抗氧化实验方法

1还原力的测定

样品2ml加到2ml 0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.6）和2ml 1%的铁氰化钾溶液的混合液中。混合物在50℃保温20min，然后在反应混合物中加入2ml 10%的TCA，混合后以3000rpm 离心10min，取上清液2ml与2ml蒸馏水以及0.4ml 0.1%氯化铁在反应试管中反应，10min 后测定其在700nm处的吸光值。吸光值越大表明还原力越强。

注意：建议蛋白浓度以5mg/ml左右变化，例如2.5，5之类变化。但具体情况应根据吸光值大小而定。

0.2mol/L pH6.6的磷酸盐缓冲液的配制见附表。

铁氰化钾溶液应盛装在棕色瓶中。

比色皿的用法：可见光(>400nm)用玻璃比色皿（即没有标字母或者标G的比色皿），紫外光时（<400nm）用石英比色皿（即标Q字比色皿）。

2 DPPH自由基清除活性的测定

将1.5ml样品液添加到1.5ml含0.1 mmol/L DPPH的95％乙醇中，混合，振荡，在

室温下放置30min，然后在波长517nm处检测（Ai）。清除率计算公式为：

空白为1.5 ml 95%的乙醇加入1.5 ml蒸馏水调零。

式中：Ac——对照为1.5 ml DPPH溶液加上1.5 ml蒸馏水在517nm处的吸光值；Aj——1.5ml样品液加上1.5 ml 95%的乙醇在517nm处的吸光值；

Ai——1.5ml样品液加上1.5 ml DPPH溶液在517nm处的吸光值；

注意：建议酶解液蛋白浓度以2mg/ml 左右变化，如0.5,1,2,2.5之类变化，但是具体情况应视清除率而定，最终结果应有清除率大于50%和小于50%的情况。

DPPH样品有毒，需戴口罩和手套进行操作。而且DPPH试剂很昂贵，用时注意节约。0.1m mol/L DPPH 乙醇溶液的配制：准确称取0.00395gDPPH，用95%的乙醇溶液溶解并定容到100ml。

3 在卵黄磷脂体系中抗氧化能力的测定

以卵黄脂蛋白为底物的LPO模型反应体系包括:体积比为1:25稀释的卵黄悬液(卵黄用等体积的pH7.45，0.lmol/LPBS配成，使用前磁力搅拌10min)0.2 mL、一定浓度的样品溶液0.lmL、25m moll/LFeSO4溶液0.2mL，用PBS缓冲液补足至2.0mL。对照管除不加样液外其他试剂同前。将上述2种试管同时置37℃恒温水浴锅中保温培养1h。取出后，加入20%TCA0.5mL，静置10 min后，与对照管于3500r/min离心10min，取2.0mL上清液，分别加入质量分数为0.8%硫代巴比妥酸(TBA)溶液1.0mL，加塞于100℃水浴15min，取出冷却。空白管以2.0mLPBS溶液代替，在532nm下测定吸光度，样品对卵黄脂蛋白LPO的抑制率表示为:

SA(%)=(Ac一AS)/A C×100

式中:Ac一不加样品的吸光度

As一加入样品的吸光度

注意：卵黄溶液不用时应放置冰箱保存。

酶解液蛋白浓度以5mg/ml左右调整，但具体应视清除率大小而定，对酶解液蛋白浓度

进行调整。

硫代巴比妥酸溶液需放置于棕色瓶内保存。并以50m mol/L NaOH溶液配制。再在50℃水浴溶解。

FeSO4溶液应以棕色瓶盛装。

4 过氧化值的测定

参照本食品学院林华娟等老师主编的食品分析实验讲义一书。

5 超氧阴离子自由基清除率的测定

邻苯三酚自氧化速率（V对照）：对照组和空白对照组加入4ml 蒸馏水（去离子水）和，0.1 mol/LTris-HCl缓冲溶液(pH8.2) 4.5ml，在25℃水浴20min后，样品组加入0.2ml （或0.3ml）3m Mol/L邻苯三酚溶液，空白组以相同体积蒸馏水（去离子水）代替。震匀后马上在320nm 处测定吸光值。迅速混匀并开始计时，每隔30 s读取吸光值,4 min后结束，以空白对照管调零。作吸光度随时间变化的回归方程，其斜率为邻苯三酚自氧化速率V对照。（V对照在0.05A/min~0.065A/min之间，否则应调整邻苯三酚加入量）

样品自氧化速率（V样品）：样品组和空白组均加入一定浓度的样品溶液4ml，0.1 mol/LTris-HCl缓冲溶液(pH8.2) 4.5ml，在25℃水浴20min后，样品组加入0.2ml （或0.3ml）3m Mol/L邻苯三酚溶液，空白组以相同体积蒸馏水（去离子水）代替。震匀后马上在320nm 处测定吸光值。迅速混匀并开始计时，每隔30 s读取吸光值,4 min后结束，以空白管调零。作吸光度随时间变化的回归方程，其斜率为邻苯三酚自氧化速率V样品，按下式计算样品对超氧阴离子的抑制率：

式中：抑制率(%)=(V对照-V样品)/V对照×100

V对照－对照组邻苯三酚自氧化速率(ΔA/min)

V样品－样品组邻苯三酚自氧化速率(ΔA/min)

动物实验资料：

摘自鹰嘴豆:

抗氧化剂的抗氧化效果受到多种因素的影响，只有在生物体内具有抗氧化作用的物质才能有效的清除体内产生的自由基，才能表现出一定的生物活性。由于体外抗氧化测定方法容易操作，周期短，因此评价一种物质的抗氧化效果往往首先采用体外抗氧化体系。但体外抗氧化体系往往与人体内的生理环境相差太大，许多研究结果表明采用体外方法评价有效的抗氧化剂进入人体后却表现不出应有的抗氧化效果，因此抗氧化剂的抗氧化效果在采用体外方法进行初步评价后应采用动物实验进行体内评价。

人体在正常生理代谢过程中会产生少量的含氧自由基，如超氧阴离子、羟自由基、过氧化氢等，这些自由基通过自然存在于体内的抗氧化酶如超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶及抗氧化剂如抗坏血酸、维生素E组成的抗氧化系统来消除。因此，在正常状态下，体内自由基维持在一定水平并处于动态平衡中，正常量的自由基对细胞的生长、分裂、解毒等具有有益的作用，在杀菌、免疫调节等方面具有积极而重要的意义。

然而，随着增龄或在某些病理状态下以及机体受到创伤时，体内抗氧化酶活性下降，从而导致机体代谢异常而骤然产生大量活性氧自由基；或由于机体抗氧化物质不足，使促氧化剂与抗氧化剂之间的平衡失常，致使自由基与机的一些生物大分子，如蛋白质、核酸、脂质等发生反应，生成大量氧化物或过氧化物，并

