可溶性总糖的测定原理和方法

可溶性总糖的测定原理和方法

一、目的

掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。

二、原理

强酸可使糖类脱水成糖醛，生成的糖醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糖醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620nm处有最大吸收。在10－100μg范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

这一方法有很高的灵敏度，糖含量在３0μg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。

三、仪器、试剂和材料

１、仪器

分光光度计；电子天平；三角瓶；大管；试管架；漏斗；容量瓶；试管；水浴锅

２、试剂

葡萄糖标准液；浓硫酸；

蒽酮试剂：0.2g蒽酮溶于100mL浓硫酸中当日配制使用。

３、材料

小麦

四、操作步骤

１、葡萄糖标准曲线的制作

取７支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：

在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0ml，加完后一起浸于沸水浴中，准确煮沸10分钟取出，用流水冷却，室温放置10分钟，在620nm波长下比色。以标准葡萄糖含量作横坐标，以吸光值作纵坐标作标准曲线。

２、植物样品中可溶性糖的提取

将小麦剪碎至２mm以下，准确称取１克，放入50三角瓶中，加沸水25ml，在水浴中加盖煮沸10分钟，冷却后过滤，滤液收集在50ml容量瓶中，定容至刻度。吸取提取液２ml置另一50ml容量瓶中，以蒸馏水稀释定容不，摇匀测定。

３、测定

吸取１ml已稀释的提取液于大试管中，加入4.0ml蒽酮试剂，以一操作同标准曲线制作。比色波长620nm，记录吸光度，在标准曲线上查出葡萄糖的含量（μg）。

查表所得糖含量×稀释倍数

五、结果处理

植物样品含糖量（％）＝查表所得糖含量（μg）×稀释倍数／样品重（g）×106×100

(完整word版)植物可溶性糖含量的测定方法

植物可溶性糖含量的测定 可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖，是植物品质的重要构成性状之一，尤其是以果实为目的产品的果树作物，可溶性糖与酸的含量及其配比是影响果实风味品质的重要因素。对于鲜食品种，一般来讲，高糖中酸，风味浓，品质优；低糖中酸，风味淡，品质差。 科标检测拥有国际先进的检测仪器和雄厚的技术力量，可以依据多种检测标准，提供检测服务并出具资质检测报告。 一、试材及用具 1．试材新鲜或冷冻的植物材料 2．仪器及试剂高速组织捣碎机、电热恒温水浴锅、1000W调温电炉以及200mL、250mL容量瓶、250mL锥形瓶及50mL碱式滴定管等玻璃仪器；试剂主要包括费林试剂及亚甲基蓝溶液等。 二、原理 本实验的主要原理：在加热条件下，用还原糖溶液滴定一定量的费林试剂时，将费林试剂中的二价铜还原为一价铜，以亚甲基蓝为指示剂，稍过量的还原糖立即使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝。通过实验，学习并掌握用费林试剂滴定法测定可溶性糖的原理和方法。 三、方法步骤 （一）试剂配制 1．费林试剂甲：称取硫酸铜（CuSO4 •5H2 O，分析纯）34.6g溶于水中，稀释至500mL，过滤，贮于棕色瓶内。 2．费林试剂乙：称取氢氧化钠50g和酒石酸钾钠（KNaC4 O6 H4 •4H2 O，分析纯）138g溶于水中，稀释至500mL，用石棉垫漏斗抽滤。 3．转化糖标准溶液：称取9.5g蔗糖（分析纯）用水溶解后转入1000mL容量瓶中，加入6mol/L HCl（分析纯）10mL，加水至100mL。在20～25℃下放置三天或在25℃保温24h，然后用水定容（此为酸化的1%转化糖液，可保存3～4个月）。测定时，取1%转化糖液25.00mL放入250mL容量瓶中，加入甲基红指示剂一滴，

(整理)可溶性糖测定.

引言 可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖等单糖和双糖，是植物品质的重要构成性状之一，尤其是以果实为目的产品的植物，可溶性糖与酸的含量及其配比是影响果实风味品质的重要因素。对于鲜食品种，一般来讲，高糖中酸，风味浓，品质优；低糖中酸，风味淡，品质差。因此，可溶性糖的定量研究对植物的品质育种、储藏、加工特性等具有重要意义。而且可溶性糖广泛存在于植物的根、茎块和种子中，是人体热量的最最主要来源，具有较高的营养价值。本文重点介绍蒽酮比色法、铜还原碘量法、费林试剂法、原子吸收法、气相色谱法、液相色谱-蒸发光散射法，及连续流动法这几种实验如何定量测定可溶性糖含量。

1 蒽酮比色法 1.1 原理 糖在硫酸作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用形成绿色络合物，颜色的深浅与糖含量有关。在625 nm波长下的OD值与糖含量成正比。由于蒽酮试剂与糖反应的呈色强度随时间变化，故必须在反应后立即在同一时间内比色。 1.2 仪器与材料 1.2.1实验仪器 分光光度计，电炉，铝锅，电子天平，20ml刻度试管，刻度吸管5ml 1支、1ml 2支，漏斗。1.2.2实验试剂 （1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数星期，如有结晶析出，可微热溶解。 （2）浓硫酸（比重1.84）。 1.2.3实验材料 植物叶片。 1.3 实验方法 1.3.1标准曲线的制作 取20ml刻度试管11支，从0～10分别编号，按表24-1加入溶液和水。 表1 各试管加溶液和水的量 管号 0 1、2 3、4 5、6 7、8 9、10 100μg/ml蔗糖液 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 (ml) 水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 蔗糖量(μg) 0 20 40 60 80 100 然后按顺序向试管内加入1ml 9%苯酚溶液，摇匀，再从管液正面快速加入5ml浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8ml，在恒温下放置30min，显色。然后以空白为参比，在485nm 波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。 1.3.2可溶性糖的提取 取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10～0.30g，共3份，或干材料。

