物线虫化学防治 的基础。 16线虫学研究的代表性期刊杂志有《》、《》、《》等。 17植物病原线虫绝大多数为雌雄同形，呈线状，如、等。少数植物线虫是雌雄异形的，雄虫呈线状，而雌虫呈梨形、球形或囊状，如、等18线虫只有肌而无肌，虫体只能弯曲而不能变粗或变细，只能借助腹肌和背肌的同时收缩，向前呈波浪状蠕动。 19线虫的口针基本上由3部分组成，前端尖锐部分为，中段为，后部为3个膨大的；而齿针分为两部分，包括前段的部和后段的部，在锥体部和膨大部之间有。 20在线虫的食道与肠交界处的瓣膜结构称为，其功能是。 二. 名词解释 1）植物病原线虫 2）植物线虫分类学3）孤雌生殖4）迁徙性外寄生5）线虫的老化 6）假受精生殖7）蜕皮8）植物病原线虫9）过敏性坏死反应10）植物线虫病害防治 三. 简答 1.植物线虫形态分类中雌虫的特征依据有哪些？ 2.根结属鉴定中的主要形态特征有哪些？

几种昆虫病原线虫对大蜡螟幼虫血淋巴及其能源物质含量的影响[1]

几种昆虫病原线虫对大蜡螟幼虫血淋巴及 其能源物质含量的影响 丁晓帆,林茂松3 ,刘亮山 (南京农业大学农业部病虫监测与治理重点开放实验室,江苏南京210095) 摘要:用异小杆线虫(Heterorhabditis s pp.)和斯氏线虫(S teinerne m a s pp.)处理大蜡螟5龄幼虫。结果显示:处理后 12h 昆虫血细胞开始变形、崩解,且血细胞数量急剧下降,到昆虫接近死亡时(24～32h 左右),血细胞数比正常水平 下降85%;处理后24h 血淋巴总量下降73161%,酯酶活性不断增强,蛋白含量明显高于对照,总糖含量降低14%～ 70%。上述结果表明:昆虫病原线虫的侵入破坏了寄主的防御系统,改变了寄主血淋巴能源物质含量。 关键词:昆虫病原线虫;大蜡螟;血淋巴;酯酶活性;蛋白质;总糖 中图分类号:S43211 文献标识码:A 文章编号:10002030(2005)03004305 Effects of ento mopathogen i c ne matodes on energeti c contents i n he moly mph of Ga lleria m ellonella D I N G Xiao 2fan,L I N Mao 2s ong 3 ,L I U L iang 2shan (Key Laborat ory of Monit oring and Manage ment of Plant D iseases and I nsects,M inistry of Agriculture, Nanjing Agricultural University,Nanjing 210095,China ) Abstract:Effects of 5s pecies of ent omopathogenic ne mat odes (Heterorhabditis s pp.and S teinerne m a s pp.)on the energetic con 2tents in he moly mph of 5th larvae of Galleria m ellonella was p resented . I n all the s pecies the nu mber of he mocytes decreased by over 85%and he mocyte shape was obvi ously changed 24hours after treat m ent .The t otal volu me of he moly mph of 5th larvae infected with ne mat odes decreased by 73161%,while esterase activity and content of p r otein increased .The decrease rate of t otal carbohy 2 drate content was 14%70%. The results revealed that the ent omopathogenic ne mat odes destr oyed the host i m mune system and dra matically changed the content of energy s ource in the hemoly mph of the host . Key words:ent omopathogenic ne mat odes;Galleria m ellonella ;he moly mph;esterase activity;p r otein;t otal carbohydrate 昆虫病原线虫(ent omopathogenic ne mat ode )是昆虫专化性寄生性天敌,一般指斯氏线虫科(Stein 2 erne matidae )和异小杆线虫科(Heter orhabdidae )种类[1] 。目前,国外学者主要集中于昆虫病原线虫行 为学、病原线虫共生菌代谢产物资源开发、病原线虫生物防治推广应用等研究[2～5] ;国内学者主要开展生物防治研究,应用昆虫病原线虫防治农、林、牧、卫生等害虫,并取得了明显的经济效益和社会效益[6,7];而有关病原线虫感染寄主昆虫的病理学研究较少。肖猛[8]研究表明,昆虫病原线虫明显改变寄主昆虫血淋巴中蛋白含量、血糖含量和酯酶活性。为利用昆虫病原线虫防治害虫提供更多的基础理论,笔者用国外引进的5种昆虫病原线虫处理大蜡螟(Galleria m ellonella )5龄幼虫,观察、检测其对昆虫血淋巴中血细胞和各种能源物质的影响,进一步探讨昆虫病原线虫的杀虫机制。 1　材料与方法 111　供试线虫与昆虫 病原线虫:异小杆线虫Heterorhabditis bacteriophora (缩略为Hb,来自加拿大)和H.m egid is (Hm ,比利时);斯氏线虫S teinerne m a carpocapsae (Sc,比利时)、S.feltiae (Sf,比利时)和S.glaseri (Sg,美国)。 线虫均由大蜡螟老熟幼虫培养、繁殖。试验用的感染期线虫均新鲜培养,并用012%(体积分数) 收稿日期:20041123 作者简介:丁晓帆(1979),硕士研究生。3通讯作者Corres ponding author:林茂松(1948),教授,从事植物病原线虫学研究, E 2mail:linm s@njau 1edu 1cn 。 　 南京农业大学学报　2005,28(3):43～47Journal of N anjing A gricultural U niversity

