实验室常用技术参数资料精
实验室常用技术参数资料一、核酸及蛋白质常用数据
1．核苷三磷酸的物理常数
化合物分子
量
λmax(pH7.0) 1摩尔溶液（pH7.0）中λmax时的最大吸收值OD280/OD260
ATP 5 .15 CTP 483 271 9000 0.97 GTP 523 253 13700 0.66 UTP 484 262 10000 0.38 dATP 494 259 15200 0.15 dCTP 467 271 9300 0.98 dGTP 5 .66 dTTP 482 267 9600 0.71
2．常用核酸的长度与分子量
核酸核苷酸数分子量
λDNA 48502（双链环状） 3.0×107
pBR322 4363（双链） 2.8×106
28SrRNA 4800 1.6×106
23SrRNA 3700 1.2×106
18SrRNA 1900 6.1×105
19SrRNA 1700 5.5×105
5SrRNA 120 3.6×104 tRNA（大肠杆菌）75 2.5×104
3．常用核酸蛋白换算数据
（1）重量换算
1μg=10-6g 1pg=10-12g
1ng=10-9g 1fg=10-15g
（2）分光光度换算：
1A260双链DNA=50μg/ml
1A260单链DNA=30μg/ml
1A260单链RNA=40μg/ml
（3）DNA摩尔换算：
1μg 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol末端
1μg pBR322 DNA=0.36pmol
1pmol 1000bp DNA=0.66μg
1pmol pBR322=2.8μg
1kb双链DNA（钠盐）=6.6×105道尔顿
1kb单链DNA（钠盐）=3.3×105道尔顿
1kb单链RNA（钠盐）=3.4×105道尔顿
（4）蛋白摩尔换算：
100pmol分子量100，000蛋白质=10μg
100pmol分子量50，000蛋白质=5μg
100pmol分子量10，000蛋白质=1μg
氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿
（5）蛋白质/DNA换算：
1kb DNA=333 个氨基酸编码容量=3.7×104MW蛋白质
10，000MW蛋白质=270bp DNA
30，000MW蛋白质=810bp DNA
50，000MW蛋白质=1.35kb
100，000MW蛋白质=2.7kb DNA
4．常用蛋白质分子量标准参照物
（1）高分子量标准参照（2）中分子量标准参照（3）低分子量标准参照
肌球蛋白分子量磷酸化酶B 97，400 碳酸酐酶31，00 肌球蛋白212，000 牛血清白蛋白66，200 大豆脻蛋白酶21，500 β-半乳糖甘酶B 116，000 谷氨酶脱氢酶55，000 抑制剂
磷酸化酶B 97，400 卵白蛋白42，700 马心肌球蛋白16，900 牛血清白蛋白66，200 醛缩酶40，000 溶菌酶14，400 过氧化氢酶` 57，000 碳酸酐酶31，000 肌球蛋白（F1）8，100 醛缩酶40，000 大豆脻蛋白酶21，500 肌球蛋白（F2）6，200
抑制剂肌球蛋白（F3）2，500
溶菌酶14，400
5．常用DNA分子量标准参照物
λDNA/HindⅢλDNA/EcoRⅠλ/HindⅢ+EcoRⅠpBR322/HaeⅢ
23 27 587 123
9416 742
6557 58
436 8 80 2322 4843 3530 434 64
2 267 57
564 1904 234 51 125 1584 213 21
1375 192 18
974 184 11
831 124 7
564
125
续上表
pBR322/HinfⅠφχ174/HinfⅠφχ174/Hae Ⅲφχ174/TapⅠ1631 726 140 1353 2914
517 7 75
5 404
396 500 82 603 327
344 417 66 310 231
298 413 48 281 141
22
22
154 200 24 194 33
75 151 118 20
72
二、常用缓冲液
1．分子克隆常用缓冲液
2．磷酸缓冲液
（1）25℃下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制※
pH 1mol/L K2HPO4(ml) 1mol/L KH2PO4(ml)
5.8 8.5 91.5
6.0 13.2 86.8
6.2 19.2 80.8
6.4 2
7.8 72.2
6.6 38.1 61.9
6.8 49.7 50.3
7.0 61.5 38.5
7.2 71.7 28.3
7.4 80.2 19.8
7.6 86.6 13.4
7.8 90.8 9.2
8.0 94.0 6.2
（2）25℃下0.1mol/L磷酸钠缓冲液的配制※
pH 1mol/L Na2HPO4(ml) 1mol/L NaH2PO4(ml)
5.8 7.9 92.1
6.0 12.0 88.0
6.2 1
7.8 82.2
6.4 25.5 74.5
6.6 35.2 64.8
6.8 46.3 53.7
7.0 57.7 42.3
7.2 68.4 31.6
7.4 77.4 22.6
7.6 84.5 15.5
7.8 89.6 10.4
8.0 93.2 6.8
※:用蒸馏水将混合的两种1mol/L贮存液稀释至1000ml，根据Henderson-Hasselbalch方程计算其pH值：
pH=pK’+1g([质子受体]/[质子供体])
在此，pK’=6.86(25℃)。
3．电泳缓冲液
测序凝胶加样缓冲液
98%去离子甲酰胺
10mol/L EDTA(pH8.0)
0.025%二甲苯青FF
0.025%溴酚蓝
甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。不过，一旦略呈黄色，则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与Dowex XG8混合床树脂共同搅拌1小时进行去离子处理，并用Whatman 1号滤纸过滤2次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存于-70℃。
常用的电泳缓冲液
缓冲液使用液浓贮存液（每升）
Tris-乙酸（TAE）1×：0.04mol/L Tris-乙酸50×：242g Tris碱
0.001mol/L EDTA 57.1ml冰乙酸
100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
Tris-磷酸（TPE）1×:0.09mol/L Tris-磷酸10×:10g Tris碱
0.002mol/L EDTA 15.5ml85%磷酸（1.679g/ml）
40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
Tris-硼酸（TBE）a0.5×0.045mol/L Tris-硼酸5×：54g Tris碱
0.001mol/L EDTA 27.5硼酸
20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
碱性缓冲液b1×:50mmol/L NaOH 1×:5ml 10mol/L NaOH
1mmol/L EDTA 2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
Tris-甘氨酸c1×:25mmol/L Tris 5×:15.1g Tris
250mmol/L 甘氨酸94g 苷氨酸（电泳级）（pH8.3）
0.1% SDS 50ml 10% SDS(电泳级)
说明：
①TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液，出现沉淀后则予以废弃。
以片都以1×TBE作为使用液（即1：5稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电泳。但0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1：10稀释的贮存液作为使用液。
进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，故通过缓冲液的电流量通常较大，需要使用1×TBE以提供足够的缓冲容量。
②碱性电泳缓冲液应现用现配。
③Tris-甘氨酸缓冲液用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
2×SDS凝胶加样缓冲液：
100mmol/L Tris·HCl(6.8)
200mmol/L二硫苏糖醇（DTT）
4%SDS（电泳级）
0.2%溴酚蓝
20%甘油
不含DTT的2×SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温，应在临用前取1mol/L贮存液现加于上述缓冲液中。4．凝胶加样缓冲液
缓冲液类型6×缓冲液贮存温度
Ⅰ0.25%溴酚蓝
4℃0.25%二甲苯青FF
40%（W/V）蔗糖水溶液
Ⅱ0.25溴酚蓝
室温0.25%二甲苯青FF
15%聚蔗糖(Ficoll400)
Ⅲ0.25%溴酚蓝
4℃0.25%二甲苯青FF
30%甘油水溶液
Ⅳ0.25%溴酚蓝
4℃40%(W/V)蔗糖水溶液
碱性加样缓冲液:
300mmol/L NaOH
6mmol/L EDTA
Ⅴ18%聚蔗糖(Ficoll400)
4℃0.15%溴甲酚绿
0.25%二甲苯青FF
使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以确保DNA均匀进入样品孔内；使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍，而与琼脂糖浓度无关。以0.5×TBF作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同，而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。在琼脂糖浓度为0.5%～1.4%的范围内，这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。