进一步引起细胞死亡和组织损伤。业已证明，氧化损伤与衰老、肿瘤、糖尿病、动脉硬化、神经退行性病变以及人类免疫缺陷病毒(HIV)感染等均有密切关系。

D-半乳糖诱导的亚急性衰老模型是按照衰老的代谢学说建立的，其机制与糖代谢紊乱[6]、D-半乳糖醇中毒[7]和活性氧自由基过剩有关；众多研究表明是生物体内含有半乳糖氧化酶，在催化D-半乳糖时可产生超氧阴离子自由基(O2·-)和H2O2；如果长期人为地给予过量D-半乳糖，使机体和细胞内自由基产生过量，除了造成组织细胞直接损伤外，还导致抗氧化酶活力下降和过氧化产物积累，从而表现出与人类自然衰老相似的生化变化、免疫功能低下、基因表达与调控异常细胞繁殖力下降及细胞退化性衰变等。有研究表明，D-半乳糖可降低人胚肺二倍体成纤维细胞(HBS)，从而使该细胞SOD活力降低和过氧化产物MDA增多，从而起到加速细胞老化的作用。

本文在前述章节已经表明，鹰嘴豆蛋白酶解物具有体外抗氧化活性，但其在生物体内的作用效果尚不清楚。为此本章采用D-半乳糖诱导致衰老小鼠作为模型，分别以小鼠的血清、肝脏和心脏组织中的丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性作为评价指标，探讨鹰嘴豆蛋白酶

解物在生物体内的作用，为揭示鹰嘴豆蛋白酶解物对体内过氧化状态的影响，明确其物质基础和相关机制提供证据。

抗氧化实验方法

1还原力的测定 样品2ml加到2ml 0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.6）和2ml 1%的铁氰化钾溶液的混合液中。混合物在50℃保温20min，然后在反应混合物中加入2ml 10%的TCA，混合后以3000rpm 离心10min，取上清液2ml与2ml蒸馏水以及0.4ml 0.1%氯化铁在反应试管中反应，10min 后测定其在700nm处的吸光值。吸光值越大表明还原力越强。 注意：建议蛋白浓度以5mg/ml左右变化，例如2.5，5之类变化。但具体情况应根据吸光值大小而定。 0.2mol/L pH6.6的磷酸盐缓冲液的配制见附表。 铁氰化钾溶液应盛装在棕色瓶中。 比色皿的用法：可见光(>400nm)用玻璃比色皿（即没有标字母或者标G的比色皿），紫外光时（<400nm）用石英比色皿（即标Q字比色皿）。 2 DPPH自由基清除活性的测定 将1.5ml样品液添加到1.5ml含0.1 mmol/L DPPH的95％乙醇中，混合，振荡，在 室温下放置30min，然后在波长517nm处检测（Ai）。清除率计算公式为： 空白为1.5 ml 95%的乙醇加入1.5 ml蒸馏水调零。 式中：Ac——对照为1.5 ml DPPH溶液加上1.5 ml蒸馏水在517nm处的吸光值；Aj——1.5ml样品液加上1.5 ml 95%的乙醇在517nm处的吸光值； Ai——1.5ml样品液加上1.5 ml DPPH溶液在517nm处的吸光值； 注意：建议酶解液蛋白浓度以2mg/ml 左右变化，如0.5,1,2,2.5之类变化，但是具体情况应视清除率而定，最终结果应有清除率大于50%和小于50%的情况。 DPPH样品有毒，需戴口罩和手套进行操作。而且DPPH试剂很昂贵，用时注意节约。0.1m mol/L DPPH 乙醇溶液的配制：准确称取0.00395gDPPH，用95%的乙醇溶液溶解并定容到100ml。 3 在卵黄磷脂体系中抗氧化能力的测定 以卵黄脂蛋白为底物的LPO模型反应体系包括:体积比为1:25稀释的卵黄悬液(卵黄用等体积的pH7.45，0.lmol/LPBS配成，使用前磁力搅拌10min)0.2 mL、一定浓度的样品溶液0.lmL、25m moll/LFeSO4溶液0.2mL，用PBS缓冲液补足至2.0mL。对照管除不加样液外其他试剂同前。将上述2种试管同时置37℃恒温水浴锅中保温培养1h。取出后，加入20%TCA0.5mL，静置10 min后，与对照管于3500r/min离心10min，取2.0mL上清液，分别加入质量分数为0.8%硫代巴比妥酸(TBA)溶液1.0mL，加塞于100℃水浴15min，取出冷却。空白管以2.0mLPBS溶液代替，在532nm下测定吸光度，样品对卵黄脂蛋白LPO的抑制率表示为: SA(%)=(Ac一AS)/A C×100 式中:Ac一不加样品的吸光度 As一加入样品的吸光度 注意：卵黄溶液不用时应放置冰箱保存。 酶解液蛋白浓度以5mg/ml左右调整，但具体应视清除率大小而定，对酶解液蛋白浓度

抗氧化活性测定方法的比较

抗氧化活性测定方法的比较 人体衰老和多种疾病均与自由基有关，寻找天然抗氧化剂具有重要意义。黄酮、多糖、多肽、酚类等生物活性成分均具有抗氧化活性，抗氧化活性的筛选方法可分为体外和体内2种测试体系。 体外：抗氧化活性可以用在特定条件下，样品对检测体系中自由基的清除能力、抗油脂过氧化能力及样品的还原能力、总抗氧化能力等来衡量和表征。常用的方法有羟基自由基（·OH）清除能力法、1,1-二苯基苦基苯肼（DPPH法）、2,2-联氮基-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐（ABTS 法）、超氧阴离子自由基法（O2-·）、邻苯三酚自氧化法、β-胡萝卜素漂白法、硫代巴比妥酸法、铁离子还原能力测定（FRAP法）、总酚测定法、ORAC法等方法。体内：主要有DNA氧化损伤法、蛋白质氧化损伤法、线粒体氧化损伤法。 其中DPPH法和ABTS法操作较简单便捷，不需要特殊的检测设备，只在需固定时间下记下其紫外分光光度测量值后计算其自由基清除率，缺点是不同物质具有组成和结构的差异，与DPPH·、ABTS+·的反应速率不同，反应到达平衡的时间不同，将反应时间固定在某一值时，可能对抗氧化剂的抗氧化性评价带来错误的判断，且DPPH自由基会和其他自由基发生反应。邻苯三酚自氧化法缺点是检测波长、缓冲液的组成及ｐＨ值、邻苯三酚浓度等关键测定条件存在