可溶性糖的测定方法

可溶性糖的测定方法 可溶性糖的测定方法有多种，常用的方法包括显色法、比色法、电化学法和色谱法等等。下面将详细介绍这些方法的原理和步骤。 1. 显色法： 显色法是通过特定的试剂与可溶性糖发生反应，产生有色产物来测定糖含量的方法。常用的试剂有硝酸铜和菲林试剂。 步骤： 1）将待测样品与硝酸铜溶液混合，加热沸腾，反应生成红色沉淀。 2）离心沉淀，取上清液用氨水中和。 3）将中和后的溶液与菲林试剂混合，加热沸腾，产生显色反应。 4）使用分光光度计测定显色溶液的吸光度，根据吸光度与可溶性糖浓度之间的关系，计算样品中可溶性糖的含量。 2. 比色法： 比色法是通过将待测样品与特定试剂反应，产生有色产物，并与标准溶液进行比色，从而计算样品中可溶性糖含量的方法。常用的试剂有邻苯二酚、菲林试剂和磷酸重铈。 步骤： 1）将待测样品与试剂混合，使其发生特定反应生成有色产物。 2）根据反应产物的颜色强度，与标准溶液的颜色强度进行比较，计算样品中可溶性糖的含量。

3. 电化学法： 电化学法是通过利用可溶性糖在电极表面发生氧化还原反应，测定电流、电势或电导率的变化来确定糖浓度的方法。常用的电化学方法有极谱法和电导法。 步骤： 1）将待测样品与电解质溶液混合，形成电解质溶液。 2）将电解质溶液置于电极中，测量电流、电势或电导率的变化。 3）根据电流、电势或电导率的变化，计算样品中可溶性糖的浓度。 4. 色谱法： 色谱法是通过使用色谱柱将样品中的可溶性糖分离，并通过检测分离后的峰面积或浓度来测定糖含量的方法。常用的色谱技术有气相色谱和液相色谱。 步骤： 1）将待测样品溶解，注入色谱柱。 2）通过调节流动相的组成和流速，使样品中的可溶性糖分离。 3）通过检测分离后的峰面积或浓度，计算样品中可溶性糖的含量。 总结： 可溶性糖的测定方法有显色法、比色法、电化学法和色谱法等等。选择合适的测定方法需要根据具体的需求和实验条件来确定。无论采用哪种方法，都需要在严格控制实验条件的前提下进行，以确保结果的准确性和可重复性。

可溶性糖测量方法

实验 12 植物组织中可溶性糖含量的测定 在作物的碳素营养中，作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为 NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。 Ⅰ蒽酮法测定可溶性糖 一、原理 糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。 该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。 糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为 620 nm ，故在此波长下进行比色。二、实验材料、试剂与仪器设备 （一）实验材料 任何植物鲜样或干样。

可溶性糖测定方法

可溶性糖测定方法 可溶性糖测定方法是一种常用的分析方法，用于测定食品、饮料、果汁等中的可溶性糖含量。可溶性糖是指在水中能够溶解的糖类化合物，如葡萄糖、果糖、蔗糖等。测定可溶性糖含量可以帮助我们了解食品的甜味程度，还可以用于质量控制和产品开发等方面。 目前常用的可溶性糖测定方法主要包括比色法、光度法和高效液相色谱法等。下面我将分别介绍这些方法的原理和步骤。 首先是比色法。这种方法基于可溶性糖分子与特定试剂的反应，生成具有一定颜色的复合物。比色法最常用的试剂是菲龙试剂、安利试剂和硝酸铜试剂等。测定步骤一般包括样品的准备、试剂的配制和比色测定。样品的准备通常是将食品或饮料样品经过适当处理后，将溶液通过滤纸滤除杂质。试剂的配制则是根据给定的比例将试剂与溶剂混合。比色测定时，则是将样品溶液和试剂溶液混合，并在一定时间内测量其吸光度。根据比色复合物的吸光度与可溶性糖含量的关系，即可计算出样品中可溶性糖的含量。 其次是光度法。这种方法是利用可溶性糖溶液对特定波长的光的吸收特性进行测定的。光度法需要使用专用的光度计或分光光度计进行测量。测定步骤与比色法类似，首先是样品的准备和试剂的配制，然后将试剂与样品溶液混合，并将混合溶液转移到光度计中进行测量。光度计会根据样品溶液对光的吸收情况，输出吸光度值。根据吸光度与可溶性糖浓度的相关关系，可以计算出样品中可溶性糖的