选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是，对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料，因为在碱性pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。
5．各种pH值的Tris缓冲液的配制
各种pH值的Tris缓冲液的配制
所需pH值（25℃）0.1mol/L HCl的体积
7．1 45．7
7．2 44．7
7．3 43．4
7．4 42．0
7．5 40．3
7．6 38．5
7．7 36．6
7．8 34．5
7．9 32．0
8．0 29．2
8.1 26.2
8.2 22.9
8.3 19.9
8.4 17.2
8.5 14.7
8.6 12.4
8.7 10.3
8.8 8.5
8.9 7.0
某一特定pH值的0.05mol/L Tris缓冲液的配制：将50ml 0.1mol/L Tris碱溶液与上表所示相应体积（单位：ml）的0.1ml/L HCl混合，加水将体积调至100ml
（2）温度对50mmol/L Tris·HCl液pH值的影响
4℃25℃37℃
8．1 7．5 7．2
8．2 7．6 7．3
8．3 7．7 7．4
8．4 7．8 7．5
8．5 7．9 7．6
8．6 8．0 7．7
8．7 8．1 7．8
8．8 8．2 7．9
8．9 8．3 8．0
9．0 8．4 8．1
9．1 8．5 8．2
9．2 8．6 8．3
9．3 8．7 8．4
9．4 8．8 8．5
（6）常用缓冲液的pKa值
缓冲液分子量pKa值缓冲范围
Tris a12.1 8.08 7.1～7.9
HEPES b283.3 7.47 7.2～8.2
MPOS c209.3 7.15 6.6～7.8
PIPES d304.3 6.76 6.2～7.3
MES e195.2 6.09 5.4～6.8
a：三羟甲基氨基甲烷；b：N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磷酸；c：3-（N-吗啉代）丙磺酸；d：N，N’-双（2-乙磺酸）哌嗪；e：2-（N-吗啉代）乙磺酸。
7．温度对常用缓冲液pH的影响
缓冲体系pKa(20℃) △pKa/10℃
Mes 6.15 -0.110
Ada 6.60 -0.110
PiPes 6.80 -0.085
Aces 6.90 -0.200
Bes 7.15 -0.160
Mops 7.20 -0.013
Tes 7.50 -0.200
Hepes 7.55 -0.014
Tricine 8.15 -0.210
Tris 8.30 -0.310
Bicine 8.35 -0.180 Glycylglycine 8.40 -0.280
三、常用酶的配制
1．溶菌酶
用水配制成50mg/ml的溶菌酶溶液，分装成小份并保存于-20℃。每一小份一经使用后便予丢弃。
2．蛋白水解酶类
贮存液贮存温度反应浓度反应缓冲液温度预处理
0.01mol/L Tris(pH7.8)
链霉蛋白酶a20mg/ml -20℃（溶于水）1mg/ml 0.01mol/L EDTA 37℃自消化b
0.5% SDS
0.01mol/L Tris(pH7.8)
蛋白酶K c20mg/ml -20℃（溶于水）50μg/ml 0.005mol/L EDTA 37～56℃无须预处理
0.5% SDS
a：链霉蛋白酶是从链球菌（Streptomyces griseus）中分离到的一种丝氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。
b：自消化可消除DNA酶和RNA酶的污染，经自消化的链酶蛋白酶的配制方法如下：把该酶的粉末溶解于10mmol./l Tri s·HCl(pH7.5)、10mmol/l NaCl中，配成20mg/ml浓度，于37℃温育1h。经消化的链霉蛋白酶分装成小份放在密封试管中，保存-20℃。
c：蛋白酶K是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，从林伯氏白色念球菌（Tritirachium album Limber）中纯化得到。该酶有两个Ca2+结合位点，它们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。然而，如果从该酶中除去Ca2+，由于出现远程的结构变化，催化活性将丧失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。所以，蛋白酶K消化过程中通常加入EDTA（以抑制依赖于Mg2+的核酸酶的作用）。但是，如果要消化对蛋白酶K具有较强耐性的蛋白，如角蛋白一类，则可能需要使用含有1mmol/l Ca2+而不含EDTA的缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前要加入EGT（pH8. 0）至终浓度为2mmol/L,以鳌合Ca2+。
3．无DNA酶的RNA酶
将胰RNA酶（RNA酶A）溶于10mmol/l Tris·HCl(pH7.5)、15mmol/l NaCl中，配成10mg/ml的浓度，于100℃加热15m in，缓慢冷却至室温，分装成小份保存于-20℃。
四、常用抗生素溶液
抗生素
贮存液a工作浓度
浓度保存条件严紧型质粒松弛型质粒
氨苄青霉素50mg/ml(溶于水) -20℃20μg/ml 60μg/ml 羧苄青霉素50mg/ml(溶于水) -20℃20μg/ml 60μg/ml 氯霉素34mg/ml(溶于乙醇) -20℃25μg/ml 170μg/ml 卡那霉素10mg/ml(溶于水) -20℃10μg/ml 50μg/ml 链霉素10mg/ml(溶于水) -20℃10μg/ml 50μg/ml 四环素b5mg/ml(溶于乙醇) -20℃10μg/ml 50μg/ml
a：以水为溶剂的抗生素贮存液通过0.22μm滤器过滤除菌。以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。
b：镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基（如LB培养基）。
五、常用贮存液的配制
1．30%丙烯酰胺溶液
【配制方法】
将29g丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100m l。用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于室温。
【注意】
丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料。
一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子，在丙烯酰胺贮存液中加入大约0.2体积的单床混合树脂（MB-1Mallinckrodt），搅拌过夜，然后用Whatman 1号滤纸过滤以纯化之。
在贮存期间，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。
2．40%丙烯酰胺
【配制方法】
把380g丙烯酰胺（DNA测序级）和20g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为600ml的蒸馏水中。继续按上述配制30%丙烯酰胺溶液的方法处理，但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为1L。
【注意】
见上述配制30%丙烯酰胺的说明，40%丙烯酰胺溶液用于DNA序列测定。
3．放线菌素D溶液
【配制方法】
把20mg放线菌素D溶解于4ml 100%乙醇中，1：10稀释贮存液，用100%乙醇作空白对照读取OD440值。放线菌素D （分子量为1255）纯品在水溶液中的摩尔消化系数为21，900，故而1mg/ml的放线菌素D溶液在440nm处的吸光值为0.18 2，放线菌素D的贮存液应放在包有箔片的试管中，保存于-20℃。
【注意】
放线菌素D是致畸剂和致癌剂，配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作，而不能在开放在实验桌面上进行，谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。
药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度，这类制品便可用于抑制自身引导作用。
4．0.1mol/L腺苷三磷酸（ATP）溶液
【配制方法】
在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0，用蒸馏水定容1ml，分装成小份保存于-70℃
5．10mol/L乙酸酰溶液
【配制方法】
把770g乙酸酰溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。
6．10%过硫酸铵溶液
【配制方法】
把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中，该溶液可在4℃保存数周。
7．BCIP溶液
【配制方法】
把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐（BCIP）溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃
8．2×BES缓冲盐溶液
【配制方法】
用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N，N-双（2-羟乙基）-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4，室温下用HCl调节该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成小份，保存于-2 0℃。
9．1mol/L CaCl2溶液
【配制方法】
在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl2·6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于-20℃。
【注意】
制备感受态细胞时，取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml，用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，然后骤冷至0℃。