常见病原菌采样分离过程

金黄色葡萄球菌采样分离过程 1、样本采集及初步分离 （1）奶样的采集： 采集有乳房炎和隐形乳房炎症状较明显的奶牛，消毒挤奶人手、奶牛乳头，弃2-3把乳，以乳样收集管无菌收集每个乳区乳样10-30mL，编好编号，4个乳区按：左前LF、左后LH、右前RF、右后RH编号，采集后尽快返回实验室，如不能尽快返回，应放在低温环境中带回。 （2）乳房皮肤拭子 用0.5mL肉汤润湿的消毒棉球拭子从乳房皮肤檫拭到乳头顶端，如果乳房土较多的话先檫掉土。拭子放入5mL离心管中，再放入冰盒中，迅速带回实验室处理。 （3）鼻腔拭子 用消毒棉球拭子插入动物鼻腔中，取出后放到盛有0.5mL肉汤的5mL离心管中，放入冰盒中，迅速带回实验室处理。 菌种的初步分离 首次分离时，用接种环蘸取样品在科玛嘉金黄色葡萄球菌显色平板上涂布接种，37℃，16-18小时培养后，从显色平板上挑取红色的单菌落，用脑心浸液（BHI）肉汤35℃培养18小时左右。 需要注意的是金葡菌初次分离时，接种显色培养基后培养时间最好不超过18h进行观察，因为超过24h后所有的葡萄球菌属细菌皆会导致显色培养基变色，进而出现假阳性。 2、菌种的保存 2mL灭菌离心管中加入400μL新鲜菌液+200μL60%灭菌甘油，-80 ℃（长期）或-20 ℃（临时）冻存。 3、菌种的复苏 如需再次纯化，或进行进一步实验，可将甘油保种的菌液在显色平板或哥伦比亚血琼脂平板上划线培养，或者将保种的菌液直接接入液体培养基培养。 肠球菌采样分离过程 1、样本采集及初步分离 （1）肛门拭子 以灭菌长棉签采集猪肛门拭子或蘸取新鲜粪便，棉拭子应以捻转方式插入肛门4-5厘米深，取出后放入1mL营养肉汤的灭菌离心管中，如不能立即接种，应放于低温环境中迅速带回实验室处理。 （2）泄殖腔拭子 以灭菌短棉签采集鸡泄殖腔拭子或采集一段盲肠后蘸取新鲜粪便，棉拭子应以捻转方式插入泄殖腔2-3厘米深，取出后放入1mL营养肉汤的灭菌离心管中，如不能立即接种，应放于低温环境中迅速带回实验室处理。 首次分离时，将样品在6.5%NaCl营养肉汤中，45℃，18-24小时预增菌进行选择性培养后，将上述培养物以划线方式接种在肠球菌选择性培养基（叠氮钠-结晶紫-七叶苷培养基，BEA）上，37℃，培养18-24小时，从选择性培养基上挑取灰色，半透明，1-2mm大小的单菌落，用脑心浸液（BHI）肉汤37℃培养18小时左右。 2、菌种的保存 2mL灭菌离心管中加入400μL新鲜菌液+200μL60%灭菌甘油，-80 ℃（长期）或-20 ℃（临时）冻存。 3、菌种的复苏 如需再次纯化，或进行进一步实验，可将甘油保种的菌液在BEA琼脂平板上划线培养，或者将保种的菌液直接接入液体培养基培养。 需要注意的是由于BEA琼脂颜色的变化导致假阳性的发生，因此，可以将肠球菌疑似菌株在BEA琼脂上进行二次筛选，提高分离准确率。

绿化常用水生植物

常用水生植物 1、千屈菜 形态特征：多年生草本，根茎横卧于地下，粗壮；茎直立，多分枝，高30-10 0厘米，全株青绿色，略被粗毛或密被绒毛，枝通常具4棱。叶对生或三叶轮生，披针形或阔披针形，长4-6(-10)厘米，宽8-15毫米，顶端钝形或短尖，基部圆形或心形，有时略抱茎，全缘，无柄。 花组成小聚伞花序，簇生，因花梗及总梗极短，因此花枝全形似一大型穗状花序；苞片阔披针形至三角状卵形，长5-12毫米；萼筒长5-8毫米，有纵棱12条，稍被粗毛，裂片6，三角形；附属体针状，直立，长1.5-2毫米；花瓣6，红紫色或淡紫色，倒披针状长椭圆形，基部楔形，长7-8毫米，着生于萼筒上部，有短爪，稍皱缩；雄蕊12，6长6短，伸出萼筒之外；子房2室，花柱长短不一。蒴果扁圆形。 生长习性：生于河岸、湖畔、溪沟边和潮湿草地。喜强光，耐寒性强，喜水湿，对土壤要求不严，在深厚、富含腐殖质的土壤上生长更好。

2、鸢尾 形态特征：常绿水生鸢尾属多年生常绿草本，系由六角果鸢尾（I.Hexag）、高大鸢尾(I.giganticae)、短茎鸢尾（I.brevuilei）等杂交选育而成，根状茎横生肉质状，叶基生密集，宽约2厘米，长40至60厘米，平行脉，厚革质； 花葶直立坚挺高出叶丛，可达60至100厘米，花被片6，花色有紫红、大红、粉红、深蓝、白等，花直径16至18厘米左右。 生长习性：常绿水生鸢尾喜光照充足的环境，能常年生长在20厘米水位以上的浅水中，可作水生植物、湿地植物或旱地花境材料。常绿水生鸢尾特别适应冷凉性气候，据江苏盐城表现看该品种在-9℃的低温条件下，能保持常绿且进行分蘖；在长江流域一带，该品种11月至翌年3月分蘖，4月份孕蕾并抽生花葶，5月份开花，花期为20天左右，夏季高温期间停止生长，略显黄绿色，在35℃以上进入半休眠状态，抗高温能力较弱。 值得注意的是，常绿水生鸢尾为杂交品种，很少结籽或不结籽，故生产上常用分株或组培的方法繁殖。 常绿水生鸢尾的叶形、株形、习性与其他水生类鸢尾相似，在黄菖蒲、玉婵花、溪荪等水生植物的应用范围内均可种植，但该品种因其叶厚革质不易下垂、冬季翠绿且花色丰富，其他鸢尾类植物只能望其项背。