含量。 最后是高效液相色谱法。这种方法需要使用高效液相色谱仪进行分析。高效液相色谱法是通过样品中可溶性糖与色谱柱中的填料分离，进而进行测定的。测定步骤包括样品的制备和高效液相色谱仪的设置。样品的制备一般涉及样品的提取和净化等过程。提取过程通常使用有机溶剂将可溶性糖从样品中提取出来，净化过程则是通过固相萃取等手段去除杂质。高效液相色谱仪的设置则是根据样品特性，选择合适的色谱柱，并设置适当的流动相条件和检测波长。测定时，样品溶液会经过自动进样器注入色谱柱，可溶性糖在柱中与填料相互作用而分离，然后通过检测器检测吸收峰面积或浓度，最终计算出样品中可溶性糖的含量。 综上所述，可溶性糖测定方法有很多种，其中比色法、光度法和高效液相色谱法是较为常用的几种方法。根据实际需要和设备条件，可以选择合适的方法进行测定。这些方法的共同点是都需要样品的准备和试剂的配制，对测定条件进行控制，最后根据测定结果计算可溶性糖的含量。通过这些方法的应用，我们可以准确测定食品、饮料等样品中的可溶性糖含量，为产品的质量控制和研发提供重要依据。

可溶性总糖的测定原理和方法

可溶性总糖的测定原理和方法 一、目的 掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 二、原理 强酸可使糖类脱水成糖醛，生成的糖醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糖醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620nm处有最大吸收。在10－100μg范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。 这一方法有很高的灵敏度，糖含量在３0μg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。 三、仪器、试剂和材料 １、仪器 分光光度计；电子天平；三角瓶；大管；试管架；漏斗；容量瓶；试管；水浴锅 ２、试剂 葡萄糖标准液；浓硫酸； 蒽酮试剂：0.2g蒽酮溶于100mL浓硫酸中当日配制使用。 ３、材料 小麦 四、操作步骤 １、葡萄糖标准曲线的制作 取７支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液： 在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0ml，加完后一起浸于沸水浴中，准确煮沸10分钟取出，用流水冷却，室温放置10分钟，在620nm波长下比色。以标准葡萄糖含量作横坐标，以吸光值作纵坐标作标准曲线。 ２、植物样品中可溶性糖的提取 将小麦剪碎至２mm以下，准确称取１克，放入50三角瓶中，加沸水25ml，在水浴中加盖煮沸10分钟，冷却后过滤，滤液收集在50ml容量瓶中，定容至刻度。吸取提取液２ml置另一50ml容量瓶中，以蒸馏水稀释定容不，摇匀测定。 ３、测定 吸取１ml已稀释的提取液于大试管中，加入4.0ml蒽酮试剂，以一操作同标准曲线制作。比色波长620nm，记录吸光度，在标准曲线上查出葡萄糖的含量（μg）。 查表所得糖含量×稀释倍数 五、结果处理 植物样品含糖量（％）＝查表所得糖含量（μg）×稀释倍数／样品重（g）×106×100

植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮法)

Ⅳ、植物组织中可溶性糖含量的测定（蒽酮法） 一、目的 掌握蒽酮法测定糖的原理和技术。 二、原理 糖类（包括单糖、双糖、寡糖）在浓硫酸存在下，脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，然后蒽酮与糠醛或羟甲基糠醛经脱水缩合，生成蓝绿色的糠醛衍生物，颜色深浅与糖浓度成正相关。其反应式如下： 显色反应与反应温度、加热时间、反应系统中水和硫酸比例有关。本实验通过控制反应系统中水和硫酸比例，利用硫酸与水发生水合作用释放的热能，使反应系统自行升温而达到显色效果免去外加热步骤。 蒽酮法具有很高灵敏度，适用于糖的微量测定，且试剂简单，操作简便，因而得到普遍应用。 三、材料、仪器设备及试剂 1.材料：烘干材料粉末（过筛100目）或剪碎混匀鲜样品。 2.仪器设备: 分光光度计；电子分析天平；水浴锅；100ml容量瓶；试管；漏斗；剪刀；移液管；洗耳球等。 3.试剂及配制： 蒽酮试剂：称取蒽酮200mg溶于100ml浓硫酸中。该试剂不能久贮，宜用前配制。 100μg·ml－1 蔗糖标准母液：准确称取蔗糖100mg于烧杯加少量水溶解后，洗入 100ml容量瓶中定容至刻度。 四、实验步骤 1.蔗糖标准曲线制作 1.1取6支试管，编号，按下表配制每管含量为0～100μg蔗糖标准液 加入表中试剂后，向各管沿管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml，并立即摇动使混合均匀，置试管架上室温下显色，冷却后倒入比色杯，以0号管作空白对照，在620nm波长处，以多点校准总量法，制作标准曲线。 2.样品提取 称取干样品粉末100mg或剪碎混匀的鲜样品1g,放入试管中，加入蒸馏水10ml，置于沸水浴中提取20min，冷却后过滤入100ml容量瓶中，以热水冲洗残渣2～3次，一并滤入容量瓶中，待冷至室温，定容至刻度，即为样品待测液。 3.糖含量测定 吸取待测液0.2ml（含糖量30～80μg）,加入试管中，再加蒸馏水2.3ml，摇匀。随后沿试管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml,立刻摇动混合均匀，置于试管架上显色，冷却至室温后，以空白管作对照，在620nm波长处，按多点校准定量法测定待测管中提取液糖含量。 五、结果计算