10．2.5mol/L CaCl2溶液
【配制方法】
在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl2·6H2O，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。
11．1mol/L二硫苏糖醇（DTT）溶液
【配制方法】
用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。
【注意】
DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。
12．脱氧核苷三磷酸（dNTP）溶液
【配制方法】
把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右，用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节每一dNTP溶液的p H值7.0（用pH试纸检测），把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释，在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度，然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP，分装成小份贮存于-70℃。
碱基波长（nm）消化系数（ε）[L/（mol·cm）]
A 259 1.54×104
G 253 1.37×104
C 271 9.10×103
T 260 7.40×103
比色杯光径为1cm时,吸光度=εM
13．0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液
【配制方法】
在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na·2H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0（约需20g NaOH颗粒）然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。
【注意】
EDTA二钠盐需加入NaOH将溶液的pH值调至接近8.0，才能完全溶解。
14．溴化乙锭（10mg/ml溶液）
【配制方法】
在100ml水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。
【注意】
小心：溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性，使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套，称量染料时要戴面罩。
15．2×HEPES缓冲盐溶液
【配制方法】
用总量为90ml的蒸馏水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO4·2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES，用0.5mol/l NaOH 调节pH值至7.05，再用蒸馏水定容至100ml。用0.22μm滤器过滤除菌，分装成5ml小份，贮存于-20℃。
16．IPTG溶液
【配制方法】
IPTG为异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（分子量为238.3），在8ml蒸馏水中溶解2g IPTG后，用蒸馏水定容至10ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于-20℃。
17．1mol/L乙酸镁溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解214.46g四水乙酸镁，用水定容至1L过滤除菌。
18．1mol/L MgCl2溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解203.4g MgCl2·6H2O，用水定容至1L，分装成小份并高压灭菌备用。
【注意】
MgCl2极易潮解，应选购小瓶（如100g）试剂，启用新瓶后勿长期存放。
19．β-巯基乙醇（BME）溶液
【配制方法】
一般得到的是14.4mol/L溶液，应装在棕色瓶中保存于4℃。
【注意】
BME或含有BME的溶液不能高压处理。
20．NBT溶液
【配制方法】
把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃。
21．酚/氯仿溶液
【配制方法】
把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L Tris·HCl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/l Tris·HCl(pH7.6)液层，保存于4℃。
【注意】
酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。
22．10mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液
【配制方法】
用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液（100mmol/L）。
【注意】
PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。
PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PM SF溶液调节为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。
23．磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶液
【配制方法】
在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl调节溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌20min。保存于室温。
24．1mol/L乙酸钾（pH7.5）溶液
【配制方法】
将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中，用2mol/L乙酸调节pH值至7.5后加入纯水定容到1L，保存于-20℃。
25．乙酸钾溶液（用于碱裂解）
【配制方法】
在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。
26．3mol/L乙酸钠（pH5.2和pH7.0）溶液
【配制方法】
在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节pH值至5.2或用稀乙酸调节pH值至7.0，加水定容到1L，分装后高压灭菌。
27．5mol/L NaCl溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L，分装后高压灭菌。
28．10%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液
【配制方法】
在900ml水中溶解100g电泳级SDS，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分装备用。
【注意】
SDS的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS，10%SDS溶液无须灭菌。
29．20×SSC溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g柠檬酸钠，加入数滴10mol/l NaOH溶液调节pH值至7.0，加水定容至1L，分装后高压灭菌。
30．20×SSPE溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4·H2O和7.4g EDTA，用NaOH溶液调节pH值至7.4（约需6.5ml 10ml/L NaOH），加水定容至1L，分装后高压灭菌。
31．100%三氯乙酸溶液
【配制方法】
在装有500g TCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100%（M/V）TCA。
32．1mol/L Tris溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解121.91g Tris碱，加入浓HCl调节pH值至所需值。
pH HCl
7.4 70ml
7.6 60ml
8.0 42ml
应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1L，分装后高压灭菌。
【注意】
如1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的Tris。
尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值，但仍可向大多数厂商购得合适的电极。
Tris溶液的pH值因温度而异，温度每升高1℃，pH值大约降低0.03个单位。例如：0.05mol/L的溶液在5℃、25℃、和3 7℃时的pH值分别为9.5、8.9和8.6。
33．Tris缓冲盐溶液（TBS）（25mmol/l Tris）
【配制方法】
在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris碱，加入0.015g酚并用HCl调至pH值至7.4，用蒸馏水定容至1L，分装后在151bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20min，于室温保存。
34．X-gal溶液
【配制方法】
X-gal为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的贮存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中，装有X-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏，并应贮存于-20℃。X-gal溶液无须过滤除菌。