植物线虫考试复习题

一、名词解释（15分，每个3分） 1、口针：植食性线虫口腔中常有一个中空的针，用于穿刺植物组织，吸取汁液。 2、会阴花纹：根结线虫雌虫阴门周围角质膜形成的特征性花纹，是根结线虫属下 “种”分类鉴定的重要依据。 3、线虫生活史：线虫从卵开始到又产生卵的过程，包括卵、幼虫、成虫三个虫态， 幼虫又分为4个龄期。 4、迁移性内寄生线虫：线虫虫体进入植物组织后不是固定不动，而是在组织内移 动，最后造成大范围根组织坏死，如短体线虫属。 5、连作障碍：同一作物或近缘作物连续多年种植后，即便在正常的管理条件下， 作物的生长发育缓慢或者病虫害发生越来越严重，最终导致产量降低、品质下降的状况。 6、交合伞：在线虫的雄虫尾部侧面常有透明的膜状结构，又称抱片，交配时起定 向和固定的作用。 7、泄殖腔：是雄虫的特殊结构，雄虫的消化管和生殖管共同开口在泄殖腔中。泄 殖腔内有一对交合刺，有的还有引带和交合伞等附属器官。 8、德曼（氏）公式：依据显微测定的线虫形态学特征，所制定的一套线虫分类鉴定的指标体系。 二、翻译拉丁学名成中文属名(十选五，10分，每个2分) Meloidogyne 根结线虫属Heterodera 孢囊（异皮）线虫属 Bursaphelenchus 伞滑刃线虫属Xiphinema 剑线虫属 Radopholus 穿孔线虫属Ditylenchus 茎线虫属 Aphelenchoides 滑刃线虫属Tylenchorhynchus 矮化线虫属 Anguina 粒线虫属Pratylenchus 短体线虫属

三、判断题（20分，每小题2分，正确划√，错误划×） 1、只有孢囊线虫是雌雄异型，其他线虫雌雄虫均为线形。（×） 2、只有极少部分的植物病原线虫生活在土壤中或寄生植物根部。（×） 3、根结线虫繁衍后代的方式既有两性生殖，又可进行孤雌生殖。（√） 4、阴门锥是鉴定根结线虫“种”的重要依据。（×） 5、植物病原线虫的侵染期虫态为3龄幼虫。（×） 6、茎线虫能够传播烟草环斑病毒，因为它是外寄生线虫。（×） 7、线虫头部的唇区能够感觉植物根系分泌物的化学刺激。（√） 8、甘薯茎线虫是在20世纪有日本传入我国的。（√） 9、我国是香蕉穿孔线虫病的主要疫区之一。（×） 10、甜菜孢囊线虫病在欧洲的爆发流行直接推动了植物线虫学的发展。（×） 11、顾名思义，所有植物“线虫”均为线形。（×） 12、植物根结线虫的侵染期虫态为2龄幼虫（J2）。（√） 13、植物线虫病害常常被称为“隐蔽性敌害”。（√） 14、植物线虫的长距离传播是主动移动的结果。（×） 15、水稻干尖线虫、柑橘根结线虫均为迁移性内寄生线虫。（×） 16、美洲剑线虫是内寄生线虫，能够传播烟草环斑病毒。（×） 17、水稻干尖线虫病在20世纪由日本传入我国，并首次在天津被发现。（√） 18、线虫头部的口针能直接分泌含有酶类的消化液，从而使植物致病。（×） 19、中国是香蕉穿孔线虫病非疫区，该病原被我国列为一类检疫对象。（√） 20、大豆胞囊线虫病在欧洲的爆发流行直接推动了植物线虫学的发展。（×） 四、填空题（20分，每空2分）