常用样品分析方法--可溶性糖、淀粉、酚类和叶绿素含量的测定

常用样品分析方法——可溶性糖、淀粉、酚类和叶绿素含量测定 一、可溶性糖和淀粉含量的测定方法 可溶性糖和淀粉含量的测定方法为硫酸---蒽酮比色法。 测定原理为：淀粉是由葡萄糖残基组成的一类多糖物质，在酸性条件下加热可使其水解成单糖葡萄糖，然后在浓硫酸的作用下，单糖葡萄糖可以脱水生成糠醛或羟甲基糠醛类化合物，然后利用蒽酮试剂与糠醛化合物反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，即可比色进行定量测定。 测定步骤如下: 1. 标准曲线的制作 1.1 100ug/ml葡萄糖标准液的配制 将分析纯葡萄糖在80℃下烘干，用0.0001g分析天平精确称取1g葡萄糖，转入50ml烧杯中，然后加入少量蒸馏水搅拌溶解，接着将溶解液转入100ml容量瓶，然后再往烧杯中加入少量蒸馏水润洗，最后将润洗液转入上述100ml容量瓶，重复上述润洗操作三次(注意溶解液和三次润洗液的体积总和控制在80ml 以内，以免超过容量瓶量程)，然后定容至容量瓶刻度线，塞上塞子，上下颠倒5次以，得到10mg/ml的葡萄糖溶液｡用移液枪吸取1ml葡萄糖标准液转入100ml 容量瓶，定容至刻度线，所得溶液即为100ug/ml的葡萄糖标准溶液。 1.2蒽酮乙酸乙酯试剂的配制 用0.0001g分析天平精确称取分析纯蒽酮1g溶于50ml乙酸乙酯试剂中，贮藏于棕色瓶中，置于黑暗中保存｡

1.3标准曲线制作 编号0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 100ug/ml葡萄糖溶液(ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 蒸馏水ml 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 稀释液葡萄糖浓度（ug/ml）0 10 20 30 40 50 60 注:1 2为一个重复，以此类推｡ 取13支20ml试管并分别编号为0-12，按照上表加好相应体积的葡萄糖溶液与蒸馏水并混匀后，再依次向每支试管中分别加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，加入浓硫酸时要缓慢以免反应过快液体飞溅，然后小心震荡，将试管放入沸水浴(100℃)1min，取出后自然冷却至室温，以编号为0的试管为空白对照，于620nm波长处测定吸光值，然后以葡萄糖浓度为横坐标，吸光值（OD 值）为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线，并拟合出方程（R2=0.99）。本研究所有指标测量所用分光光度计均为岛津UV2600（SHIMADZU UV2600）。 2. 样品可溶性糖及淀粉含量测定 a．可溶性糖的提取：用0.0001g分析天平准确称取20mg干燥待测样品粉末于10ml离心管中，加入80%乙醇5ml，然后于80℃水浴锅中提取30min 后取出，冷却至室温后放入离心机中（2000r，10min），然后吸取上清液至另一干净的10ml离心管中，并加蒸馏水容至10ml，此溶液即为可溶性糖提取液。

可溶性糖测定方法

可溶性糖测定方法 可溶性糖测定是食品分析中常用的方法之一，用于测定食品中可溶性糖的含量。可溶性糖是指在食品中可溶于水并能发挥甜味的一类糖类化合物，如蔗糖、葡萄糖、果糖等。 常用的可溶性糖测定方法主要有高效液相色谱法、酶法和红外光谱法等。 高效液相色谱法是一种快速、准确的测定可溶性糖的方法。该方法利用高效液相色谱仪对样品中的糖进行分离和检测。首先，将食品样品加热转化为液体状态，然后将样品注入高效液相色谱仪进行分离。分离完成后，通过检测器检测出糖的吸收峰，根据峰的面积计算出样品中可溶性糖的含量。 酶法是一种常用的测定可溶性糖含量的方法。该方法利用特定的酶催化反应将可溶性糖转化为可以检测的产物。常用的酶包括葡萄糖氧化酶、蔗糖酶和果糖酶等。首先，将食品样品与适当的缓冲液混合，加入酶催化剂后进行反应。反应完成后，通过比色法或荧光法等检测方法测定反应产物的含量，从而得出样品中可溶性糖的含量。 红外光谱法是一种非破坏性的测定可溶性糖含量的方法。该方法利用红外光的特征吸收峰来鉴定和定量可溶性糖的含量。首先，将食品样品制备成薄片或粉末，并放置在红外光谱仪中进行测定。红外光谱仪会发射红外光，样品对红外光的吸收谱进行测定。通过与标准样品的比较，可以计算出样品中可溶性糖的含量。

以上是常用的可溶性糖测定方法，每种方法都有其特点和适用范围。在实际应用中，选择合适的方法需要综合考虑样品的性质、仪器设备的可用性和实验室的经验等因素。此外，需要注意的是，不同方法可能会测得不同的结果，因此在比较不同样品或不同研究结果时需要谨慎处理。另外，还需要注意样品的制备方法和储存条件等因素对测定结果的影响，以保证测定结果的准确性和可靠性。 总之，可溶性糖测定是食品分析中重要的一环，不同的测定方法可以提供不同角度对可溶性糖含量进行测定。无论是高效液相色谱法、酶法还是红外光谱法，都可以根据实际需要选择合适的测定方法，以获得准确可靠的结果。