杂交试验中用于降低背景的封闭剂
试剂用途
Denhardt试剂Northern杂交
使用RNA探针的杂交
单拷贝序列的Southern杂交
将DNA固定于尼龙膜上的杂交
Denhardt试剂通常配制50×贮存液，过滤后保存于-20℃。可将该贮存液10倍稀释于预杂交液（常为含有0.5%SDS和100μg/ml经变性被打断的鲑精DNA的6×SSC或6×SSPE）中。50×Denhardt液中含5g聚蔗糖（Ficoll,400型，Pharmacia）、5g 聚乙烯吡咯烷酮和5g牛血清白蛋白（组分V”Sigmal），加水至终体积为500ml。
BLOTTO Grunstein-Hogness杂交
Benton-Davis杂交
除单拷贝序列Southern杂交以外的所有Southern杂交斑点印迹
1×BLOTT（牛乳转移技术优化液，Bovine Lacto Transfer Technique Optimizer）,是含5%胶脂奶粉和0.02%叠氮钠的水溶液，应保存于4℃。使用前可用预杂交液稀释25倍。BLOTTO不应与高浓度的SDS并用，因为后者会导致牛奶中蛋白质析出。如果杂交背景不合要求，可在杂交液中加入NP-40至终浓度为1%。BLOTTO不能用作Northern杂交的封闭剂，因为这一封闭剂中可能含有RNA酶，其活性之高使人无法接受。
注意：叠氮钠有毒性，取用时需戴手套小心操作。含叠氮钠的溶液应予明确标记。
肝素
Southern杂交
原位杂交
肝素（Sigma H-7005，从猪中提取的二级产品或相当等级的产品）用4×SSPE或4×SSC溶解配制成50mg/ml的浓度，保存于4℃。肝素在含有葡聚糖硫酸酯的杂交液中用作封闭剂的浓度为500μg/ml，在不含葡聚糖硫酸酯的杂交液中的浓度为50μ
g/ml。
经变性并被打断的鲑精DNA southern和Northern杂交
把鲑鱼精子DNA（Sigma,Ⅲ,盐钠）溶解于水配制成10mg/ml的浓度，必要时于室温磁力搅拌2～4h助溶。把溶液中NaCl的浓度调至0.1mol/L，并用酚和酚/氯仿各抽提一次，回收水相。合DNA溶液快速通17号皮下注射针头12次，以剪切DNA。加入2倍体积用冰预冷的乙醇沉淀DNA。离心回收DNA并重溶于水，配制成10mg/ml的浓度，测定溶液的OD260值并计算出精确的DNA浓度，然后煮沸10min，分装成小份保存于-20℃。使用前置沸水浴中加热5min，然后迅速在冰浴中骤冷。预杂交液中应含有100μg/ml经变性并被打断的鲑鱼精子DNA
六、常用凝胶的技术参数
1．葡聚糖凝胶的某些技术数据
种类干颗粒直径
（μ）
分子量分级范围
床体积毫升
/克干分子
筛
得水值
溶胀最少平
衡时间（h）
柱头压力
（kPa）(2.5cm
直径柱) 肽及球形蛋白质
葡聚糖（线性
分子）
室温
沸水
浴
Sephadex G-10 40～ 120 ～700 ～700 2～ 3 1.0±0.1 3 1 Sephadex G-10 40～ 120 ～1500 1500 2.5～3.5 1.5±3.5 3 1
Sephadex G-25
粗级
100～300 (≈5～100目)
中级
50～150 (≈
100～200目) 1,000～
5,000 100～ 5,000 4～6
1.5±0.2
6
2
细级
20～800(≈200～400目)
超细 10～40
Sephadex G-50
粗级 100～200 中级 50～150 1,500～ 500～ 细级 20～80 30,000 10,000 9～11 5.0±0.3 6 2 超细 10～40
Sephadex G-75
40～120 3,000～ 1,000～
超细 10～40
70,000 950,000 12～15 7.5±0.5 24 3 3.92～15.86 Sephadex G-100
40～120 4,000～ 1,000～ 超细 10～40
1,500,000 150,000 15～20 10.0±1.0 48 5 2.35～9.41 Sephadex G-150
40～120 5,000～ 1,000～ 20～30 超细 10～40
400,000 150,000 18～22 15.0±1.5 72 5 0.88～3.53 Sephadex G-200 40～120 5000～ 1000～ 30～40
10～40
800,000
200,000
20～25
20.0±2.0
72
5
0.39～1.57
2.聚丙烯酰胺凝胶的技术数据
Bio-gel-P-6 4,600 1,000～5,000 8.8 2～4 Bio-gel-P-10 10,000 5,000～17,000 12.4 2～4 Bio-gel-P-30 30,000 20,000～50,000 14.9 10～12 Bio-gel-P-60 60,000 30,000～70,000 19.0 10～12 Bio-gel-P-100 100,000 40,000～100,000 19.0 24 Bio-gel-P-150 150,000 50,000~150,000 24.0 24 Bio-gel-P-200 200,000 80,000～200,000 34.0 48 Bio-gel-P-300
300,000
100～400,000
40.0
48
3．琼脂糖凝胶的技术数据
型号
琼脂糖含量
%（W/W ）
排阻的下限
（分子量）
分级分离的范围（分子量）
生产厂家
Sepharose 4B 4 0.3×106～3×106 Pharmacia
Sepharose 2B 2
2×106～25×106 Sagavac 10 10 2.5×105 1×104～2.5×105 Seravac Sagavac 8 8 7×105 2.5×104～7×105 Sagavac 6 6 2×106 5×104～2×106 Sagavac 4 4 15×106 2×105～15×106 Sagavac 2 2 150×106 5×105～15×107 Bio-gel A-0.5M 10 0.5×106 <1×104～0.5×106 Bio-Rad Bio-gel A-1.5M 8 1.5×106 <1×104～1.5×106 Bio-gel A-5M 6 5×106 1×104～5×106 Bio-gel A-15M 4 15×106 4×104～15×106 Bio-gel A-50M 2 50×106 1×105～50×106 Bio-gel A-150M
1
150×106
1×106～150×106
4．各处凝胶所允许的最大操作压
凝胶 最大静水压（kPa ）
Sephadex
G-10 9.8 G-15 9.8 G-25 9.8 G-50 9.8 G-75
4.9
5．琼脂糖凝胶浓度与线性DNA 分辨范围
凝胶浓度（%）线性DNA长度（bp）
0.5 1000～30000
0.7 800～12000
1.0 500～10000
1.2 400～7000
1.5 200～3000
2.0 50～2000
6．染料在变性聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度
凝胶浓度（%）溴酚蓝二甲苯青FF 5．0 35bp 140bp
6．0 26bp 106bp
8．0 19bp 75bp
10．0 12bp 55bp
20．0 8bp 28bp
7．染料在非变性聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度
凝胶浓度（%）溴酚蓝二甲苯青FF
3.5 100bp 460bp
5.0 65bp 260bp
8.0 45bp 160bp
12.0 20bp 70bp
15.0 15bp 50bp
20.0 12bp 45bp
七、氨基酸的特性
氨基酸名称三字母缩写单字母缩写质量侧链电离的pHa值结构式丙氨酸（alanine）Ala A 89.09
精氨酸（arginine）Arg R 174.2 12.48
天冬酰氨（asparagine）Asn N 132.1
天冬氨酸（aspartic acid）Asp D 133.1 3.86
半胱氨酸（systeine）Cys C 121.12
实验室基本技能培训要点
实验室基本技能培训要点 4.2 仪器的较准 1、电子天平校准 因存放时间较长，位置移动，环境变化或为获得精确测量，天平在使用前，一般都应进行校准操作。 轻按CAL显示器出现CAL-100，闪烁，此时，把100g校准砝码放上称盘，显示器出现--------等待状态，经几秒名钟后显示器出现100.0000g，拿去校准砝码，显示器应出现0.0000g，如若显示不为零，则再清零，再重复以上校准操作（注意，为了得到准确的校准结果最好反复以上校准操作二次）。 2、容量仪器的较准 （1）、新到容量仪器使用前进行校准（容量瓶、量筒、刻度吸管、大肚吸管） （2）、容量仪器可分为“量入”和“量出”二大类。 （3）、先较准天平，再将容量仪器洗净、凉干后进行较准。 （4）、较准作业在20℃的室内进行，用蒸馏水或其它纯水进行。 3、酸度计校准 ?1 将“选择”钮拨至pH档，“斜率”旋钮顺时针旋到底；“温度” 旋钮旋至溶液的温度值。 ?2 把用蒸馏水清洗过的电极插入pH=6.86pH(25℃时的值)的标 准缓冲溶液中，待读数稳定后调节“定位”旋钮至该溶液在当时 温度下的pH值（当时温度下的pH值可查附录）。
?3 用蒸馏水清洗电极然后将电极插入pH=4.00或pH=9.18的标 准缓冲溶液中（根据被测溶液的酸碱性确定选择那一种缓冲溶 液，如果被测溶液呈酸性则选pH=4.00缓冲溶液；如果被测溶 液呈碱性则选pH=9.18的缓冲溶液），待读数稳定后调节“斜率” 旋钮至该溶液在当时温度下的pH值（当时温度下的pH值可 查附录）。 ?4 重复步骤2和3直到不需要再调节二旋钮为止。 ?5 标定结束（一般情况下，在24h内仪器不需要再标定）。 4.3基本仪器的使用方法 4.3.1滴定管的使用 ?使用时应先用欲滴定溶液润洗2-3次； ?注入溶液或放出溶液后，需等待30s-1min后才能读数（使附着 在内壁上的溶液留下）； ?滴定管应用拇指和食指拿住滴定管的上端（无刻度处）使管身 保持垂直后读数； ?对于无色溶液或浅色溶液，应读弯月面下缘实线的最低点（视 线应与弯月面下缘实线的最低点相切）； ?滴定时，最好每次都从0.00mL开始，或从接近零的任一刻度 开始，这样可固定在某一段体积范围内滴定，减少测量误差。 读数必须准确到0.01mL。 ?旋塞要保护润滑，适量使用凡士林，外套胶管固定，防止漏液。 4.3.2移液管的使用