大蜡螟幼虫被昆虫病原线虫Heterorhabditis beicherriana n

大蜡螟幼虫被昆虫病原线虫Heterorhabditis beicherriana n.sp. 侵染后体内四种酶活性的变化 摘要：为了解新种昆虫病原线虫Heterorhabditis beicherriana n.sp.侵染昆虫的作用机制及昆虫对这种线虫侵染的应激反应，本文研究了大蜡螟幼虫被这种昆虫病原线虫侵染后体内的酪氨酸酶（TYR）、乙酰胆碱酯酶（AChE）、羧酸酯酶（CarE）和谷胱甘肽S-转移酶（GSTs）活性的变化情况。实验结果表明：H.beicherriana 对大蜡螟幼虫的侵染在短时间内（0-40h）就能诱导其体内这四种酶活性发生显著变化，其中TYR和AChE的活性随侵染时间的增加而呈上升态势；而CarE和GSTs 的活性随侵染时间的增加而呈不同程度的波动，但在侵染40h时，其活性均大于0h的值。另外，在20-80IJS/蜡螟剂量范围内，这四种酶的活性随线虫剂量的增大而增大，其活性大小顺序均为：80/IJS蜡螟>40/IJS蜡螟>20/IJS蜡螟。大蜡螟幼虫体内这四种酶的活性因线虫侵染而增大，这就增强了其对侵入体内的线虫、共生菌及其分泌的具有杀虫活性物质的解毒能力或抵抗力。 INTRODUCTION 昆虫病原线虫或其共生菌能产生一些具有杀虫活性的物质，如毒素toxin、毒素蛋白toxin protein、蛋白酶protease等，这些物质有助于线虫对寄主昆虫的侵染(AAAAA; Toubarro, 2009)。这些具有杀虫活性的物质常会引起昆虫一些酶活性发生变化。斯氏线虫S.carpocapsae的分泌物中含有的蛋白酶能抑制酪氨酸酶的活性(Balasubramanian, AAAAA; 2010)。昆虫病原线虫共生菌嗜线虫致病杆菌产生的具杀虫活性的蛋白Tp40能诱导昆虫体内羧酸酯酶酶活性的增加（杨君，2008）；也能产生单萜化合物Benzylideneacetone来抑制磷脂酶A2的活性，从而一定程度地调控小菜蛾的免疫反应（Kim, 2011）。昆虫被昆虫病原线虫侵染后体内一些酶活性也会发生变化，大蜡螟幼虫被异小杆线虫H. zealandica侵染后α-糖苷酶的活性高于对照的活性（Zó?towska（2004））；而被斯氏线虫S. affinis和S. feltiae侵染后体内海藻糖酶的活性也高于对照的活性（Zó?towska AAAAA, 2006）。当大蜡螟幼虫被斯氏线虫S.affinis和S. feltiae侵染一天后，体内SOD活性显著下降(Zó?towska, 2006)；菜青虫（姬国红（2009））和黄粉虫（张芸（2010））被夜蛾斯氏线虫侵染后SOD、POD和CAT的活力总的变化趋势是先显著上升，再显著下降。因此，可以认为昆虫病原线虫侵染昆虫后引起其体内酶活性的变化是昆虫病原线虫侵染机制的重要组成部分，也是昆虫对线虫侵染的应激反应的重要组成部分。 酪氨酸酶（tyrosinase, TYR）是昆虫体内一种重要酶类，能氧化昆虫体内的酚类物质产生黑色素，黑色素可以包被和黑化侵入的不能被细胞吞噬的大型外来物，包括病原微生物，以抑制病原物的生长和繁殖，减轻对寄主细胞的为害；黑化过程中形成的醌有很高的毒性，可以杀死侵入的微生物和被感染的细胞，阻止其扩散(Sugumaran, 2000)。因此，酪氨酸酶常被用作评价昆虫免疫系统强弱的一个重要指标(Cai, 2001)。乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase，AChE）是影响有毒物质对

小学三年级科学《观察水生植物》教案

小学三年级科学：《观察水生植物》教案 【教学目标】 科学概念： 水葫芦叶柄部位膨大的海绵体充满空气是浮在水面上的原因； 水生植物都有根茎叶等器官，它们的生长需要水分、阳光和空气。 过程与方法： 用简图画出水生植物的主要形态特征，能填写懂维恩图； 在观察中提出问题，探究水葫芦浮在水面的秘密。 情感、态度、价值观： 初步感知水生植物与陆生植物的区别和不同的生长情况； 培养研究水生植物的兴趣，体会到水生植物也是一个个活生生的生命个体。 【教学重点】利用维恩图总结水生陆生植物作为生命体的相同与不同特征。 【教学难点】探究水生植物适应水生环境的结构特点。 【教学准备】 几种常见的水生植物，其中最好有水葫芦和金鱼藻，一个水槽，记录本，小刀 【教学过程】 一、导入新课 1.同学们，在前几堂课我们学习了几种植物，有大树和小草。这些小草，大树都是生活在陆地的，今天，我们再来学习下另外一类植物，却不是生活在陆地的，你们猜猜它会是生长在那里？ （学生：水里） 对了，就是在水里，我们把这些生长在水里的植物称水生植物。（板书揭题：水生植物） 2.通过前面的学习我们知道了观察对于我们科学课是多么的重要，也通过观察了解了很多。今天,我们还是来通过观察来认识水生植物。 3.大家在河边、水池或者在电视上，都看到过很多的水生植物，有哪些水生植物？ 二、学习新课 1.观察金鱼藻和水葫芦 （1）我们现在就来观察水生植物，请同学们拿出水葫芦和金鱼藻以其他水生植物。每位同学选择自己喜欢的水生植物进行观察。 观察要求：放入水槽中（为了使金鱼藻能沉在水底有利于观察和简图记录，可在其底部粘橡皮泥），观察它们在水中的样子，并用简图把它们画下来；在水槽中观察结束后，然后再拿出来进行观察，并做好记录；在一边观察一边思考，遇到了什么问题？观察是要注意纪律问题。 （2）小组汇报自己的发现以及遇到的问题。老师这里也有这么一个问题:水葫芦怎么能浮在水面上呢？(小组合作交流) （3）引导学生尝试剖开水葫芦的叶柄，我们会有什么发现？水葫芦的葫芦里面不是实心的，是有很多空隙的，这种海绵状气囊结构很轻，所以能浮在水面上（适应水生植物的环境）。其它水生植物是不是也有相似的结构？请课外继续探究。 2.比较水葫芦和金鱼藻 （1）刚才我们观察了水生植物，同时也观察了水葫芦和金鱼藻，那么它们