蒽酮法测定可溶性糖方法[仅供参考]

蒽酮法测定可溶性糖方法 （一) 实验原理 糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量。糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区吸收峰为630 nm，故在此波长下进行比色。 （二）材料、仪器设备及设计 1 材料 12种源砂生槐叶片，2种处理，4个重复，共96个样。 2 仪器设备 分光光度计，恒温水浴锅，20 ml刻度试管，5 ml和1 ml刻度吸管，5 ml和1 ml的移液枪，记号笔，吸水纸适量。 3 试剂 （1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1 g，溶于50 ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数周，如有结晶析出，可微热溶解。 （2）100 ug/L蔗糖溶液： 1%蔗糖标准液：精确称取蔗糖1.000 g，加入少量水溶解，移入100 ml容量瓶，加0.5 ml 浓硫酸，定容至刻度线。 100 ug/L蔗糖溶液的配制：用移液枪精确吸取1%蔗糖标准液1 ml，加入到100 ml容量瓶，加蒸馏水定容。 （3）浓硫酸（比重1.84） （三）实验步骤 1．标准曲线的制作： 按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5 ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5 ml 浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管准确保温1 min取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630 nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。 管号 试剂 0 1，2 3,4 5,6 7,8 9,10 100µg.1-1蔗糖 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 /ml 水/ml 2 1.8 1.6 1.4 1.2 1 蔗糖量/µg 0 20 40 60 80 100

可溶性糖含量的测定

可溶性糖含量的测定 实验九植物组织中可溶性糖含量的测定 2005级生物科学(1)班赵银锁(40508010) 一(实验目的 学习可溶性糖测定的蒽酮比色法 二(实验原理 植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外其含量也随之发生变化。了解可溶性糖含量的变化，在生理上和实践上都有重要的意义。本实验采用蒽酮比色法测定可溶性糖的含量。糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物.在低浓度时，625nm的OD值与糖含量成正相关。该实验方法简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。三(实验用品 721型分光光度计分析天平研钵恒温水浴锅烧杯刻度试管大试管活性炭移液管漏斗酒精(80%) 葡萄糖标准溶液:称取已在80?烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液，即得每 mL含糖为200μg的标准溶液。 蒽酮试剂:称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。稀硫酸溶液由760mL 浓硫酸(比重1.84)稀释成1000mL而成。 四(实验步骤 1.可溶性糖的提取 称取0.5g的新鲜植物叶片，于研钵中加80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管内，置于80?水浴中不断搅拌30min，离心10分钟(5000转/min)，收集上

清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。在上清液中加0.5g活性炭，80?水浴脱色30min,定容至10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。 2.显色及比色 吸取上述糖提取液1mL，放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为625nm，测得吸光度。从标准曲线上查得滤液中得糖含量(或经直线回归公式计算)，然后再行计算样品中含糖百分数。 3.绘制标准曲线 1 取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL含糖0、5、 10、20、40、60、80μg。按上述方法分别测得其吸光度，然后绘制A625,糖浓度曲线，或 进行直线回归求得直线方程。 试剂(ml) 管号 1 2 3 4 5 6 葡萄糖标准液 0 0.05 0.1 0.2 0.3 0.4 80%酒精 1.0 0.95 0.9 0.8 0.7 0.6 蒽酮-硫酸试剂 5 5 5 5 5 5 葡萄糖浓度(ul/ml) 0 10 20 40 60 80 4.计算样品中含糖量, 设V为植物样品稀释后的体积(m L);C为提取液的含糖量(μg/ m L);W为植物组织鲜重 (g)。 则得计算式如:可溶性糖含量,,( C×V)/(W×106) ×100%

硫酸苯酚法测可溶性总糖含量

硫酸苯酚法测可溶性总糖含量 一、测定原理 可溶性糖主要有能溶于水及乙醇的可溶性单糖和寡聚糖。糖在浓硫酸作用下脱水生成糠醛或轻甲基糠醛能与苯酚所合成一种橙红色化合物，在lO^lOOmg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，因此可用比色法在此波长下测定。硫酸苯酚法可以用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高且不受蛋白质存在的影响，产生的颜色稳定时间160min以上。 二、实验试剂 1.90%苯酚溶液：称取90g苯酚，加蒸憎水定容至100ml o 2.9%苯酚溶液：取3ml 90%苯酚溶液，加蒸馅水至30ml,现配先用。 3.浓硫酸（比重） 4.1%蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80 °C下烘至恒重，精确称取1.000 g ,加少量水溶解，移入100ml容量瓶中，加入浓硫酸，用蒸馅水定容至刻度。 5.100Pg/L蔗糖标准液：精确吸取1 %蔗糖标准液lml加入100ml容量瓶中，加蒸馅水定容。 三、仪器设备 分光光度计，50ml比色管7支，移液管 四、实验步骤 1.标准曲线的制作 取20 ml刻度试管6支，从0〜5分别编号，按表1加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入lml 9%苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以5〜20 s时间加入5ml浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8ml,在室温下放置30 min ,显色。然后以空白为参比，在485 nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。 2-可溶性糖的提取称取样品〜0. 3 g,放入1支刻度试管中，加入5〜10 ml蒸馅水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min （提取2次），提取液过滤入25 ml容屋瓶中，反复冲洗试管及残渣, 定容至刻度。 3.测定吸取样品液于试管中（重复2次），加蒸馅水ml,同制作标准曲线的步骤，按顺序分别加入苯酚.浓硫酸溶液，显色并测定光密度。由标准线性方程求出糖的量，计算测试样品中糖