化学实验室通风柜实验室家具实验操作台台面
一、实验台台面 实验室家具实验台面大体分为五种材料：1、酚醛树脂、2、环氧树脂、3、不锈钢、4、花岗岩。 台面分为化学实验台面、物理实验台面、生物实验室台面。 1、化学用实验台台面实验室家具公司德尔雅实验室家具实验室 家具价格 化学实验室台面通常选用酚醛树脂复合贴面板台面、酚醛树脂实心板台面、环氧树脂台面、陶瓷台面； 1、1、复合贴面板台面： 材料选用1mm厚酚醛树脂化学实验用专用板，基板国产优质中纤板材料，底面粘贴酚醛树脂普通防火板，周边采用2.0mm厚的pvc 材料封边；台面复合厚度为40mm；
1、2、实芯板台面： 材料选用12.7mm厚酚醛树脂板化学实验用专用板，加边后总厚度为25.4mm；周边倒角r10mm 耐高温不超过135℃。 1、3、环氧树脂台面： 材料厚度为13mm、20mm、25mm供选择； 特点：a、24小时耐强酸碱腐蚀；b、具有较强的耐磨性、耐冲击性、耐污染性、不弯曲；c、耐高温最高可达600℃； 2、物理用实验台台面： 物理实验室台面通常选用酚醛树脂复合贴面板台面、天然花岗岩台面； 2、1、复合贴面板台面，材料：选用1mm厚酚醛树脂物理实验用
专用板，具有耐高温、耐磨、耐划痕等特点。基板选用实验室家具公司德尔雅实验室家具实验室家具价格优质中纤板材料，周边用2.0mm厚的pvc材料封边；台面复合厚度为40mm； 2、2、实芯板台面，材料：选用12.7mm厚酚醛树脂板物理实验用专用板，具有耐高温、耐磨、耐划痕、防静电等特点。加边后总厚度为25.4mm；周边倒角r10mm 特点： a、具有较强的耐磨性、耐冲击性、耐污染性、耐高温、防静电、不弯曲； b、最大承重为300公斤/平方米； c、耐温度可在-50℃40℃环境下使用； 2、3、选用天然花岗岩台面： 厚度：高温台选用为50mm；天平台选用50mm； 特点：有较强的力学性能和耐热性能； 最大承重为500公斤/平方米； 缺点：有辐射，对人身体健康有一定的危害性，（以检测报告为数据依据）； 3、生物用实验台台面： 3、1、选用1.2mm厚316不锈钢板，内衬复合板添充封闭。 特点：1、耐有机溶剂；2、抑制细菌、霉菌生长；3、抗污染、易清洁；
实验室常用培养基的配制方法
实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin (100 mg/ml) IPTG (24 mg/ml) X-Gal (20 mg/ml) LB培养基■组份浓度 100 mg/ml Ampicillin ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3. 用0.22 μm滤器过滤除菌。 4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。 ■组份浓度 24 mg/ml IPTG ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3. 用0.22 μm滤器过滤除菌。 4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。 ■组份浓度 20 mg/ml X-Gal ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量1 g X-Gal置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后， 定容至50 ml。 3. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃避光保存。 ■组份浓度 1%（W/V）Tryptone，0.5%（W/V）Yeast Extract， 1%（W/V）NaCl ■配制量 1 L ■配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。 Tryptone 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g 2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5 N NaOH（约0.2 ml），调节pH值至7.0。 4. 加去离子水将培养基定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，4℃保存。
培养基的配置和灭菌
培养基的制备与灭菌 一、目的要求 1.掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 2.掌握培养基的配置原则和方法。 3.掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。 二、基本原理 牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。 高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。 三、实验材料 1.药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。 2.仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 3.其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。 四、操作步骤 （一）玻璃器皿的洗涤和包装 1．玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。 2．灭菌前玻璃器皿的包装 （1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。 （2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右，棉花自身长度约1~1.5cm。塞棉花时．可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。 先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移液管压紧．在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。 （二）液体及固体培养基的配制过程1．液体培养基配制 （1）称量（假定配制1000ml培养基） 按培养基配方比例依次准确地称取3.0g牛肉膏、10.0 g蛋白胨、5.0gNaCl放入烧杯（或1000ml刻度搪瓷杯）中．牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。 （2）溶化 在上述烧杯中先加入少于所需要的水量（如约700ml），用玻棒搅匀，然后，在石棉网上
实验室设备验收标准
实验室设备验收标准 一、经过实际测试，实验室台柜能承受500kg/m2以上的重压。 对实验台柜类产品的力学技术要求如下： 1 力学性能 1.1台面力学性能要求见下表1 1.2 柜体力学性能要求见下表2
1.3不锈钢柜体力学性能 1.3.1台面、搁板和底板应能承受100kg载荷，其变形量应小于3mm，且无柜门抽屉 卡滞现象。 1.3.2柜体在490N水平集中力的作用下，框架的变形量应小于5mm，去除作用力后， 框架变形量应小于3mm。 1.4水槽底部应能承受100kg载荷，其变形量应小于3mm.。 1.5调整脚 （1）调整脚螺纹表面不得有凹痕、断牙等缺陷； （2）塑料表面不应有溢料、缩痕、熔接痕等缺陷； （3）每个调整脚应能承受不小于150kg的能力。 2、力学性能试验方法 2.1台面 2.1.1 垂直静载荷试验 台面的力学性能试验，须根据产品结构（台面板、框架、柜体）结合形式装配为一个整体后。除了试验部分之外，在其它部分的所有台面面积每1dm2等分布负载 1.0kg重的压铁。台面负载是在台面中央放300mm×300mm的板，并用750N力压10s， 共进行10次，查各部有无异常。 2.1.2 垂直冲击试验 在操作台面的位置3处上，在450mm的高度落下直径19.05mm、重量28.1g的铜球，检查操作台面有无异常。 2.1.3 持续垂直静载荷试验，按GB/T10357.1—1989中7.1.1.3规定进行。 2.1.4 水平耐久性试验，按GB/T10357.1—1989中7.2.1规定进行。 2.2 柜体 2.2.1 搁板弯曲试验，按GB/T10357.5—1989中6.1.1规定进行 2.2.2 搁板加载稳定性试，按GB/10357.4—1989中5.3规定进行 2.2.3 搁板支承件强度试验，按GB/T10357.5—1989中6.1.2规定进行 2.2.4 柜门安装强度试验
细胞培养基种类
细胞培养基的选择及常用数据库 日期：2012-04-13来源：未知作者：网友点击：次细胞实验技术 经典的培养基有很多种，Invitrogen(GIBCO)、Thermo Fisher(HyClone)、Sigma等公司都可以提供。其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12都是应用最广泛的培养基。其他如M199、IMDM、L15培养基等也用于某些细胞的培养。 ◆MEM是由Eagle’s基础培养基(BME)发展而来的，其中增加了组分的范围及 浓度。 ◆ Dulbecco改良的BEM(DMEM)培养基是为小鼠成纤维细胞设计的，现在常用于 贴壁细胞的培养。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍，维生素浓度是MEM的4倍，采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。最初的配方中葡萄糖含量为1000 mg/L，后来为了某些细胞的生长需要，将葡萄糖含量又调整为4500 mg/L，这就是大家常说的低糖和高糖了。 ◆ aMEM含有附加的氨基酸、维生素以及核苷和脂肪酸，它可广泛应用于各种细 胞类型，包括对营养成分要求苛刻的细胞。 ◆ Ham’s F12是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的，现在也广泛应用于 克隆形成率的分析及原代培养。F12还可以与DMEM等体积混合使用，得到一种高浓度与成分多样化相结合的产物，这种培养基已应用于许多原代培养及更难养的细胞系的培养。 ◆ RPMI 1640培养基是专为淋巴细胞培养而设计的，现在已广泛应用于悬浮细胞 的培养。 以前经常听到有人问，这种细胞该用哪一种培养基呢?其实这个问题的答案可以很简单，也可以好复杂。此话怎讲?如果这种细胞是购自ATCC或其他的细胞库，那很简单，问供应商就行了。或者找到相关的文献，作为参考。Invitrogen网站上有一个Cell Line Database的工具，也很好用。选择你感兴趣的细胞类型，它就会弹出推荐的培养基、血清和转染试剂等，有时还有优化好的转染步骤，很方便。Sigma网站上也有一个Media Expert，包括了培养基所有成分的功能描述、使用推介和参考文献等，它还