植物保护第5讲植物病原原核生物病毒和线虫

《植物保护》课程单元教学设计 设计者：吴永汉李刚所属系部（教研室）：绿色食品生产与检验教研室 本单元标题：项目一、模块二任务3 植物病原原核生物、病毒和线虫及寄生性种子植物授 课班级食品经营12-1 食品经营12-2 上 课 时 间 3周 3月 12日第1-2节 上 课 地 点 教1-208 3周 3月 12日第3-4节教1-208 教学目的了解植物病原原核生物、病毒、线虫和寄主性种子植物的一般性状和分类命名，线虫的生物学特性及所致病害，寄生性种子植物对寄主植物的致病作用。 教学目标能力（技能）目标知识目标 掌握植物病原原核生物、病毒、线 虫和寄主性种子植物所致植物病害的 为害特点与防治要点。 了解植物病原原核生物、病毒、线虫和 寄主性种子植物的一般性状和分类命名，线 虫的生物学特性及所致病害，寄生性种子植 物对寄主植物的致病作用。 重点难点及解决方法 重点：病原原核生物的传染途径，侵染途径与症状表现的关系，病原原核生物的传播。认识植物病毒的形态、结构和组分、 难点：病原与所致病害的关系。 植物病毒的形态、结构、组分和植物病毒的增殖和复制的机理。菟丝子、列当等及其为害特点与防治要点。 参考资料

单元教学活动基本框架 第一部分：组织教学和复习导入 点名和复习 第二部分：学习新内容 【步骤一】新知识的引入 教学目的： 使学生了解植物病原原核生物、病毒、线虫和寄主性种子植物的一般性状和分类命名，线虫的生物学特性及所致病害，寄生性种子植物对寄主植物的致病作用。 让掌握植物病原原核生物、病毒、线虫和寄主性种子植物所致植物病害的为害特点与防治要点。 【步骤二】知识点讲解与操作示范 一.植物病原原核生物（细菌） 原核生物除了引发植物病害外，还是人、畜病害的重要病原。如鼠疫、霍乱、痢疾、肺炎、破伤风、肺结核及炭疽病等。许多原核生物还能使食物和其他农产品腐败变质，人误食后会引起食物中毒。许多原核生物能够分解土壤的动植物残体，有的还可以固氮。有的还可以生产有机酸、酒精、味精、抗生素、胰岛素和沼气等。细菌通常与酵母和霉菌一起被用于发酵食物，例如干酪、泡菜、酱油、醋、酒及酸奶等。还有许多原核生物成为防治其他植物病虫害的生物农药。另外，利用处理或杀死过的病原原核生物，可以制成各种预防疾病的疫苗。 (一)植物病原原核生物的一般性状 原核生物界的成员很多，通常以细菌作为有细胞壁类群的代表，以菌原体作为无细胞壁但有细胞膜类型的典型。细菌病害的数量和为害仅次于真菌和病毒，是引起植物病害最多的一类植物病原原核生物。一般细菌的形态为球状、杆状和螺旋状。植物病原细菌大多是杆状菌，大小为0．5—0．8 um一1×3um，有鞭毛，着生在菌体一端或两端的称为极鞭，着生在菌体四周的称为周鞭。细菌鞭毛的有无、着生位置和数目是细菌分类的重要依据。 革兰染色反应是细菌分类的一个重要性状。植物病原细菌革兰染色反应多为阴性，少数为阳性。 细菌依靠细胞膜的渗透作用直接吸收寄主体内的营养。细菌以裂殖方式进行繁殖，其突出的特点是繁殖速度极快，在适宜的环境条件下，每20～30分钟可以裂殖一次。 植物病原细菌可以在普通培养基上培养，生长的最适温度为 26～30℃，能耐低温，对高温较敏感，通常48—53℃处理10分钟，多数细菌即死亡。植物病 原细菌绝大多数为好气性，少数为兼性厌气性。一般在中性偏碱的环境中生长良 好。 菌原体的形态、大小变化很大，表现为多型性。有圆形、椭圆形、哑铃形、梨形和线条形。还有些特殊的形态，如分枝形、螺旋形等。菌原体的大小一般为80～800 nm。 二、植物病原原核生物的主要类群 植物病原原核生物分属于薄壁菌门、厚壁菌门和软壁菌门。原核生物形态简单、差异较小，侵染植物并引起严重病害的原核生物很多。 (一)薄壁菌门 特点：胞壁薄（厚7-8nm），胞壁肽聚糖含量8％-10％，G- 重要的植物病原细菌属：1．土壤杆菌属=农杆菌 2. 欧文氏菌属3. 假单胞菌属

观察水生植物教案

第四课观察水生植物 【教学目标】 科学概念： 水葫芦叶柄部位膨大的海绵体充满空气是浮在水面上的原因。 水生植物都有根茎叶等器官，它们的生长需要水分、阳光和空气。 过程与方法： 用简图画出水生植物的主要形态特征，能看懂维恩图的表达方式。 在观察中提出问题，探究水葫芦浮在水面的秘密。 情感、态度、价值观： 培养研究水生植物的兴趣，体会到水生植物也是一个个活生生的生命个体。 【教学重点】利用维恩图总结水生陆生植物作为生命体的共同特征。【教学难点】探究水生植物适应水生环境的结构特点。 【教学准备】 分组材料：几种常见的水生植物，其中最好有水葫芦和金鱼藻，一个水槽，一张记录纸。 【教学过程】 一、认识常见的水生植物 1.陆地上生长着许多植物水中也生长着许多植物。出示实物或图片，这就是两种常见的水生植物水葫芦和金鱼藻。你课外调查到的水生植物有哪些？你曾经看到过哪些水生植物？（补充认识水花生、浮萍、莲、菱、菖蒲、茭白等。）