着较大差异。β-胡萝卜素漂白法的缺点是β-胡萝卜素本身有抗氧化活性，对样品活性的测定结果有影响。FRAP法主要用于食品业，优点是简单易操作、可以重复，缺点是无法测定硫醇化合物的还原能力。ORAC法是国际上通用的评价食品氧化的标准方法，缺点是仪器成分较复杂，检测成本较高。 目前普遍使用的体外抗氧化活性指标一般都采用分光光度法，使用分光光度计测量各种颜色成分含量的变化。分光光度法操作较简单、便捷，不需要特殊的检测设备，只在需固定时间下记下其紫外-可见分光光度测量值后计算其活性大小，具有成本低、效率高、样品量少等优点。分光光度法缺点是会受到样本自身颜色和浑浊度的影响和限制，颜色深的样品测得的数据误差大，甚至得到错误的结果；不同物质组成和结构存在差异，与各种自由基的反应速率不同，反应到达平衡的时间不同，将反应时间固定在某一值时，可能对抗氧化剂的抗氧化性评价带来错误的判断。外界环境因素对实验结果也存在一定程度的影响，有些抗氧化活性实验在冬天低温时不易成功，测得的数据往往没有规律。 我觉得在测定样品的抗氧化活性时，各种方法都有自己的优缺点，要根据需测物质来决定用什么方法，比如DPPH 法的自由基选择性强，不和只有一个羟基的芳香酸、无羟基的类黄酮反应，这类物质需用其他方法测定。若对检测结果

体外抗氧化实验方案

体外抗氧化实验方案 一、DPPH自由基清除法 [原理] DPPH(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical)即1,1-二苯基-2-苦基肼基自由基。分子中，由于存在多个吸电子的-NO2和苯环的大π键，所以，氮自由基能稳定存在。 ON2 NONN2 NO2 当DPPH自由基被清除，其最大吸收波长519nm处的吸光度A值随之减小。DPPH这种稳定的自由基为清除自由基活性的检测提供了一个理想而又简单的药理模型。 [实验步骤] 1.1 DPPH测试液的配制 6.25,10ˉ5M 取DPPH 0.0246g溶于约100mL溶剂甲醇中，超声5min，充分振摇，务使上下各部分均匀。取1mL 该DPPH溶液，在519nm处测A值，使A,1.2-1.3之间最佳。该DPPH溶液最好避光保存，3.5小时内用完。 1.2 样品液的配制 Vc溶液 (0.25mg/ml) 称取Vc 0.01125g 溶于45mL乙醇溶液 1.3 预试 取DPPH溶液2mL，往其中加少量样品液，加样时，先少后多渐加，边加边混合，并观察溶液的褪色m情况，当溶液颜色基本褪去时，记下样品的加样量。 此加样量即为样品的最大用量，在此最大用量的基础上，往前设置5个用量，使之成等差数列。

【如】在预试过程中，发现加样到200μL时，DPPH溶液颜色基本褪去，则200μL为该样品液的最大用量。其用量梯度宜设为40、80、 120 、160、 200μL。浓度梯度mg/ml为 0.0025、0.0050、0.0100、0.0200、0.0400 μg/ml 2.5、5、 10、20、40 1.4 测量 A0值的测量:取DPPH溶液2 mL加入到小试管(或玻璃瓶)中，加95甲醇1mL，充分混合，测A值(517nm)，此A值为A(A0多在0.7-0.9之间)。 0 A值的测量: 取DPPH溶液2mL加入到小试管(或玻璃瓶)中，加样品液xμL (x是根据1.3 预试结果确定样品液的用量)，再加(1000 -x)μL 甲醇，混合，静置30分钟后，测A值(517nm)。加样表如下: 表1 加样表 样品液甲醇总体积 DPPH测试液 30μL 970μL 2 mL 3mL 60μL 940μL 2 mL 3mL 120μL 880μL 2 mL 3mL 240μL 760μL 2 mL 3mL 480μL520μL 2 mL 3mL 1.5 正式测量 方法大致与1.4相同，只不过，每测一个用量需要测三个平行数据。而且在每测一个用量的三个平行数据后，都要重测一次A. 0 [实验结果] 清除率(抑制率)的计算公式:

抗氧化功能评价方法

附件1： 抗氧化功能评价方法 试验项目、试验原则及结果判定 Items, Principles and Result Assessment 1 试验项目 1.1 动物实验 1.1.1 体重 1.1.2 脂质氧化产物：丙二醛或血清8-表氢氧异前列腺素（8-Isoprostane） 1.1.3 蛋白质氧化产物：蛋白质羰基 1.1.4 抗氧化酶：超氧化物歧化酶或谷胱甘肽过氧化物酶 1.1.5 抗氧化物质：还原性谷胱甘肽 1.2 人体试食试验 1.2.1 脂质氧化产物：丙二醛或血清8-表氢氧异前列腺素（8-Isoprostane） 1.2.2 超氧化物歧化酶 1.2.3 谷胱甘肽过氧化物酶 2 试验原则 2.1 动物实验和人体试食试验所列的指标均为必测项目。 2.2 脂质氧化产物指标中丙二醛和血清8-表氢氧异前列腺素任选其一进行指标测定，动物实验抗氧化酶指标中超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶任选其一进行指标测定。 2.3 氧化损伤模型动物和老龄动物任选其一进行生化指标测定。 2.4 在进行人体试食试验时，应对受试样品的食用安全性作进一步的观察。 3 结果判定 3.1 动物实验：脂质氧化产物、蛋白质氧化产物、抗氧化酶、抗氧化物质四项指标中三项阳性，可判定该受试样品抗氧化功能动物实验结果阳性。 3.2 人体试食试验：脂质氧化产物、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶三项指标中二项阳性，且对机体健康无影响，可判定该受试样品具有抗氧化功能的作用。

抗氧化功能检验方法 Method for the Assessment of Antioxidative Function 1 动物实验 1.1 实验动物 选用10月龄以上老龄大鼠或8月龄以上老龄小鼠，也可用氧化损伤模型鼠。单一性别，小鼠每组10－15只，大鼠8－12只。 1.2 剂量分组及受试样品给予时间 实验设三个剂量组和一个溶剂对照组，以人体推荐量的10倍（小鼠）或5倍（大鼠）为其中的一个剂量组，另设两个剂量组，高剂量一般不超过30倍，必要时设阳性对照组、空白对照组。受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天。 1.3 实验方法 1.3.1 老龄动物 选用10月龄以上大鼠或8月龄以上小鼠，按血中MDA水平分组，随机分为1个溶剂对照组和3个受试样品剂量组。3个剂量组给予不同浓度受试样品，对照组给予同体积溶剂，实验结束时处死动物测脂质氧化产物含量、蛋白质羰基含量、还原性谷胱甘肽含量、抗氧化酶活力。 1.3.2 D－半乳糖氧化损伤模型 1.3. 2.1原理 D-半乳糖供给过量，超常产生活性氧，打破了受控于遗传模式的活性氧产生与消除的平衡状态，引起过氧化效应。 1.3. 2.2造模方法 选25-30g健康成年小鼠，除空白对照组外，其余动物用D-半乳糖40mg－1.2g/kg BW 颈背部皮下注射或腹腔注射造模，注射量为0.1mL/10g，每日1次，连续造模6周，取血测MDA，按MDA水平分组。随机分为1个模型对照组和3个受试样品剂量组，3个剂量组经口给予不同浓度受试样品，模型对照组给予同体积溶剂，在给受试样品的同时，模型对照组和各剂量组继续给予相同剂量D-半乳糖颈背部皮下或腹腔注射，实验结束处死动物测脂质氧化产物含量、蛋白质羰基含量、还原性谷胱甘肽含量、抗氧化酶活力。 1.3.3 乙醇氧化损伤模型 1.3.3.1原理