化学实验室基本操作
化学实验室基本操作 化学实验室基本操作2010-07-24 11：54一、常用仪器的主要用途和使用 方法 反应容器：试管、燃烧匙、烧杯、锥形瓶、集气瓶 存放容器：集气瓶(气体)、细口瓶(液体)、广口瓶(固体)、滴瓶(少量液体) 计量仪器：托盘天平(称固体质量)、量筒(量液体体积) 取用仪器：镊子(块状或较大颗粒)、药匙或纸槽(粉末或小颗粒)、胶头滴 管(少量液体) 夹持容器：试管夹、坩埚钳、铁架台(带铁圈、铁夹) 其它仪器：漏斗、长颈漏斗、分液漏斗、石棉网、玻璃棒、水槽、试管刷 可直接加热的：试管、蒸发皿、燃烧匙 能间接加热的(需垫石棉网)：烧杯、烧瓶、锥形瓶 加热仪器：酒精灯 1.烧杯圆柱状玻璃容器，杯口有便于倒出液体的嘴。 常用的有25mL、50mL、100 mL、250 mL、500 mL等 (1)用于大量物质的溶解和配制溶液或者进行化学反应的容器，也常用于接 过滤后的液体。 (2)实验时盛放液体的量不超过烧杯容积的1/2，以防搅拌时溅出。 (3)向烧杯中注入液体的时候，应沿烧杯内壁或玻璃棒引流。
(4)加热时要垫石棉网，也防受热不均而使其破裂。烧杯不能用作加热固体试剂。 2.试管 (1)用于少量物质的溶解或发生化学反应的仪器，也常用于制取或收集少量气体。 (2)振荡试管的方法：手持试管、手腕摆动。 3)实验时盛放液体量不能超过试管容积的1/3，以防振荡或加热时溅出。可直接加热。 (4)用试管夹或者铁夹固定时，要从试管底部向上套，夹持在试管的中上部(或离管口1/3的部位)。 3.蒸发皿 (1)用于溶液的蒸发、结晶 2)蒸发过程中需用玻璃棒不断搅拌，防止液体由于局部温度过高而飞溅 3)当溶液的量减少只有大量晶体析出时，停止加热并放至石棉网上，以防晶体飞溅 (4)取放蒸发皿，要用坩埚钳夹持 4.集气瓶 (1)用于收集气体、短时间贮存气体、用做物质在气体中的燃烧的反应器 (2)在收集气体或贮存气体时，要用毛玻璃片盖住瓶口。 5、试剂瓶 试剂瓶包括滴瓶、细口瓶、广口瓶等。分为无色和棕色两种。
实验室化学品柜
实验室化学品柜实验室家具很多，但归纳起来主要是实验台、仪器台、天平台、洗涤台、实验柜、药品柜、毒品柜、器皿柜、通风柜、净化工作台、等几大类。 一．按结构形式分类： 实验台分为固定式实验台和组合式实验台。固定式实验台：固定式实验台的形式很多，国内至今仍普遍采用。常见的用钢筋混凝土结构的台面和砖砌支座，台下为木制器皿柜，台面上用白色瓷砖、水磨石、大理石或天然花岗岩等。这类实验台坚固耐用，耐高温，而且平稳，常用于天平台、高温炉台以及测光仪器台等。组合式实验台：依靠自身的构造形式，分为几个独立的部分，分别制作，然后组合在一起。其主要由几个单元实验台、管线架、试剂架、水池台等几部分，根据实验室需要组合而成。其特点可以灵活布置实验室，便于运输，便于系列化生产。 二．按材质类型分类： 木结构：这是国内外较普遍采用的形式，质量较轻，又较灵活，而且可以做成各种单元组合式，其缺点是木材耗用量较大。钢结构这种结构由钢支架、器皿柜、台面和试剂架等构件组成。钢支架系薄壁型钢制成，脚支架底脚有微调螺丝，钢支架之间留有管道空间。器皿柜是木制构件，要以灵活地挂在钢支架上。这种材质尽管其外表有防腐涂料，但难免有锈蚀，一般用于仪器分析室。混合结构采用钢架、合成树脂台面与下部活动的木制器皿柜，这也有可能做成单元组合式，其质量较轻，从灵活性方面考虑也较上一种有利。 三．按实验用途分类： 实验台主要有仪器台、天平台、洗涤台等，种类繁多。实验台根据实验室布局不同，位于实验室中间，称为;岛式中央实验台实验台的一端靠墙则称为半岛式中央实验台;如果实验台的一条长边靠墙称为侧边实验台。与之相适应的试剂架、洗涤台、器皿柜也有所不同。有的还把实验台分为单面实验台和双面实验台，后者实指岛式中央实验台和半岛式中央实验台。
实验室常用培养基的配制方法
五、实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin(氨卡青霉素)(100 mg/ml) 组份浓度100 mg/ml Ampicillin 配制量50 ml 配制方法 1.称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。 2.加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3.用0.22 μm过滤膜过滤除菌。 4.小份分装(1 ml/份)后，-20℃保存。 IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)(24 mg/ml) 组份浓度24 mg/mL IPTG 配制量50 mL 配制方法 1.称1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。 2.加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3.用0 22 μm过滤膜过滤除菌。 4小份分装(1 ml，份)后，-20℃保存。 X-Gal (20 mg/ml) 组份浓度20 mg/ml X-Gal 配制量50 ml 配制方法 1.称量l g X-Gal置于50 ml离心管中。 2.加入40 ml DMF(二甲基甲酰胺)，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3.小份分装(1 ml/份)后，-20℃避光保存。 LB培养基 组份浓度1%(W/V)Tryptone(胰蛋白胨)，0.5%(W/V)Yeast Extract(酵母提取物)，1%(W/V)NaCl 配制量 1 L 配制方法 1.称取下列试剂，置于l L烧杯中。 Tryptone 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g 2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3.滴加5 N NaOH(约0.2 m1)，调节pH值至7.0。 4.加去离子水将培养基定容至1 L。 5高温高压灭菌后，4。C保存。 LB/Amp培养基 组份浓度 1%(W/V) Tryptone 0.5%(W/V) Yeast Extract 1%(W/V) NaCl 0.1 mg/ml Ampicillin
实验室设备验收规范标准.docx
,. 实验室设备验收标准 一、经过实际测试，实验室台柜能承受500kg/m 2 以上的重压。 对实验台柜类产品的力学技术要求如下： 1力学性能 1.1 台面力学性能要求见下表1 表 1 序号试验项目试验条件技术要求1垂直静载荷试验加 750N力压 10s ， 10 次台面无损伤，无影响 质量 28g铜球在 450mm高度落使用功能的磨损或2垂直冲击试验 下， 3处变形，无断裂或豁 3持续垂直静载荷加载 2.0kg/dm2， 7天裂，连接件未出现松 4水平耐久性试验150N力， 30000 次动 1.2柜体力学性能要求见下表 2 表 2 序号试验项目试验条件技术要求 2， 7无断裂或豁裂， 1搁板弯曲试验加载 2kg/dm天 不出现永久变形 GB/T10357.4第 5.3条规定 2搁板加载稳定性不倾翻 执行 1.7kg 钢块，冲击能 1.66Nm ，搁板销未出现磨损或3搁板支承件强度 10 次变形
离门沿 100mm 处挂 25kg 法 4柜门安装强度试验 码，反复开闭10 次各部无异常，外观及功 门端 100mm处，水平加 60N能无影响 5柜门水平载荷试验 力， 10s ，10次 底板未出现严重影响6底板强度试验用 750N 力压 10s ， 10 次使用功能的磨损或变 形 7拉门耐久性试验2X1.5kg 反复开闭 40000 次门应与柜体仍紧密相 8拉门强度试验35kg ，10 次连，门与铰链均无破9拉门猛开试验2kg ，10 次损，并未出现松动，铰10翻门强度试验300N ， 10 次链功能正常，门开关灵11翻门耐久性试验20000 次便 抽屉和滑轨耐久性试加 0.33kg/dm2，开闭 40000 12 验次 滑轨未出现永久性松13抽屉快速开闭试验以 1.0m/s 施 50N 力， 10次 动，抽屉活动灵便，无14抽屉底板破坏试验施 60N 力， 10s ， 10 次 异常噪音 抽底均布 0.25kg/dm 2 ，前端 15抽屉及滑轨强度试验 施250N 力， 10s ，10 次 侧面施 300N 力（4 处），高≤未出现松动，位移小于16主体结构和底架强度 1.6m，10s ， 10次10mm 17独立柜稳定性试验GB/T10357.4第5.2不倾翻 一角抬起 150mm高度落下，无变形，松动，分体等18柜体搬运试验 4 次异常
第五章 微生物的营养和培养基习题整理
第五章微生物的营养和培养基 一、选择题 1. 大多数微生物的营养类型属于：（） A. 光能自养 B. 光能异养 C. 化能自养 D. 化能异养 2. 蓝细菌的营养类型属于：（） A．光能自养 B. 光能异养C．化能自养 D. 化能异养 3. 碳素营养物质的主要功能是：（） A. 构成细胞物质 B. 提供能量 C. A，B 两者 4. 占微生物细胞总重量70%-90% 以上的细胞组分是：（） A. 碳素物质 B. 氮素物质 C. 水 5. 能用分子氮作氮源的微生物有：（） A. 酵母菌 B. 蓝细菌 C. 苏云金杆菌 6. 大肠杆菌属于（）型的微生物。 A. 光能无机自养 B. 光能有机异养 C. 化能无机自养 D. 化能有机异养 7. 自养型微生物和异养型微生物的主要差别是：（） A. 所需能源物质不同 B. 所需碳源不同 C. 所需氮源不同 8. 基团转位和主动运输的主要差别是：（） A. 运输中需要各种载体参与 B. 需要消耗能量 C. 改变了被运输物质的化学结构 9. 单纯扩散和促进扩散的主要区别是：（） A. 物质运输的浓度梯度不同 B. 前者不需能量，后者需要能量 C. 前者不需要载体，后者需要载体 10. 微生物生长所需要的生长因子（生长因素）是：（） A. 微量元素 B. 氨基酸和碱基 C. 维生素 D. B，C二者 11. 培养基中使用酵母膏主要为微生物提供：（） A. 生长因素 B. C 源 C. N 源 12. 细菌中存在的一种主要运输方式为：（） A. 单纯扩散 B. 促进扩散 C. 主动运输 D. 基团转位 13. 微生物细胞中的C素含量大约占细胞干重的：（） A. 10% B. 30% C. 50% D.70%