二、观察水葫芦和金鱼藻 1.观察记录：塑料袋中装有水葫芦和金鱼藻，分发给各小组，要求放入水槽中（为了使金鱼藻能沉在水底有利于观察和简图记录，可在其底部粘橡皮泥），观察它们在水中的样子，并用简图把它们画下来。 2.思考：把橡皮泥去掉，比较观察水葫芦和金鱼藻在水中有什么共同之处？对，都能浮在水面上，会有什么秘密呢？ 3.探究：尝试剖开水葫芦的叶柄，我们会有什么发现？这种海绵状气囊结构很轻，所以能浮在水面上（适应水生植物的环境）。其它水生植物是不是也有相似的结构？请课外继续探究。 三、比较水葫芦和金鱼藻 水葫芦和金鱼藻有哪些相似之处？（除了形态结构特征外，还可以稍作拓展，如它们都会繁殖后代，都会死亡等。）它们是水生植物，它们的生长需要什么条件？ 四、比较水葫芦和狗尾草 水葫芦等水生植物与陆生植物狗尾草等又有什么相同和不同之处？ 与前堂课学生总结的陆生植物的唯恩图进行比较，再次填写维恩图，完成对植物生命体特征的梳理。（都有根茎叶、都会繁殖后代、寿命都短、都是草本植物，都需要阳光、水分和空气等） 不求做得最好,但求做得更好----做好自己想做的事！！ 【教学目标】 科学概念： 水葫芦叶柄部位膨大的海绵体充满空气是浮在水面上的原因。

植物病原菌分离方法

病原菌分离方法 一、实验原理： 植物患病组织内的真丝菌丝体，如果给予适宜的环境条件，除了个别种类外，一般都能恢复生长和繁殖。植物病原菌的分离就是指通过人工培养，重染病植物组织中将病原真菌与其他杂菌相分开并从寄主植物中分离出来，再将分离得到的病原菌于适宜环境内纯化，这个过程总称植物病原的分离培养。 二、实验用具： 酒精灯、手术剪、镊子、75%酒精、3%~5%次氯酸钠、灭菌水、培养皿、封口膜、乳酸等 三、实验前的准备工作： 1、煮培养基（PDA）：马铃薯200g,葡萄糖20g，琼脂粉(AGAR)20g（10:1:1）水1000ml （1）将去皮称量好的马铃薯切片后加水煮沸15~20min（水可以适量多加200ml 左右，因为在煮的过程中会蒸发一些），待土豆煮软即可。 （2）三层纱布滤去马铃薯后将过滤的水倒入洗净的锅中，加琼脂粉搅拌充分后再加热煮沸，小火使其充分融化。 （3）加入葡萄糖并不断搅拌，待其完全融化后双层纱布过滤，定容到1000ml，分装到500ml的玻璃瓶内，每个玻璃瓶最多装300ml，121℃湿热灭菌 30min。 2、培养皿干热灭菌170℃1h;蒸馏水、枪头等湿热灭菌121℃30min。 四、实验步骤： 1、用75%酒精擦拭超净工作台，所有器具用紫外灯灭菌30min,分离室要保持清洁。 2、取样，病斑大小约20个（含病缘线） 3、分装培养基：（1）融PDA，松盖在微波炉中加热约3min（看量多少而定） （2）待冷却至50℃后在超净工作台指示灯显绿灯时分装 (3) 分装时滴入一管乳酸约20滴（每10ml培养基中加3滴乳酸） （4）左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基 约15m1(300ml一瓶的培养基倒20多个平板)，加盖后轻轻摇动培 养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝

园林常用水生植物水生湿地植物的配置与应用

园林常用水生植物水生湿地植物的配置及应用（组图）(2010-04-13 13:32:08) ▼ 标签： 水生湿地植物 杂谈 水生湿地植物作为营造水景的重要要素，它的应用一直备受业内人士的关注。本文从植物的构建模式、优化配置、群丛模式、与水体关系角度分析了水生湿地植物，并且结合武汉市三大公园中的实际应用进行了对比分析。 1、生态水景的构建模式 1.1 生态水景的构建模式 （1）生态自然型 其景观自然形成，各群落分布自然合理，少有人工干涉，如：洪湖的荷花，白洋淀的芦苇。 （2）生态观赏型 其景观由人按生态原理并结合原地形地貌设计而成，各群落分布建植由人工而成，群落以观赏为主。同时运用各种手法使风景优美，使之成为旅游景点，如：杭州的西溪湿地、金银湖湿地公园等。 1.2 水生植物的群落模式 （1）物种多样化模式：陆生、湿生、挺水、浮水、沉水植物依序构成生态水景的组成部分，并逐步形成一个有机和谐统一的组合体，各组成部分比例协调，景观层次和色彩丰富，如：解放公园。 （2）优势种主导模式：优势种在水景中起主导作用，是景观的主体部分，也是景观的特色部分，其他物种为伴生物种。如大片的荷花形成的景观，点缀有香蒲、茭草和水葱。如杭州西湖曲院风荷的荷花。 （3）水质净化型模式：此类景观以大量的沉水植物和浮水植物为主，水域内点缀少量其它水生植物，主要以保持水质良好，水体透明为主。如：和平公园的人工湖，其中种植的大量菹草和黄花鸢尾。