楮实提取物体外抗氧化活性的研究

楮实提取物体外抗氧化活性的研究（作者： _________ 单位：___________ 邮编：___________ ） 作者：吴兰芳张振东景永帅杨娟 【摘要】目的探讨楮实提取物的体外抗氧化活性。方法先用80% 乙醇，然后用蒸馏水对楮实进行提取。其中醇提取物依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，水提部分经醇沉、干燥后得到楮实粗多糖。运用羟基（?OH）自由基体系、二苯代苦味基肼（DPPH ）?自由基体系和对 Fe3+的还原能力实验，比较楮实各提取物的抗氧化活性。结果楮实提取物对?OH自由基和DPPH ?自由基均有较好的清除作用，其中总醇提取物对? OH自由基的清除能力最强，其IC50值为0.28 mg/ml;乙酸乙酯提取物对DPPH ?自由基的清除效果最好，其IC50值达到0.08 mg/ml ;各提取物对Fe3+均有较强的还原能力，乙酸乙酯提取物还原效果最为明显。结论楮实提取物具有一定的抗氧 化活性，在抗衰老方面有广泛的应用前景。 【关键词】楮实；抗氧化活性；清除自由基；还原力 【Abstract ] Objective To study the antioxidant activities of extracts from Broussonetia papyrifera in vitro. Methods B.

papyrifera was treated with 80% etha nol and the n the residue was extracted with water. The etha nol extract were extracted respectively by petroleum ether, chloroform, ethyl acetate, n _buta nol. At the same time, crude polysaccharide was obta ined by etha nol precipitati on from water extract. The an tioxida nt activities of the above extracts in vitro were compared by the hydroxyl free radical ( OH), DPPH free radical (DPPH )and deoxidization Fe3+ reacti on system. Results The extracts from B. papyrifera had good scavenging effect on the hydroxyl free radical and DPPH free radical. Etha nol extract had the best scave nging effect on hydroxyl free radical system, which corresponding IC50 value was 0.28 mg/ml. Ethyl acetate extacts had the best scavenging effect on DPPH free radical, which corresponding IC50 value reached to 0.08 mg/ml. All of the extracts had strong deoxidization ability of Fe3+. Among of them, ethyl acetate extracts had significant deoxidizati on ability. Con clusi ons Brouss on etia papyrifera has stronger antioxidant activities and will be widely applicated on anti Jaging. 【Key words ] Broussonetia papyrifera; Antioxidant activity; Radical scave nging; Deoxidizati on 楮实子具有活血理气、补肾清肝、明目、利尿的功效，多用于腰膝酸软、虚劳骨蒸、头晕目眩、目生翳膜、水肿胀满等症〔1，2〕。 一些含楮实子的经典方药经多年临床验证具有确切的抗衰老、促智作

抗氧化酶测定实验方法

植物组织中丙二醛（MDA）含量的测定 一、原理 植物器官衰老或在逆境下遭受伤害，往往发生膜脂过氧化作用，丙二醛(MDA)是膜脂过氧化的最终分解产物，其含量可以反映植物遭受逆境伤害的程度。MDA从膜上产生的位置释放出后，可以与蛋白质、核酸反应，从而丧失功能，还可使纤维素分子间的桥键松驰，或抑制蛋白质的合成。因此，MDA的积累可能对膜和细胞造成一定的伤害。 丙二醛(MDA)是常用的膜脂过氧化指标，在酸性和高温度条件下，可以与硫代巴比妥酸(TBA)反应生成红棕色的三甲川(3，5，5—三甲基恶唑-2，4。二酮)，其最大吸收波长在532nm。但是测定植物组织中MDA时受多种物质的干扰，其中最主要的是可溶性糖，糖与TBA显色反应产物的最大吸收波长在450nm，但532nm处也有吸收。植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加，因此测定植物组织中MDA—TBA反应物质含量时一定要排除可溶性糖的干扰。低浓度的铁离子能够显著增加TBA与蔗糖或MDA显色反应物在532、450nm处的吸光度值，所以在蔗糖、MDA与TBA显色反应中需一定量的铁离子，通常植物组织中铁离子的含量为每克千重100—300ug·g-1，根据植物样品量和提取液的体积，加入Fe3+的终浓度为0．5umol·L-1。 二、方法直线回归法MDA与TBA显色反应产物在450nm波长下的吸光度值为零。不同浓度的蔗糖(0—25mmol·L-1)与TBA显色反应产物在 450nm的吸光度值与532nm和600nm处的吸光度值之差成正相关，配制一系列浓度的蔗糖与TBA显色反应后，测定上述三个波长的吸光度值，求其直线方程，可求算糖分在532nm处的吸光度值。UV-120型紫外可见分光光度计的直线方程为： Y532＝-0．00198十0．088D450 (44—1) D450、D532、D600分别代表450、532和600nm波长下的吸光度值。三、材料、仪器设备及试剂1、[仪器设备]紫外可见分光光度计1台；离心机1台；电子天平1台；10ml离心管4支；研钵2套；试管4支；刻度吸管：10ml1支，2ml1支；剪刀1把。