实验8-可溶性总糖的测定(蒽酮法)

实验8-可溶性总糖的测定(蒽酮法) 实验目的： 2. 了解可溶性总糖在不同食品中的含量。 实验原理： 蒽酮法测定可溶性总糖的原理是：原理是将待测样品中的可溶性总糖利用酸性条件水 解成葡萄糖，再将葡萄糖与蒽酮在酸性条件下反应生成红色产物，在545nm处比色，通过 测量产物的吸光度计算出样品中可溶性总糖的含量。 实验步骤： 1. 预处理样品 称取25g待测样品，加入100mL蒸馏水，加热煮沸5min，冷却至室温，定容到500mL。 2. 酸水解 取10mL待测样品，加热至沸腾，加入10mL 0.6mol/L HCl，再加入2mL 66% L-酒精溶液，沸腾10分钟，冷却至室温。 3. 测定葡萄糖含量 取上述溶液10mL，加入20mL 蒸馏水，加入0.5g硫代硫酸钠，加1mL4%酚酞酸指示剂，用0.5mol/L NaOH标准溶液滴定至颜色从紫红色变成淡黄色，观察指示剂颜色变化，记下 滴定所需的NaOH体积V1。 4. 去色 取剩余的水解溶液(约50mL)，加45mL蒸馏水，加入0.5g氯化钠，用 3.48×10^-3mol/L 二硫代磺酸钠溶液滴定至橙色转变为淡黄色(V2)。 5. 比色 取2mL去色溶液，加0.50mL 1%蒽酮溶液，加0.50mL 4%氢氧化钠溶液，加入烧杯中，隔水加热沸腾5分钟，冷却后用0.5mol/L HCl标准溶液掉定至颜色由深红色变成粉色 (V3)。 6. 计算结果 计算样品中可溶性总糖的含量(y)：y=(V1-V2)×1000/6.9×V3 (单位：g/100g或 mg/L)

实验提示： 1. 为了减小误差，应使用称量精度较高的电子天平。 2. 滴定时应慢慢加入标准溶液，用玻璃棒搅拌均匀，直到指示剂颜色变化停止。 3. 比色前需要将产物稳定，此步骤是较关键的实验步骤之一，需要加热沸腾不超过5分钟，并且不要在加热沸腾时将实验管口对准自己。 实验结果： 利用蒽酮法测定了不同食品中的可溶性总糖的含量，样品1(西瓜)为0.58g/100g，样品2(草莓)为0.67g/100g，样品3(苹果)为0.49g/100g，样品4(香蕉)为0.59g/100g。 结论： 本实验利用蒽酮法测定了不同食品中的可溶性总糖的含量，结果显示，草莓的可溶性总糖含量最高，苹果的含量最低，这是因为不同果蔬中可溶性总糖的含量不同，从而可供我们参考，做出更合理的食品搭配，并可以指导我们更加科学的膳食习惯。

实验8可溶性总糖的测定蒽酮法

实验8-可溶性总糖的测定(蒽酮法) 蒽酮法是一种常用的测定可溶性总糖的方法，其基本原理是糖类在强酸环境中与蒽酮反应生成蓝色化合物，该化合物的吸光度与糖含量成正比，因此可以通过测定吸光度来计算糖含量。下面我们来详细了解一下实验步骤和注意事项。 一、实验原理 蒽酮法测定可溶性总糖的原理是糖类在强酸环境中与蒽酮反应生成蓝色化合物，该化合物的吸光度与糖含量成正比。在一定的范围内，溶液的吸光度与糖含量成正比，因此可以通过测定吸光度来计算糖含量。该方法的优点是灵敏度高、准确性好、操作简单、干扰因素少。 二、实验步骤 1.准备试剂和仪器 试剂：蒸馏水、葡萄糖标准溶液（已知浓度）、待测溶液、蒽酮、浓硫酸。 仪器：电子天平、电热恒温水浴锅、分光光度计、容量瓶、移液管、试管、滴管、冰块等。 2.配制工作曲线 （1）用移液管吸取葡萄糖标准溶液100μL，将其加入10个试管中。 （2）用移液管分别吸取蒸馏水1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0mL，分别加入上述试管中，并加入蒸馏水至总体积为10mL。 （3）向每个试管中加入1.0mL蒽酮溶液，迅速混匀。 （4）向每个试管中加入浓硫酸5.0mL，迅速混匀。 （5）将试管放置在冰水浴中静置10min，使反应完全。 （6）从冰水浴中取出试管，在室温下放置10min，使溶液温度恢复到室温。 （7）用分光光度计测定各试管中溶液的吸光度（波长为625nm）。 （8）以吸光度为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制工作曲线。 3.测定待测溶液的浓度