植物群落的优化配置模式：通达人为设计将欲种植的水生湿地植物群落，根据环境条件和群落特性按一定比例在空间分布，时间分布方面进行安排。使其高效运行达到净化水质，并形成优美的景观效果和可持续利用的生态系统。群落配置包括以下两个方面： 水平空间配置：指水域平面上配置不同的植物群落。所配置的植物群落可分为生态型植物群落和观赏性植物群落，生态型植物群落以水体污染的治理，污水的净化，促进生态系统的建立和完善为主要目标，注重群落的生态效应，其建群种要求耐污，去污能力强，生长快，繁殖能力强，生态效益好的物种，如芦苇。观赏性植物群落要求株型美观，有花有色，有较高的观赏价值，易形成区域内观赏特色。如：荷花和睡莲。 垂直空间配置：指水生植物群落的垂直空间配置由水深决定，不同的水生植物群落对水深有不同的要求。群落配置从湖岸向湖心，随水深的不同分别选用不同的水生植物，即湿生植物群落，挺水植物群落，浮水植物群落，沉水植物群落。这些群落分别占据不同的空间生态位，能适应不同水深处的光照条件，能保持相对稳定。 2、水景中的水生湿地植物群落的优化配置 水生植物在园林中的应用主要分为水边的植物配置、驳岸的植物配置、水面的植物配置、堤、岛的植物配置等。配置时要考虑到物种搭配和生态功能，做到观赏功能和水体处理功能统一协调。物种搭配应主次分明，高低错落，符合各水生植物对生态位的要求，同时能充分发挥各水生植物的生态功能。 2.1 水边与驳岸的植物配置 水体边缘是水面和堤岸的分界线，水体边缘的植物配置既能对水面起到装饰作用，又能实现从水面到堤岸的自然过渡，尤其在自然水体景观中应用较多，所以水边植物配置应讲究艺术构图。在构图上，注意应用探向水面的枝、干，尤其是似倒未倒的水边大乔木，以起到增加水面层次和富有野趣的作用。水边的植物配植，主要是通过植物的色彩、线条以及姿态来组景和造景的。我国园林中自古水边主张植以垂柳，造成柔条拂水，同时在水边种植落羽松、池松、水杉及具有下垂气根的小叶榕等，均能起到线条构图的作用。但水边植物配植切忌等距种植及整形式或修剪，以免失去画意。 2.2 水面植物的配置 水面全部栽满植物的，多适用小水池，或大水池中较独立的一个局部，在南方的

昆虫病原微生物研究进展

2 国内外研究进展 2.1 主要研究应用类群 昆虫病原真菌是昆虫病原微生物中最大的一个类群, 共有 100 多个属 700 余种, 分属于真菌的半知菌亚门、接合菌亚门、鞭毛菌亚门、子囊菌亚门及担子菌亚门中, 大部分是兼性或专性病原体。在含有昆虫病原真菌的 100 多个真菌属中, 约 50 多个属于半知菌亚门。目前已在生产上得到应用的主要有白僵菌、绿僵菌、拟青霉、莱氏野村菌、汤普森被毛孢、蜡蚧轮枝菌等。 3. 1 昆虫病原真菌的入侵机理 根据报道 ,白僵菌、绿僵菌、汤普生多毛孢、莱氏野村菌与根虫瘟霉在入侵寄主昆虫体内直至使昆虫死亡的过程中均大致有下面 4 个阶段。 3. 1. 1 分生孢子附着于寄主体表 ,产生或不产生附着孢。 3. 1. 2 附着的分生孢子产生胞外酶 ,主要是几丁质酶和各种不同的蛋白酶类 ,可分解寄主昆虫的体壁。 3. 1. 3 萌发的孢子侵入寄主昆虫体内。 3. 1. 4 菌丝体在虫体内生长 ,消耗虫体内营养并分泌毒素杀死寄主昆虫。 许多资料报道认为:病原真菌分泌的毒素是昆虫死亡的主要原因。较新近的对金龟子绿僵菌侵机理更为细致的研究认为:几丁质酶和蛋白酶类以及真菌毒素的产生与昆虫病原真菌的致病力有关。国外专家经系统地研究绿僵菌的酶系 ,认为弹性凝乳蛋白酶的活性决定绿僵菌的侵染力 ,并且对编码弹性凝乳蛋白酶的基因进行了克隆 ,准备在植物中选用这种基因[ 23 ],这为用分子生物学技术改良菌株或育种创造了条件。 昆虫病原真菌代谢产物及其作用 昆虫病原真菌的代谢产物从作用上可分为 3 类。除了可杀死昆虫的毒素外 ,还有对植物生长有调节作用的激素类物质以及对人体有保健作用的营养物质 ,有些真菌的分泌物还可抑制植物病害的发生。 4. 1 产生杀虫毒素的昆虫病原真菌的主要类别 目前已报道的可以产生毒素的昆虫病原真菌主要包括球孢白僵菌和卵孢白僵菌 ,它们在孢子萌发 及菌丝生长中均能分泌毒素。绿僵菌的培养滤液和菌丝体中均能提取出毒素物质。虫霉菌也能产生毒 素 ,主要发现在冠耳霉( Conidiobol us coronata)的培养液中,尖突耳霉( C. apiculata) 也产生毒素。拟 青霉属的种类、镰刀菌的许多种类、莱氏野村菌及蜡蚧轮枝孢菌均产毒素。虫草属( Cordycepin)的种类 在培养物中可提取出毒素。有报道认为交链孢属的链格孢菌也有毒素产生 2 国内、外已报道的真菌杀虫剂种类 从20 世纪 60 年代以来,欧美国家及日本在昆虫病原真菌的应用上取得了一些突破。20 世纪 90 年代报道的真菌杀虫剂有 7 种类 24 个商品,分属 8 个国家(名录略写) ,以后报道增至 8 种类 26 种商 品[2 ] 。2000 年还报道了美国密西西比地区防治白蚁 Ret icul i termes f lavi pes 使用的由金龟子绿僵菌制 成的商品“Bioblat”。中国目前能工厂化生产的种类有白僵菌、绿僵菌 ,拟青霉中有 2 种已得到应用[ 2 ]

园林常用水生植物水生湿地植物的配置及应用

园林常用水生植物水生湿 地植物的配置及应用 This manuscript was revised by the office on December 22, 2012