体外抗氧化实验操作步骤,包括配制试剂(完整资料).doc

【最新整理，下载后即可编辑】 3.2.5 体外抗氧化实验 发酵液的预处理：将摇瓶结束的发酵液装入无菌的10ml 离心管里，在天平上仔细平衡到10g ，在4℃，10000rpm ，离心10min ，小心转移上清液到新管子里标记备用。 （1）对超氧阴离子的清除作用 利用邻苯三酚自氧化体系测定样品对超氧阴离子的清除作用。取50 mmol·L -1的Tris-HCI 缓冲液3 mL (pH=8.2，含有2 mmol·L -1的Na 2EDTA)，加入l mL 待检样品，于25℃保温10 min ，然后加入25 ℃预温的5 mmol·L -1的邻苯三酚0.3 mL(预先用10 mmol·L -1的盐酸配制)，精确反应4 min ，用0.5 mL 浓盐酸终止反应，测定其在320 nm 下的吸光度。以10 mmol·L -1的盐酸作为空白调零，按如下公式计算清除率： () %100A A A -A ?-=对照样品空白样品对照清除率 (1) 式中A 对照为未加待检样品的邻苯三酚反应体系的吸光度（用1mL 10 mmol·L -1的盐酸替代样品）；A 样品为加入待检样品后的邻苯三酚反应体系的吸光度；A 样品空白为加入待检样品后的无邻苯三酚的反应体系的吸光度（用0.3mL 10 mmol·L -1的盐酸替代邻苯三酚溶液）。 注意事项： 1、 所用的两个比色皿杯子必须是石英的，上面会写着“Q ”,

或“S ”，不得使用玻璃的，玻璃比色皿要么什么都不 写，要么写着 “G ”。 2、 测定前要用100g 砝码和天平标定所用的移液枪插上枪 头后是否精准，要求误差不超过5‰，不是5％。 3、 测定大量数据前，使用者先配制10g/L 的Vc ，做三个 平行测定，精准度达到5%以内再开始正确的测定。 4、 测定时由于每个人有使用习惯和误差，中间不得换人 换枪。 （2）对DPPH ·的清除作用 DPPH·溶液的配制：准确称取47 mg DPPH·，用无水乙醇溶解并定容至100 mL ，避光保存(0～4℃)，使用时稀释至120 μmol·L -1。 取待检样品l mL 与120μmol·L -1的DPPH·溶液3 mL 加入同一试管中，摇匀，在黑暗中放置30 min ，以无水乙醇为空白，在517 nm 下测定其吸光度，并按下式计算清除率： () %100A A A -A ?-=对照样品空白样品对照清除率 (2) 式中A 对照为未加待检样品的DPPH·反应体系的吸光度(用1mL 无水乙醇补充体积)；A 样品为加入待检样品后的DPPH·反应体系的吸光度；A 样品空白为加入待检样品后的无DPPH·的反

氧化实验步骤

3．3氧化实验 从钮扣状样品上线切割下尺寸为10×IOX3mm的片状试样，首先将试样双面在金相预磨机上水磨，水磨砂纸从粗到细，一直到1000#Ah03水磨砂纸，然后在金相砂纸上从1#到5#进行细磨：最后在高速抛光机上抛光，使用的是Cr203磨料和水的乳液。腐蚀剂选用氢氟酸和水溶液，浓度和腐蚀时间随材料的不同而变化。将腐蚀好的试样在丙酮和酒精中清洗，再在烘箱中烘干后，用螺旋测微器测量试样尺寸，并用精度为0．1mg的电子天平称试样的原始重量。制备好的试样，其中每种成分、每个氧化温度下取三个试样在实验室静止空气中进行恒温氧化试验，以便进行氧化动力学分析。氧化温度分别为823、873和923K非连续恒温氧化300 h，每恒温氧化2，5，10，15，20，50，100，200，300 h后将坩埚从炉中取出，在干燥室中冷却至室温，连同坩埚用精度为O．1mg的电子天平称重，每一样品称重三次，取平均值，然后放入炉中继续氧化。

3．4试样截面金相分析 金相分析实验是研究金属材料热处理质量常用的分析手段，它能反映出金属 材料中的显微组织。钢铁热处理时的氧化往往伴随着表面脱碳现象的发生，表面 脱碳现象将给钢铁材料的机械性能和耐腐蚀性能带来不良影响。根据显微组织的 差别可以判断金属材料脱碳层深度，从而对比其表面质量的好坏。因此该实验可 以间接反映出涂层的保护效果。 2.3 高温氧化试验 2.3.1 试样制备 将烧结体线切割成5×5×30mm 的块状毛坯，经砂轮打磨、研磨、抛光，再 用酒精在超声波清洗器中清洗30min，之后置于80℃干燥箱中干燥，每隔5 个 小时，在AY-120(精度为万分之一克)分析天平上称量一次，直至前后称量差别不超过0.0001g。 2.3.2 坩锅的焙烧 准备坩锅若干只，用清洁纱擦净，并标记。放入普通箱式电阻炉中，在 1000℃下焙烧5 小时后取出。冷却至室温后，再次放入炉中焙烧5 小时，照此方法操作4 次。 2.3.3 实验过程 将试样分别放进事先作好标记的坩锅内，采用分析天平称量不同时间内试 样的氧化增重质量。 本实验采用恒温氧化法，在750℃静态空气中氧化，恒温氧化实验依据 GB/T13303-91《钢的抗氧化性能测定方法》及参考HB5258-2000《钢及高温合 金抗氧化性能测定试验方法》标准进行。高温氧化性能试验在高温箱式加热电阻炉8X-4-11 内进行。当温度升高至750℃时开始计时，并在0h、5h、10h、 15h、20h、25h、30h、40h、50h、60、80h、100h 时间点取出试样，冷却室温后称量试样质量。 赵能伟,郑勇,刘林艳等.Ti(C，N)基金属陶瓷力学性能和高温抗氧化性能的研究[J].硬质合金,2007,24（3）. 文研究了加不同比例的TaC、NbC对Ti(C，N)一NiMo系金属陶瓷的力学性能的影响及在750℃空气中的氧化行为．测定并计算了恒温氧化增重与时问的函数关系及氧化速率常数。结果表明，这类陶瓷材料的氧化为“钝性氧化。 2．2高温氧化试验 图4表示1450℃烧结温度下所得试样A1、A2、A3、A4在750℃空气中氧化100 h单位面积氧化增重曲线。从图中可以看出，试样A1、A2、A3、A4在氧化前20 h内，氧化增重较明显，后80 h氧化增 重较为缓慢，氧化增重与氧化时间的平方根成正比，即Am与时间t之间符合抛物线规律，说明这类材料的氧化为“钝性氧化”，即氧化初期氧化速度较快，增重较为明显，随着氧化膜的形成和膜厚度的增加，氧化速率趋于缓慢。经比较可以看出，试样A2的单位面积氧化增重明显低于其他试样的氧化增重，说明TaCfNbC质量比为4：3时有助于提高Ti(C。N)