实验室常用的基本操作
实验室常用的基本操作 玻璃仪器的基本操作 1、认领仪器按照仪器单领取和认识基础化学实验中的常用仪器。
2、玻璃仪器的洗涤
（1）震荡水洗 （2）内壁附有不易洗掉的物质，可用毛刷刷洗 倒废液——注入一半水——选好毛刷，确定手拿部位刷洗——如是反复 （3）刷洗后，再用水连续振荡数次，必要时还应用蒸馏水淋洗三次洗净状态下，水均匀分布不挂水珠（如左图所示）； 未洗净状态下，器壁挂着水珠（如右图所示）。玻璃仪器里如附有不溶于水的碱、碳酸盐、碱性氧化物等可先加盐酸溶解，再用水冲洗；附有油脂等污物可先用热的纯碱液洗，然后用毛刷刷洗，也可用毛刷蘸少量洗衣粉刷洗；对于口小、管细的仪器，不便用刷子洗，可用少量王水或重铬酸盐洗液涮洗；用以上方法清洗不掉的污物可用较多王水或洗液浸泡，然后用水涮洗。（ (1)不要未倒废液就注水 (2)不要几支试管一起刷） 3、仪器的干燥 （1）晾干（左图）与烤干（右图）
（2）吹干（左图）与烘干（右图） （3）气流烘干（左图）与快干（右图） 4、常见玻璃仪器的使用 （1）量筒与量杯 （2）移液管 移液管使用注意事项： 应根据不同的需要选用大小合适的移液管，如取1.5ml的溶液，显然选用2ml移液管要比选用5ml移液管误差小；吸取溶液时要把移液管插入溶液，避免吸入空气而将溶液从上端
溢出；移液管从液体中移出后必须用滤纸将管的外壁擦干，再行放液；不可用移液管直接从瓶中移取溶剂或溶液，剩余溶剂或溶液不可倒回贮液瓶，应作废弃物处理。 （2）滴定管 操作步骤：洗涤——涂凡士林——检漏——装入操作液——滴定管排气——滴定操作 （3）容量瓶 容量瓶使用前应检查容量瓶的瓶塞是否漏水，合格的瓶塞应系在瓶颈上，不得任意更换。容量瓶刻度以上的内壁挂有水珠会影响准确度，所以应该洗得很干净。称量的任何固体物质必须先在小烧杯中溶解或加热溶解，冷却至室温后才能转移到容量瓶中。容量瓶绝不应加热或烘干。容量瓶定容完再翻转摇匀，若翻转摇匀后定容，会因加的水或溶剂过多，导致溶液浓度偏小。
实验室常用培养基大全
表皮葡萄球菌 产气肠杆菌 鼠伤寒沙门氏菌 单核增生李斯特氏菌 大肠埃希氏菌 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 表面接触碟/表面接触皿 https://www.wendangku.net/doc/261196332.html, 金黄色葡萄球菌 酿酒酵母菌 脑心浸出液肉汤(BHI) 品红亚硫酸钠液体培养基 MFC肉汤 CFU培养基基础 4-甲基伞形酮葡糖苷酸(MUG)培养基蛋白胨 胰蛋白胨 胰酪蛋白胨 酵母浸粉 大豆蛋白胨 酸水解酪蛋白 明胶蛋白胨 马铃薯浸粉 琼脂粉 琼脂粉 动物组织胃蛋白酶消化物 肉胃酶消化物 牛肉浸粉 牛肝浸粉 牛肝浸粉 牛心浸粉 多价蛋白胨(多聚蛋白胨) 月示蛋白胨 玉米浸出粉 一次性培养皿 表面接触碟 一次性培养皿（密理博浮游菌采样）表面接触碟/表面接触皿 https://www.wendangku.net/doc/261196332.html, 金属玻璃培养皿（可重复使用） 金属玻璃表面接触碟
嗜热脂肪肝菌芽孢菌片（ATCC7953 枯草杆菌黑色变种芽孢菌片（ATCC9372）121度高压灭菌化学指示卡 132℃压力蒸汽灭菌指示卡 葡萄糖 氯化钠 L-半胱氨酸盐酸盐 氧化酶试剂 三磷酸腺苷二钠盐（ATP） 费尔休林（无吡啶） SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 SDS-PAGE电泳液 SDS-PAGE上样缓冲液5倍 考马斯亮蓝R-250染色套装 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 大肠埃希氏菌 大肠埃希氏菌 产气肠杆菌 乙型副伤寒沙门氏菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 表面接触碟/表面接触皿 https://www.wendangku.net/doc/261196332.html, 黑曲霉 生孢梭菌 大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉汤) 大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉汤) 无菌大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉? 大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉汤) 大豆酪蛋白消化液培养基 大豆酪蛋白琼脂培养基 大豆酪蛋白琼脂培养基 无菌大豆酪蛋白琼脂培养基 卵磷脂-吐温80营养琼脂培养基基础 胰化大豆坚固绿琼脂(TSFA) 营养肉汤(NB) 营养琼脂(NA) 0.5%葡萄糖肉汤培养基 pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 三糖铁琼脂培养基(TSI) 三糖铁琼脂培养基 R2A琼脂
实验室台柜及配套设备采购要求
实验室台柜及配套设备采购要求 项目情况 本项采购项目具体包括：监测站台柜的设计、制作、运输、安装调试及其配套水、电安装，以及不少于2年（含）的免费质保售后服务。 （一）、防震承重边台 结构：H型框架木板箱体结构 材质、工艺技术性能 框架：主体框架由国家标准40*60*2.0mm优质空心钢焊接而成，直角部分有加强筋支撑。此种结构承载力强，结构合理，稳定性高。下箱体与支架之间采 用T型钢支撑。 台面：采用上海威盛亚实芯理化板，厚12.7mm，边缘双倍加厚。具有抗强化学腐蚀、耐撞击、磨刻、抑菌易清洁，耐浸泡，永不弯曲变形等特点。配实验电源插座。 箱体：采用达到环境标准并具有环保标志的15mm三聚氰胺双饰面中纤板，板材断面以1.5mm厚PVC封边条作热熔胶防水封边处理。箱体板采用“三合一”组件连接，可多次拆卸组装无损伤，利于拆迁和内部管线检修。 门板、抽屉面板：采用15mm高密度中纤板，周边以2mm厚PVC封边条作热熔胶防水封边。装配隐藏式铝型材拉手。门板装DTC 175度开铰链；抽屉装DTC三节钢导轨。 试剂架：均采用钢立柱及固定件，层板采用10—12mm厚钢化玻璃，高度可按需要灵活调节，边缘设特制不锈钢防滑护栏。配实验电源插座。 （二）仪器台 结构：H型钢框架木板箱体结构 材质、工艺技术性能 框架：采用40*60*2.0mm优质空心钢焊接而成，表面经酸洗、磷化化学防锈处理后，采用1600目进口干粉EPOXY喷涂处理，耐刻画。具有强固美观承载力强，耐腐蚀等特点。 台面：采用上海威盛亚实芯理化板，厚12.7mm，边缘双倍加厚。具有抗强化学腐蚀、耐撞击、磨刻、抑菌易清洁，耐浸泡，永不弯曲变形等特点。配实验电源插座。 箱体：采用达到环境标准并具有环保标志的15mm三聚氰胺双饰面中纤板，板材断面以1.5mm厚PVC封边条作热熔胶防水封边处理。箱体板采用“三合一”组件连接，可多次拆卸组装无损伤，利于拆迁和内部管线检修。 门板、抽屉面板：采用15mm三聚氰胺双饰面高密度中纤板，周边以2mm厚PVC 封边条作热熔胶防水封边。装配一字型铝合金暗拉手。门板装DTC 175度开铰链；抽屉装DTC三节钢导轨。 键盘主机箱位：铝木结构，配万向活动轮。 （三）、洗涤台 结构： H型钢框架木质柜体结构。
实验室通风柜各项规范及标准汇总
通常情况下，推荐的通风柜进口风速应在0.4-0.5m/s 之间。对于少数药品毒性较高或当外界对于通风柜的气流抑制能力有不利影响时，可采取进口分速为0.5-0.6m/s。但是通风柜的能耗一般是与进口风速成线性关系的。当进口风速接近或超过0.75m/s 时，会在通风柜内形成紊流，从而降低通风柜的气流抑制效率。 供风分布：典型的通风柜使用是操作者站在通风柜前，伸手进入通风柜内部进行实验操作。此时进入通风柜的气流会在操作者身边形成旋转气流，从而引起柜内气体溢出，甚至沿操作者身体到底呼吸区域。进口风速越大，形成的旋转气流就越强。因此，事情并不象人们想象的那样，进口分速越大，气流抑制效果就越好。 进口风速的选择：实验室内的供风口供风与通风柜进口风速的相互影响，会使得任何关于通风柜进口风速的总括性的规范标准失去参考价值。较高的进口风速在浪费能耗的同时，却不会提高，甚至有可能会恶化通风柜的气流抑制效果。 实验室通风柜的进口风速和排风量应能很好地抑制通风柜内产生的污染气体，并尽快将其排出实验室。当通风柜内有化学物品进行操作时，应能够抑制潜在毒害气体的外溢，保护实验室员工的安全。
实验室通风柜气流抑制可参照实验室通风柜性能测试办法规定的步骤进行操作。通常情况下，当通风柜的位置要求和室内通风次数的要求被满足的基础上，进口风速0.4m/s-0.6m/s 是可以对柜内气体进行较好控制的。 要求：通风柜平均进口风速应当能够很好地抑制柜内产生的危害性化学气体以防其泄漏。合适通风柜的进口风速对于实验室安全是很重要的，但也不是唯一标准，我们应对各种因素进行综合考虑。 实验室内的操作者及其他设备物品的运动都会对通风柜的安全性能，尤其当进口风速较低时，产生明显影响。所以，认识其影响，并据此制定相应的实验室操作流程规范是很有必要的。当进口风速过低时，通风柜对柜内气流的抑制能力会大大降低，从而产生相应的风险，因此，我们建议进口风速要大于0.3m/s。 对排风机转速及通风柜排风阀进行控制以调节通风柜排风量的控制装置应合理设计，确保在定风量系统里，除非通风柜停止使用或者有书面的危险描述有另外的其他要求之外，最小排风量应取以下两值中的最大值：50cfm/ft×ft（通风柜宽度）或者25cfm/ft2×ft2（通风柜工作面积）。 对于上述要求的解释： 60-80fpm（0.30-0.41m/s）：当对气流抑制性能很出色的通风柜在相对很理想的操作环境下（如实验室的设计特性），并且遵循谨慎的实验室操作规范时，
实验一常用器皿包扎与培养基的配制和灭菌