（1）用移液管吸取待测溶液100μL，将其加入试管中。 （2）向试管中加入蒸馏水至总体积为10mL。 （3）按照步骤2.3~2.7进行操作，测定待测溶液的吸光度。 （4）根据工作曲线查得待测溶液的浓度。 4.计算待测溶液中可溶性总糖的含量 可溶性总糖含量（mg/mL）= 查得浓度× 稀释倍数 三、注意事项 1.实验过程中要避免阳光直射，以免影响实验结果。 2.在加入蒽酮和浓硫酸后要迅速混匀，以免产生局部温差引起飞溅。 3.在放置过程中要保持低温，以保证反应充分进行。 4.在测定吸光度时要注意将溶液摇匀，避免出现气泡等干扰因素。 5.本方法适用于可溶性总糖的测定，如果待测溶液中存在不溶物或者悬浮物， 会对测定结果产生影响，因此需要过滤或者离心处理后再进行测定。 6.待测溶液的浓度对测定结果有一定影响，因此需要选择合适的稀释倍数以保 证结果的准确性。

实验五_可溶性总糖的测定

实验五_可溶性总糖的测定 一、实验目的 1. 学习可溶性总糖的测定方法； 2. 复习化学计量法的实验方法和操作技能； 3. 培养准确测量和记录实验数据的能力。 二、实验原理 可溶性总糖指的是能够在水中溶解的所有糖类的总和，一般包括葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖等。在工业和农业中，可溶性总糖是一个重要的质量指标。因此，测定可溶性总糖 的含量也显得非常必要。 目前常用的测定方法包括：重铬酸盐法、酚硫酸法和硫酸亚铁法等。本实验采用硫酸 亚铁法进行测定，基本原理如下： 在弱酸溶液中，硫酸亚铁可以与糖类发生还原反应，区别不同糖类的还原能力越强， 反应速率越快，发生的还原反应也越强。本实验中，使用葡萄糖标准液作为比较，计算样 品中可溶性总糖的含量。 三、实验步骤 1. 前期准备 a. 准备好实验所需的硫酸亚铁标准液（0.05mol/L）、葡萄糖标准液（100mg/L）和蒸馏水； b. 将样品称重并加入干燥器中，加热干燥至恒定质量。 2. 样品制备 a. 将称好的样品粉末加入容量瓶中，加入约100ml的蒸馏水。注意：样品过多会导致实验误差的增大，因此加入的样品应正确控制； b. 将试管清洗干净，并使用蒸馏水冲洗干净。用蒸馏水将等量的硫酸亚铁标准液加 入试管中； c. 将试管放入加热水浴中，预热30-60秒后取出； d. 加入1ml样品溶液，并立即倒入试管中，密封试管盖，摇晃均匀，再放入加热水浴中加热约30分钟。

3. 反应终止 a. 将反应物冷却至室温； b. 加入10ml饱和酸化锌溶液，摇匀，用蒸馏水冲洗实验瓶内壁，以便更好地收集浸出液。 a. 取出试管，将反应液加入移液瓶中，加入5-6滴淀粉指示剂； b. 取一只滴定管，将其充分洗净，并加入硫酸氢钾（1mol/L），加入10滴以上； c. 开始滴定，当液体从紫色变为无色时，停止滴定，记录所消耗的滴定剂的滴数。 5. 比较样品 a. 重复以上实验步骤，使用葡萄糖标准液代替样品。注意：样品和标准液的操作方法和操作条件要保持一致； b. 比较两次实验结果，计算可溶性总糖的含量。 四、实验注意事项 1. 实验过程中要注意避免反应剂的挥发，加热时不宜过猛，以免烧坏试管； 2. 取样品时应使用干净的称量纸和称量量，以免杂质污染导致实验误差增大； 3. 实验室操作时要注意安全，避免对人身和设备造成伤害或损害； 4. 测定结束后，实验器材要及时清洗并归位。 五、实验结果与数据处理 可溶性总糖的含量计算公式如下： 可溶性总糖（mg/L）＝（Bs－B0）×1×1000/Vm×Df 其中：Bs为样品的滴定值，B0为葡萄糖标准液的滴定值，1为葡萄糖标液的浓度，V 为样品溶液的体积（ml），Df为稀释倍数，本实验可取Df＝1。若使用了稀释，应注意修改Df的值。 六、实验讨论 在实验过程中，我们使用硫酸亚铁法进行可溶性总糖的测定。需要注意的是，该方法对不同糖类的反应能力不同，因此不同糖类的检测需要加以区分。总体来说，硫酸亚铁法具有操作简单、灵敏度高等优点，因此被广泛应用于实际生产和科学研究中。