几种生物活性物质体外抗氧化能力评价技术的研究解读

第38卷第3期2802009年5月 卫生研究 JO U R N A L O F H Y G I E N E R ES EA R C H V01.38N o.3 M ay2009 文章编号:1000-8020(200903.02∞.04 几种生物活性物质体外抗氧化能力评价技术的研究 刘小兵朴建华1田园 中国疾病预防控制中心营养与食品安全所,北京100050 论著 摘要:目的研究生物活性物质体外抗氧化能力评价方法,应用体外理化环境下建立起来的评价方法对受试物进行初步抗氧化能力评估。方法联合应用2,2’.连氮.双.(3.乙基苯并噻唑.6.磺酸二铵盐(AB T S 法与铁离子还原/抗氧化能力测定法(r aA P法用于生物活性物质体外抗氧化能力研究。在A B T S法中。使用 紫外可见分光光度计734nm波长下测定以槲皮素、姜黄素、D L-a.生育酚和原花青素等为代表的生物活性物 质;在FR A P法中,运用酶标仪,595nm波长处测定同样受试物的抗氧化能力。结果A B TS法:槲皮素和姜黄 素的抗氧化活性T E A C值分别约为2.02和0.50;而l g D L-a.生育酚、原花青素清除自由基的能力相当于

2.06m m ol、2.897m m ol的Trol ox清除自由基的能力;F RA P法:抗氧化活性以1.O m m ol/L FeS04为参考标准,槲皮 素、姜黄素和Tr ol ox摩尔当量约为5.73、1.18和2.09;而D L-a.生育酚和原花青素抗氧化活性分别是207.7m g、 156.36r ag。结论A B TS法与FR A P法联合应用,操作简便、结果可靠,尤其适宜作为生物活性物质体外抗氧 化能力的评价方法。 关键词:生物活性物质氧化应激中图分类号:R151.2Q591A B T S法FR A P法抗氧化能力 文献标识码:A R ese a r ch on t he eval uat i on m et hods f or ant i oxi dant capaci t y of s ever al bi oact i ve s ubs t ances/n vi t r o LI U X i aobi ng,P I A O Ji anhua,TI A N Y ua n I nst i t ut e of N u t r i ti on a nd F oo d Saf et y,C hi nes e C ent er f or D i seas e C ont r ol a nd Pr event i on,B eij i ng100050,C h i na A bst r act:O bj ect t ve T o s t udy t he eval u at i on m e t h ods f or ant ioxi dant capaci t y of bioacti ve s ubs t B nce i n础阳,an d t O appl y t he m e t h ods w h i ch i s es t abl i s hed i n physi eochem i ea l envi r onm ent i n or der t o g i v e t he pr eli m i nar y as se韶,m ent of t e st subj e ct s.M et hods7r he co m bi ne d appli cat i on of A B T S and F R A P m e t h ods i n t he as s es s m ent https://www.wendangku.net/doc/0c13907275.html, i ng t he U V—V I S

高一化学《化学实验基本方法》教案

第一章从实验学化学 第一节化学实验基本方法 一、教材分析 1.教学内容分析 “化学实验基本方法”在强调化学实验安全性的基础上，通过“粗盐的提纯”实验，复习过滤和蒸发等操作。蒸馏则是在初中简易操作的基础上引入使用冷凝管这一较正规的操作。在复习拓宽的基础上又介绍一种新的分离和提纯方法——萃取。本节还结合实际操作引入物质检验的知识，这样由已知到未知，由简单到复杂，逐步深入。 2.教学重点的分析与确定： 化学是以实验为基础的科学，通过让学生讨论一些实验问题来初步体会化学研究的方法。初中化学已经介绍了药品的取用、物质的加热、仪器的洗涤、天平的使用等基本操作，也介绍了过滤、蒸发等分离操作。本节选择粗盐提纯这一涉及基本操作较多的典型实验，复习实验原理和步骤，使学生掌握溶解、过滤、蒸发、离子检验等基本操作。进而继续学习蒸馏和萃取等新的分离方法，使学生的实验技能进一步提高。基于以上观点： 教学重点：混合物的分离与离子的检验，分离与提纯过程的简单设计。 3.教学难点的分析与确定： 从三维目标的层面上来看，掌握化学实验方法是学习化学的重要途径。能根据物质的性质设计分离和提纯的方案，并在初步掌握溶解、过滤的基础上学习蒸馏、萃取的操作，可以由已知到未知，由简单到复杂，逐步深入，并可为选修课《实验化学》中相关知识的学习打下良好的基础。基于以上观点： 教学难点：物质检验试剂的选择，蒸馏、萃取的操作，分离与提纯过程的简单设计。 二、学生分析 1.学生有一定知识基础，学习较为主动，有学习动机和兴趣，能与教师和同学进行良好的交流与合作，能够达到预定的学习目标与要求，积极关注教师创设的问题情景，积极主动参与到学习活动中去，学生在学习活动中能提出有意义的问题或能发表个人见解，能按要求正确操作，能够倾听、协作、分享。 2.学生在初中的学习过程中已经接触到一些实验知识，本章第一节的内容是对初中已有的有关实验知识的拓宽和提升。初中学生实验过程中已经涉及一些实验安全问题、分离的方法。已经初步了解了粗盐提纯的方法，蒸馏的简易装置。在本章中要在初中学习的基础上巩固粗盐提纯的操作，掌握蒸馏的实验室正规的装置和规范的操作，学习新的分离提纯的方法——萃取，还要了解有关离子的验检。可以看到第一节中学生学习的重点是混合物的分离与离子的检验。在分离提纯的学习过程中纯盐提纯有关的操作学生比较熟悉，其学习的难度不大。但对于课本中提到的提纯后溶液依然存在的杂质如何设计简单的实验进行分离提纯，对