实验一常用器皿包扎与培养基的配制和灭菌 一、实验目的 1学会常用器皿包扎方法 2学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤 3学会实验室灭菌锅的使用方法 二、常用器具和仪器 试管(testtube)，德汉氏小管(Durhamtube)，玻璃吸管 (glasspipette)，吸器，微量加样器(micropipette)，吸嘴(tip)，培养皿(petri dish)，三角瓶(erlenmeyer flask)，接种铲(inoculatingshovel),玻璃涂布器(glassspreade)，接种环(inoculatingloop)，接种钩(inoculating hook)，接种针(inoculating needle)，小塑料离心管(Eppendorf tube)，滴瓶(dropper bottle )，双层瓶(double bottle)，酒精灯⑻ cohol burner)，煤气喷头(coal gas sprinklerhead，试剂瓶，量筒，烧杯，温度计，石棉网，漏斗，烘箱，卧式灭菌锅，手提式灭菌锅，无菌操作台/ 室，过滤除菌设备，厌氧操作设备，小型发酵罐，离心机，培养箱/摇床，冷冻干燥机，蒸馏水器，超声波清洗仪，磁力搅拌器。 三、玻璃器皿的包装 1、培养皿的包装方法一：用旧报纸密密包紧，一般以5-8 套培养皿作一包。包好后用干热或湿热灭菌(见无菌操作技术)。 方法二：将培养皿放入金属(不锈钢)筒内，干热灭菌。金属筒配有盖子，内部还有一个可以放培养皿的带底框架。框架可以从筒内提出，以便装取培养皿。 包好的培养皿 金属筒和内部的框架 塑料培养皿架 2、吸管的包装
实验室通风柜各项规范及标准汇总
如何计算通风柜风量 网上一位大虾写风柜计算公式 计算公式：G=S·V·h·μ=L·H·3600·μ 其中 G：排风量 S：操作窗开启面积 V：面风速 h: 时间（1小时） L: 通风柜长度 H: 操作窗开启高度 μ: 安全系数（1.1~1.2） 例：1200L的通风柜其排风量计算如下： G：1.2*0.75/2*0.8*3600*1.2=1555 m3/h 感觉地下例子和上面公式不一样啊 0.75为什么要除以2？？ 操作窗开启面积是怎么确定的啊 1.5m通风柜网上给的风量是1000~1400m3/h是怎么确定那个出来的啊 实验室通风柜各项规范及标准汇总 本文所收录的内容全部摘自当今工业领域被广泛应用各种相关的标准跟规范。制作此文的目的是为所有者，工程师，建筑师，以及实验
室研究员提供一个应用于实验室建设及使用的各类规范的一个全景 式的认识。针对每个不同实验设施，我们可依据地区或国家相应的建筑标准规范，采用适用的标准或规范进行设计。通风柜进口风速联邦公报－美国职业安全和健康委员会（OSHA）－Appendix A，section C.4(g)质量??进入通风柜以及通风柜内的气体不应出现紊流；通风柜的进口风速应保持在一个合适的范围（通常0.3-0.5m/s）。 Prudent Practices－P.178 通常情况下，推荐的通风柜进口风速应在 0.4-0.5m/s 之间。对于少数药品毒性较高或当外界对于通风柜的气流抑制能力有不利影响时，可采取进口分速为0.5-0.6m/s。但是通风柜的能耗一般是与进口风速成线性关系的。当进口风速接近或超过0.75m/s 时，会在通风柜内形成紊流，从而降低通风柜的气流抑制效率。工业通风－美国政府工业卫生专家协会（ACGIH）－P.10－40 供风分布：典型的通风柜使用是操作者站在通风柜前，伸手进入通风柜内部进行实验操作。此时进入通风柜的气流会在操作者身边形成旋转气流，从而引起柜内气体溢出，甚至沿操作者身体到底呼吸区域。进口风速越大，形成的旋转气流就越强。因此，事情并不象人们想象的那样，进口分速越大，气流抑制效果就越好。 P.10－40 进口风速的选择：实验室内的供风口供风与通风柜进口风速的相互影响，会使得任何关于通风柜进口风速的总括性的规范标准失去参考价值。较高的进口风速在浪费能耗的同时，却不会提高，甚至有可能会恶化通风柜的气流抑制效果。美国国家标准化组织/美国暖通制冷和空调工程师协会（ANSI/ASHRAE）的通风柜性能测试标准可以用来作为通风柜生
实验室常用培养基配方
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031*-2./4,+ 5 9678 :UWPWTW JOSULKNRSQSMV KIUIQSM SRQORL;Y``^HGGaaaF`WZW_WFX][FX\ i x if ]wZjnOFp>hfio y wv j |{l @hfoj y w j v|{l ?ihh 21< aU jfki /wv j |{l M ijfml /w j v|{l r qh 21I_Xyix@TAaUN@R_Xy iJbu ihh 21@LkLm[V 基础操作步骤参考 1.仪器的洗涤 玻璃仪器洗净的标准是：内壁上附着的水膜均匀，既不聚成水滴，也不成股流下。 2.试纸的使用 常用的有红色石蕊试纸、蓝色石蕊试纸、pH试纸、淀粉碘化钾试纸和品红试纸等。 （1）在使用试纸检验溶液的性质时，一般先把一小块试纸放在表面皿或玻璃片上，用蘸有待测溶液的玻璃棒点试纸的中部，观察试纸颜色的变化，判断溶液的性质。 （2）在使用试纸检验气体的性质时，一般先用蒸馏水把试纸润湿，粘在玻璃棒的一端，用玻璃棒把试纸放到盛有待测气体的导管口或集气瓶口（注意不要接触），观察试纸颜色的变化情况来判断气体的性质。 注意：使用pH试纸不能用蒸馏水润湿。 3.药品的取用和保存 （1）实验室里所用的药品，很多是易燃、易爆、有腐蚀性或有毒的。因此在使用时一定要严格遵照有关规定，保证安全。不能用手接触药品，不要把鼻孔凑到容器口去闻药品（特别是气体）的气味，不得尝任何药品的味道。注意节约药品，严格按照实验规定的用量取用药品。如果没有说明用量，一般应按最少量取用：液体1～2mL，固体只需要盖满试管底部。实验剩余的药品既不能放回原瓶，也不要随意丢弃，更不要拿出实验室，要放入指定容器内或交由负责人处理。 （2）固体药品的取用：取用固体药品一般用药匙。往试管里装入固体粉末时，为避免药品沾在管口和管壁上，先使试管倾斜，用盛有药品的药匙（或用小纸条折叠成的纸槽）小心地送入试管底部，然后使试管直立起来，让药品全部落到底部。有些块状的药品可用镊子夹取。 （3）液体药品的取用取用很少量液体时可用胶头滴管吸取；取用较多量液体时可用直接倾注法。取用细口瓶里的药液时，先拿下瓶塞，倒放在桌上，然后拿起瓶子（标签对着手心），瓶口要紧挨着试管口，使液体缓缓地倒入试管。注意防止残留在瓶口的药液流下来，腐蚀标签。一般往大口容器或容量瓶、漏斗里倾注液体时，应用玻璃棒引流。 （4）几种特殊试剂的存放 A.钾、钙、钠在空气中极易氧化，遇水发生剧烈反应，应放在盛有煤油的广口瓶中以隔绝空气。 B.白磷着火点低（40℃），在空气中能缓慢氧化而自燃，通常保存在冷水中。 C.液溴有毒且易挥发，需盛放在磨口的细口瓶里，并加些水（水覆盖在液溴上面），起水封作用。 D.碘易升华且具有强烈刺激性气味，盛放在磨口的广口瓶里。 E.浓硝酸、硝酸银见光易分解，应保存在棕色瓶中，贮放在阴凉处。 F.氢氧化钠固体易潮解且易在空气中变质，应密封保存；其溶液盛放在无色细口瓶里，瓶口用橡皮塞塞紧，不能用玻璃塞。 4.过滤 过滤是除去溶液里混有不溶于溶剂的杂质的方法。 过滤时应注意： 实验用培养基配制 > 1 ．牛肉膏蛋白胨培养基（用于细菌培养）7.6 ～1000mL ，pH7.4 10g ，NaCl 5g ，水牛肉膏3g ，蛋白胨) 用于放线菌培养号培养基 ( 2. 高氏 1 可溶性淀粉20g ，KNO 3 1g ，NaCl 0.5g ，K 2 HPO 4-·3H 2 O 0.5g ，MgSO 。～7.6 ，水1000mL ，pH7.4 7H 2 O 0.5g, 4 ·，FeSO4 ·7H 2 O 0.01g 配制时注意，可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。）培养基（用于从土壤中分离真菌）．马丁氏（ Martin 3 K 2 HPO 4 1g ，MgSO 4 ·7H 2 O 0.5g ，蛋白胨5g ，葡萄糖10g ，1/3000 孟。30min 121 ℃湿热灭菌100mL, 水900mL ，自然pH ，加拉红水溶液 30 μg/mL). 链霉素含量为时加入链霉素( 待培养基融化后冷却55 ～60 ℃) 用于霉菌或酵母菌培养马铃薯培养基(PDA)( 4. 1000mL ) 20g, 水去皮)200g, 蔗糖( 或葡萄糖马铃薯( 配制方法如下: 将马铃署去皮, 切成约2cm 2 的小块, 放入1500mL 的烧杯中煮沸30min, 注意用玻棒搅拌以防糊底, 然后用双层纱布过滤, 取其滤液. 酵母菌用葡萄糖霉菌用蔗糖, 1000mL, 加糖, 再补足至自然pH. ) )( 用于霉菌培养 5. 察氏培养基 ( 蔗糖硝酸钠培养基蔗糖30g, NaNO 3 2g, K 2 HPO 4 1g, MgSO 4 ·7H 2 O 0.5g, KCl 0.5g, FeSO4 ·7H 7.2 ～2 O 0.1g, 水1000mL, pH7.0 ) ( 用于支原体培养培养基6. Hayflik ～15g, pH7.8 琼脂10g, NaCl 5g, 蛋白胨)1000mL, 或浸出液( 牛心消化液． 8.0, 分装每瓶70mL, 121 ℃湿热灭菌15min, 待冷却至80 ℃左右, 每70mL 中加入马血清 20mL,25% 鲜酵母浸出液10mL, 15 醋酸铊水溶液2.5mL, 青霉素 G 钾盐水溶液(20 万单位以上)0.5mL, 以上混合后倾注平板. 注意: 醋酸铊. , 需特别注意安全操作是极毒的药品 ) 醋酸钠培养基培养基 (McCLary) ( 7 ．麦氏葡萄糖0.1g, KCl 0.18g ，酵母膏0.25g ，醋酸钠0.82g, 琼脂l.5g ，蒸馏水 15min 。℃湿热灭菌l00mL 。溶解后分装试管，1l5 ) ．反应和甲基红试验用于 V.P 8 ．葡萄糖蛋白胨水培养基 ( 蛋白胨0.5g ，葡萄糖0.5g ，K 2 HPO 4 0.2g ，水100mL, pH7.2, 1l5 ℃湿热20min 。灭菌 ) ( 用于吲哚试验9 ．蛋白胨水培养基。湿热灭菌20min ～7.4, 121 ℃蛋白胨10g, NaCl 5g, 水1000mL ，pH7.2 ) ( 用于细菌糖发酵试验10 ．糖发酵培养基蛋白胨0.2g, NaCl 0.5g, K 2 HPO 4 0.02g ，水100mL ，溴麝香草酚蓝( 质量分数1% 水溶液) 0.3mL ，糖类lg 。分别称取蛋白胨和NaCl 溶于热水中，调pH 至7.4 ，再加入溴麝香草酚蓝( 先用少量质量分数95% 乙醇溶解后，再加水配成质量分数1% 水溶液) ，加入糖类，分装试管，装量 4 ～5cm 高，并倒放入一杜氏实验室基础操作步骤
实验室常用培养基