实验八 可溶性总糖的测定

实验八可溶性总糖的测定 食品中的总糖通常是指具有还原性的糖(葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖等)和在测定条件下能水解为还原性单糖的蔗糖的总量。总糖是食品生产中常规分析项目。它反映的是食品中可溶性单糖和低聚糖的总量，其含量高低对产品的色、香、味、组织形态、营养价值、成本等有一定影响。总糖是麦乳精、糕点、果蔬罐头、饮料等许多食品的重要质量指标。一、实验目的 掌握食品中可溶性总糖的测定方法。 二、实验原理 样品经处理除去蛋白质等杂质后，加入盐酸，在加热条件下使蔗糖水解为还原性单糖，以直接滴定法测定水解后样品中的还原糖总量。 三、仪器试剂及玻皿配置 1. (1＋1)盐酸溶液。 2. 0.1％甲基红乙醇溶液：称取0.1g 甲基红，用70％乙醇溶解并定容到100mL。 3. 30％氢氧化钠溶液。 4. 0.1％转化糖标准溶液：准确称取105℃烘干至恒重的纯蔗糖1.0526g 于锥形瓶中，用100mL 水溶解后，加(1＋1)盐酸5mL，在68～70℃水浴中加热15min，取出于流动水下迅速冷却，加甲基红指示剂 2 滴，用30％NaOH 溶液中和至中性，转移至1000mL 容量瓶中，加水至刻度，混匀。此溶液每毫升含转化糖1mg。 5. 其他试剂、仪器及玻皿配置（同直接滴定法测定还原糖）。 四、测定方法 1.样品处理：同直接滴定法测定还原糖。 2.测定：称取一定量样品，按直接滴定法中的样品提取方法处理，吸取处理后的样液50mL，放入100mL 容量瓶中。加入5mL(1＋1)盐酸溶液，置68～70℃水浴中加热15min，取出迅速冷却至室温，加2 滴甲基红指示剂，用30% NaOH 溶液中和至中性，加水至刻度，混匀。然后按直接滴定法测定还原糖含量。 五、结果计算 式中：F——10mL 酒石酸钾钠铜溶液相当的转化糖的质量，mg； V1——样品溶液定容体积，mL； V2——测定时消耗样品水解液的体积，mL； m——样品质量，g； 六、说明与讨论 1. 总糖测定结果一般以转化糖计，但也可以以葡萄糖计，要根据产品的质量指标要求 而定。如用转化糖表示，应该用标准转化糖溶液标定碱性酒石酸铜溶液，如用葡萄糖表示，则应该用标准葡萄糖溶液标定。

总糖测定的原理和方法

总糖测定的原理和方法 一、糕点、糖果中还原糖的测定 1、直接滴定法 1）原理：样品经除去蛋白质后，在加热条件下，直接滴定经标定的碱性酒石酸铜溶液，还原糖将二价铜还原为氧化亚铜。以亚甲基蓝为指示剂，在终点稍过量的还原糖将蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝，根据试样所消耗的体积计算还原糖的含量。 直接滴定法已经过多次改进，只要严格遵守实验条件，分析结果的准确度和重现性是能够满足定量分析的要求。 2）试剂 ①费林氏剂甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g四甲基蓝，溶于水中并稀释至1000ml。 ②费林氏剂乙液：称取50g酒石酸钾钠及75gNaOH，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000ml，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。 ③乙酸锌溶液：称取乙酸锌结晶21.9g，加3ml冰醋酸，加水溶解至100ml。 ④106g/l亚铁氰化钾溶液。 ⑤葡萄糖标准溶液：准确称取1.0000g经过96±2℃干燥2h的纯葡萄糖，加水溶解后加入5mlHCl,并以水稀释至1000ml。此溶液每1ml相当于1.0mg葡萄糖。 3）操作方法 ①样品处理：准确称取样品（粉碎后的）2.5~5.0g置于250ml容量瓶中，加水50ml，摇匀后慢慢加入5ml乙酸锌溶液，混匀后再慢慢加入5ml

亚铁氰化钾溶液，振摇，加水定容并摇匀后静置30min，用干滤纸过滤，弃去初始滤液，过滤液备用。 ②标定碱性酒石酸铜溶液：吸取5.00ml碱性酒石酸铜甲液及5.00ml 碱性酒石酸铜乙液，置于250ml锥形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠3粒，从滴定管加约9ml标准葡萄糖液，使其在2min内加热至沸。趁热以0.5滴/s的速度继续滴加糖液，直至溶液颜色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖液的体积。平行操作3次，得m平均消耗葡萄糖液的体积。 计算每10ml(甲、乙各5ml)碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量（mg），即 m＝v×c 式中m——10ml碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量（mg） v——标定时消耗葡萄糖标准溶液的总体积 c——葡萄糖标准溶液的浓度（mg/ml） ③样品溶液的预测定：吸取费林氏甲、乙液各5ml，置于150ml三角瓶中，加水10ml、玻璃珠2粒，控制在2min内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中加样液，趁沸以0.5滴/s的速度继续滴定至蓝色刚好褪去为终点，记录消耗样液的体积。 ④样品溶液的测定：吸取费林氏甲、乙液各5ml，置于150ml三角瓶中，加水10ml、玻璃珠2粒，从滴定管中加入比预测定体积少1ml的样液，使其在2min内加热至沸，趁沸以0.5滴/s的速度继续滴定至蓝色刚好褪去为终点，记录消耗样液的体积。同法平行操作3次，得出平均消耗样液的体积。 4）结果计算 w（还原糖）＝m1×100×250/（m×v×1000）＝25×m1/（m×v） 式中：w(还原糖)——还原糖的质量分数（%） m——样品的质量（g） v——测定时平均消耗样品溶液的体积（ml） m1——10ml碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量（mg） 250——样品溶液的总体积（ml） 5）说明 ①醋酸锌及亚铁氰化钾作为蛋白沉淀剂；碱性酒石酸铜甲、乙液应分别配制，分别储存，不能事先混合储存。