抗氧化实验方法

2.2.3 香青兰挥发油抗氧化活性的检测 2.2. 3.1 有机自由基DPPH ·清除能力的测定 （1）实验试剂的配制 DPPH ·无水乙醇溶液：称取19.72mg DPPH ，用无水乙醇定容至500ml ，得到浓度为0.1mmol/L 的DPPH 溶液。 样品：吸取30μl 的挥发油，加入3.56ml 无水乙醇溶解挥发油；再将此溶液按照2倍梯度稀释至28倍。 （2）有机自由基DPPH ·清除能力的测定 向100μl DPPH ·乙醇溶液中加入不同浓度的香青兰挥发油及无水乙醇使总体积达到200μl 。振荡器混匀后，室温，避光放置30min 后，在518nm 处测定吸光度，平行测定3次，计算清除率。 %100) (0210?--=A A A A 清除率 式中：A 0--DPPH ·溶液100μl +无水乙醇100μl 的吸光度 A 1--DPPH ·溶液100μl +样品溶液100μl 的吸光度 A 2--样品溶液100μl +无水乙醇100μl 的吸光度 公式中引入A 2是为了消除样品溶液本身颜色对实验测定的干扰。 2.2. 3.2 超氧阴离子O 2-·清除能力测定 （1）实验试剂的配制 Tris-HCl 缓冲液：量取2.1ml 浓HCl ，加蒸馏水定容到250ml ，得到0.1mol/LHCl 溶液；称取三羟甲基氨基甲烷3.0285g ，加蒸馏水溶解，再加入114.5ml 0.1mol/LHCl 溶液，用蒸馏水定容至500ml 得pH=8.2浓度为50mmol/L 的Tris-HCl 缓冲液液。 邻苯三酚溶液：称取37.833mg 邻苯三酚，用0.01mol/LHCl 溶液溶解定容至500ml ，得浓度为0.3mmol/L 的邻苯三酚溶液。 样品：吸取挥发油100μl ，加3.0ml 无水乙醇稀释，再将此溶液按2倍梯度稀释25倍。 （2）清除超氧阴离子O 2-·能力测定 邻苯三酚自氧化速率V 0的测定：在试管中加入5ml pH 值为8.2的Tris-HCl 缓冲液，加入2ml 蒸馏水，于25℃恒温水浴中放置20分钟，再加入0.5ml 邻苯三酚溶液，立即混匀倒入比色杯中，用紫外分光光度计在325nm 处测定A 值，每反应30s 记录一组，共反应5min 。将记录的数据以时间为横坐标，吸光值为纵坐标，作直线回归得到的斜率表示邻苯三酚自氧化速率V 0。 挥发油清除超氧阴离子速率V 1的测定：在试管中加入5ml pH 值为8.2的Tris-HCl 缓冲液，加入1.8ml 蒸馏水，0.2ml 不同浓度的挥发油于25℃恒温水浴中放置20分钟，再加入0.5ml 邻苯三酚溶液，立即混匀倒入比色杯中，用紫外分光光度计在325nm 处测定A 值，每反应30s 记录一组，共反应5min 。将记录的数据以

(完整版)抗氧化试验方法

一、试验方法 1、DPPH自由基清除率的测定 本实验采用1,1-diphenyl-2-picryhydrazyl(DPPH)法测定样品清除自由基活性。 1.1实验原理 1,1-二苯基-2-苦肼基（1,1-diphenyl-2-picryhydrazyl(DPPH)）是一种稳定的以氮为中心的自由基，其乙醇溶液显紫色，最大吸收波长为517nm。当DPPH 溶液中加入自由基清除剂时，其孤对电子被配对时，吸收消失或减弱，导致溶液颜色变浅，显黄色或淡黄色，在517nm处的吸光度变小，其变化程度与自由基清除程度呈线性关系，故该法可用清除率表示，清除率越大，表明该物质清除能力越强。 1.2溶液的配制 0.08mmol/L DPPH溶液的配制：精密称取DPPH8.0mg，用无水乙醇溶解并定容至200ml棕色容量瓶中，得浓度为0.004%的DPPH溶液，避光保存，备用。 1.3实验步骤：分别取不同浓度的各样品溶液（0.24,0.48,0.72,0.96,1.20mg/ml）1.0ml，置10ml离心管中，加入3.0ml的DPPH溶液，室温避光反应30min，同时以无水乙醇为空白，于517nm波长处测定吸光值。按下列公式计算DPPH自由基清除率。 DPPH自由基清除率（%）= A0-(A s-A c)/ A0×100% 公式中，A0—1.0ml蒸馏水+3.0mlDPPH溶液的吸光度值 A s—1.0ml样品溶液+3.0mlDPPH溶液的吸光度值 A c—1.0ml样品溶液+3.0ml无水乙醇的吸光度值

将实验重复三次，求得清除率的平均值。 2、总的抗氧化活性的测定 总的抗氧化活性实验采用改良后的Prieto法。 2.1实验原理：磷钼络合物测定方法的原理是Mo(VI)被抗氧化物质还原成绿色的Mo(V)络合物，其最大吸收波长为695nm。抗氧化物质活性越强，测定的吸光度值越大。此方法操作简单，所用试剂低廉、方法重现性好，非常适合抗氧化性的测定。 2.2溶液的配制 样品液:同上 磷钼试剂:0.6mol/L浓硫酸溶液、28mmol/L磷酸钠溶液和4mmol/L钼酸胺溶液混匀，即得。 2.3实验步骤 分别取不同浓度的各样品溶液（0.24,0.48,0.72,0.96,1.20mg/ml）1.0ml，置10ml 离心管中，加入3.0ml试剂溶液（试剂溶液中包括0.6mol/L的硫酸、28mmol/L 的磷酸钠、4mmol/L的钼酸铵）。混合液于95℃水浴锅中分别水浴30min，60min、90 min、120 min、150 min。 放冷至室温，695nm处测吸光度值。以蒸馏水为空白，吸光度值越大，表明抗氧化能力越强。BHT做为阳性对照。将实验重复三次，求平均值。 三、还原力的测定 3.1 实验原理 以普鲁士蓝[Fe4(Fe(CN)6)3] 之生成量作为指标，将六氰合铁酸钾[K3 Fe(CN)6] 还原成K4Fe(CN)6，再利用Fe3+形成Fe4(Fe(CN)6)3，由700nm处吸光

抗氧化活性实验方法

抗氧化活性实验方法（体外实验） 1、清除DPPH自由基能力的测定 称取一定量的DPPH，用无水乙醇配制成0.04mg/mL的DPPH溶液。分别取2mL不同浓度（2，4，6，8mg/mL）的溶液，加入2mL DPPH溶液，混合均匀，室温放置30min后，5000r/min离心10min。取上清液于517nm处测吸光值。用Vc作为阳性对照。样品对DPPH 自由基的清除率用以下公式计算： DPPH () 12 1100% A A A - =-? 清除率 A0—2mL无水乙醇+ 2mL DPPH溶液的吸光值； A1—2mL样品溶液+ 2mL DPPH溶液的吸光值； A2—2mL样品溶液+ 2mL无水乙醇的吸光值。 2、总还原能力的测定 在10mL离心管中分别加入0.2mol/L pH 6.6的磷酸缓冲液2.5mL和不同浓度（2，4，6，8mg/mL）的溶液1mL，加入2.5 mL 1%铁氰化钾，混合均匀后于50℃反应20min。取出后加入2.5mL 10%三氯乙酸终止反应，5000r/min离心10min。取上清液2.5mL，加入2.5mL 蒸馏水和0.5mL FeCl3，混匀后静置10min，在700nm处检测吸光值。Vc作为阳性对照。 3、对Fe2+离子螯合能力的测定 分别取1mL不同浓度（2，4，6，8mg/mL）的溶液和3.7mL蒸馏水，加入2mmol/L的FeCl2溶液0.1mL和5mmol/L的菲洛嗪溶液0.2mL，25℃水浴10min，于562nm处测吸光值。EDTA为阳性对照。样品对Fe2+的螯合率计算公式如下： Fe2+ () 12 1100% A A A - =-? 螯合率 A0—1mL蒸馏水代替反应体系中样品溶液后的吸光值； A1—样品溶液反应后的吸光值； A2—0.1mL的蒸馏水代替反应体系中FeCl2溶液后的吸光值。 4、超氧自由基（O2-）清除率的测定 采用邻苯三酚自氧化法测定。取50mmol/L Tris-HCl缓冲液（pH8.2）4.5mL，置25℃水浴中保温20min，分别加入1mL样品溶液和0.4mL 25mmol/L邻苯三酚溶液，混匀后于25℃水浴中反应5min，加入1mL 8mmol/L HCl终止反应，于299nm处测定吸光度（A x），空白对照组以相同体积蒸馏水代替样品。按下式计算O2-清除率：