园林常用水生植物水生湿地植物的配置及应用（组图） (2010-04-13 13:32:08) 标签： 水生湿地植物作为营造水景的重要要素，它的应用一直备受业内人士的关注。本文从植物的构建模式、优化配置、群丛模式、与水体关系角度分析了水生湿地植物，并且结合武汉市三大公园中的实际应用进行了对比分析。 1、生态水景的构建模式 生态水景的构建模式 （1）生态自然型 其景观自然形成，各群落分布自然合理，少有人工干涉，如：洪湖的荷花，白洋淀的芦苇。 （2）生态观赏型 其景观由人按生态原理并结合原地形地貌设计而成，各群落分布建植由人工而成，群落以观赏为主。同时运用各种手法使风景优美，使之成为旅游景点，如：杭州的西溪湿地、金银湖湿地公园等。 水生植物的群落模式

（1）物种多样化模式：陆生、湿生、挺水、浮水、沉水植物依序构成生态水景的组成部分，并逐步形成一个有机和谐统一的组合体，各组成部分比例协调，景观层次和色彩丰富，如：解放公园。 （2）优势种主导模式：优势种在水景中起主导作用，是景观的主体部分，也是景观的特色部分，其他物种为伴生物种。如大片的荷花形成的景观，点缀有香蒲、茭草和水葱。如杭州西湖曲院风荷的荷花。 （3）水质净化型模式：此类景观以大量的沉水植物和浮水植物为主，水域内点缀少量其它水生植物，主要以保持水质良好，水体透明为主。如：和平公园的人工湖，其中种植的大量菹草和黄花鸢尾。 植物群落的优化配置模式：通达人为设计将欲种植的水生湿地植物群落，根据环境条件和群落特性按一定比例在空间分布，时间分布方面进行安排。使其高效运行达到净化水质，并形成优美的景观效果和可持续利用的生态系统。群落配置包括以下两个方面： 水平空间配置：指水域平面上配置不同的植物群落。所配置的植物群落可分为生态型植物群落和观赏性植物群落，生态型植物群落以水体污染的治理，污水的净化，促进生态系统的建立和完善为主要目标，注重群落的生态效应，其建群种要求耐污，去污能力强，生长快，繁殖能力强，生态效益好的物种，如芦苇。观赏性植物群落要求株型美观，有花有色，有较高的观赏价值，易形成区域内观赏特色。如：荷花和睡莲。 垂直空间配置：指水生植物群落的垂直空间配置由水深决定，不同的水生植物群落对水深有不同的要求。群落配置从湖岸向湖心，随水深的不同分别选用不同的水生植物，即湿生植物群落，挺水植物群落，浮水植物群落，沉水植物群落。这些群落分别占据不同的空间生态位，能适应不同水深处的光照条件，能保持相对稳定。 2、水景中的水生湿地植物群落的优化配置 水生植物在园林中的应用主要分为水边的植物配置、驳岸的植物配置、水面的植物配置、堤、岛的植物配置等。配置时要考虑到物种搭配和生态功能，做到观赏功能和水体处理功能统一协调。物种搭配应主次分明，高低错落，符合各水生植物对生态位的要求，同时能

湖北地区常用园林植物大全

湖北地区常用园林植物大全 1、常绿乔木:香樟、日本柳杉、杜英、广玉兰、大叶女贞(大叶冬青)、桂花、柑桔、罗汉松、雪松、月桂、深山含笑、乐昌含笑、金玉含笑、枇杷、石楠、棕榈、苏铁、加拿利海枣、华盛顿棕榈。 香樟: 学名:Cinnamommum camphora 科別:樟科 形态特征:常绿大乔木,高达30m,胸径5m,呈园形树冠,树皮暗褐色,有縱裂。叶革质互生,卵形或橢园形,全绿,表面光滑。雌雄同花,园錐花序腋生於枝頂端,黃面光滑。黃绿色小花;漿果球形、成熟時由绿色转为黑紫色。全株散發樟樹的特有清香氣息。 生长习性:喜光,幼苗幼树耐荫。喜温暖湿润气候,耐寒性不强,最低温度-10℃时,常遭冻害。深厚肥沃湿润的酸性或中性黄壤、红壤中生长良好,不耐干旱瘠薄与盐碱土,耐湿。萌芽力强,耐修剪。抗二氧化硫、臭氧、烟尘污染能力强,能吸收多种有毒气,较适应城市环境,耐寒。 园林用途: 行道樹、庭園樹。 落叶乔木:法国梧桐、池杉、水杉、榉树、栾树、无患子、银杏、合欢、金合欢、马褂木、垂柳、白玉兰、国槐、朴树、枫香、枫杨、青桐、紫薇、紫荆、红枫、垂丝海棠、贴梗海棠、西府海棠、樱花、丁香、紫玉兰、二乔玉兰、木槿、香泡、木芙蓉、红花刺槐、盘槐、桃树、山麻杆、红叶李、结香、石榴、意杨、枣树、乌桕。 2、常绿灌木:法国冬青、龟甲冬青、红果冬青、桃叶珊瑚、栀子花、细叶栀子、八角金盘、六月雪、十大功劳、阔叶十大功劳、大叶黄杨、金边黄杨、雀舌黄杨、茶花、茶梅、椤木石楠、红继木、月季、杜鹃、金叶女贞、小叶女贞、云南黄馨、丝兰、火棘、蚊母、棣棠、二月兰、洒金柏、龍柏、海桐、夹竹桃、金丝桃、南天竹、苏铁、棕竹、扶桑、苟骨、凤尾竹。 3、落叶灌木:八仙花、棣棠、丁香、海棠、红瑞木、红叶碧桃、红叶李、结香、金山绣线菊、决明、腊梅、连翘、木芙蓉、木槿、绣线菊、紫荆、紫薇、矮生紫薇、红叶小檗、青枫、金丝桃、迎春、垂叶榆。 4、草本花卉:(多年生)芭蕉、美人蕉、百合、春羽、二月兰、风信子、佛座草、