高一化学必修1 化学实验基本方法(2)

高一化学必修1 化学实验基本方法（2） 【学习目标】 1．初步了解根据混合物的性质，选择不同的分离方法对物质进行分离。 2．掌握过滤、蒸发等实验操作。 【学习重点】根据混合物的性质，选择不同的分离方法对物质进行分离。 【预备知识】 1．过滤是分离___________________________混合物的方法。 仪器： 操作要点： 2．蒸发是用__________________________的方法较少溶液中的__________，使_________从溶液中析出的方法，该方法又称为蒸发结晶。 仪器： 操作要点：液体的量不得超过蒸发皿容量的__________；加热过程中，用玻璃棒__________ ______________，以免_______________________________________________；当_____________ ____________________________时，停止加热。 3．常见离子的检验

【基础知识】 自然界中的物质绝大多数以_______________的形式存在。 根据组成混合物的物质状态不同，可分为： 一、粗盐提纯 粗盐属于____________________混合物。 如果要除去粗盐中含有的可溶性杂质CaCl2、MgCl2及一些硫酸盐，按下表所示顺序，应加入什么试剂？

在实际操作中，能否做到适量即加入试剂与杂质恰好完全反应呢？ 加入你选择的试剂除掉杂质后，有没有引入其他离子？想一想可用什么方法再把它们除去？ 调换以上三种试剂的顺序，对结果会有影响吗？ 除杂质的原则是____________________________________________________________。 在实际进行方案设计时，除要考虑所加试剂外，还要考虑加入试剂的__________________、____________、以及_________________________________等。 思考：KNO3中若含有K2SO4和KOH等杂质，想一想，应加入什么试剂除去? 【过关训练】 A组 1．实验室里进行过滤和蒸发操作时，都要用到的仪器是（）

云南白药体外抗氧化活性作用

第38卷第5期 唐山师范学院学报 2016年9月 Vol.38 No.5 Journal of Tangshan Normal University Sep. 2016 ────────── 基金项目：安徽省重点实验室绩效项目（1606c08226），院校中青年科研基金项目（WK201601），安徽省大生创新创业训练 计划项目（201510368123） 收稿日期：2016-06-30 作者简介：李萍（1984-），女，江苏兴化人，硕士，实验师，研究方向为天然药物药理学。 -75- 云南白药体外抗氧化活性作用 李 萍1,2，秦国正1,2，何宝佳1，卜晓阳1，李贵州1 （1. 皖南医学院 药学院，安徽 芜湖 241002；2. 活性生物大分子研究安徽省重点实验室，安徽 芜湖 241002） 摘 要：以VC 为对照，测定云南白药对DPPH 自由基、羟基自由基的清除力，以及还原能力测定，研究云南白药的体外抗氧化活性。结果表明，云南白药具有抗氧化活性，可以有效清除DPPH 自由基、羟基自由基、并具有还原能力。 关键词：云南白药；抗氧化；自由基 中图分类号：Q5-33 文献标识码： A 文章编号：1009-9115(2016)05-0075-03 DOI ：10.3969/j.issn.1009-9115.2016.05.023 In Vitro Antioxidant Activity of Yunnan Baiyao LI Ping 1,2, QIN Guo-zheng 1,2, HE Bao-jia 1, BU Xiao-yang 1, LI Gui-zhou 1 (1. School of Pharmacy, W annan Medical College, Wuhu 241000, China; 2. Anhui Province Key Laboratory of Biological Macro-Molecules Research, Wuhu 241000, China) Abstract: With VC as control, by determinating Yunnanbaiyao on DPPH free radical scavenging, hydrogen peroxide scavenging, as well as the reducing power, the study in vitro antioxidant activity of Yunnan Baiyao was made. The results show that Yunnan Baiyao exhibits antioxidant activity, effectively antioxidant activity, DPPH radical, hydrogen peroxide scavenging and reducing power. Key Words: Yunnanbaiyao; antioxidant; free radical 云南白药是我国著名的中成药，由三七、冰片、重楼、麝香等名贵重药材制成，具体配方至今为不传之密。近年来研究发现云南白药除治疗跌打损伤和治疗各种出血及溃疡有奇效外，还具有保护缺血心肌[1]、促进人牙髓干细胞分化[2]和骨骼肌急性损伤后卫星细胞的再生[3]、抗肿瘤[4]的作用，对糖尿病引起的牙周炎[5]及骨质疏松的治疗[6]也有良好的效果。Liu 等[7-8]用高效液相色谱及质谱对其中的某些成分进行了定量，但云南白药成分复杂，目前对其作用机制尚不明确。本试验采用DPPH 法、结晶紫法、铁氰化钾法对其体外抗氧化活性和还原能力进行测定，考察云南白药的体外抗氧化作用，探讨其可能的作用机制，为进一步研究该药物的用途，提供实验依据和理论支持。 1 材料与方法 1.1 材料与试剂 云南白药粉（云南白药集团股份有限公司）；DPPH （Sigma ）、Tris-HCl （Amresco ）；磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、硫酸亚铁、铁氰化钾、结晶紫、三氯乙酸均为国药分析纯。 1.2 仪器与设备 AL104分析天平（梅特勒）；UV2550紫外可见记录分光光度计（岛津）；TDL-5-A 台式离心机（上海飞鸽）；HH-6数显电子恒温水浴锅（江苏金坛宏华仪器厂）。 1.3 DPPH 法测定云南白药体外抗氧化活性 将云南白药粉和VC 分别用蒸馏水配制成0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg·mL -1的溶液，DPPH 用无水乙醇配制成2×10-4 mol·L -1的溶液。以无水乙醇作为参比，取2 mL 不同浓度的云南白药溶液及2 mL 的DPPH 溶液加入具塞试管中，摇匀后室温放置30 min ，测定517 nm 处的吸光度A i 。同时无水乙醇作参比测定2 mL 不同浓度的云南白药与2 mL 无水乙醇混合液在517 nm 的吸光度